Бактериоцины и новые бактериальные штаммы

013330 Область изобретения Данное изобретение относится к контролю за заболеваниями животных, особенно домашней птицы,посредством использования новых продуцирующих бактериоцины молочно-кислых бактерий и/или новых бактериоцинов, продуцируемых этими видами. Изобретение также относится к новым бактериоцинам, аминокислотным последовательностям новых бактериоцинов и к штаммам молочно-кислых бактерий, продуцирующих новые бактериоцины. Кроме того, изобретение относится к терапевтическим композициям, содержащим новые бактериоцины и/или продуцирующие их штаммы молочно-кислых бактерий, и к применению таких терапевтических композиций. Уровень техники Потребление неправильно приготовленных продуктов из домашней птицы является причиной кишечных заболеваний человека. Давно признано, что возбудителями таких заболеваний являются Salmonella spp., а не так давно к ним также были отнесены Campylobacter spp., особенно Campylobacter jejuni. Оба микроорганизма могут колонизировать желудочно-кишечный тракт домашних птиц, не оказывая каких-либо вредных воздействий на этих птиц, и хотя существует возможность выявления некоторых колонизированных птиц, бессимптомные носители могут легко разносить данные микроорганизмы в процессе производства или обработки, что приводит к дополнительному инфицированию как живых птиц, так и тушек. Домашняя птица является основным источником микроорганизмов Salmonella и Campylobacter при снабжении пищевыми продуктами (Jones et al., Journal of Food Protection, Volume 54,7,502-507, July, 1991). Предупреждение колонизации живой домашней птицы в процессе ее выращивания может уменьшить проблему инфицирования домашней птицы. В колонизации и постоянном наличии бактерий в пищеварительном тракте животных задействован ряд факторов. Подробный обзор этих факторов приведен в Savage (Progress in Food and Nutrition Science,Volume 7, 65-74, 1983). В число этих факторов входят: (1) кислотность желудка (Gilliland, Journal of FoodProduction, Volume 42, 164-167, 1979); (2) соли желчных кислот (SharpeMattick, Milchwissenschaft,Volume 12, 348-349, 1967; Floch et al. American Journal of Clinical Nutrition, Volume 25, 1418-1426, 1972;Food Protection, Volume 40, 820-823, 1977; Hugdahl et al. Infection and Immunity, Volume 56, 1560-1566,1988); (3) перистальтика; (4) пищеварительные ферменты (Marmur, Journal of Molecular Biology, Volume 3, 208-218, 1961); (5) иммунный ответ и (6) собственные микроорганизмы и продуцируемые ими антибактериальные соединения. Первые четыре фактора зависят от фенотипа хозяина и могут оказаться практически нерегулируемыми переменными. Иммунный ответ в желудочно-кишечном (GI) тракте не поддается легкому модулированию. Факторы, вовлекающие собственные микроорганизмы и их метаболиты, зависят от нормальной флоры GI тракта. Одним из возможных подходов к контролю за колонизацией Campylobacter и/или Salmonella является использование конкурентного исключения (СЕ). Nurmi и Rantala (Nature, Volume 241, 210-211, 1973) продемонстрировали возможность эффективного регулирования инфицирования Salmonella путем введения через желудочный зонд бактерий из веществ кишечника здоровой домашней птицы молодым цыплятам с еще неустоявшейся микрофлорой для противодействия колонизации Salmonella. Введение неопределенных СЕ-препаратов цыплятам ускоряет созревание пищеварительной флоры у птиц, недавно вылупившихся из яйца, и обеспечивает замену естественному процессу передачи микрофлоры от взрослой курицы своему потомству. Результаты лабораторных и полевых исследований доказывают полезность регулирования Campylobacter путем введения нормальной микрофлоры цыплятам; сообщается об уменьшенной частоте инфицирования стад Campylobacter (Mulder and Bolder, in Colonization Control ofSchoeni и Wong (Appl. Environ. Microbiol., Volume 60, 1191-1197, 1994) сообщали о значительном снижении колонизации С. jejuni бройлерных цыплят в результате применения углеводных добавок вместе с тремя идентифицированными антагонистами: Citrobacter diversus 22, Klebsiella pneumoniae 23 и Escherichia coli 25. Также имеется доказательство значительного снижения С. jejuni в образцах кишечника инфицированных бройлерных цыплят после обработки выделенными от домашней птицы культурамиSnoeyenbos et al. (патент США 4335107, июнь 1982 года) разработали методику конкурентного исключения (СЕ) для микрофлоры с целью предотвращения колонизации Salmonella посредством лиофилизации экскрементов животных и анаэробного культивирования этого препарата. Mikola et al. (патент США 4657762, апрель 1987 года) в качестве источника СЕ-микрофлоры для предотвращения колонизации Salmonella использовали фекальное содержимое кишечника и содержимое слепой кишки. Stern etal. (патент США 5451400, сентябрь 1995 года, и патент США 6241335, апрель 2001 года) описывают мукозальную СЕ-композицию для защиты домашней птицы и домашнего скота от колонизации Salmonella и Campylobacter, для приготовления которой соскабливают муциновый слой предварительно промытой слепой кишки, и соскобы, хранящиеся без доступа кислорода, анаэробно культивируют. Nisbetet al. (патент США 5478557, декабрь 1996 года) раскрывают определенный пробиотик, который может быть выделен от разнообразных домашних животных и который получают посредством непрерывного культивирования партии культуры клеток, приготовленной непосредственно из экскрементов, содержимого слепой кишки и/или толстой кишки взрослого целевого животного. Микроорганизмы продуцируют ряд соединений, демонстрирующих антибактериальные свойства. Одна группа таких соединений, бактериоцины, состоит из бактерицидных белков с механизмом действия, аналогичным ионофорным антибиотикам. Бактериоцины часто активны в отношении видов, близко родственных их продуценту. Их широкое распространение в бактериальных видах, выделенных из сложных микробных сообществ, таких как кишечный тракт, поверхность рта или другие эпителиальные поверхности, позволяет предположить, что бактериоцины могут играть регуляторную роль в динамике популяции в бактериальных экосистемах. Бактериоцины определены как продуцируемые бактериями соединения, имеющие биологически активную белковую группировку и обладающие бактерицидным действием (Tagg et al., Bacteriological Reviews, Volume 40, 722-256, 1976). Другие характеристики могут включать (1) узкий ингибиторный спектр действия, сосредоточенный на близкородственных видах; (2) присоединение к конкретным клеточным рецепторам и (3) переносимые плазмидами генетические детерминанты продуцирования бактериоцинов и иммунитета клетки-хозяина к бактериоцинам. Не полностью охарактеризованные антагонистические вещества названы "бактериоциноподобными веществами". Некоторые бактериоцины, эффективные в отношении грамположительных бактерий, в отличие от грамотрицательных бактерий, имеют более широкий спектр действия. Предполагается, что термин "бактериоцин", когда он использован для описания ингибирующих агентов, продуцируемых грамположительными бактериями, должен удовлетворять следующим минимальным критериям: (1) представлять собой пептид и (2) обладать бактерицидной активностью (Tagg et al., выше). Молочно-кислые бактерии принадлежат к наиболее важным пробиотическим микроорганизмам. Они являются грамположительными, не образующими спор каталазонегативными организмами, лишенными цитохромов. Они являются анаэробными, но аэротолерантными, неприхотливыми, толерантными к кислотам и в качестве основного конечного продукта ферментации ими сахаров получается только молочная кислота. Бактерии, продуцирующие молочную кислоту, включают виды Lactobacillus, виды Bifidobacterium, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides,Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus thermophilus и т.д. Эти виды представляют особый интерес из-за широкой распространенности бактериоцинов внутри этой группы, и, кроме того, их широко применяют при ферментации в молочной, пищевой и мясоперерабатывающей отраслях промышленности. Их роль в консервировании пищевых продуктов и придания им аромата хорошо описана. Большинство бактериоцинов, продуцируемых этой группой, активны только в отношении других молочно-кислых бактерий, однако некоторые демонстрируют антибактериальную активность по отношению к более филогенетически отдаленным грамположительным бактериям и, в некоторых условиях,грамотрицательным бактериям.Lactobacilli широко исследовали в отношении продуцирования антагонистов. Они включают хорошо охарактеризованные бактериоцины (DeKlerk, 1967; Upreti and Hinsdill, 1975; Barefoot and Klaenhammer, 1983; Joerger and Klaenhammer, 1986); потенциальные бактериоциноподобные вещества (Vincent etal., 1959) и другие антагонисты, не обязательно родственные бактериоцинам (Vakil and Shahni, 1965;Klaenhammer (1993) классифицировал бактериоцины молочно-кислых бактерий, известные на данный момент, на четыре основные группы: класс I - лантибиотики, представляющие собой небольшие пептиды с массой менее 5 кДа, содержащие необычные аминокислоты лантионин и -метиллантионин; они особенно интересны тем, что имеют очень широкие спектры действия по сравнению с другими бактериоцинами; примеры включают низин, низин Z, карноцин U 149, лактицин 481 и лактоцин 5; класс II - небольшие пептиды, не содержащие лантионин: гетерогенная группа небольших пептидов с массой менее 10 кДа; эта группа включает пептиды, активные в отношении видов Listeria; класс III - большие термолабильные белки с массой более 30 кДа, примером является гелветицин; класс IV - комплексные бактериоцины - белки, содержащие дополнительные группировки, такие как липиды и углеводы. В настоящем изобретении предложены новые композиции, содержащие по меньшей мере один новый штамм, представляющий собой молочно-кислый бактериальный штамм, и/или новые бактериоцины,продуцируемые по меньшей мере одним новым штаммом, способ применения этого штамма или бактериоцина, новые штаммы, аминокислотные последовательности для новых бактериоцинов и способы применения; все из которых отличаются от штаммов, бактериоцинов и способов применения, известных из уровня техники. Сущность изобретения Следовательно, задача настоящего изобретения заключается в предложении новых штаммов Lactobacillus и Enterococcus, продуцирующих новые бактериоцины. Следующая задача настоящего изобретения заключается в предложении нового штамма Lactobacil-2 013330lus salivarius PVD32, имеющего идентификационные характеристики NRRL В-30514. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение нового штамма Lactobacillus acidophilus LWP320, имеющего идентификационные характеристики NRRL B-30510. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение нового штамма Enterococcus faecalis LWP21, имеющего идентификационные характеристики NRRL B-30645. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение нового штамма Enterococcus durans LWP26, имеющего идентификационные характеристики NRRL B-30511. Следующей задачей настоящего изобретения является предложение новых бактериоцинов, продуцируемых новыми штаммами Lactobacillus и Enterococcus. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение нового бактериоцина OR7,имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 1. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение нового бактериоцина LWP320,имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 2. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение нового бактериоцина LWP21,имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 3. Следующей задачей настоящего изобретения является предложение нового бактериоцина LWP26,имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 4. Другая задача настоящего изобретения заключается в предложении способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей по меньшей мере один новый штамм Lactobacillus или Enterococcus, продуцирующий новый бактериоцин, по меньшей мере один новый бактериоцин,продуцируемый новым штаммом Lactobacillus или Enterococcus, или комбинацию новых штаммов и/или новых бактериоцинов. Следующая задача настоящего изобретения заключается в предложении способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей новый штамм Lactobacillus, имеющий характеристики NRRL с номером депонирования В-30514 и В-30510, Enterococcus, имеющий идентификационные характеристики NRRL B-30511 и NRRL B-30645 и их смеси. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей по меньшей мере один новый штамм с идентификационными характеристиками NRRL В-30510, NRRL B-30511, NRRL В-30514, NRRL B-30645 и их смеси; по меньшей мере один новый бактериоцин, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и их смеси; или комбинацию новых штаммов и новых бактериоцинов. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей новый бактериоцин, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 1. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей новый бактериоцин, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 2. Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей новый бактериоцин, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 3. Следующей задачей настоящего изобретения является предложение способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животных по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей новый бактериоцин, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO 4. Другая задача настоящего изобретения заключается в предложении способа, по меньшей мере,уменьшения уровней колонизации животного по меньшей мере одной бактерией-мишенью путем введения животному терапевтической композиции, содержащей бактериоцин, продуцируемый новым штаммом бактерий Lactobacillus, имеющим идентификационные характеристики NRRL В-30510 или NRRL В 30514, новым штаммом Enterococcus, имеющим идентификационные характеристики NRRL B-30511 илиNRRL B-30645, и их смесями. Дополнительные задачи и преимущества изобретения будут очевидны из следующего далее описания. Депонирование микроорганизмовNRRL B-30645 (штамм LWP21) депонирован 1 апреля 2003 года. Все указанные выше штаммы депонированы согласно положениям Будапештского соглашения (Budapest Treaty) в U.S.D.A. коллекции культур сельскохозяйственной научно-исследовательской службы для патентной процедуры (Agricultural Research Service Patent Culture Collection (National Center for Agricultural Utilization Research, 1815 N. University Street, Peoria, Illinois 61604. Краткое описание графических материалов Фиг. 1 представляет собой фотографию, иллюстрирующую непосредственное детектирование OR7 после SDS-PAGE (электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия). На гель наносили Campylobacter jejuni для определения полос(ы), соответствующих(ей) противомикробной активности, и молекулярной массы такой полосы, обладающей активностью. Дорожка 1 - маркеры молекулярной массы (MWM) в диапазоне 6500-97000 (AMERSHAM PHARMACIA BIOTECH): 97000, 66000,43000, 30000, 21000, 14400 и 6500 Да. Полоса на дорожке 2 - чистый лактоцин OR7, полоса на дорожке 3- САР лактоцин (неочищенный противомикробный препарат) OR7 после абсорбции С. jejuni, соответствующая противомикробной активности, зона ингибирования роста (см. стрелку), имела массу приблизительно 6000 Да, полоса на дорожке 4 - САР лактоцин OR7. Другие полосы не проявляли противомикробную активность. Фиг. 2 представляет собой фотографию, иллюстрирующую непосредственное детектирование бактериоцина LWP320 и LWP26 после SDS-PAGE. На гель наносили Campylobacter jejuni для определения полос(ы), соответствующих(ей) противомикробной активности, и молекулярной массы, ассоциированной с этой активностью. Дорожка 3 - маркеры молекулярной массы (LWM) в диапазоне 3000-43000 (AMERSHAM PHARMACIA BIOTECH): 3000, 11400, 18000, 21000 и 43000 Да. Полоса на дорожке 1 - бактериоцин LWP320, полоса на дорожке 2 - бактериоцин LWP26, соответствующая противомикробной активности, зона ингибирования роста имела массу приблизительно 6000 и приблизительно 3000 Да соответственно. Другие полосы не проявляли противомикробную активность. Фиг. 3 представляет собой фотографию, показывающую непосредственное детектирование энтероцина LWP21 после SDS-PAGE. На гель наносили Campylobacter jejuni для определения полос(ы), соответствующих(ей) противомикробной активности, и молекулярной массы активной полосы. Дорожка 4 маркеры молекулярной массы в диапазоне LWM 1060-43000 (AMERSHAM PHARMACIA BIOTECH): 1060, 2500, 3500, 14400, 20000, 30000 и 43000 Да. Полоса на дорожке 1 (энтероцин LWP21 после SPSepharose) и полоса на дорожке 2 (пик 2 после фенил-Sepharose CL-4B), которая соответствует противомикробной активности, зона ингибирования роста (см. стрелку) имела массу приблизительно 6000 Да. Полоса на дорожке 3 (пик после фенил-Sepharose CL-4B) имела массу приблизительно 3000 Да. Другие полосы не проявляли противомикробную активность. Подробное описание изобретения Все больше осознается важность кишечных инфекций у людей, и хорошо описана взаимосвязь между инфицированностью домашней птицы и инфицированием людей. Также хорошо известна возможность уменьшить эту угрозу для здоровья путем вмешательства в заводской процесс производства домашней птицы. При выращивании и обработке бройлерных цыплят вещества фекалий, содержащие патогены, переносятся на мясо и остаются в нем в процессе приготовления пищи на кухне. Метаболиты конкурирующих организмов могут вносить вклад в контроль за такими патогенами,как Campylobacter jejuni и Salmonella. Новые антагонистические штаммы по настоящему изобретению были выделены из слизистых оболочек слепой кишки и зоба бройлерных цыплят. Природными компонентами охарактеризованного антагониста являются низкомолекулярные пептиды, бактериоцины,имеющие широкий спектр антагонистической активности. Согласно настоящему изобретению предложены новые штаммы Lactobacillus и Enterococcus, новые бактериоцины, аминокислотные последовательности указанных бактериоцинов, терапевтические композиции, содержащие новые бактериоцины и/или штаммы, продуцирующие их, и способы применения новых терапевтических композиций. Изолят LWP320 Lactobacillus acidophilus представляет собой факультативные анаэробные (микроаэрофильные) каталазонегативные грамположительные неподвижные плейоморфные палочки с задержкой роста на агаре MRS при приблизительно 37 С. При выращивании на агаре MRS такой изолят образует беловатые полупрозрачные колонии диаметром от приблизительно 0,5 до приблизительно 0,8 мм после приблизительно 24-часовой микроаэрофильной инкубации. В бульоне MRS штамм LWP320 растет только на дне культуральной пробирки. Штамм Lactobacillus salivarius PVD32 представляет собой факультативные анаэробные (микроаэрофильные) грамположительные каталазонегативные неподвижные плейоморфные палочки, которые образуют гладкие выпуклые колонии с четкими границами, от круглой до правильной формы, диаметром от приблизительно 1 до приблизительно 3 мм после микроаэрофильной инкубации в течение приблизительно 18-24 ч при приблизительно 37 С. Штаммы продуцируют молочную кислоту и Н 2 О 2. Штамм Enterococcus faecalis LWP21 представляет собой факультативные анаэробные (микроаэрофильные) грамположительные кокки, каталазонегативные. Их рост замедлен на агаре MRS при 37 С.-4 013330 При культивировании на агаре MRS этот штамм образует беловатые полупрозрачные колонии диаметром приблизительно 0,2 мм после микроаэрофильной инкубации в течение приблизительно 24 ч при приблизительно 37 С. Спустя приблизительно 48 ч микроаэрофильной инкубации при приблизительно 37 С диаметр колоний составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,2 мм. Штамм растет в бульоне MRS только приблизительно в 2/3 объема от дна культуральной пробирки. Штамм Enterococcus durans LWP26 представляет собой факультативные анаэробные (микроаэрофильные) грамположительные кокки, каталазонегативные, с задержкой роста на агаре MRS при приблизительно 37 С. При выращивании на агаре MRS штамм образует беловатые полупрозрачные колонии,которые становятся непрозрачными через приблизительно 24 ч микроаэрофильной инкубации при приблизительно 37 С. Спустя приблизительно 48 ч микроаэрофильной инкубации при приблизительно 37 С средний размер колоний составляет от приблизительно 0,8 до приблизительно 1,0 мм. В бульоне MRS штамм растет во всем объеме пробирки. Скрининг изолированных видов Lactobacillus и Enterococcus с точки зрения продуцирования бактериоциновой активности осуществляют на питательном агаре на культурах с разными внесенными бактериями-мишенями, представляющими интерес. Другие тестируемые штаммы культивируют в аэробных условиях при приблизительно 37 С в течение приблизительно 14-24 ч. Yersinia enterocolitica и Y. pseudotuberculosis культивируют при приблизительно 28 С в аэробных условиях в течение приблизительно 14-24 ч. Тесты на активность в отношении Campylobacter jejuni выполняют на засеянном С. jejuni агаре для Campylobacter, содержащем приблизительно 5% лизированной крови. Использование крови известно специалисту обычной квалификации в данной области и включает кровь, например, овцы, лошади и т.д. Тесты на активность в отношении Campylobacter jejuni проводят в микроаэробных условиях при приблизительно 5% О 2, приблизительно 10% СО 2 и приблизительно 85% N2, в течение приблизительно 24-48 ч при приблизительно 42 С. Приблизительно 0,2 мл антагонистических бактерий, суспендированных в изотоническом растворе, наносят на агар для Lactobacillus и инкубируют в течение приблизительно 24 ч. Вырезают кусочки агара приблизительно 0,5 см 3 и переносят на агар для бруцелл или Campylobacter с добавлением лизированной крови, приблизительно 10 мкг/мл рифампицина, приблизительно 2,4 ед./мл полимиксина, и высевают приблизительно 107 клеток Campylobacter jejuni. Чашки инкубируют при приблизительно 42 С в течение приблизительно 24-48 ч в микроаэробных условиях. Активность оценивают,измеряя зоны ингибирования роста. Изоляты Lactobacillus, для которых обнаружено антагонистическое действие, оценивают с точки зрения продуцирования бактериоцинов. Неочищенные противомикробные препараты (САР) получают путем осаждения сульфатом аммония только из культур антагонистических штаммов, выращенных на минимальной среде при приблизительно 37 С в течение приблизительно 18 ч в аэробных условиях. Культуральные жидкости затем центрифугируют при приблизительно 12000g в течение приблизительно 10 мин. Значения рН в полученных супернатантах затем доводят до приблизительно 6,2, добавляя 1 н. NaOH, a для удаления органических кислот и перекиси водорода и ингибирующих факторов добавляют приблизительно 130 ед./мл каталазы. Антагонистические пептиды выделяют из супернатанта, комбинируя осаждение сульфатом аммония, обессоливающую хроматографию и гель-фильтрацию с получением неочищенного противомикробного препарата (САР). Образцы САР фильтруют через 0,22 мкм фильтры (Millipore, Bedford, MA, USA). Изоляты Enterococcus, для которых обнаружено антагонистическое действие, оценивают с точки зрения продуцирования бактериоцинов. Неочищенные противомикробные препараты (САР) готовят путем осаждения сульфатом аммония только из культур антагонистических штаммов, выращенных в бульоне MRS-5 013330 жидкости затем центрифугируют при приблизительно 12000g в течение приблизительно 10 мин. рН в полученных супернатантах затем доводят до приблизительно 6,2, добавляя 1 н. NaOH, а для удаления органических кислот, и перекиси водорода, и ингибирующих факторов добавляют приблизительно 130 ед./мл каталазы. Антагонистические пептиды выделяют из супернатанта, комбинируя осаждение сульфатом аммония, обессоливающую хроматографию и гель-фильтрацию с получением неочищенного противомикробного препарата (САР). Образцы САР фильтруют через фильтры 0,22 мкм (Millipore, Bedford,MA, USA). Молекулярные массы всех пептидов определяют при помощи SDS-PAGE. Величины pl пептидов определяют посредством изоэлектрического фокусирования. Аминокислотные последовательности определяют при помощи расщепления по Эдману, используя, например, автоматический секвенатор 491cLC (Applied Biosystems, Inc.). Для целей настоящего изобретения термин "пептид" означает соединение, состоящее по меньшей мере из двух или более аминокислот либо аминокислотных аналогов. Аминокислоты или аминокислотные аналоги могут быть соединены пептидными связями. В другом воплощении аминокислоты могут быть соединены другими связями, например сложноэфирными, эфирными и т.д. Пептиды могут находиться в любой структурной конфигурации, включая линейную, разветвленную или циклическую конфигурации. При использовании в данном описании термин "аминокислоты" относится либо к природным, либо к синтетическим аминокислотам, включая как D-, так и L- оптические изомеры, и к аминокислотным аналогам. Производные и аналоги пептидов по настоящему изобретению включают, без ограничения ими, содержащие в качестве первичной аминокислотной последовательности всю или часть аминокислотной последовательности пептида, включая измененные последовательности, в которых функционально эквивалентные аминокислотные остатки заменены остатками, приводящими к консервативной аминокислотной замене в рамках данной последовательности. Например, один или более чем один аминокислотный остаток в рамках данной последовательности может быть заменен другой аминокислотой с аналогичной полярностью, которая действует как функциональный эквивалент, что приводит к "молчащему" изменению. Заместители аминокислоты в рамках данной последовательности могут быть выбраны из других членов класса, к которому эта аминокислота принадлежит. Например, неполярные (гидрофобные) аминокислоты включают аланин, лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан и метионин. Аминокислотами, содержащими ароматические кольцевые структуры, являются фенилаланин, триптофан и тирозин. Полярные нейтральные аминокислоты включают глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин и глутамин. Положительно заряженные (основные) аминокислоты включают аргинин, лизин и гистидин. Отрицательно заряженные(кислотные) аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту. Не ожидается,что такие изменения будут оказывать значительное воздействие на кажущуюся молекулярную массу,определяемую электрофорезом в полиакриламидном геле, или на изоэлектрическую точку. Кроме того,для замены на аминокислоту с особенно предпочтительным свойством также можно ввести неконсервативные аминокислотные замены. Например, Cys может быть введен в место, потенциально подходящее для образования дисульфидных мостиков с другим Cys. Pro может быть введен из-за его исключительно плоской структуры. Пептиды по настоящему изобретению могут быть получены посредством химического синтеза. Синтетические пептиды можно получить, используя хорошо известные методики получения в твердой фазе, жидкой фазе, или методики пептидной конденсации, либо любую их комбинацию, и они могут включать в себя природные и/или синтетические аминокислоты. Аминокислоты, используемые для пептидного синтеза, могут представлять собой стандартный Вос(N-аминозащищенный N-третбутилоксикарбонил)аминокислотную смолу, со стандартными протоколами удаления защиты, нейтрализации, сочетания и промывки, используемыми в оригинальной твердофазной процедуре Мерифилда (J.Am. Chem. Soc, Volume 85, 2149-2154, 1963), или лабильную в щелочных условиях N-аминозащищенную 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmos)-аминокислоту (Carpino and Han, J. Org. Chem., Volume 37, 3403-3409, 1972). В дополнение к этому, в способе по настоящему изобретению могут быть использованы другие N-защитные группы, известные специалистам в данной области техники. Твердофазный пептидный синтез может быть осуществлен с использованием методик, известных специалисту обычной квалификации в данной области техники (см., например Stewart and Young, Solid Phase Synthesis, Second Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, III., 1984; Fields and Noble, Int. J. Pept. Protein Res., Volume 35, 161-214, 1990), или используя автоматические синтезаторы. Согласно настоящему изобретению пептиды и/или новые бактериальные штаммы можно вводить в терапевтически приемлемом носителе местно, парентерально, через слизистые, например перорально,назально или ректально, или трансдермально. При необходимости пептиды по настоящему изобретению могут быть модифицированы с целью увеличения способности пептида проходить через клеточные мембраны, например, путем усиления гидрофобной природы пептида, введения пептида в виде конъюгата с носителем, например лигандом, к конкретному рецептору и т.д.-6 013330 Кроме того, согласно настоящему изобретению предложено конъюгирование нацеленной молекулы с пептидом по изобретению. Нацеленные молекулы для задач настоящего изобретения означают молекулу, которая при введении in vivo локализуется в желаемом месте или местах. В различных воплощениях настоящего изобретения нацеленная молекула может представлять собой пептид или белок, антитело,лектин, углевод или стероид. Нацеленная молекула может представлять собой пептидный лиганд рецептора на клетке-мишени или антитело, такое как моноклональное антитело. Для облегчения сшивания антитело может быть уменьшено до двух гетеродимеров легких и тяжелых ветвей или может быть уменьшен F(ab')2-фрагмент, и после этого они сшиваются с пептидом через восстановленную сульфгидрильную группу. Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены терапевтические композиции. Композиции могут быть для перорального, назального введения, введения в легкие, для инъекции и т.д. Терапевтические композиции включают эффективные количества по меньшей мере одного бактериоцина по настоящему изобретению и его производных и/или по меньшей мере один новый штамм, по меньшей мере, с целью, по меньшей мере, снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактериеймишенью, вместе с приемлемыми растворителями, консервантами, солюбилизаторами, эмульгирующими агентами, адъювантами и/или носителями. Растворители могут включать буферы, такие как, например,Трис-HCl, ацетатный, фосфатный; добавки могут включать детергенты и солюбилизирующие агенты,такие как, например, Твин 80, Полисорбат 80 и т.д.; антиоксиданты включают, например, аскорбиновую кислоту, метабисульфит натрия и т.д.; консерванты могут включать, например, тимерсол, бензиловый спирт и т.д.; а наполнители - такие вещества, как лактоза, маннит и т.д. Терапевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена в композицию,представленную в виде частиц полимерных соединений, таких как поливинилпирролидон, полимолочная кислота, полигликолевая кислота и т.д., или в липосомы. Липосомальное инкапсулирование включает инкапсулирование различными полимерами. Можно использовать большое разнообразие полимерных носителей для заключения в них и/или доставки из них одного или более терапевтических агентов, рассмотренных выше, включая, например, как биоразлагаемые, так и бионеразлагаемые композиции. Типичные примеры биоразлагаемых композиций включают альбумин, коллаген, желатин, гиалуроновую кислоту, крахмал, целлюлозу (метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу,фталат ацетат целлюлозы, сукцинат ацетат целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы), казеин,декстраны, полисахариды, фибриноген, поли(D,L-лактид), поли(сополимер D,L-лактида и гликолида),поли(гликолид), поли(гидроксибутират), поли(алкилкарбонат) и полиортоэфиры, полиэфиры, поли(гидроксивалериановую кислоту), полидиоксанон, поли(этилентерефталат), полияблочную кислоту,политартроновую кислоту, полиангидриды, полифосфазены, полиаминокислоты и их сополимеры (в целом см. Illum L., Davids S.S. (eds.) Polymers in Controlled Drug Delivery, Wright, Bristol, 1987; Arshady J.Controlled Release 17: 1-22, 1991; Pitt, Int. J. Phar. 59: 173-196, 1990; Holland et al., J. Controlled Release 4: 155-0180, 1986). Типичные примеры неразлагаемых полимеров включают сополимеры поли(этиленвинилацетата) ("EVA"), силиконовая резина, акриловые полимеры (полиакриловую кислоту,полиметилакриловую кислоту, полиметилметакрилат, полиалкилцианоакрилат), полиэтилен, полипропилен, полиамиды (нейлон 6,6), полиуретан, поли(сложный эфируретаны), поли(простой эфируретаны),поли(эфирмочевину), простые полиэфиры (полиэтиленоксид, полипропиленоксид, соединения на основе плюроновых кислот (Pluronics) и поли(тетраметиленгликоль, силиконовые резины и виниловые полимеры, такие как поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, поли(винилацетатфталат). Также можно разработать полимеры, которые будут либо анионными (например, альгинат, каррагинин, карбоксиметилцеллюлоза и полиакриловая кислота), либо катионными (например, хитозан, поли-L-лизин, полиэтиленимин и поли(аллиламин (в целом см. Dunn et al., J. Applied Polymer Sci. 50: 353-365, 1993; Cascone etal., J. Materials Sci.: Materials in Medicine 5: 770-774, 1994; Shiraishi et al., Biol. Pharm. Bull. 16 (11): 11641168, 1993; Thacharodi and Rao, Int'l J. Pharm. 120: 115-118, 1995; Miyazaki et al., Int'l J. Pharm. 118:257263, 1995). Полимерным носителям можно придать различные формы с необходимыми характеристиками по высвобождению и/или с конкретными необходимыми свойствами. Например, полимерные носители могут быть изготовлены в форме для высвобождения терапевтического агента под действием конкретного запускающего "события", такого как рН (см., например, Heller et al. Chemically Self-Regulated Drug Delivery Systems в Polymers in Medicine III, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, 1988, p.175-188; KangDelivery Systems в Gurny et al. (eds.), Pulsatile Drug Delivery, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft mbH,Stuttgart, 1993, p.41-55; Doelker, Cellulose Derivatives, 1993, в Peppas and Langer (eds.), Biopolymers I,Springer-Verlag, Berlin). Типичные примеры рН-чувствительных полимеров включают полиакриловую кислоту и ее производные (в том числе, например, гомополимеры, такие как полиаминокарбоновая кислота, полиакриловая кислота, поли(метилакриловая кислота), сополимеры таких гомополимеров и со-7 013330 полимеры полиакриловой кислоты и акрилмономеров, аналогично рассмотреным выше. Другие рНчувствительные полимеры включают полисахариды, такие как фталат ацетат целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, сукцинат ацетат гидроксипропилметилцеллюлозы, тримеллитат ацетат целлюлозы и хитозан. Другие рН-чувствительные полимеры включают любую смесь рН-чувствительного полимера и водорастворимого полимера. Также могут быть получены полимерные носители, чувствительные к температуре (см., например,Chen et al. Novel Hydrogels of a Temperature-Sensitive Pluronic Grafted to a Bioadhesive Polyacrylic AcidControlled Release 18: 1-12, 1992; Paavola et al., Pharm. Res. 12 (12): 1997-2002, 1995). Типичные примеры термогелеобразующих полимеров и температура их гелеобразования (LCST (нижняя критическая температура растворения) (С включают гомополимеры, такие как поли(N-метил-н-пропилакриламид), 19,8; поли(N-н-пропилакриламид), 21,5; поли(N-метил-N-изопропилакриламид), 22,3; поли(N-нпропилметакриламид), 28,0; поли(N-изопропилакриламид), 30,9; поли-(N,н-диэтилакриламид), 32,0; поли(N-изопропилметакриламид), 44,0; поли(N-циклопропилакриламид), 45,5; поли(N-этилметакриламид), 50,0; поли(Nметил-N-этилакриламид), 56,0; поли(N-циклопропилметакриламид) 59,0; поли(N-этилакриламид), 72,0. Кроме того, термогелеобразующие полимеры могут быть изготовлены путем получения сополимеров (из) упомянутых выше мономеров или путем объединения таких гомополимеров с другими водорастворимыми полимерами, такими как акрилмономеры (например, акриловая кислота и ее производные, такие как метилакриловая кислота,акрилат и его производные, такие как бутилметакрилат, акриламид и N-н-бутилакриламид). Другие типичные примеры термогелеобразующих полимеров включают эфирные производные целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, 41 С; метилцеллюлоза, 55 С; гидроксипропилметилцеллюлоза, 66 С, и этилгидроксиэтилцеллюлоза, и Pluronics, такие как F-127, 10-15C; L-122, 19 С; L-92, 26C; L-81, 20 С и L-61, 24 С. С использованием полимерных носителей по настоящему изобретению может быть получено большое разнообразие форм, включая, например, палочкообразные структуры, шарики, плитки или капсулы (см., например, Goodell et al., Am. J. Hosp. Pharm. 43: 1454-1461, 1986; Langer et al. Controlled releaseof macromolecules from polymers в Biomedical Polymers, Polymeric Materials and Pharmaceuticals for Biomedical Use, Goldberg E.P., Nakagim A. (eds.) Academic Press, p.113-137, 1980; Rhine et al., J. Pharm. Sci. 69: 265-270, 1980; Brown et al., J. Pharm. Sci. 72: 1181-1185, 1983 и Bawa et al., J. Controlled Release 1: 259267, 1985). Терапевтические агенты могут быть связаны посредством заключения их в матрицы из полимера,присоединены ковалентными связями или инкапсулированы в микрокапсулы. В некоторых предпочтительных воплощениях изобретения терапевтические композиции предложены в виде некапсулированных препаратов, таких как микросферы (размером в диапазоне от нанометров до микрометров), пасты, нити различного размера, пленки и спреи. Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены терапевтическая композиция и корм для животных. Терапевтическая композиция по настоящему изобретению может быть инкапсулирована с использованием полимерного носителя, как описано выше, и затем добавлена в корм любым известным способом введения ее в корм, таким как, например, механическое смешивание, распыление и т.д. Терапевтическая композиция включает в себя, например, некоторое количество по меньшей мере одного бактериоцина и/или антагонистических бактерий, эффективных, по меньшей мере, для пониже-8 013330 ния уровней колонизации животного по меньшей мере одной бактерией-мишенью, такое как, например,приблизительно 0,5 г каждого из лактоцина и/или энтероцина/1000 г, приблизительно 1,25 г полимерного носителя, такого как поливинилпирролидон/1000 г, и приблизительно 8,6% растворителя, такого как вода/1000 г, в смеси с любым перевариваемым гранулированным компонентом, таким как, например, молотая кукурузная крупа, дробленое зерно, такое как, например, овес, пшеница, гречка; измельченные фрукты, такие как, например, груши, и т.д. Терапевтическую композицию затем добавляют к любому типу корма для животных в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью, например с соотношениями бактериоцина к корму, составляющими от приблизительно 1:10 до приблизительно 1:100. Для целей настоящего изобретения примеры корма для животных включают фураж, силосы, сухой зеленый корм, коренья, клубни, сочные плоды, зерна, семена, "пивное зерно", жмыхи, пивные дрожжи, остатки от перегонки, побочные продукты размола, побочные продукты при производстве сахара, крахмала или масла, и различные пищевые отходы. Продукт можно добавлять в корма для животных, использующиеся для разведения крупного рогатого скота, домашних птиц, кроликов, свиней или овец и т.д. Его можно использовать в виде смеси с другими пищевыми добавками для этих пород. Следующие далее примеры предназначены только для дополнительной иллюстрации данного изобретения и не предназначены для ограничения объема изобретения, который определен формулой изобретения. Пример 1. Из слепой кишки и зоба бройлерных цыплят были выделены два новых антагонистических штамма Lactobacillus salivarius, обозначенный как NRRL В-30514 (штамм PVD32), и Lactobacillus acidophilus,обозначенный как NRRL B-30510 (штамм LWP320), продуцирующих бактериоцины. Слепую кишку и зоб предварительно опорожняли и дважды промывали приблизительно 100 мл стерильного 0,85%-ного(мас./об.) физиологического раствора (изотонического раствора). Материал слепой кишки и зоба суспендировали в стерильном физиологическом растворе, рН приблизительно 7,0. Приблизительно 0,1 мл 10-кратно разбавленной суспензии наносили прямо на чашки с селективным агаром MRS. Чашки инкубировали в анаэробных условиях при приблизительно 37 С в течение приблизительно 16-18 ч. Из каждого образца отбирали по меньшей мере 10 колоний, характерных для Lactobacillus spp. Лактобактерии идентифицировали, используя систему для микротестирования АРО 50 CHL (bioMerieux, Франция). Штаммы Lactobacillus salivarius PVD 32 и Lactobacillus acidophilus LWP320 выращивали при приблизительно 37 С в течение приблизительно 24 ч на агаре MRS. Эти два штамма представляют собой факультативные анаэробные грамположительные неподвижные палочки, способные расти при приблизительно 30, 37 и 42 С. Штамм PVD 32 растет на агаре MRS с образованием после микроаэрофильной инкубации в течение приблизительно 18-24 ч при приблизительно 37 С, гладкие выпуклые колонии от круглой до правильной формы с четкими границами диаметром приблизительно 1-3 мм. Штамм LWP320 растет на агаре MRS с образованием после микроаэрофильной инкубации в течение приблизительно 24 ч при приблизительно 37 С беловатых полупрозрачных колоний диаметром от приблизительно 0,5 до приблизительно 0,8 мм.Enterococcus faecalis LWP21 и Enterococcus durans LWP26 выращивали при приблизительно 37 С в течение приблизительно 24 ч на агаре MRS. Они представляют собой грамположительные факультативные анаэробные неподвижные кокки, способные расти при приблизительно 30, 37 и 42 С. Штамм LWP21 растет на агаре MRS с образованием беловатых полупрозрачных колоний, которые становятся непрозрачными после микроаэрофильной инкубации в течение приблизительно 24 ч. После приблизительно 48-часовой микроаэрофильной инкубации при приблизительно 37 С диаметр колонии составляет от приблизительно 0,8 до приблизительно 1,0 мм. Результаты в API 50CHL и EN-COCCUS галереях с использованием суспензионной среды API 50CHL представлены ниже в табл. 1. Результаты, представленные ниже в табл. 2, указывают на то, что штамм PVD32 представляет собой Lactobacillus salivarius, штамм LWP320 представляет собой Lactobacillus acidophilus, штамм LWP21 представляет собой Enterococcus faecalis и штамм LWP26 представляет собой Enterococcus durans. Бактерии-мишени для оценки антагонистической активности антагонистических изолятов включали штаммы С. jejuni L4 и В 1, выделенные от бройлерных цыплят в России, a Campylobacter jejuni ATCC 11168, несколько видов из семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa штамм ATCC 9027,Staphilococcus aureus и Listeria monocytongenes использовали в качестве тестируемых культур для оценки изолятов на антагонистическую активность. Культуры С. jejuni выращивали либо на агаре для бруцелл,либо на агаре для Campylobacter с добавлением приблизительно 0,02% бисульфита натрия, приблизительно 0,05% сульфата двухвалентного железа и приблизительно 5% частично лизированной овечьей крови при приблизительно 37 С в течение приблизительно 18-24 ч в микроаэробных условиях с приблизительно 5% О 2, приблизительно 10% СО 2 и приблизительно 85% N2. Другие штаммы культивировали на питательном агаре при приблизительно 37 С или приблизительно 28 С для Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis в течение приблизительно 18-24 ч в аэробных условиях. Оценивали антагонистическую активность изолятов в отношении Campylobacter. Приблизительно 0,2 мл суспензий в изотоническом фи-9 013330 зиологическом растворе помещали на чашки с агаром MRS и инкубировали при приблизительно 37 С в течение приблизительно 24 ч. Вырезали кусочки агара приблизительно 0,5 см 3 и переносили на агар для бруцелл или агар для Campylobacter с добавлением приблизительно 5-10% частично лизированной овечьей крови, приблизительно 10 мкг/мл рифампицина и приблизительно 2,5 ед./мл полимиксина, и инокулировали приблизительно 107 клеток Campylobacter jejuni на чашку. Чашки инкубировали при приблизительно 42 С в течение приблизительно 24 ч в микроаэробных условиях, как описано выше. Антагонистическую активность оценивали, измеряя величину диаметра зон ингибирования С. jejuni. Антагонистическую активность по отношению к Campylobacter jejuni оценивали, используя 11790 изолятов. Из них 279 изолятов продемонстрировали антагонизм к С. jejuni. Таблица 1 Результаты идентификации в тесте API 50CHL и EN-COCCUS- 11013330 Таблица 3 Ингибиторная активность изолятов в отношении тестируемых штаммов Campylobacter jejuni Пример 2. Из мазков слепой кишки и зоба здоровых бройлерных цыплят были выделены два новых антагонистических штамма, Enterococcus faecalis 21 (NRRL В-30645) и Enterococcus durans 26 (NRRL B-30511),продуцирующие бактериоцины. Слепую кишку и зоб опорожняли и дважды промывали стерильным 0,085%-ным (мас./об.) изотоническим физиологическим раствором при рН приблизительно 7,0. Материал слепой кишки и зоба суспендировали в стерильном изотоническом физрастворе при рН приблизительно 7,0. Приблизительно 0,1 мл 10-кратно разбавленной суспензии наносили прямо на чашки с селективной средой MRS, и чашки инкубировали при приблизительно 37 С в течение приблизительно 24-48 ч. Энтерококки идентифицировали, используя набор для микротестирования EN-COCCUS. В качестве тестируемой культуры для оценки изолятов на антагонистическую активность, как описано выше в примере 1, использовали Campylobacter jejuni ATCC 11168. Тридцать три других штамма использовали в качестве тестируемых культур для оценки антагонистической активности изолятов, как описано выше в примере 1. Антагонистическую активность изолятов в отношении Campylobacter также оценивали, как описано выше в примере 1. Антагонистическую активность по отношению к Campylobacter jejuni оценивали, используя 1200 изолятов, выделенных от приблизительно 125 бройлерных цыплят. Из них 63 изолята проявляли антагонизм по отношению к С. jejuni ATCC 11168. Способность продуцировать бактериоцины в процессе культивирования в среде MRS изучали для 12 наиболее активных изолятов (см. табл. 1-3 выше). Пример 3. Неочищенные противомикробные препараты получали путем осаждения сульфатом аммония только из культур антагонистических штаммов Lactobacillus, выращенных на минимальной среде в течение приблизительно 18 ч в аэробных условиях при приблизительно 37 С. Культуральные жидкости центрифугировали при приблизительно 12000g в течение приблизительно 10 мин. Значения рН в полученных супернатантах доводили до приблизительно 6,2, добавляя 1 н. NaOH, а для удаления органических кислот и перекиси водорода и ингибирующих факторов добавляли приблизительно 130 ед./мл каталазы. Антагонистические пептиды выделяли из супернатанта, комбинируя осаждение сульфатом аммония, обессоливающую хроматографию и гель-фильтрацию, с получением неочищенного препарата (САР). Образцы САР фильтровали через 0,22 мкм фильтры (Millipore, Bedford, MA).- 12013330 Пример 4. Проявляющие противомикробную активность изоляты Enterococcus из приведенного выше примера 2 культивировали в бульоне MRS (HiMedia) при приблизительно 37 С в течение приблизительно 18 ч в аэробных условиях. Культуральные жидкости собирали и центрифугировали при приблизительно 12000g в течение приблизительно 10 мин. Значения рН в полученных супернатантах подводили до приблизительно 6,2, добавляя 1 н. NaOH,а для удаления органических кислот и перекиси водорода и ингибирующих факторов добавляли приблизительно 130 ед./мл каталазы. Антагонистические пептиды выделяли из супернатанта, комбинируя осаждение сульфатом аммония, обессоливающую хроматографию и гель-фильтрацию с получением неочищенного противомикробного препарата (САР). Образцы САР фильтровали через 0,22 мкм фильтры (Millipore). Пример 5. Спектр противомикробной активности САР определяли, используя спот-тест. Приблизительно 1 мл стерильного неочищенного противомикробного препарата (САР), полученного как в примерах 3 и 4 выше, разбавляли приблизительно 1 мл натрий-фосфатного буфера (рН приблизительно 7,0) и стерилизовали, как в приведенных выше примерах 3 и 4. Приблизительно 10 мкл каждого образца наносили на чашки с агаром для Campylobacter или питательным агаром с добавлением крови, предварительно засеянным клетками бактерий-мишеней. Чашки, содержащие культуры С. jejuni, выращивали при приблизительно 42 С в микроаэробных условиях, Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis культивировали аэробно при приблизительно 28 С, а другие бактериальные штаммы инкубировали аэробно при приблизительно 37 С в течение приблизительно 24 или 48 ч. Идентификацию осуществляли на основе площадей ингибирования, получаемых у бактерий-мишеней. Активность САР выражали в произвольно условных единицах(AU) на один миллилитр препарата, при которых появляется видимая зона ингибирования роста культуры (Henderson et al., Archives of Biochemistry and Biophysics, Volume 295, 5-12, 1992; включен в данное описание посредством ссылки). Все эксперименты проводили в двух параллелях. Приведенные ниже табл. 4 и 5 демонстрируют антагонистическую активность неочищенных противомикробных препаратов, приготовленных для Lactobacillus в примере 3 и Enterococcus в примере 4. Два изолята вида Lactobacillus ингибировали рост Campylobacter jejuni (табл. 3). Изоляты идентифицировали, используя тест API 50CHL (bioMerieux, Франция), и они представляют собой Lactobacillussalivarius PVD32 (NRRL В-30514) и Lactobacillus acidophilus LWP320 (NRRL B-30510). Как видно из табл. 4, все эти штаммы продуцируют лактоцин с широким спектром антибактериальной активности. Они ингибируют рост как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов. ЛактоцинOR-7 является самым активным в отношении C. jejuni. Два изолята вида Enterococcus ингибировали рост С. jejuni (табл. 3). Изоляты идентифицировали,используя тест EN-COCCUS, как Enterococcus faecalis (изолят LWP21) (NRRL В-30645) и Enterococcusdurans (изолят LWP26) (NRRL В-30511). Оба штамма продуцируют энтероцины с широким спектром действия, подавляя как грамположительные, так и грамотрицательные микроорганизмы. Энтероцин 21,продуцируемый Е. faecalis, уникален в том, что он ингибирует рост всех 33 тестируемых штаммов,включая Proteus vulgaris и Morganella morganii, которые особенно устойчивы к бактериоцинам разного происхождения. Пример 6. САР и бактериоцины разделяли электрофоретически посредством SDS-PAGE, используя приблизительно 15%-ный агарозный гель и приблизительно 1% SDS (912 см) в трис-глициновом буфере. После проведения электрофореза при приблизительно 100 мА в течение приблизительно 4 ч гели фиксировали раствором, содержащим приблизительно 15% этанола и приблизительно 1% уксусной кислоты. Затем гели промывали дистиллированной водой в течение приблизительно 4 ч. Для определения молекулярных масс белковых фракций гели окрашивали раствором, содержащим приблизительно 0,15% Coomassi Brilliant Blue R-250 (Sigma, США), приблизительно 40% этанола и приблизительно 7% уксусной кислоты. Гели последовательно промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS) в течение приблизительно 1,5 ч и деионизованной водой в течение приблизительно 3 ч. Промытые гели тестировали в отношении трех типов бактерий-мишеней - С. jejuni АТСС 11168, Е. coli 0157:Н 7 904 и S. enteritidis 237 способом Bhunia et al. (Journal of Industrial Microbiology, Volume 2, 319-322, 1987; включен в данное описание посредством ссылки). Гели помещали в чашки Петри, покрытые полутвердым агаром для Campylobacter (приблизительно 0,75%-ным), содержащим приблизительно 5% лизированной крови овцы, или полутвердым агаром (0,7%-ным), и засевали клетками тестируемых штаммов. Чашки, содержащие С.jejuni, инкубировали при приблизительно 42 С в течение приблизительно 48 ч в микроаэробных условиях, E.coli 0157:Н 7 и S. enteritidis - при приблизительно 37 С в течение приблизительно 24 ч. Оценка была основана на визуализации зон ингибирования роста тестируемых штаммов в присутствии бактериоцинов. Проводили оценку активности очищенных бактериоцинов (табл. 6 для вида Lactobacillus и табл. 7 для вида Enterococcus). Образцы САР и бактериоцинов помещали в гели для IEF (изоэлектрофокусирования) (рН приблизительно 3,1-10,0) (Novex, San Diego, СА). Изоэлектрофокусирование в гелях проводили при приблизительно 100 В в течение приблизительно 1 ч, 200 В в течение приблизительно 2 ч и 500 В в течение приблизительно 30 мин в устройстве ХСМ II Mini-Cell (Novex). Гели промывали дистиллированной водой в течение приблизительно 30 с без фиксирования с последующей окраской Coomassie Brilliant Blue R-250(Sigma, США) для определения изоэлектрических точек (pl) бактериоцинов и их способности ингибировать рост тестируемых штаммов, как показано ниже в табл. 6 для лактоцинов и табл. 7 для энтероцинов. Как видно из фиг. 1, CAP OR7 из L. salivarius PVD 32 содержит три белковые фракции приблизительно 6 кДа, приблизительно 16 кДа и приблизительно 40 кДа. Для измерения их активности окрашенные электрофоретические полоски, содержащие пептиды, помещали на полутвердый агар для Campylobacter, инокулированный клетками С. jejuni АТСС 11168, S. enteritidis и E. coli 0157:H7. Обнаружено, что фракция с массой приблизительно 6 кДа активна в отношении всех трех тестируемых штаммов. Изоэлектрофокусированием идентифицирована фракция с pl, равным приблизительно 9,0, которая демонстрировала активность в отношении всех трех тестируемых штаммов. Как видно из фиг. 2, чистый лактоцин LWP320 из L. acidophilus LWP320 и чистый энтероцинLWP26 из Е. durans LWP26 содержат белковые фракции приблизительно 6 кДа и приблизительно 3 кДа соответственно. Для измерения их активности окрашенные электрофоретические полоски, содержащие- 15013330 пептиды, помещали на полутвердый агар для Campylobacter, инокулированный клетками С. jejuni АТСС 11168, S. enteritidis и Е. coli 0157:Н 7. Обнаружено, что фракции приблизительно 6 кДа и приблизительно 3 кДа активны в отношении всех трех тестируемых штаммов. Изоэлектрофокусированием идентифицированы фракции с pl, равным приблизительно 8,5 и приблизительно 7,8 соответственно, которые демонстрировали активность в отношении всех трех тестируемых штаммов. Как видно из фиг. 3, выделенный энтероцин LWP21 из Е. faecalis LWP21 содержит две белковые фракции приблизительно 3,0 кДа (пик 1) и приблизительно 6,0 кДа (пик 2). Для определения противомикробной активности электрофоретические полосы помещали на полутвердый агар для Campylobacter,инокулированный С. jejuni АТТС 11168, S. enteritidis и Е. coli 0157:Н 7. Фракция приблизительно 6,0 кДа была активна в отношении всех трех штаммов. Никакой антибактериальной активности не наблюдалось для фракции приблизительно 3,0 кДа. Для выделенного энтероцина LWP26 изоэлектрофокусированием идентифицирована единственная белковая фракция с pl приблизительно 7,8, которая была антагонистической в отношении всех трех тестируемых штаммов (табл. 7). Наивысшая активность ассоциировалась с фракциями пика 1 + пика 2 энтероцина LWP21 в спот-тесте, в то время как с использованием SDS-PAGE и IEF была показана самая низкая активность. Таблица 6 Противомикробная активность САР лактоцинов, определенная в спот-тесте, SDS-PAGE и IEF Таблица 7 Характеристика активных фракций энтероцинов LWP21 и LWP26 на основании результатов SDS-PAGE и изоэлектрофокусирования Пример 7. Бактериоцины, полученные в виде неочищенного противомикробного препарата, как описано выше в примере 2, очищали гель-фильтрацией и ионообменной хроматографией. Неочищенные противомикробные препараты (САР) лактоцина OR7 и лактоцина LWP320 инъецировали на колонку Superose 12HR 16/50 (Pharmacia; 1,650 см), уравновешенную приблизительно 75 мл натрий-фосфатного буфера, рН приблизительно 5,9. Препараты элюировали тем же буфером при скорости потока приблизительно 8 мл/мин. Активности элюированных фракций тестировали в отношении Campylobacter jejuni ATCC 11168. Концентрацию белков измеряли, используя способ, описанный Lowry et al. (Journal of BiologicalChemistry, Volume 193, 1951). Фракции, ингибирующие рост С. jejuni, дополнительно очищали катионообменной хроматографией, используя колонку с CM-Sepharose (Pharmacia; 2,520 см). Колонку с СМ-Sepharose уравновешивали буфером С (50 мМ фосфатно-цитратный буфер, рН приблизительно 5,0) при скорости потока приблизительно 8 мл/мин. Бактериоцины элюировали приблизительно 8 мМ буфером С в присутствии Nad в концентрации от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,8%, при скорости потока приблизительно 8 мл/мин. Определяли противомикробную активность и концентрацию белка для каждой фракции. Очищенные фракции обозначали как лактоцины OR7 и LWP320. Очищенные OR7 и LWP320 оценивали, используя SDS-PAGE и изоэлектрофокусирование, как описано выше в примере 4. Наиболее активная фракция (OR7) представляла собой пептид с молекулярной массой приблизительно 6 кДа и pl приблизительно 9,0 (фиг. 1 и табл. 6), а активная фракция LWP320 представляла собой пептид с молекулярной массой приблизительно 6 кДа, pl приблизительно 8,5 (фиг. 3 и табл. 6). Энтерококковые бактериоцины из САР очищали, используя двухстадийную методику: ионообменная хроматография и гидрофобная хроматография. Активные фракции САР, полученные в примере 4,инъецировали на колонку с SP-Sepharose Fast Flow (V равен 30 мл), уравновешенную буфером С (20 мМ фосфат натрия; рН приблизительно 7,8) при скорости потока приблизительно 18 мл/мин. Колонку промывали четырьмя объемами буфера С, и фракции элюировали приблизительно 100 мл 0,5 М NaCl в буфере С. Активность фракций определяли, используя спот-тест, как описано выше в примере 5, используя С. jejuni ATCC 11168. Фракции, способные ингибировать рост С. jejuni, инъецировали на колонку сPhenyl-Sepharose CL-4 В, уравновешенную буфером D (0,06 М боратный буфер, рН приблизительно 8,5),содержащим 0,2 М NaCl. Колонку промывали четырьмя объемами буфера D. Фракции элюировали приблизительно 4 мл буфера D, содержащего приблизительно 70% (об./об.) этанола. Антагонизм каждой фракции измеряли, используя спот-тест. Очищенные препараты получали методами катионообменной рехроматографии на SP-Sepharose, а также на Phenyl-Sepharose CL-4B. Концентрацию белка определяли,используя способ Лоури (выше). Выделенные фракции обозначали как энтероцины LWP21 и LWP26.- 17013330 Выделенные фракции LWP21 и LWP26 оценивали с использованием SDS-PAGE и изоэлектрофокусирования, как описано выше в примере 4. Наиболее активная фракция 2 для LWP21 представляла собой пептид с молекулярной массой приблизительно 6 кДа и pl приблизительно 8,4 (фиг. 2 и табл. 7), а неактивная фракция 1 для LWP21 представляла собой пептид с молекулярной массой приблизительно 3 кДа,pl приблизительно 5,6 (фиг. 2. и табл. 7). Наиболее активная фракция для LWP26 представляла собой пептид с молекулярной массой приблизительно 3 кДа и pl приблизительно 7,8 (фиг. 3 и табл. 7). Аминокислотные последовательности очищенных бактериоцинов определяли с помощью расщепления по Эдману, используя автоматический секвенатор 491 cLC (Applied Biosystems, США). Бактериоцины гидролизовали приблизительно в 6 М HCl под вакуумом при приблизительно 110 С в течение приблизительно 72 ч. Молекулярные массы определяли масс-спектрометрически, используя Voyager-DERP(Perkin-Elmer, США). Использовали систему MALDI-TOF, времяпролетную систему с ионизацией посредством лазерной десорбции при содействии матрицы, вместе с матрицей, 2-циано-гидроксикоричной кислотой. Аминокислотные последовательности четырех бактериоцинов представляют собой Расчетная молекулярная масса пептида OR7 составляла приблизительно 6000 Да. В анализе с использованием MALDI-TOF обнаружено следующее значение молекулярной массы OR7: 5123 Да. Расчетная молекулярная масса пептида LWP320 составила приблизительно 6000 Да. В анализе с использованием MALDI-TOF обнаружено следующее значение молекулярной массы OR7: 5858 Да. Расчетная молекулярная масса пептида LWP21 (фракция 1) составила приблизительно 3000 Да. В анализе с использованием MALDI-TOF обнаружено следующее значение молекулярной массы LWP21(фракция 1): 2786 Да. Расчетная молекулярная масса пептида LWP21 (фракция 2) составила приблизительно 6000 Да. В анализе с использованием MALDI-TOF обнаружено следующее значение молекулярной массы LWP21(фракция 2): 4986 Да. Расчетная молекулярная масса пептида LWP26 составила приблизительно 3000 Да. В анализе с использованием MALDI-TOF обнаружено следующее значение молекулярной массы LWP26: 3231 Да. Таблица 8 Биохимическая очистка лактоцина OR7- 18013330 Таблица 9 Биохимическая очистка энтероцина LWP21 Пример 8. Установлено влияние ферментов, температуры и рН на активность бактериоцинов. В пробирки, содержащие приблизительно 20 мл бактериоцинов, переносили приблизительно 10 мкл одного из следующих ферментов: бета-химотрипсина - приблизительно 100 мг/мл, протеиназы K - приблизительно 200 мг/мл, папаина - приблизительно 60 мг/мл, лизоцима - приблизительно 75 мг/мл и липазы - приблизительно 100 мг/мл (все от Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, МО). Приблизительно после трехчасового периода инкубации при приблизительно 37 С смесь бактериоцина и фермента анализировали на противомикробную активность, используя спот-тест, как в примере 5. Необработанные бактериоцины служили в качестве положительных контролей. Для исследования термостабильности бактериоцинов образец приблизительно 2 мг/мл кипятили в водяной бане в течение приблизительно 15 мин, охлаждали и оценивали в отношении их противомикробной активности, используя спот-тест. Для оценки влияния рН использовали приблизительно 2 мг/мл бактериоцина. Для тестирования рН от приблизительно 3 до приблизительно 10 к образцам добавляли приблизительно по 2 мл стерильных растворов, приблизительно 10 мМ NaOH или приблизительно 10 мМ HCl. Образцы инкубировали при приблизительно 37 С в течение приблизительно 2 и 24 ч, а при приблизительно 90 С в течение приблизительно 20 мин. Образцы доводили до рН приблизительно 7,2 путем добавления приблизительно 4 мМ стерильного фосфатного буфера и анализировали на их противомикробную активность, используя спот-тест, как описано выше в примере 5. Бактериоцины теряли свою противомикробную активность после обработки бета-химотрипсином,протеиназой K и папаином, но сохраняли ее при обработке лизоцимом, липазой или нагревании до приблизительно 90 С (табл. 10 и 11). Они были стабильны при разных значениях рН в диапазоне от приблизительно 3,0 до приблизительно 9,0, но становились неактивными при рН приблизительно 10 (табл. 12 и 13). Энтероцины теряли свою активность при рН приблизительно 9,1 и приблизительно 10. Таблица 10 Влияние ферментов и температуры на противомикробную активность OR7(-) потеря активности после обработки- 19013330 Таблица 11 Влияние ферментов и температуры на противомикробную активность энтероцина LWP21 и энтероцина LWP26(+) наличие активности после обработки(-) потеря активности после обработки Таблица 12 Влияние рН на активность лактоцина OR7(+) наличие активности после обработки(-) потеря активности после обработки Таблица 13 Влияние рН на активность энтероцина LWP21 и LWP26(+) наличие активности после обработки(-) потеря активности после обработки Пример 9. Бактериоцин OR7 очищали, как описано в примере 5. Очищенный бактериоцин OR7 добавляли в концентрации приблизительно 250 мг/кг имеющегося в продаже корма для домашней птицы в поливинилпирролидоне, как это известно в данной области техники. Приблизительно 100 г терапевтической композиции, приготовленной с использованием молотой кукурузной крупы, содержат приблизительно 0,5 г бактериоцина OR7, приблизительно 1,25 г поливинилпирролидона и приблизительно 8,6% воды. Приблизительно 100 г этой композиции добавляют к приблизительно 2 кг корма для домашней птицы. Цыплят в возрасте 1, 6 и 18 суток размещали группами в отдельных изолированных секциях, оборудованных кормушками и подачей воды и фильтрованного воздуха. Корм и воду давали без ограничения. Для цыплят в возрасте 1 сутки (табл. 14): цыплята Группы один служили в качестве контрольной группы, которой предоставляли свободный доступ к пище без добавленного бактериоцина. Этим цыплятам в первые сутки жизни вводили провокационную пробу штаммов L4 и В 1 С. jejuni, как описано выше в примере 1. Штаммы вводили с применением перорального желудочного зонда в концентрации приблизительно 2106 в объеме 0,2 мл. Пять цыплят умерщвляли приблизительно через 7 суток после провокационной пробы, а остальные пять умерщвляли приблизительно через 10 суток после провокационной- 20013330 пробы. Цыплятам Группы два в первый день жизни вводили провокационную пробу штаммов L4 и В 1 С.jejuni, как описано выше для Группы один. Этим цыплятам предоставляли свободный доступ к пище,содержащей приблизительно 250 мг бактериоцина OR7 на килограмм корма, в течение трех суток, начиная с 4-х суток жизни. Цыплят Группы два умерщвляли приблизительно через семь суток после провокационной пробы С. jejuni. Цыплятам Группы три вводили провокационную пробу и их кормили так же,как цыплят Группы два, и их умерщвляли через 10 суток после провокационной пробы. Результаты представлены в табл. 14. Таблица 14 Терапевтические эффекты бактериоцина OR-7 в отношение экспериментально индуцированной инфекции С. jejuni у бройлерных цыплят Лечебный корм, приготовленный на основе имеющегося в продаже корма,предназначенного для цыплят в возрасте 1-10 суток. Что касается цыплят в возрасте 6 суток, то контрольным группам предоставляли свободный доступ к пище без добавленного бактериоцина. Этим цыплятам на 2-е сутки эксперимента вводили провокационную пробу штаммов L4 и В 1 в количестве приблизительно 106 КОЕ (колониеобразующие единицы) в объеме приблизительно 0,2 мл С. jejuni, как описано в примере 1. С. jejuni вводили с применением пероральных желудочных зондов. Цыплят умерщвляли через 9, 11 и 14 суток после провокационной пробы. Цыплятам экспериментальной группы, поделенной на две части, предоставляли свободный доступ к пище с бактериоцином OR7, инкапсулированным в поливинилпирролидон, начиная с 6 суток жизни. Этим- 21013330 цыплятам на 2-е сутки эксперимента вводили провокационные пробы, как описано выше для контрольных цыплят. Цыплят умерщвляли на 9, 11 и 14 сутки жизни. Результаты показаны ниже в табл. 15. Таблица 15 Лечение экспериментальной С. jejuni-ассоциированной инфекции у цыплят в возрасте 6 суток с использованием бактериоцина OR7,добавленного в корм Что касается цыплят в возрасте 18 суток, то контрольным цыплятам предоставляли свободный доступ к пище без добавленного бактериоцина. Этим цыплятам на 15 сутки эксперимента путем перорального кормления через желудочный зонд вводили провокационную пробу штаммов L4 и В 1 С. jejuni величиной 107 КОЕ в объеме приблизительно 0,2 мл. Цыплят умерщвляли на 24 сутки эксперимента. Цыплятам, получавшим обычную пищу с включением бактериоцина OR7, как описано выше, предоставляли свободный доступ к корму, содержащему приблизительно 0,25 г бактериоцина OR7 на килограмм корма, в течение приблизительно пяти суток,- 22013330 начиная приблизительно с 19-х суток жизни. Чистая терапевтическая доза составляет приблизительно 109 мг на цыпленка. Цыплят умерщвляли приблизительно на 24 сутки жизни. Результаты показаны ниже в табл. 16. Таблица 16 Лечение экспериментальной С. jejuni-ассоциированной инфекции у цыплят в возрасте 18 суток бактериоцином OR7,добавленным в корм Цыплятам на 1-е сутки жизни вводили провокационную пробу, и контрольным цыплятам предоставляли свободный доступ к пище и воде без добавленного бактериоцина. Цыплятам вводили провокационную пробу величиной приблизительно 106 КОЕ смеси штаммов L4 и В 1 С. jejuni с помощью перорального желудочного зонда на 1-е сутки жизни. Контрольных цыплят умерщвляли на 17-е сутки жизни. В экспериментальной группе I цыплятам в возрасте 1 сутки вводили провокационную пробу как контрольным цыплятам, предоставляли свободный доступ к корму, содержащему приблизительно 0,250 г бактериоцина OR7 на килограмм корма, начиная с 14-х суток жизни, и умерщвляли приблизительно на 17-е сутки жизни; а цыплятам группы II вводили провокационную пробу как контрольным цыплятам на 1-е сутки жизни и предоставляли свободный доступ к пище, содержащей приблизительно 0,500 г бактериоцина OR7 на килограмм корма на 14-е сутки жизни; и умерщвляли на 17-е сутки жизни. Результаты показаны ниже в табл. 17. Таблица 17 Лечение экспериментальной С. jejuni-ассоциированной инфекции у цыплят бактериоцином OR7, добавленным в корм Приведенное выше подробное описание предназначено для иллюстрации. Подробности приведены исключительно для этой задачи, и специалисты в данной области техники могут создать варианты без отклонения от сущности и объема изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Выделенный бактериоцин, продуцируемый молочно-кислым бактериальным штаммом, имеющим отличительные признаки штамма, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivariusNRRL B-30514, Lactobacillus acidophilus NRRL B-30510, Enterococcus durans NRRL B-30511 и Enterococcus faecalis NRRL B-30645. 2. Бактериоцин по п.1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 1.- 23013330 3. Бактериоцин по п.1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 2. 4. Бактериоцин по п.1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 3. 5. Бактериоцин по п.1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 4. 6. Выделенный Lactobacillus spp., имеющий отличительные признаки штамма Lactobacillus, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivarius NRRL B-30514 и Lactobacillus acidophilus NRRLB-30510. 7. Выделенный Lactobacillus acidophilus, имеющий отличительные признаки NRRL B-30510. 8. Выделенный Lactobacillus salivarius, имеющий отличительные признаки NRRL B-30514. 9. Выделенный штамм Enterococcus, имеющий отличительные признаки штамма Enterococcus, выбранного из группы, состоящей из Enterococcus faecalis NRRL B-30645 и Enterococcus durans NRRLB-30511. 10. Выделенный Enterococcus faecalis, имеющий отличительные признаки NRRL B-30645. 11. Выделенный Enterococcus durans, имеющий отличительные признаки NRRL B-30511. 12. Терапевтическая композиция, содержащая:(а) по меньшей мере один выделенный бактериоцин, продуцируемый молочно-кислым бактериальным штаммом, имеющим отличительные признаки штамма, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivarius NRRL B-30514, Lactobacillus acidophilus NRRL B-30510, Enterococcus faecalis NRRLB-30645, Enterococcus durans NRRL B-30511 и их смесей, в количествах, эффективных, по меньшей мере,для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и(а) выделенный бактериоцин, продуцируемый штаммом Lactobacillus salivarius, имеющим отличительные признаки NRRL B-30514, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и(б) подходящий терапевтический носитель. 14. Терапевтическая композиция по п.12, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQID NO 4 или их смесей. 15. Терапевтическая композиция по п.14, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO 1. 16. Терапевтическая композиция по п.14, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO 2. 17. Терапевтическая композиция по п.14, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO 3. 18. Терапевтическая композиция по п.14, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO 4. 19. Терапевтическая композиция, содержащая:(а) по меньшей мере один выделенный бактериоцин, продуцируемый Lactobacillus acidophilus,имеющим отличительные признаки NRRL B-30510, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и(а) по меньшей мере один выделенный бактериоцин, продуцируемый Enterococcus durans, имеющим отличительные признаки NRRL B-30511, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и(а) по меньшей мере один выделенный бактериоцин, продуцируемый Enterococcus faecalis, имеющий отличительные признаки NRRL В-30645, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и(б) терапевтически приемлемый носитель. 22. Терапевтический корм для животных, содержащий:(а) по меньшей мере один выделенный бактериоцин, продуцируемый молочно-кислым бактериальным штаммом, имеющим отличительные признаки штамма, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivarius NRRL B-30514, Lactobacillus acidophilus NRRL B-30510, Enterococcus durans NRRLB-30511, Enterococcus faecalis NRRL В-30645 и их смесей, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью;(в) корм для животных. 23. Терапевтический корм по п.22, где по меньшей мере один указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ- 24013330 24. Терапевтический корм для животных, содержащий:(а) бактериоцин, продуцируемый штаммом Lactobacillus, имеющим отличительные признаки штамма Lactobacillus, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus acidophilus NRRL B-30510, Lactobacillus salivarius NRRL B-30514 и их смесей; в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью;(в) корм для животных. 25. Терапевтический корм по п.24, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO 1 и SEQ ID NO 2. 26. Терапевтический корм для животных, содержащий:(а) по меньшей мере один выделенный бактериоцин, продуцируемый штаммом Enterococcus,имеющим отличительные признаки штамма Enterococcus, выбранного из группы, состоящей из Enterococcus durans NRRL B-30511, Enterococcus faecalis NRRL B-30645 и их смесей; в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью;(в) корм для животных. 27. Терапевтический корм по п.26, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO 3 и SEQ ID NO 4. 28. Способ, по меньшей мере, снижения уровней колонизации животного по меньшей мере одной бактерией-мишенью, включающий введение животному терапевтической композиции, содержащей по меньшей мере один бактериоцин, продуцируемый молочно-кислым бактериальным штаммом, имеющим отличительные признаки штамма, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivarius NRRL B-30514, Lactobacillus acidophilus NRRL B-30510, Enterococcus durans NRRL B-30511, Enterococcus faecalis NRRL B-30645 и их смесей, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и терапевтический носитель. 29. Способ по п.28, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и их смесей. 30. Способ по п.29, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO 1. 31. Способ по п.29, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO 2. 32. Способ по п.29, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO 3. 33. Способ по п.29, где указанный бактериоцин имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO 4. 34. Способ, по меньшей мере, снижения уровней колонизации животного по меньшей мере одной бактерией-мишенью, включающий введение животному терапевтической композиции, содержащей:(а) по меньшей мере один бактериоцин, продуцируемый молочно-кислым бактериальным штаммом, имеющим отличительные признаки штамма, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivarius NRRL B-30514, Lactobacillus acidophilus NRRL B-30510, Enterococcus durans NRRL B-30511, Enterococcus faecalis NRRL B-30645 и их смесей, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью;(б) по меньшей мере один молочно-кислый бактериальный штамм, имеющий отличительные признаки штамма, выбранного из группы, состоящей из Lactobacillus salivarius NRRL B-30514, Lactobacillusacidophilus NRRL B-30510, Enterococcus durans NRRL B-30511, Enterococcus faecalis NRRL B-30645 и их смесей, в количествах, эффективных, по меньшей мере, для снижения уровней колонизации по меньшей мере одной бактерией-мишенью; и