Антагонист минералокортикоидного рецептора и способы его применения

АНТАГОНИСТ МИНЕРАЛОКОРТИКОИДНОГО РЕЦЕПТОРА И СПОСОБЫ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ В изобретении предложено соединение формулы Коутс Дэвид Эндрю, Гавардинас Константинос, Джадхав Прабхакар Кондаджи (US) Медведев В.Н. (RU) или его фармацевтически приемлемая соль, фармацевтические композиции, содержащие соединение (I) в комбинации с подходящим носителем, разбавителем или наполнителем, и способы лечения физиологических расстройств, в частности застойной сердечной недостаточности,гипертензии, диабетической нефропатии или хронического заболевания почек, включающие введение соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US) Настоящее изобретение относится к трициклическим соединениям, которые можно применять в качестве терапевтических средств, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения,к способам применения таких соединений для лечения физиологических расстройств у пациентов и к промежуточным соединениям и способам, подходящим для синтеза указанных соединений. Альдостерон, основной эндогенный минералокортикоид, стимулирует реабсорбцию натрия и воды и экскрецию калия после взаимодействия с минералокортикоидным рецептором (МР). Благодаря роли альдостерона в поддержании электролитного и водного баланса антагонисты МР нашли применение для лечения многочисленных физиологических расстройств, в том числе гипертензии, гипокалиемии, миокардиальной аритмии, синдрома Барттера, а также расстройств, связанных с первичным или вторичным гиперальдостеронизмом, таких как синдром Конна. В последнее время антагонисты МР нашли применение при лечении застойной сердечной недостаточности и острого инфаркта миокарда. Кроме того, было доказано, что антагонисты МР являются эффективными в доклинических моделях заболевания почек и в комбинации со стандартной терапией для уменьшения протеинурии у пациентов, страдающих почечными расстройствами, такими как хроническое заболевание почек, в том числе диабетическая нефропатия. Однако существующие стероидные антагонисты МР вызывают сопутствующие эффекты, которые ограничивают их безопасность и/или эффективность. Например, спиронолактон является неселективным и перекрестно взаимодействует с другими ядерными гормональными рецепторами (например, андрогенным рецептором (АР), прогестероновым рецептором (ПР) или глюкокортикоидным рецептором (ГР,которые опосредуют другие физиологические процессы. Терапия с применением спиронолактона сопровождалась гиперкалиемией, а также гинекомастией, эректильной дисфункцией, пониженным либидо,нерегулярными менструациями и болями в желудке. Эплеренон, несмотря на селективность к МР относительно других ядерных гормональных рецепторов, также вызывал гиперкалиемию. Таким образом, в данной области техники сохраняется потребность в способах лечения, альтернативных имеющейся в настоящее время терапии с применением антагонистов МР. Задачей настоящего изобретения является обеспечение нестероидного лиганда МР, который обладает антагонистической активностью в отношении МР. Более конкретно, задачей является обеспечение нестероидного антагониста МР, который связывается с МР с большим сродством по сравнению с АР, ПР и ГР. В качестве более конкретного варианта реализации изобретения задачей настоящего изобретения является обеспечение нестероидного антагониста МР, который связывается с МР с большим сродством по сравнению с АР, ПР и ГР и обладает сильной ренопротективной или кардиозащитной активностью. В качестве более конкретного варианта реализации изобретения задачей является обеспечение нестероидного антагониста МР, который связывается с МР с большим сродством по сравнению с АР, ПР и ГР, обладает сильной ренопротективной или кардиозащитной активностью и при этом характеризуется пониженной частотой случаев развития гиперкалиемии или вероятности ее развития. Трициклические лиганды МР известны в данной области техники. Например, в WO 04/052847 иWO 05/066161 предложены трициклические модуляторы рецептора стероидного гормона, которые можно применять для лечения расстройств, восприимчивых к модулированию минералокортикоидного рецептора или глюкокортикоидного рецептора. Настоящее изобретение относится к конкретному дибензооксепину, представленному соединением (I), показанным ниже, которое имеет профиль активности invitro и in vivo, указывающий на полезность этого соединения при лечении или предотвращении расстройств, восприимчивых к терапии антагонистами минералокортикоидных рецепторов. Соответственно в настоящем изобретении предложено соединение формулы(5-Е)-(3-фтордибензо[b,е]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-1-7R,8aR)-гексагидро-1 Н-пирроло[2,1c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он) или его фармацевтически приемлемая соль. В качестве конкретного варианта реализации изобретения в настоящем изобретении предложено соединение (I) или его фармацевтически приемлемая соль в кристаллической форме. Согласно другому варианту реализации изобретения в настоящем изобретении предложен способ лечения или предотвращения застойной сердечной недостаточности, диабетической нефропатии, хронического заболевания почек, гипертензии, гипокалиемии, миокардиальной аритмии, синдрома Барттера,первичного или вторичного гиперальдостеронизма или синдрома Конна, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В качестве более конкретного аспекта в настоящем изобретении предложен способ лечения или предотвращения застойной сердечной недостаточности, гипертензии, диабетической нефропатии или хронического заболевания почек, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффектив-1 019179 ного количества соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли В настоящем изобретении также предложено соединение (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. Кроме того, в настоящем изобретении предложено соединение (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении или предотвращении застойной сердечной недостаточности, диабетической нефропатии, хронического заболевания почек, гипертензии, гипокалиемии, миокардиальной аритмии, синдрома Барттера, первичного или вторичного гиперальдостеронизма или синдрома Конна. Более конкретно, в изобретении предложено соединение (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении или предотвращении застойной сердечной недостаточности, гипертензии,диабетической нефропатии или хронического заболевания почек. Согласно другому варианту реализации изобретения в настоящем изобретении предложено применение соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения застойной сердечной недостаточности, диабетической нефропатии,хронического заболевания почек, гипертензии, гипокалиемии, миокардиальной аритмии, синдрома Барттера, первичного или вторичного гиперальдостеронизма или синдрома Конна. Более конкретно, в настоящем изобретении предложено применение соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения застойной сердечной недостаточности, гипертензии, диабетической нефропатии или хронического заболевания почек. Кроме того, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение (I) его или фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или наполнителями. Более конкретно, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения застойной сердечной недостаточности, гипертензии, диабетической нефропатии или хронического заболевания почек,содержащая соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или наполнителями. Настоящее изобретение также включает новые промежуточные соединения и способы, применимые для синтеза соединения (I). Настоящее изобретение относится к фармацевтически приемлемым солям соединения (I), а также сольватам соединения (I) или его фармацевтически приемлемым солям. По существу, в настоящей заявке значение термина "соединение (I)" включает любой сольват указанного соединения. Примеры фармацевтически приемлемых солей и способов их получения хорошо известны специалистам в данной области техники; см., например, Stahl et al., "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use",VCHA/Wiley-VCH, (2002); Gould, P.L., "Salt selection for basic drugs", International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986) и Bastin et al. "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical NewChemical Entities", Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000). Особое значение имеет тозилат соединения (I), однако, следует понимать, что свободное основание соединения (I) является предпочтительным. В настоящей заявке термины "R" и "S" применяют, как и в большинстве случаев в органической химии, для обозначения конкретной конфигурации хирального центра. Термины , "R/S" или "RS" относятся к рацемической конфигурации хирального центра. Частичный перечень приоритетов и описание стереохимии содержится в "Nomenclature of Organic Compounds: Principles and Practice" (J.H. Fletcher,et al., eds., 1974). В настоящей заявке обозначение относится к химической связи, которая выступает вперед относительно плоскости страницы, тогда как обозначение относится к химической связи, которая выступает назад относительно плоскости страницы. Как понятно обычному специалисту в данной области техники, молекулы, содержащие двойную связь углерод-углерод или углерод-азот, могут существовать в виде геометрических изомеров. Как правило, применяют два способа для обозначения конкретных изомеров, способ "цис-транс" и способ "Е иZ", в зависимости от того, являются ли одинаковыми или различными группы, прикрепленные к каждому из атомов, соединенных двойной связью. Описание геометрической изомерии и наименование конкретных изомеров можно найти в публикации March, "Advanced Organic Chemistry", John WileySons,1992, Chapter 4. Соединение (I) можно получить как часть фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция, как таковая, содержащая соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем, представляет собой важный вариант реализации изобретения. Примеры фармацевтических композиций и способов их получения хорошо известны в данной области техники; см., например, REMINGTON: THE SCIENCE AND(I) (измельченное в струйной мельнице) в суспензии с 10% витамином Е TPGS и 0,05% AntiFoam 1510 в дистиллированной воде и соединение (I) в растворе (15 мг/мл) с 20% Captisol, 25 мМ фосфатным буфером (рН 2) и 1 экв. HCl. Однако будет понятно, что предпочтительная композиция согласно настоящему изобретению содержит соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль, полученное в капсуле или таблетке. Соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль или композицию, содержащую соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль, можно ввести любым путем, который делает соединение биодоступным, в том числе пероральным и парентеральным путями. Однако следует иметь в виду, что пероральное введение является предпочтительным. Специалист в данной области техники понимает, что размер частиц может влиять на растворение фармацевтического агента in vivo, что, в свою очередь, может влиять на абсорбцию агента. В настоящей заявке "размер частиц" относится к диаметру частицы фармацевтического средства, определенному общепринятыми методами, такими как рассеяние лазерного излучения, лазерная дифракция, рассеяние Ми,седиментационное фракционирование в потоке при наличии поля, фотонно-корреляционная спектроскопия и т.п. Если фармацевтические средства имеют плохую растворимость, малые или уменьшенные размеры частиц могут способствовать растворению и, таким образом, увеличивать абсорбцию средства;Amidon et al., Pharm. Research, 12; 413-420 (1995). Способы снижения или регулирования размера частиц(микронизация) являются общепринятыми и включают измельчение в шаровой мельнице, измельчение в штифтовой мельнице, измельчение на струйной мельнице, мокрое измельчение и т.п. Другой способ регулирования размера частиц включает получение фармацевтического средства в виде наносуспензии. Конкретный вариант реализации настоящего изобретения включает соединение (I) или фармацевтически приемлемую соль соединения (I) либо фармацевтическую композицию, содержащую соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль, при этом размер частиц d90 вышеуказанного соединения или соли (т.е. размер, меньше или равный которому имеют 90% частиц) составляет менее чем примерно 10 мкм. Специалисту в данной области техники понятно, что для терапевтического средства предпочтительно обладать определенными физическими характеристиками. В частности, средства, которые стабильны, представляют собой кристаллические твердые вещества, являются предпочтительными, поскольку они особенно поддаются общепринятым методам химического синтеза, очистки, хранения и приготовления или разработки лекарственных форм. В настоящей заявке "кристаллическая форма" или"форма кристалла" относится к кристаллическому препарату химических соединений. Конкретную форму кристалла можно охарактеризовать и, таким образом, отличить от других твердых форм этого же химического соединения, применяя общепринятые методы, в том числе рентгеновскую порошковую дифрактометрию (РПД), спектроскопические методы (например, инфракрасную спектроскопию (ИК) или спектроскопию ядерного магнитного резонанса (ЯМР и термические методы (например, дифференциальную сканирующую калориметрию (ДСК), термический гравиметрический анализ(ТГА) или дифференциальный термический анализ (ДТА. Несмотря на то что РПД является особенно ценным средством для исследования кристаллических форм химических соединений, понятно, что фактические интенсивности пиков на рентгенограмме могут варьировать от анализа к анализу одной и той же кристаллической формы в зависимости от анализируемой пробы и применяемых прибора, растворителя или методик. Кроме того, также будет понятно, что, хотя точные положения пиков, полученные при анализе данной формы кристалла, измеренные в 2, могут варьировать от анализа к анализу (например,0,1), относительный профиль положений пиков для разных спектров будет оставаться, по существу,одинаковым. В настоящем изобретении предложено соединение (I) в кристаллической форме. Более конкретно, в настоящем изобретении предложено свободное основание соединения (I) в кристаллической форме,имеющее характеристические пики при значениях 2 примерно 10,5, 13,0, 15,5 и 19,7 (форма I свободного основания в примерах, приведенных в настоящей заявке). Кроме того, в настоящем изобретении предложено свободное основание соединения (I) в кристаллической форме, имеющее характеристические пики при значениях 2 примерно 11,3, 12,1, 18,8 и 21,0 (форма II свободного основания в примерах, приведенных в настоящей заявке). Применяемый в настоящей заявке термин "пациент" относится к человеку или млекопитающему,которое не является человеком, такому как собака, кошка, корова, обезьяна, лошадь или овца. Более конкретно, термин "пациент" относится к человеку. Применяемый в настоящей заявке термин "лечение" (или "лечить") включает предупреждение, предотвращение, сдерживание, замедление, прекращение или реверсирование развития или серьезности существующего симптома или расстройства. Термин "предотвращение" (или "предотвращать"), применяемый в настоящей заявке, относится к предупреждению, сдерживанию или подавлению заболеваемости или встречаемости симптома или расстройства. Как понятно специалисту в данной области техники, фи-3 019179 зиологические расстройства можно представить как "хроническое" состояние или как "острый" приступ. Таким образом, лечение расстройств подразумевает как острые нарушения, так и хронические состояния. При остром нарушении соединение вводят при наступлении симптомов и прекращают, когда симптомы исчезают, тогда как хроническое состояние лечат в течение всей болезни. Применяемый в настоящей заявке термин "эффективное количество" относится к количеству или дозе соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которое после введения пациенту однократной или многократной дозы обеспечивает пациенту необходимый эффект при диагностике или лечении. Эффективное количество может легко определить лечащий врач-диагност, как специалист в данной области техники, принимая во внимание ряд факторов, таких как вид млекопитающего; его размер, возраст и общее состояние здоровья; конкретное рассматриваемое заболевание; степень или серьезность заболевания; реакция данного пациента; конкретное введенное соединение; способ введения; характеристики биодоступности введенного препарата; выбранный режим дозирования; и применение каких-либо сопутствующих лекарственных средств. Используемое в сочетании со способами и применениями согласно настоящему изобретению предлагаемое соединение и композиции согласно настоящему изобретению можно ввести сами по себе или в комбинации с общепринятыми терапевтическими средствами, применяемыми для лечения конкретного расстройства или состояния. Например, соединение (I) или композицию, содержащую соединение (I),можно ввести в комбинации с традиционными препаратами для лечения гипертензии, диабетической нефропатии или хронического заболевания почек, такими как ингибиторы ангиотензинконвертирующего фермента (АСЕ) или блокаторы ангиотензиновых рецепторов (препараты ARB). Когда соединение или композицию согласно настоящему изобретению применяют как часть комбинации, соединение (I) или композицию, содержащую соединение (I), можно ввести отдельно или как часть состава, содержащего терапевтическое средство, с которым его предполагают комбинировать. Определение биологической активности. Применяемое в настоящей заявке обозначение "Kd" относится к равновесной константе диссоциации для комплекса лиганд-рецептор; "Ki" относится к равновесной константе диссоциации для комплекса лекарственный препарат-рецептор и является показателем концентрации лекарственного препарата,который свяжется с половиной сайтов связывания при равновесии; "Kb" относится к равновесной константе диссоциации для комплекса антагонист-рецептор; "IC50" относится к концентрации агента, которая вызывает ингибирующую реакцию, составляющую 50% от максимально возможной для данного агента или, альтернативным образом, к концентрации агента, которая вызывает 50% замещение связывания лигандов с рецептором; "ЕС 50" относится к концентрации агента, которая вызывает реакцию, составляющую 50% от максимально возможной для данного агента; и "ED50" относится к дозе введенного терапевтического средства, которая вызывает реакцию, составляющую 50% от максимально возможной для данного агента. А. Анализ связывания ядерных рецепторов стероидного гормона. Клеточные лизаты из клеток человеческой эмбриональной почки HEK293, избыточно экспрессирующих человеческий МР (минералокортикоидный рецептор), ГР (глюкокортикоидный рецептор), АР(андрогенный рецептор) или ПР (прогестеронный рецептор) применяли для анализов конкурентного связывания рецептор-лиганд для определения значений Ki. В общих чертах, анализы конкурентного связывания стероидного рецептора проводили в буфере,содержащем 20 мМ буфер HEPES (pH 7,6), 0,2 мМ ЭДТА, 75 мМ NaCl, 1,5 мМ MgCl2, 20% глицерина, 20 мМ молибдата натрия, 0,2 мМ DTT (дитиотреитол), 20 мкг/мл апротинина и 20 мкг/мл леупептина (буфер для анализа). Как правило, анализы связывания стероидного рецептора включают меченные радиоактивным изотопом лиганды, такие как 0,25 нМ [3 Н]-альдостерон для связывания МР, 0,7 нМ [3 Н]дексаметазон для связывания ГР, 0,36 нМ [3 Н]-метилтриенолон для связывания АР и 0,29 нМ [3 Н]метилтриенолон для связывания ПР, и, либо 20 мкг лизата 293-МР, 20 мкг лизата 293-ГР, 22 мкг лизата 293-АР, либо 40 мкг лизата 293-ПР на 1 лунку. Как правило, анализы проводили в 96-луночном формате. Конкурирующие тестируемые соединения добавляли при различных концентрациях, варьирующих от примерно 0,01 нМ до 10 мкМ. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 500 нМ альдостерона для связывания МР, 500 нМ дексаметазона для связывания ГР или 500 нМ метилтриенолона для связывания АР и ПР. Реакции связывания (140 мкл) проводили при инкубировании в течение ночи при 4 С, затем к каждой реакции добавляли 70 мкл холодного буфера с нагруженной декстраном угольной пылью (содержащего на 50 мл буфера для анализа, 0,75 г угольной пыли и 0,25 г декстрана). Содержимое планшетов перемешивали в течение 8 мин на орбитальном встряхивателе при 4 С. Затем планшеты центрифугировали со скоростью 3000 об/мин при 4 С в течение 10 мин. Затем аликвоту в 120 мкл связывающей реакционной смеси переносили в другой 96-луночный планшет и в каждую лунку добавляли 175 мкл сцинтилляционной жидкости Wallac Optiphase Hisafe 3. Планшеты герметизировали и энергично встряхивали на орбитальном встряхивателе. После инкубации в течение 2 ч планшеты считывали на счетчике Wallac Microbeta. Полученные данные применяли для расчета предполагаемой IC50 и процента ингибирования при 10 мкМ. Kd [3 Н]-альдостерона для связывания МР, [3 Н]-дексаметазона для связывания ГР, [3 Н]-4 019179 метилтриенолона для связывания АР или [3 Н]-метилтриенолона для связывания ПР определяли путем связывания до насыщения. Значения IC50 для рассматриваемых соединений конвертировали в Ki, применяя уравнение Ченга-Прусоффа. Согласно протоколу, по существу описанному выше, Ki соединения (I) при анализе связывания МР составляет примерно 0,40 нМ, что, таким образом, демонстрирует, что соединение (I) представляет собой потенциальный лиганд человеческого МР. Кроме того, Ki соединения (I) в анализах связывания АР, ГР и ПР составляет примерно 1170, 669 и 478 нМ соответственно, что, таким образом, демонстрирует, что соединение (I) представляет собой селективный лиганд для МР. В. Функциональные анализы модуляции ядерного рецептора стероидного гормона. Альдостерон проявляет свои физиологические эффекты за счет взаимодействия с минералокортикоидным рецептором. После связывания альдостерона с МР в цитоплазме комплекс лиганд-рецептор перемещается в ядро клетки, где он связывается с элементами гормонального ответа на ДНК для инициации экспрессии целевых генов. Чтобы продемонстрировать способность соединений согласно настоящему изобретению модулировать активность рецепторов стероидного гормона (т.е. либо действовать в качестве агониста, частичного агониста, частичного антагониста, либо антагониста), проводили биологические анализы, которые выявили функциональную модуляцию экспрессии целевых генов в клетках, временно трансфицированных белком ядерного рецептора, и структуру элемент гормонального ответа/ген-репортер. Растворители, реагенты и лиганды, используемые в функциональном анализе, легкодоступны в коммерческих источниках или могут быть получены средним специалистом в данной области техники. 1. Групповой скрининг ядерных гормональных рецепторов. Клетки почки эмбриона человека HEK293 трансфицировали рецептором стероидного гормона и плазмидами гена-репортера с применением подходящего реагента для трансфекции, такого как Fugene. Вкратце, плазмиду репортера, содержащую две копии промотора пробазина ARE и TK (тимидинкиназы) на участке выше кДНК люциферазы-репортера, трансфицировали в клетки HEK293 с плазмидой, конститутивно экспрессирующей человеческий андрогенный рецептор (АР) с применением промотора вирусаCMV (цитомегаловирус). Плазмиду репортера, содержащую две копии промотора GRE и TK на участке выше кДНК люциферазы-репортера, трансфицировали с плазмидой, конститутивно экспрессирующей или рецептор человеческого глюкокортикоида (ГР), рецептор человеческого минералокортикоида (МР) или рецептор человеческого прогестерона (ПР), применяя промотор вируса CMV. Клетки трансфицировали в колбах Т 150 см в среде DMEM (модифицированной по способу Дульбекко среде Игла) с 5% очищенной на активированном угле фетальной бычьей сывороткой (ФБС). После инкубации в течение всей ночи трансфицированные клетки обрабатывали трипсином, помещали в 96-луночные чашки в средуDMEM, содержащую 5% очищенную на активированном угле ФБС, инкубировали в течение 4 ч и затем подвергали воздействию различных концентраций тестируемых соединений, варьирующих от примерно 0,01 нМ до 10 мкМ. Для анализов в антагонистическом режиме к среде добавляли низкие концентрации агониста для каждого соответствующего рецептора (0,08 нМ альдостерона для МР, 0,25 нМ дексаметазона для ГР, 0,66 нМ метилтриенолона для АР и 0,08 нМ промегестона для ПР). После 24-часовой инкубации с тестируемыми соединениями клетки лизировали и определяли активность люциферазы, применяя стандартные методики. Полученные данные наносили на логистическую кривую с четырехпараметрической подгонкой для определения значений ЕС 50. Эффективность в процентах (соединения с максимальными характеристиками с насыщением) или максимальное стимулирование в процентах (соединения с максимальными характеристиками, без насыщения) определяли относительно максимального стимулирования, которое достигалось при применении следующих эталонных агонистов: 30 нМ альдостерона для анализа МР, 100 нМ метилтриенолона для анализа АР, 30 нМ промегестона для анализа ПР и 100 нМ дексаметазона для анализа ГР. Значения IC50 определяли аналогичным образом с применением анализа в антагонистическом режиме. В антагонистическом режиме ингибирование в процентах определяли путем сравнения активности реакции, вызываемой этой же низкой концентрацией агониста в отсутствие тестируемого соединения. Согласно протоколу, по существу описанному выше, значения IC50 соединения (I) составляют примерно 21 нМ, 924 нМ, 10000 нМ и 10000 нМ при анализах МР, ПР, ГР и АР (антагонистический режим) соответственно и ЕС 50 10000 нМ для каждого из МР, ПР, ГР и АР в агонистическом режиме. Таким образом, соединение (I) представляет собой селективный функциональный антагонист человеческого МР. 2. Анализ конкурентного антагонизма МР человека. Клетки почки эмбриона человека HEK293 трансфицировали МР человека, применяя те же реагенты для трансфекции, плазмиды, промоторы, репортерные конструкции, буферы и методики, которые описаны выше для группового скрининга ядерных гормональных рецепторов. Трансфицированные клетки обрабатывали трипсином, помещали в 96-луночные чашки со средой DMEM, содержащей 5% очищенную на активированном угле ФБС, инкубировали в течение 4 ч и затем подвергали воздействию различных концентраций (10 разведений) альдостерона (варьирующих от примерно 0,001 нМ до 0,03 мкМ. Способ-5 019179 ность альдостерона действовать в качестве агониста чМР определяли в отсутствие и в присутствии фиксированных концентраций тестируемого соединения и контролировали путем измерения активности люциферазы, применяя стандартные методики. Затем можно определить Kb тестируемого соединения с помощью анализа Шильда путем построения кривой log (отношение доз - 1) относительно log концентрации антагониста, применяя уравнение: Log(DR-1)=Log[Антагонист]-LogKb, где отношение доз (DR) представляет собой отношение ЕС 50 альдостерона в присутствии тестируемого соединения к ЕС 50 альдостерона в отсутствие тестируемого соединения). Согласно протоколу, по существу описанному выше, Kb соединения (I) при анализе конкурентного антагониста МР составляет примерно 5,1 нМ, таким образом демонстрируя, что соединение (I) представляет собой потенциальный антагонист МР человека. С. Модель почечного заболевания, обусловленного альдостероном, in vivo. Самцов крыс Sprague Dawley (240-280 г) с одной удаленной почкой содержали по отдельности при свободном доступе к водопроводной воде и корму для грызунов 5001 в течение одной недели. После адаптации отбирали исходные пробы 24 ч мочи и проводили анализ на общий белок и креатинин в моче. Животных распределяли в группы для наблюдения по массе тела и исходному уровню белка в моче. Отбирали исходную сыворотку с помощью хвостовой клипсы и анализировали на азот мочевины крови(АМК), креатинин и электролиты. После отбора исходных проб все крысы, за исключением контрольной группы, получали корм, содержащий 6% соли, и питьевую воду, содержащую 0,3% KCl, на протяжении всего исследования. Контрольные животные получали корм 5001 и водопроводную воду на протяжении всего исследования и не получали альдостерон. Животным, не входящих в контрольную группу (например, группу, принимавшую тестируемые соединения, и группу, принимавшую только носитель), под анестезией изофлураном имплантировали мини-насосы Alza для подкожной доставки 2,5 мкл/ч 28 днейd-альдостерона в 0,01% ДМСО при 0,75 мкг/ч. Затем тестируемое соединение в носителе, содержащем 1% карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ)/0,25% полисорбат 80, или в один носитель перорально вводили один раз в день через желудочный зонд (10 мл/кг), начиная со дня после имплантации альдостерона. Повторные пробы мочи отбирали через 2 и 4 недели после введения соединения или одного носителя и анализировали на общий белок и креатинин в моче. В конце исследования получали фармакокинетические пробы в 8 временных точках (0,5, 1, 2, 3, 6, 8, 12 и 24 ч). Кроме того, сердца и почки можно удалить и зафиксировать в 10% формалине в буфере для окраски с применением гематоксилина и эозина (НЕ) и трихрома по Массону для обнаружения структурного повреждения в сердечных и почечных тканях. Также в конце исследования можно отобрать сыворотку путем пункции сердца для дальнейшего анализа сыворотки на содержание АМК, креатинина и электролитов. Согласно протоколу, по существу описанному выше, соединение (I) при введении в дозе 10 мг/кг/день 28 дней, уменьшало экскрецию белка с мочой по сравнению с животными, получавшими носитель, примерно на 60%, демонстрируя, таким образом, что соединение (I) имеет потенциальную ренопротективную активность in vivo. Чтобы показать, что соединение обладает гипотензивным действием, можно использовать следующую модель.D. Модель гипертензии, обусловленной альдостероном in vivo. Самцов крыс Sprague Dawley (240-280 г) с одной удаленной почкой содержали по отдельности при свободном доступе (ad lib) к водопроводной воде и корму для грызунов 5001 в течение одной недели. После адаптации животным имплантировали насосы Alzet для подкожной доставки 0,25 мкг/ч альдостерона при дозе 2,5 мкл/ч на протяжении до 28 дней и давали животным корм, содержащий 6% NaCl и питьевую воду, содержащую 0,3% KCl, на протяжении всего исследования. Также были имплантированы радиотелеметрические устройства для мониторинга артериального давления крови. Например, сигналы от каждого животного поступали через каждые 10 мин на протяжении исследования. Среднее ( СКО) из всех значений, полученных в течение 24 ч, означало среднее ежедневное артериальное давление для каждого животного. На следующий день после имплантации насосов один раз в день перорально через желудочный зонд (10 мл/кг) вводили тестируемое соединение в носителе, содержащем 1% карбоксиметилцеллюлозу натрия со средней вязкостью /0,25% полисорбат 80/0,05% Antifoam 1510, или один носитель. Согласно протоколу, по существу описанному выше, соединение (I) при пероральном введении один раз в день (1-30 мг/кг/день)14 дней, в зависимости от дозы, уменьшало гипертензивное действие альдостерона в присутствии соли по сравнению с носителем, что демонстрирует, таким образом, что соединение (I) обладает гипотензивным действием. Чтобы показать, что это соединение уменьшает заболеваемость гиперкалиемией или вероятность ее развития, можно использовать следующую модель. Е. Анализ электролитной модуляции in vivo. Самцов крыс Sprague Dawley (240-280 г) адреналэктомировали, а затем держали на корме для грызунов 5001 и 1% питьевом растворе NaCl в течение 6 дней после операции. Затем всю ночь животным не давали еду и заменяли 1% солевую питьевую воду водопроводной водой в свободном доступе. Утром в день исследования голодных животных распределяли в группы на основе массы тела натощак. Контрольным животным (например, тем, которые не получали альдостерон или тестируемое соединение) перорально через желудочный зонд вводили 10 мл/кг носителя для тестируемого соединения, содержащего 0,5% СМС/0,25% полисорбат 80/2,7% NaCl, и путем подкожной инъекции - 1 мл/кг носителя для альдостерона (0,01% ДМСО/вода). Животным, получавшим носитель, давали тот же носитель для тестируемого соединения, перорально через желудочный зонд, и альдостерон 3 мкг/кг, подкожно. Тестируемые вещества суспендировали в носителе, содержащем карбоксиметилцеллюлозу/NaCl. Лечебным группам, получавшим тестируемое соединение, вводили тестируемое вещество, суспендированное в носителе, содержащем карбоксиметилцеллюлозу/NaCl, и альдостерон 3 мкг/кг подкожно. Сразу же после дозирования животных помещали в устройства для изучения обмена веществ при свободном доступе к водопроводной воде. Пробы мочи собирали через 5 ч после введения дозы и анализировали экскрецию электролитов. Данные представляли как отношение экскреции log Na/K или % отношение Na/K по сравнению с адреналэктомированными животными, получавшими носитель. Соединение I можно тестировать при различных дозах для определения, в какой степени это соединение вызывает увеличение отношенияNa/K в моче (показатель увеличенной концентрации калия в сыворотке). Согласно протоколу, по существу описанному выше, соединение (I) при пероральном введении 30 мг/кг увеличивало отношение экскреции Na/K в моче только примерно на 30% по сравнению с животными, принимавшими носитель, что показывает, что соединение (I) может уменьшать заболеваемость гиперкалиемией или вероятность ее развития. Без дальнейшего уточнения, полагают, что специалист в данной области техники может применить предшествующее описание для практической реализации настоящего изобретения в его максимальном объеме. Следующие способы синтеза и пример предложены для более подробного иллюстрирования изобретения и представляют типичный способ синтеза соединения (I). Реагенты и исходные вещества являются легкодоступными или могут быть легко синтезированы обычным специалистом в данной области техники. Специалисты в данной области техники сразу же распознают подходящие варианты из методик, описанных в примерах. Наименования соединений, описанных в настоящем изобретении, в целом представлены в ChemDraw Ultra version 10.0. В настоящей заявке следующие термины имеют указанные значения: "ДМСО" обозначает диметилсульфоксид; "ДМАА" обозначает N,N-диметилацетамид; "tBOC" или "boc" обозначает третбутоксикарбонил и "ТСХ" обозначает тонкослойную хроматографию. Синтез 1. 1-Бром-4-фтор-2-(2-йодбензилокси)бензол Смесь 2-йодбензилбромида (90 г, 0,29 моль), 2-бром-5-фторфенола (57,9 г, 0,29 моль) и карбоната калия (63 г, 0,46 моль) в N,N-диметилформамиде (750 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Добавляли воду (1 л), перемешивали образовавшуюся смесь в течение 1 ч, отфильтровывали твердое вещество, промывали водой и высушивали в вакуумной печи (20 мм рт. ст./60 С) с получением указанного в заголовке соединения (121 г, 100%). 1 Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)5,11 (с, 2 Н), 6,81N-метилпирролидинона (900 мл) при 55-60 С добавляли по каплям раствор этилакрилата (34,3 мл, 0,32 моль) в N-метилпирролидиноне (200 мл). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали водой (2 л) и метил-трет-бутиловым эфиром (2 л). Реакционную смесь пропускали через диатомовую землю, добавляли этилацетат (1 л), фазы разделяли и промывали водой (2 л). Органическую часть высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Суспендировали образовавшееся твердое вещество в гексане (1 л), замораживали в течение 2 ч, фильтровали и промывали холодным гексаном (500 мл). Высушивали в вакуумной печи (50 С/20 мм рт. ст.) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (104,4 г, 95%). ЖХ-МС m/z 381,0[М+Н]+. Альтернативная методика. В чистый, сухой 100-галлоновый (379 л) реактор с возможностью перемешивания в атмосфере азота добавляли свежий N-метилпирролидинон (72 л), ацетат натрия (2721 г, 33,17 моль), 1-бром-4-фтор-2(2-йодбензилокси)бензол (9000 г, 22,11 моль) и бромид тетрабутиламмония (7128 г, 22,11 моль). Начинали перемешивание и дегазировали реакционную смесь под полным вакуумом в течение 30 мин, продувая азотом. Позволяли давлению в реакторе вернуться к давлению окружающей среды в атмосфере азота и повторяли процедуру дегазирования. В редакционную смесь добавляли ацетат палладия(II) (180 г, 2 масс.%) и нагревали до 60 С. При 60 С в реакционную смесь через капельную воронку медленно добавляли этилакрилат (2258 г, 22,55 моль) в виде раствора в N-метилпирролидиноне (18 л). После завершения добавления реакционную смесь нагревали до 70 С. Продолжали перемешивание на протяжении минимум 2 ч при 70 С. Доводили внутреннюю температуру реакционной смеси до 5-10 С. В отдельный, чистый реактор подходящего размера загружали воду (225 л), начинали энергичное перемешивание и охлаждали до внутренней температуры 5 С. Переносили реакционную смесь в воду, которую энергично перемешивали, на протяжении минимум 1 ч. Образовавшуюся суспензию перемешивали в течение от 30 мин до 1 ч при температуре окружающей среды. Фильтровали через полипропиленовую фильтрующую прокладку и собирали светло-пурпурное твердое вещество. Осадок с фильтра промывали водой (25 л) и высушивали на фильтре, используя резиновую прокладку. Повторно загружали твердое вещество в реактор с водой (45 л) и перемешивали суспензию в течение от 30 мин до 1 ч. Повторно фильтровали твердое вещество на полипропиленовой фильтрующей прокладке, промывая осадок с фильтра водой (25 л). Высушивали на фильтре, используя резиновую прокладку. Переносили светло-пурпурное вещество на сушильные лотки и высушивали воздухом в вытяжном шкафу на протяжении как минимум 24 ч. Твердые вещества высушивали в сушильном шкафу под вакуумом при 50 С с получением указанного в заголовке соединения (8,4 кг, 100%). Синтез 3. Этиловый эфир (Е)-(3-фтор-6H-дибензо[b,е]оксепин-11-илиден)уксусной кислоты Смесь этилового эфира 3-[2-(2-бром-5-фторфеноксиметил)фенил]акриловой кислоты (94 г, 0,25 моль), ацетата натрия (30 г, 0,37 моль), бромида тетра-н-бутиламмония (81 г, 0,25 моль) и ацетата палладия(II) (1,7 г, 7 ммоль, 3 мол.%) в N-метилпирролидиноне (850 мл) нагревали при 100-110 С в течение 6 ч. Охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (1 л), фильтровали через диатомовую землю и промывали этилацетатом (2 л). Переносили фильтрат в делительную воронку, добавляли воду (500 мл) и разделяли слои. Промывали органическую фазу водой (21,5 л), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали через силикагелевую прокладку, промывали этилацетатом (1,5 л) и концентрировали до сухого состояния. К остатку твердого вещества добавляли гексан (1 л), замораживали в течение 2 ч,фильтровали, промывали гексаном (500 мл) и высушивали при 50 С/20 мм рт. ст. с получением указанного в заголовке соединения (64,3 г, 87%). ЖХ-МС m/z 299,0 [М+Н]+. Альтернативная методика. В чистый, сухой 100-галлоновый реактор с возможностью перемешивания в атмосфере азота добавляли N-метилпирролидинон (83,4 л), ацетат натрия (2,706 кг, 32,98 моль), этиловый эфир 3-[2-(2 бром-5-фторфеноксиметил)фенил]акриловой кислоты (9,256 кг, 21,99 моль) и бромид тетрабутиламмония (7,088 кг, 21,99). Начинали перемешивание и дегазировали реакционную смесь под полным вакуумом в течение 30 мин, продувая азотом. Позволяли давлению в реакторе вернуться к давлению окружающей среды в атмосфере азота и повторяли процедуру дегазирования. В реакционную смесь добавляли ацетат палладия(II) (167 г, 2 мас.%). Нагревали реакцию при температуре в диапазоне между 100 С и 125 С, перемешивая на протяжении минимум 3-5 ч. Добавляли этилацетат (100 л) и перемешивали 30 мин. Добавляли воду (100 л) и перемешивали 30 мин. Прекращали перемешивание и оставляли фазам разделяться на протяжении минимум 1 ч. Собирали органическую фазу и экстрагировали водную фазу этилацетатом (50 л, затем 25 л). Органические порции объединяли и промывали водой (40 л), 20% водным раствором хлорида натрия (220 л), перемешивая каждую порцию на протяжении минимум 30 мин и оставляя по меньшей мере на 30 мин для разделения фаз. Органический раствор высушивали сульфатом магния (8,0 кг) и добавляли активированный уголь (2,0 кг) и силикагель 60 (2,0 кг), перемешивая на протяжении минимум 1 ч. Фильтровали для удаления твердых веществ. Фильтрат концентрировали до сухого состояния под вакуумом при 35 С. К твердому остатку добавляли метанол (20 л) и нагревали смесь с получением прозрачного раствора при 50-60 С. Добавляли гептан (40 л) и охлаждали до температуры в диапазоне 20-25 С. Продолжали дальнейшее охлаждение реакционной смеси до -10 С на протяжении минимум 3 ч. Перемешивали при -10 С на протяжении минимум 12 ч. Фильтровали, чтобы собрать образовавшийся твердый продукт, промывая смесью гептан:метанол, (75:25) (220 л). Твердое вещество высушивали под вакуумом при 40 С до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (3,7 кг, 64%). Альтернативная методика 2. Нагревали 1-бром-4-фтор-2-(2-йодбензилокси)бензол (50 г, 0,123 моль), ацетат натрия (30,2 г, 0,369 моль), бромид тетрабутиламмония (39,6 г, 0,123 моль) и ацетат палладия (1 г) в N-метилпирролидине(250 мл) до 60 С. Добавляли по каплям этилакрилат (12,91 г, 0,129 моль) в N-метилпирролидине (50 мл) в течение 20 мин. После завершения добавления реакционную смесь нагревали до 145 С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через диатомовую землю и промывали твердое вещество метил-трет-бутиловым эфиром (2150 мл). Фильтрат разбавляли метилтрет-бутиловым эфиром (0,5 л) и промывали водой (0,5 л). Отделяли органическую фазу и экстрагировали водную фазу метил-трет-бутиловым эфиром (2300 мл). Промывали объединенные органические фазы водой (2200 мл). Органическую порцию высушивали над сульфатом магния, обрабатывали древесным углем, фильтровали, промывали твердое вещество метил-трет-бутиловым эфиром (100 мл) и концентрировали. Суспендировали остаток в изопропаноле (20 мл) в колбе Бучи при 55 С в отсутствие вакуума. При перемешивании добавляли гептан (100 мл). Помещали темную суспензию в холодную комнату на всю ночь. Твердое вещество фильтровали, промывали холодной смесью гептан/изопропанол (9:1,2100 мл), затем гептаном (50 мл) и высушивали до постоянной массы в вакуумной печи при 35 С с получением указанного в заголовке соединения в виде желто-коричневого порошка (22,25 г, 61%). Синтез 4. (Е)-11-Бромметилен-3-фтор-6,11-дигидродибензо[b,e]оксепин К суспензии этилового эфира (3-фтор-6H-дибензо[b,e]оксепин-11-илиден)уксусной кислоты (69,5 г,0,23 моль) в изопропаноле (725 мл) добавляли раствор гидроксида лития (12,0 г, 0,53 моль) в воде (125 мл) и нагревали до 70 С в течение 4 ч. Оставляли смесь охлаждаться до 40 С и затем обрабатывали ледяной уксусной кислотой (0,44 моль, 25 мл). После перемешивания в течение 15 мин добавляли Nбромсукцинимид (0,25 моль, 44 г). Происходило выделение пузырьков, температура поднималась до 45 С и через несколько минут образовалось твердое вещество. Смесь перемешивали при 40-45 С в течение 1 ч и охлаждали до комнатной температуры. Добавляли бисульфит натрия (4,5 г) в воде (150 мл),насыщенный водный бикарбонат натрия (150 мл) и воду (450 мл). Образовавшуюся суспензию фильтровали и промывали холодной смесью 1:1 изопропанол/вода (300 мл). Высушивали твердое вещество при 60 С/20 мм рт. ст. всю ночь с получением указанного в заголовке соединения (65,8 г, 93%). 1 Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)4,9-5,4 (ушир.д, 2 Н), 6,63 (дд, 1 Н), 6,77 (дт, 1 Н), 7,13 (с, 1 Н), 7,32-7,46 (м, 4 Н), 7,52 (дд,1 Н). Альтернативная методика. В чистый, сухой 100-галлоновый реактор с возможностью перемешивания в атмосфере азота загружали изопропанол (125 л), этиловый эфир (Е)-(3-фтор-6H-дибензо[b,e]оксепин-11-илиден)уксусной кислоты (13,857 кг, 46,42 моль) и раствор гидроксида лития (3,896 кг, 92,84 моль) в воде (54 л). Реакционную смесь нагревали до 80 С и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до 40 С и добавляли уксусную кислоту (5,575 кг, 92,84 моль) в течение 20 мин при температуре в диапазоне между 40 и 45 С. В течение 30 мин порциями добавляли N-бромсукцинимид (48,74 моль, 8,676 кг) при 45 С. Реакцию охлаждали до комнатной температуры и перемешивали на протяжении минимум 12 ч. Добавляли водный раствор бисульфита натрия (37,7 л) и перемешивали 15 мин. Добавляли водный раствор бикарбоната натрия (37,7 л) и перемешивали 15 мин. Добавляли воду (129 л) и перемешивали 30 мин. Фильтровали, чтобы собирать образовавшееся твердое вещество, промывая смесью изопропанол:вода(1:1, 220 л). Твердое вещество высушивали под вакуумом при 32 С до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (13,8 кг, 97%). Синтез 5. При перемешивании к смеси (Е)-11-(бромметилен)-3-фтор-6,11-дигидродибензо[b,e]оксепина (15 г,49 ммоль) и бис-(пинаколато)дибора (16 г, 64 ммоль) в 1,4-диоксане (250 мл) добавляли ацетат калия (15 г, 150 ммоль). Смесь продували азотом, добавляли аддукт дихлор[1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен] палладия(II) и дихлорметана (1,80 г, 2,46 ммоль) и нагревали при 65 С всю ночь. Охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через диатомовую землю, промывали этилацетатом и концентрировали фильтрат в вакууме. Добавляли метанол (200 мл) и вращали смесь в течение 1 ч на роторном испарителе при отсутствии вакуума, что приводило к образованию коричневого твердого вещества. Собирали темнокоричневые кристаллы посредством фильтрации и высушивали под вакуумом всю ночь с получением указанного в заголовке соединения (7,28 г, 42%). Фильтрат концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии, элюируя 0-16% этилацетатом в гексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого желтого вещества (3,46 г, 20%). Общий выход для реакции составил 10,7 г(дд, J=10,3, 2,6 Гц, 1 Н), 5,98 (с, 1 Н), 5,20 (ушир.с, 1 Н), 1,15 (с, 12 Н). Альтернативная методика. Трехгорловую круглодонную колбу вместимостью 50 л оборудовали механической мешалкой, термопарой, входом для подачи азота и дефлегматором. Помещали в колбонагреватель. Загружали колбу диоксаном (13,5 л), (Е)-11-бромметилен-3-фтор-6,11-дигидродибензо[b,e]оксепином (1,600 кг, 5,24 моль),бис-(пинаколато)дибором (1,731 кг, 6,82 моль), ацетатом калия (823 г, 8,38 моль), водой (20 мл), трициклогексилфосфином (29,5 г, 0,105 моль) и трис-(дибензилиденацетон)дипалладием (48 г, 0,052 моль). Реакционную смесь нагревали до 80-85 С. Поддерживали температуру реакции на уровне 85-90 С на протяжении минимум 6 ч. Охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь фильтровали через прокладку из диатомовой земли (2-3 дюйма). Фильтрат промывали этилацетатом (23,5 л). Фильтрат концентрировали на роторном испарителе при 50-55 С. Испаряли совместно с гептаном (23,5 л) с образованием суспензии. К взвеси добавляли метанол (2,5 л) при 50 С. Перемешивали в течение 10-15 мин. Охлаждали взвесь до -10-0 С в течение 20-30 мин. Фильтровали твердое вещество. Промывали собранное твердое вещество холодным (-10 С) метанолом (21,5 л), а затем гептаном (21,5 л). Твердое вещество высушивали под вакуумом при температуре окружающей среды с получением указанного в заголовке соединения в виде грязно-белого твердого вещества (1,408 кг, 76%). Синтез 6. Гидрохлорид (2R,4R)-4-гидроксипирролидин-2-карбоновой кислоты Следуя методике, по существу описанной в Tetrahedron: Asymmetry, 14, (2003) 3141-3152, к смеси уксусного ангидрида (1,437 кг, 5,65 экв.) и уксусной кислоты (4,225 л) при 50 С добавляли порциями транс-4-гидрокси-L-пролин (331 г, 2,49 моль) в течение 30 мин. Реакционную смесь нагревали в течение 5,5 ч при 90 С, затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Реакцию перемешивали при комнатной температуре всю ночь и затем концентрировали. Остаток растворяли в 2 н. соляной кислоте(4,57 л) и кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через диатомовую землю и концентрировали под вакуумом при 70 С до приблизительно 700 мл. Оставляли вещество охлаждаться до комнатной температуры и оставляли оседать на всю ночь. Разбавляли образовавшуюся взвесь эфиром (1 л), кристаллы фильтровали, промывали эфиром и высушивали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (340 г). Твердое вещество растворяли в горячем этаноле (2,5 л), охлаждали, медленно перемешивали при 35 С и медленно порциями добавляли эфир (2,5 л) в течение 1 ч. Перемешивали в течение 2 ч, образовавшееся твердое белое вещество фильтровали и высушивали всю ночь в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения (270,6 г, 65%). []D20+12,0 (с=1,0 в метаноле). 1 Н ЯМР (400 МГц, D2O),2,34-2,39 (м,1 Н), 2,45-2,53 (м, 1 Н), 3,38 (дд, 1 Н), 3,45 (д, 1 Н), 4,50 (дд, 1 Н), 4,58 (ушир.с, 1 Н). Синтез 7. 2-Метиловый эфир 1-трет-бутилового эфира (2R,4R)-4-гидроксипирролидин-1,2 дикарбоновой кислоты Тионилхлорид (233 мл, 3,10 моль) добавляли по каплям к раствору гидрохлорида (2R,4R)-4 гидроксипирролидин-2-карбоновой кислоты (355 г, 2,12 моль) в сухом метаноле (3,5 л) при 0 С в атмосфере азота. После завершения добавления реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 6 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением соответствующего гидрохлорида метилового эфира в виде воскообразного твердого вещества. Суспендировали твердое вещество в сухом дихлорметане (3,5 л) при 0 С и осторожно добавляли триэтиламин (640 мл, 4,66 моль) в течение 30 мин и перемешивали в течение еще 30 мин. Последовательно добавляли N,N-диметиламинопиридин (39 г, 0,32 моль) и ди-трет-бутилдикарбонат (500 г, 2,25 моль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Раствор экстрагировали водой (4 л), насыщенным бикарбонатом натрия (4 л) и соляным раствором (4 л). Органическую фазу обрабатывали этилендиамином (8 мл), перемешивали в течение 15 мин и обратно экстрагировали 10% водной лимонной кислотой (4 л). Органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением желтого масла (484 г), которое затвердевало всю ночь. Растворяли в метил-трет-бутиловом эфире (1 л) и концентрировали до небольшого объема. Добавляли гексан (2 л) и оставляли смесь отстаиваться в течение 1 ч. Твердое белое вещество фильтровали и промывали гексаном. Твердое белое вещество высушивали (20 мм рт. ст./60 С) всю ночь с получением указанного в заголовке соединения (354 г, 68%). []D20+56,3 (с=1,0 в метаноле). 1 Н ЯМР К раствору 2-метилового эфира 1-трет-бутилового эфира (2R,4R)-4-гидроксипирролидин-1,2 дикарбоновой кислоты (320 г, 1,30 моль) и тетрабромида углерода (540 г, 1,94 моль) в дихлорметане (3,2 л) при 0-5 С (баня сухой лед/дихлорметан) добавляли порциями трифенилфосфин (1,95 моль, 514 г) в течение 30 мин и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Добавляли этанол (3,2 л) и перемешивали в течение еще 2 ч. Реакцию переносили в 18-л баллон и добавляли эфир (8 л) до тех пор,пока не произошло осаждение. Смесь перемешивали всю ночь. Твердое вещество отфильтровывали и концентрировали эфирный слой. Растворяли маслянистый остаток в дихлорметане и фильтровали через силикагелевый тампон, элюируя дихлорметаном до тех пор, пока продукт больше нельзя было обнаружить методом ТСХ. Дихлорметановый слой концентрировали и обрабатывали 5% этилацетатом в гексанах (4 л), что приводило к образованию твердого белого вещества. Смесь пропускали через силикагелевый тампон, элюируя 5% этилацетатом в гексане, и собирали только фракции, содержащие целевой продукт. Раствор концентрировали, растворяли в 5% этилацетате в гексанах (2 л) и очищали через 1 кг силикагелевую прокладку, элюируя 5% этилацетатом в гексанах, с получением указанного в заголовке соединения в виде желтоватого масла (372,4 г, 93%). []D20+53,6 (c=1,0 в метаноле). 1 Н ЯМР (400 МГц,ДМСО-d6)1,33 и 1,39 (двойн.с, 9 Н), 2,40 (м, 1 Н), 2,53 (м, 1 Н), 3,35 (м, 1 Н), 3,66 (с, 3H), 3,80 (м, 1 Н),4,35 (кв, 1 Н), 4,73 (м, 1 Н). Синтез 9. 2-Метиловый эфир 1-трет-бутилового эфира (2R,4R)-4-азидопирролидин-1,2 дикарбоновой кислоты Азид натрия (157 г, 2,39 моль) добавляли к 2-метиловому эфиру 1-трет-бутилового эфира (2R,4S)-4 бромпирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (370 г, 1,20 моль) в N,N-диметилформамиде (2,5 л) и нагревали при 70-75 С в течение 16 ч в атмосфере азота. Охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (5 л) и экстрагировали этилацетатом (3 л). Промывали соляным раствором (2 л). Соляную фазу экстрагировали этилацетатом (3 л), органические фазы объединяли, высушивали над сульфатом натрия,фильтровали и концентрировали с получением масла (324,5 г). Полученное вещество растворяли в эфире(2 л), промывали водой (22 л), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 261,2 г темно-желтого масла. Водную фазу обратно экстрагировали эфиром (22 л), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением дополнительных 7,3 г продукта. Общий выход 268,5 г (83%). []D20+39,5 (с=1,0 в метаноле). 1 Н ЯМР (400 МГц, CDCl3)1,401,41 (с, 9 Н), 2,09-2,13 (м, 1 Н), 2,40-2,44 (м, 1 Н), 3,37-3,45 (м, 1 Н), 3,61-3,65 (м, 1 Н), 3,67-3,69 (с, 3H), 4,094,15 (м, 1 Н), 4,25-4,38 (м, 1 Н). Синтез 10. трет-Бутиловый эфир (2R,4R)-4-азидо-2-гидроксиметилпирролидин-1-карбоновой кислоты Борогидрид лития (8,50 г, 351 ммоль) добавляли к раствору 2-метилового эфира 1-трет-бутилового эфира (2R,4R)-4-азидопирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (95 г, 351 ммоль) в эфире (1 л) при -30 С в атмосфере азота. Позволяли температуре подняться до 0 С в течение 1,5 ч и перемешивали в течение еще 2 ч. Охлаждали до -70 С и добавляли по каплям насыщенный водный бикарбонат натрия (1 л). Оставляли нагреваться до комнатной температуры, разделяли слои и водный слой экстрагировали эфиром(1 л). Эфирные слои объединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Образовавшееся вещество высушивали под глубоким вакуумом с получением желтого масла (82 г, 96%). карбоновой кислоты (225 г, 0,93 моль) и 10% палладия-на-углероде (22,5 г, предварительно смоченный толуолом) в метаноле (2,3 л) при давлении водорода 15 psi (104 кПа) при комнатной температуре в течение 16 ч. Катализатор отфильтровывали и фильтрат концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (198 г, 92%). 1 Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)1,38 (с, 9 Н), 1,58 (м, 1 Н),2,16 (м, 1 Н), 2,95 (м, 1 Н), 3,20-3,58 (м, 6 Н), 3,61 (м, 1 Н), 3,65 (ушир.с, 1 Н). Синтез 12. трет-Бутиловый эфир(198 г, 0,92 моль), 5-бромфторнитробензола (224 г, 0,98 моль), триэтиламина (273 мл, 1,96 моль) в этилацетате (2 л) кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч в атмосфере азота при энергичном перемешивании. Охлаждали до комнатной температуры и промывали соляным раствором. Соляную фазу обратно экстрагировали этилацетатом (1 л), органические фазы объединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Образовавшееся твердое вещество растворяли в теплом этилацетате (2 л), концентрировали до приблизительно 500 мл и выдерживали до начала формирования кристаллов. Раствор медленно обрабатывали гексаном (2 л) и оставляли смесь отстаиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Твердое желтое вещество собирали посредством фильтрации, промывали гексаном и высушивали при 40 С/20 мм рт. ст. с получением 227 г целевого продукта. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с применением колоночной хроматографии на силикагеле (2:3:5 этилацетат/дихлорметан/гептан, постепенно увеличивая соотношение до 2:3 этилацетат/гептан) с получением дополнительных 54 г целевого продукта. Общий выход: 281 г (70%). []D20-81(2R,4R)-4-(4-бром-2-нитрофениламино)-2 гидроксиметилпирролидин-1-карбоновой кислоты (125,5 г, 0,301 моль) в дихлорметане (400 мл) добавляли 4 н. соляную кислоту в диоксане (800 мл) и перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали эфиром и высушивали при 20 мм рт. ст./60 С с получением указанного в заголовке соединения (105,2 г, 99%). []D20-89,6 (с=1,0 в метаноле). 1 Н ЯМР При перемешивании к раствору гидрохлорида (2R,4R)-[4-(4-бром-2-нитрофениламино)пирролидин 2-ил]метанола (54,5 г, 155 ммоль) в тетрагидрофуране (375 мл) и воде (376 мл) по каплям добавляли 5 н. гидроксид натрия до установления рН, равным 10-12. Через капельную воронку по каплям добавляли хлорацетилхлорид (27,3 мл, 337 ммоль) в течение 30 мин. Применяя другую капельную воронку, во время добавления хлорангидрида добавляли 5 н. гидроксид натрия с такой скоростью, чтобы поддержать внутренний рН при 8-12. Перемешивали в течение 6 ч, собирали твердое вещество, образовавшееся при фильтрации, и промывали водой. Удаляли органический компонент фильтрата при пониженном давлении и собирали твердое вещество посредством фильтрации. Объединяли две партии твердого вещества и высушивали при 60 С/20 мм рт. ст. с получением 51,4 г. Суспендировали твердое вещество в 2% метаноле в дихлорметане (1,5 л) и вращали на роторном испарителе при 40 С в течение 1 ч. Осадок собирали посредством фильтрации (11 г) и отбрасывали. Пропускали фильтрат через силикагелевый тампон,элюируя дихлорметаном, и концентрировали элюент с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого желто-оранжевого вещества (32,8 г, 60%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)1,68 (м, 1 Н),2,42 (м, 1 Н), 3,37 (м, 1 Н), 3,49 (м, 1 Н), 3,75-3,91 (м, 3H), 4,10 (м, 2 Н), 4,48 (м, 1 Н), 7,18 (д, 1 Н), 7,64 (дд,1 Н), 7,93 (д, 1 Н), 8,19 (с, 1 Н).(7R,8aR)-7-(4-бром-2 нитрофениламино)тетрагидропирроло[2,1-с][1,4]оксазин-4-он (32,1 г, 90,1 ммоль) и охлаждали до температуры от 0 до -5 С. Добавляли комплекс боран-диметилсульфид (26 мл, 0,279 моль) в течение 10 мин. Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали в ледяной бане и осторожно по каплям добавляли метанол (450 мл). Добавляли 4 N соляную кислоту (450 мл) и кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Охлаждали до приблизительно 40 С и устанавливали рН, равным 10-12, путем осторожного по каплям добавления 5 н. гидроксида натрия. Удаляли органический растворитель при пониженном давлении. Водную фазу разбавляли водой (1,2 л) и экстрагировали дихлорметаном (1,2 л). Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением масла. В этот момент масло объединяли с неочищенным веществом, полученным согласно предыдущему идентичному способу синтеза (начиная с 30,2 г амидного исходного вещества). Масло пропускали через силикагелевый тампон, элюируя метиленхлоридом для удаления компонента с более высоким Rf. Элюировали 1% метанолом в дихлорметане и концентрировали с получением твердого вещества (57,8 г). Твердое вещество суспендировали в эфире (1 л) и оставляли отстаиваться на ночь. Твердое вещество собирали посредством фильтрации и промывали небольшим количеством эфира с получением 47,5 г вещества. Фильтрат концентрировали, суспендировали в эфире (100 мл) и оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Собирали дополнительные 3,1 г целевого продукта посредством фильтрации. Фильтрат концентрировали и очищали остаток с помощью фильтрации через силикагелевый тампон с получением дополнительных 2,9 г твердого оранжевого вещества. Объединяли все твердое вещество с получением указанного в заголовке соединения (53,5 г, 89%). []D20-36 В колбу загружали (7R,8aR)-(4-бром-2-нитрофенил)-(гексагидропирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7 ил)амин (50,9 г, 0,149 моль), (E)-2-3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-4,4,5,5 тетраметил-1,3,2-диоксаборолан (57,5 г, 0,163 моль), трифенилфосфин (10,1 г, 39 ммоль) и метоксид натрия (19,7 г, 0,346 моль) в тетрагидрофуране (1 л) и метаноле (500 мл). Через смесь барботировали азот в течение 30 мин. Добавляли ацетат палладия(II) (3,00 г, 13 ммоль) и барботировали азот через смесь в течение еще 30 мин. Нагревали с обратным холодильником (60 С) в атмосфере азота в течение 16 ч. Охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через диатомовую землю и концентрировали в вакууме с получением твердого вещества. Растворяли в смеси 1:1 этилацетат/соляной раствор (2 л) и пропускали через прокладку из диатомовой земли. Прокладку промывали смесью 1:1 этилацетат/соляной раствор(21 л) и затем 10% метанолом в дихлорметане (41 л). Слои разделяли и объединяли органические фазы. Органическую часть высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением масла. Масло растворяли в дихлорметане и пропускали через силикагелевую прокладку. Прокладку промывали дихлорметаном до удаления компонента с более высоким Rf согласно ТСХ. Элюировали 1% метанолом в дихлорметане и концентрировали в вакууме с получением пены. Растворяли в этилацетате(2 л) и концентрировали до приблизительно 200 мл. Добавляли гексан (1,5 л) и оставляли суспензию выстаиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Собирали твердое оранжевое вещество посредством фильтрации и высушивали при 50 С/20 мм рт. ст. с получением указанного в заголовке соединения(Е)-[4-(3-фтор-6H-дибензо[b,e]оксепин-11-илиденметил)-2-нитрофенил]-7R,8aR)гексагидропирроло[2,1-с][1,4]оксазин-7-ил)амина (52 г, 0,107 моль), триэтиламина (33 мл, 0,237 моль) и 5% платины на углероде (18 г) в тетрагидрофуране (450 мл) гидрировали при комнатной температуре при 50 psi (345 кПа) в течение 2 ч. Отфильтровывали катализатор, промывали тетрагидрофураном и концентрировали с получением коричневой пены. Пену растворяли в безводном тетрагидрофуране (500 мл) и охлаждали в ледяной бане. По каплям добавляли трифосген (31,5 г, 0,106 моль) в тетрагидрофуране(450 мл) в течение 30 мин и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Раствор концентрировали, растворяли в 5% метаноле в дихлорметане и очищали через короткий силикагелевый тампон. Концентрировали с получением твердого коричневого вещества. Твердое вещество суспендировали в насыщенном бикарбонате натрия (1,5 л) и перемешивали на роторном испарителе в течение 1 ч. Фильтровали и высушивали в вакууме. Растворяли в теплой смеси 1:1 метанол/дихлорметан (приблизительно 6 л) и обрабатывали поли(4-винилпиридиновой) 2% поперечно сшитой смолой (170 г). Взвесь перемешивали в течение 30 мин и фильтровали через диатомовую землю. Фильтрат концентрировали до объема приблизительно 1,5 л и образовавшееся твердое вещество собирали посредством фильтрации. Высушивали при 80 С/20 мм рт. ст. всю ночь с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества (38,1 г, 74%). []D20-20,5 (с=1,0 в ДМСО). 1 Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)1,48 (м, 1 Н),2,02 (м, 1 Н), 2,19 (м, 2 Н), 2,52 (м, 1 Н), 2,91 (д, 1 Н), 3,03 (д, 1 Н), 3,25 (т, 1 Н), 3,50 (т, 1 Н), 3,79 (д, 1 Н), 3,88(д, 1 Н), 4,95 (м, 1 Н), 5,03 (ушир.с, 1 Н), 5,60 (ушир.с, 1 Н), 6,59 (м, 2 Н), 6,78 (м, 2 Н), 6,97 (с, 1 Н), 7,02 (д,1 Н), 7,25 (т, 1 Н), 7,38 (т, 1 Н), 7,48-7,61 (м, 3H), 10,72 (с, 1 Н, NH); ЖХ-МС m/z 484,0 [М+Н]+. Применяя вещество, полученное, как описано в примере 1, получили рентгеновские порошковые дифрактограммы и обнаружили кристаллическую форму (форма I) с положениями характеристических пиков (2 значения) примерно при 10,5, 13,0, 15,5 и 19,7. Характеристики температуры плавления веществ определяли с помощью ДСК. Начало плавления = 298,9 С. Пример 1(а). 5-Е)-(3-Фтордибензо[b,e]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-1-7R,8aR)-гексагидро-1 Нпирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он (форма II). Во флакон добавляли 117,7 мг 5-E)-(3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-17R,8aR)-гексагидро-1 Н-пирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-она (полученного,как описано в примере 1) и смешивали с 2,5 мл ДМАА на пластине для смешивания при 1000 об/мин и 70 С до тех пор, пока не произошло растворение. К пробе медленно добавляли воду до появления мутности, затем отводили тепло. Продолжали перемешивание в течение 30 мин до осаждения твердого белого вещества из раствора. Твердое вещество собирали посредством фильтрации и высушивали всю ночь при 40 С. Применяя вещество, полученное, как описано в примере 1(а), получали рентгеновские порошковые дифрактограммы и обнаружили кристаллическую форму (форма II) с положениями характеристических пиков (2 значения) примерно при 11,3, 12,1, 18,8 и 21,0. Альтернативные методики.(i) Суспензию 5-Е)-(3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-1-7R,8aR)-гексагидро-1 Нпирроло[2,1-с][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он-4-метилбензолсульфоната (10,2 г, 15,55 ммоль) (полученную, по существу, как описано ниже в примере 2) в 1 н. NaOH (200 мл) экстрагировали в делительной воронке 5% раствором МеОН/CHCl3 (5100 мл). Органическую фазу промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали через складчатый фильтр и концентрировали в вакууме. Остаток высушивали в вакуумной печи при 50 С всю ночь с получением твердого белого вещества (6,71 г, 90% извлечение). ЖХ-МС (4 мин): RT=1,87 мин, 100% М+Н=484.2.(ii) 0,1 г пробы вещества, полученного согласно альтернативной методике (i), описанной выше, обрабатывали с помощью 1 мл ДМАА и нагревали образовавшуюся суспензию в 80 С масляной бане в течение 30 мин. К раствору добавляли 15 мл AcCN, нагревали в 80 С масляной бане в течение 30 мин, затем охлаждали до комнатной температуры при перемешивании. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, затем высушивали в 50 С вакуумной печи всю ночь с извлечением 74,5 мг продукта.(iii) 0,1 г пробы вещества, полученного согласно альтернативной методике (i), описанной выше, обрабатывали с помощью 20 мл AcCN и нагревали образовавшуюся суспензию в 80 С масляной бане в течение 30 мин, затем охлаждали до комнатной температуры при перемешивании. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, затем высушивали в 50 С вакуумной печи всю ночь с извлечением 81,8 мг продукта.(iv) 0,1 г пробу вещества, полученного согласно альтернативной методике (i), описанной выше, обрабатывали с помощью 20 мл изопропилового спирта и нагревали образовавшуюся суспензию в 80 С масляной бане в течение 30 мин, затем охлаждали до комнатной температуры при перемешивании. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, затем высушивали в 50 С вакуумной печи всю ночь с извлечением 92,8 мг продукта. При применении вещества, полученного, как описано выше в альтернативной методике (i), с помощью рентгеновской порошковой дифрактометрии обнаружили кристаллическую форму с положениями характеристических пиков (2 значения) примерно при 11,3, 12,1, 18,8 и 21,0 (форма II). Пример 2. 5-Е)-(3-Фтордибензо[b,е]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-1-7R,8aR)-гексагидро-1 Нпирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он, тозилат Нагревали раствор моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты (51,70 ммоль, 9,98 г) в диметилацетамиде (50 мл) в 40 С масляной бане в течение 30 мин. К гомогенному раствору 5 г порциями при энергичном перемешивании добавляли 5-Е)-(3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6H)-илиден)метил)-1-7R,8aR)гексагидро-1 Н-пирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он (51,70 ммоль, 25,00 г). Промывали насыпную воронку и контейнерную бутыль диметилацетамидом (25 мл) и перемешивали суспензию при 40 С в течение 30 мин до полного растворения твердого вещества. Помещали светлокоричневый гомогенный раствор в поток азота на всю ночь при 30 С. Разбавляли остаток ацетонитрилом(200 мл) и обрабатывали ультразвуком в водяной бане в течение 20 мин. Нагревали суспензию белого твердого вещества в 60 С масляной бане в течение 3 ч. Охлаждали до комнатной температуры и собирали твердое вещество посредством фильтрации. Высушивали в вакуумной печи при 40 С в течение 2 дней с получением указанного в заголовке соединения (32,88 г, 97%). 1 Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)2,00 (м,0,5 Н), 2,29 (м, 0,5 Н), 2,44 (с, 3H), 2,48 (м, 0,5 Н), 3,1-4,2 (м, 7 Н), 5,10 (ушир.м, 2 Н), 5,55 (ушир.с, 1 Н), 6,60(а) Растворяли 85,8 мг (0,177 ммоль) 5-E)-(3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6H)-илиден)метил)-17R,8aR)-гексагидро-1 Н-пирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-она (полученного,по существу, как описано в примере 1) в диметилацетамиде (2 мл). Добавляли моногидрат птолуолсульфоновой кислоты (43 мг, 0,226 ммоль) и перемешивали до превращения смеси в прозрачный раствор. Добавляли ацетонитрил (7 мл) и испаряли с получением прозрачного масла. Добавляли воду (2 мл) и обрабатывали пробу ультразвуком. После осаждения твердого белого вещества пробу суспендировали в течение 10 мин. Фильтровали и высушивали с получением твердого вещества.(b) 98,0 мг 5-Е)-(3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-1-7R,8aR)-гексагидро-1 Нпирроло[2,1-с][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-она (полученного, по существу, как описано в примере 1) растворяли в 2,5 мл ДМАА. Добавляли 1,2 экв. моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты и перемешивали до тех пор, пока раствор не становился прозрачным и бесцветным. Добавляли 2 мл 88% ацетона, затем 16 мл воды, затем испаряли для удаления растворителей. К образовавшемуся прозрачному маслу добавляли 1 мл ацетона и обрабатывали ультразвуком. Образовавшийся гель высушивали с получением грязно-белого твердого вещества. Опять растворяли твердое вещество в смеси 1:10 ТТФ:Н 2 О и выпаривали с получением прозрачного масла, затем обрабатывали ультразвуком с 5 мл ацетонитрила. После осаждения твердого белого вещества пробу суспендировали всю ночь. Фильтровали и высушивали с получением твердого вещества. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение, представляющее собой 5-E)-(3-фтордибензо[b,e]оксепин-11(6 Н)-илиден)метил)-17R,8aR)-гексагидро-1 Н-пирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он, или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, представляющее собой 5-E)-(3-фтордибензо[b,е]оксепин-11(6 Н)илиден)метил)-1-7R,8aR)-гексагидро-1 Н-пирроло[2,1-c][1,4]оксазин-7-ил)-1 Н-бензо[d]имидазол-2(3H)он. 3. Соединение по п.2 в кристаллической форме, имеющее характеристические пики при значениях 2 примерно 11,3, 12,1, 18,8 и 21,0. 4. Применение соединения или соли по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства для лечения застойной сердечной недостаточности, гипертензии, диабетической нефропатии или хронического заболевания почек. 5. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-3 и один или более