Карбониламинопроизводные как новые ингибиторы гистондеацетилазы

007908 Данное изобретение относится к соединениям, обладающим ферментативной активностью ингибирования гистондеацетилазы (HDAC). Оно также относится к способам их получения, к композициям,содержащим их, а также к их применению, как in vitro, так и in vivo, для ингибирования HDAC и в качестве лечебного средства, например в качестве лекарственного средства для подавления пролиферативных состояний, таких как рак и псориаз. Во всех эукариотических клетках геномная ДНК в хроматине ассоциирует с гистонами с образованием нуклеосом. Каждая нуклеосома состоит из октамера белка, состоящего из двух копий каждого из гистонов Н 2 А, Н 2 В, Н 3 и Н 4. ДНК обвивает такую белковую сердцевину с помощью основных аминокислот гистонов, взаимодействующих с отрицательно заряженными фосфатными группами ДНК. Самой обычной посттрансляционной модификацией таких коровых гистонов является обратимое ацетилирование -аминогрупп консервативных высокоосновных N-концевых лизиновых остатков. Устойчивое состояние ацетилирования гистонов устанавливается за счет динамического равновесия между конкурирующими гистонацетилтрансферазой(ами) и гистондеацетилазой(ами), называемыми в данном описании"HDAC". Ацетилирование и деацетилирование гистонов долгое время связывали с транскрипционным контролем. Современное клонирование генов, кодирующих различные гистонацетилтрансферазы и гистондеацетилазы, дало возможное объяснение соотношения между ацетилированием гистонов и транскрипционным контролем. Обратимое ацетилирование гистонов может привести к реконструкции хроматина и, как таковое, действует как контрольный механизм транскрипции генов. Вообще, гиперацетилирование гистонов облегчает экспрессию генов, в то время как деацетилирование гистонов коррелирует с транскрипционной репрессией. Показано, что гистонацетилтрансферазы действуют как коактиваторы транскрипции, в то время как гистондеацетилазы, как было обнаружено, принадлежат к каскаду реакций транскрипционной репрессии. Динамическое равновесие между ацетилированием и деацетилированием гистонов существенно для нормального роста клеток. Ингибирование гистондеацетилазы приводит к задержке клеточного цикла,клеточной дифференцировке, апоптозу и реверсированию трансформированного фенотипа. Поэтому ингибиторы HDAC могут иметь большой терапевтический потенциал при лечении клеточнопролиферативных заболеваний или состояний (Marks et al., Nature Reviews: Cancer, 1:194-202, 2001). Исследование ингибиторов гистондеацетилаз (HDAC) показывает, что действительно эти ферменты играют важную роль в пролиферации и дифференцировке клеток. Ингибитор трихостатин А (TSA) вызывает задержку клеточного цикла в обеих фазах G1 и G2, возвращает в исходное состояние трансформированный фенотип различных клеточных линий и индуцирует дифференцировку клеток лейкоза Фрейда и др. Сообщалось, что TSA (и субероиланилидгидроксамовая кислота - SAHA) ингибирует рост клеток, индуцирует терминальную дифференцировку и предотвращает образование опухолей у мышей(Finnin et al., Nature, 401:188-193, 1999). Также сообщалось, что трихостатин А пригоден при лечении фиброза, например фиброза печени, и цирроза печени (Geerts et al., заявка на европейский патент ЕР 0827742, опубликована 11 марта 1998 г.). В международной заявке WO01/38322, опубликованной 31 мая 2001 г., описываются, среди прочих,ингибиторы гистондеацетилазы общей формулы Cy-L1-Ar-Y1-C(О)-NH-Z, а также композиции и способы лечения клеточнопролиферативных заболеваний и состояний. В международной заявке WO01/7 0675, опубликованной 27 сентября 2001 г., описываются ингибиторы гистондеацетилазы формулы Cy-X-Y1-W и Cy-S(О)2-NH-Y3-W, а также композиции и способы лечения клеточнопролиферативных заболеваний и состояний. Проблема, которую следует решить, состоит в получении ингибиторов гистондеацетилазы с высокой ферментативной активностью, показывающих также такие выгодные свойства, как клеточная активность и повышенная биологическая доступность, предпочтительно оральная биологическая доступность,и имеющих слабые побочные действия или не имеющих их. Новые соединения настоящего изобретения решают описанные выше проблемы. Соединения отличаются от соединений известного уровня техники по строению. Соединения настоящего изобретения показывают in vitro превосходную ферментативную активность ингибирования гистондеацетилазы. Соединения настоящего изобретения обладают выгодными свойствами в отношении клеточной активности и специфическими свойствами в отношении ингибирования развития клеточного цикла в обеих контрольных точках G1 и G2 (способность индуцировать р 21). Соединения настоящего изобретения показывают хорошую метаболическую устойчивость и высокую биологическую доступность, и конкретнее, они показывают оральную биологическую доступность. Данное изобретение относится к соединениям формулы (I)t равен 0, 1, или 2 и когда t равен 0, тогда имеется в виду непосредственная связь; каждый Q представляет собой азот или каждый X представляет собой азот или каждый Y представляет собой азот или-L- представляет собой непосредственную связь; каждый R3 представляет независимо атом водорода, и один атом водорода может быть заменен заместителем, выбранным из арила;C1-6-алкилокси; каждый R6 и R7 может находиться у атома азота, замещая водород; его N-оксидные формы, фармацевтически приемлемые соли присоединения и их стереохимически изомерные формы. Предпочтительным воплощением изобретения является соединение формулы (I), где n равен 1; m равен 0 или 1; t равен 0, 1 или 2; каждый Q представляет собойR1 представляет собой -C(O)NH(OH); R2 представляет собой водород; -L- представляет собой непосредственную связь; R4 представляет собой водород; R5 представляет собой водород; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-20), (а-27), (а-28), (а-29), (а-41) или (а-42); каждый s равен, независимо, 0, 1 или 2; и каждый R6 выбирают независимо из числа водорода,галогена, C1-6-алкила или C1-6-алкилокси. Еще одним предпочтительным воплощением изобретения является соединение формулы (I), а именно соединение представленное формулой соединение 3 Другим воплощением настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые носители и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эф-2 007908 фективное количество соединения формулы (I). Еще одним воплощением настоящего изобретения является способ получения фармацевтической композиции тщательным смешиванием фармацевтически приемлемых носителей и соединений формулы (I). Следующим воплощением изобретения является применение соединения формулы (I) в качестве лекарственного средства. К еще одному воплощению настоящего изобретения относится применение соединения формулы(I) для получения лекарственного средства для лечения пролиферативных заболеваний. Воплощением данного изобретения является также способ получения соединений формулы (I), отличающийся тем, что промежуточное соединение формулы (II) вводят во взаимодействие с соответствующей кислотой, такой как, например, трифторуксусная кислота (CF3COOH), и получают гидроксамовую кислоту формулы (I-а), где R1 представляет собой -C(O)NH(OH) К следующему воплощению настоящего изобретения относится способ детекции или идентификация HDAC в биологическом образце, включающий детекцию или определение образования комплекса между меченым соединением формулы (I) и HDAC. Воплощением данного изобретения также является сочетание противораковых средств и соединений формулы (I) в качестве ингибитора HDAC. Термин "ингибитор гистондеацетилазы" используется для обозначения соединения, способного взаимодействовать с гистондеацетилазой и ингибировать ее активность, конкретнее - ее ферментативную активность. Ингибирование ферментативной активности гистондеацетилазы означает ослабление способности гистондеацетилазы удалять ацетильную группу из гистона. Предпочтительно, такое ингибирование является специфическим, т.е., ингибитор гистондеацетилазы ослабляет способность гистондеацетилазы удалять ацетильную группу из гистона в концентрации, которая ниже, чем концентрация ингибитора, которая требуется для получения некоторого другого эффекта, неродственного биологическому. Используемый в приведенных выше определениях и далее термин "галоген" является общим для фтора, хлора, брома и иода; С 1-4-алкил определяет линейные и разветвленные насыщенные углеводородные радикалы, содержащие от 1 до 4 атомов углерода, такие как, например, метил, этил, пропил, бутил,1-метилэтил, 2-метилпропил и т.п.; C1-6-алкил включает C1-4-алкил и его более высокие гомологи с 5-6 атомами углерода, такие как, например, пентил, 2-метилбутил, гексил, 2-метилпентил и т.п.; C1-6 алкандиил определяет двухвалентные линейные и разветвленные насыщенные углеводородные радикалы с 1-6 атомами углерода, такие как, например, метилен, 1,2-этандиил, 1,3-пропандиил, 1,4-бутандиил, 1,5 пентандиил, 1,6-гександиил и их разветвленные изомеры, такие как 2-метилпентандиил, 3 метилпентандиил, 2,2-диметилбутандиил, 2,3-диметилбутандиил и т.п.; тригалоген-C1-6-алкил определяетC1-6-алкил, содержащий три идентичных или разных галогенозаместителя, например трифторметил; C2-6 алкендиил определяет двухвалентные линейные и разветвленные углеводородные радикалы, содержащие одну двойную связь и 2-6 атомов углерода, такие как, например, этендиил, 2-пропендиил, 3 бутендиил, 2-пентендиил, 3-пентендиил, 3-метил-2-бутендиил и т.п.; аминоарил определяет арил, замещенный амино; и C3-10-циклоалкил включает циклические углеводородные группы с 3-10 атомами углерода, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил,циклогептил, циклооктил и т.п. Термин "другая Zn-хелатообразующая группа" относится к группе, способной взаимодействовать сZn-ионом, который может присутствовать в сайте связывания фермента. Фармацевтически приемлемые соли присоединения охватывают фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований. Подразумевается, что упомянутые выше фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот включают терапевтически активные нетоксичные формы солей присоединения кислот, которые способны образовывать соединения формулы (I). Соединения формулы (I), имеющие свойства оснований, можно превратить в их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот обработкой указанной формы основания под-3 007908 ходящей кислотой. Подходящими кислотами являются, например, неорганические кислоты, такие как галогеноводородные кислоты, например, хлороводородная или бромоводородная кислота; серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, трифторуксусная, пропановая, гликолевая, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная (т.е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая,памовая кислота и подобные кислоты. Соединения формулы (I), имеющие кислотные свойства, можно превратить в их фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований обработкой указанной формы кислоты подходящим органическим или неорганическим основанием. Соответствующие формы солей присоединения оснований включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например, литиевые, натриевые, калиевые, магниевые, кальциевые соли, и т.п., соли с органическими основаниями, например, соли бензатина, N-метил-D-глюкамина, гидрабамина, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и т.п. Термин "соли присоединения кислот или оснований" также включает гидраты и формы присоединения растворителей, которые способны образовывать соединения формулы (I). Примерами таких форм являются, например, гидраты, алкоголяты и т.п. Термин "стереохимически изомерные формы соединений формулы (I)", используемый в данном описании, определяет все возможные соединения, состоящие из одних и тех же атомов, связанных в одной и той же последовательности связей, но имеющие разные трехмерные структуры, не являющиеся взаимозаменяемыми, которыми могут обладать соединения формулы (I). Если не упоминется или не указано иное, химическое название соединения охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которыми указанное соединение может обладать. Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Подразумевается, что все стереохимически изомерные формы соединений формулы (I) как в чистой форме, так и в форме смесей друг с другом входят в объем настоящего изобретения. Подразумевается, что N-оксидные формы соединений формулы (I) включают такие соединения формулы (I), где один или несколько атомов азота окислены до так называемого N-оксида, в частности,такие N-оксиды, где N-окисленными являются один или несколько атомов азота пиперидина, пиперазина или пиридазинила. Некоторые соединения формулы (I) также могут существовать в их таутомерных формах. Подразумевается, что такие формы хотя и не указываются ясно в приведенной выше формуле, включены в объем настоящего изобретения. Когда бы ни использовался далее в настоящем описании термин "соединения формулы (I)", подразумевается, что он также включает фармацевтически приемлемые соли присоединения и все стереоизомерные формы. Подразумевается, что используемые в данном описании термины "гистондеацетилаза" и "HDAC" относятся к любому ферменту из семейства ферментов, удаляющих ацетильную группу из -аминогрупп лизиновых остатков в N-конце гистона. Если в контексте не указано иное, подразумевается, что термин"гистон" относится к любому белку-гистону, включая H1, Н 2 А, Н 2 В, Н 3, Н 4 и Н 5, от любого вида. Человеческие белки HDAC или генные продукты включают HDAC-1, HDAC-2, HDAC-3, HDAC-4, HDAC-5,HDAC-6, HDAC-7, HDAC-8, HDAC-9 и HDAC-10 и другие белки. Гистондеацетилаза также может происходить от источника, принадлежащего к простейшим или грибам. Первая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько из следующих ограничений:f) R2 представляет собой водород или C1-6-алкил;g) -L- представляет собой непосредственную связь;j) представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-20), (а-25), (а-27), (а-28), (а-29),(а-41) или (а-42);l) каждый R6 выбирают, независимо, из числа водорода, галогена, C1-6-алкила или C1-6-алкилокси. Вторая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько из следующих ограничений:g) -L- представляет собой непосредственную связь;J) представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-20), (а-25), (а-27), (а-28), (а 29), (а-41) или (а-42);l) каждый R6 выбирают, независимо, из числа водорода, галогена, C1-6-алкила или C1-6-алкилокси. Третья группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I), гдеR1 представляет собой -C(O)NH(OH). Четвертая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I),где R1 представляет собой -C(O)NH(OH), и -L- представляет собой непосредственную связь. Пятая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I), гдеR1 представляет собой -C(O)NH(OH), и R2 представляет собой водород. Шестая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I),где R1 представляет собой -C(O)NH(OH), R2 представляет собой водород, и -L- представляет собой непосредственную связь. Седьмая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько из следующих ограничений:e) -L- представляет собой непосредственную связь или двухвалентный радикал, выбранный из числа С 1-6-алкандиила, C1-6-алкандиилокси, амино или карбонила;h) представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-3), (а-4), (а-5), (а-6), (а-7), (а 8), (а-9), (а-10), (а-11), (а-12), (а-13), (а-14), (а-15), (а-16), (а-17), (а-18), (а-19), (а-20), (а-21), (а-22), (а-23),(а-24), (а-25), (а-26), (а-28), (а-29), (а-30), (а-31), (а-32), (а-33), (а-34), (а-35), (а-36), (а-37), (а-38), (а-39), (а 40), (а-41), (а-42), (а-44), (а-45), (а-46), (а-47), (а-48) или (а-51);j) R6 представляет собой водород; галоген; гидрокси; амино; нитро; тригалоген-C1-6-алкил; тригалоген-C1-6-алкилокси; C1-6-алкил; C1-6-алкилокси; C1-6-алкилкарбонил; C1-6-алкилоксикарбонил; C1-6 алкилсульфонил; гидрокси-C1-6-алкил; арилокси; ди(C1-6-алкил)амино; циано; тиофенил; фуранил; фуранил, замещенный гидрокси-С 1-6-алкилом; бензофуранил; имидазолил; оксазолил; оксазолил, замещенный арилом и C1-6-алкилом; C1-6-алкилтриазолил; тетразолил; пирролидинил; пирролил; морфолинил; C1-6 алкилморфолинил; пиперазинил; C1-6-алкилпиперазинил; гидрокси-C1-6-алкилпиперазинил; C1-6 алкилоксипиперидинил; пиразолил; пиразолил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из числа C1-6-алкила или тригалоген-C1-6-алкила; пиридинил; пиридинил, замещенный C1-6 алкилокси, арилокси или арилом; пиримидинил; хинолинил; индол; фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными, независимо, из числа галогена, C1-6-алкила, C1-6-алкилокси или трифторметила;k) R7 представляет собой водород; галоген; гидрокси; амино; нитро; тригалоген-C1-6-алкил; тригалоген-C1-6-алкилокси; C1-6-алкил; C1-6-алкилокси; C1-6-алкилкарбонил; C1-6-алкилоксикарбонил; C1-6 алкилсульфонил; гидрокси-C1-6-алкил; арилокси; ди(C1-6-алкил)амино; циано; пиридинил; фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными, независимо, из числа галогена, C1-6-5 007908 алкила, C1-6-алкилокси или трифторметила. Восьмая группа соединений, представляющих интерес, состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько из следующих ограничений:a) R8 и R9, каждый независимо, выбирают из числа водорода, гидрокси, гидрокси-C1-6-алкила, амино-C1-6-алкила или аминоарила;b) R5 представляет собой водород, C1-6-алкил, С 3-10-циклоалкил, гидрокси-C1-6-алкил, C1-6 алкилокси-C1-6-алкил или ди(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкил; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-2), (а-3), (а-4), (а-5), (а-6), (а-7),с)(гидрокси-C1-6 алкил)(C1-6 алкил)амино-C1-6-алкил; пирролидинил-C1-6-алкилокси; пиразолил; тиопиразолил; пиразолил, замещенный двумя заместителями, выбранными из числа C1-6-алкила или тригалоген-C1-6-алкила; пиридинил; пиридинил,замещенный C1-6-алкилокси или арилом; пиримидинил; хинолинил; индол; фенил; фенил, замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными, независимо, из числа галогена, амино, C1-6-алкила, C1-6 алкилокси, гидрокси-C1-4-алкила, трифторметила, трифторметилокси, гидрокси-C1-4-алкилокси, C1-4 алкилокси-C1-4-алкилокси,амино-C1-4-алкилокси,ди(C1-4-алкил)амино-C1-4-алкилокси,ди(C1-4 алкил)амино, ди(C1-4-алкил)амино-C1-4-алкила, ди(C1-4-алкил)амино-C1-4-алкил(C1-4-алкил)амино-C1-4 алкила, пиперидинил-C1-4-алкилокси, пирролидинил-C1-4-алкилокси, аминосульфонилпиперазинила, аминосульфонилпиперазинил-C1-4-алкила, ди(C1-4-алкил)аминосульфонилпиперазинила, ди(C1-4-алкил)аминосульфонилпиперазинил-C1-4-алкила, гидрокси-C1-4-алкилпиперазинила, гидрокси-C1-4-алкилпиперазинил-C1-4-алкила,C1-4-алкилоксипиперидинила, C1-4-алкилоксипиперидинил-C1-4-алкила, гидрокси-C1-4-алкилокси-C1-4-алкилпиперазинила, гидрокси-C1-4-алкилокси-C1-4-алкилпиперазинил-C1-4-алкила, (гидрокси-C1-4-алкил) (C1-4-алкил) амино, (гидрокси-C1-4-алкил) (C1-4-алкил) амино-C1-4-алкила, пирролидинил-C1-4-алкилокси, морфолинил-C1-4 алкилокси, морфолинил-C1-4-алкила, C1-4-алкилпиперазинила, C1-4-алкилпиперазинил-C1-4-алкилокси, C1-4 алкилпиперазинил-C1-4-алкила, гидрокси-C1-4-алкиламино, ди(гидрокси-C1-4-алкил)амино, ди(C1-4-алкил)аминоC1-4-алкиламино, аминотиадиазолила, аминосульфонилпиперазинил-C1-4-алкилокси или тиофенил-C1-4 алкиламино. Группа предпочтительных соединений состоит из таких соединений формулы (I), гдеR8 и R9, каждый независимо, выбирают из числа водорода, гидрокси, гидрокси-C1-6-алкила, аминоC1-6-алкила или аминоарила;R5 представляет собой водород, C1-6-алкил, С 3-10-циклоалкил, гидрокси-C1-6-алкил, C1-6-алкилоксиС 1-6-алкил или ди(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкил; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-2), (а-3), (а-4), (а-5), (а-6), (а-7),(а-8), (а-9), (а-10), (а-11), (а-12), (а-13), (а-14), (а-15), (а-16), (а-17), (а-18), (а-19), (а-20), (а-21), (а-22), (а 23), (а-24), (а-25), (а-26), (а-27), (а-28), (а-29), (а-30), (а-31), (а-32), (а-33), (а-34), (а-35), (а-36), (а-37), (а 38), (а-39), (а-40), (а-41), (а-42), (а-43) или (а-44); и каждый R6 и R7 выбирают независимо из группы, в которую входят водород; галоген; гидрокси; амино; нитро; тригалоген-C1-6-алкил; тригалоген-C1-6-алкилокси; C1-6-алкил; C1-6-алкилокси; C1-6-алкилокси-C1-6 алкилокси; C1-6-алкилкарбонил; C1-6-алкилсульфонил; циано-C1-6-алкил; гидрокси-С 1-б-алкил; гидрокси-C1-6 алкилокси; гидрокси-C1-6-алкиламино; амино-C1-6-алкилокси; ди(C1-6-алкил)аминокарбонил; ди(гидрокси-C1-6-6 007908 алкил)амино; арил(C1-6-алкил)амино; ди(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкилокси; ди(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкиламино; арилсульфонил; арилсульфониламино; арилокси; арил-С 2-6-алкендиил; ди(C1-6-алкил)амино; ди(C1-6 алкил)амино-C1-6-алкил; ди(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкил (C1-6-алкил)амино-C1-6-алкил; циано; тиофенил; тиофенил, замещенный ди(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкил (C1-6-алкил)амино-C1-6-алкилом, ди(C1-6 алкил)амино-C1-6-алкилом, C1-6-алкилпиперазинил-C1-6-алкилом или ди(гидрокси-C1-6-алкил)амино-C1-6 алкилом; фуранил; имидазолил; C1-6-алкилтриазолил; тетразолил; пирролидинил; пиперидинил-C1-6 алкилокси; морфолинил; C1-6-алкилморфолинил; морфолинил-C1-6-алкилокси; морфолинил-C1-6-алкил;C1-6-алкилпиперазинил; C1-6-алкилпиперазинил-C1-6-алкилокси; C1-6-алкилпиперазинил-C1-6-алкил; C1-6 алкилпиперазинилсульфонил; аминосульфонилпиперазинил-C1-6-алкилокси; аминосульфонилпиперазинил; аминосульфонилпиперазинил-C1-6-алкил; ди(C1-6-алкил)аминосульфонилпиперазинил; ди(C1-6-алкил)аминосульфонилпиперазинил-C1-6-алкил; гидрокси-C1-6-алкилпиперазинил; гидрокси-C1-6-алкилпиперазинил-C1-6 алкил; C1-6-алкилоксипиперидинил; C1-6-алкилоксипиперидинил-C1-6-алкил; гидрокси-C1-6-алкилокси-С 1-6 алкилпиперазинил; гидрокси-C1-6-алкилокси-C1-6-алкилпиперазинил-C1-6-алкил; (гидрокси-C1-6-алкил)(C1-6 алкил)амино; (гидрокси-C1-6-алкил)(C1-6-алкил)амино-C1-6-алкил; пирролидинил-C1-6-алкилокси; пиразолил; тиопиразолил; пиразолил, замещенный двумя заместителями, выбранными из числа C1-6-алкила или тригалоген-C1-6-алкила; пиридинил; пиридинил, замещенный C1-6-алкилокси или арилом; пиримидинил; хинолинил; индол; фенил; фенил, замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными, независимо, из числа галогена, амино, C1-6-алкила, C1-6-алкилокси, гидрокси-C1-4-алкила, трифторметила, трифторметилокси,гидрокси-C1-4-алкилокси, C1-4-алкилокси-C1-4-алкилокси, амино-C1-4-алкилокси, ди(C1-4-алкил)амино-С 1-4 алкилокси,ди(C1-4-алкил)амино,ди(C1-4-алкил)амино-С 1-4-алкила,ди(С 1-4-алкил)амино-C1-4-алкил(C1-4 алкил)амино-С 1-4-алкила, пиперидинил-С 1-4-алкилокси, пирролидинил-С 1-4-алкилокси, аминосульфонилпиперазинила, аминосульфонилпиперазинил-С 1-4-алкила, ди(C1-4-алкил)аминосульфонилпиперазинила, ди(C1-4 алкил)аминосульфонилпиперазинил-С 1-4-алкила,гидрокси-C1-4-алкилпиперазинила,гидрокси-C1-4 алкилпиперазинил-С 1-4-алкила, C1-4-алкилоксипиперидинила, C1-4-алкилоксипиперидинил-С 1-4-алкила, гидрокси-C1-4-алкилокси-С 1-4-алкилпиперазинила,гидрокси-С 1-4-алкилокси-C1-4-алкилпиперазинил-С 1-4 алкила, (гидрокси-С 1-4-алкил)(C1-6-алкил)амино, (гидрокси-С 1-4-алкил)(C1-6-алкил)амино-C1-4-алкила,пирролидинил-С 1-4-алкилокси,морфолинил-C1-4-алкилокси,морфолинил-С 1-4-алкила,С 1-4 алкилпиперазинила, C1-4-алкилпиперазинил-C1-4-алкилокси, С 1-4-алкилпиперазинил-C1-4-алкила, гидрокси-C1-4-алкиламино, ди(гидрокси-C1-4-алкил)амино, ди(C1-4-алкил)амино-C1-4-алкиламино, аминотиадиазолила, аминосульфонилпиперазинил-C1-4-алкилокси или тиофенил-С 1-4-алкиламино. Другая группа предпочтительных соединений состоит из таких соединений формулы (I), где-L- представляет собой непосредственную связь или двухвалентный радикал, выбранный из числаR5 представляет собой водород; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-3), (а-4), (а-5), (а-6), (а-7), (а-8),(а-9), (а-10), (а-11), (а-12), (а-13), (а-14), (а-15), (а-16), (а-17), (а-18), (а-19), (а-20), (а-21), (а-22), (а-23), (а 24), (а-25), (а-26), (а-28), (а-29), (а-30), (а-31), (а-32), (а-33), (а-34), (а-35), (а-36), (а-37), (а-38), (а-39), (а 40), (а-41), (а-42), (а-44), (а-45), (а-4 б), (а-47), (а-48) или (а-51); каждый s равен, независимо, 0, 1, 2, 3 или 4;R6 представляет собой водород; галоген; гидрокси; амино; нитро; тригалоген-C1-6-алкил; тригалоген-C1-6-алкилокси; C1-6-алкил; C1-6-алкилокси; C1-6-алкилкарбонил; C1-6-алкилоксикарбонил; C1-6 алкилсульфонил; гидрокси-C1-6-алкил; арилокси; ди(C1-6-алкил)амино; циано; тиофенил; фуранил; фуранил, замещенный гидрокси-C1-6-алкилом; бензофуранил; имидазолил; оксазолил; оксазолил, замещенный арилом и C1-6-алкилом; C1-6-алкилтриазолил; тетразолил; пирролидинил; пирролил; морфолинил; C1-6 алкилморфолинил; пиперазинил; C1-6-алкилпиперазинил; гидрокси-C1-6-алкилпиперазинил; C1-6 алкилоксипиперидинил; пиразолил; пиразолил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из числа C1-6-алкила или тригалоген-С 1-6-алкила; пиридинил; пиридинил, замещенный C1-6 алкилокси или арилом; пиримидинил; хинолинил; индол; фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными, независимо, из числа галогена, C1-6-алкила, C1-6-алкилокси или трифторметила; иR7 представляет собой водород; галоген; гидрокси; амино; нитро; тригалоген-С 1-6-алкил; тригалоген-C1-6-алкилокси; C1-6-алкил; C1-6-алкилокси; C1-б-алкилкарбонил; C1-6-алкилоксикарбонил; C1-6 алкилсульфонил; гидрокси-C1-6-алкил; арилокси; ди(C1-6-алкил)амино; циано; пиридинил; фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными, независимо, из числа галогена, C1-6 алкила, C1-6-алкилокси или трифторметила. Группа более предпочтительных соединений состоит из таких соединений формулы (I), гдеR2 представляет собой водород или C1-6-алкил;-L- представляет собой непосредственную связь;R5 представляет собой водород; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-20), (а-25), (а-27), (а-28), (а-29),(а-41) или (а-42); каждый s равен, независимо, 0, 1 или 2; и каждый R6 выбирают, независимо, из числа водорода, галогена, C1-6-алкила или C1-6-алкилокси. Группа даже более предпочтительных соединений состоит из таких соединений формулы (I), где-L- представляет собой непосредственную связь;R5 представляет собой водород; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-20), (а-27), (а-28), (а-29), (а-41) или (а-42); каждый s равен, независимо, 0, 1 или 2; и каждый R6 выбирают, независимо, из числа водорода, галогена, C1-6-алкила или C1-6-алкилокси. Наиболее предпочтительным соединением является соединение 3 соединение 3 Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли и их N-оксиды и стереохимически изомерные формы можно получить обычными способами. Общий путь синтеза включает, например,этапы, перечисленные далее. а) Гидроксамовые кислоты формулы (I), где R1 представляет собой -C(O)NH(OH), причем указанные соединения относят к соединениям формулы (I-а), можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с подходящей кислотой, такой как, например, трифторуксусная кислота(CF3COOH). Указанное взаимодействие осуществляют в подходящем растворителе, таком как, например,метанол.b) Промежуточные соединения формулы (II) можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (III) с промежуточным соединением формулы (IV) в присутствии соответствующих реагентов, таких как моногидрохлорид N'-(этилкарбонимидоил)-N,N-диметил-1,3-пропандиамина (EDC) и 1-гидрокси-1 Н-бензотриазол (НОВТ). Взаимодействие можно осуществлять в подходящем растворителе, таком как смесь DCM и ТГФ. с) Промежуточные соединения формулы (III) можно получить взаимодействием промежуточного соединения формулы (V) с подходящим основанием, таким как NaOH, в присутствии подходящего растворителя, такого как этанол. Соединения формулы (I) также можно удобно получать с использованием метода твердофазного синтеза. Вообще, твердофазный синтез включает взаимодействие промежуточного соединения при синтезе с полимерным носителем. Такое промежуточное соединение на носителе затем может проходить через ряд стадий синтеза. После каждой стадии отфильтровыванием смолы и промывкой ее несколько раз различными растворителями удаляют примеси. На каждой стадии смолу можно разделять для взаимодействия с разными промежуточными соединениями на следующей стадии, причем таким образом создается возможность синтеза большого числа соединений. После последней стадии в процедуре смолу обрабатывают реагентом или способом, отщепляющим смолу от образца. Более подробное пояснение методов, используемых в твердофазной химии, дается, например, в работах "The Combinatorial Index"AG, Switzerland), которые обе включены в данное описание в качестве ссылок. Соединения формулы (I) и некоторые промежуточные соединения могут содержать в своей структуре по меньшей мере один стереогенный центр. Такой стереогенный центр может присутствовать в Rили S-конфигурации. Соединения формулы (I), полученные описанными выше способами, могут представлять собой рацемические смеси энантиомеров, которые можно отделить друг от друга последующими процедурами разделения, известными в технике. Рацемические соединения формулы (I) можно превратить в соответ-9 007908 ствующие диастереомерные формы солей взаимодействием с подходящей хиральной кислотой. Затем указанные диастереомерные формы солей разделяют, например, селективной или фракционной кристаллизацией и энантиомеры высвобождают из них под действием щелочи. Другой способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает жидкостную хроматографию с использованием хиральной неподвижной фазы. Указанные стереохимически чистые изомерные формы также можно получить из соответствующих стереохимически чистых изомерных форм подходящих исходных веществ, при условии, что взаимодействие происходит стереоспецифически. Предпочтительно, если нужен определенный стереоизомер, следует синтезировать указанное соединение стереоспецифическими способами получения. В таких способах преимущественно будут использоваться энантиомерно чистые исходные вещества. Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и их стереоизомерные формы имеют ценные фармакологические свойства, проявляющиеся в том, что они обладают ингибирующим действием в отношении гистондеацетилазы (HDAC). Данное изобретение относится к способу ингибирования аномального роста клеток, в том числе,трансформированных клеток, путем введения эффективного количества соединения изобретения. Аномальным является рост клеток, независимый от нормальных регуляторных механизмов (например, утрата контактного ингибирования). Сюда относятся ингибирование роста опухоли как непосредственно, за счет задержки роста, терминальной дифференцировки и/или апоптоза раковых клеток, так и косвенно,путем ингибирования неоваскуляризации опухолей. Данное изобретение также относится к способу ингибирования роста опухолей путем введения субъекту, например млекопитающему (в более частном случае, человеку), нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения настоящего изобретения. В частности, данное изобретение относится к способу ингибирования роста опухолей путем введения эффективного количества соединений настоящего изобретения. Примерами опухолевых заболеваний, которые можно подавлять, являются,но не ограничиваются указанными, рак легких (например, аденокарцинома и, в том числе, немелкоклеточный рак легких), раковые заболевания поджелудочной железы (например, панкреатическая карцинома, такая как, например, экзокринная панкреатическая карцинома), раковые заболевания ободочной кишки (например, колоректальные карциномы, такие как, например, аденокарцинома ободочной кишки и аденома ободочной кишки), рак предстательной железы, в том числе, прогрессирующее заболевание,гемопоэтические опухоли лимфоидного ряда (например, острый лимфоцитарный лейкоз, В-клеточная лимфома, лимфома Беркитта), миелоидные лейкозы (например, острый миелоидный лейкоз (AML), фолликулярный рак щитовидной железы, миелодиспластический синдром (MDS), опухоли мезенхимного происхождения (например, фибросаркомы и рабдомиосаркомы), меланомы, тератокарциномы, нейробластомы, глиомы, доброкачественная опухоль кожи (например, кератоакантомы), карцинома молочной железы (например, прогрессирующий рак молочной железы), карцинома почек, карцинома яичников,карцинома мочевого пузыря и эпидермальная карцинома. Соединения по изобретению можно использовать для других лечебных целей, например, для а) сенсибилизации опухолей к радиотерапии путем введения соединения по изобретению перед, во время или после облучения опухоли для лечения рака;b) лечения артропатий и остеопаталогических состояний, таких как ревматоидный артрит, остеоартрит, ювенильный артрит, подагра, полиартрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит и системная красная волчанка;c) ингибирования пролиферации клеток гладких мышц, в том числе, васкулярных пролиферативных расстройств, атеросклероза и рестеноза;d) лечения воспалительных состояний и состояний кожи, таких как неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, аллергический ринит, болезнь "трансплантат против хозяина", конъюнктивит, астма,ARDS, болезнь Бехчета, отторжение трасплантата, крапивница, аллергический дерматит, гнездная алопеция, склеродерма, экзантема, экзема, дерматомиозит, акне, диабет, системная красная волчанка, болезнь Кавасаки, рассеянный склероз, эмфизема, кистозный фиброз и хронический бронхит;e) лечения эндометриоза, маточного фиброза, дисфункционального маточного кровотечения и эндометриальной гиперплазии;m) ингибирования нервно-мышечной патологии, например амиотрофического бокового склероза;n) лечения спинально-мышечной атрофии; о) лечения других патологических состояний, поддающихся лечению путем потенциирования экспрессии гена; р) усиления генной терапии. Итак, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства, а также к применению указанных соединений формулы (I) для получения лечебного средства для лечения одного или нескольких из вышеуказанных состояний. Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и стереоизомерные формы могут иметь ценные диагностические свойства в том отношении, что их можно использовать для детекции или идентификации HDAC в биологическом образце, включая детекцию или определение образования комплекса между меченым соединением и HDAC. В способах детекции или идентификации можно использовать соединения, помеченные веществами-метками, такими как радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и т.д Примерами радиоизотопов являются 125I, 131I, 3 Н и 14 С. Ферменты, как правило, делают детектируемыми путем соединения с соответствующим субстратом, который, в свою очередь, катализирует реакцию детекции. Их примерами являются, например, бета-галактозидаза, бета-глюкозидаза, щелочная фосфатаза, пероксидаза и малатдегидрогеназа, и предпочтительна пероксидаза из хрена. Люминесцентные вещества включают, например, люминол, производные люминола, люциферин, экворин и люциферазу. Биологические образцы можно определить как ткань организма или жидкости организма. Примерами жидкостей организма являются цереброспинальная жидкость, кровь, плазма, сыворотка, моча, мокрота, слюна и т.п. С учетом их полезных фармакологических свойств, обсуждаемые соединения можно ввести в состав разных фармацевтических форм для целей введения. Для того, чтобы получить фармацевтические композиции данного изобретения, эффективное количество определенного соединения, в форме соли присоединения основания или кислоты, в качестве активного ингредиента объединяют при тщательном перемешивании с фармацевтически приемлемым носителем, который может иметь самые разные формы, в зависимости от формы препарата, нужного для введения. Такие фармацевтические композиции представляют, желательно, единичную дозированную форму, подходящую предпочтительно для введения перорально, ректально, чрескожно или путем парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в оральной дозированной форме можно использовать любую из обычно используемых фармацевтических сред, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае оральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, дезинтегрирующие вещества и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за легкости их введения таблетки и капсулы представляют наиболее благоприятную оральную единичную дозированную форму, и в таком случае, очевидно, используют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель, как правило, будет содержать стерильную воду, по меньшей мере, в большей части, хотя можно включать и другие ингредиенты, например, способствующие растворению. Можно получить, например, растворы для инъекций, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получить суспензии для инъекций, и в таком случае можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие вещества и т.п. В композициях, подходящих для чрезкожного введения, носитель необязательно содержит вещество, усиливающие проникание, и/или подходящее смачивающее вещество, необязательно, в сочетании с небольшими количествами подходящих добавок любой природы, которые не оказывают существенного раздражающего действия на кожу. Указанные добавки могут облегчить нанесение на кожу и/или могут быть полезными при получении нужных композиций. Такие композиции можно вводить разными способами, например, в виде трансдермального пластыря, в виде капли или в виде мази. Особенно выгодно получать указанные выше фармацевтические композиции в единичной дозированной форме для облегчения введения и равномерности дозировки. Используемый в данном описании и в формуле изобретения термин "единичная дозированная форма" относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных дозировок, причем каждая единица содержит предварительно установленное количество активного ингредиента, рассчитанное на получение нужного лечебного действия, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных дозированных форм являются таблетки (в том числе, таблетки с насечками или с покрытием), капсулы, пилюли, порошки в пакетиках, облатки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки, столовые ложки и т.п., и множество таких разделенных дозированных форм. Специалисты в данной области техники легко могут определить эффективное количество из результатов испытаний, представленных далее. Вообще, предполагается, что терапевтически эффективное количество будет составлять от 0,005 до 100 мг/кг веса тела, и в частности, от 0,005 до 10 мг/кг веса тела. Может оказаться подходящим введение требуемой дозы в виде двух, трех, четырех или большего числа- 11007908 субдоз через соответствующие интервалы в течение суток. Указанная субдоза может быть составлена в виде единичных дозированных форм, например, содержащих 0,5-500 мг, и в частности, 10-500 мг, активного ингредиента на единичную дозированную форму. В другом аспекте настоящее изобретение относится к сочетанию ингибитора HDAC с другим противораковым средством, в особенности, для применения в качестве лекарственного средства, конкретнее,при лечении рака или родственных заболеваний. Для лечения вышеуказанных состояний соединения изобретения можно выгодно использовать в сочетании с одним или несколькими другими лекарственными средствами, в частности, с другими противораковыми средствами. Примерами противораковых средств являются координационные соединения платины, например цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин; таксановые соединения, например паклитаксел или доцетаксел; ингибиторы топоизомеразы I, такие как соединения камптотецина, например иринотекан или топотекан; ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые производные подофиллотоксина, например этопозид или тенипозид; противоопухолевые алкалоиды растения барвинок, например винбластин, винкристин или винорелбин; противоопухолевые производные нуклеозидов, например 5-флуороурацил, гемцитабин или капецитабин; алкилирующие агенты, такие как горчичный газ или нитрозомочевина, например циклофосфамид,хлорамбуцил, кармустин или ломустин; противоопухолевые производные антрациклинов, например даунорубицин, доксорубицин, идарубицин или митоксантрон; антитела к HER2, например Trastuzumab; антагонисты эстрогеновых рецепторов или селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов, например тамоксифен, торемифен, дролоксифен, фаслодекс или ралоксифен; ингибиторы ароматазы, такие как экземестан, анастрозол, летразол и ворозол; дифференцирующие агенты, такие как ретиноиды, витамин D и блокаторы метаболизма ретиноевой кислоты (RAMBA), например аккутан; ингибиторы ДНК-метилтрансферазы, например азацитидин; ингибиторы киназ, например флавоперидол, иматинибмезилат или гефитиниб; ингибиторы фарнезилтрансферазы или другие ингибиторы HDAC. Термин "координационное соединение платины", используемый в данном описании, обозначает любое координационное соединение платины, ингибирующее рост опухолевых клеток, в котором платина предоставлена в форме иона. Термин "таксановые соединения" обозначает класс соединений с таксановой циклической системой, родственные или полученные из экстрактов некоторых видов деревьев тиса (Taxus). Термин "ингибиторы топоизомеразы" используется для обозначения ферментов, способных изменять топологию ДНК в эукариотических клетках. Они являются критическим фактором для важных клеточных функций и клеточной пролиферации. Существует два класса топоизомераз в эукариотических клетках, а именно, типа I и типа II. Топоизомераза I представляет собой мономерный фермент с молекулярной массой приблизительно 100000. Фермент связывается с ДНК и вводит временный однонитевой разрыв, раскручивает двойную спираль (или создает возможность для ее раскручивания) и затем закрывает разрыв перед диссоциацией от цепи ДНК. Топоизомераза II имеет подобный механизм действия,который включает индукцию разрывов в цепи ДНК или образование свободных радикалов. Термин "соединения камптотецина" используется для обозначения соединений, родственных или образованных от исходного камптотецина, представляющего собой нерастворимый в воде алкалоид, полученный из дерева Chinese Camptothecin acuminata и дерева Indian Nothapodytes foetida. Термин "подофиллотоксины" используется для обозначения соединений, родственных или полученных из исходного подофиллотоксина, экстрагированного из растения мандрагоры. Термин "противоопухолевые алкалоиды растения барвинок" используется для обозначения соединений, родственных или полученных из экстрактов растения барвинок (Vinca rosea). Термин "алкилирующие агенты" охватывает группу разных химических веществ, общим свойством которых является способность, в физиологических условиях, отдавать алкильные группы биологически жизнеспособным макромолекулам, таким как ДНК. С помощью большинства более важных агентов, таких как горчичные газы и нитрозомочевины, активные алкилирующие группы генерируются in vivo после сложных реакций деградации, из которых некоторые являются ферментативными. Наиболее важными фармакологическими действиями алкилирующих агентов являются действия, которые нарушают фундаментальные механизмы, касающиеся пролиферации клеток, в частности, синтез ДНК и деление клеток. Способность алкилирующих агентов влиять на функцию и целостность ДНК в быстро пролифирирующих тканях создает основу для их терапевтических применений и, во многих случаях, для их ток- 12007908 сических свойств. Термин "противоопухолевые производные антрациклинов" включает антибиотики, полученные из гриба Strep. peuticus var. caesius, и их производные, характеризующиеся наличием тетрациклиновой циклической структуры с необычным сахаром даунозамином, присоединенным гликозидной связью. Показано, что амплификация белка рецептора 2 человеческого эпидермального фактора роста(HER2) при первичных карциномах молочной железы коррелирует с плохим клиническим прогнозом для некоторых пациентов. Trastuzumab представляет собой полученное методом рекомбинантных ДНК гуманизированное моноклональное антитело IgG1-каппа высокой степени чистоты, которые с высокой аффинностью и специфичностью связываются с внеклеточным доменом рецептора HER2. Многие злокачественные опухоли молочной железы имеют эстрогенные рецепторы, и рост таких опухолей можно стимулировать эстрогеном. Термины "антагонисты эстрогеновых рецепторов" и "селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов" используются для обозначения конкурентных ингибиторов связывания эстрадиола с эстрогеновым рецептором (ER). Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов, когда связываются с ER, индуцируют изменение в трехмерной структуре рецептора, ингибируя его связывание с реагирующим на эстроген элементом (ERE) в ДНК. У женщин в период после менопаузы основным источником циркулирующего эстрогена является конверсия андрогенов надпочечников и яичников (андростендиона и тестостерона) в эстрогены (эстрон и эстрадиол) ферментом ароматазой в периферических тканях. Депривация эстрогена через ингибирование или инактивацию ароматазы является эффективным и избирательным лечением для некоторых пациенток с гормонзависимым раком молочной железы в период после менопаузы. Термин "антиэстроген" используется в данном описании не только для антагонистов эстрогеновых рецепторов и селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов, но также для ингибиторов ароматазы,описанных выше. Термин "дифференцирующие агенты" охватывает соединения, которые могут, различными путями,ингибировать пролиферацию клеток и индуцировать дифференцировку. Известно, что витамин D и ретиноиды играют главную роль в регуляции роста и дифференцировке широкого ряда типов здоровых и злокачественных клеток. Блокаторы метаболизма ретиноевой кислоты (RAMBA) повышают уровни эндогенных ретиноевых кислот путем ингибирования опосредуемого цитохромом Р 450 катаболизма ретиноевых кислот. Изменения метилирования ДНК находятся в числе наиболее обычных аномалий при неоплазии человека. Гиперметилирование в промоторах селективных генов, как правило, ассоциируется с инактивацией вовлеченных генов. Термин "ингибиторы ДНК-метилтрансферазы" используется для обозначения соединений, которые действуют через фармакологическое ингибирование ДНК-метилтрансферазы и реактивацию экспрессии гена супрессора опухоли. Термин "ингибиторы киназ" включает сильные ингибиторы киназ, вовлеченных в развитие клеточного цикла и запрограммированную гибель клеток (апоптоз). Термин "ингибиторы фарнезилтрансферазы" используется для обозначения соединений, сконструированных для предупреждения фарнезилирования Ras и других внутриклеточных белков. Показано, что они действуют на пролиферацию и выживаемость злокачественных клеток. Термин "другие ингибиторы HDAC" включает короткоцепные жирные кислоты, например бутират, 4-фенилбутират или вальпроевую кислоту; гидроксамовые кислоты, например субероиланилидгидроксамовую кислоту (SAHA), биарилгидроксамат А-161906, бициклические арил-N-гидроксикарбоксамиды, пироксамид, CG-1521, PXD-101,сульфонамидгидроксамовую кислоту LAQ-824, трихостатин A (TSA), оксамфлатин, скриптаид, мкарбоксициннамовую кислоту, бисгидроксамовую кислоту или аналог трапоксингидроксамовой кислоты; циклические тетрапептиды, например трапоксин, апидицин или депсипептид; бензамиды, например MS-275 или CI-994, или депудицен; и другие вещества. Для лечения рака соединения по настоящему изобретению можно вводить пациенту так, как описано выше, в сочетании с облучением. Облучение означает обработку ионизирующим излучением, и в частности, гамма-излучением, в особенности, испускаемым линейными ускорителями или радионуклеидами, которые обычно применяют в настоящее время. Облучение опухоли радионуклеидами может быть наружным или внутренним. Настоящее изобретение также относится к сочетанию по изобретению противоракового средства и ингибитора HDAC по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также относится к сочетанию по изобретению для применения в лекарственной терапии, например, для ингибирования роста опухолевых клеток. Настоящее изобретение также относится к сочетаниям по изобретению для ингибирования роста опухолевых клеток. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток у че- 13007908 ловека, включающему введение субъекту эффективного количества сочетания по изобретению. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования аномального роста клеток, в том числе, трансформированных клеток, путем введения эффективного количества сочетания по изобретению. Другое лекарственное средство и ингибитор HDAC можно вводить одновременно (например, в отдельных или в единых композициях) или последовательно в любом порядке. В последнем случае два соединения будут вводиться в течение периода и в количестве и способом, которые достаточны для того,чтобы иметь уверенность, что достигается благоприятный или синергический эффект. Следует иметь в виду, что предпочтительный способ и порядок введения и соответствующие дозировочные количества и режимы для каждого компонента сочетания будут зависеть от конкретных вводимых другого лекарственного средства и ингибитора HDAC, способа их введения, конкретной опухоли, от которой лечат, и конкретного хозяина, которого лечат. Оптимальный способ и порядок введения и соответствующие дозировочные количества и режим могут легко определить специалисты в данной области техники с использованием обычных методов и с учетом изложенной в данном описании информации. Координационное соединение платины выгодно вводить в дозировке 1-500 мг на квадратный метр(мг/м 2) площади поверхности тела, например, 50-400 мг/м 2, в частности, в случае цисплатина в дозировке примерно 75 мг/м 2, и в случае карбоплатина - примерно 300 мг/м 2 на курс лечения. Таксановое соединение выгодно вводить в дозировке 50-400 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, например 75-250 мг/м 2, в частности, в случае паклитаксела в дозировке примерно 175-250 мг/м 2, и в случае доцетаксела примерно 75-150 мг/м 2 на курс лечения. Камптотециновое соединение выгодно вводить в дозировке 0,1-400 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, например 1-300 мг/м 2, в частности, в случае иринотекана в дозировке примерно 100-350 мг/м 2, и в случае топотекана примерно 1-2 мг/м 2 на курс лечения. Противоопухолевое производное подофиллотоксина выгодно вводить в дозировке 30-300 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, например 50-250 мг/м 2, в частности, в случае этопозида в дозировке примерно 35-100 мг/м 2, и в случае тенипозида - примерно 50-250 мг/м 2 на курс лечения. Противоопухолевый алкалоид растения барвинок выгодно вводить в дозировке 2-30 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, в частности, в случае винбластина в дозировке примерно 312 мг/м 2, в случае винкристина в дозировке примерно 1-2 мг/м 2, и в случае винорелбина в дозировке примерно 10-30 мг/м 2 на курс лечения. Противоопухолевое нуклеозидное производное выгодно вводить в дозе 200-2500 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, например 700-1500 мг/м 2, в частности, в случае 5-FU в дозировке 200-500 мг/м 2, в случае гемцитабина в дозировке примерно 800-1200 мг/м 2, и в случае капецитабина примерно 1000-2500 мг/м 2 на курс лечения. Алкилирующие вещества, такие как горчичный газ или нитрозомочевина, выгодно вводить в дозировке 100-500 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, например 120-200 мг/м 2, в частности, в случае циклофосфамида в дозировке примерно 100-500 мг/м 2, в случае хлорамбуцила в дозировке примерно 0,1-0,2 мг/кг, в случае кармустина в дозировке примерно 150-200 мг/м 2, и в случае ломустина в дозировке примерно 100-150 мг/м 2 на курс лечения. Противоопухолевое производное антрациклина выгодно вводить в дозировке 10-75 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, например 15-60 мг/м 2, в частности, в случае доксорубицина в дозировке примерно 40-75 мг/м 2, в случае даунорубицина в дозировке примерно 25-45 мг/м 2, и в случае идарубицина в дозировке примерно 10-15 мг/м 2 на курс лечения.Trastuzumab выгодно вводить в дозировке 1-5 мг на квадратный метр (мг/м 2) площади поверхности тела, в частности, 2-4 мг/м 2 на курс лечения. Антиэстрогенное средство выгодно вводить в дозировке примерно 1-100 мг ежесуточно, в зависимости от конкретного средства и состояния, от которого лечат. Тамоксифен выгодно вводить перорально в дозировке 5-50 мг, предпочтительно 10-20 мг, дважды в сутки, при продолжении терапии в течение времени, достаточного для достижения и поддержания лечебного эффекта. Торемифен выгодно вводить перорально в дозировке примерно 60 мг один раз в сутки при продолжении терапии в течение времени,достаточного для достижения и поддержания лечебного эффекта. Анастрозол выгодно вводить перорально в дозировке примерно 1 мг один раз в сутки. Дролоксифен выгодно вводить перорально в дозировке примерно 20-100 мг один раз в сутки. Ралоксифен выгодно вводить перорально в дозировке примерно 60 мг один раз в сутки. Экземестан выгодно вводить перорально в дозировке примерно 25 мг один раз в сутки. Указанные дозировки можно вводить, например, один раз, дважды или большее число раз на курс лечения, который может повторяться примерно каждые 7, 14, 21 или 28 дней. С учетом их полезных фармакологических свойств, компоненты сочетаний по изобретению, т.е. другое лекарственное средство и ингибитор HDAC, можно ввести в разные фармацевтические формы для целей введения. Компоненты можно включить по отдельности в отдельные фармацевтические композиции или в единую фармацевтическую композицию, содержащую оба компонента. Следовательно, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содер- 14007908 жащей другое лекарственное средство и ингибитор HDAC вместе с одним или несколькими фармацевтическими носителями. Настоящее изобретение также относится к сочетанию по изобретению в форме фармацевтической композиции, содержащей противораковое средство и ингибитор HDAC по изобретению вместе с одним или несколькими фармацевтическими носителями. Настоящее изобретение также относится к применению сочетания по изобретению для получения фармацевтической композиции для ингибирования роста опухолевых клеток. Настоящее изобретение также относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента ингибитор HDAC по изобретению и в качестве второго активного ингредиента противораковое средство, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении пациентов, страдающих от рака. Экспериментальная часть Далее приводятся примеры в целях иллюстрации. Далее в описании "BINAP" означает 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил, "Воc" означает третичный бутоксикарбонил, "BSA" означает бычий сывороточный альбумин, "DCM" означает дихлорметан, "DIC" означает диизопропилкарбодиимид, "DIEA" означает диизопропилэтиламин, "DIPE" означает диизопропиловый эфир, "DMAP" означает диметиламинопиридин, ДМФА" означает диметилформамид, "ДМСО" означает диметилсульфоксид, "EDC" означает моногидрохлорид N'-(этилкарбонимидоил)N,N-диметил-1,3-пропандиамина, "ЭДТК" означает этилендиаминтетрауксусная кислота, "EtOAc" означает этилацетат, "Hepes" означает 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота, "НОВТ" означает гидроксибензотриазол, "МеОН" означает метанол, "МТТ" означает бромид 3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2 Н-тетразолия, "NMP" означает N-метилпирролидинон, "PBS" означает забуференный фосфатом физиологический раствор, "TEA" означает триэтиламин, "ТФК" означает трифторуксусная кислота, "TIS" означает триизопропилсилан, "ТГФ" означает тетрагидрофуран, "ТНР" означает тетрагидропиранил и "TMSOTf" означает триметилсилилтрифлат. А. Получение промежуточных соединений Пример А 1. а) Получение промежуточное соединение 1 Смесь 4-метокси-2-хинолинкарбоновой кислоты (0,00024 моль; 1,2 эквив.), ДМФА (2 мл), присоединенного к смоле карбодиимида (0,200 г; 2 эквив.) (поставщик Argonaut, 800369) и 1 гидроксибензотриазола (0,040 г; 1,5 эквив.) в DCM (3 мл) встряхивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли этиловый эфир 6-(4-амино-1-пиперидинил)-3-пиридинкарбоновой кислоты(0,0002 моль). Реакционную смесь встряхивали в течение 20 ч при комнатной температуре. Добавляли МР-карбонат (0,150 г; 4,5 эквив.) (поставщик Argonaut, 800267) и реакционную смесь встряхивали в течение 20 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали, фильтрат упаривали и получали промежуточное соединение 1 (количественный выход). промежуточное соединение 2 Смесь промежуточного соединения 1 (макс. 0,0002 моль) в растворе гидроксида натрия (1,5 мл),ТГФ (4 мл) и МеОН (1 мл) перемешивали в течение 6 ч при 60 С и затем в течение уикенда при комнатной температуре. Реакционную смесь нейтрализовали 1 н HCl и затем добавляли DCM (4 мл). Смесь фильтровали через Extrelute (Isolute HM-N, объем 3 мл, поставщик IST, 800-0220-ЕМ), фильтрат упаривали и получали промежуточное соединение 2 (количественный выход).N,N-Диметил-4-пиридинамин (0,018 г) добавляли к присоединенному к смоле НОВТ (0,200 г) (поставщик Novabiochem, 01-64-0425) в смеси DCM/ДМФА, 5/1 (6 мл). Добавляли промежуточное соединение 2 (макс. 0,0002 моль) и смесь встряхивали в течение 15 мин. Добавляли N,N'-метантетраилбис-2 пропанамин (0,070 мл) и реакционную смесь встряхивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Смолу отфильтровывали и промывали DCM (3 х), ДМФА (3 х), DCM (3 х), ДМФА (3 х) и затем DCM (3 х). К смоле добавляли раствор О-(тетрагидро-2 Н-пиран-2-ил)гидроксиламина (0,030 г, 0,00026 моль) в DCM(5 мл) и реакционную смесь встряхивали в течение ночи при комнатной температуре. Смолу отфильтровывали, промывали DCM (3 х) и фильтрат упаривали. Остаток растворяли в DCM (5 мл). Добавляли присоединенный к смоле тозилхлорид (0,100 г) (поставщик Argonaut, 800276) и присоединенный к смоле морфолин (0,100 г) (морфолинометилполистирол HL, поставщик Novabiochem, 01-640171). Реакционную смесь встряхивали в течение 48 ч. Смолу отфильтровывали, промывали DCM,фильтрат упаривали и получали промежуточное соединение 3 (количественный выход). Пример А 2. а) Получение промежуточное соединение 4 Раствор 2-нафталинкарбонилхлорида (0,0102 моль) в DCM (40 мл) при 0 С добавляли к смеси 1,1 диметилэтилового эфира 4-(аминометил)-1-пиперидинкарбоновой кислоты (0,0093 моль) и TEA (0,0158 моль) в DCM (40 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, выливали в смесь воды со льдом и экстрагировали DCM. Органический слой промывали 10% раствором K2 СO3, сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали растворитель. Остаток (3,1 г) кристаллизовали из диэтилового эфира. Выпавшее в осадок вещество отфильтровывали, сушили и получали 2,52 г (74%) промежуточного соединения 4, температура плавления 153 С. промежуточное соединение 5 Смесь промежуточного соединения 4 (0,0068 моль) с 3 н HCl (25 мл) и ТГФ (5 мл) перемешивали при 80 С в течение 12 ч, выливали в смесь воды со льдом, подщелачивали NH4OH и экстрагировалиDCM. Органический слой промывали водой, сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали растворитель. Остаток (1 г) кристаллизовали из смеси диэтиловый эфир/CH3CN. Выпавшее в осадок вещество отфильтровывали, сушили и получали 0,8 г (44%) промежуточного соединения 5, температура плавления 209 С. с) Получение промежуточное соединение 6 Гидрид натрия (0,0044 моль) при 0 С в токе N2 добавляли к смеси промежуточного соединения 5(0,0029 моль) и ТГФ (10 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли раствор этилового эфира 2(метилсульфонил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0035 моль) в ТГФ (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, выливали в смесь воды со льдом и экстрагировали EtOAc. Ор- 16007908 ганический слой промывали водой, сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали растворитель. Остаток кристаллизовали из смеси СН 3 СN/диэтиловый эфир. Выпавшее в осадок вещество отфильтровывали,сушили и получали 0,56 г промежуточного соединения 6, температура плавления 161 С. промежуточное соединение 7 Смесь промежуточного соединения 6 (0,0013 моль) и гидроксида натрия (0,0026 моль) в этаноле (15 мл) перемешивали и кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч и затем охлаждали. Выпавшее в осадок вещество отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром, сушили и получали 0,44 г (83%) промежуточного соединения 7. е) ПолучениеN'-(этилкарбонимидоил)-N,N-диметил-1,3-пропандиамина (0,0014 моль) в DCM (10 мл) при комнатной температуре добавляли к смеси промежуточного соединения 7 (0,0011 моль) и О-(тетрагидро-2 Н-пиран 2-ил) гидроксиламина (0,0014 моль) в DCM (10 мл) и ТГФ (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, выливали в воду и экстрагировали DCM. Органический слой отделяли, сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали растворитель. Остаток (0,9 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент CH2Cl2/CH3OH/NH4OH, 97/3/0,1; 15-40 мкм). Чистые фракции собирали,и выпаривали растворитель. Остаток (0,47 г) кристаллизовали из смеси диэтиловый эфир/DIPE. Выпавшее в осадок вещество отфильтровывали, сушили и получали 0,4 г промежуточного соединения 8, температура плавления 149 С. В. Получение конечных соединений Пример В 1. а) Получение смолы (1) Смесь коммерческой смолы Novabiochem 01-64-0261 (200 мг, загрузка 0,94 ммоль/г), моно-N-Вос-4 аминопиперидина (188 мг) и изопропоксида титана (IV) (Ti(OiPr)4) (277 мкл) в DCM (4 мл) осторожно встряхивали в течение 90 мин при комнатной температуре. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия(199 мг), и реакционную смесь осторожно встряхивали в течение ночи при комнатной температуре, затем смолу отфильтровывали, промывали один раз DCM, один раз МеОН, затем два раза смесью DCM/DIEA 10%, промывали сначала три раза DCM, затем еще три раза метанолом, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН. Такая обработка давала смолу, которую идентифицировали как смолу (1) и использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.b) Получение смолы (2) Смолу (1) три раза промывали DCM. К смоле (1) добавляли 2-нафталинкарбонилхлорид (175 мг) в 4 мл DCM и DIEA (307 мкл), смолу осторожно встряхивали в течение ночи, смолу отфильтровывали и промывали 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН. Такая обработка давала смолу (2), которую использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. с) Получение смолы (3) Смолу (2) три раза промывали DCM. К смоле (2) добавляли 4 мл смеси TMSOTf-2,6-лутидин(1 М/1,5 М) в DCM, смолу осторожно встряхивали в течение 3 ч при комнатной температуре, смолу отфильтровывали и промывали 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН, 3 х DCM, 3 х МеОН. Такая обработка давала смолу (3), которую использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.d) Получение смолы (4) Смолу (3) три раза промывали толуолом. К смоле (3) добавляли 4-бромметилбензоат (606 мг) в 3 мл толуола, BINAP (117 мг) и Cs2CO3 (326 мг) и смолу осторожно встряхивали в течение 45 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. К реакционной смеси добавляли Pd(OAc)2 в 1 мл толуола. Смолу осторожно встряхивали в течение 18 ч при 110 С в атмосфере азота. Смолу отфильтровывали в горячем состоянии, смолу промывали 3x ДМФА при 80 С, 3x Н 2O при 80 С, 3x ДМФА при 80 С, промывали 3x ДМФА при комнатной температуре, 3x Н 2O, 3x ДМФА, 3x МеОН, 3x DCM, 3x МеОН, 3x DCM. Такая обработка давала смолу (4), которую использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. е) Получение смолы (5) Смолу (4) три раза промывали NMP. К смоле (4) добавляли триметилсиланолат калия (KOSiMe3)(240 мг) в 4 мл NMP, смолу осторожно встряхивали в течение 24 ч при 50 С, смолу отфильтровывали и промывали 3x DCM, 3x МеОН, 3x DCM, 3x МеОН, 3x DCM, 3x МеОН, 3x DCM, 3x МеОН, 3x DCM, 3x МеОН, 3x DCM, 3x МеОН. Такая обработка давала смолу (5), которую использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.f) Получение промежуточного соединения 9 Смолу (5) три раза промывали DCM. К смоле (5) добавляли 5 мл смеси ТФК/TIS/DCM (5:2:93),смолу осторожно встряхивали в течение 2 ч при комнатной температуре, смолу отфильтровывали и промывали DCM. Фильтрат продували азотом при 50 С до сухого состояния, добавляли DCM (2 мл) и продували азотом при 50 С до сухого состояния, добавляли DCM (2 мл) и продували азотом при 50 С до сухого состояния. Такая обработка давала свободную карбоновую кислоту (промежуточное соединение 30) в виде соли ТФК с выходом 58 мг.g) Получение смолы (6), способ А Промежуточное соединение 9 при 50 С в атмосфере азота концентрировали с тионилхлоридом(SOCl2) (1 мл), добавляли DCM (2 мл), и продували азотом при 50 С до сухого состояния, добавлялиDCM (2 мл), и продували азотом при 50 С до сухого состояния. Добавляли DCM (3 мл) и раствор добавляли к смоле с присоединенным НОВТ (300 мг, нагрузка 1,3 ммоль/г) (поставщик Novabiochem, 01-640425), и к смеси добавляли 1 мл 2,6-лутидина и 1 мл DCM. Смолу осторожно встряхивали в течение 1 ч,смолу отфильтровывали и промывали 3x ДМФА, 3x DCM и 3x ДМФА. Такая обработка давала смолу (7),которую использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.h) Получение смолы (6), способ В Промежуточное соединение 9 обрабатывали DCM, NEt3 и Н 2O и несколькими каплями МеОН. Полученную смесь сушили над Extrelute (Isolute HM-N, объем 3 мл, поставщик IST, 800-0220-ЕМ) и продували азотом до сухого состояния при 50 С. Добавляли DCM (3 мл) 3 раза и продували азотом до сухого состояния при 50 С. Свободное основание растворяли в смеси DCM/ДМФА, 4 мл/1 мл, и раствор добавляли к смоле с присоединенным НОВТ (300 мг; нагрузка 1,3 ммоль/г) (поставщик Novabiochem, 01-640425), и к смеси добавляли DMAP (10 мг). Смолу осторожно встряхивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли DIC (70 мкл). Смолу осторожно встряхивали в течение 4 ч при комнатной температуре, смолу отфильтровывали и промывали 3x ДМФА, 3x DCM и 3x ДМФА. Такая обработка давала смолу (7), которую использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.i) Получение промежуточного соединения 10 К смоле (6) добавляли О-(тетрагидро-2 Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (60 мг) в 4 мл DCM, смолу осторожно встряхивали в течение 18 ч при комнатной температуре, смолу отфильтровывали, промывалиDCM (2 мл), отфильтровывали и продували азотом при 50 С до сухого состояния. Такая обработка давала промежуточное соединение 10.j) Получение соединения 1 Промежуточное соединение 10 перемешивали в течение ночи в 5% ТФК в МеОН (5 мл), реакционную смесь выливали в раствор - 4 мл H2O и NaHCO3 (300 мг), продукт реакции экстрагировали DCM (5 мл) два раза, DCM-слой сушили над MgSO4, фильтровали и продували азотом при 50 С до сухого со- 19007908 стояния. Такая обработка давала конечное соединение 1 с выходом 2,3 мг. соединение 2 Промежуточное соединение 3 (макс. 0,0002 моль) перемешивали в 5% CF3COOH/CH3OH (q.s.) в течение уикенда при комнатной температуре. Растворитель выпаривали и получали (модельная реакция) 0,058 г (чистота 87%) соединения 2. Пример В 3. Получение соединение 3 Трифторуксусную кислоту (0,5 мл) при 0 С добавляли к смеси промежуточного соединения 8(0,0006 моль) и МеОН (5 мл). Смесь доводили до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 48 ч. Выпавшее в осадок вещество отфильтровывали, промывали МеОН и затем диэтиловым эфиром,сушили и получали 0,168 г (65%) соединения 3, температура плавления 226 С. В табл. F-1 приводится перечень соединений, полученных согласно одному из примеров, приведенных выше. В таблицах используются следующие аббревиатуры: соед.означаетсоединения,пр.[В] относится к такому же способу, какой описан в примерах В. Некоторые соединения характеризуются температурой плавления (т.пл.). С. Фармакологический пример С помощью анализа in vitro на ингибирование гистондеацетилазы (см. пример С.1) измеряют ингибирование ферментативной активности HDAC, полученное с соединениями формулы (I). Клеточную активность соединений формулы (I) определяли на клетках опухоли А 2780 с использованием колориметрического анализа на клеточную токсичность или выживание (Mosmann Tim, Journal ofImmunological Methods, 65:55-63, 1983) (см. пример С.2). Кинетическая растворимость в водных средах определяет способность соединения оставаться в водном растворе после разведения (см. пример С.3). Исходные растворы в ДМСО разводят одним водным растворителем - буфером в 3 последователь- 21007908 ные стадии. Для каждого разведения измеряют мутность нефелометром. Проникающая способность лекарственного средства выражает его способность перемещаться из одной среды в другую или через нее. Конкретно, это его способность перемещаться через кишечную оболочку в кровоток и/или из кровотока в мишень. Проникающую способность (см. пример С.4) можно измерить через образование фосфолипидного бислоя искусственной мембраны, иммобилизованной на фильтре. В анализе с искусственной мембраной, иммобилизованной на фильтре, формируют "сэндвич" из 96-луночного титрационного микропланшета и 96-луночного фильтра-планшета, так что каждая составная лунка разделяется на две камеры с донорским раствором на дне и акцепторным раствором сверху, разделенными диском микрофильтра в 125 мкм (размер пор 0,45 мкм), с покрытием из 2% (мас./об.) раствора диолеоилфосфатидилхолина в додекане, в условиях, в которых внутри каналов фильтра образуются многослойные бислои, когда система контактирует с водным буферным раствором. Проникающая способность соединений через такую искусственную мембрану измеряют в см/с. Целью является проверка проникания лекарственных средств через параллельную искусственную мембрану при 2 разных рН: 4,0 и 7,4. Детекцию соединения осуществляют методом УФ-спектрометрии при оптимальной длине волны от 250 до 500 нм. Метаболизм лекарственных средств означает, что жирорастворимое соединение ксенобиотик или эндобиотик ферментативно трансформируется в (а) полярный(е) водорастворимый(е) и экскретируемый(е) метаболит(ы). Основным органом для метаболизма лекарственных средств является печень. Продукты метаболизма часто менее активны, чем исходное лекарственное средство, или неактивны. Однако некоторые метаболиты могут обладать усиленной активностью или токсическим действием. Таким образом, метаболизм лекарственных средств может включать процессы как "детоксикации", так и "токсикации". Одну из главных ферментативных систем, определяющих способность организма обращаться с лекарственными средствами или химикатами, представляют цитохром-Р 450-монооксигеназы, которые являются NADPH-зависимыми ферментами. Метаболическую устойчивость соединений можно определить in vitro с использованием субклеточной ткани человека (см. пример С.5). В данном описании метаболическая устойчивость соединений выражается в % лекарственного средства, претерпевшего метаболизм после 15-минутной инкубации указанных соединений с микросомами. Количественно соединения определяют анализом методом ЖХ-МС. Супрессор опухолей р 53 транскрипционно активирует ряд генов, в том числе, ген WAF1/CIP1, в ответ на повреждение ДНК. Продукт гена WAF1 в 21 кДа обнаружен в комплексе, включающем циклины,циклинзависимые киназы (CDK) и ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA), в нормальных клетках, но не в трансформированных клетках, и, как оказалось, является универсальным ингибитором активности CDK. Одним из следствий связывания p21WAF1 с CDK и ингибирования CDK является предотвращение CDK-зависимого фосфорилирования и последующей инактивации белка Rb, который важен для развития клеточного цикла. Следовательно, индукция p21WAF1 в ответ на контакт клеток с ингибитором HDAC является сильным и специфическим индикатором ингибирования развития клеточного цикла в обеих контрольных точках G1 и G2. Способность соединений индуцировать p21WAFl измеряли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа на p2lWAFl (WAF1 ELISA of Oncogene). Анализ на p21WAF1 является "сэндвич"иммуноферментным анализом с использованием как мышиных моноклональных, так и кроличьих поликлональных антител. Кроличьи поликлональные антитела, специфические для человеческого белкаWAF1, иммобилизовали на поверхности пластиковых лунок, имеющихся в наборе. Любое количествоp21WAF1, имеющееся в анализируемом образце, будет связываться с иммобилизованными антителами. Биотинилированные идентифицирующие моноклональные антитела также узнают человеческий белокp2lWAF1 и будут связываться с любым p21WAF1, который удерживается иммобилизованными антителами. Идентифицирующие антитела, в свою очередь, связываются со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой из хрена. Пероксидаза из хрена катализирует конверсию хромогенного субстрата тетраметилбензидина от бесцветного раствора до раствора синего цвета (или желтого после добавления стопреагента), интенсивность окраски которого пропорциональна количеству белка p21WAF1, связанного с планшетом. Продукт цветной реакции определяют количественно с использованием спектрофотометра. Количество определяют, строя стандартную кривую с использованием известных концентрацийp2lWAF1 (предоставляемого в лиофилизованном виде) (см. пример С.6). Пример С.1. Анализ in vitro на ингибирование гистондеацетилазы Экстракты ядер HeLa (поставщик Biomol) инкубировали при 60 мкг/мл с 2 х 10-8 М меченного радиоактивными изотопами пептидного субстрата. В качестве субстрата для измерения активности HDAC использовали синтетический пептид, т.е. аминокислоты 14-21 гистона Н 4. Субстрат биотинилируют вNH2-концевой части со спейсером - 6-аминогексановой кислотой, защищают в СООН-концевой чти амидогруппой и специфически [3 Н]-ацетилируют в лизине 16. Субстрат биотин-(6-аминогексановая)Gly-Ala([3 Н]-ацетил-Lys-Arg-His-Arg-Lys-Val-NH2) добавляли в буфер, содержащий 25 мМ Hepes, 1 М сахарозы,0,1 мг/мл BSA и 0,01% Тритона Х-100, при рН 7,4. Через 30 мин реакцию деацетилирования обрывали,добавляя HCl и уксусную кислоту (конечные концентрации 0,035 мМ и 3,8 мМ, соответственно). После- 22007908 остановки реакции свободный 3 Н-ацетат экстрагировали этилацетатом. После перемешивания и центрифугирования определяли радиоактивность в аликвоте верхней (органической) фазы в счетчике -частиц. Для каждого эксперимента проводили параллельно инкубацию контролей (содержащих экстракт ядер HeLa и ДМСО без соединения), "пустышек" (содержащих ДМСО, но без экстракта ядер HeLa и соединения) и образцов (содержащих соединение, растворенное в ДМСО, и экстракт ядер HeLa). В первом случае соединения испытывали в концентрации 10-5 М. Когда соединения демонстрируют активность при 10-5 М, строили кривую зависимости ответа от концентрации, где соединения испытывали в концентрациях от 10-5 до 10-12 М. В каждом испытании величину для пустышки вычитали из величин как для контроля, так и для образца. Контрольный образец представлял 100% деацетилирование субстрата. Для каждого образца радиоактивность выражали как процент от средней величины для контроля. В соответствующих случаях величины IС 50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для снижения количества метаболитов на 50% от контроля) вычисляли с использованием пробит-анализа для сортируемых данных. В данном случае действие испытываемых соединений выражают в виде pIC50 (значение кологарифма величины IC50). Все испытываемые соединения продемонстрировали ферментативную активность при испытываемой концентрации 10-5 М, и 13 соединений имели pIC505 (см. табл.F-2). Пример С. 2. Определение антипролиферативной активности на клетках А 2780 Все испытываемые соединения растворяли в ДМСО, и затем получали разведения в культуральной среде. Конечные концентрации ДМСО в анализах на пролиферацию клеток никогда не превышали 0,1%(об./об.). Контрольные образцы содержали клетки А 2780 и ДМСО без соединения, и пустышки содержали ДМСО, но без клеток. МТТ растворяли в PBS в концентрации 5 мг/мл. Получали глициновый буфер,содержащий 0,1 М глицина и 0,1 М NaCl, забуференный до рН 10,5 NaOH (1 н) (все реагенты от Merck). Клетки карциномы яичников человека А 2780 (получены в дар от Dr. T.C. Hamilton [Fox Chase Cancer Centre, Pensilvania, USA] ) культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 2 мМ L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальной телячьей сыворотки. Клетки обычным способом поддерживали в монослойных культурах при 37 С в увлажненной атмосфере с 5% CO2. Клетки пересевали один раз в неделю с использованием раствора трипсин/ЭДТК при отношении разделения 1:40. Все среды и добавки получали от Life Technologies. Клетки были свободны от загрязнения микоплазмами, при определении с использованием набора Gen-Probe Mycoplasma Tissue Culture kit (поставщик BioMerieux). Клетки высевали в 96-луночные культуральные планшеты NUNC (поставщик Life Technologies) и оставляли прилипать к пластику на ночь. Используемая при высевании плотность клеток составляла 1500 клеток на лунку при общем объеме среды 200 мкл. После того, как клетки прилипнут к планшетам, среду заменяли и добавляли лекарственные средства и/или растворители до конечного объема 200 мкл. После четырехсуточной инкубации среду заменяли 200 мкл свежей среды, и анализировали плотность и жизнеспособность клеток с использованием анализа на основе МТТ. В каждую лунку добавляли 25 мкл раствора МТТ, и затем клетки инкубировали в течение 2 ч при 37 С. Затем среду осторожно отсасывали, и синий продукт МТТ-формазан растворяли, добавляя 25 мкл глицинового буфера и затем 100 мкл ДМСО. Тестируемые микропланшеты встряхивали в течение 10 мин на планшетном шейкере и измеряли поглощение при 540 нм с использованием спектрофотометра для чтения 96-луночных планшетов Emax (поставщик Sopachem). В рамках эксперимента результаты для каждого условия эксперимента являются средними результатами повторения в 3 лунках. Для целей начального скрининга соединения испытывали в одной установленной концентрации 10-6 М. В случае активных соединений эксперименты повторяли для построения полных кривых зависимости ответа от концентрации. Для каждого эксперимента параллельно проводили инкубацию контрольных образцов (не содержащих лекарственного средства) и пустышек (не содержищих ни клеток, ни лекарственного средства). Величину для пустышки вычитали из величин для всех контролей и образцов. Для каждого образца среднюю величину роста клеток (в единицах поглощения) выражали в виде процента от средней величины роста клеток для контроля. В соответствующем случае величины IC50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для снижения роста клеток на 50% от контроля) вычисляли с использованием пробит-анализа для сортируемых данных (Finnely D.J.,Probit Analyses, 2nd Ed., Chapter 10, Graded Responses, Cambridge University Press, Cambridge, 1962). В данном случае действие испытываемых соединений выражают в виде pIC50 (значение кологарифма величины IC50). Большинство испытываемых соединений показывали клеточную активность при испытываемой концентрации 10-6 М, и 12 соединений имели pIC505 (см. табл. F-2). Пример С.3. Кинетическая растворимость в водных средах На первой стадии разведения 10 мкл концентрированного исходного раствора активного соединения в ДМСО (5 мМ) добавляли к 100 мкл фосфатцитратного буфера, рН 7,4, и перемешивали. На второй стадии разведения аликвоту (20 мкл) раствора с первой стадии разведения также распределяли в 100 мкл фосфатцитратного буфера, рН 7,4, и перемешивали. Наконец, на третьей стадии разведения образец (20 мкл) раствора со второй стадии разведения также разводили в 100 мкл фосфатцитратного буфера, рН 7,4,и перемешивали. Все разведения осуществляли в 96-луночных планшетах. Сразу же после последней стадии разведения с помощью нефелометра измеряли мутность трех полученных растворов с последова- 23007908 тельных стадий разведения. Разведение повторяли трижды для каждого соединения для того, чтобы исключить случайные ошибки. На основании измерений мутности осуществляли разделение на 3 класса. Соединениям с высокой растворимостью ставили оценку 3, и для таких соединений раствор после первого разведения прозрачный. Соединения со средней растворимостью получали оценку 2. В случае таких соединений раствор после первого разведения непрозрачный, а после второго разведения прозрачный. Соединения с низкой растворимостью получали оценку 1, и в случае таких соединений раствор как после первого, так и после второго разведения непрозрачный. Измеряли растворимость 52 соединений. Из указанных соединений 9 продемонстрировало оценку 3, и 1 продемонстрировало оценку 1 (см. табл. F-2). Пример С.4. Параллельный анализ проницаемости искусственной мембраны Исходные образцы (аликвоты в 10 мкл исходного 5 мМ раствора в 100% ДМСО) разводили в планшете с глубокими лунками или Pre-mix, содержащем 2 мл водной буферной системы, рН 4 или рН 7,4(RSR4 System Solution Concentrate (pION. Перед добавлением образцов в планшет для сравнения в лунки добавляли по 150 мкл буфера и осуществляли контрольные измерения в УФ-свете. Затем буфер отбрасывали и использовали планшет как планшет для сравнения. Все измерения осуществляли в планшетах, устойчивых к УФ-излучению(поставшик Costar или Greiner). После контрольного измерения планшета для сравнения в его лунки добавляли по 150 мкл разведенных образцов, и по 200 мкл разведенных образцов добавляли в лунки донорского планшета 1. На акцепторный фильтр-планшет 1 (поставщик Millipore, тип MAIP N45) наносили 4 мкл раствора, образующего искусственную мембрану (1,2-диолеил-sn-глицер-3-фосфохолин в додекане, содержащем 0,1% 2,6 ди-трет-бутил-4-метилфенола), и помещали поверх донорского планшета 1 для формирования "сэндвича". Сверху в лунки акцепторного планшета вносили буфер (200 мкл). Сэндвич накрывали крышкой и хранили в течение 18 ч при комнатной температуре в темноте. Контрольные измерения акцепторного планшета 2 осуществляли, добавляя в лунки по 150 мкл буфера, и затем проводили УФ-измерения. После контрольного измерения акцепторного планшета 2 буфер отбрасывали, и 150 мкл акцепторного раствора переносили из акцепторного фильтр-планшета 1 в акцепторный планшет 2. Затем акцепторный фильтр-планшет 1 удаляли из сэндвича. После контрольного измерения донорского планшета 2 (см. выше) 150 мкл донорского раствора переносили из донорского планшета 1 в донорский планшет 2. Снимали УФ-спектры донорского планшета 2, акцепторного планшета 2 и планшета для сравнения (с помощью SpectraMAX 190). Все спектры обрабатывали для вычисления проникающей способности с помощью программного обеспечения PSR4p Command Software. Измерения для всех соединениий повторяли трижды. В качестве эталонов в каждом эксперименте использовали карбамазепин,гризеофулвин, ациклогуанизин, атенолол, фуросемид и хлоротиазид. Соединения распределяли на 3 категории как имеющие низкую проникающую способность (средний эффект 0,5 х 10-6 см/с; оценка 1), среднюю проникающую способность (1 х 10-6 см/ссредний эффект 0,5 х 10-6 см/с; оценка 2) или высокую проникающую способность ( 0,5 х 10-6 см/с; оценка 3). Только одно испытанное соединение продемонстрировало оценку 1 при измерениях при обоих рН. Пример С.5. Метаболическая устойчивость Субклеточные препараты получали согласно Gorrod et al. (Xenobiotica, 5:453-462, 1975) путем разделения на центрифуге после механической гомогенизации ткани. Ткань печени ополаскивали в охлажденном на льду буфере 0,1 М Трис-HCl (рН 7,4) для отмывания избытка крови. Затем ткань сушили, промокая, взвешивали и нарезали на крупные куски хирургическими ножницами. Куски ткани гомогенизировали в 3 объемах охлажденного на льду 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,4) с использованием или Potter-S (Braun, Италия), снабженного тефлоновым пестиком, или гомогенизатора Sorvall Omni-Max, в течение 7 х 10 с. В обоих случаях во время процесса гомогенизации сосуд держали во/на льду. Гомогенаты ткани центрифугировали при 9000 хg в течение 20 мин при 4 С с использованием центрифуги Sorvall или ультрацентрифуги Beckman. Полученный супернатант хранили при -80 С и обозначали "S9". Затем фракцию S9 можно центрифугировать далее при 100000 хg в течение 60 мин (4 С) с использованием ультрацентрифуги Beckman. Полученный супернатант осторожно отсасывали, делили на аликвоты и обозначали "цитозоль". Осадок ресуспендировали в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) в конечном объеме 1 мл на 0,5 г массы исходной ткани и обозначали "микросомы". Все субклеточные фракции делили на аликвоты, сразу же замораживали в жидком азоте и хранили при -80 С до применения. Для испытываемых образцов смесь для инкубации содержала PBS (0,1 М), соединение (5 мкМ),микросомы (1 мг/мл) и NADPH-генерирующую систему (0,8 мМ глюкозо-6-фосфата, 0,8 мМ хлорида магния и 0,8 единиц глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы). Контрольные образцы содержали те же вещества, но микросомы заменяли микросомами, инактивированными нагреванием (10 мин при 95 С). Извлечение соединений в контрольных образцах всегда составляло 100%.- 24007908 Смеси предварительно инкубировали в течение 5 мин при 37 С. Реакцию начинали в момент времени ноль (t=0), добавляя 0,8 мМ NADP, и образцы инкубировали в течение 15 мин (t=15). Реакцию обрывали, добавляя 2 объема ДМСО. Затем образцы центрифугировали в течение 10 мин при 900 хg, и супернатанты хранили до анализа при комнатной температуре не более 24 ч. Все инкубации повторяли дважды. Анализ супернатантов осуществляли методом ЖХ-МС. Элюирование образцов осуществляли на Xterra MS C18 (50 х 4,6 мм, 5 мкм, Waters, США). Использовали систему ВЭЖХ Alliance 2790 (поставщик Waters, США). Элюировали буфером А (25 мМ ацетата аммония(рН 5,2) в смеси H2O/ацетонитрил (95/5, причем растворителем В является ацетонитрил и растворителем С метанол, при скорости потока 2,4 мл/мин. Используют градиент - возрастание концентрации органической фазы от 0% через 50% В и 50% С за 5 мин до 100% В за 1 мин при линейном изменении, и концентрацию органической фазы поддерживали постоянной еще в течение 1,5 мин. Общий объем загрузки образцов составлял 25 мкл. В качестве детектора использовали тройной квадрупольный масс-спектрометр Quattro (поставщикMicromass, Manchester, UK), снабженный источником ESI. Температуру источника и десольватации устанавливали в 120 и 350 С, соответственно, и использовали азот в качестве распыляющего и осушающего газа. Данные получали в положительном режиме (реакция одного иона). Пик напряжения устанавливали в 10 В, и время пребывания составляло 1 с. Метаболическую устойчивость выражали в % метаболизма соединения после 15-минутной инкубации в присутствии активных микросом (Е(акт (% метаболизма = 100% Полный ионный ток (TIC) Е(акт) при t=15TIC Е(акт) при t=0 Соединения, имеющие процент метаболизма менее 20%, определяли как высокоустойчивые к метаболизму. Соединения, претерпевающие метаболизм на уровне от 20 до 70%, определяли как промежуточно устойчивые, и соединения, демонстрирующие процент метаболизма свыше 70, определяли как слабоустойчивые к метаболизму. Когда бы ни осуществлялась проверка на метаболическую устойчивость, всегда включали три эталонных соединения. Верапамил включали в качестве соединения с низкой метаболической устойчивостью (% метаболизма = 73%). Цизаприд включали как соединение со средней метаболической устойчивостью (% метаболизма 45%) и пропанол включали как соединение с метаболической устойчивостью от промежуточной до высокой (25% метаболизма). Указанные эталонные соединения использовали для проверки достоверности анализа на метаболическую устойчивость. Испытывали два соединения, и они оба имели процент метаболизма менее 20%. Пример С.6. Индуцирующая способность в отношении р 21 Для определения уровня экспрессии белка р 21 в клетках карциномы яичников человека А 2780 применяли следующий протокол. Клетки А 2780 (20000 клеток/180 мкл) высевали в 96-луночные планшеты в среде RPMI с добавлением 2 мМ L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальной телячьей сыворотки. За 24 ч до лизиса клеток добавляли соединения в конечных концентрациях 10-5, 10-6, 10-7 и 10-8 М. Все испытываемые соединения растворяли в ДМСО и затем осуществляли разведения в культуральной среде. Через 24 ч после добавления соединений супернатанты удаляли из клеток. Клетки промывали 200 мкл охлажденного на льду PBS. Содержимое лунок отсасывали и добавляли 30 мкл буфера для лизиса(50 мМ Трис.HCl (рН 7,6), 150 мМ NaCl, 1% Nonidet p40 и 10% глицерина). Планшеты инкубировали в течение ночи при -70 С. Соответствующее число титрационных микролунок извлекали из мешочка из фольги и помещали в свободный держатель для лунок. Получали рабочий раствор (1 х) буфера для промывки (20 х концентрат для промывки планшетов: 100 мл 20-кратного концентрированного раствора PBS и поверхностноактивного вещества, содержит 2% хлорацетамида). Лиофилизованный эталонный p21WAF восстанавливали дистиллированной Н 2O и затем разводили разбавителем для образцов (имеющимся в наборе). Образцы получали разведением их 1:4 в разбавителе для образцов. Образцы (100 мкл) и эталоныp21WAF1 (100 мкл) переносили пипеткой в соответствующие лунки и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 ч. Лунки промывали 3 раза 1 х буфером для промывки и затем в каждую лунку добавляли пипеткой 100 мкл реагента идентифицирующих антител (раствор биотинилированных моноклональных антител к p21WAF1). Лунки инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем три раза промывали 1 х буфером для промывки. Разводили 400 х конъюгат (конъюгат стрептавидина и пероксидазы: 400-кратный концентрированный раствор) и в лунки добавляли по 100 мкл 1 х раствора. Лунки инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем промывали 3 раза 1 х буфером для промывки и 1 раз дистиллированной Н 2O. Добавляли в лунки раствор субстрата (хромогенного субстрата) (100 мкл) и лунки инкубировали в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. В каждую лунку добавляли стоп-раствор в том же порядке, в каком ранее добавляли раствор субстрата. Измеряли поглощение в каждой лунке при двух длинах волн 450/595 нм с использованием спектрофотометра для прочтения планшетов. Для каждого эксперимента параллельно проводили инкубацию контрольных образцов (не содержащих лекарственного средства) и пустышек (не содержащих ни клеток, ни лекарственных средств).- 25007908 Величину для пустышки вычитали из величин для всех контролей и образцов. Для каждого образца величину индукции p21WAF1 (в единицах поглощения) выражали в виде процента от величины дляp21WAF1, присутствующего в контрольных образцах. Индукцию в процентах свыше 130% определяли как существенную индукцию. В данном анализе проверяли три соединения. Два показывали существенную индукцию. В табл. F-2 приводятся результаты для соединений, которые испытывали согласно примерам С.1,С.2 и С.3. Таблица F-2D. Пример композиции: таблетки с пленочным покрытием Получение сердцевины таблеток Смесь 100 г соединения формулы (I), 570 г лактозы и 200 г крахмала тщательно перемешивали и затем увлажняют раствором 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинилпирролидона в примерно 200 мл воды. Влажную порошкообразную смесь просеивают, сушат и снова просеивают. Затем добавляют 100 г микрокристаллической целлюлозы и 15 г гидрированного растительного масла. Все тщательно перемешивают и прессуют в таблетки, и получают 10000 таблеток, причем каждая содержит 10 мг соединения формулы (I). Покрытие К раствору 10 г метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этанола добавляют раствор 5 г этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем добавляют 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола, и 10 г полиэтиленгликоля расплавляют и растворяют в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляют к первому раствору, и затем к этой смеси добавляют 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной суспензии красителя, и все гомогенизируют. Полученную таким образом смесь наносят на сердцевины таблеток в аппарате для нанесения покрытия. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение формулы (I)t равен 0, 1, или 2 и когда t равен 0, тогда имеется в виду непосредственная связь; каждый Q представляет собой азот или каждый X представляет собой азот или каждый Y представляет собой азот или-L- представляет собой непосредственную связь; каждый R3 представляет, независимо, атом водорода, и один атом водорода может быть заменен заместителем, выбранным из арила;C1-6-алкилокси; каждый R6 и R7 может находиться у атома азота, замещая водород; его N-оксидные формы, фармацевтически приемлемые соли присоединения и их стереохимически изомерные формы. 2. Соединение по п.1, где-L- представляет собой непосредственную связь;R5 представляет собой водород; представляет собой радикал, выбранный из числа (а-1), (а-20), (а-27), (а-28), (а-29), (а-41) или- 27007908 каждый R6 выбирают, независимо, из числа водорода, галогена, C1-6-алкила или C1-6-алкилокси. 3. Соединение по пп.1 и 2, представляющее собой соединение 3 соединение 3 4. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые носители и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество соединения по пп.1-3. 5. Способ получения фармацевтической композиции по п.4, где тщательно смешивают фармацевтически приемлемые носители и соединение по пп.1-3. 6. Применение соединения по пп.1-3 в качестве лекарственного средства. 7. Применение соединения по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства для лечения пролиферативных заболеваний. 8. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что промежуточное соединение формулы(II) вводят во взаимодействие с соответствующей кислотой, такой как, например, трифторуксусная кислота(CF3COOH), и получают гидроксамовую кислоту формулы (1-а), где R1 представляет собой -C(O)NH(OH) 9. Способ детекции или идентификации HDAC в биологическом образце, включающий детекцию или определение образования комплекса между меченым соединением по п.1 и HDAC. 10. Сочетание противораковых средств и ингибитора HDAC по любому из пп.1-3.