Производное гидрокси-6-гетероарилфенантридина и его применение в качестве ингибитора pde4

В изобретении приведено описание соединения 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8 метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1H-пиридин-2-он, причем указанное соединение является эффективным ингибитором PDE4. 017282 Область применения изобретения Изобретение относится к производному гидрокси-6-гетероарилфенантридина, которое используется в фармацевтической промышленности для получения фармацевтических композиций. Предпосылки создания изобретения В международных заявках WO 99/57118 и WO 02/05616 приведено описание 6-фенилфенантридинов в качестве ингибиторов PDE4. В международной заявке WO 99/05112 приведено описание 6-алкилфенантридинов в качестве бронхиальных лекарственных средств. В европейской заявке ЕР 0490823 приведено описание производных дигидроизохинолина, которые,как полагают, могут использоваться для лечения астмы. В международной заявке WO 00/42019 заявлены 6-арилфенантридины в качестве ингибиторовPDE4. В международной заявке WO 02/06270 заявлены 6-гетероарилфенантридины в качестве ингибиторов PDE4. В международной заявке WO 97/35854 заявлены замещенные в положении 6 фенантридины в качестве ингибиторов PDE4. В международных заявках WO 2004/019944 и WO 2004/019945 заявлены гидроксизамещенные 6-фенилфенантридины в качестве ингибиторов PDE4. Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения В настоящее время установлено, что 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси 1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-он, более подробно описанный ниже,отличается от ранее описанных соединений неожиданными и незначительными изменениями в структуре и обладает неожиданными и прежде всего практически ценными свойствами. Таким образом, первым объектом изобретения является применение 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2 гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она или его фармацевтически приемлемой соли для получения фармацевтических композиций, предназначенных для лечения сахарного диабета. Вторым объектом изобретения является способ лечения сахарного диабета у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества 5-2R,4aR,10bR)-9 этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она или его фармацевтически приемлемой соли. Возможные соли указанного производного (в зависимости от типа и степени замещения) включают все кислотно-аддитивные соли или все соли оснований, прежде всего фармакологически приемлемые соли неорганических и органических кислот и оснований, обычно используемые в фармацевтике. С одной стороны, это не растворимые в воде и, прежде всего, растворимые в воде кислотно-аддитивные соли кислот, таких, например, как хлористо-водородная, бромисто-водородная, фосфорная, азотная, серная,уксусная, лимонная, D-глюконовая, бензойная, 2-(4-гидроксибензоил)бензойная, масляная, сульфосалициловая, малеиновая, лауриновая, яблочная, фумаровая, янтарная, щавелевая, винная, эмбоновая, стеариновая, толуолсульфоновая, метансульфоновая или 3-гидрокси-2-нафтоевая кислоты, причем при получении солей кислоты используют в эквимолярном или ином отношении в зависимости от основности кислоты или в зависимости от типа требуемой соли. В соответствии с вышеизложенным при получении возможных солей соединения в качестве других кислот можно использовать адипиновую, L-аскорбиновую, L-аспарагиновую, бензолсульфоновую,4-ацетамидобензойную, (+)-камфорную, (+)-камфор-10-сульфоновую, каприловую (октановую кислоту),додецилсерную, этан-1,2-дисульфоновую, этансульфоновую, 2-гидроксиэтаносульфоновую, муравьиную, галактаровую, гентизиновую, D-глюкогептоновую, D-глюкуроновую, глутаминовую, 2 оксоглутаровую, гиппуровую, молочную, малоновую, миндальную, нафталин-1,5-дисульфоновую, нафталин-2-сульфоновую, никотиновую, пальмитиновую, памовую (эмбоновую кислоту) и пироглутаминовую кислоты. С другой стороны, пригодными являются соли оснований. Примерами солей оснований являются соли щелочных металлов (лития, натрия, калия) или соли кальция, алюминия, магния, титана, аммония,меглумина или гуанидиния, причем при получении солей основания также используются в эквимолярном или ином соотношении. Фармакологически неприемлемые соли, которые первоначально получают, например, в качестве промежуточных продуктов при получении соединения по изобретению в промышленном масштабе, превращают в фармакологически приемлемые соли методами, известными специалисту в данной области. Для специалиста в данной области очевидно, что соединение по изобретению и его соли при получении в кристаллической форме могут содержать различные количества растворителя. Следовательно,изобретение включает все сольваты и, прежде всего, все гидраты соединения, а также все сольваты и,прежде всего, все гидраты солей соединения.-1 017282 Кроме того, изобретение включает все возможные таутомерные формы соединения по настоящему изобретению в чистой форме, а также любые его смеси. В этой связи для специалиста очевидно, что в зависимости от конкретного окружения в составе молекулы енолизуемые кетогруппы могут существовать в таутомерных енольных формах, и наоборот. Причем известно, что кето- и енольные группы могут находиться в равновесном состоянии. Изобретение включает как стабильные кето, так и стабильные енольные изомеры соединения по настоящему изобретению в чистой форме, а также его смеси в любом соотношении. Соединение по настоящему изобретению можно получить, например, как показано на схемах реакций по указанным стадиям реакций заявки WO 2005/085225 или, прежде всего, как описано в следующем примере, или аналогично методикам или схемам синтеза, известным специалисту в данной области. Из соединения согласно изобретению необязательно можно получить его соли или необязательно из солей указанного соединения можно получить исходное свободное соединение. Кроме того, из соединения необязательно можно получить его N-оксиды, например, при обработке пероксидом водорода в метаноле или при обработке метахлорпербензойной кислотой в дихлорметане. Специалисту в данной области известны условия проведения подобных реакций N-окисления. Кроме того, для специалиста очевидно, что при наличии в исходном или промежуточном соединении нескольких реакционноспособных центров необходимо временно блокировать один или несколько таких центров защитными группами с целью проведения реакции по требуемому центру (или группе). Подробное описание методов применения многих защитных групп приводится в монографии "Protective(2000). Соединение по настоящему изобретению выделяют и очищают известными методами, например выпариванием растворителя при пониженном давлении и перекристаллизацией полученного остатка из соответствующего растворителя, или очисткой обычными методами, такими как хроматография на колонке с соответствующим материалом. Соли получают растворением свободного соединения в пригодном растворителе (например, в кетоне, таком как ацетон, метилэтилкетон или метилизобутилкетон, простом эфире, таком как диэтиловый эфир, тетрагидрофуран или диоксан, хлорированном углеводороде, таком как хлористый метилен или хлороформ, или низкомолекулярном алифатическом спирте, таком как этанол или изопропанол), содержащем требуемую кислоту или основание или к которому добавляют требуемую кислоту или основание. Соли получают с использованием операций фильтрования, переосаждения, осаждения нерастворителем дополнительного количества соли или выпаривания растворителя. Из полученных солей можно получить свободное соединение, которое, в свою очередь, можно превратить в соли подщелачиванием или подкислением. Аналогичным образом, фармакологически неприемлемые соли можно превратить в фармакологически приемлемые соли. Сольваты или, прежде всего, гидраты соединения по настоящему изобретению получают известным способом, например в присутствии соответствующего растворителя. Гидраты получают при использовании в качестве растворителя воды или смеси воды с полярными органическими растворителями (например, спиртами, такими как метанол, этанол или изопропанол, или кетонами, например ацетоном). Хотя настоящее изобретение описано подробно, объем настоящего изобретения не ограничивается описанными условиями и вариантами его осуществления. Для специалиста в данной области благодаря его квалификации и, прежде всего, благодаря описанию изобретения (например, его явного, неявного или неотъемлемого содержания) представляется очевидным, что в пределах сущности и объема изобретения, заявленных в пунктах формулы изобретения, возможны его различные модификации, аналоги,вариации, производные, гомологические интерпретации и трансформации. В соответствии с практикой стереохимии символы RS и SR используются для обозначения специфической конфигурации каждого из хиральных центров рацемата. Например, термин(2S,4aS,10bS). Примеры 5-2R,4aR,10bR)-9-Этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1 метил-1 Н-пиридин-2-он. К карбонату цезия добавляли 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10bгексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1H-пиридин-2-иловый эфир уксусной кислоты, растворенный в смеси дихлорметана и метанола, и раствор перемешивали в течение 19 ч. Реакционную смесь наносили на силикагель и очищали экспресс-хроматографией, при этом получали указанное в заголовке соединение. Формула соединения: C22H26N2O4, MM: рассчитано: 382,46, МС: найдено: 383,2 (МН+).-2 017282 Соответствующие соли получали, например, по общей методике, приведенной ниже, или аналогичным или подобным способом из соответствующего соединения, указанного выше, и соответствующей кислоты. Приблизительно 1 г свободного основания растворяли приблизительно в 10 мл пригодного растворителя при комнатной температуре. К указанному раствору одной порцией при перемешивании добавляли 1,1 экв. соответствующей кислоты. Смесь перемешивали в течение ночи, при этом получали осадок соли. Соль отделяли фильтрованием, промывали приблизительно 2 мл пригодного растворителя и высушивали в вакууме приблизительно при 50C в течение ночи. Таким образом, например, в случае соляной кислоты в качестве растворителя использовали простой эфир и спирт (например, диоксан, ТГФ, диэтиловый эфир, метанол, этанол и т.п.) или в случае органических кислот, таких как, например, фумаровая,винная или кетоглутаровая кислоты, в качестве растворителя использовали кетон (например, ацетон). Приведенные ниже соли получали по методике, описанной выше, или аналогичным методом: гидрохлорид 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,метансульфонат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1H-пиридин-2-она,цитрат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4a,10b-гексагидрофенантридин-6 ил)-1-метил-1H-пиридин-2-она,L-тартрат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4a,10b-гексагидрофенантридин 6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,D-тартрат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4a,10b-гексагидрофенантридин 6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,мезотартрат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,D-малат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси 8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6 ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,L-малат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6 ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,фумарат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4a,10b-гексагидрофенантридин-6 ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,малеинат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин 6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,кетоглутарат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1H-пиридин-2-она,оксалат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6 ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она,D-глюконат 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10b-гексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1H-пиридин-2-она. При необходимости указанные выше соли превращают с использованием пригодного основания в пригодном растворителе в свободное соединение, которое можно выделить известными методами. Промышленная применимость Соединение по изобретению обладает полезными фармакологическими свойствами, которые обеспечивают промышленную применимость. В качестве селективных ингибиторов циклонуклеотидфосфодиэстеразы (PDE, прежде всего, типа 4) это соединение может использоваться для лечения сахарного диабета. Соединение по настоящему изобретению характеризуется низкой токсичностью, высокой энтеральной абсорбцией (высокой биодоступностью), широким спектром лечебного действия и отсутствием заметного побочного действия. Благодаря ингибирующему действию в отношении PDE соединение по изобретению может применяться в медицине и ветеринарии в качестве лечебных средств для лечения сахарного диабета. Кроме того, изобретение относится к способу лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вышеуказанного заболевания. Способ включает введение больному млекопитающему терапевтически активного, фармакологически эффективного и переносимого количества соединения по изобретению. Изобретение также относится к применению соединения по изобретению для получения фармацевтических композиций, предназначенных для лечения и/или профилактики указанного заболевания. Кроме того, соединение по изобретению может быть представлено в виде готового изделия, которое включает упаковочный материал и фармацевтический агент, помещенный в указанный упаковочный материал, причем фармацевтический агент является терапевтически эффективным в качестве антагониста циклонуклеотид-фосфодиэстеразы типа 4 (PDE4), который снижает интенсивность симптомов заболевания, опосредованного PDE4, а упаковочный материал включает этикетку или вкладыш-инструкцию, на которой указано, что фармацевтический агент используется для профилактики или лечения сахарного-3 017282 диабета, причем указанный фармацевтический агент включает соединение по изобретению. С другой стороны, упаковочный материал, этикетка и вкладыш-инструкция в основном идентичны или похожи на обычные упаковочные материалы, этикетки и вкладыши-инструкции для фармацевтических препаратов соответствующего назначения. Фармацевтические композиции получают способами, которые хорошо известны специалисту в данной области. В качестве фармацевтических композиций соединение по изобретению (активные вещества) используются отдельно или предпочтительно в комбинации с соответствующими фармацевтическими вспомогательными веществами и/или эксципиентами, например в форме таблеток, таблеток с покрытием, капсул, микрокапсул, суппозиториев, пластырей (например, таких как трансдерм (TTS, эмульсий,суспензий, гелей или растворов, в которых содержание активного компонента составляет предпочтительно от 0,1 до 95%, причем благодаря соответствующему подбору вспомогательных веществ и/или эксципиентов можно получить фармацевтическую форму для введения (например, форму для пролонгированного действия или энтеральную форму), пригодную для активного соединения и/или для проявления требуемого действия. Квалифицированному специалисту известны вспомогательные вещества, эксципиенты, носители,наполнители, разбавители или адъюванты пригодные для получения необходимых фармацевтических составов. Наряду с растворителями, гелеобразующими веществами, основами мазей и другими эксципиентами активных веществ, используются, например, антиоксиданты, диспергирующие вещества, эмульгаторы, консерванты, солюбилизирующие агенты, красители, комплексообразующие вещества и агенты,способствующие проникновению через биологические барьеры. Введение фармацевтических композиций осуществляют любым общепринятым способом, известным в данной области техники. Типичные примеры пригодных способов введения включают внутривенный, пероральный, назальный, парентеральный, местный, трансдермальный и ректальный способы доставки. Предпочтителен пероральный способ введения. Фармацевтические композиции получают известными в данной области техники способами. Дозировка активных соединений соответствует дозировке, принятой для ингибиторов PDE. При общей терапии (пероральном или внутривенном введении) обычная доза составляет 0,003-3 мг/кг/сут. В другом варианте при общей терапии (пероральном или внутривенном введении) обычная доза составляет 0,03-3 мг/кг/сут. Биологические испытания. Циклический АМФ (цАМФ) является вторичным месенджером при ингибировании воспалительных и иммунокомпетентных клеток. Изофермент PDE4 широко экспрессируется во многих клетках, принимающих участие в инициации и развитии воспалительных процессов (Н. Tenor и C. Schudt, inPhosphodiesterase inhibitors, p. 21-40, "The Handbook of Immunopharmacology", Academic Press, (1996, а его ингибирование приводит к росту концентрации внутриклеточного цАМФ, а затем к ингибированию клеточной активации (J.E. Souness и др., Immunopharmacology, 47, 127-162 (2000. В литературе описана противовоспалительная активность ингибиторов PDE4, которую определялиin vivo на различных моделях животных (M.M. Teixeira, TIPS, 18, 164-170 (1997. При изучении ингибирования PDE4 на клеточном уровне (in vitro) можно регистрировать множество провоспалительных клеточных ответов. Примерами являются продуцирование супероксидрадикалов нейтрофильнымиPharmacol., 114, 821-831 (1995 гранулоцитами, которое определяют по хемолюминесценции, усиленной люминолом, или по синтезу -фактора некроза опухоли в моноцитах, макрофагах или дендритных клетках (Gantner и др., Brit. J. Pharmacol., 121, 221-231 (1997) и Pulmonary Pharmacol. Therap., 12, 377-386(1999. Кроме того, о наличии иммуномодулирующей активности у ингибиторов PDE4 свидетельствует подавление Т-клеточного ответа, такого как синтез цитокинов или пролиферация (D.M. Essayan,Biochem. Pharmacol., 57, 965-973 (1999. К соединениям, которые ингибируют PDE4, относятся такие соединения, которые ингибируют секрецию указанных провоспалительных медиаторов. Следовательно,ингибирование PDE4 соединением по изобретению является основным показателем подавления воспалительных процессов. Методика определения ингибирующей активности в отношении PDE4.(Стенфордский Университет, США). Указанную кДНК амплифицировали из исходной плазмидыRb10 (5'-AGAGGGGGATTATGTATCCAC-3') и клонировали в вектор pCR-Bac (фирма Invitrogen, Groningen, NL). Рекомбинантный бакуловирус получали методом гомологичной рекомбинации в клетках насекомых SF9. Плазмиды экспрессии трансфектировали совместно с Bac-N-Blue (фирма Introgen, Groningen,NL) или Baculo-Gold ДНК (фирма Pharmingen, Гамбург) по стандартной методике (фирма Pharmingen,Гамбург). Супернатант, содержащий рекомбинантный вирус (и не содержащий вирус дикого типа), отбирали методом бляшкообразования. Супернатант с высоким титром вируса получали трехкратной ам-4 017282 плификацией. PDE экспрессировали в клетках SF21 при заражении 2106 клеток/мл при бляшкообразущем числе (MOI) от 1 до 10 в бессывороточной среде SF900 (фирма Life Technologies, Paisley, UK). Клетки культивировали при 28C в течение 48-72 ч, а затем осаждали центрифугированием при 1000g и 4C в течение 5-10 мин. Клетки SF21 ресуспендировали при концентрации приблизительно 107 клеток/мл в охлажденном на ледяной бане (4C) буферном растворе для гомогенизации (20 мМ трис, рН 8,2, следующего состава: 140 мМ NaCl, 3,8 мМ KCl, 1 мМ EGTA, 1 мМ MgCl2, 1 мМ -меркаптоэтанол, 2 мМ бензамидин, 0,4 мМPefablock, 10 мкМ лейпептин, 10 мкМ пепстатин А, 5 мкМ ингибитор трипсина) и разрушали при действии ультразвука. Гомогенат центрифугировали при 1000g в течение 10 мин и полученный супернатант хранили при -80C до использования (см. ниже). Содержание белка определяли по методу Бредфорда(фирма BioRad, Munich) при использовании в качестве стандарта БСА. Активность PDE4B2 ингибировалась указанными соединениями при анализе модифицированнымPharmacia Biotech (см. описание методики "Phosphodiesterase [3H] cAMP SPA enzyme assay, code TRKQ 7090"). Анализ проводили в 96-луночных микротитрационных планшетах. Смесь для анализа (100 мкл) содержала 20 мМ трис-буферного раствора (рН 7,4), 0,1 мг/мл БСА (бычий сывороточный альбумин),5 мМ Mg2+, 0,5 мкМ цАМФ (включая меченый [3 Н] цАМФ с уровнем метки приблизительно 50000 имп/мин), 1 мкл раствора анализируемого соединения (при соответствующем разведении в ДМСО) и определенное количество рекомбинантного PDE (супернатанта после центрифугирования при 1000g, см. выше), которое обеспечивает 10-20% конверсию цАМФ в указанных условиях. Конечное содержание ДМСО в реакционной смеси (1% об./об.) не оказывало существенного влияния на активностьPDE. После предварительного инкубирования при 37C в течение 5 мин в реакционную смесь добавляли субстрат (цАМФ) для инициирования реакции и образцы инкубировали в течение еще 15 мин, затем реакцию останавливали добавлением 50 мкл гранул SPA. Согласно методике фирмы-изготовителя гранулы предварительно ресуспендировали в воде, а затем суспензию разбавляли водой 1:3 (об./об.). Таким образом, разбавленный раствор содержал 3 мМ IBMX, что обеспечивало полное подавление активности PDE. После седиментации гранул (30 мин) планшеты анализировали с использованием соответствующего люминометра. Ингибирующую активность соединения по изобретению в отношении PDE (значения IC50) определяли по графику зависимости ингибирования от концентрации методом нелинейной регрессии. Ингибирующая активность соединения по изобретению приведена в табл. А. Таблица А Ингибирующая активность в отношении PDE4 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10bгексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она или его фармацевтически приемлемой соли для получения фармацевтических композиций, предназначенных для лечения сахарного диабета. 2. Способ лечения сахарного диабета у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества 5-2R,4aR,10bR)-9-этокси-2-гидрокси-8-метокси-1,2,3,4,4 а,10bгексагидрофенантридин-6-ил)-1-метил-1 Н-пиридин-2-она или его фармацевтически приемлемой соли.