Бензонитрильные производные в качестве ингибиторов киназ

Соединения в соответствии с изобретением являются ингибиторами ТВK1 и IKK и могут применяться среди прочего для лечения рака и воспалительных заболеваний.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: МЕРК ПАТЕНТ ГМБХ (DE) Предпосылки создания изобретения Задача изобретения заключалась в поиске новых соединений, которые имеют ценные свойства, в частности, тех, которые можно применять для приготовления лекарственных средств. Настоящее изобретение относится к бензонитрильным соединениям, которые способны ингибировать одну или несколько киназ. Соединения применяют для лечения множества нарушений, в том числе рака, септического шока, первичной открытоугольной глаукомы (POAG), гиперплазии, ревматоидного артрита, псориаза, атеросклероза, ретинопатии, остеоартрита, эндометриоза, хронического воспаления и/или нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера. Настоящее изобретение относится к соединениям и к применению соединений, где играет роль ингибирование, регуляция и/или модуляция передачи сигналов рецепторными киназами, кроме того к фармацевтическим композициям, которые содержат эти соединения, и к применению соединений для лечения вызванных киназами заболеваний. Поскольку протеинкиназы регулируют почти каждый клеточный процесс, включая метаболизм,пролиферацию клеток, дифференцировку клеток и клеточное выживание, они являются привлекательными мишенями для терапевтического вмешательства в случае различных состояний. Например, контроль клеточного цикла и ангиогенез, где протеинкиназы играют ключевую роль, являются клеточными процессами, связанными с многочисленными состояниями, такими как, но не ограничиваясь ими, рак,воспалительные заболевания, аномальный ангиогенез и связанные с ним заболевания, атеросклероз, дегенерация желтого пятна, диабет, ожирение и боль. В частности, настоящее изобретение относится к соединениям и к применению соединений, где играет роль ингибирование, регуляция и/или модуляция передачи сигналов посредством ТВK1 и IKK. Один из основных механизмов, с помощью которого осуществляется клеточная регуляция, выполняется через передачу внеклеточных сигналов сквозь мембрану, которая в свою очередь модулирует биохимические пути внутри клетки. Фосфорилирование белков представляет собой один процесс, с помощью которого внутриклеточные сигналы распространяются от молекулы к молекуле, приводя в итоге к клеточному ответу. Эти каскады передачи сигналов строго регулируются и часто пересекаются, как это очевидно из существования многих протгинкиназ, а также фосфатаз. Фосфорилирование белков происходит преимущественно по остаткам серина, треонина или тирозина, и поэтому протеинкиназы были классифицированы по их специфичности сайта фосфорилирования, то есть серин/треонинкиназы и тирозинкиназы. Поскольку фосфорилирование является таким распространенным процессом в клетках и поскольку на клеточные фенотипы главным образом влияет активность этих путей, в настоящее время считается, что ряду состояний и/или заболеваний присущи либо аберрантная активация, либо функциональные мутации в молекулярных компонентах киназных каскадов. Следовательно, значительное внимание было уделено характеризации этих белков и соединениям, которые способны модулировать их активность (обзорные статьи см.: Weinstein-Oppenheimer и др. Pharma. . Therap., 2000, 88, 229-279).IKK и TBK1 являются серин/треонинкиназами, которые являются высокогомологичными друг к другу и к другим IkB киназам. Две киназы играют ключевую роль во врожднной иммунной системе. Вирусы, содержащие двуспиральную РНК, распознаются Toll-подобными рецепторами 3 и 4, и РНКгеликазами RIG-I и MDA-5 и приводят к активации TRIF-TBK1/IKK-IRF3 сигнального каскада, что приводит к I типа интерфероновому ответу. В 2007, Boehm и др. описывали IKK в качестве нового онкогена рака молочной железы [J.S. Boehm и др., Cell 129, 1065-1079, 2007]. Было исследовано 354 киназы в отношении их способности повторятьRas-трансформирующий фенотип вместе с активированной формой MAPK киназы Mek. IKK была идентифицирована в этом документе как кооперативный онкоген. Кроме того, авторы смогли показать,что IKK амплифицируется и сверхэкспрессируется в многочисленных клеточных линиях рака молочной железы и образцах опухолей. Снижение в экспрессии генов посредством РНК-интерференции в клетках рака молочной железы вызывает апоптоз и ослабляет их пролиферацию. Eddy и др. получили подобные данные в 2005, что подчеркивает важность IKK в заболеваниях рака молочной железы [S.F.Eddy и др.,Cancer Res. 2005; 65 (24), 11375-11383]. На проопухолевый эффект TBK1 впервые было указанно в 2006. При проверке генотеки 251,000 кДНК, Korherr и др. точно определили три гена, TRIF, TBK1 и IRF3. которые типично задействованы во врожденной иммунной защите в качестве проангиогенных факторов [С.Korherr и др., PNAS, 103, 42404245, 2006]. В 2006, Chien и др. [Y.Chien и др., Cell 127, 157-170, 2006] опубликовал, что TBK1-/- клетки могут быть лишь до определенной меры быть преобразованы с использованием онкогенного Ras, что предполагает вовлечение TBK1 в Ras-опосредованное превращение. Кроме того, они смогли показать,что PHKi-опосредованное отключение TBK1 запускает апоптоз в MCF-7 и Рапс-1 клетках. Barbie и др. недавно опубликовали, что TBK1 является чрезвычайно важной в многочисленных раковых клеточных линиях с мутированным K-Ras, что предполагает, что TBK1-интерверсия могла бы сыграть важную роль в терачевтическом плане в соответствующей опухоли [D.A.Barbie и др., Nature Letters 1-5. 2009]. Заболевания, вызванные протеинкиназами, характеризуются аномальной активностью или гиперактивностью таких протеинкиназ. Аномальная активность относится либо к: (1) экспрессии в клетках, ко-1 025038 торые обычно не экспрессируют эти протеинкиназы; (2) повышенной киназной экспрессии, которая приводит к нежелательной пролиферации клеток, такой как рак; (3) повышенной киназной активности, которая приводит к нежелаемой пролиферации клеток, такой как рак, и/или к гиперактивности соответствующих протеинкиназ. Гиперактивность относится либо к амплификации гена, который кодирует определенную протеинкиназу, либо к генерации уровня активности, который может быть коррелирован с заболеванием, связанным с пролиферацией клеток (т.е. тяжесть одного или нескольких симптомов заболевания, связанного с пролиферацией клеток, возрастает с возрастанием уровня киназы), на биодоступность протеинкиназы может также повлиять присутствие или отсутствие связывающих белков этой киназы.IKK и TBK1 являются гомологичными Ser/Thr киназами, которые играют решающую роль во врожднном иммунном ответе через индукцию интерферонов типа 1 и других цитокинов. Эти киназы стимулируются в ответ на вирусную/бактериальную инфекцию. Иммунный ответ на вирусные и бактериальные инфекции включает связывание антигенов, например бактериальных липополисахаридов (LPS),вирусной двуспиральной РНК (дсРНК), Toll-подобными рецепторами, и последующую активацию путиTBK1. Активированные TBK1 и IKK фосфорилируют IRF3 и IRF7, что запускает димеризацию и ядерную транслокацию этих интерферон-регулирующих факторов транскрипции, в конечном счете, индуцируя сигнальный каскад, ведущий к выработке IFN. В последнее время IKK и TBK1 также связывают с раком. Было показано, что IKK взаимодействует с активированной MEK для трансформации клеток человека. Кроме того, IKK часто амплифицируется/сверхэкспрессируется в клеточных линиях рака молочной железы и опухолях, полученных от пациентов. TBK1 индуцируется в гипоксических условия и экспрессируется на значительных уровнях во многих солидных опухолях. Кроме того, TBK1 требуется для поддержки онкогенной трансформации Ras, иTBK1 киназная активность повышается в трансформированных клетках и требуется для их выживания в культуре. Подобным образом было обнаружено, что TBK1 и NF-kB сигнализация имеет важное значение в KRAS-мутантных опухолях. TBK1 была определена в качестве синтетического летального партнера онкогенного KRAS. Литература:WO 2011/046970 A1 описывает применение ингибиторов TBK1 и/или IKK для лечения различных заболеваний, таких как ревматоидный артрит (RA), системная красная волчанка (SLE), синдрома Шегрена, синдром Айкарди-Гутьерес, ознобленная волчанка, ретинальная васкулопатия и церебральная лейкодистрофия (RVCL), системный склероз, миозит, псориаз, хроническое обструктивное заболевание легких(CPD), воспалительное заболевание кишечника (IBD), ожирение, резистентность к инсулину, диабет 2 типа (NIDDM). метаболический синдром, раковые заболевания. Соответственно, соединения в соответствии с изобретением или их фармацевтически приемлемую соль вводят для лечения рака, включая солидные карциномы, такие как, например, карциномы (например, легких, поджелудочной железы, щитовидной железы, мочевого пузыря или ободочной кишки), миелоидных заболеваний (например, миелоидного лейкоза) или аденом (например, ворсинчатой аденомы ободочной кишки). Кроме того, опухоли включают моноцитарный лейкоз, карциному головного мозга, мочеполовой системы, лимфатической системы, желудка, гортани и легких, включая аденокарциному легких и мелкоклеточную карциному легких, карциному поджелудочной железы и/или молочной железы. Кроме того, соединения пригодны для лечения иммунодефицита, индуцированного ВИЧ-1 (вирусом иммунодефицита типа 1). В качестве ракоподобных гиперпролиферативных заболеваний рассматриваются рак головного мозга, рак легких, плоскоклеточный рак, рак мочевого пузыря, рак желудка, рак поджелудочной железы,рак печени, рак почки, колоректальный рак, рак молочной железы, рак головы, рак шеи, рак пищевода,рак женских половых органов, рак щитовидной железы, лимфомы, хронический лейкоз и острый лейкоз. В частности, рост ракоподобных клеток представляет собой заболевание, которое является целью настоящего изобретения. Таким образом, настоящее изобретение относится к соединениям в соответствии с изобретением в качестве лекарственных средств и/или активных соединений лекарственных средств для лечения и/или профилактики указанных заболеваний и к применению соединений в соответствии с изобретением для приготовления фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики указанных заболеваний и к способу лечения указанных заболеваний, включающему введение одного или нескольких соединений в соответствии с изобретением пациенту, нуждающемуся в таком введении. Может быть продемонстрировано, что соединения в соответствии с изобретением обладают антипролиферативным действием. Соединения в соответствии с изобретением вводятся пациенту с гиперпролиферативным заболеванием, например, для ингибирования роста опухоли, для уменьшения воспаления, связанного с лимфопролиферативным заболеванием, для ингибирования отторжения трансплантата или неврологического повреждения в результате восстановления ткани и т.д. Эти соединения при-2 025038 годны для профилактических или терапевтических целей. Используемый в настоящем изобретении термин "лечение" применяется для обозначения как предотвращения заболеваний, так и лечения ранее существующих состояний. Предотвращение пролиферации/жизнеспособности достигают путем введения соединений в соответствии с изобретением до явного развития заболевания, например для предотвращения роста опухолей. Альтернативно, соединения применяются для лечения хронических заболеваний путем стабилизации или улучшения клинических симптомов у пациента. Хозяин или пациент может принадлежать к любому виду млекопитающих, например, такому как приматы, предпочтительно человек; грызуны, включая мышей, крыс и хомячков; кролики; лошади, коровы, собаки, кошки и т.д Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, поскольку они обеспечивают модель для лечения заболевания человека. Чувствительность определенной клетки к лечению с помощью соединений в соответствии с изобретением может быть определена при исследованиях в условиях in vitro. Обычно культуру клеток инкубируют с соединением в соответствии с изобретением при различных концентрациях в течение периода времени, достаточного для того, чтобы позволить активным веществам индуцировать гибель клетки или ингибировать пролиферацию, жизнеспособность клеток или миграцию, обычно в интервале времени приблизительно от одного часа до одной недели. Для исследования в условиях in vitro можно использовать культивируемые клетки из образца биопсии. Затем определяют количество клеток, оставшихся после обработки. Доза будет изменяться в зависимости от конкретного применяемого соединения, конкретного заболевания, состояния пациента и т.д. Обычно терапевтическая доза будет достаточной для существенного уменьшения нежелательной популяции клеток в ткани-мишени, при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение в общем случае продолжают до тех, пока не будет достигнуто существенного уменьшения, например, по меньшей мере приблизительно 50% уменьшения популяции клеток, представляющих интерес, при этом лечение можно продолжать до тех пор, пока по существу в организме не будет определяться нежелательных клеток. Существует много заболеваний, связанных с нарушением регуляции пролиферацией клеток и клеточной гибели (апоптоза). Состояния, представляющие интерес, включают, но не ограничиваются только ими, следующие. Соединения в соответствии с изобретением пригодны для лечения различных состояний, в которых присутствует пролиферация и/или миграция гладкомышечных клеток и/или воспалительных клеток в интимальный слой сосудов, что приводит к ограничению кровотока через этот сосуд, например, в случае неоинтимальных окклюзионных поражений. Окклюзионные заболевания трансплантированных сосудов, которые представляют интерес, включают атеросклероз, заболевание коронарных сосудов после трансплантации, стеноз венозного трансплантата, перианастомотический простетический рестеноз, рестеноз после ангиопластики или установления стента и др. Кроме того, соединения в соответствии с изобретением можно применять для достижения аддитивного или синергетического эффектов в определенных существующих химиотерапиях и лучевых терапиях рака и/или для восстановления эффективности определенных существующих химиотерапий и лучевых терапий рака. Термин "способ" относится к методам, средствам, технологиям и методикам выполнения данной задачи, включая, но не ограничиваясь, те методы, средства, технологии и методики, которые либо известны специалисту в данной области техники - в областях химии, фармакологии, биологии, биохимии и медицины, либо могут быть легко разработаны им из известных способов, средств, технологий и методик. Термин "введение", используемый в данной заявке, относится к способу сведения соединения настоящего изобретения и целевой киназы вместе таким образом, что соединение способно оказать воздействие на ферментную активность киназы либо непосредственно, то есть путем взаимодействия с киназой как таковой, либо опосредованно, то есть путем взаимодействия с другой молекулой, от которой зависит каталитическая активность киназы. Как использовано в данной заявке, введение можно выполнять либоin vitro, то есть в пробирке, либо in vivo, то есть в клетках или тканях живого организма. Термин "лечение" включает прекращение, существенное ингибирование, замедление или обращение развития заболевания или нарушения, существенное улучшение клинических симптомов заболевания или нарушения или существенное предотвращение появления клинических симптомов заболевания или нарушения. Термин "предотвращение" в данной заявке относится к способу удержания организма от приобретения нарушения или заболевания изначально. Для любого требуемого соединения, применяемого в настоящем изобретении, терапевтически эффективное количество, которое здесь также упоминается как терапевтически эффективная доза, может быть рассчитано изначально из анализов культуры клеток. Например, на животных моделях может быть составлена доза для достижения интервала циркулирующей концентрации, который включает IC50 илиIC100, исходя из данных, полученных на культурах клеток. Эта информация может быть использована для более точного определения пригодных доз для людей. Начальные дозы также можно рассчитывать,исходя из данных in-vivo. Используя эти исходные рекомендации, средний специалист в данной области может определить эффективную дозу для человека. Кроме того, токсичность и терапевтическая эффективность соединений, описанных в данной заявке, могут быть определены с помощью стандартных фармацевтических методик на культурах клеток или экспериментальных животных, например путем определения значений LD50 и ED50. Соотношение доз между токсическим и терапевтическим эффектом представляет собой терапевтический индекс и может быть выражено как соотношение между LD50 и ED50. Соединения, которые демонстрируют высокий терапевтический ичдекс, являются предпочтительными. Данные, полученные из этих анализов культур клеток и исследований животных, можно использовать в составлении интервала доз, который не является токсическим при введении в организм человека. Доза таких соединений предпочтительно находится в интервалах концентраций в кровяном русле, которые включают ED50 с небольшой токсичностью или без не. Доза может варьироваться в пределах этого интервала в зависимости от используемых лекарственной формы и пути введения. Точный состав, путь введения и доза могут быть выбраны отдельным врачом, принимая во внимание состояние пациента (см., например, Fingl и др., 1975, в: The Pharmacological Basis of Therapeutics, глава 1, стр. 1). Количество доз и промежуток можно устанавливать индивидуально для обеспечения в плазме таких уровней активного соединения, которые являются достаточными для получения терапевтического эффекта. Обычная доза для пациента для перорального введения находится в интервале приблизительно от 50 до 2000 мг/кг/день, обычно приблизительно от 100 до 1000 мг/кг/день. предпочтительно приблизительно от 150 до 700 мг/кг/день и особенно предпочтительно приблизительно от 250 до 500 мг/кг/день. Терапевтически эффективных уровней в сыворотке предпочтительно достигают путем введения нескольких доз в сутки. В случае местного введения или селективного поглощения, эффективная местная концентрация лекарственного средства может быть не связана с концентрацией в плазме. Специалист в данной области техники сможет оптимизировать терапевтически эффективные местные дозы без излишнего экспериментирования. Предпочтительными заболеваниями или нарушениями, для предотвращения, лечение и/или изучения которых могут быть пригодны соединения, описанные в данной заявке, являются нарушения клеточной пролиферации, в частности, рак, такой как, но не ограничиваясь перечисленным, папиллома, бластоглиома. саркома Капоши. меланома, рак легкого, рак яичника, рак предстательной железы, плоскоклеточная карцинома, астроцитома, рак головы, рак шеи, рак кожи, рак печени, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак легкого, рак матки, рак предстательной железы, карцинома яичка, колоректальный рак, рак щитовидной железы, рак поджелудочной железы, рак желудка, гепатоцеллюлярная карцинома,лейкемия, лимфома, болезнь ходжкина и лимфома беркитта. Уровень техники Другие бензонитрильные производные описываются в качестве TBK1 и/или IKK ингибиторов вWO 2011/046970 А 1 и в WO 2012/010826 А 1. Дальнейшие гетероциклические производные и их применение в качестве противоопухолевых агентов были(о) описаны(о) в WO 2007/129044. Дальнейшие пиридиновые и пиразиновые производные были описаны для применения для лечения рака в WO 2009/053737 и для лечения других заболеваний в WO 2004/055005. Дальнейшие гетероциклические производные были раскрыты в качестве ингибиторов IKK в WO 2009/122180. Пирролопиримидины были описаны в качестве ингибиторов IKK и TBK1 в WO 2010/100431. Пиримидиновые производные были описаны в качестве ингибиторов IKK и TBK1 в WO 2009/030890. Краткое изложение сущности изобретения Изобретение относится к соединениям, выбранным из группы: и их фармацевтически применимым солям и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях. Изобретение также относится к оптически активным формам (стереоизомерам), солям, энантиомерам, рацематам, диастереомерам и гидратам и сольватам этих соединений. Под сольватами соединений подразумевают аддукции молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря силе их взаимного притяжения. Сольваты представляют собой, например, моно- или дигидраты или алкоголяты. Естественно, изобретение также относится к сольватам солей. Под фармацевтически применимыми производными подразумевают, например, соли соединений в соответствии с изобретением, а также так называемые соединения - пролекарства. Под производными - пролекарствами подразумевают соединения в соответствии с изобретением,которые являются модифицированными с помощью, например, алкильных или ацильных групп, сахаров или олигопептидов и которые быстро расщепляются в организме с образованием эффективных соединений в соответствии с изобретением. Это понятие также включает биоразлагаемые полимерные производные соединений в соответствии с изобретением, как описано, например, в Int. J. Pharm. 115, 61-67 (1995). Выражение "эффективное количество" означает количество лекарственного средства или фарма- 10025038 цевтического активного соединения, которое вызывает в ткани, системе, животном или человеке биологическую или медицинскую ответную реакцию, которую стремится получить или ожидает, например,исследователь или врач. Кроме того, выражение "терапевтически эффективное количество" означает количество, которое по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества, имеет следующие последствия: улучшение лечения, излечение, предотвращение или элиминация заболевания, синдрома, состояния, жалобы, нарушения или побочных явлений или также уменьшение прогрессирования заболевания,состояния или нарушения. Выражение "терапевтически эффективное количество" также охватывает количества, которые являются эффективными для повышения нормальной физиологической функции. Изобретение также относится к применению смесей соединений в соответствии с изобретением,например смесей двух диастереомеров, например в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000. Особенно предпочтительными являются смеси стереоизомерных соединений. Соединения в соответствии с изобретением могут иметь один или несколько хиральных центров и поэтому могут встречаться в разных стереоизомерных формах. Соединения в соответствии с изобретением, а также исходные вещества для их получения, кроме того, получают методами, известными per se, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chetnie [Методы органической химии], GeorgThieme-Verlag, Штутгарт), более точно, при реакционных условиях, которые являются известными и пригодными для указанных реакций. Также в данном случае можно использовать варианты, известныеper se, которые не упомянуты здесь более подробно. Соединения в соответствии с изобретением можно предпочтительно получить по реакции соединений в соответствии с изобретением I в которой Y и R2 имеют значения, указанные ниже, с соединением в соответствии с изобретением IIL означает F, Cl, Br или I,и/или основание или кислоту превращают в одну из его(ее) солей,гдеX означает СН или N,Y означает Het-диил,R1 означает O(CH2)nHet1, NH(CH2)nHet1, OA, NHA, NA2, O(CH2)nCyc или NH(CH2)nCyc,R2 означает H, A, Ar1, (CH2)nHet3, CN, (CH2)nCyc, CONH2, COOA, (CH2)nOH, (CH2)nOA, (CH2)nNH2,(CH2)nNHA или (CH2)nNA2,Ar1 означает фенил, который является незамещенным или моно-, ди- или тризамещенньш посредством Hal, А, ОН, OA, COOH, COOA, CN, CONH2, NHSO2A и/или SO2A,Het1 означает цигидропирролил, пирролидинил, азетидинил, тетрагидроимидазолил, дигидропиразолил, тетрагидропиразолил, дигидропиридил, тетрагидропиридил, пиперидинил, морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, 1,3-диоксоланил, тетрагидропиранил или пиперазинил, каждый из которых является незамещенным или монозамещенным посредством ОН, COOA, CONH2, COA и/или А,Het2 означает фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил,триазолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, пиразинил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил, индазолил, хинолил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиофенил, бензофуранил, имидазопиридил, 5,6,7,8 тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-2-ил или фуро[3,2-b]пиридил, каждый из которых является незамещенным или монозамещенным посредством Hal, А, ОН, =O, OA, CN, COOA, COOH, CONH2 и/илиNHCOA,Het3 означает дигидропирролил, пирролидинил, азетидинил, тетрагидроимидазолил, тетрагидрофуранил, дигидропиразолил, тетрагидропиразолил, дигидропиридил, тетрагидропиридил, пиперидинил,морфолинил, гексагидропиридазинил, гексагидропиримидинил, 1,3-диоксоланил, дигидропиранил, тетрагидропиранил, пиперазинил, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, триазолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, индолил, изоиндолил, бензимидазолил,индазолил, хинолил, 1,3-бензодиоксолил, бензотиофенил, бензофуранил, имидазопиридил или фуро[3 2b]пиридил, каждый из которых является незамещенным или моно- или дизамещенным посредством Hal,А, ОН, ОА, CN, СООА, СООН, CONH2, CONHA, CONA2, COA, COCH2NH2, COCH2NHA, COCH2NA2,- 11025038(CH2)nCyc и/или NHCOA,А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 С атомов, в котором одна или две не расположенные рядом СН и/или СН 2 группы могут быть заменены на атомы N, О и/или S и/или, кроме того, 1-7 Н атомов могут быть заменены на F и/или Cl,Сус означает циклический алкил, содержащий 3, 4, 5, 6 или 7 С атомов, который является незамещенным или монозамещенным посредством CN, (CH2)nOH или А,Hal означает F, Cl, Br или I,n означает 0, 1, 2, 3 или 4. А означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 С атомов. А предпочтительно означает метил, кроме того этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил, кроме того также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил,1,1- , 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-,2,3- или 3,3-диметилбутил, 1 - или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-или 1,2,2-триметилпропил, более предпочтительно, например, трифторметил. А чрезвычайно предпочтительно означает алкил, содержащий 1, 2, 3, 4, 5 или 6 С атомов, предпочтительно метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, трифторметил, пентафторэтил или 1,1,1-трифторэтил. Одна или две группы СН и/или СН 2 в А могут также быть заменены на атомы N, О или S. Таким образом, А также означает, например, 2-метоксиэтил. А особенно предпочтительно означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-8 С атомов, в котором, кроме того, одна или две не расположенные рядом СН и/или СН 2 группы могут быть заменены на N и/или О атомы и/или 1-7 Н атомов могут быть заменены на F.Ar1 особенно предпочтительно означает фенил, который является незамещенным или моно-, диили тризамещенным посредством А.Het1 предпочтительно означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или тетрагидропиранил,каждый из которых является незамещенным или монозамещенным посредством СОА.Het2 предпочтительно означает тиенил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, пиридил, пиразинил,пиридазинил, тиазолил, пиримидил, индолил, 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-2-ил или бензофуранил, каждый из которых является незамещенным или монозамещенным посредством =O или ОА.Het3 предпочтительно означает пирролидинил, азетидинил, тетрагидрофуранил, дигидропиранил,тетрагидропиранил, дигидропиридил, тетрагидропиридил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, фурил, тиенил, пиразолил, бензофуранил или пиридил, каждый из которых является незамещенным или монозамещенным посредством А.X предпочтительно означает СН. По всему объему изобретения, все радикалы, которые встречаются более одного раза, могут быть одинаковыми или разными, то есть являются независимыми друг от друга. Соединения в соответствии с изобретением I и в соответствии с изобретением II являются, как правило, известными. Однако, если же они являются новыми, их можно получить способами, известнымиper se. Реакцию проводят в условиях Бухвальда-Хартвига, которые известны специалисту в данной области техники. В зависимости от используемых условий время реакций находится в интервале между несколькими минутами и 14 днями, реакционная температура находится в интервале между приблизительно -10 и 160, обычно между 20 и 150, особенно предпочтительно между 80 и приблизительно 150. Пригодными инертными растворителями являются, например, углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2 дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры. такие как диэтиловый эфир,диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; простые гликолевые эфиры, такие как мо- 12025038 нометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид(ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитро соединения,такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат или смеси указанных растворителей. Особое предпочтение отдают диоксану. В соединениях в соответствии с изобретением II, L предпочтительно означает Cl, Br или I, особенно предпочтительно Cl. Расщепление простого эфира осуществляют с помощью способов, которые известны специалисту в данной области техники. Стандартным способом расщепления простого эфира, например, простого метилового эфира, является применение трибромида бора. Гидрогенолитически удаляемые группы, например, при расщеплении простого бензилового эфира,могут быть отщеплены, например, путем обработки водородом в присутствии катализатора (например,катализатора на основе благородного металла, такого как палладий, преимущественно на подложке, такой как уголь). Подходящими растворителями для этого являются растворители, указанные выше, в особенности, например, спирты, такие как метанол или этанол, или амиды, такие как ДМФА. Гидрогенолиз обычно осуществляют при температурах в интервале приблизительно от 0 до 100 и давлении приблизительно от 1 до 200 бар, предпочтительно при 20-30 и 1-10 бар. Сложные эфиры можно гидролизовать, например, используя уксусную кислоту или используяNaOH или KOH в воде, смеси вода/ТГФ или смеси вода/диоксан при температурах между 0 и 100. Алкилирования по азоту проводят в стандартных условиях, которые известны специалисту в данной области техники. Фармацевтические соли и другие формы Соединения в соответствии с изобретением могут использоваться в своей конечной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также охватывает применение таких соединений в форме их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены с помощью разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые солевые формы соединений в соответствии с изобретением получают, главным образом, с использованием традиционных способов. Если соединение в соответствии с изобретением содержит карбоксильную группу, то одна из его пригодных солей может быть образована с помощью реакции соединения с приемлемым основанием для получения соответствующей соли присоединения основания. Такими основаниями являются, например, гидроксиды щелочных металлов, включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития; гидроксиды щелочно-земельных металлов, такие, как гидроксид бария и гидроксид кальция; алкоксиды щелочных металлов, например, этилат калия и пропилат натрия; а также различные органические основания, такие,как пиперидин, диэтаноламин и N-метилглутамин. Сюда также включены соли алюминия соединений в соответствии с изобретением. Для некоторых соединений в соответствии с изобретением соли присоединения кислоты могут быть образованы путем обработки указанных соединений фармацевтически приемлемыми органическими и неорганическими кислотами, например, галогеноводородами, такими, как хлороводород, бромоводород или йодоводород, другими минеральными кислотами и их соответствующими солями, такими как, сульфат, нитрат или фосфат и т.п.; и алкил- и моноарилсульфонатами, такими как этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат; и другими органическими кислотами, их соответствующими солями, такими как ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, сукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбаг и т.п. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений в соответствии с изобретением включают следующие соли, но не ограничиваясь только ими: ацетат, адипат, альгинат, аргинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бисульфит,бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорид, хлорбензоат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, галактерат (из слизевой кислоты), галактуронат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гемисукцинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2 гидроксиэтансульфонат, йодид, изотионат, изобутират, лактат, лактобионат, малат, малеат, малонат,манделат, метафосфат, метансульфонат, метилбензоат, моногидрофосфат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, олеат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилацетат, 3-фенилпропионат, фосфат,фосфонат, фталат. Кроме того, основные соли соединений в соответствии с изобретением включают, но не ограничиваясь только ими, соли алюминия, аммония, кальция, меди железа (III), железа (II), лития, магния, марганца (III), марганца (II), калия, натрия и цинка. Предпочтительными среди перечисленных выше солей являются аммонийные; соли щелочных металлов натрия и калия; и соли щелочно-земельных металлов кальция и магния. Соли соединений в соответствии с изобретением, которые происходят от фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают, но не ограничиваясь только ими,- 13025038 соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, также включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аргинин, бетаин, кофеин, хлорпрокаин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин (бензатин), дициклогексиламин, диэтаноламин,диэтиламин,2-диэтиламиноэтанол,2-диметиламиноэтанол,этаноламин,этилендиамин,Nэтилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лидокаин, лизин, меглумин, N-метил-D-глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы,прокаин, пурины, теобромин, триэтаноламин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин и трис(гидроксиметил)метиламин (трометамин). Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые включают основные азотсодержащие группы, могут быть кватернизированы с помощью таких агентов, как (C1-С 4)алкилгалогениды, например, метил-, этил-, изопропил-и трет-бутилхлориды, бромиды и йодиды; ди(С 1-С 4)алкилсульфаты,например, диметил-, диэтил- и диамилсульфаты; (С 10-С 18)алкилгалогениды, например, децил-, додецил-,лаурил-, миристил- и стеарилхлориды. бромиды и йодиды; и арил(С 1-С 4)алкилгалогениды, например,бензилхлорид и фенетилбромид. Указанные соли позволяют получать как растворимые в воде, так и растворимые в масле соединения в соответствии с изобретением. Предпочтительные фармацевтические соли, указанные выше, включают, но не ограничиваясь только ими, ацетат, трифторацетат, безилат, цитрат, фумарат, глюконат, гемисукцинат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, изотионат, манделат, меглумин, нитрат, олеат, фосфонат, пивалат, фосфат натрия,стеарат, сульфат, сульфосалицилат, тартрат, тиомалат, тозилат и трометамин. Кислотно-аддитивные соли основных соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт свободной основной формы с достаточным количеством желаемой кислоты для получения соли традиционным способом. Свободное основание можно регенерировать путем приведения в контакт солевой формы с основанием и выделения свободного основания традиционным способом. Свободные основные формы в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм своими определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях; однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим свободным основным формам для целей настоящего изобретения. Как было указано, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений в соответствии с изобретением образуют с металлами или аминами, такими, как щелочные металлы и щелочноземельные металлы или органические амины. Предпочтительные металлы представляют собой натрий, калий, магний и кальций. Предпочтительные органические амины представляют собой N,N'дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, N-метил-D-глюкамин и прокаин. Соли присоединения основания кислых соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт свободной кислотной формы с достаточным количеством желаемого основания для получения соли традиционным способом. Свободную кислоту можно регенерировать путем приведения в контакт солевой формы с кислотой и выделения свободной кислоты известным способом. Свободные кислотные формы в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях; однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим свободным кислотным формам для целей настоящего изобретения. Если соединение в соответствии с изобретением включает более чем одну группу, которая способна к образованию фармацевтически приемлемых солей этого типа, то изобретение также охватывает составные соли. Примеры типичных составных солевых форм включают, но не ограничиваясь только ими,битартрат, диацетат, дифумарат, димеглумин, дифосфат, динатрий и тригидрохлорид. В свете вышеописанного можно увидеть, что выражение фармацевтически приемлемая соль" в контексте данной заявки подразумевает активное соединение, которое включает соединение в соответствии с изобретением в форме одной из своей соли, особенно в том случае, если указанная солевая форма обеспечивает указанному активному соединению улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению со свободной формой указанного активного соединения или любой другой солью указанного активного соединения, которые использовались ранее. Фармацевтически приемлемая солевая форма активного соединения может также изначально обеспечивать желаемое фармакокинетическое свойство указанному активному соединению, которым оно ранее не обладало, а также может даже положительно влиять на фармакодинамику указанного активного соединения в отношении его терапевтической активности в организме. Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение в соответствии с изобретением и/или его фармацевтически применимые соли и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества. Фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Такая единица может включать, например, от 0.5 мг до 1 г, предпочтительно от 1 до 700 мг, более предпочтительно от 5 до 100 мг соединения в соответствии с изобретением, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, способа введения, а также возраста, веса тела и состояния пациента, или фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Предпочтительными дозированными единицами лекарственных препаратов являются те, которые содержат суточную дозу или часть суточной дозы, как указано выше,или соответствующую порцию их активного компонента. Фармацевтические составы этого типа также могут быть получены способом, который хорошо известен в области фармацевтики. Фармацевтические составы могут адаптироваться для введения при помощи любого пригодного способа, например, путем перорального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) введения. Такие составы могут быть приготовлены с помощью любого способа, известного в области фармацевтики, например,путем объединения активного соединения со вспомогательным(ыми) наполнителем(ями) и/или вспомогательным(и) веществом(ами). Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут вводиться в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевых пен или пенистых пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле. Таким образом, например, в случае перорального введения в виде таблетки или капсулы, активный компонент может быть объединен с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки получают путем измельчения соединения до пригодного небольшого размера и смешивания его с фармацевтическим наполнителем, измельченным подобным способом, таким как, например, пищевой углеводород, такой как,например, крахмал или маннит. Также можно добавлять ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель. Капсулы получают путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ею желатиновых капсул определенной формы. Перед заполнением капсул к порошковой смеси можно добавлять скользящие и смазывающие вещества, такие как, например, высокодисперсная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме. Для улучшения доступности лекарственного средства, заключенного в капсулу, также можно добавлять дезинтегрирующее вещество или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия. Кроме того, если это является желательным или необходимым, в смесь также можно добавлять подходящие связующие, смазывающие вещества, дезинтеграторы, а также красители. Подходящими связующими являются крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или бета-лактоза,подсластители, приготовленные из кукурузы, природных и синтетических резин, такие как, например,аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинаг натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазывающие вещества, которые могут применяться в таких дозированных формах,включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Дезинтеграторы включают, но не ограничиваясь только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Таблетки получают, например, путем приготовления порошковой смеси,гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и дезинтегратора и прессования полученной смеси в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения,измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как, например, парафин, усилителем поглощения, таким как, например, четвертичная соль, и/или абсорбентом, таким как, например, бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем смачивания со связующим, таким как,например, сироп,крахмальная паста, слизь акации или растворы целлюлозы или полимерных веществ и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции порошковую смесь можно пропускать через таблетировочную машину, получая куски неправильной формы, которые распадаются, образуя гранулы. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеарата, талька или минерального масла для предотвращения слипания в таблетировочной литейной форме. После этого смазанную смесь спрессовывают, получая таблетки. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять с сыпучим инертным наполнителем и затем подвергать прямому прессованию, получая таблетки без осуществления стадий грануляции или сухого прессования. Таблетки также можно покрывать прозрачным или светонепроницаемым защитным слоем, состоящим из шеллакового запечатывающего слоя, слоя сахара или полимерного вещества и глянцевого слоя воска. К этим покрытиям также можно добавлять красители для возможности различения между разными дозируемыми единицами. Жидкости для перорального введения, такие как, например, раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в виде дозируемых единиц таким образом, чтобы они содержали заранее установленное количество соединения. Сиропы могут быть получены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры готовят с применением нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например,этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, ароматические добавки, такие как, например, масло мяты перечной, или натуральные заменители сахара или сахарин, или другие искусственные заменители сахара и т.п. Составы для перорального введения в виде дозированных единиц могут быть инкапсулированы в микрокапсулы, если это является желательным. Также состав может быть приготовлен таким образом,чтобы пролонгировать или замедлить высвобождение, например, путем применения покрытий или заделывания требуемого вещества в полимеры, воск и т.п. Соединения в соответствии с изобретением и их фармацевтически применимые соли, таутомеры и стереоизомеры также могут вводиться в виде липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы с помощью различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины. Соединения в соответствии с изобретением и их фармацевтически применимые соли, таутомеры и стереоизомеры также могут доставляться с помощью моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым присоединены молекулы соединения. Соединения также могут быть соединены с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такими полимерами могут являться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоиловыми радикалами. Кроме того, соединения можно связывать с биоразлагаемыми полимерами, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей. Фармацевтические составы, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для удлиненного, тесного контакта с эпидермисом реципиента. Таким образом, например, активное соединение может доставляться из пластыря путем ионофореза, как в общем описано в Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986). Фармацевтические соединения, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел. Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, предпочтительно применяются составы в виде местной мази или крема. Для приготовления состава в виде мази активный компонент может применяться с парафиновым или смешивающимся с водой мазевым основанием. Альтернативно,для получения крема активное соединение может быть приготовленос основой для крема типа масло-вводе или основой вода-в-масле. Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активное соединение растворено или суспендировано в пригодном носителе, в частности,в водном растворителе. Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в полость рта, включают лепешки, пастилки и жидкости для полоскания рта. Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в виде суппозиториев или клизм. Фармацевтические составы, адаптированные для назального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают крупный порошок, имеющий размер частичек, например, в интервале 20-500 мкм, который вводится путем вдыхания, то есть путем быстрого вдоха через нос из контейнера, содержащего порошок, который придерживают возле носа. Пригодные составы для введения в виде назального аэрозоля или носовых капель с жидкостью в качестве носителя включают растворы активного соединения в воде или в масле. Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают тонкоизмельченные частички в виде пыли или тумана, которые могут быть получены с помощью различных диспергирующих устройств под давлением с аэрозолями, распылителями или инсуффляторами. Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут вводиться в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей. Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные или неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические вещества и растворенные вещества, с помощью которых состав поддерживается изотоническим по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные или неводные стерильные суспензии,которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Составы могут вводиться с помощью емкостей для однократного или многократного введения, например запечатанных ампул и флаконов, и хра- 16025038 ниться в лиофилизированном состоянии, при этом непосредственно перед введением необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например, воду для инъекций. Растворы и суспензии для инъекций, приготовленные согласно рецептуре, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток. Кроме того, является очевидным, что дополнительно к предпочтительным вышеописанным составляющим, составы также могут содержать другие вещества, которые используются в данной области для конкретных типов состава: таким образом, например, составы, которые являются пригодными для перорального введения, могут содержать ароматизаторы. Терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением зависит от многих факторов, включая, например, возраст и вес животного, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу состава и способ введения, и в конченом счете оно может быть определено лечащим врачом или ветеринаром. Тем не менее, эффективнее количество соединения в соответствии с изобретением для лечения роста опухолей, например, карциномы ободочной кишки или молочной железы, как правило, находится в интервале от 0,1 до 100 мг/кг веса тела реципиента (млекопитающего) в сутки и предпочтительно обычно находится в интервале от 1 до 10 мг/кг веса тела в сутки. Следовательно, действующее суточное количество для взрослого млекопитающего весом 70 кг обычно может составлять от 70 до 700 мг, причем это количество может вводиться в виде отдельной дозы один раз в день или обычно в виде циклов частичных доз (таких как, например, два, три, четыре, пять или шесть раз) в день, таким образом, что общая суточная доза является аналогичной. Эффективное количество его соли или сольвата или физиологически функционального производного может быть определено в виде доли эффективного количества соединения в соответствии с изобретением per se. Также можно предположить, что аналогичные дозы пригодны для лечения других состояний, описанных выше. Кроме того, соединения по изобретению могут использоваться в лекарственных средствах, содержащих по меньшей мере одно соединение в соответствии с изобретением и/или также его фармацевтически применимые соли и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и по меньшей мере одно дополнительное активное соединение лекарственного средства. Соединения по изобретению могут использоваться в комплекте (наборе), состоящем из отдельных пакетов:(а) эффективного количества соединения в соответствии с изобретением и/или его фармацевтически применимых солей и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, и(б) эффективного количества дополнительного активного соединения лекарственного средства. Комплект включает пригодные емкости, такие как коробки, индивидуальные бутылки, пакеты или ампулы. Комплект может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения в соответствии с изобретением и/или его фармацевтически применимых солей и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, и эффективное количество дополнительного активного соединения лекарственного средства в растворенной или лиофилизированной форме. Изотопы Кроме того, подразумевается, что соединение в соответствии с изобретением включает его меченные изотопом формы. Меченная изотопом форма соединения в соответствии с изобретением является идентичной этому соединению, не считая того, что один или несколько атомов соединения заменены на атом или атомы, которые имеют атомную массу или массовое число, которое отличается от атомной массы или массового числа атома, обычно встречающегося в природе. Примеры изотопов, которые легко доступны для приобретения и которые могут быть введены в соединение в соответствии с изобретением хорошо известными способами включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, 2 Н, 3H, 13 С, 14 С, 15N, 18 О, 17O, 31 Р, 32 Р, 35S, 18F и 36Cl соответственно. Соединение в соответствии с изобретением, его пролекарство или фармацевтически приемлемая соль того или другого,которое(ая) содержит один или несколько из вышеупомянутых изотопов и/или другие изотопы других атомов считается частью настоящего изобретения. Меченное изотопом соединение в соответствии с изобретением можно использовать в ряде полезных направлений. Например, меченное изотопом соединение в соответствии с изобретением в которое, например, введен радиоизотоп, такой как 3H или 14 С, является пригодным для анализа распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Эти радиоизотопы, то есть тритий (3H) и углерод-14 (14 С), являются особенно предпочтительными благодаря возможности их простого получения и отличной обнаруживаемости. Введение более тяжелых изотопов, например дейтерия (2 Н), в соединение в соответствии с изобретением имеет терапевтические преимущества благодаря более высокой метаболической стабильности этого меченного изотопом соединения. Более высокая метаболическая стабильность непосредственно приводит к увеличенному периоду полураспадаin-vivo или более низким дозам, что в большинстве случаев будет представлять предпочтительный вариант настоящего изобретения. Меченное изотопом соединение в соответствии с изобретением как правило можно получить путем осуществления методик, раскрытых в схемах синтеза и соответствующем описании, в разделе примеров и в разделе получения в настоящей заявке, заменяя не меченный изотопом реагент на легко доступный меченный изотопом реагент. С целью управления окислительным метаболизмом соединения посредством первичного кинетиче- 17025038 ского изотопного эффекта, в соединение в соответствии с изобретением также может быть введен дейтерий (2H). Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции, которое происходит в результате обмена изотопных ядер, что, в свою очередь, вызывается изменением в энергиях основного состояния, необходимых для образования ковалентной связи после этого изотопного обмена. Обмен на более тяжелые изотопы обычно приводит к понижению энергии основного состояния для химической связи и таким образом вызывает снижение скорости в ограничивающем скорость разрыве связи. Если происходит разрыв связи в или возле области седловой точки по оси координат многопродуктовой реакции, соотношения распределения продуктов могут быть существенно изменены. Для пояснения: если дейтерий связан с атомом углерода в положении, в котором не происходит обмен, разницы в скорости kM/kD = 2-7 являются типичными. Если эта разница в скорости успешно распространяется на соединение в соответствии с изобретением, которое является чувствительным к окислению, профиль этого соединения in vivo таким образом может радикально модифицироваться и привести к улучшенным фармакокинетическим свойствам. При обнаружении и совершенствовании терапевтических агентов специалист в данной области техники пытается оптимизировать фармакокинетические параметры, при этом сохраняя желательные свойства in-vitro. Справедливо предположить, что многие соединения с плохими фармакокинетическими профилями являются чувствительными к окислительному метаболизму. Доступные в настоящее время микросомальные анализы печени in-vitro предоставляют ценную информацию о ходе окислительного метаболизма этого типа, что в свою очередь позволяет обеспечить рациональную модель дейтерированных соединений в соответствии с изобретением с улучшенной стабильностью посредством стойкости к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительные улучшения в фармакокинетических профилях соединений в соответствии с изобретением, которые могут быть выражены количественно в показателях увеличения периода полувыведения in vivo (Т/2), концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (Cmax), площади под кривой зависимости "доза-эффект" (AUC), и F; и в показателях сниженных клиренса, дозы и материальных затрат. Нижеследующее предназначено для иллюстрации указанного выше: соединение в соответствии с изобретением которое имеет множество потенциальных точек атаки для окислительного метаболизма,например, атомы водорода бензила и атомы водорода, присоединенные к атому азота, получают в виде ряда аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода заменены на атомы дейтерия, таким образом, что некоторые, многие или все эти атомы водорода заменены на атомы дейтерия. Определения периода полувыведения дает возможность удобно и точно определить степень, до которой улучшилась стойкость к окислительному метаболизму. В этом случае, определяют, что период полувыведения исходного соединения может быть продлен до 100% как результат обмена дейтерий-водород этого типа. Обмен дейтерий-водород в соединении в соответствии с изобретением также можно использовать для достижения благоприятной модификации метаболического спектра исходного соединения с целью уменьшения количества или исключения нежелательных токсических метаболитов. Например, если токсический метаболит возникает посредством окислительного расщепления связи углерод-водород (С-Н),разумно предположить, что дейтерированный аналог значительно уменьшит или исключит выработку нежелательного метаболита, даже если такое отдельное окисление не является определяющей скорость стадией. Дополнительная информация о уровне техники касательно обмена дейтерий-водород приведена,например в работе Hanzlik и др J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990, Reider и др., J. Org. Chem. 52, 33263334, 1987, Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985, Gillette и др., Biochemistry 33(10), 2927-2937, 1994, иJarman и др Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993. Применение Соединения в соответствии с изобретением применимы для лечения рака, септического шока, первичной открытоугольной глаукомы (POAG), гиперплазии, ревматоидного артрита, псориаза, атеросклероза, ретинопатии, остеоартрита, эндометриоза. хронического воспаления и/или нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера. Изобретение относится к применению соединений в соответствии с изобретением для приготовления лекарственного средства для лечения рака, септического шока, первичной открытоугольной глаукомы (POAG), гиперплазии, ревматоидного артрита, псориаза, атеросклероза, ретинопатии, остеоартрита,эндометриоза, хронического воспаления и/или нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера. Соединения по изобретению могут использоваться в способе лечения млекопитающего, страдающего от заболевания, выбранного из рака, септического шока, первичной открытоугольной глаукомы(POAG), гиперплазии, ревматоидного артрита, псориаза, атеросклероза, ретинопатии, остеоартрита, эндометриоза. хронического воспаления и/или нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, где способ включает введение терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с изобретением млекопитающему. Кроме того, изобретение относится к соединениям в соответствии с изобретением для применения для лечения рака, септического шока, первичной открытоугольной глаукомы (POAG), гиперплазии, атеросклероза, ретинопатии, остеоартрита. эндометриоза, хронического воспаления, нейродегенеративных заболеваний, ревматоидного артрита (RA), системной красной волчанки (SLE), синдрома Шегрена, синдрома Айкарди-Гутьереса, ознобленной волчанки, ретинальной васкулопатии, церебральной лейкодистрофии (RVCL), системного склерюза, миозита, псориаза, хронического обструктивного заболевания легких(CPD), воспалительного заболевания кишечника (IBD), ожирения, резистентности к инсулину, диабета 2 типа (NIDDM) и/или метаболического синдрома Соединения согласно настоящему изобретению пригодны в качестве фармацевтически активных соединений для млекопитающих, в частности, для людей, для лечения и борьбы с раковыми заболеваниями и воспалительными заболеваниями. Хозяин или пациент может принадлежать к любому виду млекопитающих, например, такому как,приматы, предпочтительно человек; грызуны, включая мышей, крыс и хомячков, кролики; лошади, коровы, собаки, кошки и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований,поскольку они обеспечивают модель для лечения заболевания человека. Чувствительность определенной клетки к лечению соединениями в соответствии с изобретением может быть определена при исследованиях в условиях in vitro. В общем случае культуру клеток комбинируют с соединением в соответствии с изобретением при различных концентрациях в течение периода времени, достаточного для того, чтобы позволить активным веществам, таким как анти-IgM индуцировать ответ клеток, такой как экспрессия маркра клеточной поверхности, обычно продолжительностью от одного часа до одной недели. Для исследования в условиях in vitro можно использовать культивируемые клетки из крови или образца биопсии. Количество экспрессированого маркра поверхности оценивают с помощью проточной цитометрии с использованием специфических антител, которые распознают маркр. Доза изменяется в зависимости от конкретного применяемого соединения, конкретного заболевания, состояния пациента и т.д. Обычно терапевтическая доза будет достаточной для существенного уменьшения нежелательной популяции клеток в ткани-мишени, при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение, как правило, продолжают до тех пор, пока не будет достигнуто существенное уменьшение, например, по меньшей мере приблизительно 50% уменьшения популяции клеток, представляющих интерес, при этом лечение можно продолжать до тех пор, пока, по существу, в организме не будет обнаружено нежелательных клеток. С целью распознания пути передачи сигналов и выявления взаимодействий между различными путями передачи сигналов, различные ученые разработали пригодные модели или системы моделей, например, модели клеточных культур (например, Khwaja и др., ЕМВО, 1997, 16, 2783-93) и модели трансгенных животных (например, White и др., Oncogene, 2001, 20, 7064-7072). Для определения отдельных стадий в каскаде передачи сигналов, взаимодействующие соединения можно использовать для модулирования сигнала (например, Stephens и др., Biochemical J., 2000, 351, 95-105). Соединения в соответствии с изобретением также можно применять в качестве реагентов для исследования киназо-зависимых путей передачи сигналов у животных и/или моделей клеточных культур или в клинических заболеваниях, указанных в данной заявке. Измерение киназной активности является хорошо известным методом для специалиста в данной области техники. Системы общих исследований для определения киназной активности с использованием субстратов, например, гистона (например, Alessi и др., FEBS Lett. 1996, 399, 3, стр. 333-338) или основного миелинового белка, описаны в литературе (например, Campos-Gonzalez, R. и Glenney, Jr., J.R. 1992,J. Biol. Chem. 267, стр. 14535). Для распознавания ингибиторов киназы доступны различные системы анализа. В сцинтилляционном анализе сближения (Sorg и др., J. of Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19) и анализе с использованием флэш-планшета измеряют радиоактивное фосфорилирование белка или пептида как субстрата с АТФ. В присутствии соединения-ингибитора может быть обнаружен уменьшенный радиоактивный сигнал или вовсе его отсутствие. Кроме того, метод резонансного переноса энергии гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTR-FRET) и поляризационный флуоресцентный (FP) метод являются пригодными в качестве методов анализа (Sills и др., J. of Biomolecular Screening, 2002, 191-214). В других нерадиоактивных ELISA методах анализа используют специфические фосфо-антитела(фосфо-АВ). Фосфо-АВ связывает только фосфэрилированный субстрат. Связывание может быть обнаружено с помощью хемилюминесценции с использованием вторичного сопряженного с пероксидазой анти-овечьего антитела (Ross и др., 2002, Biochem. J.). Настоящее изобретение охватывает применение соединений в соответствии с изобретением и/или их физиологически приемлемых солей и сольватов для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения рака. Предпочтительные карциномы для лечения выбирают из группы карциномы головного мозга, карциномы мочеполового тракта, карциномы лимфатической системы, карциномы желудка, карциномы гортани и карциномы легкого, карциномы кишечника. Дальнейшей группой предпочтительных форм рака являются моноцитарный лейкоз, аденокарцинома легких, мелкоклеточные карциномы легких, рак поджелудочной железы, глиобластомы и карцинома молочной железы. Также охватывается применение соединений в соответствии с изобретением и/или их физиологически приемлемых солей и сольватов для приготовления лекарственного средства для лечения и/или кон- 19025038 троля заболевания, индуцированного опухолью, у млекопитающего, где для этого способа терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением вводят больному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Терапевтическое количество изменяется в зависимости от конкретного заболевания и может быть определено специалистом в данной области без чрезмерных усилий. Особенно предпочтительным является применение для лечения заболевания, где раковое заболевание представляет собой солидную опухоль. Солидную опухоль предпочтительно выбирают из группы опухолей плоского эпителия, мочевого пузыря, желудка, почек, головы и шеи, пищевода, шейки матки, щитовидной железы, кишечника, печени, головного мозга, предстательной железы, мочеполового тракта, лимфатической системы, желудка,гортани и/или легкого. Солидную опухоль более предпочтительно выбирают из группы аденокарциномы легких, мелкоклеточной карциномы легких, рака поджелудочной железы, глиобластом, карциномы ободочной кишки и карциномы молочной железы. Кроме того, предпочтительным является применение для лечения опухоли крови и иммунной системы, предпочтительно для лечения опухоли, выбранной из группы острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, острого лимфолейкоза и/или хронического лимфолейкоза. Кроме того, изобретение относится к применению соединений в соответствии с изобретением для лечения патологий костей, где патологию костей выбирают из группы остеосаркомы, остеоаргрита и рахита. Соединения в соответствии с изобретением также могут вводиться одновременно с другими хорошо известными терапевтическими средствами, которые выбирают исходя из их индивидуальной пригодности для состояния, подвергаемого лечению. Соединения согласно настоящему изобретению также пригодны для комбинирования с известными противораковыми средствами. Эти известные противораковые средства включают следующие: модуляторы эстрогенового рецептора, модуляторы андрогенового рецептора, модуляторы ретиноидного рецептора, цитотоксические агенты, антипролиферативные агенты, ингибиторы пренил-протеин-трансферазы,ингибиторы HMG-CoA редуктазы, ингибиторы ВИЧ протеазы, ингибиторы обратной транскриптазы и другие ингибиторы ангиогенеза. Соединения согласно настоящему изобретению особенно пригодны для одновременного применения с лучевой терапией. Выражение "модуляторы эстрогенового рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание эстрогена с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов эстрогенового рецептора включают, но не ограничиваются только ими, тамоксифен, ралоксифен,идоксифен, LY353381, LY 117081, торемифен, фулвестрант, 4-[7-(2.2-диметил-1-оксопропокси-4-метил 2-[4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил]-2 Н-1-бензопиран-3-ил]фенил-2,2-диметилпропаноат, 4,4'-дигидроксибензофенон-2,4-динитрофенилгидразон и SH646. Выражение "модуляторы андрогенового рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание андрогенов с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов андрогенового рецептора включают финастерид и другие ингибиторы 5-редуктазы, нилутамид,флутамид. бикалутамид, лиарозол и абиратерон ацетат. Выражение "модуляторы ретиноидного рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание ретиноидов с рецептором, независимо от механизма. Примеры таких модуляторов ретиноидного рецептора включают бексаротен, третиноин, 13-цис-ретиноевую кислоту, 9 цис-ретиноевую кислоту, -дифторметилорнитин, ILX23-7553, транс-N-(4'-гидроксифенил)ретинамид иN-4-карбоксифенилретинамид. Выражение "цитотоксические агенты" относится к соединениям, которые приводят к смерти клетки главным образом путем прямого действия на функционирование клетки или ингибируют или препятствуют миозису клетки, включая алкилирующие агенты, факторы некроза опухоли, интеркалирующие агенты, ингибиторы микротрубулина и ингибиторы топоизомеразы. Примеры цитотоксических агентов включают, но не ограничиваясь только ими, тирапазимин, сертенеф, кахектин, ифосфамид, тазонермин, лонидамин, карбоплатин, алтретамин, преднимустин, дибромдулцитол, ранимустин, фотемустин. недаплатин, оксалиплатин, темозоломид, гептаплатин, эстрамустин,импросульфан тозилат, трофосфамид, нимустин, диброспидиум хлорид, пумитепа, лобаплатин, сатраплатин,профиромицин,цисплатин,ирофулвен,дексифосфамид,цис-аминдихлор(2 метилпиридин)платина, бензилгуанин, глуфосфамид, GPX100, (транс,транс,транс)бис-мю-(гексан-1,6 диамин)мю-[диаминплатина(II)]бис[диамин(хлор)платина(Н)] тетра-хлорид, диаризидинилспермин, триоксид мышьяка, 1-(11-додециламино-10-гидроксиундецил)-3,7-диметилксантин, зорубицин, идарубицин,даунорубицин, бисантрен, митоксантрон, пирарубицин, пинафид, валрубицин, амрубицин, антинеопластон, 3'-деамино-3'-морфолино-13-деоксо-10-гидроксикарминомицин, аннамицин, галарубицин, элинафид, MEN10755 и 4-деметокси-3-деамино-3-азиридинил-4-метилсульфонилдаунорубицин (см. WO 00/50032). Примеры ингибиторов микротрубулина включают паклитаксел, виндезин сульфат, 3',4'-дидегидро- 20025038"Антипролиферативные агенты" включают антисмысловые РНК и ДНК олигонуклеотиды, такие как G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231 и INX3001 и антиметаболиты, такие как, например, эноцитабин, кармофур, тегафур, пентостатин, доксифлуридин, триметрексат, флударабин, капецитабин, галоцитабин, цитарабин окфосфат, фостеабин натрия гидрат, ралтитрексед, палтитрексид, эмитефур, тиазофурин, децитабин, нолатрексед, пеметрексед, нелзарабин, 2'-деокси-2'-метилиденцитидин, 2'-фторметилен 2'-деоксицитидин,N-[5-(2,3-дигидробензофурил)сульфонил]-N'-(3,4-дихлорфенил)мочевина,N6-[4 деокси-4-[N2-[2(Е),4(Е)-тетрадекадиеноил]глициламино]-L-глицеро-В-L-манногептопиранозил]аденин,аплидин, эктеинасцидин, троксацитабин, 4-[2-амино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидро-3 Н-пиримидино[5,4-b]1,4-тиазин-6-ил-(S)-этил]-2.5-тиеноил-L-глутаминовая кислота, аминоптерин, 5-фторурацил, аланозин,сложный эфир 11-ацетил-8-(карбамоилоксиметил)-4-формил-6-метокси-14-окса-1,11-диазатетрацикло(7.4.1.0.0)тетрадека-2,4,6-триен-9-илуксусной кислоты, свайнсонин, лометрексол, дексразоксан,метиониназа, 2'-циано-2'-деокси-N4-палмитоил-1-В-D-арабинофуранозил цитозин и 3-аминопиридин-2 карбоксальдегид тиосемикарбазон. "Антипролиферативные агенты" также включают моноклональные антитела к факторам роста, отличающиеся от тех, которые перечислены для "ингибиторов ангиогенеза",такие как трастузумаб, и подавляющие опухоли гены, такие как р 53, которые могут быть доставлены с помощью переноса генов, опосредованного рекомбинантным вирусом (см., например, патент US No. 6,069, 134). Лекарственные средства из табл. 1, приведенной ниже, предпочтительно, но не исключительно,комбинируют с соединениями в соответствии с изобретением. Комбинированного лечения этого типа можно добиться с помощью одновременного, последовательного или раздельного дозирования отдельных компонентов для лечения. В комбинированных продуктах этого типа используют соединения в соответствии с изобретением. Тест на ингибирование IKKIKK - Анализ киназной активности (IKK-эпсилон) Краткое описание Анализ киназной активности осуществляют в виде анализа с использованием 384-луночного флэшпланшета (например, для измерения на Topcount). 1 нМ(Biotin-C6-C6GLKKERLLDDRHDSGLDSMKDEE) и 10 мкМ АТФ (маркированный 0.3 мкКи 33 Р-АТФ/лунку) инкубируют при 30 С в течение 2 ч в общем объеме 50 мкл (10 мМ MOPS, 10 мМ ацетат магния, 0.1 мМ EGTA,1 мМ дитиотреитол, 0,02% Brij3 5. 0,1% BSA, 0,1% BioStab, pH 7.5) с или без тестируемого соединения. Реакцию останавливают с использованием 25 мкл 200 мМ EDTA. После 30 мин выдерживания при комнатной температуре жидкость удаляют и каждую лунку трижды промывают 100 мкл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Неспецифическую реакцию определяют в присутствии 3 мкМ MSC2119074 (ВХ-795). Радиоактивность измеряют с использованием Topcount (PerkinElmer). Результаты (например, значенияIC50) рассчитывают с помощью программных средств, обеспеченных отделом информационных технологий (например, AssayExplorer. Symyx). Тест на ингибирование TBK1 Ферментный тест Краткое описание Анализ киназной активности осуществляют в виде анализа с использованием 384-луночного флэшпланшета (например, для измерения на Topcount). 0,6 нМ TANK-связывающую киназу (TBK1), 800 нМ биотинилированный MELK-производный пептид (Biotin-Ah-Ah-AKPKGNKDYHLQTCCGSLAYRRR) и 10 мкМ АТФ (маркированный 0.25 мкКи 33 РАТФ/лунку) инкубируют при 30 С в течение 120 мин в общем объеме 50 мкл (10 мМ MOPS, 10 мМ ацетат магния, 0,1 мМ EGTA, 1 мМ DTT, 0,02% Bnj35, 0,1% BSA, pH 7.5) с или без тестируемого соединения. Реакцию останавливают с помощью 25 мкл 200 мМ EDTA. После 30 мин выдерживания при комнатной температуре, жидкость удаляют, и каждую лунку трижды промывают 100 мкл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Неспецифическую реакцию измеряют в присутствии 100 нМ стауроспорина. Радиоактивность измеряют на Topcount (PerkinElmer). Результаты (например, значения IC50) рассчитывают с помощью программных средств, обеспеченных отделом информационных технологий (например AssayExplorer, Symyx). Клеточный тест Дозозависимое ингибирование фосфо-IRF3Ser 386cell/MDAMB468/INH/PHOS/IMAG/pIRF3 1. Область действия Несмотря на то, что TBK1 и IKK главным образом известны в качестве ключевых веществ во врожднном иммунном ответе, недавно полученные сведения указывают на роль TBK1 и IKK в Rasиндуцированной онкогенной трансформации. TBK1 была идентифицирована как RalB эффектор в Rasподобном пути фактора обмена (Ral)-гуаниновых нуклеотидов (GEF), который требуется для Rasиндуцированной трансформации. TBK1 непосредственно активирует IRF3 которое, при фосфорилировании, гомодимеризируется и перемещается к ядру, где активизирует процессы связанные с воспалением,иммунорегуляцией, клеточным выживанием и пролиферацией. Этот анализ был разработан с целью оценить эффективность/действенность соединений - ингибиторов TBK1/IKK на основании иммуноцитохимического обнаружения локализированного в ядре фосфо-IRF3, мишени непосредственно ниже TBK1. Обработку полиинозин-полицитидиловой кислотой (поли(I:С), синтетическим аналогом двуспиральной РНК (дсРНК), молекулярной моделью, связанной с вирусной инфекцией, и распознаваемой Tollподобным рецептором 3 (TLR3), применяют для индуцирования активности TBK1/IKK и IRF3 фосфорилирования по Ser386. 2. Обзор анализа День 1: MDA-MB-468 клетки отделяют с помощью HyQ-Tase, подсчитывают, и высеивают в 384 луночный планшет с TC поверхностью и прозрачным дном при плотности 10,000 клеток на лунку в общем объеме 35 мкл полной среды. Альтернативно, клетки непосредственно высевают из пробирок из низкотемпературного стекла. День 2: Клетки предварительно обрабатывают соединениями -ингибиторами в течение 1 ч до стимуляции поли(I:С). После инкубации в течение 2 ч с поли(I:С), клетки фиксируют в (пара)формальдегиде(PFA) и пермеабилизируют, используя метанол (МеОН). Затем клетки блокируют и инкубируют с антиpIRF3 антителом при 4 С в течение ночи. День 3: Первичное антитело вымывают, добавляют AlexaFluor488-сопряженное вторичное антитело, клетки контрастно окрашивают пропидиум иодидом и далее получают изображение на ридере IMXRPMI 1640, Invitrogen 31870 10% FCS. Invitrogen10270-106 2 мМ Glutamax, Invitrogen 35050-038 1 мМ пируват натрия, Invitrogen11360 1% Pen/Strep 37 С. 5% СО 2 Планшеты: 384-луночные черные/с прозрачным дном планшеты для культур клеток, Falcon 35 3962 или Greiner 781090 Субкультивирование: HyQ-Tase, Thermo Scientific (HyClone)SV30030.01 Другие реагенты: Поли(I:С) (LMW), Invitrogentlrl-picw (готовят 20 мг/мл исходный раствор в стерильном PBS, денатурируют 30 мин при 55 С на водяной бане, медленно охлаждают до КТ, хранят при -20 С в аликвотах) Эталонный ингибитор: MSC2119074 А-4 = ВХ-795 (IC50: 200-800 нМ) Ингибиторный контроль: 10 мкМ MSC2119074 А-4 = ВХ-795 Нейтральный контроль: 0.5% ДМСО 10-точечная кривая зависимости "доза-эффект" с MSC2119074 А-4 = ВХ-795 включена в каждый экспериментPBS 1x DPBS, Invitrogen 14190 Формальдегид (не содержащий метанол, 16%, сверхчистый, EM Grade), Polysciences18814 (хранение при КТ), конечная концентрация: 4% Метанол, Merck1.06009.1011 (-20 С, предварительно охлажденный) Козья сыворотка, РААB15-035 (хранение при 4 С, длительное время при -20 С), конечная концентрация: 10%