Применение эффекторов глутаминил – и глутаматциклаз

010108 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к глутаминилциклазе (QC, КФ 2.3.2.5), которая катализирует внутримолекулярную циклизацию N-концевых остатков глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты (5-оксопролин, pGlu) и выделением в свободном состоянии аммиака и внутримолекулярную циклизацию N-концевых остатков глутамата с образованием пироглутаминовой кислоты и выделением в свободном состоянии воды. При создании настоящего изобретения были идентифицированы QC млекопитающих в качестве металлоферментов, выявлены новые физиологические субстраты QC в организме млекопитающих и разработаны пути применения эффекторов QC и фармацевтических композиций, содержащих эффекторыQC, для лечения состояний, которые можно лечить путем модуляции QC-активности. Кроме того, установлено, что использование взаимодействия с металлом является важным подходом при разработке ингибиторов QC. Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является применение эффекторов QC-активности в сочетании с ингибиторами DP IV (дипептидилпептидаза IV) или подобныхDP IV ферментов для лечения или облегчения состояний, которые можно лечить путем модуляции активности QC и/или DP IV. Предложен также способ скрининга для идентификации и отбора эффекторов QC-активности. Предпосылки создания изобретения Глутаминилциклаза (QC, КФ 2.3.2.5) катализирует внутримолекулярную циклизацию N-концевых остатков глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты (pGlu) с выделением в свободном состоянии аммиака. QC впервые была выделена Мессером (Messer) из латекса тропического растенияCarica papaya в 1963 г. (Messer M., Nature 4874, 1963, с. 1299). Спустя 24 года соответствующая ферментативная активность была обнаружена в гипофизе животных (Busby W.Н.J. и др. J. Biol. Chem. 262, 1987,с. 8532-8536; Fischer W.H. и Spiess J., Proc Natl Acad Sci USA 84, 1987, c. 3628-3632). Для QC млекопитающих превращение Gln в pGlu с помощью QC было обнаружено для предшественников TRH (тиреолиберин) и GnRH (гонадолиберин) (Busby W.H.J. и др., J. Biol. Chem. 262, 1987, c. 8532-8536; FischerW.H. и Spiess J., Proc Natl Acad Sci USA 84, 1987, c. 3628-3632). Кроме того, предварительные эксперименты по выявлению локализации QC позволили выявить ее совместную локализацию с предполагаемыми продуктами катализа в бычьем гипофизе, что является дополнительным доказательством ее функции в синтезе пептидных гормонов (Bockers Т.М. и др., J. Neuroendocrinol. 7, 1995, c. 445-453). В противоположность этому физиологическая функция растительной QC все еще остается неясной. Предполагается, что фермент из С. papaya играет роль в защите растений от патогенных микроорганизмов (El Moussaoui А. и др., Cell Mol Life Sci 58, 2001, c. 556-570). В настоящее время на основе сравнительного анализа последовательностей были выявлены предполагаемые QC из других растений (Dahl S.W. и др., ProteinExpr Purif 20, 2000, c. 27-36). Однако физиологическая функция этих ферментов все еще остается неясной. Известные выделенные из растений и животных QC обладают строгой специфичностью в отношении L-глутамина в N-концевом положении субстратов и установлено, что их кинетические характеристики описываются уравнением Михаэлиса-Ментена (Pohl Т. и др., Proc Natl Acad Sci USA 88, 1991,с. 10059-10063; Consalvo A.P. и др., Anal Biochem 175, 1988, c. 131-138; Gololobov M.Y. и др., Biol. Chem.Hoppe Seyler 377, 1996, c. 395-398). Однако сравнение первичной структуры QC из С. papaya и высококонсервативных QC млекопитающих не выявило никакой гомологии последовательностей (Dahl S.W. и др., Protein Expr Purif 20, 2000, с. 27-36). В то время как растительные QC, вероятно, принадлежат к новому семейству ферментов, (Dahl S.W. и др., Protein Expr Purif 20, 2000, с. 27-36), установлено, чтоQC млекопитающих обладают выраженной гомологией последовательностей с бактериальными аминопептидазами (Bateman R.С. и др., Biochemistry 40, 2001, с. 11246-11250), что позволило сделать заключение о различном эволюционном происхождении QC из растений и животных. В ЕР 020113494 описаны полинуклеотиды, кодирующие глутаминилциклазу насекомых, а также кодируемые ими полипептиды. В этом описании рассмотрены также клетки-хозяева, которые содержат экспрессионные векторы, несущие полинуклеотиды, предлагаемые в изобретении. Выделенные полипептиды и клетки-хозяева, содержащие QC насекомых, применяют в методах скрининга агентов, которые снижают глутаминилциклазную активность. Установлено, что такие агенты можно применять в качестве пестицидов. Болезнь Альцгеймера (АБ) характеризуется аномальным накоплением внеклеточных амилоидных бляшек, непосредственно связанных с дистрофичными нейронами, реактивными астроцитами и микроглией (Terry R.D. и Katzman R., Ann Neurol 14, 1983, c. 497-506; Glenner G.G. и Wong С.W., Biochem Biophys Res Comm 120, 1984, c. 885-890; Intagaki S. и др., J. Neuroimmunol 24, 1989, c. 173-182; Funato H. и др., Am. J. Pathol. 152, 1998, c. 983-992; Selkoe D.J., Physiol Rev 81, 2001, c. 741-766). Амилоидпептиды А)-пептиды) являются основными компонентами старческих бляшек и считается, что они непосредственно участвуют с патогенезе и развитии АБ, эта гипотеза подтверждается генетическими исследованиями (Glenner G.G. и Wong С.W., Biochem Biophys Res Comm 120, 1984, c. 885-890; Borchelt D.R. и др.,-1 010108Neurodegeneration 5, 1996, c. 115-120; Citron M. и др., Nat Med 3, 1997, с. 67-72; Selkoe D. J., Physiol Rev 81, 2001, cc. 741-766). A образуется в результате протеолитического процессинга -амилоидного белкапредшественника (APP) (Kang, J. и др., Nature 325, 1987, с. 733-736; Selkoe D.J., Trends Cell Biol. 8, 1998,c. 447-453), который последовательно расщепляется -секретазой на N-конце и -секретазой на С-концеA (Haass С. и Selkoe D.J., Cell 75, 1993, c. 1039-1042; Simons M. и др., J. Neurosci, 16, 1996, c. 899-908). Помимо доминирующих А-пептидов, у которых на N-конце находится L-Asp (A 1-42/40), в старческих бляшках присутствует множество гетерогенных укороченных на N-конце форм. Установлено, что такие укороченные пептиды обладают более высокой нейротоксичностью in vitro и у них существенно быстрее происходит агрегация по сравнению с полноразмерными изоформами (Pike С.J. и др., J. Biol. Chem., 270,1995, c. 23895-23898). Известно, что у пациентов на ранней стадии семейной АБ (САБ) происходит сверхпроизводство укороченных на N-конце пептидов (Saido Т.С. и др., Neuron 14, 1995, с. 457-466;Russo С. и др., Nature 405, 2000, с. 531-532), эти пептиды появляются в раннем возрасте в головном мозге пациентов, страдающих синдромом Дауна (ДС), и их количество увеличивается с возрастом (Russo С. и др., FEBS Lett 409, 1997, с. 411-416, Russo С. и др., Neurobiol Dis 8, 2001, c. 173-180; Tekirian T.L. и др.,J. Neuropathol. Exp. Neurol. 57, 1998, c. 76-94). И, наконец, их количество отражает развитие более серьезной формы заболевания (Russo С. и др., FEBS Lett. 409, 1997, с. 411-416). Дополнительные посттрансляционные процессы могут также модифицировать N-конец в результате изомеризации или рацемизации аспартата в положении 1 и 7 и циклизации глутамата на остатках 3 и 11. Пироглутаматсодержащие изоформы в положении 3 [pGlu3]A(3-40/42) представляют собой доминирующие формы - на их долю приходится примерно 50% общего количества укороченных на N-конце видов A в старческих бляшкахCommun 276, 2000, c. 422-427), и они присутствуют также в преамилоидных повреждениях (Lalowski М. и др., J. Biol. Chem. 271, 1996, c. 33623-33631). Накопление пептидов [pGlu3]A(3-40/42), вероятно, является следствием структурной модификации, которая усиливает агрегацию и придает устойчивость к большинству аминопептидаз (Saido Т.С. и др., Neuron 14, 1995, с. 457-466; Tekirian Т.L. и др., J. Neurochem. 73, 1999, с. 1584-1589). Эти данные являются ключом к объяснению основной роли пептидов [pGlu3]A(3-40/42) в патогенезе АБ. Однако пока имеется относительно мало сведений об их нейротоксичности и способности к агрегации (Не W. иBarrow С.J., Biochemistry 38, 1999, с. 10871-10877; Tekirian Т.L. и др., J Neurochem 73, 1999, с. 1584-1589). Более того, совершенно нет данных о действии этих изоформ на глиальные клетки и о глиальном ответе на эти пептиды, хотя связь активированной глии со старческими бляшками точно установлена, и глия может активно участвовать в накоплении амилоидных отложений. В современных исследованиях изучали токсичность, агрегацию и катаболизм пептидов А(1-42), А(1-40), [pGlu3]A(3-42) и [pGlu3]A(3-40) в культурах клеток нейронов и глии и было установлено, что модификация пироглутамата усиливает токсичные свойства А-пептидов и ингибирует также их расщепление культивируемыми астроцитами.Shirotani с соавторами (2002) изучали образование пептидов [pGlu3]A в первичных кортикальных нейронах, зараженных вирусом Синдбис in vitro. Эти авторы сконструировали путем аминокислотной замены и делеции комплементарные ДНК амилоидного белка-предшественника, которые кодировали потенциальный предшественник [pGlu3]A. Для одного из искусственных предшественников, у которого наN-конце находился остаток глутамина вместо глутамата, присутствующего во встречающемся в естественных условиях предшественнике, сделано предположение о спонтанном превращении или ферментативном превращении с помощью глутаминилциклазы в пироглутамат. Механизм циклизацииN-концевого глутамата в положении 3 во встречающемся в естественных условиях предшественнике пептида [pGlu3]A in vivo не выяснен (Shirotani K., Tsubuki S., Lee H. J., Maruyama K. и Saido Т.С.,Neurosci Lett. 327, 2002, с. 25-28). Семейная британская деменция (СБД и семейная датская деменция (СДД) представляют собой проявляющиеся в раннем возрасте аутосомные доминантные нарушения, которые характеризуются прогрессирующим нарушением когнитивной функции, мышечной спастичностью и мозжечковой атаксиейVidal R. и др., J. Neuropathol. Exp. Neurol. 63, 2004, c. 787-800). Так же как и при болезни Альцгеймера, у пациентов образуются широко распространенные амилоидные отложения в паренхиме и в сосудах, что сопровождается нейродегенерацией гиппокампа, активацией комплемента и глии (Rostagno А. и др.,J. Biol. Chem. 277, 2002, с .49782-49790). Причиной этих заболеваний являются различные мутации в гене BRI (SwissProt Q9Y287), приводящие к образованию открытой рамки считывания, удлиненной на 11 аминокислот по сравнению с BRI дикого типа. В случае СБД замена в ОРС обусловлена мутацией в стоп-кодоне BRI (BRI-L), в при СДД дупликация-инсерция десяти нуклеотидов приводит к удлинениюBRI (BRI-D) (Ghiso J. и др., Amyloid 8, 2001, с. 277-284; Rostagno А. и др., J. Biol. Chem. 277, 2002,c. 49782-49790). Установлено, что BRI, представляющий собой трансмембранный белок класса 2, кото-2 010108 рый кодируется на хромосоме 13, может процессироваться в С-концевой области с помощью фурина и других прогормональных конвертаз с высвобождением пептида, состоящего из 23 аминокислот(Kim S.Н. и др., Ann N Y Acad Sci 920, 2000, c. 93-99; Kim S.H. и др., J. Biol. Chem. 277, 2002, c. 18721877). Расщепление мутантных белков BRI, т.е. BRI-D и BRI-L, приводит к образованию пептидов(ABri и ADan, каждый из которых состоит из 34 аминокислот), обладающих способностью к агрегации,которая приводит к возникновению нефибриллярных отложений, а также амилоидных фибрилл (ElAgnaf О.М. и др., Protein Pept. Lett. 11, 2002, c. 207-212; El Agnaf О.М. и др., Biochemistry 40, 2001,c. 3449-3457; El Agnaf О.М. и др., J. Mol. Biol. 310, 2001, c. 157-168; Srinivasan и др., J. Mol. Biol. 333,2003, c. 1003-1023). Пептиды ADan и ABri содержат идентичные N-концевые 22 аминокислоты, но имеют различные С-концевые области. Установлено, что С-концевые области требуются для образования фибрилл и проявления нейротоксичности (El Agnaf О.М. и др., Protein Pept. Lett. 11, 2004, c. 207-212). Установлено, что N-конец пептидов ABri и ADan блокируется путем образования пироглутамила. Так же как при болезни Альцгеймера, когда пироглутамил образуется на N-конце А, pGlu образуется из глутаминовой кислоты (Ghiso J. и др., Amyloid 8, 2001; Saido и др., Neuron 14, 1995, с. 457-466). Образование пироглутамила, в свою очередь, стабилизирует устойчивость пептидов к расщеплению большинством аминопептидаз, что провоцирует развитие заболеваний. Установлено, что образование агрегатов происходит вне клеток, но также и в клетках в результате пути секреции (Kim и др., J. Biol. Chem. 277,2002, с. 1872-1877). Таким образом, подавление образования pGlu на N-конце нейротоксичных пептидовABri и ADan путем ингибирования глутаминил- и глутаматциклаз является новым подходом к лечению СБД и СДД. Дипептидилпептидаза IV (DP IV) представляет собой сериновую протеазу, которая осуществляет расщепление в положении после пролина (в меньшей степени после аланина, после серина или после глицина), обнаруженную в различных тканях организма, включая почку, печень и кишечник, и она отщепляет N-концевые дипептиды от пептидной цепи. В настоящее время установлено, что DP IV играет важную роль в метаболизме нейропептидов, Т-клеточной активации, прикреплении раковых клеток к эндотелию и в проникновении ВИЧ в лимфоидные клетки (см. WO 02/34242, WO 02/34243,WO 03/002595 и WO 03/002596). В WO 99/61431 описаны ингибиторы DP IV, которые содержат аминокислотный остаток и тиазолидиновую или пирролидиновую группу,а также их соли,прежде всегоL-треоизолейцилтиазолидин,L-аллоизолейцилтиазолидин,L-треоизолейцилпирролидин,L-аллоизолейцилтиазолидин, L-аллоизолейцилпиролидин. Дополнительными примерами низкомолекулярных ингибиторов дипептидилпептидазы IV являются такие агенты, как тетрагидроизохинолин-3-карбоксамидные производные, N-замещенные 2-цианпиролы и пирролидины, N-(N'-замещенный глицил)-2-цианпирролидины, N-(замещенный глицил)тиазолидины,N-(замещенный глицил)-4-циантиазолидины, аминоацилборпролильные ингибиторы, сконденсированные с циклопропилом пирролидины и гетероциклические соединения. Ингибиторы дипептидилпептидазы IV описаны в US 6380398; US 6011155; US 6107317;WO 03/002593; WO 03/004496; WO 03/024942 и WO 03/024965, содержание которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки, прежде всего касательно этих ингибиторов, их определения,применения и получения. Краткое изложение сущности изобретения Настоящее изобретение относится к новым физиологическим субстратам QC в организме млекопитающих, выбранным из группы, включающей Glu1-ABri, Glu1-ADan, Gln3-А(3-40/42) и Gln1-гастрины(17 и 34), и к применению эффекторов QC и фармацевтических композиций, содержащих эффекторы QC,для лечения состояний, которые можно лечить путем модуляции активности QC, предпочтительно выбранных из группы, включающей рак двенадцатиперстной кишки, связанный или не связанный с заражением Heliobacter pylori, колоректальный рак, синдром Золлингера-Эллисона (ульцерогенная аденома поджелудочной железы), семейная британская деменция и семейная датская деменция. С помощью экспериментов по ингибированию установлено, что человеческая QC представляет собой металлзависимую трансферазу. Апофермент QC может проявлять наибольшую реакционную способность в присутствии ионов цинка, и металлсвязывающий мотив цинкзависимых аминопептидаз присутствует также в человеческой QC. Соединения, которые взаимодействуют с активным сайтом связывания металла, являются эффективными ингибиторами QC. При создании изобретения неожиданно было установлено, что рекомбинантная человеческая QC, а также активность QC в экстрактах, выделенных из головного мозга, катализирует циклизацию какN-концевого глутаминила, так и глутамата. В этом исследовании убедительно доказано, что для катали-3 010108 зируемого циклазой Glu1-превращения оптимальным является значение pH, близкое к 6,0, а дляGln1-превращения в pGlu-производные оптимальным является значение pH, близкое к 8,0. Поскольку образование пептидов, родственных pGlu-A, можно подавлять путем ингибирования рекомбинантной человеческой QC и QC-активности экстрактов, выделенных из гипофиза свиньи, согласно настоящему изобретению фермент QC является мишенью для разработки лекарственных средств, предназначенных для лечения болезни Альцгеймера. Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, предназначенным для парентерального, энтерального или орального введения, которые содержат по меньшей мере один эффекторQC необязательно в сочетании с общепринятыми носителями и/или эксципиентами или которые содержат по меньшей мере один эффектор QC в сочетании по меньшей мере с одним ингибитором DP IV необязательно в сочетании с общепринятыми носителями и/или эксципиентами. Настоящее изобретение относится к ингибиторам QC, которые в целом описываются формулой 1,или к их фармацевтически приемлемым солям, включая все стереоизомеры: где R1-R6 независимо друг от друга обозначают Н либо разветвленную или неразветвленную алкильную цепь, разветвленную или неразветвленную алкенильную цепь, разветвленную или неразветвленную алкинильную цепь, карбоцикл, арил, гетероарил, гетероцикл, азааминокислоту, аминокислоту или ее миметик, пептид или его миметик; все вышеперечисленные остатки необязательно могут быть замещены;n может обозначать 0-2. Краткое описание чертежей Эти и другие аспекты настоящего изобретения проиллюстрированы ниже со ссылкой на чертежи,на которых показано: фиг. 1 - кривые, характеризующие процесс циклизации H-Gln-Ala-OH, катализируемой человеческой QC, которую оценивают по снижению абсорбции при 340 нм. Образцы содержали 0,3 мМ НАДН/Н+, 14 мМ -кетоглутаровую кислоту, 30 ед./мл глутаматдегидрогеназы и 1 мМ H-Gln-Ala-OH. На кривых А-Г представлены результаты, полученные с использованием различных концентраций QC: А, 10 мед (0,001 стандартной единицы)/мл; Б, 5 мед/мл; В, 2,5 мед/мл. На кривой Г представлены результаты, полученные без QC. Обнаружена линейная зависимость полученной активности от концентрацииQC (вклейка); фиг. 2 - зависимость от pH активности человеческой QC и QC из папайи (вставка), которую определяли в условиях скорости реакции первого порядка с использованием в качестве субстрата Gln-NA. Для человеческой QC использовали буферную систему, обеспечивающую постоянную ионную силу, предложенную Ellis и Morrison, в состав которой входили 25 мМ MES, 25 мМ уксусная кислота и 50 мМ Трис(Ellis K. J. и Morrison J. F., Methods Enzymol. 87, 1982, cc. 405-426). Из-за некоторого ингибирующего действия Трис на фермент QC из папайи изучали с использованием 50 мМ Mops-буфера. Ионную силу доводили до 0,05 М, добавляя NaCl. Профили скорости реакции оценивали путем аппроксимации с использованием модели, основанной на концепции диссоциирующих групп. Для QC из папайи при аппроксимации данных с использованием модели однократной диссоциации установлено, что значение pKa составляло 7,130,03; фиг. 3 - данные о воздействии значений pH на стабильность QC из латекса папайи и человеческойQC. Маточный раствор фермента разбавляли в 20 раз 0,1 М буфером с различными значениями pH(натрий-цитратый буфер, pH 4-7 и натрий-фосфатный буфер, pH 7-10). Растворы ферментов инкубировали при 30 С в течение 30 мин и затем оценивали ферментативную активность согласно стандартному протоколу; фиг. 4 - результаты сравнения констант специфичности kcat/KM для набора субстратов, содержащих глутамат в положении второй аминокислоты. В то время как при переходе от ди- к трипептидам было обнаружено повышение специфичности человеческой QC, никаких изменений в этом варианте не обнаружено для QC из папайи. Представленные диаграммы получены на основе параметров, приведенных в табл. 3; фиг. 5 - данные об образовании pGlu-Lys(pGlu)-Arg-Leu-Ala-NH2 из Н-Gln-Lys(Gln)-Arg-Leu-AlaNH2, катализируемом человеческой QC. Превращение субстрата оценивали по зависящему от времени изменению в соотношении m/z, обусловленному выбросом аммиака. Образец имел следующий состав: 0,5 мМ субстрат, 38 нМ QC в 40 мМ трис/HCl, pH 7,7. В указанные моменты времени образцы изымали-4 010108 из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором (1:1, об./об.) и затем подвергали массспектрометрическому анализу. Очень близкая зависимость обнаружена и для QC из папайи; фиг. 6 - данные об образовании pGlu-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2 из Н-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2, катализируемом QC из папайи. Превращение субстрата оценивали по зависящему от времени изменению в соотношении m/z, обусловленному выбросом метиламина. Образец имел следующий состав: 0,5 мМ субстрат, 0,65 мкМ QC из папайи в 40 мМ Трис/HCl, pH 7,7. В указанные моменты времени образцы изымали из лабораторной пробирки, смешивали с матричным раствором (1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу. Никакого превращения субстрата не обнаружено в образцах безQC из папайи или при добавлении к субстрату вплоть до 1,5 мкМ человеческой QC (данные не представлены); фиг. 7 - данные об образовании Gln3-A(3-11)а из Gln3-A(1-11)а, катализируемом DP IV. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным растворомVal-пирролидида (Val-Pyrr). В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором (1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 9 - данные об образовании [pGlu3]A(3-11)а из Gln3-A(3-11)a, катализируемом QC. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором(1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 10 - данные об ингибировании образования [pGlu3]A(3-11)а из Gln3-A(3-11)a с помощью ингибитора QC 1,10-фенантролина. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором (1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 11 - данные об образовании [pGlu3]A(3-11)а из Gln3-A(1-11)a после последовательного катализа с помощью DP IV и QC. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором (1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 12 - данные об ингибировании образования [pGlu3]A(3-11)a из Gln3-A(1-11)a с помощью ингибитора QC 1,10-фенантролина в присутствии каталитически активных DP IV и QC. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором(1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 13 - данные о снижении образования [pGlu3]A(3-11)а из Gln3-A(1-11)а с помощью ингибитора DP IV Val-Pyrr в присутствии каталитически активных DP IV и QC. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором (1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 14 -данные об образовании [pGlu3]A(3-11)а из Gln3-A(1-11)a после последовательного катализа аминопепетидазой(ами) и QC, которые присутствовали в гомогенате гипофиза свиньи. В указанные моменты времени образцы изымали из аналитической пробирки, смешивали с матричным раствором(1:1, об./об.) и затем подвергали масс-спектрометрическому анализу; фиг. 15 А и Б - масс-спектры A(3-11)а и A(3-21)а, инкубированных в присутствии рекомбинантной человеческой QC, которую кипятили в течение 10 мин перед применением. На фиг 15 В и Д представлены масс-спектры A(3-11)а и A(3-21)а в присутствии активной человеческой QC, что приводило к образованию [pGlu3]A(3-11)а и [pGlu3]A(3-21)а соответственно. На фиг. Д и Е представлены массспектры A(3-11)а и A(3-21)а в присутствии активной QC и 5 мМ бензимидазола, подавляющего образование [pGlu3]; фиг. 16 - скорости реакции катализируемого QC из папайи превращения Glu-NA в зависимости от концентрации субстрата. Начальные скорости оценивали в 0,1 М пирофосфатном буфере, pH 6,1 (квадраты), 0,1 М фосфатном буфере, pH 7,5 (кружки) и 0,1 М боратном буфере, pH 8,5 (треугольники). Значения кинетических параметров: KM=1,130,07 мМ, kcat=1,130,04 мин-1 (pH 6,1); KM=1,450,03 мМ,kcat=0,920,01 мин-1 (pH 7,5); KM=1,760,06 мМ, kcat=0,560,01 мин-1 (pH 8,5); фиг. 17 - зависимость от pH превращения Gln-NA (кружочки) и Glu-NA (квадраты), которую определяли в условиях скорости реакции первого порядка (SKM). Использовали концентрацию субстрата 0,01 и 0,25 мМ соответственно. Для обоих вариантов использовали трехкомпонентную буферную систему, включающую 0,05 М уксусную кислоту, 0,05 М пирофосфорную кислоту и 0,05 М трицин. Все буферы доводили до одинаковой проводимости путем добавления NaCl для того, чтобы избежать различий в ионной силе. Данные аппроксимировали с помощью уравнений, позволивших установить для двух диссоциирующих групп значения pKa 6,910,02 и 9,50,1 для Gln-NA и 4,60,1 и 7,550,02 для Glu-NA. Значения pKa для аминогрупп соответствующего субстрата, которые определяли титрованием, составили 6,970,01 (Gln-NA) и 7,570,05 (Glu-NA). Все опыты осуществляли при 30 С;-5 010108 фиг. 18 - кривые, характеризующие процесс катализируемой человеческой QC циклизацииH-Gln-AMC (7-амино-4-метилкумарин) в присутствии имидазола, дипиколиновой кислоты и без ингибитора. Гиперболическая форма кривой в присутствии дипиколиновой кислоты свидетельствует об удалении иона металла из активного сайта QC; фиг. 19 - зависящая от времени инактивация QC с помощью гетероциклического хелатора 1,10-фенантролина. После инкубации фермента QC с ингибитором в отсутствии субстрата (сплошная линия) обнаружена пониженная ферментативная активность по сравнению с образцами, которые не подвергали предварительной инкубации с ингибитором (пунктирная линия), что свидетельствует об удалении иона металла из активного сайта QC; фиг. 20 - реактивация человеческой QC ионами одновалентных и двухвалентных металлов. QC инактивировали добавлением 2 мМ дипиколиновой кислоты в 50 мМ бис-Трис-буфере, pH 6,8. Затем фермент подвергали диализу в противотоке 50 мМ бис-Трис-буфера, pH 6,8, содержащего 1,0 мМ ЭДТК. Для реактивации фермента осуществляли инкубацию инактивированного образца фермента с ионами металлов в концентрации 0,5 мМ в присутствии 0,5 мМ ЭДТК для того, чтобы избежать неспецифической реактивации следами ионов металлов, присутствующих в буферных растворах. В качестве контролей использовали содержащие фермент образцы, которые не инактивировали, но также как и инактивированный фермент подвергали диализу в противотоке раствора ЭДТК (+ЭДТК), и образцы фермента,которые подвергали диализу в противотоке буферных растворов, не содержащих ЭДТК (-ЭДТК); фиг. 21 - сравнительный анализ последовательностей человеческой QC (hQC) и других представителей семейства М 28 металлопептидаз Clan MH. Сравнительный анализ множества последовательностей осуществляли с помощью программы ClustalW в ch.EMBnet.org с принимаемыми по умолчанию параметрами. Превращение связанных с ионом цинка остатков обнаружено для человеческой QC (hQC;N-ацетилированном-альфа-связанном кислотном дипептидазном домене (NAALADase I) (остатки 274-587) человеческой глутаматкарбоксипептидазы II (hGCP II; Swiss-Prot Q04609). Аминокислоты, участвующие в связывании металла, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты. В случае человеческой QC эти остатки, вероятно, являются двойниками пептидаз; фиг. 22 - зависимость от pH ингибирования мышиной QC цистеамином (квадраты), диметилцистеамином (кружки) и меркаптоэтанолом (треугольники). Точки подгоняли к уравнениям, в которых рассматривается одна диссоциирующая группа. Кривые имели различную форму, что свидетельствует о том, что зависимость является результатом изменения в состоянии протонирования ингибитора. Кинетически определенные значения pKa для цистеамина (8,710,07) и диметилцистеамина (8,070,03) хорошо соответствовали известным из литературы данным для аминогруппы (8,6 и 7,95 соответственно)(Buist G.J. и Lucas H.J., J. Am. Chem. Soc. 79, 1957, с. 6157; Edsall J.T. Biophysical Chemistry, изд-во Academic Press, Inc., New York, 1958). Соответственно зависимость от pH ингибирования меркаптоэтанолом характеризуется одинаковым наклоном по всей длине, поскольку у него отсутствует способная к диссоциации группа в исследуемом диапазоне значений pH; фиг. 23 - график зависимости Lineweaver-Burk кинетических данных, полученных для превращенияGln-AMC (0,25, 0,125, 0,063, 0,031 мМ), катализируемого человеческой QC в присутствии различных концентраций цистеамина (0, 0,25, 0,5, 1 мМ). Данные аппроксимировали с учетом конкурентного ингибирования. Установленное значение Ki составляло 0,0370,001 мМ.-6 010108 Пептидные последовательности Упомянутые и применяемые согласно настоящему описанию пептиды имеют следующие последовательности: Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к эффекторам глутаминилциклазы (QC), предназначенным: а) для лечения болезней у млекопитающих, которые можно лечить путем модуляции активностиQC in vivo, и/или б) для модуляции физиологических процессов, основанных на действии pGlu-содержащих пептидов, которое обусловлено модуляцией активности QC. Кроме того, настоящее изобретение относится к соединениям, предназначенным для ингибирования глутаминилциклазы (QC, КФ 2.3.2.5) и/или QC-подобных ферментов в организме млекопитающего и к применению ингибиторов QC-активности для лечения патологических состояний, связанных с-8 010108 В настоящем изобретении предложен также новый способ лечения болезни Альцгеймера и синдрома Дауна. N-концы амилоидных -пептидов, отложение которых происходит в головном мозге при болезни Альцгеймера и синдроме Дауна, несут пироглутаминовую кислоту. Образование pGlu представляет собой важное событие в развитии и прогрессировании заболевания, так как известно, что модифицированные амилоидные -пептиды характеризуются повышенной тенденцией к агрегации -амилоидов и токсичностью, чем, вероятно, обусловлено возникновение и прогрессирование заболевания (Russo С. и др., J. Neurochem 82, 2002, с. 1480-1489). В противоположность этому во встречающихся в естественных условиях A-пептидах (3-40/42) в качестве N-концевой аминокислоты присутствует глутаминовая кислота. К настоящему времени отсутствуют данные о превращении Glu в pGlu. Кроме того, пока не обнаружена спонтанная циклизацияGlu-пептидов с образованием pGlu-пептидов. Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является выяснение роли QC в развитии болезни Альцгеймера и синдрома Дауна. Эта задача решается с помощью синтеза A(3-11)а и A(1-11)а, которые содержат аминокислоту глутамин вместо глутаминовой кислоты в положении 3, определения особенностей этих модифицированных амилоидных-пептидов в качестве субстратов для QC, DP IV и подобных DP IV ферментов и аминопептидаз и применения ингибиторов QC для предупреждения образования pGlu из N-концевого глутаминильного остатка образованных из амилоида -пептидов (1-11) и (3-11). Результаты описаны в примере 8. Примененный метод описан в примере 3. К настоящему времени отсутствуют какие-либо сведения об участии QC в прогрессировании заболеваний, поскольку N-концевой аминокислотой в A (3-40/42 или 11-40/42) является глутаминовая кислота. Однако QC является единственным известным ферментом, который обладает способностью образовывать pGlu на N-конце пептидов. Другие объекты настоящего изобретения касаются следующих данных и открытий: а) при добавлении к глутамину QC катализирует циклизацию глутаминовой кислоты с образованием пироглутаминовой кислоты с очень низкой скоростью,б) глутаминовая кислота APP или образованные из него амилоидные -пептиды превращаются в глутамин после трансляции с помощью неизвестной ферментативной активности, а на второй стадии QC катализирует циклизацию глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты после процессингаN-конца амилоидного -пептида,в) глутаминовая кислота превращается в глутамин после трансляции с помощью химического катализа или автокатализа, а затем QC катализирует циклизацию глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты после процессинга N-конца амилоидного -пептида,г) в гене APP присутствуют мутации, которые кодируют амилоидный -белок, несущий замену Glu в положении 3 на Gln. После трансляции и процессинга N-конца QC катализирует циклизацию глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты,д) глутамин включается в образующуюся пептидную цепь APP вследствие функционального нарушения неизвестной ферментативной активности и поэтому QC катализирует циклизацию N-концевого глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты после процессинга N-конца амилоидногоQC участвует в имеющей решающее значение стадии во всех 5 перечисленных выше случаях, а именно в образовании пироглутаминовой кислоты, которая способствует агрегации амилоидных-пептидов. Таким образом, ингибирование QC приводит к предупреждению осаждения бляшкообразующих A (3-40/42) или A (11-40/42), что приводит к возникновению и прогрессированию болезни Альцгеймера и синдрома Дауна, в не зависимости от механизма, посредством которого происходит циклизация. Глутамат обнаружен в положениях 3, 11 и 22 амилоидного -пептида. Среди прочего описана мутация, приводящая к замене глутаминовой кислоты (Е) на глутамин (Q) в положении 22 (соответствующая изменению в аминокислотной последовательности амилоидного белка-предшественника APP 693,Swissprot P05067), в качестве мутации, приводящей к цереброартериальному амилоидозу датского типа. Установлено, что -амилоидные пептиды, несущие остаток пироглутаминовой кислоты в положении 3,11 и/или 22, являются более цитотоксическими и гидрофобными по сравнению с A(1-40/42/43)(Saido Т.С., Medical Hypotheses 54(3), 2000, с. 427-429). Многочисленные N-концевые вариации в различных сайтах можно получать с помощью-секретазы, фермента, расщепляющего -сайт амилоидного белка-предшественника (ВАСЕ) (Huse J.T. и др., J. Biol. Chem. 277 (18), 2002, с. 16278-16284), и/или процессинга с помощью аминопептидазы. Во всех случаях циклизация может происходить согласно описанным выше механизмам а)-д). Таким образом, к настоящему времени отсутствуют экспериментальные данные, подтверждающие ферментативный путь превращения Glu1-пептидов в pGlu-пептиды с помощью неизвестной глутамилциклазы (ЕС), что соответствует механизму a) (Garden R.W., Moroz Т.P., Gleeson J.M., Floyd P.D., Li L.J.,Rubakhin S.S. и Sweedler J.V., J. Neurochem. 72, 1999, c. 676-681; Hosoda R. и др., J. Neuropathol. Exp.Neurol. 57, 1998, c. 1089-1095). К настоящему времени не была обнаружена такая ферментативная активность, которая может осуществлять циклизацию Glu1-пептидов, протонированных на N-конце и несущих отрицательно заряженный остаток Glu1-карбоксилата, при слабых щелочных значениях pH.QC-активность в отношении Gln1-субстратов очень резко снижается при значениях pH ниже 7,0. Установлено, что в противоположность этому Glu1-превращение может происходить в кислых реакционных средах (Iwatsubo Т. и др., Am. J. Pathol. 149, 1996, с. 1823-1830; Russo С. и др., FEBS Lett. 409, 1977,с. 411-416; Russo С. и др., Neurobiol. Dis. 8, 2001, с. 173-180; Tekirian Т.L. и др., J. Neuropathol. Exp.Neuropathol. Exp. Neurol. 57, 1998, c. 1089-1095; Garden R.W. и др., J. Neurochem., 72, 1999, c. 676-681). При создании настоящего изобретения изучался вопрос о том, может ли QC распознавать и участвовать в превращении образованных из амилоидапептидов в слабо кислых условиях. Для этой цели синтезировали и исследовали в качестве потенциальных субстратов фермента пептиды Gln3-A(1-11)а,А(3-11)а, Gln3-A(3-11)a, A(3-21)a, Gln3-A(3-21)a и Gln3-A(3-40). Эти последовательности были выбраны для имитации встречающихся в естественных условиях укороченных на N-конце и на С-конце пептидов Glu3-A и пептидов Gln3-А, которые могут присутствовать в результате посттрансляционного амидирования Glu. При создании настоящего изобретения было установлено, что QC из папайи и человеческая QC катализируют циклизацию как глутаминила, так и глутамила. По-видимому, первичной физиологической функцией QC является прекращение созревания гормонов в эндокринных клетках посредством циклизации глутамина до или во время процесса секреции гормона. Известно, что такие секреторные пузырьки характеризуются кислым значением pH. Таким образом, побочная активность фермента в узком диапазоне значений pH от 5,0 до 7,0 может представлять собой новую, открытую при создании настоящего изобретения глутамилциклазную активность, которая трансформирует также пептиды Glu-A. Однако из-за существенно меньшей скорости Glu-циклизации по сравнению с Gln-конверсией вопрос о том, может ли циклизация глутамила играть важную физиологическую роль, является спорным. При этом доказано, что циклизация глутамила участвует в патологии нейродегенеративных заболеваний. При создании настоящего изобретения при изучении зависимости этой ферментативной реакции от значений pH установлено, что непротонированный N-конец играет ключевую роль для циклизацииGln1-пептидов и, соответственно, значение pKa субстрата идентично значению pKa при QC-катализе (см. фиг. 17). Таким образом, QC стабилизирует внутримолекулярное нуклеофильное воздействие непротонированной -аминогруппы на -карбонильный углерод, который приобретает электрофильные свойства в результате амидирования (схема 1). В отличие от одновалентного заряда, присутствующего в пептидах, несущих N-концевой глутамин,N-концевой остаток Glu в содержащих Glu пептидах в большинстве случаев несет двухвалентных заряд при нейтральных значениях pH. Для глутамата характерно значение pKa примерно 4,2 и 7,5 для-карбоксильного остатка и для -аминогруппы соответственно. Т.е. при нейтральных и щелочных значениях pH, хотя азот -аминогруппы является частично или полностью непротонированным и нуклеофильным, -карбоксильная группа является непротонированной и поэтому не проявляет никакой электрофильной, характерной для карбонила, активности. Поэтому внутримолекулярная циклизация представляется невозможной. Однако при значениях pH примерно 5,2-6,5, с учетом соответствующих значений pKa, обе функциональные группы присутствуют в неионизированной форме в концентрациях примерно 1-10% (-NH2) или 10-1% (-СООН) от общей массы N-концевого содержащего Glu пептида. В результате при слабо кислых значениях pH присутствуют виды N-концевых Glu-пептидов, в которых обе группы являются незаряженными, и поэтому представляется возможным, что QC может стабилизировать промежуточное звено внутримолекулярной циклизации с образованием pGlu-пептида. Т.е. если -карбоксильная группа является протонированной, то углерод карбонила является достаточно электрофильным, что позволяет осуществлять нуклеофильное воздействие на него непротонированной -аминогруппы. При таких значениях pH ион гидроксила функционирует в качестве уходящей группы (схема 3). Эти предположения подтверждаются данными о зависимости от pH, полученными для катализируемого QC превращенияGlu-NA (см. пример 11). В отличие от превращения с помощью QC глутамина Gln-NA, оптимум pH катализа сдвигается в кислотный диапазон значений pH, примерно pH 6,0, т.е. диапазон значений pH, при котором одновременно присутствует значительное количество видов молекул субстрата, которые несут протонированную -карбоксильную и непротонированную -аминогруппу. Кроме того, характеризующее кинетическую реакцию конкретное значение pKa, составляющее 7,550,02, очень хорошо согласуется со значением, установленным для -аминогруппы Glu-NA с помощью титрования (7,570,05). С физиологической точки зрения при pH 6,0 константа скорости реакции второго порядка (или константа специфичности kcat/KM) катализируемой QC циклизации глутамата может быть примерно в 8000 раз ниже, чем константа, характеризующая циклизацию глутамина (фиг. 17). Однако не связанное с ферментом превращение обоих модельных субстратов Glu-NA и Gln-NA является очень небольшим,что согласуется с данными о незначительном образовании pGlu-пептида, полученными при создании- 10010108 настоящего изобретения. Следовательно, из соотношения констант скорости ферментативной и неферментативной реакций (при сравнении констант скорости реакции второго порядка для ферментативного катализа с соответствующими константами скорости реакции первого порядка для неферментативной циклизации коэффициент каталитической эффективности составляет 109-1010 М-1 для Gln- иGlu-превращения соответственно) можно заключить, что при образовании pGlu с помощью QC может быть достигнуто ускорение по меньшей мере в 108 раз. Из этих данных можно сделать вывод о том, чтоin vivo возможным является только ферментативный путь, приводящий к образованию pGlu. Поскольку QC присутствует в больших количествах в головном мозге, а также принимая во внимание высокую скорость превращения, составляющую 0,9 мин-1, которая в последние годы установлена для созревания 30 мкМ (Gln-)TRH-подобного пептида (Prokai L., Prokai-Tatrai K., Ouyang X., Kim H.S.,Wu W.M., Zharikova А. и Bodor N., J Med Chem 42, 1999, c. 4563-4571), можно предсказать, что время полужизни соответствующего глутаматного субстрата при его циклизации составляет примерно 100 ч,что совпадает с предложенными в настоящем описании реакционными условиями. Кроме того, принимая во внимание компартментализацию и локализацию в головном мозге QC/EC в пути секреции, in vivo в неповрежденных клетках фактические концентрации фермента и субстрата и условия реакции могут оказаться еще более оптимальными для ферментативной циклизации. А также, если N-концевой Glu заменяют на Gln, то можно ожидать еще более быстрого образования pGlu, опосредуемого QC. In vitro обе реакции подавлялись при внесении ингибиторов QC/EC-активности (фиг. 9, 10 и 15). В целом, при создании настоящего изобретения установлено, что человеческая QC, которая присутствует в больших количествах в головном мозге, вероятно, катализирует образование амилоидогенных пептидов pGlu-A из предшественников Glu-A и Gln-А, на долю которых приходится более чем 50% отложений бляшек при болезни Альцгеймера. Эти данные позволили установить, что QC/EC участвуют в образовании старческих бляшек и вследствие этого представляют собой новую мишень для разработки лекарственных средств, предназначенных для лечения болезни Альцгеймера. Второй вариант осуществления настоящего изобретения касается того, что полученные из амилоида- пептиды являются субстратом для дипептидилпептидазы IV (DP IV) или подобныхDP IV ферменты высвобождают дипептид из N-конца модифицированного амилоидного -пептида(1-11), что приводит к образованию амилоидного -пептида (3-11), у которого в качестве N-концевого аминокислотного остатка присутствует глутамин. Эти результаты представлены в примере 8. Перед расщеплением с помощью DP II, DP IV или другим подобным DP IV ферментом пептидная связь между аспарагиновой кислотой (остаток 1 амилоидного -пептида) и аланином (остаток 2 амилоидного -пептида) может быть изомеризована с образованием изоаспартильного остатка, что описано в литературе (Kuo Y.-M., Emmerling M.R., Woods A.S., Cotter R.J., Roher A.E., BBRC 237, 1997, с. 188-191;Shimizu Т., Watanabe A., Ogawara M., Mori H. и Shirasawa Т., Arch. Biochem. Biophys. 381, 2000, с. 225234). Эти изоаспартильные остатки придают амилоидному -пептиду устойчивость к расщеплению аминопептидазой и в результате коровьи бляшки содержат более высокие количества изо-Asp1-амилоидных-пептидов, что позволяет предположить наличие пониженного превращения на N-конце. Однако в настоящем изобретении впервые продемонстрировано, что под воздействием дипептидилпептидаз может высвобождаться N-концевой дипептид Н-изо-Asp1-Ala2-ОН, прежде всего в кислотных условиях. Кроме того, при создании изобретения было установлено, что изомеризация может предшествовать также расщеплению -секретазой и что изомеризация может ускорять протеолитическое расщепление, что приводит к выделению в свободном состоянии N-концевой изоаспартильной связи изоAsp1-амилоидных -пептидов, которые в свою очередь подвергаются превращению с помощью DP II, DPIV или подобных DP IV ферментов (Momand J. и Clarke S., Biochemistry 26, 1987, с. 7798-7805; Kuo Y.-M. и др., BBRC 237, 1997, c.188-191). Таким образом, ингибирование образования изоаспартила может приводить к снижению расщепления -секретазой и в свою очередь к пониженному образованию амилоидных -пептидов. Кроме того, блокада превращения изо-Asp1-амилоидного -пептида путем ингибирования DP II, DP IV или подобных DP IV ферментов должна препятствовать катализируемому QC/EC образованию [pGlu3]A из Glu3-A. Согласно третьему варианту осуществления настоящего изобретения комбинацию ингибиторов активности DP IV и ингибиторов QC можно применять для лечения болезни Альцгеймера и синдрома Дауна. Совместное действие DP IV и/или подобных DP IV ферментов и QC иллюстрируют следующие факты: а) DP IV и/или подобные DP IV ферменты расщепляют A(1-40/42), при этом высвобождается дипептид, содержащий H-Asp-Ala-OH и A(3-40/42); б) побочная реакция катализируемой QC циклизации глутаминовой кислоты с образованием пироглутаминовой кислоты происходит с очень низкой скоростью,в) глутаминовая кислота превращается в глутамин на N-конце после трансляции с помощью неизвестной ферментативной активности, а затем QC катализирует циклизацию глутамина с образованием- 11010108 пироглутаминовой кислоты после процессинга N-конца амилоидного -пептида; г) глутаминовая кислота превращается в глутамин после трансляции с помощью химического катализа или автокатализа, а на второй стадии QC катализирует циклизацию глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты после процессинга N-конца амилоидного -пептида; д) в гене APP присутствуют мутации, которые кодируют амилоидный -белок, что приводит к замене Glu в положении 3 A на Gln. После трансляции и процессинга N-конца QC катализирует циклизацию глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты; е) глутамин включается в образующуюся пептидную цепь APP вследствие функционального нарушения неизвестной ферментативной активности, и поэтому QC катализирует циклизацию N-концевого глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты после процессинга N-конца амилоидногоQC-активность в отношении N-концевого Gln может запускаться также действием различных пептидаз. Аминопептидазы могут удалять последовательно Asp и Ala из N-конца A(1-40/42),демаскируя тем самым аминокислоту в положении 3, которая может подвергаться циклизации. Дипептидилпептидазы, такие как DP I, DP II, DP IV, DP 8, DP 9 и DP 10, в одну стадию осуществляют удаление дипептида Asp-Ala. Таким образом, ингибирование аминопептидазной или дипептидилпептидазной активности можно применять для предупреждения образования A(3-40/42). Совместное действие ингибиторов DP IV и/или подобных DP IV ферментов и снижающих активность эффекторов QC можно проиллюстрировать следующим образом: а) ингибиторы DP IV и/или подобных DP IV ферментов ингибируют превращение A(1-40/42) вA(3-40/42),б) тем самым предотвращается воздействие на N-концевую глутаминовую кислоту и не происходит ее превращение либо ферментативным путем, либо с помощью химического катализа в глутамин, что в дальнейшем приводит к образованию пироглутаминовой кислоты,в) ингибиторы QC предупреждают также образование пироглутаминовой кислоты из любых молекул A(3-40/42) с модифицированными остатками и тех модифицированных молекул A(3-40/42), которые образуются в результате мутаций гена APP. При создании настоящего изобретения аналогичное совместное действие DP IV или подобныхDP IV ферментов и QC было продемонстрировано также для других пептидных гормонов, таких как глюкагон, СС-хемокины и вещество Р. Глюкагон представляет собой состоящий из 29 аминокислот полипептид, который выделяется из альфа-клеток панкреатических островков, и его функцией является поддержание нормальной глицемии путем стимуляции печеночного гликогенолиза и глюконеогенеза. Несмотря на важность этого вопроса,сохраняются противоположные мнения о механизме, ответственном за клиренс глюкагона в организме.Pospisilik с соавторами изучали ферментативный метаболизм глюкагона с помощью высокочувствительных методов масс-спектрометрии для идентификации продукта на молекулярном уровне. Инкубация глюкагона с очищенной свиной дипептидилпептидазой IV (DP IV) приводила к последовательному производству глюкагона 3-29 и глюкагонов (5-29). В человеческой сыворотке расщепление до глюкагона 3-29 сопровождалось быстрой N-концевой циклизацией глюкагона, что препятствовало дальнейшему опосредуемому DP IV гидролизу. Биологический анализ глюкагона после его инкубации с очищеннойDP IV или нормальной крысиной сывороткой продемонстрировал значительное снижение гипергликемической активности, в то время как аналогичная инкубация с крысиной сывороткой с дефицитом DP IV не приводила ни к какому снижению биологической активности глюкагона. Расщепление, для оценки которого применяли масс-спектрометрию и биологический анализ, блокировали с помощью специфического ингибитора DP IV изолейцилтиазолидина. Эти результаты свидетельствуют о том, что DP IV представляет собой основной фермент, участвующий в расщеплении и инактивации глюкагона. Эти данные нашли важное применение для определения уровней глюкагона в человеческой плазме (Pospisilik и др.,Regul Pept, 12, 96, 2001, с. 133-141). Хемотаксический белок 2 человеческих моноцитов (МСР)-2 впервые был выделен из стимулированных клеток остеосаркомы в качестве хемокина, производимого вместе с MCP-1 и MCP-3. Van Coillie с соавторами (Van Coillie Е. и др., Biochemistry 37, 1998, с. 12672-12680) клонировали из библиотеки кДНК, созданной на основе кДНК человеческих яичек, MCP-2 с удлинением на 5'-конце. Она кодировала состоящий из 76 остатков белок MCP-2, но отличалась от известной полученной из костного мозга последовательности кДНК MCP-2 кодоном 46, который кодировал Lys вместо Gln. Осуществляли анализ биологической активности этого варианта MCP-2Lys46, полученного в результате полиморфизма одного нуклеотида (SNP), и MCP-2Gln46. Кодирующие области субклонировали в бактериальном экспрессионном векторе pHEN1 и после трансформации им Escherichia coli из периплазмы выделяли два варианта белка MCP-2. С помощью расщепления по Эдману было подтверждено наличие на NH2-конце остаткаGln вместо pGlu. rMCP-2Gln46 и rMCP-2Lys46 и копии с циклическим NH2-концом оценивали на клетках моноцитов в опытах по мобилизации кальция и оценке хемотаксиса. Между изоформами rMCP-2Gln46 иrMCP-2Lys46 не было обнаружено никаких различий в биологической активности. Однако для обоих- 12010108 вариантов MCP-2 установлено, что наличие NH2-концевого пироглутамата имело решающее значение для хемотаксиса, но не было важно для мобилизации кальция. Укорочение NH2-конца rMCP-2Lys46 с помощью сериновой протеазы CD26/дипептидилпептидазы IV (CD26/DPP IV) приводило к высвобождению NH2-концевого дипептида Gln-Pro, в то время как синтетический MCP-2, несущий на NH2-концеpGlu, остался неповрежденным. Укороченный с помощью CD26/DPP IV rMCP-2Lys46(3-76) оказался практически полностью неактивным как в опытах по оценке хемотаксиса, так и в опытах по оценке передачи сигнала. Эти данные свидетельствуют о том, что NH2-концевой pGlu в MCP-2 является не только необходимым для хемотаксической активности, но также защищает белок от расщепления с помощьюCD26/DPP IV (Van Coillie Е. и др., Biochemistry, 37, 1998, с. 12672-12680). При создании настоящего изобретения с помощью анализа методом жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ/МС) установлено, что образование N-концевого остатка пироглутамата в глюкагоне 3-29 (Pospisilik и др., 2001) и в изоформах MCP-2 (Van Coillie и др., 1998), катализируется QC. Кроме того, с помощью ЖХ/МС доказано, что после катализируемого DP IV удаления двух дипептидов Lys-Pro и Arg-Pro из N-конца вещества Р, оставшееся [Gln5]вещество Р 5-11 трансформируется с помощью QC с образованием [pGlu5]вещества Р 5-11. Ингибиторы DP IV описаны в WO 99/61431. В частности, описаны ингибиторы DP IV, содержащие аминокислотный остаток и тиазолидиновую или пирролидиновую группу и их соли, прежде всегоL-треоизолейцилтиазолидин,L-аллоизолейцилтиазолидин,L-треоизолейцилпирролидин,L-аллоизолейцилтиазолидин, L-аллоизолейцилпирролидин и их соли. Дополнительными примерами низкомолекулярных ингибиторов дипептидилпептидазы IV являются такие агенты, как тетрагидроизохинолин-3-карбоксамидные производные, N-замещенные 2-цианпиролы и пирролидины, N-(N'-замещенный глицил)-2-цианпирролидины, N-(замещенный глицил)тиазолидины,N-(замещенный глицил)-4-циантиазолидины, аминоацилборпролильные ингибиторы, сконденсированные с циклопропилом пирролидины и гетероциклические соединения. Ингибиторы дипептидилпептидазы IV описаны в US 6380398; US 6011155; US 6107317; US 6110949; US 6124305; US 6172081;WO 03/024942 и WO 03/024965, содержание которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки, прежде всего касательно этих ингибиторов, их определения, применения и получения. Предпочтительными для применения в сочетании с эффекторами QC являются такие ингибиторыFE-999011, описанный у Sudre и др., Diabetes 51, 2002, с. 1461-1469 (фирма Ferring) и соединения, описанные в WO 01/34594 (фирма Guilford),при их использовании в дозах, которые указаны в приведенных выше ссылках. Более предпочтительными ингибиторами DP IV, которые можно применять в сочетании с эффекторами QC, являются дипептидные соединения, в которых аминокислоту предпочтительно выбирают из встречающихся в естественных условиях аминокислот, таких, например, как лейцин, валин, глутамин,глутаминовая кислота, пролин, изолейцин, аспарагины и аспарагиновая кислота. Подобные дипептидам соединения, применяемые согласно изобретению, в концентрации (в пересчете на дипептидные соединения) 10 мкМ снижают активность в плазме дипептидилпептидазы IV или ферментов-аналогов DP IV по меньшей мере на 10%, прежде всего по меньшей мере на 40%. Часто in vivo требуется также снижение активности по меньшей мере на 60% или по меньшей мере на 70%. Предпочтительные соединения могут обладать также способностью снижать активность максимум на 20 или 30%. Предпочтительными дипептидными соединениями являютсяL-аллоизолейцилпирролидин и его соли. Особенно предпочтительными соединениями являются глутаминилпирролидин и глутаминилтиазолидин, Н-Asn-пирролидин, H-Asn-тиазолидин, H-Asp-пирролидин, H-Asp-тиазолидин, H-Asp(NHOH)пирролидин, H-Asp(NHOH)-тиазолидин, H-Glu-пирролидин, H-Glu-тиазолидин, Н-Glu(NHOH)пирролидин, Н-Glu(NHOH)-тиазолидин, H-His-пирролидин, H-His-тиазолидин, Н-Pro-пирролидин,- 13010108 Н-Pro-тиазолидин, Н-Ile-азидидин, Н-Ile-пирролидин, H-L-алло-Ile-тиазолидин, H-Val-пирролидин и Н-Val-тиазолидин и их фармацевтически приемлемые соли. Эти соединения описаны в WO 99/61431 и ЕР 1304327. Кроме того, в настоящем изобретении предложено применение эффекторов QC в сочетании с пептидными соединениями, аналогичными субстрату, которые можно использовать для конкурентной модуляции катализа, осуществляемого дипептидилпептидазой IV. Предпочтительными пептидными соединениями являются 2-аминооктановая кислота-Pro-Ile, Abu-Pro-Ile, Aib-Pro-Ile, Aze-Pro-Ile, Cha-Pro-Ile,Ile-Hyp-Ile, Ile-Pro-алло-Ile, Ile-Pro-трет-бутил-Gly, Ile-Pro-Val, Nle-Pro-Ile, Nva-Pro-Ile, Orn-Pro-Ile,Phe-Pro-Ile, Phg-Pro-Ile, Pip-Pro-Ile, Ser(Bzl)-Pro-Ile, Ser(P)-Pro-Ile, Ser-Pro-Ile, трет-бутил-Gly-Pro-D-Val,трет-бутил-Gly-Pro-Gly, трет-бутил-Gly-Pro-Ile, трет-бутил-Gly-Pro-Ile-amide, трет-бутил-Gly-Pro-третбутил-Gly, трет-бутил-Gly-Pro-Val, Thr-Pro-Ile, Tic-Pro-Ile, Trp-Pro-Ile, Tyr(P)-Pro-Ile, Tyr-Pro-алло-Ile,Val-Pro-алло-Ile, Val-Pro-трет-бутил-Gly, Val-Pro-Val и их фармацевтически приемлемые соли, в которых трет-бутил-Gly обозначаетa Ser(Bzl) и Ser(P) обозначают бензилсерин и фосфорилсерин соответственно. Tyr(Р) обозначает фосфорилтирозин. Эти соединения описаны в WO 03/002593. Другими предпочтительными ингибиторами DP IV, которые можно применять согласно настоящему изобретению в сочетании с эффекторами QC, являются пептидилкетоны, например гидробромид 2-метилкарбонил-1-N-[(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина,гидробромид 2-метилкарбонил-1-N-[(L)-валинил-(L)-пролил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина,гидробромид 2-[(ацетилоксиметил)карбонил]-1-N-[(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина,гидробромид 2-[(бензоилоксиметил)карбонил]-1-N-[(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина,2-[(2,6-дихлорбензил)тиометил]карбонил-1-N-[(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидин,гидробромид 2-[бензоилоксиметил)карбонил]-1-N-[глицил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина,трифторацетат 2-[([1,3]-тиазолетиазол-2-ил)карбонил]-1-N-[(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина,трифторацетат 2-[(бензотиазолетиазол-2-ил)карбонил]-1-N-[N-(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)пирролидина,трифторацетат 2-[(-бензотиазолетиазол-2-ил)карбонил]-1-N-[(L)-аланилглицил]-(2S)-пирролидина,трифторацетат 2-[(пиридин-2-ил)карбонил]-1-N-[N-(L)-аланил-(L)-валинил]-(2S)-пирролидина и другие их фармацевтически приемлемые соли. Эти соединения описаны в WO 03/033524. Кроме того, согласно настоящему изобретению в сочетании с эффекторами QC можно применять замещенные аминокетоны. Предпочтительными замещенными аминокетонами являются хлорид 1-циклопентил-3-метил-1-оксо-2-пентанаминия,хлорид 1-циклопентил-3-метил-1-оксо-2-бутанаминия,хлорид 1-циклопентил-3,3-диметил-1-оксо-2-бутанаминия,хлорид 1-циклогексил-3,3-диметил-1-оксо-2-бутанаминия,хлорид 3-(циклопентилкарбонил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиния,хлорид N-(2-циклопентил-2-оксоэтил)циклогексанаминия и другие их фармацевтически приемлемые соли. Ранее считалось, что из редкой группы специфических для пролина протеаз DP IV является единственным связанным с мембраной ферментом, специфическим для пролина, представляющего собой предпоследний остаток на аминоконце полипептидной цепи. Однако были выявлены другие молекулы, даже не обладающие структурной гомологией с DP IV, но обладающие соответствующей ферментативной активностью. Подобные DP IV-ферменты, которые были выявлены к настоящему времени, представляют собой, например, протеин , участвующий в активации фибробластов, дипептидилпептидазу IV, белок,подобный дипептидиламинопептидазе, N-ацетилированную -связанную кислотную дипептидазу,пролиндипептидазу покоящихся клеток, дипептидилпептидазу II, аттрактин и белок, родственный дипептидилпептидазе IV (DPP 8), DPL1 (DPX, DP6), DPL2 и DPP 9, которые описаны в обзорных статьяхSedo и Malik (Sedo и Malik, Biochim Biophys Acta, 36506, 2001, c. 1-10) и Abbott и Gorrell (Abbott С.А. и Gorrell M.D. в: Ectopeptidases, под ред. Langner и Ansorge, изд-во Kluwer Academic/Plenum Publishers,New York, 2002, c. 171-195). В настоящее время описано клонирование и характеристики дипептидилпептидазы 10 (DPP 10) (Qi S.Y. и др., Biochemical. Journal Immediate Publication, публикация 28 марта 2003 г., рукопись BJ20021914).- 14010108 Эффекторы в контексте настоящего описания обозначают молекулы, которые связываются с ферментом и понижают или повышают его активность in vitro и/или in vivo. Некоторые ферменты несут сайты связывания для небольших молекул, которые влияют на их каталитическую активность; молекулустимулятор называют активатором. Ферменты могут нести даже несколько сайтов, которые распознаются более чем одним активатором или ингибитором. Ферменты могут выявлять концентрации различных молекул и использовать эту информацию для изменения собственной активности. Эффекторы могут модулировать ферментативную активность, поскольку ферменты могут принимать как активную, так и неактивную конформацию: активаторы являются позитивными эффекторами,ингибиторы являются негативными эффекторами. Эффекторы воздействуют не только на активные сайты ферментов, но также на регуляторные сайты или аллостерические сайты, последнее понятие применяют для того, чтобы подчеркнуть, что регуляторный сайт представляет собой элемент фермента, отличный от каталитического сайта, и для того, чтобы отделить эту форму регуляции от конкуренции между субстратами и ингибиторами на каталитическом сайте (Darnell J., Lodish H. и Baltimore D., Molecular CellBiology, 2-е изд., изд-во Scientific American Books, New York, 1990, с. 63). Предпочтительными эффекторами, предлагаемыми в настоящем изобретении, являются ингибиторы QC- и ЕС-активности. Наиболее предпочтительными являются конкурентные ингибиторы QC- и ЕС-активности. В соответствующих случаях предпочтительными являются активаторы QC-и ЕС-активности. В пептидах, предлагаемых в настоящем изобретении, каждый аминокислотный остаток обозначен однобуквенным или трехбуквенным кодом, который соответствует тривиальному названию аминокислоты, общепринятые обозначения которых представлены ниже: Понятие QC в контексте настоящего описания обозначает глутаминилциклазу (QC) иQC-подобные ферменты. QC и QC-подобные ферменты имеют идентичную или сходную ферментативную активность, обозначенную далее как QC-активность. Следует отметить, что QC-подобные ферменты могут принципиально отличаться от QC по молекулярной структуре. Понятие QC-активность в контексте настоящего описания обозначает внутримолекулярную циклизацию N-концевых остатков глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты (pGlu) илиN-концевого L-гомоглутамина или Lгомоглутамина с образованием циклического пирогомоглутаминового производного с выделением в свободном состоянии аммиака (см. ниже схемы 1 и 2). Понятие ЕС в контексте настоящего описания обозначает побочную активность QC иQC-подобных ферментов, таких как глутаматциклаза (ЕС), которая обозначена далее как ЕС-активность. Понятие ЕС-активность в контексте настоящего описания обозначает внутримолекулярную циклизацию N-концевых глутаматных остатков с образованием пироглутаминовой кислоты (pGlu) с помощью QC (см. ниже схему 3). Понятие металлзависимый фермент в контексте настоящего описания обозначает фермент(ы),для которого(ых) требуется наличие связанного иона металла для того, чтобы осуществлять присущую ему(им) каталитическую функцию и/или для которого(ых) требуется наличие связанного иона металла для образования каталитически активной структуры. Схема 3. N-концевая циклизация незаряженных глутамильных пептидов с помощью QC (ЕС) Следующим объектом настоящего изобретения является идентификация новых физиологических субстратов QC. Их идентифицировали, осуществляя эксперименты по циклизации, описанные в примере 5, с использованием пептидов млекопитающих. Предварительно человеческую QC и QC из папайи выделяли согласно процессу, описанному в примере 1. Применяемые методы описаны в примере 2, а применяемый пептидный синтез изложен в примере 6. Результаты исследования представлены в табл. 1.- 16010108 Таблица 1 Новые физиологические субстраты глутаминилциклазы количественное определение проведено с помощью экспериментов методом Все анализы осуществляли в оптимальном диапазоне активности и стабильности либо человеческой, либо растительной QC, что продемонстрировано в примере 4. Аминокислотные последовательности физиологически активных пептидов, несущих N-концевой остаток глутамина, и, следовательно, являющихся субстратами для фермента QC, представлены в табл. 2. Таблица 2 Аминокислотные последовательности физиологически активных пептидов с N-концевым остатком глутамина, превращающиеся после трансляции в пироглутаминовую кислоту (pGlu)- 20010108 Согласно четвертому варианту осуществления изобретения были идентифицированы в качестве новых физиологических субстратов для QC пептиды Gln1-гастрин (длиной 17 и 34 аминокислоты),Gln1-нейротензин и Gln1-FPP. Гастрин, нейротензин и FPP несут остаток pGlu в N-концевом положении. Установлено, что у всех пептидов этот N-концевой остаток pGlu образован из N-концевого глутамина в результате QC-катализа. Вследствие этого указанные пептиды активизируются с точки зрения их биологической функции при превращении N-концевого остатка глутамина в pGlu. Клетки, обладающие способностью к трансдукции через эпителий, прежде всего несущие гастрин(G) клетки, осуществляют координацию секреции желудочной кислоты и поступающей в желудок пищи. В современных исследованиях установлено, что из предшественника гастрина образуются продукты,обладающие несколькими видами активности, и что существует целый ряд важных моментов в биосинтезе гастрина. Участвующие в биосинтезе предшественники и промежуточные продукты (прогастрин иGly-гастрины), возможно, представляют собой факторы роста; их продукты, амидированные гастрины,регулируют пролиферацию эпителиальных клеток, дифференцировку продуцирующих кислоту париетальных клеток и секретирующих гистамин энтерохромаффиноцит-подобных клеток (ECL-клетки), и экспрессию генов, связанных с синтезом и хранением гистамина в ECL-клетках, а также острую стимуляцию секреции кислоты. Гастрин стимулирует также производство представителей семейства эпидермального фактора роста (EGF), которые в свою очередь ингибируют функцию париетальных клеток, но стимулируют рост поверхностных эпителиальных клеток. Концентрации гастрина в плазме у пациентов,зараженных Helicobacter pylori, у которых, как известно, существует повышенный риск возникновения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и рака желудка, повышены (Dockray G.J., J. Physiol., 15,1999, c. 315-324). Известно, что пептидный гормон гастрин, который выделяется из антральных G-клеток, стимулирует синтез и высвобождение гистамина из ECL-клеток в кислородпродуцирующую слизистую черезCCK-2-рецепторы. Мобилизованный гистамин индуцирует секрецию кислоты в результате связывания с Н(2)-рецепторами, локализованными на париетальных клетках. В современных исследованиях сделано предположение о том, что гастрин, как в виде полностью амидированной, так и в виде менее процессированных форм (прогастрин и удлиненный глицином гастрин), также является фактором роста в желудочно-кишечном тракте. Было установлено, что основное трофическое действие амидированного гастрина связано с кислородпродуцирующей слизистой желудка, где он вызывает повышенную пролиферацию стволовых клеток желудка и ECL-клеток, что приводит к увеличению массы париетальных иECL-клеток. С другой стороны, основной мишенью трофического действия менее процессированного гастрина (например удлиненного глицином гастрина), вероятно, является слизистая оболочка ободочной кишки (Koh T.J. и Chen, D., Regul. Pept. 93, 2000, с. 337-344). Согласно пятому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение повышающих активность эффекторов QC для стимуляции пролиферации клеток желудочно-кишечного тракта, прежде всего пролиферации слизистых клеток желудка, пролиферации эпителиальных клеток,дифференцировки продуцирующих кислоту париетальных клеток и секретирующих гистамин энтерохромаффиноцит-подобных клеток (ECL) и экспрессии генов, связанных с синтезом и хранением гистамина в ECL-клетках, а также для стимуляции острой секреции кислоты у млекопитающих путем поддерживания или повышения концентрации активного [pGlu1]гастрина. Согласно шестому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение понижающих активность эффекторов QC для лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и рака желудка, связанного или не связанного с Heliobacter pylori, и синдрома Золлингера-Эллисона у млекопитающих путем снижения скорости превращения неактивного Gln-гастрина в активный [pGlu1]гастрин. Нейротензин (НТ) представляет собой нейропептид, участвующий в патофизиологии шизофрении,который специфически модулирует системы нейротрасмиттеров (нейромедиаторов), регуляция которых,как продемонстрировано ранее, нарушается при этом заболевании. Клинические исследования, при которых определяли концентрации НТ в спиномозговой жидкости (СМЖ), позволили выявить группу страдающих шизофренией пациентов с пониженными концентрациями НТ в СМЖ, которые восстанавливались при эффективном лечении с помощью антипсихотических лекарственных средств. Известны также данные, которые подтверждают роль НТ-систем в механизме действия антипсихотических лекарственных средств. Поведенческие и биохимические реакции при введении НТ в центральную нервную систему очень сходны с реакциями на системное введение антипсихотических лекарственных средств, и антипсихотические лекарственные средства повышают нейротрансмиссию НТ. Совокупность этих данных привела к гипотезе о том, что НТ функционирует в качестве эндогенного антипсихотического агента. Кроме того, обычные и атипичные антипсихотические лекарственные средства по-разному изменяют нейротрансмиссию НТ в области черного тела и в мезолимбических допаминсодержащих конечных областях, и эти эффекты обусловливают способность вызывать побочные действия и эффективность соответственно (Binder Е.В. и др., Biol Psychiatry, 50, 2001, с. 856-872). Согласно седьмому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение повышающих активность эффекторов QC для приготовления антипсихотических лекарственных средств и/или для лечения шизофрении у млекопитающих. Эффекторы QC либо поддерживают, либо повышают- 21010108 концентрацию активного [pGlu1]нейротензина. Стимулирующий оплодотворение пептид (FPP), трипептид, родственный тиреотропин-рилизингфактору (TRH), обнаружен в семенной плазме. Современные исследования in vitro и in vivo позволили установить, что FPP играет важную роль в регуляции фертильности спермы. В частности, FPP прежде всего стимулирует включение неспособных к оплодотворению (неактивных) сперматозоидов и существенно быстрее делает их фертильными, а затем поддерживают эту способность посредством того, что сперматозоиды не подвергаются спонтанной потере акросомы и вследствие этого не теряют способность к оплодотворению. Аденозин, который, как известно, регулирует путь трансдукции сигнала аденилилциклазы (АС)/цАМФ, приводит к аналогичным реакциям и фактически усиливает их. Установлено, что иFPP, и аденозин стимулируют производство цАМФ в неактивных клетках, но ингибируют его в активных клетках, причем FPP-рецепторы каким-то образом взаимодействуют с аденозиновыми рецепторами и G-протеинами для осуществления регуляции АС. Эти события влияют на состояние фосфорилирования тирозина различных белков, некоторые из которых важны для начального включения, другие, вероятно, участвуют в самой реакции акросомы. Кальцитонин и ангиотензин II, также обнаруженные в семенной плазме, оказывают аналогичные действия in vitro на неактивные сперматозоиды и могут усиливать реакции на FPP. Эти молекулы оказывают аналогичные действия in vivo, оказывая влияние на фертильность путем стимуляции и затем поддержания способности к оплодотворению. Любое уменьшение доступности FPP, аденозина, кальцитонина и ангиотензина II или дефекты в их рецепторах приводят к развитию мужского бесплодия (Fraser L.R. и Adeoya-Osiguwa S.А., Vitam Horm 63, 2001, с. 1-28). Согласно восьмому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение понижающих активность эффекторов QC для приготовления препятствующих оплодотворению лекарственных средств и/или для снижения фертильности у млекопитающих. Понижающие активность эффекторы QC снижают концентрацию активного [pGlu1]FPP, что приводит к предупреждению способности к оплодотворению спермы и к дезактивации сперматозоидов. В противоположность этому установлено,что повышающие активность эффекторы QC могут стимулировать фертильность особей мужского пола и их можно применять для лечения бесплодия. Согласно девятому варианту осуществления настоящего изобретения были идентифицированы дополнительные физиологические субстраты QC. Они представляют собой Gln1-CCL2, Gln1-CCL7,Gln1-CCL8, Gln1-CCL16, Gln1-CCL18 и Gln1-фракталкин (более подробные характеристики приведены в табл. 2). Эти полипептиды играют важную роль в таких патофизиологических состояниях, как подавление пролиферации миелодных клеток-предшественников, неоплазии, воспалительных реакций хозяина,рака, псориаза, ревматоидного артрита, атеросклероза, гуморальных и клеточно-опосредуемых иммунных ответов, процессов адгезии и миграции лейкоцитов в эндотелий, а также воспалительных процессов,связанных с болезнью Альцгеймера, СБД и СДД. В настоящее время в клинических опытах изучено несколько цитотоксических вакцин на основе Т-лимфоцитарных пептидов против гепатита В, вируса иммунодефицита человека и меланомы. Одной из перспективных вакцин против меланомы, которую применяют индивидуально или в сочетании с другими опухолевыми антигенами, является декапептид ELA. Этот пептид является аналогом иммунодоминантного пептида антигена Melan-A/MART-1, который несет N-концевую глутаминовую кислоту. Известно, что аминогруппа и гамма-карбоксильная группа глутаминовых кислот, а также аминогруппа и гамма-карбоксамидная группа глутаминов легко конденсируются с образованием пироглутаминовых производных. Для решения указанных проблем, связанных со стабильностью, было разработано несколько пептидов, представляющих интерес с фармацевтической точки зрения, которые содержали пироглутаминовую кислоту вместо N-концевого глутамина или глутаминовой кислоты без потери фармакологических свойств. Однако по сравнению с ELA у производного пироглутаминовой кислоты(PyrELA), а также N-концевого кэппированного ацетилом производного (AcELA) не удалось сохранить цитотоксическую активность, присущую Т-лимфоцитами (CTL). Несмотря на то, что в PyrELA и AcELA были внесены кажущиеся очень небольшими модификации, эти два производных, вероятно, обладают более низкой аффинностью по сравнению с ELA к специфическому классу I главного комплекса гистосовместимости. Следовательно, для того чтобы полностью сохранить активность ELA, следует избегать образования PyrELA (Beck А. и др., J. Pept. Res. 57, 2001, с. 528-538.). В последние годы установлено, что при меланомах происходит также сверхэкспрессия глутаминилциклазы (QC) (Ross D.T. и др., Nat Genet 24, 2000, с. 227-235). Согласно десятому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение эффекторов QC для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения патофизиологических состояний, например, для подавления пролиферации миелоидных клеток-предшественников,неоплазии, воспалительных реакций хозяина, рака, злокачественного метастаза, меланомы, псориаза,ревматоидного артрита, атеросклероза, нарушенных гуморальных и клеточно-опосредуемых иммунных ответов, процессов адгезии и миграции лейкоцитов в эндотелий, а также воспалительных процессов, связанных с болезнью Альцгеймера, СБД и СДД. Согласно одиннадцатому вариант осуществления настоящего изобретения был идентифицированGln1-орексин А в качестве физиологического субстрата QC. Орексин А представляет собой нейропептид,- 22010108 который играет важную роль в регуляции всасывания пищи и нарушении сна, вероятно, в результате координации комплекса поведенческих и физиологических реакций этих комплементарных связанных с гомеостазом функций. Он играет также существенную роль в связанной с гомеостазом регуляции энергетического метаболизма, функции вегетативной нервной системы, гормональном балансе и регуляции общей воды организма. Согласно двенадцатому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение эффекторов QC для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения нарушенного всасывания пищи и сна, нарушенной связанной с гомеостазом регуляции энергетического метаболизма, нарушенной функции вегетативной нервной системы, нарушенного гормонального баланса и нарушенной регуляции общей воды организма. Экспансия полиглутамина в некоторые белки приводит к возникновению нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Паркинсона и болезнь Кеннеди. Их механизм пока остается неясным. Биохимические свойства полиглутаминовых повторов позволяют дать одно из возможных объяснений: эндолитическое расщепление связи глутаминил-глутаминил с последующим образованием пироглутамата может принимать участие в патогенезе в результате повышения катаболитической стабильности, гидрофобности, амилоидогенеза и нейротоксичности полиглутаминильных белков (Saido Т., Med. Hypotheses,54(3), март 2000, с. 427-429). Таким образом, согласно тринадцатому варианту осуществления настоящего изобретения предложено применение эффекторов QC для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения болезни Паркинсона и болезни Гентингтона. Согласно четырнадцатому варианту осуществления настоящего изобретения предложен общий путь снижения или ингибирования ферментативной активности QC. Предложены также репрезентативные ингибиторы. Первоначально в качестве ингибиторов QC млекопитающих были описаны только 1,10-фенантролин и восстановленный 6-метилптерин (Busby W.H.J., и др., J. Biol. Chem. 262, 1987,с. 8532-8536). ЭДТК не ингибирует QC, из чего было сделано заключение, что QC не представляет собой металлзависимый фермент (Busby W.H.J, и др., J. Biol. Chem. 262, 1987, с. 8532-8536; Bateman R.C.J., и др., Biochemistry 40, 2001, с. 11246-11250; Booth R.E. и др., ВМС Biology 2, 2004). Однако при создании настоящего изобретения установлено, что человеческая QC и другие QC животного происхождения являются металлзависимыми ферментами, что доказано по характеристиками ингибирования QC 1,10-фенантролином, дипиколиновой кислотой, 8-гидроксихинолином и другими хелаторами (фиг. 18,19) и по реактивации QC ионами переходных металлов (фиг. 20). И, наконец, зависимость от металлов обнаруживается при сравнении с последовательностями других зависимых от металлов ферментов, что свидетельствует о превращении хелатирующих аминокислотных остатков также и в человеческой QC(фиг. 21). Взаимодействие соединений с ионом металла, связанным с активным сайтом, представляет собой общий путь ингибирования QC-активности. При создании настоящего изобретения установлено, что имидазольные производные являются эффективными ингибиторами QC. С помощью непрерывного анализа (подробно описанного в примере 2),проанализирован целый ряд имидазольных производных в плане их способности ингибировать человеческую QC в качестве представителя высококонсервантивных QC млекопитающих. Таким образом, в настоящем изобретении предложены имидазольные производные, а также гистидин и его производные в качестве понижающих активность эффекторов QC и описаны их характеристики с точки зрения типа ингибирования и эффективности. Структуры и значения Ki представлены в табл. 3 и 4. Результаты подробно описаны в примере 7.- 23010108 Таблица 3 Константы ингибирования имидазольных производных в катализируемой человеческой QC реакции. Опыты проводили при 30 С в 0,05 М Трис-HCl-буфере, pH 8,0, содержащем 5 мМ ЭДТК- 25010108 Таблица 4 Ингибирование QC L-гистамином и его двумя биологическими метаболитами Согласно пятнадцатому варианту осуществления изобретения предложены новые ингибиторы QC иQC-подобных ферментов, на основе цистеамина. Помимо имидазольных производных и гидроксаматов в качестве ингибиторов металлзависимых ферментов часто упоминают тиольные реагенты (Lowther W.Т. и Matthews, B.W., Chem. Rev. 102, 2002,с. 4581-4607; Lipscomb W.N. и Strter N., Chem. Rev. 96, 1996, c. 2375-2433). Тиольные пептиды описаны также в качестве ингибиторов родственной QC аминопептидазы Clan МН (Huntington K.М., Biochemistry 38, 1998, с. 15587-15596). Хотя эти ингибиторы являются неактивными в отношении QC млекопитающих, можно предположить, что выделенные цистеаминные производные будут представлять собой эффективные конкурентные ингибиторы QC (фиг. 23). Настоящее изобретение относится к ингибиторам QC, которые в целом описываются формулой 1,или их фармацевтически приемлемым солям, включая все стереоизомеры: где R1-R6 независимо друг от друга обозначают Н или разветвленную или неразветвленную алкильную цепь, разветвленную или неразветвленную алкенильную цепь, разветвленную или неразветвленную алкинильную цепь, карбоцикл, арил, гетероарил, гетероцикл, азааминокислоту, аминокислоту или ее миметик, пептид или его миметик; все вышеперечисленные остатки необязательно могут быть замещены;n может обозначать 0, 1, 2, предпочтительно 1, наиболее предпочтительно 2. В контексте настоящего описания и в формуле изобретения понятие алкил может обозначатьC1-C8 алкильную группу; например, алкильная группа может обозначать метильную, этильную, пропильную, изопропильную или бутильную группу. Понятие алк, например в понятии алкокси, и понятие алкан, например в понятии алканоил,имеют значения, указанные для алкила; ароматические (арильные) соединения обозначают предпочтительно замещенные или необязательно незамещенные фенильную, бензильную, нафтильную, бифенильную или антраценовую группы, которые предпочтительно содержат по меньшей мере 8 атомов С; понятие алкенил может обозначать C2-C10 алкенильную группу, предпочтительно C2-C6 алкенильную группу, которая имеет двойную(ые) связь(и) в любом требуемом положении и может быть замещенной или незамещенной; понятие алкинил может обозначать C2-C10 алкинильную группу, предпочтительноC2-C6 алкинильную группу, которая имеет тройную(ые) связь(и) в любом требуемом положении и может быть замещенной или незамещенной; понятие замещенный или заместитель может обозначать любое требуемое замещение одной или несколькими, предпочтительно одной или двумя алкильными, алкенильными, алкинильными, одно- или мультивалентными ацильными, алканоильными, алкоксиалканоильными или алкоксиалкильными группами; вышеуказанные заместители в свою очередь могут нести одну или несколько (но предпочтительно не нести вообще) алкильных, алкенильных, алкинильных, од- 26010108 но- или мультивалентных ацильных, алканоильных, алкоксиалканоильных или алкоксиалкильных групп в качестве боковых групп. В контексте настоящего описания и в формуле изобретения понятие ацил может означатьC1-C4 ацильный фрагмент; и карбоцикл может обозначать C3-C12 карбоциклический фрагмент, предпочтительно C4-, С 5-или С 6 карбоциклический фрагмент. Гетероарил имеет значения, указанные для арила,в котором 1-4 и более предпочтительно 1, 2 или 3 кольцевых атома заменены гетероатомами типа N, S или О. Гетероцикл имеет значения, указанные для циклоалкила, в котором 1, 2 или 3 кольцевых атома заменены гетероатомами типа N, S или О. Понятие пептидные миметики само по себе является известным специалисту в данной области. Предпочтительно оно относится к соединениям, которые имеют вторичную структуру типа пептида и необязательно дополнительные структурные характеристики; их механизм действия в основном аналогичен или идентичен механизму действия нативного пептида; однако их активность (например, в качестве антагониста или ингибитора) может быть изменена по сравнению с нативным пептидом, прежде всего относительно рецепторов или ферментов. Кроме того, они могут имитировать действие нативного пептида (агонист). Примерами пептидных миметиков являются миметики-носители, непептидные миметики,пептоиды, нуклеиновые кислоты пептида, олигопирролиноны, винилогпептиды и олигокарбаматы. Определение таких пептидных миметиков см. в Lexikon der Chemie, изд-во Spektrum Akademischer Verlag,Heidelberg, Berlin, 1999. Понятие азааминокислота обозначает аминокислоту, в которой хиральная -СН-группа заменена атомом азота, в то время как азапептид обозначает пептид, в котором хиральная -СН-группа одного или нескольких аминокислотных остатков в пептидной цепи заменена атомом азота. Роль тиольной и аминогруппы можно понять путем сравнения ингибирующей активности диметилцистеамина, цистеамина, меркаптоэтанола, этилендиамина, этаноламина, данные о которой представлены в табл. 5. Только соединения, несущие амино- и тиольную группу, обладали эффективностью, удаление или модификация любой из групп приводила к снижению ингибирующей активности. Кроме того, зависимость от pH ингибирования мышиной QC цистеамином, диметилцистеамином и меркаптоэтанолом характеризуется различиями, которые свидетельствуют о том, что статус протонирования ингибитора влияет на связывание ингибитора с активным сайтом (фиг. 22). Таблица 5 Сравнение эффективности соединений-производных цистеамина,в отношении ингибирования QC (н.и. обозначает, что ингибирование не обнаружено в концентрации 5 мМ, pH 8,0, 30 С и концентрации субстрата в образце,составляющей 1 KM При создании изобретения в процессе изучения ферментативной активности неожиданно было установлено, что помимо N-концевого глутаминильного остатка, N-концевые -гомоглутаминильные остатки удовлетворяют характеристикам в качестве субстратов QC из растений и млекопитающих,N-концевой -гомоглутаминильный остаток превращался в 5-членное лактамовое кольцо посредством- 27010108 реакции, катализируемой человеческой QC и QC из папайи соответственно. Результаты описаны в примере 5. Применяемый метод проиллюстрирован в примере 2, а пептидный синтез осуществляли согласно методу, описанному в примере 6. Еще один предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к способам скрининга эффекторов QC. Предпочтительный способ скрининга для идентификации модифицирующих активность эффекторов QC из группы соединений, предусматривает стадии, которые заключаются в том, что: а) приводят в контакт соединения с QC в условиях, которые позволяют осуществлять их связывание; б) добавляют субстрат QC; в) оценивают превращение субстрата или необязательно определяют остаточную QC-активность; г) количественно оценивают изменения в превращении субстрата и/или ферментативной активности QC для идентификации модифицирующего активность эффектора. Другой предпочтительный способ скрининга аналогичен методу идентификации и отбора эффекторов, которые взаимодействуют непосредственно или опосредованно с ионом металла, связанным с активным сайтом QC, и он предусматривает стадии, которые заключаются в том, что: а) приводят в контакт соединения с QC в условиях, которые позволяют осуществлять их связывание; б) добавляют субстрат QC, который подвергается превращению с помощью QC; в) оценивают превращение субстрата или необязательно определяют остаточную QC-активность; и г) количественно оценивают изменения в превращении субстрата и/или ферментативной активностиQC, где изменения можно использовать для идентификации модифицирующего активность эффектора. Предпочтительными для применения в вышеуказанных методах скрининга являются QC млекопитающих или QC из папайи. Особенно предпочтительной является QC млекопитающих, так как эффекторы, идентифицированные с помощью указанных способов скрининга, можно использовать для лечения болезней млекопитающих, прежде всего человека. Эти агенты, отобранные с помощью описанных выше способов скрининга, могут осуществлять снижение превращения по меньшей мере одного из субстратов QC (негативные эффекторы, ингибиторы) или путем увеличения превращения по меньшей мере одного субстрата QC (позитивные эффекторы, активаторы). Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут быть превращены в кислотноаддитивные соли, прежде всего фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли. Соли соединений, предлагаемых в изобретении, могут находиться в форме неорганических или органических солей. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно превращать и применять в форме кислотно-аддитивных солей, прежде всего в форме фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей. Фармацевтически приемлемая соль, как правило, находится в форме, в которой основная боковая цепь протонирована неорганической или органической кислотой. Репрезентативными органическими или неорганическими кислотами являются соляная, бромисто-водородная, перхлорная, серная, азотная,фосфорная, уксусная, пропионовая, гликолевая, молочная, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная,винная, лимонная, бензойная, миндальная, метансульфоновая, гидроксиэтансульфоновая, бензолсульфоновая, щавелевая, памоновая, 2-нафталинсульфоновая, паратолуолсульфоновая, циклогексансульфамовая, салициловая, сахариновая или трифторуксусная кислоты. Подразумевается, что все формы соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, в виде кислотно-аддитивных солей подпадают под объем настоящего изобретения. Учитывая близкое сходство соединений в свободной форме и соединений в форме соли, следует иметь в виду, что когда в настоящем описании упоминается соединение, то при этом подразумевается соответствующая его соль, при условии, что существует возможность ее получения и применения в определенных условиях. Если соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, имеют по меньшей мере один хиральный центр, то они могут существовать в виде энантиомеров. Если соединения имеют два или более хиральных центра, то они могут, кроме того, существовать в виде диастереоизомеров. Следует иметь в виду, что все такие изомеры и их смеси подпадают под объем настоящего изобретения. Кроме того, некоторые кристаллические формы соединений могут существовать в полиморфной форме, и такие соединения подпадают под объем настоящего изобретения. Кроме того, некоторые соединения могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или с обычными органическими растворителями, и подразумевается, что такие сольваты также подпадают под объем настоящего изобретения. Соединения, включая их соли, можно получать также в форме гидратов или в форме, содержащей другие растворители, применяемые для их кристаллизации. Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу предупреждения или лечения состояния, опосредуемого модуляцией активности фермента QC у индивидуума, нуждающегося в этом, который заключается в том, что вводят любое из соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, или содержащих их фармацевтических композиций в количестве и согласно схеме приема лекарственного средства, которая обеспечивает терапевтическую эффективность для лечения состояния. Кро- 28010108 ме того, под объем настоящего изобретения подпадает применение соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, и их соответствующих фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей для приготовления лекарственного средства, предназначенного для предупреждения или лечения состояния у индивидуума, опосредуемого модуляцией активности QC. Соединение можно вводить пациенту с помощью любого стандартного пути введения, включая (но не ограничиваясь ими) внутривенное, оральное, подкожное, внутримышечное, внутрикожное, парентеральное введение и их комбинации. Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются фармацевтические композиции, представляющие собой лекарственные средства, которые содержат по меньшей мере одно соединение, предлагаемое в изобретение, или его соль необязательно в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и/или растворителями. Фармацевтические композиции могут иметь, например, форму препаратов для парентерального или энтерального введения и содержать соответствующие носители, или могут иметь форму препаратов для орального введения, которые могут содержать соответствующие носители, пригодные для орального введения. Предпочтительно они находятся в форме препаратов для орального введения. Эффекторы QC-активности, вводимые согласно изобретению, можно применять в составе фармацевтических препаратов или комплексов препаратов в качестве ингибиторов QC- и ЕС-активности,предпочтительно конкурентных ингибиторов, или в сочетании с ингибиторами ферментов, конкурентными ингибиторами ферментов, субстратами, псевдосубстратами, ингибиторами экспрессии QC, связывающимися белками или антителами к таким белковым ферментам, которые снижают концентрацию белка QC в организме млекопитающих. Соединения, предлагаемые в изобретении, позволяют регулировать лечение применительно к конкретным пациентам и заболеваниям, в частности при их использовании можно избегать индивидуальной непереносимости, аллергии и побочных действий. Соединения обладают также различной зависимостью активности от времени. Таким образом, у врача, осуществляющего лечение, имеется возможность различного подхода к индивидуальному состоянию пациента: он может точно регулировать, с одной стороны, быстроту начала действия и, с другой стороны, продолжительность действия и прежде всего интенсивность действия. Предпочтительный способ лечения, предлагаемый в изобретении, представляет собой новый подход к лечению или предупреждению состояния, опосредуемого модуляцией активности фермента QC у млекопитающих. Его преимущество заключается в том, что он является простым, пригодным для коммерческого применения и удобным для применения, прежде всего при лечении заболеваний, которые обусловлены нарушением баланса концентрации физиологически активных субстратов QC, например перечисленных в табл. 1 и 2, при лечении млекопитающих, прежде всего при лечении человека. Соединения предпочтительно можно вводить, например, в форме фармацевтических препаратов,которые содержат действующее вещество в сочетании с общепринятыми добавками, такими как разбавители, эксципиенты и/или носители, известные в данной области техники. Их можно вводить, например,парентерально (например, i.v. в физиологическом растворе) или энтерально (например, орально в виде композиции со стандартными носителями). В зависимости от их эндогенной стабильности и биологической доступности можно вводить одну или несколько доз соединений в день для достижения требуемой нормализации уровней глюкозы в крови. Такие дозы для человека могут составлять, например, примерно от 0,01 до 250,0 мг в день, предпочтительно примерно от 0,01 до 100 мг соединения на 1 кг веса тела. Путем введения млекопитающим эффекторов QC-активности можно предупреждать или облегчать или лечить такие состояния, как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна, семейная британская деменция(СБД), семейная датская деменция (СДД), язвенная болезнь и рак желудка, связанный или не связанный с заражением Heliobacter pylori, колоректальный рак, синдром Золлингера-Эллисона, патогенные психические состояния, шизофрения, бесплодие, неоплазия, воспалительные реакции хозяина, рак, псориаз,ревматоидный артрит, атеросклероз, нарушенные гуморальные и клеточно-опосредуемые иммунные ответы, нарушенные процессы адгезии и миграции лейкоцитов в эндотелий, нарушенное всасывание пищи,нарушенный сон, нарушенная связанная с гомеостазом регуляция энергетического метаболизма, нарушенная функция вегетативной нервной системы, нарушенный гормональный баланс и нарушенная регуляция общей воды организма. Кроме того, путем введения млекопитающему эффекторов QC-активности можно стимулировать пролиферацию клеток желудочно-кишечного тракта, предпочтительно пролиферацию слизистых клеток желудка, эпителиальных клеток, острую секрецию кислоты и дифференцировку продуцирующих кислоту париетальных клеток и секретирующих гистамин энтерохромаффиноцит-подобных клеток. Кроме того, введение млекопитающему ингибиторов QC может приводить к потере функции сперматозоидов, подавляя тем самым мужскую фертильность. Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ регуляции и контроля мужской фертильности и применение понижающих QCактивность эффекторов для приготовления контрацептивных лекарственных средств для особей мужского пола. Кроме того, путем введения млекопитающему эффекторов QC-активности можно подавлять пролиферацию миелоидных клеток-предшественников.- 29010108 Соединения, применяемые согласно изобретению, можно включать хорошо известным методом в состав стандартных композиций, таких, например, как таблетки, капсулы, драже, пилюли, суппозитории,гранулы, аэрозоли, сиропы, жидкие, твердые и кремообразные эмульсии и суспензии и растворы, с использованием инертных нетоксичных фармацевтически приемлемых носителей и добавок или растворителей. В каждой из таких композиций обладающие терапевтической эффективностью соединения предпочтительно присутствуют в концентрации примерно от 0,1 до 80 мас.%, более предпочтительно от 1 до 50 мас.% в пересчете на общую массу смеси, т.е. в количествах, достаточных для обеспечения требуемого диапазона доз. Субстанции можно применять в качестве лекарственных средств в форме драже, капсул, содержащих две таблетки капсул, жевательных капсул, таблеток, капель, сиропов или также в виде суппозиториев или в виде назальных спреев. Композиции можно предпочтительно приготавливать, например, путем разбавления действующего вещества растворителями и/или носителями необязательно с применением эмульгаторов и/или диспергирующих агентов, например, в том случае, когда в качестве разбавителя используют воду, необязательно можно применять в качестве вспомогательных растворителей органические растворители. Примерами эксципиентов, которые можно применять согласно настоящему изобретению, являются вода, нетоксичные органические растворители, такие как парафины (например, фракции нефтепродуктов); растительные масла (например, рапсовое масло, арахисовое масло, кунжутное масло); спирты (например, этиловый спирт, глицерин); гликоли (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль); твердые носители, такие, например, как природные измельченные в порошок минералы (например,высокодисперсный диоксид кремния, силикаты); сахара (например, сахар-сырец, лактоза и декстроза); эмульгаторы, такие как неионные и анионные эмульгаторы (например, эфиры полиоксиэтилена и жирной кислоты, простые эфиры полиоксиэтилена и жирного спирта, алкилсульфонаты и арилсульфонаты); диспергирующие агенты (например, лигнин, сульфитный щелок, метилцеллюлоза, крахмал и поливинилпирролидон) и замасливатели (например, стеарат магния, тальк, стеариновая кислота и лаурилсульфат натрия) и необязательно корригенты. Введение можно осуществлять стандартным методом, предпочтительно энтерально или парентерально, прежде всего орально. При энтеральном введении таблетки могут содержать в дополнение к указанным носителям дополнительные добавки, такие как цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция, наряду с различными добавками, такими как крахмал, предпочтительно картофельный крахмал, желатин и т.п. Кроме того, дополнительно в процессе таблетирования можно применять замасливатели,такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. В случае водных суспензий и/или элексиров,предназначенных для орального введения, можно добавлять к действующим веществам, помимо вышеуказанных эксципиентов, различные корригенты или красители. В случае парентерального введения можно применять растворы действующих веществ с использованием пригодных жидких носителей. Было установлено, что, как правило, в случае внутривенного введения предпочтительно вводить количества, составляющие примерно от 0,01 до 2,0 мг/кг, предпочтительно примерно от 0,01 до 1,0 мг/кг веса тела в день, а в случае энтерального введения доза составляет примерно от 0,01 до 2 мг/кг, предпочтительно примерно от 0,01 до 1 мг/кг веса тела в день. Тем не менее, в некоторых случаях необходимо отступать от указанных количеств в зависимости от веса тела экспериментального животного или пациента или от пути введения, а также в зависимости от вида животного и его индивидуальной реакции на лекарственное средство или от интервала, с которым осуществляют введение. Следовательно, в определенных случаях может оказаться достаточным применять дозы, меньшие, чем указанные выше минимальные количества, в то время как в других случаях указанный верхний предел может быть превышен. В случаях, когда требуется вводить относительно большие количества, может оказаться целесообразным разделять эти количества на несколько однократных доз, вводимых в один день. Для применения для лечения человека можно использовать тот же самый диапазон доз. Вышеуказанные комментарии применимы также и в этом случае. Примеры фармацевтических композиций 1. Капсулы, содержащие по 100 мг соединения, предлагаемого в изобретении, на капсулу. Для получения примерно 10000 капсул приготавливают раствор, имеющий следующий состав: