Проростки крестоцветных, за исключением brassica oleracea capitata, lepidium sativum, sinapis alba, sinapis nigra и raphanus sativus, и способ их получения, композиция глюкозинолатов и изотиоцианатовиз данных проростков, способ ее получения и пищевой продукт, обладающий хемопротективным и антиканцерогенным действием

1 Правительство США располагает предоплаченной лицензией на данное изобретение и правом в определенных условиях требовать от держателя патента лицензировать других лиц на разумных основаниях, как оговорено условиями гранта РO1 СА 44530, озаглавленного "Новые стратегии хемопротекции против рака" (главный исследователь - Пол Талалей) и выданного Национальным противораковым Институтом. Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к диетическому способу снижения уровня канцерогенов в организме животных и в отдельных клетках,чем достигается снижение риска развития рака. В частности, данное изобретение относится к производству и потреблению пищи, богатой хемопротективными в отношении рака соединениями. Более конкретно, данное изобретение относится к хемопротективным соединениям,которые модулируют ферменты млекопитающих, участвующие в метаболизме канцерогенов. Данное изобретение относится к пищевым источникам, которые чрезвычайно богаты соединениями, индуцирующими ферменты фазы 2, и не индуцирующими биологически значимую активность ферментов фазы 1, активирующих канцерогены. Уровень техники Широко известно, что диета играет важную роль в снижение риска развития рака и что увеличенное потребление фруктов и овощей снижает частоту заболеваний раком у людей. Считается, что главный защитный механизм обусловлен наличием в растениях таких химических компонентов, которые, попадая в клетки млекопитающих, повышают уровень ферментов фазы 2, участвующих в детоксикации канцерогенов. Ранние исследования механизма хемопротекции отдельных соединений показали, что данные хемопротекторы индуцируют активность монооксигеназ, известных также, как ферменты фазы 1 или цитохромы Р-450. Однако, Talalay et al. [см. "Химическая защита против рака индукцией электрофильной детоксикации" В:кн. CELLULAR AND MOLECULARCHEMOPREVENTION,L.Wattenberg et al., CRC Press, Boca Raton, FL,pp.469-478 (1992)] показали, что введение известного хемопротектора-бутилированного гидоксианизола (ВНА) - грызунам, приводит к незначительному изменению активности цитохромов Р-450 (ферменты фазы 1), но существенно увеличивает активность ферментов фазы 2. Ферменты фазы 2, такие как глутатионтрансферазы, НАД(Ф)Н:хинонредуктаза (QR) и глюкуронозилтрансферазы, детоксицируют ДНКповреждающие электрофильные формы основных канцерогенов. Избирательные индукторы ферментов фазы 2 были обозначены как монофункциональные индукторы. См. ProchaskaTalalay, Cancer Res. 48:4776-4782 (1988). Почти все монофункциональные индукторы являются электрофилами и принадлежат к 8 различным химическим классам, включающим: 1) дифенолы, фенилендиамины и хиноны; 2) акцепторы реакции Михаэля, содержащие олефины или ацетилены, конъюгированные с электронсвязывающими группами; 3) изотиоцианаты; 4) 1,2 дитио-3-тионы; 5) гидропероксиды; 6) трехвалентные органические и неорганические производные мышьяка; 7) тяжелые металлы, обладающие аффинностью к тиоловым группам,включая Hg2+ и Cd2+ и 8) димеркаптаны. См.Prestera et al., Proc.Natl,Acad.Sci.USA 90:29632969 (1993). Единственным общим свойством всех перечисленных индукторов является их способность реагировать с тиоловыми группами. Хемопротективные агенты могут быть использованы для снижения чувствительности млекопитающих к токсическому и неопластическому воздействию канцерогенов. Указанные хемопротекторы могут быть растительного происхождения или представлять собой синтетические соединения. Были получены синтетические аналоги встречающихся в природе индукторов и показана их способность подавлять химический канцерогенез у животных. См. Posner et al.,J.Med.Chem. 37:170-176(1994); Zhang et al.,Proc.Natl.Acad. Sci.USA 91:3147- 3150 (1994);(1994). Разработаны высокоэффективные методы для измерения способности растительных экстрактов индуцировать и повышать активность ферментов фазы 2. См. ProchaskaSantamaria,Anal.Biochem. 169:328-336 (1988) и Prochaska etal., Proc.Natl, Acad.Sci.USA 89:2394-2398 (1992). Кроме того, данные методы были применены для выделения соединений, ответственных за индуцирующую активность в растениях, и для оценки антиканцерогенной активности указанных соединений и их синтетических аналогов. См. Zhang et al., Proc. Natl.Acad. Sci. USA 89:2399-2403 (1992); Posner et al., J. Med. Chem. 37:170-176 (1994). При том, что индуцирующая активность может быть обнаружена в съедобных растениях многих различных семейств, ее величина сильно варьирует в зависимости от семейства, рода,вида, разновидности или сорта данного растения, а также в зависимости от условий произрастания и сбора. Таким образом, существует потребность идентификации конкретных съедобных растений, а также методов их выращивания и подготовки с целью получения высоких уровней индуцирующей ферменты фазы 2 активности для хемопротекции. Кроме того, необходимо разрабатывать способы выращивания и подготовки съедобных растений, продуцирующих известный спектр специфических индукторов ферментов фазы 2 с целью повышения эффек 3 тивности инактивации специфических канцерогенов или классов канцерогенов. Кроме того,существует потребность в методах скрещивания и селекции растений для повышения указанной индуцирующей активности, а также в методах выделения и анализа индукторов, продуцируемых отдельными сортами растений. Сущность изобретения Одним из объектов настоящего изобретения являются пищевые продукты и добавки,обогащенные хемопротективными в отношении рака соединениями. Другим объектом изобретения являются пищевые продукты, которые содержат значительные количества индукторов ферментов фазы 2 и практически свободны от индукторов ферментов фазы 1. Еще одним объектом настоящего изобретения являются пищевые продукты, содержащие значительные количества индукторов ферментов фазы 2 и нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления, а также вызывающих образование зоба (струмогенных) гидроксибутенил глюкозинолатов. Получение указанных и других продуктов достигается использованием проростков крестоцветных, за исключением капусты, кресса,горчицы и редьки, собранных перед стадией второго листа. Под проростками крестоцветных подразумеваются проростки Brassica oleracea разновидностей acephala, alboglabra, botrytis,costata, gemmifera, gongylodes, italica, medullosa,palmifolia, ramosa, sabauda, sabellica и selensia. В другом варианте осуществления настоящего изобретения получают проростки крестоцветных, за исключением капусты, кресса, горчицы и редьки, собранные перед стадией второго листа, при том, что проростки практически свободны от потенциала, индуцирующего ферменты фазы 1. В еще одном варианте осуществления изобретения получают не токсичный экстракт проростков крестоцветных, за исключением капусты, кресса, горчицы и редьки, собранных перед стадией второго листа. Нетоксичный экстракт может быть водным экстрактом. Кроме того,водный экстракт может содержать соединение крестоцветных, например, рода Raphanus, включающее активный фермент мирозиназу. В другом варианте осуществления настоящего изобретения получают пищевой продукт,содержащий проростки крестоцветных, за исключением капусты, кресса, горчицы и редьки,собранных до стадии второго листа; экстракты проростков или семян крестоцветных; или любые комбинации проростков или экстрактов. Кроме того, изобретение обеспечивает способ повышения хемопротективной активности ферментов фазы 2 у млекопитающих, включающий применение эффективного количества проростков крестоцветных, за исключением 4 капусты, кресса, горчицы и редьки, собранных перед стадией второго листа. Изобретение также обеспечивает способ повышения хемопротективной активности ферментов фазы 2 у млекопитающих, включающий применение эффективного количества пищевого продукта, содержащего проростки крестоцветных, за исключением капусты, кресса, горчицы и редьки, собранных перед стадией второго листа. В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает способ получения проростков крестоцветных, за исключением Brassicaoleracea capitata, Lepidium sativum, Sinapis alba,Sinapis nigra и Raphanus sativus, включающий проращивание соответствующих семян и сбор проростков до стадии второго листа или на этой стадии с получением проростков, обогащенных соединениями, индуцирующими активность ферментов фазы 2 при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинолатов, продуктов их расщепления и гидроксибутенил глюкозинолатов, вызывающих образование зоба. Проростки крестоцветных представляют собой проростки Brassica oleracea разновидностей acephala,alboglarba, botrytis, costata, gemmifera, gongylodes, italica, medullosa, palmifolia, ramosa,sabauda, sabellica и selensia. В другом варианте осуществления изобретения получают пищевой продукт, содержащий проростки крестоцветных, собранные перед стадией второго листа, содержащие, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через 3 дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащие нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов, а также любые комбинации проростков или экстрактов. Изобретение также относится к проросткам крестоцветных, за исключением Brassicaoleracea capitata, Lepidium sativum, Sinapisalba,Sinapis nigra и Raphanus sativus, собранным перед стадией второго листа, обогащенным соединениями, индуцирующими активность ферментов фазы 2, например, содержащим, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки,и содержащим нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов и практически свободным от индуцирующего ферменты фазы 1 потенциала. Изобретение также относится к нетоксичной, полученной с помощью растворителя композиции глюкозинолатов и изотиоцианатов, 5 полученной из экстракта проростков крестоцветных, собранных перед стадией второго листа, содержащих, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Нетоксичный экстракт может быть водным экстрактом. Кроме того, водный экстракт может содержать соединение крестоцветных, например родаRaphanus, представляющее собой активный фермент мирозиназу. Изобретение также относится к способу увеличения хемопротективного количества ферментов фазы 2 у млекопитающих, включающему введение эффективного количества проростков, собранных перед стадией второго листа, содержащих, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Изобретение также относится к способу увеличения хемопротективного количества ферментов фазы 2 у млекопитающих, включающему введение эффективного количества пищевого продукта, который содержит проростки, собранные перед стадией второго листа,содержащие, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащие нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предусматривает разработку способа получения пищевого продукта,обогащенного глюкозинолатами, включающего проращивание семян крестоцветных, за исключением капусты, кресса, горчицы и редьки, и сбор проростков перед стадией второго листа с приготовлением пищевого продукта, содержащего многочисленные проростки. Под проростками крестоцветных подразумеваются проростки Brassica oleracea разновидностей acephala,alboglabra, botrytis, costata, gemmifera, gongylodes, italica, medullosa, palmifolia, ramosa,sabauda, sabellica и selensia, содержащие нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Изобретение также относится к пищевому продукту, обогащенному глюкозинолатами, используемому для увеличения хемопротективно 002571 6 го количества ферментов фазы 2 или снижения уровня канцерогенов в организме млекопитающего при потреблении данного продукта и полученному путем проращивания семян крестоцветных, за исключением капусты, кресса, горчицы и редьки, и сбором проростков до стадии второго листа с приготовлением пищевого продукта, содержащего многочисленные проростки. Изобретение также относится к способу получения композиции глюкозинолатов и изотиоцианатов, включающему экстрагирование глюкозинолатов и изотиоцианатов из проростков крестоцветных, за исключением капусты,кресса, горчицы и редьки, собранных перед стадией второго листа, с помощью нетоксичного растворителя и выделение экстрагированных глюкозинолатов и изотиоцианатов из экстракта. Фермент мирозиназу или содержащее данный фермент соединение крестоцветных, например,вида Raphanus, смешивают с проростками крестоцветных, экстрактом, или с проростками и экстрактом. Кроме того, изобретение относится к способу получения пищевых продуктов, обогащенных глюкозинолатами, включающему проращивание семян крестоцветных, содержащих, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов, и сбор проростков перед стадией второго листа с приготовлением пищевых продуктов,содержащих многочисленные проростки. Семена могут принадлежать Brassica oleracea, включая разновидности acephala, alboglabra, botrytis,costata, gemmifera, gongylodes, italica, medullosa,palmifolia, ramosa, sabauda, sabellica и selensia. Изобретение также относится к пищевому продукту, обогащенному глюкозинолатами, полученному путем проращивания семян крестоцветных, содержащих, по крайней мере, 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления и струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов, и сбором проростков перед стадией второго листа с приготовлением пищевого продукта, содержащего многочисленные проростки. Пищевой продукт содержит нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления, а также струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Изобретение также относится к способу получения пищевого продукта, включающему экстрагирование глюкозинолатов и изотиоциа 7 натов с помощью растворителя из семян, проростков, растений или частей растений крестоцветных, при том, что семена, используемые для получения проростков, растений или частей растений, содержат не менее 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении через три дня после проращивания семян, и данные семена, проростки, растения или части растений содержат нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления, а также струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов, и выделение экстрагированных глюкозинолатов и изотиоцианатов. Нетоксичным экстрагирующим растворителем может быть вода. Фермент мирозиназу или соединение крестоцветных, содержащее данный фермент, например, вида Raphanus, смешивают с проростками крестоцветных,семенами, растениями или частями растений,или с экстрактами, или с любой их комбинацией. Изобретение также относится к способу снижения уровня канцерогенов у млекопитающих, включающему применение проростков крестоцветных, за исключением проростков капусты, кресса, горчицы и редьки. Изобретение также относится к способу снижения уровня канцерогенов у млекопитающих, включающему применение проростков крестоцветных, содержащих не менее 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении на третий день после проращивания семян, которые образуют указанные проростки, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления, а также струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Кроме того, изобретение относится к способу получения пищевого продукта путем введения в съедобный ингредиент семян крестоцветных, содержащих не менее 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении на третий день после проращивания и нетоксичные уровни индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления, а также струмогенных гидроксибутенил глюкозинолатов. Изобретение также относится к способу экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов из растительной ткани, включающему гомогенизирование растительной ткани в избытке смеси диметилсульфоксида, ацетонитрила и диметилформамида (DMF/ACN/DMSO) при температуре, подавляющей активность мирозиназы. Изобретение также относится к проросткам крестоцветных, собранных перед стадией 2 го листа, при том, что соотношение монофункциональных и бифункциональных индукторов в них составляет не менее 20/1. Другим объектом настоящего изобретения является пищевой продукт, дополнительно со 002571 8 держащий очищенный или частично очищенный глюкозинолат. Другие объекты, особенности и преимущества настоящего изобретения станут более ясными из дальнейшего подробного описания. Однако необходимо понимать, что подробное описание и конкретные примеры, относящиеся к предпочтительным вариантам осуществления изобретения, приведены здесь только в иллюстративных целях, поскольку различные изменения и модификации, которые не выходят за рамки изобретения, будут очевидны для специалиста из последующего описания. Перечень чертежей На фиг. 1 показан общий индуцирующий потенциал органических экстрактов (полученных с помощью растворителя) культивируемых растений брокколи и дайкона как функция возраста растения. На фиг. 2 приведены ЯМР-спектры высокого разрешения выделенных глюкозинолатов,полученных из 3-х дневных проростков брокколи сорта Сага путем горячей водной экстракции. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретенияI. Определения В описании многие термины используются в расширенном значении. Последующие определения приведены для облегчения понимания изобретения. Бифункциональный индуктор - это молекула, которая повышает активность как ферментов фазы 1 (цитохромы Р-450), так и ферментов фазы 2, и для проявления действия которой необходимо участие арилгидрокарбонового (Ah) рецептора и родственного ему ксенобиотикотвечающего элемента (XRE). Примерами таких индукторов служат плоские планарные ароматические соединения, такие как полициклические гидрокарбоны, азокрасители или 2,3,7,8 тетрахлородибензо-п-диоксин (TCDD). Хемопротектор или хемопротектант представляет собой синтетический или природный химический агент, который уменьшает чувствительность млекопитающих к токсическому и неопластическому действию канцерогенов. Под пищевым продуктом понимается любая съедобная субстанция, содержащая заявленные в настоящем изобретении проростки, или экстракты или препараты, приготовленные из указанных проростков, которая способна доставлять индукторы фазы 2 млекопитающим,съедающим данный пищевой продукт. Пищевой продукт может быть свежеприготовленным и представлять собой, например, салаты, напитки или сэндвичи, содержащие заявленные проростки. Альтернативно, продукт, содержащий заявленные в настоящем изобретении проростки,может быть высушен, зажарен, сварен, лиофилизирован или запечен. Среди огромного многообразия предлагаемых продуктов находятся 9 хлеб, чаи, супы, смеси злаков, пилюли и таблетки. Индуцирующая активность или индуцирующая активность по отношению к ферментам фазы 2 служит мерой способности соединения(соединений) индуцировать активность ферментов фазы 2. В настоящем изобретении индуцирующую активность измеряют посредством определения QR-активности в биологическом тесте на клетках мышиной гепатомы in vitro. Соответственно, индуцирующую активность определяют как индуцирующую QR-активность в клетках Нера 1 с 1 с 7 (клетки мышиной гепатомы), инкубированных с экстрактами проростков, семян или других частей растений, не обработанных мирозиназой. Индуцирующую активность измеряют в клетках мышиной гепатомы Нера 1 с 1 с 7, выращиваемых в 96-луночных планшетах. Обычно в каждую ячейку планшета вводят 10000 клеток Нера 1 с 1 с 7. Клетки гепатомы выращивают в течение 24 ч, а затем в каждую ячейку вносят последовательные разведения растительного экстракта, содержащего микрограммовые количества свежей растительной ткани. Разведения готовят на свежей среде, содержащей 0,15 мл культуральной среды альфаМЕМ с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, а также пенициллина и стрептомицина. Клетки инкубируют еще 48 ч.QR-активность (на основании образования восстановленного сине-коричневого красителя тетразолия) измеряют при помощи оптического сканера микротитровальных планшетов в клеточных лизатах, приготовленных в одном планшете, и соотносят с концентрацией белка. Количественную информацию о специфическойQR-активности получают при компьютерном анализе величин поглощения. Одна единица индуцирующей активности соответствует такому количеству, которое при добавлении в одну ячейку планшета приводит к удвоению QRактивности (см. ProchaskaSantamaria,Anal.Biochem. 169:328-336 (1988). Prochaska etal., Proc.Natl,Acad.Sci.USA 89:2394-2398 (1992. Индуцирующий потенциал или индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал служит мерой комбинированных количеств индуцирующей активности в растительной ткани, обусловленной изотиоцианатами и глюкозинолатами, которые могут быть конвертированы мирозиназой в изотиоцианаты. Глюкозинолаты сами по себе не являются индукторами ферментов фазы 2 у млекопитающих, при том что изотиоцианаты являются такими индукторами. Таким образом, индуцирующий потенциал определяют как QR-активность в клетках мышиной гепатомы Нера 1 с 1 с 7, инкубированных с обработанными мирозиназой экстрактами проростков,семян или других частей растений. В настоящем изобретении индуцирующий потенциал измеряют при биологическом тестировании QRактивности в клетках мышиной гепатомы invitro, как описано выше. Индуцирующий потенциал измеряют с использованием клеток мышиной гепатомы Нера 1 с 1 с 7, выращиваемых в 96 луночных планшетах. Обычно в каждую ячейку планшета вводят 10000 клеток Нера 1 с 1 с 7. Клетки гепатомы выращивают в течение 24 ч, а затем в каждую ячейку вносят последовательные разведения растительного экстракта, содержащего микрограммовые количества свежей растительной ткани. Разведения готовят на свежей культуральной среде, содержащей 0,15 мл культуральной среды альфа-МЕМ с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, а также пенициллина и стрептомицина. К растительному экстракту добавляют мирозиназу (6 единиц на 1 мл растительного экстракта). Мирозиназу очищают согласно модифицированному методу Palmieri et al. (Anal.Biochem. 35:320-324(1982 из 7-дневных проростков дайкона, выращенных на агаровой подложке, не содержащей дополнительных питательных веществ. После 234-кратной очистки мирозиназа имеет специфическую активность 64 единицы/мг белка [единица = количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкмоля синигрина в минуту]. Растительный экстракт первоначально разводят в 200 раз в лунках планшета, а затем осуществляют 7 последовательных разведений. Клетки инкубируют еще 48 ч. QR-активность(на основании образования восстановленного сине-коричневого красителя тетразолия) измеряют при помощи оптического сканера микротитровальных планшетов в клеточных лизатах,приготовленных в одном планшете, и соотносят с концентрацией белка. Количественную информацию о специфической QR-активности получают при компьютерном анализе величин поглощения. Одна единица индуцирующего потенциала соответствует такому количеству,которое при добавлении в одну ячейку планшета приводит к удвоению QR-активности (см.Acad.Sci.USA 89:2394-2398 (1992. Монофункциональный индуктор селективно повышает активность ферментов фазы 2 без существенного изменения активности ферментов фазы 1. Монофункциональные индукторы не зависят от функционального АПрецептора, но усиливают транскрипцию ферментов фазы 2 посредством элемента, отвечающего на антиоксиданты (ARE). Под проростками крестоцветных понимают растение или рассаду на ранних стадиях развития, непосредственно следующими за прорастанием семян. Семена крестоцветных помещают в такие условия, в которых они успешно прорастают и развиваются. Заявленные в настоящем изобретении проростки крестоцветных собирают вскоре после прорастания семян до стадии второго листа или на этой стадии. Заявленные в настоящем изобретении проростки кре 11 стоцветных содержат индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал в количестве не менее 200000 единиц на грамм свежей массы при измерении на третий день после выращивания в условиях,обеспечивающих прорастание и развитие семян.II. Описание Основной механизм защитного действия фруктов и овощей, заключающийся в снижении частоты опухолей у людей, зависит от минорных химических компонентов, которые при поступлении в клетки млекопитающих повышают уровни ферментов фазы 2, детоксифицирующих канцерогены. Показано, что антиканцерогенная активность отдельных съедобных растений может быть повышена. Такие растения, как Brassica oleracea разновидности italics (брокколи) обычно не собирают до тех пор, пока они не образуют головки. Путем культивирования данных растений только до стадии проростка, т.е. с начала герминации до стадии 2-го листа, удается повысить количество индукторов ферментов,которые детоксифицируют канцерогены и защищают, по меньшей мере, в пять раз по сравнению с овощами того же сорта, собранными на товарной стадии. Может наблюдаться и 10 1000 -кратное повышение. Сбор растений на стадиях ранних проростков или остановка их роста любым другим способом приводит к повышению индуцирующего потенциала и к получению пищевого продукта,к которому потребители уже привыкли. Индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал подобных проростков может быть в несколько сот раз выше в сравнении с таковым у взрослых растений товарной стадии, полученных из тех же семян. Таким образом, появляется возможность получения людьми того же количества индуцирующего потенциала при потреблении относительно небольшого количества проростков, а не значительных количеств овощей обычной товарной стадии. Показано, что в значительной мере индуцирующий потенциал крестоцветных обусловлен наличием в них изотиоцианатов и их биологических предшественников глюкозинолатов. Глюкозинолаты превращаются в изотиоцианаты под действием фермента мирозиназы, которая является тиоглюкозидазой. Обычно мирозиназа и глюкозинолаты в клетке разделены, но при повреждении клетки, с утратой компартментализации, мирозиназа входит в контакт с глюкозинолатами, которые затем превращаются в изотиоцианаты. Для проверки большого количества съедобных растений и оценки воздействия изменений окружающей среды на индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал данных растений было необходимо усовершенствовать ранее описанные методы гомогенизации и экстракции. Ранее описанные методы экстракции индукторов фазы 2 из овощей включали гомогенизацию овощей в холодной воде, лиофилизацию, экс 002571 12 тракцию полученного порошка ацетонитрилом,фильтрацию и концентрацию упариванием. Prochaska et al., Proc.Natl,Acad.Sci.USA 89:23942398 (1992). После идентификации сульфорафана из брокколи в качестве главного индуктора ферментов фазы 2, были проведены сравнительные экстракции горячим 80%-ным метанолом, в которых была обнаружена аналогичная индуцирующая активность, как и в упомянутых выше ацетонитрильных экстрактах. Когда к этим метанольным экстрактам, в которых растворены глюкозинолаты, добавляют мирозиназу, наблюдается резкое усиление индуцирующией активности, присущей данным экстрактам (данные суммированы в табл. 1). Таким образом, намеренное превращение глюкозинолатов в изотиоцианаты с использованием экзогенной мирозиназы, может служить хорошим указанием на присутствие в тестируемых растениях индукторов ферментов фазы 2. Стало понятным, что большая часть потенциальных индукторов в крестоцветных обычно присутствует в растениях в виде глюкозинолатных предшественников изотиоцианатов. Преобладание глюкозинолатов и та быстрота, с которой они переходят в изотиоцианаты при повреждении тканей крестоцветного растения, привели к разработке усовершенствованного метода экстракции. Путем подбора смесей растворителей и оценки активности водных гомогенатов и гомогенатов в растворителях, полученных из свежих растений, была разработана процедура, позволяющая проводить количественное определение глюкозинолата и изотиоцианата в одном и том же неконцентрированном образце. Помимо того, что концентрация выпариванием является лимитирующим по скорости этапом всей процедуры экстракции, она еще дает возможность летучим индукторам избежать обнаружения. Усовершенствованный метод более прост и эффективен и требует лишь полной гомогенизации растительного образца в растворителе. Использование данного метода позволило авторам настоящего изобретения продемонстрировать резкое увеличение выхода индуцирующей активности и индуцирующего потенциала из крестоцветных растений по сравнению с ранее описанными методами. Свежесобранные овощи быстро и осторожно помещают непосредственно в органические растворители, представляющие собой смесь DMF/ACN/DMSO, при температуре, подавляющей активность мирозиназы. Глюкозинолаты и изотиоцианаты эффективно экстрагируются смесью органических растворителей. Предпочтительно смешивать DMF, ACN иDMSO в равных объемах. Однако пропорции трех растворителей в смеси могут варьировать для оптимизации экстракции специфических глюкозинолатов и изотиоцианатов из любой растительной ткани. Предпочтительно, чтобы 13 температура экстракционной смеси была ниже 0 С, а наиболее предпочтительно - ниже -50 С. Температура экстрагирующего растворителя должна оставаться выше точки замерзания. В то же время фермент мирозиназа, который неизбежно сопутствует данным растительным компонентам и быстро превращает глюкозинолаты в изотиоцианаты, неактивен. Подобные экстракты обычно содержат большие количества глюкозинолатов и пренебрежимо малые количества изотиоцианатов. Активность мирозиназы inplanta варьирует в зависимости от различных видов растений. Глюкозинолаты сами по себе не являются индукторами ферментов фазы 2 у млекопитающих, при том, что изотиоцианаты являются монофункциональными индукторами при биологическом определении QR-активности в клетках мышиной гепатомы. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов, в отличие от индуцирующей активности, может быть количественно определен добавлением в тест-систему очищенной мирозиназы, полученной из того же или другого растительного источника. У человека глюкозинолаты, по меньшей мере частично, конвертируются в изотиоцианаты. Однако, если желательно усилить эту конверсию, проростки брокколи или других растений могут быть смешаны с мирозиназой. Смесь может быть приготовлена в воде или другом нетоксичном растворителе, не инактивирующем мирозиназу. Мирозиназа может быть в виде частично или полностью очищенного препарата. Альтернативно, мирозиназа может присутствовать в растительной ткани, например в богатых мирозиназой проростках крестоцветных, включая Raphanus sativus или дайкон. Подобный препарат можно использовать для приготовления "супа" для потребления человеком, богатого изотиоцианатами, но почти лишенного глюкозинолатов. Индуцирующий потенциал может быть определен путем измерения специфической QR-активности in vitro в многолуночных планшетах с клетками мышиной гепатомы, как описано выше. Отношение монофункциональной и бифункциональной индуцирующих активностей в растительной ткани определяют путем биологического тестирования растительных экстрактов,как описано выше, не только с использованием клеток Нера 1 с 1 с 7 дикого типа, но также и мутантных клеток, обозначенных с 1 и ВРс 1, которые имеют соответственно дефектные рецепторы Ah или дефектные гены цитохрома Р-450.(1988). Согласно настоящему изобретению, собранные проростки могут быть включены непосредственно в пищевые продукты, такие как свежие салаты, сэндвичи или напитки. Развитие проростка может быть остановлено активным вмешательством человека, например, путем ох 002571 14 лаждения перед стадией 2-го листа, обычно между 1-м и 14-м днями роста. Остановка роста может быть достигнута путем лишения проростка субстрата и/или источника воды. Замораживание, высушивание, запекание, жарка, лиофилизация и кипячение - вот те обработки, которые наряду с другими можно использовать для остановки роста. Они могут быть полезны как для сохранения активности мирозиназы в проростке (например, лиофилизация), так и для инактивации мирозиназы (например, кипячение), в зависимости от конкретного применения. До введения в пищевой продукт проростки могут быть подвергнуты созреванию в различных ростовых условиях. Например, проросток может быть собран на очень ранней стадии развития, всего лишь на первый или второй день после прорастания семени. Затем проростку можно дать созреть в различных условиях, таких как пониженная или повышенная интенсивность освещения, температура или влажность,обработка ультрафиолетовым облучением или другими стрессовыми воздействиями, добавление экзогенных питательных веществ или регуляторов роста растений (гормонов). Затем проростки немедленно включают в пищу, например в салаты. Напротив, развитие проростков может быть остановлено и сами они подвергнуты различным обработкам, например лиофилизации,высушиванию, экстрагированию водой и другими растворителями, замораживанию, запеканию, жарке, кипячению и т.д. Проросток пригоден для потребления человеком, если к нему не прилипло или не прикрепилось несъедобного субстрата, такого как земля. Обычно проростки выращивают на плотной непищевой подложке, такой как агар, бумажные полотенца, промокательная бумага,Вермикулит, Перлит и т.д. при достаточной освещенности и достаточном количестве воды. Таким образом, если проростки выращивают не в земле, а на плотной подложке, нет необходимости отмывать несъедобную землю. Если проростки выращивают на особенно плотной подложке, такой как земля, Вермикулит или Перлит, может потребоваться отмывка, чтобы проростки стали пригодными для потребления человеком. Проростки могут быть выращены в удобных для транспортировки и продажи контейнерах. Обычно подобные контейнеры представляют собой пластиковые коробки или банки с влажной подушечкой на дне. Контейнеры позволяют проникать свету, являясь вместе с тем механическим защитным барьером. Известны многочисленные методы культивирования проростков, примеры их приведены в патентах США . 3,733,745; 3,643,376; 3,945,148; 4,130,964; 4,292,760 или 4,086,725. Пищевые продукты, содержащие заявленные в настоящем изобретении проростки, наряду с другими продуктами можно хранить и транспортировать в 15 различных контейнерах, таких как банки, пакеты и коробки. Проростки, служащие источником хемипротектантов против рака, обычно являются проростками крестоцветных, за исключением проростков капусты (Brassica oleracea capitata),кресса (Lepidium sativum), горчицы (Sinapis alba и S.niger) и редьки (Raphanus sativus). Обычно для получения проростков используют представителей семейства Criciferae, вида Brassiceae подвида Brassicinae. Предпочтительно используют проростки Brassica oleracea, выбранные из следующих разновидностей: acephala (капуста,коллардс, дикая капуста, курчавая капуста),medullosa (кормовая мозговая капуста), ramosa(листовая капуста). Возможно использование и других разновидностей. Наиболее полезными сортами брокколи для использования в целях настоящего изобретения являются сорта Сага, ДеСикко, Эверест,Эмералд Сити, Пэкман, Корвет, Денди ранний,Император, Меринер, Грин Комет, Грин Вэлиант, Аркадия, Калабрезе Каравел, Ченселлор,Ситейшн, Крузер, Красная стрела проростковый, Эврика, Эксцельсиор, Галеон, Гинга, Голиаф, Грин Дьюк, Гринбелт, Интальянский проростковый, Поздний пурпурный проростковый,Поздний зимний проростковый Белая Звезда,Легенда, Лепрешо, Марафон, Минарет (Романеско), Парагон, Патриот, Премиум Кроп, Рэпайн(Спринг Рааб), Розалинд, Сэлад (Фолл Рааб),Самурай, Шогун, Спринтер, Султан, Тайко и Трикси. Однако, пригодны и многие другие сорта брокколи. Наиболее полезными сортами цветной капусты являются сорта Аотверда, Эмейзинг, Анды, Бургундская Королева, Кэндид Шарм, Кашмир, Белый Рождественский, Доминант, Элби,Суперранний Сноубол, Фримонт, Инклайн, Милуоки Миньютмен, Рашмор, S-207, Серрано,Сьерра Невада, Сирия, Снежная Корона, Снежные Хлопья, Сноу Грейс, Сноубред, Солид,Тайпан, Вайолет Куин, Уайт Бэрон, Уайт Бишоп, Уайт Контесса, Уайт Корона, Уайт Дав,Уайт Флэш, Уайт Фокс, Уайт Найт, Уайт Лайт,Уайт Куин, Уайт Рок, Уайт Сэйлс, Уайт Саммер, Уайт Топ, Юкон. Однако пригодны и многие другие сорта цветной капусты. Подходящие проростки должны содержать индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал в количестве не менее 200000 единиц на грамм свежей массы при измерении на 3-й день инкубации в условиях, в которых семена прорастают и развиваются. Предпочтительно, проростки должны содержать индуцирующий потенциал в 16 количестве не менее 250000 единиц на грамм свежей массы, или даже 300000 единиц, 350000 единиц, 400000 единиц или 450000 единиц. В отдельных образцах было обнаружено более 500000 единиц на грамм свежей массы на 3-й день после проращивания семян. Уровень индуцирующей активности и индуцирующего потенциала варьирует среди крестоцветных и даже среди их сортов. Наиболее предпочтительны проростки, практически свободные от индолглюкозинолатов и продуктов их расщепления, которые в клетках млекопитающих обладают индуцирующим ферменты фазы 1 потенциалом, и практически свободные от токсичных количеств струмогенных нитрилов и таких глюкозинолатов, как гидроксибутенил глюкозинолаты, которые при гидролизе образуют струмогенные оксазолидонетионы. Зрелые проростки брюссельской капусты и рапса богаты подобными нежелательными глюкозинолатами. Нетоксичные экстракты в растворителях,полученные согласно настоящему изобретению,могут быть использованы для приготовления полезных настоев и супов. В число нетоксичных или легко удаляемых растворителей, используемых для экстракции согласно настоящему изобретению, входят вода, жидкая двуокись углерода, этанол и другие растворители. Экстракцию проростков можно проводить холодной, теплой или, предпочтительно, горячей или кипящей водой, которая денатурирует мирозиназу. После экстракции ростки могут быть удалены из экстракта или оставлены в нем. Процедура экстракции может быть использована для инактивации мирозиназы, присутствующей в проростках. Подобная инактивация может способствовать сохранению индуцирующего потенциала. Экстракт можно употреблять в пищу сам по себе или подвергать дальнейшей обработке. Например, экстракт можно выпарить с получением сухого экстрагированного продукта. Он может быть охлажден, заморожен или лиофилизирован. Он может быть смешан с соединениями растений семейства крестоцветных,содержащими активный фермент мирозиназу. Это облегчит конверсию глюкозинолатов в изотиоцианаты до употребления продукта в пищу. Растения, которые содержат активную мирозиназу, принадлежат к роду Raphanus. Это, в частности, дайкон, разновидность редьки. Наряду с проростками семена весьма богаты индуцирующим потенциалом. Поэтому в объем настоящего изобретения включено использование семян крестоцветных в качестве пищевых продуктов. Подходящие семена крестоцветных можно смолоть в муку и использовать в качестве добавок к пище или напиткам. Подобная мука может добавляться при выпечке хлеба и других хлебобулочных изделий, добавляться в напитки и коктейли. Альтернативно,семена можно экстрагировать нетоксичным рас 17 творителем, таким как вода, жидкая двуокись углерода или спирт, для приготовления супов,чаев и других напитков и настоев. Семена можно также использовать в пищу и без размола. Семена можно использовать в различных блюдах и продуктах, таких как салаты, мюсли, хлеб и другая выпечка и т.д. Согласно настоящему изобретению, в состав пищевых продуктов могут вводиться проростки, семена или экстракты проростков или семян, полученные или приготовленные от одного или нескольких различных крестоцветных растений различных родов, видов, разновидностей или сортов. Показано, что генетически различные крестоцветные продуцируют химически различные индукторы ферментов фазы 2. Различные индукторы ферментов фазы 2 детоксицируют различные канцерогены с различной скоростью. Поэтому пищевые продукты, включающие генетически различные проростки или семена, или экстракты, или препараты, приготовленные из этих проростков или семян, будут детоксицировать более широкий ряд канцерогенов. Глюкозинолаты и/или изотиоцианаты можно выделять из семян или растительных экстрактов при помощи методов, хорошо известных из уровня техники. См. Fenwick et al.,CRC Crit.Rez.Food Sci. Nutr. 18:123-201 (1983)Zhang et al., Proc.Natl,Acad.Sci.USA 89:23992403 (1992). Очищенные или частично очищенные глюкозинолаты или изотиоцианаты можно вводить в пищевые продукты в качестве добавки. Доза глюкозинолата и/или изотиоцианата,вводимого в пищевые продукты, находится в интервале от 1 мкмоль до 1000 мкмоль. Однако,величина добавок глюкозинолата и/или изотиоцианата к пищевым продуктам может быть и выше. Отбор растений, чьи проростки, семена или другие части обладают высоким потенциалом индукции ферментов фазы 2, может стать частью программ по селекции Cruciferae. Кроме того, целью тех же программ может стать идентификация и отбор сортов, продуцирующих специфические индукторы ферментов фазы 2,или определенного спектра индукторов. Стратегия скрещивания, селекции и выведения новых сортов Cruciferae хорошо известна специалистам в данной области исследований. BrassicaPress, Tokyo pp.354 (1980). Полученные растения проверяют на активность индукторов фазы 2 или на химическую идентичность специфических индукторов ферментов фазы 2, продуцирумых конкретным растением на различных фазах роста. Определяют растения, представляющие интерес и усиливают нужные признаки или сочетают их с другими агрономическими характеристиками с использованием методов,хорошо известных из уровня техники. 18 Пример 1. Сравнение индуцирующего потенциала побегов крестоцветных. Первоначально проводили поверхностную стерилизацию семян различных видов семейства крестоцветных обработкой 70%-ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку, не содержащую дополнительных питательных веществ. Семена проращивали в течение 1 - 9 дней. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры. Семена и проростки инкубировали при следующем дневном цикле: 16 ч освещения при 25 С и 8 ч темноты при 20 С. После 3-х дней инкубации проростки собирали и немедленно помещали в 10 объемов смеси DMF/ACN/DMSO (равное соотношение компонентов) при -50 С. Данная смесь растворителей имеет точку замерзания около -33 С, но при добавлении около 10% воды, а именно столько ее содержится в растительном материале, точка замерзания опускается ниже -64 С. При смешивании с растительным материалом действительная точка замерзания опускается еще ниже. Гомогенизацию проводили или вручную,растирая образцы в стеклянном гомогенизаторе в небольшом количестве растворителя с постепенным добавлением большего количества растворителя, или же образцы гомогенизировали в 10-ти объемах растворителя в гомогенизаторе Бринкман Политрон в течение 1 мин при половинной мощности. Гомогенат центрифугировали для удаления плотного материала и хранили при -20 С до тестирования. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов, приготовленных, как описано выше,определяли биологическим методом в микротитровальных планшетах, как описано в разделе"Определения". Проростки брокколи и цветной капусты,собранные и протестированные после трех дней проращивания семян, содержат более 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала. С другой стороны, капуста, редька, горчица и кресс содержат менее 200000 единиц на 1 г свежей массы индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала при измерении в те же временные сроки. Пример 2. Вариации в индуцирующем потенциале среди различных сортов брокколи. Имеются вариации в индуцирующем потенциале в зависимости от сорта брокколи. Кроме того, значительная доля индуцирующего потенциала в крестоцветных присутствует в виде предшественников глюкозинолатов. Инду 19 цирующую активность и индуцирующий потенциал головок брокколи товарной стадии определяли после соответствующей экстракцииDMF/ACN/DMSO и исследовали QR-активность, как описано выше. Биологическое тестирование гомогенатов головок брокколи товарной стадии с добавлением или без добавления очищенной растительной мирозиназы показало, что величина QRактивности в отсутствие мирозиназы была на 5% ниже, чем при ее добавлении. Данные наблюдения подтверждают ранние предположения(см. Matile et al., Biochem. Physiol. Pflanzen 179:5-12 (1984) о том, что неповрежденные растения практически не содержат свободных изотиоцианатов. Таблица 1. Воздействие мирозиназы на индуцирующую активность головок брокколи товарной стадии Сорт Ед./г растения+ Мирозиназа Де Сикко 5882 37037 Калабрезе Корвет 1250 41666 Эверест 12500 Ниже предела обнаружения (833 ед./г) Как видно из табл. 1, значительная доля растительного индуцирующего потенциала обусловлена гидролизом глюкозинолатов мирозиназой с образованием изотиоцианатов. Таким образом, гидролиз необходим для биологической активности. Пример 3. Индуцирующий потенциал достигает наивысших значений в семенах и снижается по мере созревания ростков. Индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал наиболее высок в семенах и постепенно снижается в ходе культивирования рассады. Первоначально проводили поверхностную стерилизацию семян Brassica oleracea разновидности italica (брокколи) сортов Сага и ДеСикко обработкой 70%-ным этанолом в течение 1 мин,затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку,не содержащую дополнительных питательных веществ. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры (16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты, 20 С). Ежедневно собирали растения с поверхности агара в нескольких контейнерах. Растения собирали быстро и осторожно, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой, высвобождающейся при повреждении растений. Образцы, состоящие приблизительно 20 из 40 проростков, гомогенизировали в 10 объемах растворителя DMF/ACN/DMSO при -50 С. При этом растворялся почти весь нелигноцеллюлозный растительный материал. Собранные растения гомогенизировали и определяли QR-активность с добавлением или без добавления мирозиназы, как описано выше. Как видно на фиг.1, индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал, был наиболее высоким в семенах, но постепенно снижался по мере развития проростка. Не выявлялась индуцирующаяQR-активность (менее 1000 ед./г), если не добавляли мирозиназу. Пример 4. Индуцирующий потенциал проростков выше, чем растений товарной стадии. Заявленные в настоящем изобретении проростки имеют более высокий индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал, нежели растения товарной стадии. В частности, индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал проростков, по меньшей мере, в 5 раз выше по сравнению со зрелыми растениями. Например, общий индуцирующий потенциал семидневных проростков брокколи при экстракции DMF/ACN/DMSO и обработке мирозиназой, как описано выше, составлял 238000 и 91000 ед./г свежей массы в сравнении с 25000 и 20000 ед./г свежей массы для выращенных в поле головок (соцветий) брокколи сортов Сага и Де Сикко, соответственно. К настоящему времени в биологическом тесте проверены экстракты проростков более 40 представителей семейства Cruciferae, и проростки брокколи остаются наиболее богатыми индукторами ферментов фазы 2 среди всех проверенных растений. В табл. 2 приведены данные об общем индуцирующем потенциале экстрактов в органических растворителях, приготовленных из брокколи и дайкона на стадии проростков и на товарной стадии. Таблица 2. Сравнение индуцирующего потенциала проростков и зрелых растений Разница Активность(ед./г свежего веса) Сорт овоща Зрелый овощ Проросток Дайкон Миура 625 26316 42 Теншун 3333 33333 10 Хаккай 1471 16667 11 Охкура 2857 50000 18 Брокколи Сага 25000 476000 19 ДеСикко 25000 625000 25 Эверест 8333 1087000 130 Эиералд Сити 12500 833000 67 Пэкман 20000 556000 28 Отбирали образцы коммерческой части каждого растения (корнеплодRaphanus sativus разновидности radicola (редька) и соцветия Brassica oleracea разновидности italica (брокколи). Ко всем тестируемым экстрактам добавляли мирозиназу.Проростки брокколи были однодневными, а проростки дайкона 4-5-ти дневными. Проростки брокколи сорта Эверест содержали в 130 раз больше индуцирующего потенциала (ед./г свежей массы), чем зрелые расте 21 ния. Индуцирующая активность брокколи была значительно выше по сравнению с дайконом. Пример 5. Индуцирующий потенциал экстрактов проростков брокколи. Определяли индуцирующий потенциал серии водных экстрактов трехдневных проростков брокколи сорта Сага. Первоначально проводили поверхностную стерилизацию семян Brassicaoleracea разновидности italica (брокколи) сорта Сага обработкой 70%-ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку,не содержащую дополнительных питательных веществ. Семена проращивали в течение 72 ч. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры (16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты,20 С). Растения быстро и осторожно собирали с поверхности агара, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой,высвобождающейся при повреждении растений. Проростки (со свежей массой приблизительно 25 мг/проросток) немедленно помещали в 3 объема кипящей воды для инактивации эндогенной мирозиназы и для экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов из растительной ткани. Воду доводили до кипения и проводили экстракцию в течение 3-х мин при помешивании. Затем проростки отцеживали от кипящего настоя (чай, суп) или гомогенизировали в нем, а осадок позже удаляли фильтрованием или центрифугированием. Приведенные в табл. 3 данные, относятся как к гомогенатам, так и к настоям. Препараты до тестирования хранили при -20 С. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов,приготовленных описанным способом, определяли, как описано выше в разделе "Определения". Таблица 3. Индуцирующие потенциалы экстрактов 3-х дневных проростков брокколи сорта Сага (экстракция горячей водой) Была обнаружена некоторая вариабельность величины индуцирующего потенциала ферментов фазы 2. Однако высокие уровни данного потенциала наблюдались постоянно. Пример 6. Обработка водных экстрактов брокколи мирозиназой дайкона.QR-активность водного экстракта брокколи повышалась в присутствии растительного источника мирозиназы. Водный экстракт трехдневных проростков брокколи сорта Сага, выращенных на влажном агаре, в котором мирозиназа была инактивирована 3-х минутным кипячением, разделяли на 6 различных аликвот по 150 мл. Девятидневные проростки дайкона, богатый источник фермента мирозиназы, добавляли к этому охлажденному экстракту в количествах, эквивалентных 0, 5, 9, 17, 29 и 40%(вес/вес) брокколи. Как описано в разделе "Определения", QR-активность контрольных экстрактов, содержащих 0% дайкона, составляла 26300 ед./г свежей массы, при том, что QRактивность экстрактов, в которые в качестве источника мирозиназы был добавлен дайкон,колебалась в пределах от 500000 до 833000 ед./г свежей массы брокколи. Соответственно, мирозиназа, присутствующая в проростках дайкона,повышала QR-активность экстрактов брокколи более, чем в 19 раз. Пример 7. Глюкорафанин и глюкоэруцин являются доминирующими глюкозинолатами в водных экстрактах проростков брокколи (сорт Сага). Хроматография парных ионов (РIС). Центрифугированные водные экстракты трехдневных проростков брокколи (сорт Сага) подвергали аналитической и препаративной хроматографии парных ионов (РIС) на обратнофазовой HPLC колонке С 18 Партисил ODS-2 в АСМ/Н 2 О (1/1 по объему) с бромидом тетраоктиламмония (ТОА) в качестве противоиона. Было обнаружено только три хорошо различимых пика: пик А элюировался через 5,5 мин, пик В через 11,5 мин и пик С через 13 мин в молярном соотношении [А:В:С] = 2,5:1,6:1,0 (контроль вели по поглощению в УФ с длиной волны 235 нм). Данные пики исчезали при обработке исходных экстрактов высоко очищенной мирозиназой. Пики А, В и С не содержали скольконибудь значительной индуцирующей активности, и циклоконденсатное определение мирозиназных гидролизатов показало, что только пики А и С содержат значительное количество изотиоцианатов, которыми и обусловлена вся индуцирующая активность. Zhang et al.,Anal.Biochem. 205:100-107 (1992). Пик В далее 23 не охарактеризовывали. Пики А и С, элюированные с HPLC колонки в виде солей ТОА, требовали конверсии в аммонийные соли для успешного проведения масс-спектроскопии, ядерного магнитного резонанса и биологического теста. Очищенный материал пиков упаривали в вакуумной центрифуге, растворяли в водном 20 мМ NH4Cl и экстрагировали хлороформом для удаления избытка ТОА бромида. Аммонийные соли глюкозинолатов оставались в водной фазе,которую затем упаривали. Идентификация глюкозинолатов Аммонийные соли пиков А и С охарактеризовывали методами мас.спектроскопии и ядерного магнитного резонанса: (а) атомная бомбардировка отрицательными ионами (FAB) на тиоглицериновом матриксе дала значения 436 amu (Пик А) и 420 amu (Пик С) для отрицательных молекулярных ионов, и (б) ядерный магнитный резонанс высокого разрешения, как видно из фиг. 2, обеспечил недвусмысленную идентификацию структуры. Пик А представлял собой глюкорафанин [4-метилсульфинилбутил глюкозинолат], а пик С - близкородственный ему глюкоэруцин [4-метилтиобутил глюкозинолат]. Данные определения, а также чистота препаратов хорошо согласовывались с индуцирующим потенциалом; после гидролиза мирозиназой пики А и С обладали потенциалом 36100 и 4360 ед./мкмоль, соответственно, в сравнении с известными значениями CD 0,2 мкМ (33333 ед./мкмоль) для сульфорафана и 2,3 мкМ (29000 ед./мкмоль) для эруцина. ВеличиныCD представляют собой концентрации вещества, необходимые для удвоения специфическойQR-активности в клетках мышиной гепатомы Нера 1 с 1 с 7. Поскольку других глюкозинолатных пиков не было выявлено, и индуцирующая активность пиков А и С обуславливала общую индуцирующую активность экстрактов, очевидно, что в растениях данного сорта брокколи, не содержится значимых количеств других индукторов, т.е. индол - или гидроксиалкенил глюкозинолатов. Таким образом, выделенные соединения были, по существу, очищенными. Пример 8. Сравнение методов экстракции индуцирующего потенциала водой и органическими растворителями. Первоначально проводили поверхностную стерилизацию семян Brassica oleracea разновидности italica (брокколи) сорта Сага обработкой 70%-ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку, не содержащую дополнительных питательных веществ. Семена проращивали в течение 72 ч. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы(16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты, 20 С). Растения быстро и осторожно собирали с поверхности агара, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой,высвобождающейся при повреждении растений. Небольшую порцию проростков гомогенизировали в 10-ти объемах растворителяDMF/ACN/DMSO при -50 С, как описано в примере 1. Данный растворитель растворяет практически весь растительный нелигноцеллюлозный материал. Основную порцию собранных проростков помещали в 5 объемов кипящей воды на 3 мин для инактивации эндогенной мирозиназы и экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов. Охлажденную смесь гомогенизировали, центрифугировали и супернатант хранили при -20 С. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов, приготовленных двумя описанными методами, определяли биологическим методом в микротитровальных планшетах, как описано выше. Обычные средние значения индуцирующих потенциалов для 5-ти препаратов составляли 702000 (экстракты DMF/ACN/DMSO) и 505000 (водные экстракты) ед./г свежей массы проростков. Спектрофотометрическое определение циклоконденсационного продукта реакции изотиоцианатов с 1,2-бензолдитиолом проводили,как описано в работе Zhang et al., Anal. Biochem. 205:100-107 (1992). Глюкозинолаты быстро превращались в изотиоцианаты после добавления мирозиназы. Около 6% общего экстрагируемого горячей водой материала составляли глюкозинолаты. Данные результаты свидетельствуют,что а) уровень изотиоцианатов в грубых растительных экстрактах крайне низок; б) мирозиназа быстро превращает избыточные глюкозинолаты в изотиоцианаты; в) при экстракции горячей водой экстрагируется приблизительно 70% индуцирующей активности, если принять за 100% активность, экстрагируемую смесью трех растворителей, причем подобные препараты безопасны для потребления человеком; г) более 95% индуцирующего потенциала в интактном растении представлено в виде глюкозинолатов, и других индукторов в биологически значимых количествах не обнаруживается. Пример 9. Регуляция продукции глюкозинолатов в ходе развития. Предварительные эксперименты с выращенной в полевых условиях брокколи (сорт ДеСикко), собранной с одного и того же поля через определенные временные интервалы, показали, что индуцирующий потенциал снижается от ранних стадий вегетации до стадии коммерческого сбора урожая, но, по-видимому, возрастает к началу цветения (поздний урожай). Эти данные позволили предположить, что индуцирующий потенциал должен быть наиболее высоким в семенах. Дальнейшие исследования 25 показали, что при поверхностной стерилизации и последующем выращивании семян восьми сортов брокколи в гнотобиотических условиях индуцирующий потенциал в отношении ферментов фазы 2 был наивысшим в семенах и прогрессивно снижался (в расчете на свежую массу) в течение 14-ти дней роста. Однако в расчете на отдельное растение в течение данного периода активность оставалась неизменной, что указывает на отсутствие синтеза глюкозинолатов на ранних этапах роста растения. Но при сравнении глюкозинолатных профилей товарных соцветий брокколи и 3-х дневных проростков (сорт Император) были обнаружены сильные различия в составе глюкозинолатов. Проводили поверхностную стерилизацию семян Brassica oleracea разновидности italica(брокколи) сорта Император обработкой 70%ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку, не содержащую дополнительных питательных веществ. Семена проращивали в течение 72 ч. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры(16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты, 20 С),Растения быстро и осторожно собирали с поверхности агара, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой,высвобождающейся при повреждении растений. Проростки (приблизительно 25 мг свежей массы/проросток) немедленно помещали в 3 объема кипящей воды для инактивации эндогенной мирозиназы и для экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов из растительной ткани. Воду доводили до кипения и проводили экстракцию в течение 3-х мин при помешивании. Затем проростки отцеживали от кипящего настоя (чай,суп), который до анализа хранили при -20 С. Соцветия брокколи товарной стадии получали, проращивая семена одной партии в теплицах в горшочной земле, перенося рассаду на органически удобряемое поле в Гаррет Каунти(Мэриленд) и затем собирая соцветия. Соцветия после сбора немедленно замораживали, доставляли в лабораторию на льду и приготавливали экстракты аналогично тому, как это делали с проростками с той разницей, что для экстракции брали приблизительно 3 г цветковой ткани. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов, полученных описанным способом,определяли биологическим методом в микротитровальных планшетах, как показано в примере 1. Хроматография парных ионов выявила два главных пика, предположительно глюкобрассицин и неоглюкобрассицин, в экстрактах, 002571 26 приготовленных из соцветий брокколи рыночной стадии, со сходным временем задержки для глюкобрассицина (индол-3-ил метил глюкозинолат) и неоглюкобрассицина (1-метоксииндол 3-илметил глюкозинолат). Данное наблюдение совпадает с опубликованными результатами по составу глюкозинолатов в зрелых растениях брокколи. Однако хроматография парных ионов в тех же условиях идентично приготовленных экстрактов 3-х дневных проростков выявила отсутствие глюкобрассицина или неоглюкобрассицина. Кроме того, 3-х дневные проростки различных сортов брокколи продуцируют различные смеси глюкозинолатов. Соответственно,продукция глюкозинолатов меняется в ходе развития растения. Пример 10. Оценка антиканцерогенной активности препаратов проростков брокколи на модели Хаггинса (вызванные ДМБА, а именно 9 10 диметил-1,2-бензантраценом, опухоли молочной железы). Первоначально проводили поверхностную стерилизацию семян Brassica oleracea разновидности italica (брокколи) сорта Сага обработкой 70%-ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку, не содержащую дополнительных питательных веществ Семена проращивали в течение 72 ч. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры(16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты, 20 С). Растения быстро и осторожно собирали с поверхности агара, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой,высвобождающейся при повреждении растений. Большое количество собранных проростков немедленно помещали в 3 объема кипящей воды для инактивации эндогенной мирозиназы и для экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов из растительной ткани. Воду доводили до кипения и проводили экстракцию в течение 3-х мин при помешивании. Затем проростки отцеживали от кипящего настоя (чай, суп), который лиофилизировали и хранили в виде сухого порошка при -20 С (препарат А). Аналогично приготовленную другую порцию проростков экстрагировали кипящей водой, остужали до 25 С и смешивали с таким количеством семидневных проростков дайкона, которое было эквивалентно приблизительно 0,5% исходной свежей массы проростков брокколи. Данную смесь гомогенизировали при помощи гомогенизатора Бринкман Политрон, инкубировали 2 ч при 37 С, фильтровали через стеклянный фильтр, лиофилизировали, как описано выше и хранили в виде сухого порошка при -20 С (препарат В). 27 Индуцирующую QR-активность и индуцирующий потенциал растительных экстрактов,приготовленных как описано выше, определяли биологическим методом при использовании планшетов для микротитрования, как описано ранее. Индукция QR-активности в препарате А была в значительной степени обусловлена глюкозинолатами, в основном глюкорафанином,представляющим собой глюкозинолат сульфорафан, но этот препарат содержал и некоторое количество глюкоэруцина, сульфидного аналога глюкорафанина. Индукция QR-активности в препарате В была почти полностью обусловлена изотиоцианатами, образовавшимися в результате обработки глюкозинолатов мирозиназой. В опыте использовали случайно выбранных самок крыс Спраг-Доули в возрасте 35 дней; по 4 животных в пластиковой клетке. Все животные получали 10 мг ДМБА через желудочный зонд в 1 мл кунжутного масла в 50 дневном возрасте. Препараты проростков (А или В) или контрольный носитель вводили также через зонд за 3, 2 и 1 день до введения ДМВА, в день введения ДМВА (за 2 ч) и на следующий день после введения ДМВА. Использованный носитель представлял собой смесь 50% Эмульфора 620 Р/50% воды. Животные получали полуочищенную диету AIN-76A ad libitum с начала введения ДМВА до окончания опыта (в возрасте 167 дней). Таблица 4. Антиканцерогенная активность экстрактов проростков брокколи на модели вызванных ДМБА опухолей молочной железы Группа Препарат Количество Общее Множестобработан- количест- венность: ных живот- во опухо- количество ных лей опухолей на крысу Только 19 34 1,79 Контроль Введение экстрактов проростков задерживало образование пальпируемых опухолей, по меньшей мере, на 5 недель. У крыс, обработанных препаратом А или препаратом В, развилось значительно меньше опухолей в сравнении с необработанным контролем, и множественность опухолей (число опухолей на крысу) была значительно ниже у животных, получавших препараты А или В. Пример 11. Метаболизм и клиренс глюкозинолатов у людей. Двум некурящим здоровым мужчинамдобровольцам в возрасте 35 и 40 лет была предложена низкоовощная диета без желтых и зеленых овощей, исключающая потребление при 002571 28 прав, горчицы, редьки, помидоров и папайи. После 24-х ч подобной диеты всю мочу добровольцев собирали 8-ми часовыми порциями. Через 24 ч после начала эксперимента испытуемым давали 100 мл супа из проростков брокколи (приготовленного, как описано далее), содержащего 520 мкмоль глюкозинолатов. Проводили поверхностную стерилизацию семян Brassica oleracea разновидности italica(брокколи) сорта Император обработкой 70%ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку, не содержащую дополнительных питательных веществ. Семена проращивали в течение 72 ч. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры(16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты, 20 С). Растения быстро и осторожно собирали с поверхности агара, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой, высвобождающейся при повреждении растений. Большое количество проростков немедленно помещали в 3 объема кипящей воды для инактивации эндогенной мирозиназы и для экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов из растительной ткани. Воду доводили до кипения и проводили экстракцию в течение 3-х мин при помешивании. Затем проростки гомогенизировали в экстракте в течение 1 мин при помощи гомогенизатора Бринкман Политрон, а затем препарат хранили в замороженном состоянии при -79 С до использования. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов, приготовленных описанным способом, определяли биологическим методом в микротитровальных планшетах, как указано выше. Индуцирующий потенциал был почти полностью обусловлен присутствием глюкозинолатов,в основном глюкорафанина, являющегося глюкозинолатом сульфорафана, однако выявлялось и некоторое количество глюкоэруцина, сульфидного аналога глюкорафанина. При конверсии изотиоцианатов под действием очищенной мирозиназы индуцирующий потенциал в отношении ферментов фазы 2 составлял 100000 ед./мл при содержании 5,2 мкмоль изотиоцианатов на мл, как определено реакцией циклоконденсации, описанной в примере 7. Таким образом, испытуемые получили в сумме 520 мкмоль глюкозинолатов. Сбор 8-часовых порций мочи продолжали еще в течение 30 ч. Выведение конъюгатов изотиоцианатов (тиокарбаматов) с мочой контролировали с использованием реакции циклоконденсации, как описано в примере 7. 29 Таблица 5. Выведение дитиокарбаматов двумя испытуемыми, получившими 520 микромолей глюкозинолатов, экстрагированных из брокколи сорта Сага Время Состояние Индивидуум 1 Индивидуум 1 мкМ дитиокарбамата на 8 Время сбора (ч) часовую порцию мочи 8 Точка отсчета 1,4 2,7 16 Точка отсчета 2,1 0,9 24 Точка отсчета 1,7 5,4 Первые 8 ч после 32 23,2 20,4 введения Вторые 8 ч после 9,9 36,8 40 введения Третьи 8 ч после 4,4 14,0 48 введения Четвертые 8 ч 4,2 4,1 56 после введения Общее кол-во за вычетом 39,8 63,2 среднего исходного значения Общее кол-во как процент 6,7% 12,2% от дозы В организме обоих испытуемых происходило метаболическое превращение значительной доли потребленных глюкозинолатов в изотиоцианаты, которые затем превращались в родственные дитиокарбаматы и определялись в моче. Пример 12. Эффекты физических воздействий на развитие проростков и продукцию индукторов хинон-редуктазы. Проводили поверхностную стерилизацию семян Paphanus sativum (дайкона) 70%-ным этанолом в течение 1 мин, затем в течение 15 мин 1,3%-ным раствором гипохлорита натрия, содержащего приблизительно 0,001% детергента Алконокс. Семена засевали в стерильные пластиковые контейнеры с плотностью приблизительно 8 семян на квадратный сантиметр на 0,7% агаровую подложку, не содержащую дополнительных питательных веществ. Семена проращивали в течение 7 дней. Условия проращивания тщательно контролировали в отношении освещения (флуоресцентные лампы широкого спектра), влажности и температуры (16 ч освещения, 25 С/8 ч темноты, 20 С). Проростки облучали бактерицидным УФ светом в течение получаса на 5-й и 6-й дни. Облученные проростки достигали только половины высоты по сравнению с необлученным контролем. На седьмой день растения быстро и осторожно собирали с поверхности агара, чтобы минимизировать гидролиз глюкозинолатов эндогенной мирозиназой, высвобождающейся при повреждении растений. Собранные проростки немедленно помещали в 10 объемовDMF/ACN/DMSO (1:1:1) при температуре -50 С для инактивации эндогенной мирозиназы и для экстракции глюкозинолатов и изотиоцианатов. Проростки немедленно гомогенизировали при помощи стеклянных ступки и пестика, а затем препарат хранили в замороженном состоянии при -20 С. Индуцирующий потенциал растительных экстрактов, приготовленных описанным спосо 002571 30 бом, определяли биологическим методом в микротитровальных планшетах, как указано выше. Индуцирующий потенциал УФ-облученных проростков был более чем в три раза выше по сравнению с необлученным контролем. Таким образом, обработка проростков УФ облучением повышала индуцирующий ферменты фазы 2 потенциал в растительной ткани. Описанное и заявленное изобретение не должно ограничиваться частными вариантами его осуществления, приведенными здесь, поскольку примеры приводятся только в целях иллюстрации некоторых аспектов данного изобретения. Предполагается, что любые равнозначные варианты осуществления изобретения входят в его объем. Действительно, различные модификации изобретения, дополняющие те,которые раскрыты в настоящем описании, очевидным образом следуют из него и понятны специалисту в данной области исследований. Такие модификации также охватываются заявленными пунктами формулы. Все публикации и патентные заявки, цитируемые в настоящем описании, отражают уровень техники в той области, к которой относится изобретение. Все публикации и патентные заявки, цитируемые в настоящем описании, приведены здесь в качестве ссылок. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения проростков крестоцветных, за исключением Brassica oleracea capitata, Lepidium sativum, Sinapis alba, Sinapis nigra и Raphanus sativus, заключающийся в том, что проращивают соответствующие семена и собирают проростки до стадии второго листа или на этой стадии с получением проростков крестоцветных, обогащенных соединениями, индуцирующими активность ферментов фазы 2, и содержащих нетоксичные уровни индолглюкозинолатов, продуктов их расщепления и гидроксибутенил глюкозинолатов, вызывающих образование зоба, причем измерения осуществляют после трех дней с начала проращивания семян. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что проростки собирают в интервале от первого дня до четырнадцатого дня после прорастания семян и получают проростки, содержащие, по крайней мере, 200000 единиц индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала на 1 г свежей массы. 3. Способ по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что проращивают семена Brassica oleracea разновидностей acephala, alboglarba,botrytis, costata, gemmifera, gongylodes, italica,medullosa, palmifolia, ramosa, sabauda, sabellica иselensia. 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что проращивают семена Brasica oleracea разновид 31 ностей italica, botrytis и подразновидности botrytis cauliflora. 5. Проростки крестоцветных, за исключением Brassica oleracea capitata, Lepidium sativum,Sinapis alba, Sinapis nigra и Raphanus sativus,обогащенные соединениями, индуцирующими активность ферментов фазы 2, и содержащие нетоксичные уровни индолглюкозинолатов,продуктов их расщепления и гидроксибутенил глюкозинолатов, вызывающих образование зоба, полученные способом по любому из пп.1-4. 6. Способ получения композиции глюкозинолатов и изотиоцианатов, заключающийся в том, что из проростков крестоцветных по п.5,или из семян крестоцветных, или из комбинации семян и проростков экстрагируют глюкозинолаты и изотиоцианаты с помощью нетоксичного растворителя, полученный экстракт отделяют от экстрагированных проростков и/или семян и выделяют композицию экстрагированных глюкозинолатов и изотиоцианатов из экстракта. 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что композицию экстрагированнных глюкозинолатов и изотиоцианатов дополнительно высушивают путем удаления растворителя. 8. Композиция глюкозинолатов и изотиоцианатов из проростков крестоцветных, полученная способом по п.6. 9. Пищевой продукт, используемый для увеличения хемопротективного количества ферментов фазы 2 или снижения уровня канцерогенов в организме млекопитающего при потреблении данного продукта, содержащий проростки крестоцветных по п.5 и/или композицию экстрагированных глюкозинолатов и изотиоцианатов по п.8. 10. Пищевой продукт по п.9, отличающийся тем, что он дополнительно содержит фермент мирозиназу. 11. Пищевой продукт по любому из пп.9 или 10, отличающийся тем, что он содержит проростки, собранные в интервале от первого дня до четырнадцатого дня после прорастания семян и содержащие, по крайней мере, 200000 единиц индуцирующего ферменты фазы 2 потенциала на 1 г свежей массы и нетоксичные уровни индолглюкозинолатов, продуктов их расщепления и гидроксибутенил глюкозинолатов, вызывающих образование зоба, при измерении после трех дней с начала проращивания семян, из которых образуются указанные проростки.