Способ выделения остеопонтина из молочных продуктов питания, содержащих смр

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ОСТЕОПОНТИНА ИЗ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ,СОДЕРЖАЩИХ СМР Изобретение относится к способу выделения остеопонтина из молочного продукта питания,содержащего казеиновый макропептид, такого как, например, продукта питания на основе молочной сыворотки или сладкой сыворотки. В частности, настоящий способ предусматривает применение узкого интервала рН и удельной проводимости молочного продукта питания, которые,как на удивление было доказано, обеспечивают очень эффективное выделение остеопонтина из сложных по химическому составу продуктов питания.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: АРЛА ФУДС АМБА (DK) Область изобретения Настоящее изобретение относится к способу выделения остеопонтина из молочного продукта питания, например, продукта питания на основе молочной сыворотки или сладкой сыворотки, В частности,настоящий способ предусматривает применение узкого интервала рН и удельной проводимости молочного продукта питания, которые, как на удивление было доказано, обеспечивают очень эффективное выделение остеопонтина из сложных по химическому составу продуктов питания. Предпосылки изобретения Остеопонтин является кислым, высокофосфорилированным, богатым сиаловой кислотой, связывающимся с кальцием белком. Остеопонтин содержит примерно 28 моль связанного фосфата на 1 моль остеопонтина и связывает примерно 50 моль Ca на 1 моль остеопонтина. Остеопонтин (OPN) является многофункциональным биоактивным белком, который принимает участие в многочисленных биологических процессах, как, например, ремоделирование костей, ингибирование эктопической кальцификации и клеточной адгезии и миграции, а также в некоторых функциях иммунной системы. Остеопонтин имеет сходные с цитокином свойства и является ключевым фактором в инициировании иммунных ответов с участием Т-хелперов 1. Остеопонтин присутствует в большинстве тканей и биологических жидкостях, при этом наивысшие концентрации обнаруживают в молоке. Подтверждая ингибиторную функцию OPN при эктопической кальцификации, in vivo модель на мышах с дефицитом OPN показала сниженную кальцификацию после экзогенного добавления белка. Кроме того, OPN вовлечен в защиту мочевыводящих путей от образования камней в почках, так как OPN может ингибировать рост и агрегацию кристаллов моногидрата оксалата кальция. Биологическая роль OPN в молоке неясна; несмотря на это, можно предположить несколько функций. Сообщается, что остеопонтин вовлечен в развитие и дифференцировку молочной железы и при ранней лактации в молочной железе наблюдали высокие уровни экспрессии OPN. Кроме того, природа белка, заключающаяся в его высокой анионной активности, может давать возможность OPN образовывать растворимые комплексы с ионами кальция и, таким образом, ингибировать непроизвольную кристаллизацию кальция и осаждение в молоке. В научной литературе описано, что остеопонтин обычно очищают из костей и молока, и он, как правило, присутствует в коровьем молоке в концентрации 20 мг/л. В молоке остеопонтин является сывороточным белком, а также может в некоторой степени связываться с мицеллами казеина в зависимости от уровня Са 2+. Кислая сыворотка является предпочтительным сырьем для промышленного получения остеопонтина. Полагают, что при образовании кислой сыворотки остеопонтин отсоединяется от мицелл казеина по мере утечки Са 2+ в сывороточную фазу. Этот аспект делает кислую сыворотку непосредственным источником остеопонтина. По этой же причине сладкая сыворотка имеет немного более низкое содержание остеопонтина. Кроме того, сладкая сыворотка содержит казеиновый макропептид (СМР),образующийся в результате ферментативного расщепления каппа-казеина. СМР имеет много биохимических сходств с остеопонтином: оба являются небольшими, гибкими, кислыми, фосфорилированными гликопротеинами. По этой причине считается, что СМР и остеопонтин достаточно схожи в отношении их связывания с ионообменными смолами, что будет вызывать затруднение при очистке остеопонтина от сырья, содержащего СМР. Другим аспектом является вероятный распад остеопонтина под воздействием протеолитических ферментов, применяемых для сыроварения. Эти три аспекта могут в результате привести к отказу от такого сырья для очистки остеопонтина как в промышленном производстве, так и в научных исследованиях. Уровень техники В WO 02/28413 А 1 описан способ получения композиции, содержащей остеопонтин, из исходных материалов, как, например, молоко или кислая сыворотка, при помощи анионного обмена при низком значении рН. В WO 02/28413 А 1 подчеркнуто, что ни технологическое сырье, ни получаемый в результате продукт не могут содержать cGMP, который представляет собой определенный тип СМР, который,как известно, связывается с анионообменниками и может ингибировать связывание остеопонтина. В WO 01/149741 А 2 описан способ, в котором остеопонтин очищают из молочного материала при помощи смешивания молочного материала с растворимым кальцием и регулировки рН смеси для избирательного осаждения других белковых компонентов сыворотки, при этом сохраняя остеопонтин в растворе. Краткое описание изобретения Авторы настоящего изобретения выявили, что, на удивление и в противовес предубеждениям, обнаруживаемым в уровне техники, остеопонтин может быть выделен при помощи анионного обмена с высоким выходом и высокой степенью очистки из сложных молочных продуктов питания, несмотря на наличие конкурентных белков в продукте питания. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что удельная проводимость продукта питания особенно важна для выхода и степени чистоты остеопонтина,и определили оптимальный интервал удельной проводимости для выделения остеопонтина из молочных продуктов питания. Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к способу выделения остеопонтина из молочного продукта питания, при этом способ включает следующие этапы:a) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. Настоящее изобретение может, например, относиться к способу выделения остеопонтина из молочного продукта питания, при этом способ включает следующие этапы:a) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания или свободный -казеин и свободный -казеин;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. Таким образом, в некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ выделения остеопонтина из молочного продукта питания включает следующие этапы: а) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ выделения остеопонтина из молочного продукта питания включает следующие этапы:a) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит свободныйb) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ выделения остеопонтина из молочного продукта питания включает следующие этапы:a) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания и свободный -казеин и свободный -казеин;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой,c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. В дополнение к вышеупомянутым преимуществам настоящий способ предусматривает более экономичное применение анионообменной среды и более высокий выход остеопонтина на 1 кг анионообменной среды. Другим преимуществом способа согласно настоящему изобретению является улучшенный выход остеопонтина в расчете на анионообменный цикл, что продемонстрировано в примере 5."Удельная проводимость" (иногда называемая "удельной электропроводностью") водного раствора является мерой способности раствора проводить электричество. Удельную проводимость можно, например, определить путем измерения сопротивления раствора по АС между двумя электродами, а результат обычно приводят в единице измерения мСм/см. Измерение удельной проводимости можно, например,провести в соответствии со способом 120.1 ЕРА (Управления охраны окружающей среды США). Еще один аспект настоящего изобретения относится к композиции, содержащей остеопонтин, получаемой при помощи способа согласно настоящему изобретению. Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к композиции, содержащей остеопонтин, как таковой. Краткое описание фигур Фиг. 1. Эффект рН продукта питания, получаемого из сладкой сыворотки, в отношении степени чистоты и выхода остеопонтина при удельной проводимости 5,5 мСм/см. Фиг. 2. Эффект удельной проводимости продукта питания, получаемого из сладкой сыворотки, в отношении степени чистоты и выхода остеопонтина при рН 4,3. Фиг. 3. Влияние удельной проводимости продукта питания, получаемого из кислой сыворотки, на степень чистоты OPN и выход при рН 4,3. Подробное описание изобретения Как упоминалось, один аспект настоящего изобретения относится к способу выделения остеопонтина из молочного продукта питания, при этом способ включает следующие этапы: а) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания или свободный -казеин и свободный -казеин,b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. Этапы способа обычно осуществляют последовательно, например этапы а), b), с) и d). Однако в некоторых вариантах осуществления этап с) способа пропускают, и в этом случае способ включает следующие этапы: а), b) и d). Применительно к целям настоящего изобретения выражение "выделение остеопонтина" относится к обогащению остеопонтина до значения весового процента, составляющего по меньшей мере 70%(вес./вес.), предпочтительно по меньшей мере 80% (вес./вес.) и еще более предпочтительно по меньшей мере 90% (вес./вес.) по отношению к общему весу белка, извлеченного из анионообменной среды в ходе этапа d). Выделение остеопонтина может, например, предусматривать обогащение остеопонтина до значения весового процента, составляющего по меньшей мере 95% (вес./вес.), как, например, по меньшей мере 97% (вес./вес.) по отношению к общему весу белка, извлеченного из анионообменной среды в ходе этапа d). Способ является в особенности применимым для улучшения избирательного обогащения остеопонтина из молочного продукта питания, содержащего дополнительный белок, характеризующийся изоэлектрической точкой (pI) 5,0, например, из молочного продукта питания, который содержит СМР. Выражение "избирательное обогащение" нужно понимать как увеличение молярного соотношения между остеопонтином и общим количеством других белков в молочном продукте питания. Изоэлектрическую точку белка предпочтительно определяют при помощи изоэлектрического фокусирования при 25 С. Применительно к целям настоящего изобретения выражение "молочный продукт питания" относится к жидкому продукту питания, который контактирует с анионообменной средой. Молочный продукт питания получают из молока из одного или нескольких источников, являющихся млекопитающими, например из молока человека, коровы, овцы, козы, буйвола, верблюда, ламы, лошади и/или оленя. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания получают из коровьего молока. Применительно к целям настоящего изобретения выражения "молочный продукт питания", "продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки", "продукт питания, получаемый из кислой сыворотки" и "продукт питания, получаемый из молочной сыворотки" относятся к продуктам питания, в которых по меньшей мере 50% (вес./вес.) общего белка происходит из молока, сладкой сыворотки, кислой сыворотки или молочной сыворотки, соответственно. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения по меньшей мере 90% (вес./вес.) и предпочтительно практически весь общий белок в молочном продукте питания происходит из молока, сладкой сыворотки, кислой сыворотки или молочной сыворотки. Применительно к целям настоящего изобретения выражение "молоко" относится к жидкости, получаемой из молочных желез млекопитающих в период лактации. Выражение "молоко" следует толковать в широком смысле, и оно охватывает как сырое молоко, т.е. жидкость, получаемую непосредственно из молочных желез, так и нормализованные молочные продукты, как, например, обезжиренное молоко или цельное молоко, в которых концентрация молочного жира была понижена по отношению к исходному сырому молоку. Сыворотка является собирательным выражением, относящимся к водянистому субпродукту, который получают в ходе производства сыра или казеина из молока. Применительно к целям настоящего изобретения выражение "сладкая сыворотка" относится к сыворотке, которую получают в ходе сычужного свертывания молока, которое, например, имеет место в ходе получения желтого сыра. Применительно к целям настоящего изобретения выражение "кислая сыворотка" относится к сыворотке, которую получают в ходе химического или биологического подкисления молока, которое, например, имеет место в ходе получения домашнего сыра или творога или при получении казеина/казеинатов. Применительно к целям настоящего изобретения выражение "молочная сыворотка", известное также как "молочный отстой", "нативная сыворотка" или "сыворотка молока", относится к молоку, из которого были удалены молочный жир и мицеллы казеина. Тем не менее, молочная сыворотка обычно содержит несколько видов свободного казеина, которые диссоциировали из мицелл нативного казеина перед удалением мицелл. Молочную сыворотку можно получить, например, при помощи микрофильтрации обезжиренного молока через фильтр или мембрану с размером пор примерно 0,1 мкм и сбора получаемого в результате пермеата в качестве молочной сыворотки. Молочную сыворотку можно получить согласно Evans et al. Будет понятно, что для получения молочного продукта питания молоко, сладкая сыворотка, кислая сыворотка или молочная сыворотка может подвергаться нескольким этапам обработки. Обработка молока или молочных продуктов обычно предусматривает один или несколько способов термообработки, как, например, пастеризация (например, 72 С в течение 15 с) или высокотемпературная пастеризация (например, 85 С в течение 20 с). Альтернативно или дополнительно, обработка может предусматривать один или несколько этапов фильтрации. Микрофильтрацию можно применять для удаления микроорганизмов или, альтернативно,для концентрирования казеина. Ультрафильтрацию или нанофильтрацию можно, например, применять для концентрирования белка сыворотки или белка молочной сыворотки. Альтернативно или дополнительно, обработка может предусматривать один или несколько этапов центрифугирования, например, для отделения жира от обезжиренного молока и/или для отделения микроорганизмов от молока. Альтернативно или дополнительно, обработка может предусматривать один или несколько этапов выпаривания для удаления воды и, таким образом, концентрирования сухого вещества, такого как белки и/или минеральные вещества. Обработка также может включать одну или несколько регулировок рН. Подкисление можно, например, применять для свертывания казеина, и регулировка рН может, кроме того, быть важна, если обработка предусматривает ионообменную хроматографию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания включает один или несколько технологических потоков от получения других фракций молочных белков, как,например, фильтрованная, подвергнутая термической обработке сыворотка или сыворотка, обедненная-лактальбумином и/или -лактоглобулином. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит продукт питания, получаемый из молочной сыворотки, или даже по сути состоит из него. Молочный продукт питания может, например, представлять собой молочную сыворотку и предпочтительно концентрат белков молочной сыворотки, например, в виде ретентата, получаемого при помощи ультрафильтрации молочной сыворотки. Содержание остеопонтина в молочном продукте питания зависит от конкретного типа продукта питания. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит остеопонтин в количестве 0,01-20% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать остеопонтин в количестве 0,05-5% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Молочный продукт питания может, например, содержать остеопонтин в количестве 0,12% (вес./вес.). Альтернативно, молочный продукт питания может содержать остеопонтин в количестве 0,1-1%(вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Применительно к целям настоящего изобретения продукт, компонент, способ или этап способа,указанный как "по сути состоит из" одного или нескольких субкомпонентов или одного или нескольких активных компонентов, состоит из одного или нескольких конкретно упомянутых субкомпонентов или одного или нескольких конкретно упомянутых активных компонентов, а также может включать один или несколько дополнительных неупомянутых субкомпонентов или активных компонентов, которые существенно не воздействуют на основную и новую характеристику (характеристики) настоящего изобретения. Как указано выше, способ согласно настоящему изобретению является особенно эффективным для выделения остеопонтина из сложных продуктов питания, т.е. продуктов питания, которые содержат молекулярные структуры, препятствующие выделению остеопонтина, как, например, белки с pI ниже 5,0. Было обнаружено, что такие белки конкурируют с остеопонтином за функциональные группы анионообменной среды. Примерами белков с pI 5,0 являются -лактальбумин, протеозопептон-3, протеозопептон-5 и протеозопептон-8 и пептиды, получаемые из казеина, как, например, казеиновый макропептид и/или казеиновые фосфопептиды. Таким образом, дополнительный белок может содержать один или несколько белков из группы, состоящей из -лактальбумина, протеозопептона-3, протеозопептона-5 и протеозопептона-8, пептида, получаемого из казеина, казеинового макропептида, казеинового фосфопептида и их комбинаций. Свободный -казеин и свободный -казеин являются другими примерами белков со значениемpI 5,0. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит дополнительный белок с pI 5,0 в количестве по меньшей мере 0,1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве по меньшей мере 0,5% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Альтернативно, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве по меньшей мере 2% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Будет понятно, что дополнительный белок с pI 5,0 не включает остеопонтин, но обычно включает один или несколько других белков с pI в установленном диапазоне. В других вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 0,1-50% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 0,5-40% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Альтернативно, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 2-25% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Молочный продукт питания может, например, содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 0,1-20% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 0,3-15%(вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Альтернативно, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 0,5-10%(вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В дополнительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 1-50% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 10-45% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Альтернативно, молочный продукт питания может содержать дополнительный белок с pI 5,0 в количестве 15-40% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления дополнительный белок с pI 5,0 имеет pI 4,5 и предпочтительно pI 4,0. Применительно к целям настоящего изобретения выражение "белок" охватывает как большие агрегаты полипептидов, отдельные полипептидные цепи, так и пептиды, как, например, ди- или трипептиды. По химическому составу белки являются полимерами, содержащими различные и/или идентичные аминокислоты, соединенные так называемыми пептидными связями. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид (СМР). Применительно к целям настоящего изобретения выражение "СМР" или "казеиновый макропептид" относится к небольшому белку, который высвобождается из каппа-казеина в результате воздействия сычужных ферментов. СМР охватывает как гликозилированные варианты, так и негликолизированные варианты белка. Гликозилированные варианты белка иногда называют казеиновыми гликомакропептидами(cGMP). В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки, или даже по сути состоит из не-5 023367 го. Молочный продукт питания может, например, представлять собой сладкую сыворотку и предпочтительно концентрат белков сладкой сыворотки, например, в виде ретентата, получаемого при помощи ультрафильтрации сладкой сыворотки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания может содержать продукт питания, получаемый из кислой сыворотки, или даже по сути состоять из него. Молочный продукт питания может, например, представлять собой кислую сыворотку и предпочтительно концентрат белков кислой сыворотки, например, в виде ретентата, получаемого при помощи ультрафильтрации кислой сыворотки. Применительно к целям настоящего изобретения выражения "концентрат белков молочной сыворотки", "концентрат белков сладкой сыворотки" или "концентрат белков кислой сыворотки" относятся к водной композиции, которая содержит по меньшей мере 80% (вес./вес.) общего белка, присутствовавшего в исходной молочной сыворотке, сладкой сыворотке или кислой сыворотке, соответственно, и которая имеет содержание общего белка по меньшей мере 25% (вес./вес.) по отношению к сухому весу водной композиции. Тем не менее, в других вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания не является продуктом питания, получаемым из кислой сыворотки. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания, например продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки, содержит СМР в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания, например продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки,может содержать СМР в количестве по меньшей мере 5% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания, предпочтительно по меньшей мере 10% (вес./вес.) и еще более предпочтительно по меньшей мере 15% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания, например продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки, содержит СМР в количестве 1-40%(вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания, например продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки, может содержать СМР в количестве 5-35% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания,предпочтительно в диапазоне 10-30% (вес./вес.) и еще более предпочтительно в диапазоне 15-25%(вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Авторы настоящего изобретения заметили, что, на удивление, при осуществлении настоящего способа образуется осадок, если продукт питания основан на молочной сыворотке или ее концентрате. Осадок вызывает проблемы в ходе осуществления анионообменного способа и уменьшает его надежность. Авторы настоящего изобретения изучили осадок и обнаружили признаки того, что он содержит осажденные виды казеина, которые присутствовали в растворенном виде, как, например, свободный-казеин или свободный -казеин. Применительно к целям настоящего изобретения выражения "свободный -казеин" или "свободный-казеин" относятся к молекулам -казеина или к молекулам -казеина, которые не связаны с мицеллами нативного казеина в молочных продуктах. Такой свободный -казеин или свободный -казеин включает растворенные отдельные молекулы -казеина или -казеина или небольшие агрегаты -казеина и/или-казеина. Например, известно, что отдельные молекулы -казеина образуют небольшие мицеллы-казеина, которые также являются примерами свободного -казеина. Таким образом, в некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания дополнительно содержит свободный -казеин и свободный -казеин. В продукте питания, получаемом из молочной сыворотки, обычно присутствуют свободный -казеин и свободный -казеин. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что эту проблему, связанную с осаждением, можно решить посредством удаления осадка из молочных продуктов питания перед анионным обменом. Таким образом, в некоторых предпочтительных вариантах осуществления этап а) способа предусматривает удаление осадка из подкисленной жидкости с образованием молочного продукта питания. Такое удаление может, например, предусматривать центрифугирование или фильтрацию подкисленной жидкости. Другим решением проблемы, связанной с осаждением, является применение рН продукта питания,при котором осаждение ограничено или даже отсутствует, например, в диапазоне 5,0-6,5. Молочный продукт питания может, таким образом, иметь рН в диапазоне 5,0-6,5 и предпочтительно в диапазоне 5,0-6,0. При осуществлении анионного обмена в этом диапазоне рН дополнительно предлагается применять температуру продукта питания/способа выше 15 С, как, например, 20-40 С. В этом температурном диапазоне растворенный -казеин образует небольшие мицеллы -казеина, которые не следует путать с мицеллами нативного казеина в молоке, и эти мицеллы -казеина представляются меньшим препятствием в способе анионного обмена, чем отдельные молекулы -казеина. Температура молочного продукта питания и анионообменного материала в ходе этапа b) может, таким образом, находиться в диапазоне 15-40 С и предпочтительно в диапазоне 20-38 С. Молочный продукт питания может, например, содержать общее количество свободного -казеина и свободного -казеина по меньшей мере 0,5% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать общее количество свободного -казеина и свободного -казеина по меньшей мере 2% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Молочный продукт питания может, например, содержать общее количество свободного -казеина и свободного -казеина по меньшей мере 10% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит общее количество свободного -казеина и свободного -казеина в количестве 0,5-40% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать общее количество свободного -казеина и свободного -казеина в количестве 2-20% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Молочный продукт питания может, например, содержать общее количество свободного -казеина и свободного-казеина в количестве 5-15% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит -лактальбумин в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать-лактальбумин в количестве по меньшей мере 10% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания, предпочтительно по меньшей мере 20% (вес./вес.) и еще более предпочтительно по меньшей мере 30% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит -лактальбумин в количестве 1-50% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать -лактальбумин в количестве 5-40% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания, предпочтительно в диапазоне 10-35% (вес./вес.) и еще более предпочтительно в диапазоне 12-30% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит -лактоглобулин в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать-лактоглобулин в количестве по меньшей мере 15% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания, предпочтительно по меньшей мере 30% (вес./вес.) и еще более предпочтительно по меньшей мере 40% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит -лактоглобулин в количестве 1-70% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать -лактоглобулин в диапазоне 10-65% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания, предпочтительно в диапазоне 20-60% (вес./вес.) и еще более предпочтительно в диапазоне 35-55% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Известно, что казенны осаждаются при значениях рН, составляющих около 4,6 или ниже. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, следовательно, предпочтительно, чтобы молочный продукт питания с рН в диапазоне приблизительно 3,6-4,6 имел относительно низкую концентрацию казеина, как, например, не более 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит не более 0,1% казеина (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. Может даже быть предпочтительным, чтобы молочный продукт питания содержал не более 0,01% казеина (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит белок в общем количестве в диапазоне 6-250 г/л молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать белок в общем количестве в диапазоне 50-150 г/л молочного продукта питания. Может даже быть предпочтительным, чтобы молочный продукт питания содержал белок в общем количестве в диапазоне 75-125 г/л молочного продукта питания. Альтернативно, молочный продукт питания может содержать белок в общем количестве в диапазоне 50-250 г/л молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать белок в общем количестве в диапазоне 50-150 г/л молочного продукта питания. Может даже быть предпочтительным, чтобы молочный продукт питания содержал белок в общем количестве в диапазоне 75-150 г/л молочного продукта питания. Может также быть предпочтительным, чтобы молочный продукт питания мог содержать белок в общем количестве в диапазоне 75-250 г/л молочного продукта питания. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания содержит белок в общем количестве по меньшей мере 6 г/л молочного продукта питания. Например, молочный продукт питания может содержать белок в общем количестве по меньшей мере 50 г/л молочного продукта питания. Может даже быть предпочтительным, чтобы молочный продукт питания содержал белок в общем количестве по меньшей мере 75 г/л молочного продукта питания. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания имеет рН в диапазоне рН 3,8-6,0 при 25 С. Предпочтительно, рН молочного продукта питания при 25 С находится в диапазоне рН 4,0-5,5. Еще более предпочтительно, рН молочного продукта питания при 25 С находится в диапазоне рН 4,2-5,0, таком как, например, рН 4,3-4,5. Желательной удельной проводимости молочного продукта питания можно, например, добиться при помощи концентрирования молочного продукта питания при помощи частичного удаления воды и/или добавления соли (солей), что в результате увеличивает удельную проводимость; или обессоливания молочного продукта питания при помощи удаления соли (солей) или добавления воды, что в результате уменьшает удельную проводимость. Методики удаления воды и/или соли (солей) из водной жидкости хорошо известны специалистам в данной области. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 4,5-9,0 мСм/см при 25 С. Например, удельная проводимость молочного продукта питания может находиться в диапазоне 5,0-8,0 мСм/см при 25 С. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения может быть еще более предпочтительным, чтобы удельная проводимость молочного продукта питания находилась в диапазоне 5,5-7,0 мСм/см при 25 С. Молочный продукт питания может, например, иметь удельную проводимость в диапазоне 4-7 мСм/см при 25 С. Альтернативно, молочный продукт питания может иметь удельную проводимость в диапазоне 7-10 мСм/см при 25 С. Альтернативно, молочный продукт питания может иметь удельную проводимость в диапазоне 5-8 мСм/см при 25 С. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 4-7 мСм/см при 25 С и рН в диапазоне 3,6-5,0 при 25 С. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 7-10 мСм/см при 25 С и рН в диапазоне 5,0-6,5 при 25 С. В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 5-8 мСм/см при 25 С и рН в диапазоне 4,05,5 при 25 С. Например, молочный продукт питания может иметь удельную проводимость в диапазоне 5-6 мСм/см при 25 С и рН в диапазоне 4,2-5,0 при 25 С. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 и если рН находится в диапазоне 3,6-5,0, то удельная проводимость составляет по меньшей мере 4 мСм/см и наибольшая провод.макс = 1,38 мСм/смрН + 1,03 мСм/см; и если рН находится в диапазоне 5-6,5, то удельная проводимость составляет наименьшая провод.мин = 1,33 мСм/смрН - 2,67 мСм/см и наибольшая провод.макс = 1,38 мСм/смрН + 1,03 мСм/см. Таким образом, если рН продукта питания согласно данным вариантам осуществления составляет,например, рН 6,0, то удельная проводимость составляет наименьшая провод.мин = 1,33 мСм/см 6,0 - 2,67 мСм/см = 5,3 мСм/см и наибольшая провод.макс = 1,38 мСм/см 6,0 + 1,03 мСм/см = 9,3 мСм/см. Например, молочный продукт питания может иметь рН в диапазоне 3,6-5,0 и удельную проводимость, составляющую по меньшей мере 4 мСм/см и наибольшую провод.макс = 1,38 мСм/смрН + 1,03 мСм/см. Альтернативно, молочный продукт питания может иметь рН в диапазоне 5,0-6,5 и следующую удельную проводимость: наименьшая провод.мин = 1,33 мСм/смрН - 2,67 мСм/см и наибольшая провод.макс = 1,38 мСм/смрН + 1,03 мСм/см. Значения удельной проводимости и значения рН измеряют в продуктах питания с температурой 25 С, если не указано иное. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения анионообменная среда содержит твердую фазу и одну или несколько катионных групп. Предпочтительно, по меньшей мере, несколько катионных групп прикрепляются к поверхности твердой фазы и/или к поверхности пор, доступ к которым открыт через поверхность твердой фазы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения твердая фаза анионообменной среды содержит один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из множества частиц,фильтра и мембраны. Твердая фаза может, например, содержать полисахарид или даже по сути состоять из него. Сшитые полисахариды являются особенно предпочтительными. Примерами применимых полисахаридов являются целлюлоза, агароза и/или декстран. Альтернативно, твердая фаза может содержать неуглеводные полимеры или даже по сути состоять из них. Примерами применимых неуглеводных полимеров являются метакрилат, полистирол и/или стирол-дивинилбензол. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения катионные группы содержат аминогруппы или даже по сути состоят из них. Третичные аминогруппы особенно предпочтительны и дают в результате группы четвертичного аммония при соответствующих условиях рН. Группы четвертичного аммония обеспечивают анионообменной среде сильные анионообменные характеристики. Альтернативно или дополнительно, катионные группы могут содержать одну или несколько первичных или вторичных аминогрупп. Значительное количество первичных или вторичных аминогрупп обычно обеспечивает анионообменной среде слабые анионообменные характеристики. Оптимальная нагрузка белка в расчете на цикл зависит от конструкции системы для анионообменной хроматографии и характеристик анионообменной среды. Условия способа в ходе анионообменной хроматографии, включая давление, скорость потока и т.д.,зависят от фактического осуществления способа, применяемого оборудования и применяемой анионообменной среды. Температура молочного продукта питания в ходе этапа b) обычно является достаточно низкой для предотвращения роста микроорганизмов и теплового повреждения белка и анионообменной среды, но является достаточно высокой для обеспечения приемлемой вязкости. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения температура молочного продукта питания в ходе этапа b) находится в диапазоне 2-40 С. Температура молочного продукта питания в ходе этапа b) предпочтительно находится в диапазоне 4-20 С и еще более предпочтительно в диапазоне 612 С. Больше подробностей в отношении анионообменной хроматографии и ее промышленного осуществления можно обнаружить в Scopes, который включен в данный документ посредством ссылки во всех отношениях. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ согласно настоящему изобретению включает этап с) промывания анионообменной среды промывочным раствором после ее контакта с молочным продуктом питания. Применимые промывочные растворы обычно имеют нейтральный рН или представляют собой слабокислые водные растворы, которые могут удалять слабосвязанные молекулы из анионообменной среды. В качестве промывочной жидкости можно, например,использовать деминерализованную воду или водный раствор хлорида натрия с нейтральным рН, например 0,1 М NaCl. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ согласно настоящему изобретению не включает этап с). Этап d) согласно настоящему изобретению предусматривает извлечение остеопонтина, связанного с анионообменной средой. Извлечение обычно осуществляется посредством приведения анионообменной среды в контакт с элюентом и сбора получаемого в процессе элюата, т.е. элюента, а также молекул, высвобождаемых из анионообменной среды. Обычно элюент представляет собой водный раствор с ионной силой и/или рН, достаточными для высвобождения связанного остеопонтина из анионообменной среды. Примерами применимых элюентов являются 1,0 М водные растворы солей с нейтральным рН, как,например, NaCl, CaCl2, KCl, MgCl2 или их комбинация. Извлеченная композиция может быть подвергнута дополнительным этапам способа, например, для деминерализации и концентрирования композиции и последующего преобразования ее в порошок. Таким образом, в некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения извлеченную композицию дополнительно подвергают одному или нескольким этапам способа, выбранным из группы, состоящей из концентрирования, диафильтрации, выпаривания растворителя, распылительной сушки и замещения катионов, связанных с белком. Например, извлеченную композицию можно подвергнуть этапу концентрирования. Альтернативно или дополнительно, извлеченную композицию можно подвергнуть этапу диафильтрации. Альтернативно или дополнительно, извлеченную композицию можно подвергнуть этапу выпаривания. Альтернативно или дополнительно, извлеченную композицию можно подвергнуть этапу распылительной сушки. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения извлеченную композицию подвергают действию следующих этапов:iv) замещение катионов посредством приведения в контакт водной композиции из этапа ii) или iii) с водорастворимой солью кальция, например CaCl2;vi) распылительная сушка для превращения пастеризованной композиции в порошок. Настоящий способ можно осуществлять как в качестве непрерывного способа, так и в качестве полунепрерывного способа. Полунепрерывный способ можно, например, осуществлять, задействуя первую и вторую анионообменную колонку и осуществляя этап b) на первой анионообменной колонке, в то же время осуществляя этапы с) и/или d) на второй анионообменной колонке, и наоборот. Таким образом, в некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ выделения остеопонтина из молочного продукта питания включает следующие этапы: а) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания является концентратом белков сладкой сыворотки, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения способ выделения остеопонтина из молочного продукта питания включает следующие этапы:a) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания представляет собой концентрат белков молочной сыворотки, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне рН 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит свободный -казеин и свободный -казеин;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) необязательно, промывание анионообменной среды иd) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. Еще один аспект настоящего изобретения относится к композиции, содержащей остеопонтин, получаемой согласно способу, описанному в данном документе. Настоящее изобретение описано выше со ссылкой на конкретные варианты осуществления. Однако в рамках объема настоящего изобретения равновозможными являются варианты осуществления, отличные от вышеописанных. Различные признаки и этапы различных вариантов осуществления и аспектов настоящего изобретения можно объединять со способами, отличными от описанных в данном документе,если не указано иное. Примеры Пример 1. Обогащение остеопонтина из концентрата сладкой сыворотки с контролируемой проводимостью. Протокол. Следующие эксперименты по очистке проводили на оборудовании для жидкостной экспрессхроматографии белков (FPLC), оснащенном сильной анионообменной смолой в виде больших гранулQ-сефарозы, упакованных в колонку на 13,3 мл (17010 мм). Поток поддерживали при 3,33 мл/мин, в течение всех этапов загрузки, промывки и элюирования во всех экспериментах. Сырье представляло собой изолят белка сладкой сыворотки, и в ходе каждого эксперимента в колонку загружали 70 г общего белка. В сырье анализировали содержание СМР. Образцы сырья разбавляли до конечной концентрации белка 10% вес./об., после этого регулировали рН (рН 3,0-5,7 при 4,7 мСм/см) и удельную проводимость(2,3-10,3 мСм/см при рН 4,3) путем добавления HCl и NaCl соответственно. Несвязавшиеся белки вымывали из колонки при помощи 3 объемов слоя 100 мМ раствора NaCl, рН 5,0. Затем связавшиеся белки элюировали при помощи пропускания 1 М раствора NaCl, рН 5,0, через колонку до тех пор, пока белок не перестал выявляться в элюате. Относительно каждого образца элюата анализировали содержание остеопонтина (OPN), СМР и общего белка с применением следующих методик. Определение общего белка. Содержание общего белка в элюате измеряли путем стандартного озоления по Кьельдалю, как описано в Cohen. Количественная оценка OPN с помощью способа HPLC. Принцип анализа. Образец фильтровали через фильтр на 0,22 мкм, а затем подвергали HPLC с колонкой MonoQ HR 5/5 (1 мл) от Pharmacia и детекцией при 280 нм. Концентрацию образца рассчитывали при помощи способа внешнего стандарта (сравнение с площадью пика стандарта с известным содержанием OPN). Необходимым предварительным условием для данной аналитической процедуры являлось то, что образцы должны были содержать относительно чистый OPN, например, определяемый с помощью SDS-PAGE(Laemmli, 1970), в связи с низкой специфичностью данного способа. Реактивы: стандарт OPN, вода качества Milli Q, чистая для HPLC, NaCl, Merck, Трис-HCl, Sigma. Буфер А: 10 мМ NaCl, 20 мМ Трис-HCl, рН 8,0. Буфер В: 0,8 М NaCl, 20 мМ Трис-HCl, рН 8,0. Стандартную калибровочную кривую строили по 5 стандартам в концентрационном диапазоне 1-10 мг/мл стандарта OPN в буфере А. Все стандарты фильтровали при помощи фильтров на 0,22 мкм перед загрузкой в колонку. Отбор образцов и предварительная обработка. Образцы для анализа разбавили водой качества Milli Q, чистой для HPLC, если они выходили за диапазон стандартной калибровочной кривой. Разбавление было в нескольких случаях также необходимо для обеспечения возможности связывания OPN с анионообменной смолой при наличии большого количества NaCl из элюента. Для анализа вводили количественный эквивалент 25 мкл 1-10 мг/мл OPN. Образцы фильтровали через фильтры на 0,22 мкм перед введением в HPLC-систему. Условия HPLC: скорость потока 1 мл/мин, объем вводимой пробы 25 мкл, градиент: 0-3 мин 0% В,3-17 мин 0-60% В, 17-30 мин 60-100% В, 30-33 мин 100% В, 33-34 мин 100-0% В, 34-40 мин 0% В. Расчет и представление результатов. Концентрацию OPN в каждом образце рассчитывали путем сравнения со стандартной кривой и наблюдения применяемых разбавленных растворов. Степень чистоты рассчитывали по соотношению между OPN и общим белком с применением удельного коэффициента Джонса для OPN, составляющего 7,17, поскольку большая часть белка или весь белок, определяемый с помощью озоления по Кьельдалю в данном контексте, представляли собой OPN. Количественное определение основных белков сыворотки с помощью HPLC. Разделение и количественное определение основных белков сыворотки, -лактальбумина,-лактоглобулина и СМР (казеиновый гликомакропептид), производили с помощью гель-проникающей хроматографии. Гель-проникающую хроматографию проводили с применением 2 колонок TSKgel3000PWxl(Tosohass, Япония). Раствор стандарта для калибровки системы состоял из 225 мг СМР, 225 мг -лактальбумина и 50 мг-лактоглобулина, растворенных в 500,0 мл 0,02 М фосфатного буфера с рН 7,5. Предварительная обработка образцов. Порошкообразные образцы растворяли в фосфатном буфере в количестве 1 мг/мл и оставляли в течение ночи для солюбилизации. Альтернативно, жидкие образцы разбавляли фосфатным буфером до получения значения содержания белка примерно 0,1%. Если содержание белка было ниже 0,1%, то образец измеряли неразбавленным. Все образцы фильтровали через фильтры на 0,22 мкм перед введением в колонку. Расчет и представление результатов. Процентную долю отдельного белка в образце рассчитывали в соответствии с формулой А 0,1F, гдеB А = площадь, измеренная в образце; 0,1 = коэффициент пересчета для 0,1% раствора;F = фактор разбавления (100000/вес образца в мг); В = расчетная площадь отдельного белка в 0,1% растворе стандарта. Результаты. Содержание СМР. Содержание СМР в сырье сладкой сыворотки составляло 20,1%, но, на удивление, СМР нельзя было выявить в обогащенных композициях OPN согласно примеру 1. Эффект рН продукта питания в отношении степени чистоты и выхода остеопонтина В первой серии экспериментов с изменяющимся значением рН применяемого продукта питания,показанных на фиг. 1, было продемонстрировано, что выход OPN (мг OPN из 70 г общего белка в продукте питания) увеличивался по мере увеличения рН от рН 3 до примерно рН 4,3. Высокий выход сохранялся при увеличении рН более чем до рН 4,3. Степень чистоты OPN в полученных препаратах OPN являлась очень высокой при низких значениях рН, однако при увеличении рН свыше примерно рН 4,5 степень чистоты медленно снижалась, но все еще была приемлемой до примерно рН 6,5. Однако наилучшего выхода OPN с высокой степенью чистоты добивались в рН-интервале рН 3,8-5,5 и, в частности, в диапазоне рН 4,3-4,5. Влияние удельной проводимости продукта питания на степень чистоты и выход остеопонтина. Результаты этой серии экспериментов с различной удельной проводимостью были показаны на фиг. 2. При низкой удельной проводимости выход являлся высоким, в то время как степень чистоты низкой. При увеличении удельной проводимости степень чистоты увеличивалась и достигала 100% при примерно 5,5 мСм/см. При дополнительном увеличении удельной проводимости степень чистоты оставалась высокой, в то время как выход OPN начинал снижаться, если удельная проводимость превышала примерно 10 мСм/см. Однако наилучшего выхода OPN с высокой степенью чистоты, по-видимому, добивались в диапазоне удельной проводимости 4,5-9,0 мСм/см и, в частности, в диапазоне 5-8 мСм/см. Обсуждение/выводы. Эффект рН. Из фиг. 1 видно, что при значении рН ниже примерно 3,6 заряд OPN уменьшался и, следовательно,уменьшалось связывание последнего с катионными группами смолы. При значении рН выше примерно 4,5 степень чистоты OPN начинала уменьшаться, поскольку другие белки продукта питания становились отрицательно заряженными и начинали связываться со смолой. Таким образом, был обнаружен интервал оптимальных значений рН в диапазоне 3,6-6,5 для выделения OPN с высокой степенью чистоты и с высоким выходом, даже если продукт питания содержит большое количество CMP. В полученном в результате препарате OPN нельзя было выявить СМР. Эффект удельной проводимости. Из фиг. 2 видно, что при удельной проводимости ниже примерно 4 мСм/см степень чистоты OPN уменьшалась, поскольку со смолой могли связываться другие белки. При значениях удельной проводимости выше примерно 6 мСм/см связывание OPN со смолой становилось слабее, и выход медленно уменьшался, но являлся приемлемым до значения удельной проводимости примерно 10 мСм/см. Таким образом, было обнаружено, что узкий диапазон примерно 4-10 мСм/см является оптимальным для получения OPN. В этом узком диапазоне можно было выделить OPN с высоким выходом и с высокой степенью чистоты даже из сырья, которое содержало примерно 20% СМР. Были проведены несколько дополнительных экспериментов для исследования заявленного интервала рН/удельной проводимости в продуктах питания на основе сладкой сыворотки, и результаты дополнительных экспериментов подтверждали вышеупомянутые выводы. Пример 2. Обогащение остеопонтина из концентрата кислой сыворотки с контролируемой проводимостью. Следующий эксперимент по очистке проводили на оборудовании для FPLC, аналогичном таковому из примера 1. Сырьем, однако, был концентрат кислой сыворотки с общим содержанием белка 10%(вес./вес.), и в колонку загружали примерно 70 г общего белка. Концентрированную кислую сыворотку разбавляли до различной степени, что давало в результате значения удельной проводимости в диапазоне от 2,5 до 10 мСм/см. OPN и общий белок измеряли в продукте питания и элюате при помощи способов, описанных в примере 1. рН регулировали до 4,3 путем добавления HCl и сырья, вносимого в анионообменную колонку. Несвязавшиеся белки вымывали из колонки 3 объемами слоя 0,1 М NaCl, а связавшиеся белки затем элюировали при помощи пропускания 1 М раствора NaCl через колонку до тех пор, пока белок не перестал выявляться в элюате. Влияние удельной проводимости на степень чистоты и выход OPN в ходе обогащения OPN из концентрированной кислой сыворотки показано на фиг. 3. Данные на фиг. 3 показывали обогащение OPN из кислой сыворотки при помощи описанной процедуры. Как и в случае примера 1, где в качестве сырья применяли сладкую сыворотку, снова наблюдали,что при низкой удельной проводимости продукта питания увеличивался выход в ущерб степени чистоты продукта. Однако поскольку продукты питания, получаемые из кислой сыворотки, не содержали СМР в больших количествах, то эффект в отношении обогащения OPN не являлся настолько неблагоприятным,как в случае, если продукт питания получен из сладкой сыворотки. Продукт питания, получаемый из кислой сыворотки, содержал второстепенные компоненты, связывание которых можно было свести к минимуму путем такой же установки значений параметров, какую использовали для того, чтобы избежать связывания СМР. Таким образом, можно было наблюдать, что узкий оптимальный диапазон для выделения OPN, указанный в примере 1, также подходит для выделения OPN из кислой сыворотки. Были проведены несколько дополнительных экспериментов для исследования заявленного интервала рН/удельной проводимости в продуктах питания на основе кислой сыворотки, и результаты дополнительных экспериментов подтверждали вышеупомянутые выводы. Пример 3. Обогащение остеопонтина из концентрата молочной сыворотки с контролируемой проводимостью. В соответствии с предыдущими примерами молочную сыворотку можно было применять в качестве сырья для получения OPN при помощи раскрытого способа. Молочную сыворотку получали путем микрофильтрации (размер пор фильтра примерно 0,1 микрон) обезжиренного молока при 24 С с целью удаления мицеллярного казеина. Образцы молочной сыворотки после этого доводили до рН 4,3 или 4,7 при помощи HCl и подвергали диафильтрации с получением значений удельной проводимости в диапазоне 4-10 мСм/см и содержания общего белка примерно 5 или 10% (вес./вес.). Затем OPN обогащали из образцов модифицированной молочной сыворотки при помощи анионного обмена при примерно 5 С, как описано в примере 1. Результаты и наблюдения. Проведенные испытания продемонстрировали, что продукты питания, получаемые из молочной сыворотки, также можно применять в настоящем способе. На удивление, в ходе осуществления способа наблюдали неустановленное осаждение, которое в результате приводило к засорению или загрязнению анионообменного материала спустя несколько циклов анионного обмена. Проблему, связанную с осаждением, решали путем фильтрования подкисленной молочной сыворотки через фильтровальную бумагу перед анионным обменом. Наблюдали признаки того,что осадок был связан с нерастворившимися видами казеина, такими как свободный - и свободный-казеин, которые оставались в молочной сыворотке при удалении мицелл нативного казеина. Обсуждение/выводы. Молочную сыворотку получали путем микрофильтрации обезжиренного молока с целью удаления казеинов, в то время как сладкую и кислую сыворотку обедняли по казеину путем осаждения казеинов под действием сычуга или кислоты, соответственно. Таким образом, все три категории молочных продуктов питания по сути не содержали мицеллярный казеин, который мог бы препятствовать проведению процедур анионообменной хроматографии в связи с осаждением или флокуляцией казеинов. Наблюдали признаки того, что растворенные казеины вызывали проблемы при анионном обмене. Эту проблему можно решить путем фильтрации молочных продуктов питания перед анионным обменом с помощью, например, микрофильтра. Альтернативно, этап анионного обмена можно осуществлять при рН, при котором осаждение ограничено или даже отсутствует, например в диапазоне 5,0-6,5. При осуществлении анионного обмена в этом диапазоне рН дополнительно предлагалось применять температуру продукта питания/способа выше 15 С, как, например, 20-40 С. В этом температурном диапазоне растворенный -казеин образовывал небольшие мицеллы -казеина, которые не следует путать с мицеллами нативного казеина, и эти мицеллы-казеина являлись меньшим препятствием в способе анионного обмена, чем отдельные молекулы-казеина. Пример 4. Обогащение остеопонтина из концентрата сладкой сыворотки без контролируемой проводимости. Следующий эксперимент по очистке проводили на оборудовании для FPLC, аналогичном таковому из примера 1. Сырье представляло собой изолят сладкой сыворотки, и в колонку загружали примерно 1 г общего белка. Перед загрузкой в колонку сладкую сыворотку концентрировали путем ультрафильтрации, подвергали диафильтрации после добавления равного объема воды и, наконец, снова разбавляли равным объемом воды. Полученная в результате удельная проводимость составляла 2,1 мСм/см. СМР и общий белок измеряли в продукте питания и элюате при помощи способов, описанных в примере 1. Количество OPN нельзя было измерить из-за препятствующих этому белков как в продукте питания, так и в элюате. Данные относительно OPN в табл. 1 были оценены по известным значениям выхода в экспериментах из примера 1. рН регулировали до 4,3 путем добавления HCl и сырья, вносимого в анионообменную колонку. Несвязавшиеся белки вымывали из колонки 3 объемами слоя воды, а связавшиеся белки после этого элюировали при помощи пропускания 1 М раствора NaCl через колонку до тех пор, пока белок не перестал выявляться в элюате. Таблица 1 Результаты анионного обмена сладкой сыворотки с низкой проводимостью Обсуждение/выводы. Данные в табл. 1 показывали обогащение белков кислой сыворотки при помощи описанной процедуры. Однако OPN обогащался только до незначительной степени, поскольку он составлял незначительную фракцию белков кислой сыворотки в продукте питания. Поскольку, например, СМР также связывался со смолой и присутствовал в продукте питания в высокой концентрации, то на этот белок приходилась большая величина связывающей способности смолы. Следовательно, данная процедура непригодна для получения OPN. Пример 5. Сравнение и выводы (сравнение примера 1 с примером 4). Для некоторых характеристик способов из примеров 1 и 4 ниже приведено сравнение в табл. 2. Таблица 2 Характеристики согласно примерам 1 и 4 Вывод. Как обобщено в табл. 2, способ из примера 1 намного более специфичен в отношении обогащенияOPN, чем способ из примера 4. Таким образом, в колонку можно загрузить намного больше белка в расчете на цикл, и выход OPN в расчете на цикл намного выше в случае способа из примера 1. Этот способ дает в результате практически чистый OPN, в то время как в продукте из примера 4 преобладает СМР. Список литературы ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ выделения остеопонтина из молочного продукта питания, при этом способ включает следующие этапы:a) получение молочного продукта питания, содержащего остеопонтин, при этом указанный молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,6-6,5 при 25 С и удельную проводимость в диапазоне 4-10 мСм/см при 25 С, и где указанный молочный продукт питания дополнительно содержит казеиновый макропептид (СМР) в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания;b) осуществление с указанным молочным продуктом питания анионообменной хроматографии, что приводит молочный продукт питания в контакт с анионообменной средой;c) извлечение белка, связанного с анионообменной средой, с получением, таким образом, композиции, содержащей выделенный остеопонтин. 2. Способ по п.1, дополнительно включающий этап промывания анионообменной среды после контакта молочного продукта питания с анионообменной средой на этапе (b). 3. Способ по любому из пп.1 и 2, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит СМР в количестве 1-40% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит СМР в количестве по меньшей мере 5% (вес./вес.). 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что молочный продукт питания, кроме того, содержит дополнительный белок с изоэлектрической точкой (pI) 5,0. 6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит продукт питания, получаемый из молочной сыворотки. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит продукт питания, получаемый из сладкой сыворотки. 8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 5,0-6,5. 9. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что молочный продукт питания имеет рН в диапазоне 3,8-5,5 при 25 С. 10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что этап а) обеспечения молочного продукта питания предусматривает удаление осадка из подкисленной жидкости с образованием молочного продукта питания. 11. Способ по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит-лактальбумин в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. 12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит-лактоглобулин в количестве по меньшей мере 1% (вес./вес.) по отношению к общему количеству белка молочного продукта питания. 13. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что молочный продукт питания содержит общее количество белка в диапазоне 6-250 г/л молочного продукта питания. 14. Способ по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 4,5-9,0 мСм/см при 25 С. 15. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 4-7 мСм/см при 25 С. 16. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что молочный продукт питания имеет удельную проводимость в диапазоне 7-10 мСм/см при 25 С. 17. Способ по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что извлеченную композицию дополнительно подвергают одному или нескольким этапам способа, выбранным из группы, состоящей из концентрирования, диафильтрации, выпаривания растворителя, распылительной сушки и замещения катионов, связанных с белком.