Способ получения клеток наноразмерных молочно-кислых бактерий и композиции на их основе

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК НАНОРАЗМЕРНЫХ МОЛОЧНО-КИСЛЫХ БАКТЕРИЙ И КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ Настоящее изобретение относится к способу получения клеток наноразмерных молочно-кислых бактерий, а также к композиции, пищевому продукту, напитку, корму, косметическому продукту на основе этих клеток. Заявленный способ включает культивирование молочно-кислых бактерий в среде, содержащей глюкозу, при регулировании величины рН среды в диапазоне от 5 до 8, и переработку молочно-кислых бактерий при величине рН от 5 до 8, где стадии переработки включают, по крайней мере, стадию промывки. Настоящее изобретение позволяет получить молочно-кислые бактерии, имеющие конкретный размер, предпочтительный для индуцирования Th1, наиболее подходящий для способности продуцировать IFN-, и превосходную диспергируемость в воде.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: СИНВА ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД.; БИО-ЛАБ ЛТД.; ДЗЕ ДЖАПАНИЗ АССОСИЭЙШН ОФ КЛИНИКАЛ РИСЕРЧ ОН САПЛИМЕНТС; КОСМО ФУДЗ КО.,ЛТД. (JP) Область техники Настоящее изобретение относится к наноразмерным молочно-кислым бактериям, активно усиливающим способность получения интерферона- антигенпрезентирующими клетками. Уровень техники В соответствии с последними исследованиями известно, что первичные Т клетки (в дальнейшем обозначаемые как "Th0") дифференцируются в Т клетки типа-I (в дальнейшем обозначаемые как "Th1") и Т клетки типа-II (в дальнейшем обозначаемые как "Th2") в зависимости от их функций. Иммунный ответ Th1 клеток индуцирует клеточный иммунитет, приводящий к осуществлению фагоцитоза мононуклеарными клетками, такими как макрофаги или лимфоциты. С другой стороны, иммунный ответ Th2 клеток индуцирует гуморальный иммунитет так, чтобы происходило уничтожение бактерий антителами. Th1 цитокин супрессирует Th2, и наоборот, Th2 цитокин супрессирует Th1. Два данных цитокина действуют синергично для поддержания баланса общего иммунитета. Интерферон- (IFN-) представляет собой цитокин, секретируемый дендритными клетками (антигенпрезентирующими клетками) при инфицировании вирусами, межклеточными факультативными бактериями, такими как бациллы туберкулеза, сальмонелла, листерия или Mycobacterium laprae, или межклеточным факультативным грибком, таким как Cryptococcus. С другой стороны, интерлейкин 12 (IL-12) представляет собой цитокин, секретируемый антигенпрезентирующими клетками, такими как дендритные клетки или макрофаги, и известен как очень сильное иммуноактивное средство, которое активирует натуральные клетки-киллеры (NK клетки), LAK клетки (LAK клетки) или Т клетки-киллеры (CTL клетки), которые непосредственно атакуют раковые клетки и усиливают продуцирование IFN-. Данные IFN- и IL-12, оба, являются цитокинами, которые индуцируют Th1 клетки, но обнаружено, что они отличаются рецепторами (TRL: Toll-подобными рецепторами), экспрессируемыми антигенпрезентирующими клетками (TLR1, TLR3, TLR5 и TLR9 в случае IL-12; TLR7 и TLR9 в случае IFN-). Сообщалось, что молочно-кислые бактерии, которые усиливают продуцирование IFN- антигенпрезентирующими клетками, и их составляющие элементы включают порошок клеток Lactobacillus brevis (см. патентный документ 1: JP-A 6-206826), молочно-кислые бактерии, относящиеся к роду Enterococcus, и их продукт переработки (см. патентный документ 2: JP-A 8-259450), экстракт составляющих элементов Lactobacillus brevis FERM ВР-4693 (см. патентный документ 3: JP-A 9-188627) и т.д. Если бы все было хорошо, было бы естественно выбрать штамм, имеющий высокую способность продуцирования IFN-, и не было бы необходимо пробовать модифицировать низкоактивный штамм в высокоактивный штамм, не говоря уже об осуществлении подобной попытки. Однако для коммерческих структур, которые поставляли клетки Lactobacillus brevis на рынок в течение многих лет, очень желательно усиление способности продуцирования IFN- молочно-кислыми бактериями. Прежде молочно-кислые бактерии обычно принимались в форме ферментированного молока или йогурта. Принятые перорально антигены захватываются в результате их фагоцитоза М клетками, покрывающими Пейеровы бляшки. С целью выяснить, антигены какого размера могли бы захватываться Пейеровыми бляшками, было проведено большое количество исследований для того, чтобы установить корреляцию между размерами частиц и захватом их в Пейеровые бляшки. В результате, уже было установлено, что фагоцитоз М клетками становится значительно ниже, когда размер частиц превышает 10 мкм (см. непатентный документ 1), а также, что максимальный размер частиц, которые проходят сквозь Пейеровы бляшки, составляет 10 мкм, когда материалом частиц является полилактид (см. непатентный документ 2), 15 мкм, когда материалом частиц является полистирол (см. непатентный документ 3), и 21 мкм, когда материалом частиц является биодеградируемая полимолочная кислота (см. непатентный документ 4). Из данных результатов становится очевидно, что наибольший размер частиц, способных проходить сквозь Пейеровы бляшки, составляет 20 мкм. В соответствии с экспериментом, в котором чувствительные к антигенам гранулы биодеградируемой полимолочной кислоты перорально вводили крысам, размер частиц, при котором процент продуцирования антиген-специфичных антител в результате индуцирования Th2 составлял 4 мкм в случае IgG и 7 мкм в случае IgA. Вследствие этого становится очевидным, что предпочтительный для индуцированияTh2 размер частиц составляет от 3 до 7 мкм или подобный (см. непатентный документ 4). Тем не менее, до сих пор не сообщалось о предпочтительном размере частиц для индуцирования Непатентный документ 3: Eldridge J.H., et al., Molec. Immun., 28, 287-294 (1991). Непатентный документ 4: Tabata Y., et al., Vaccine 14, 1677-1685 (1996). Раскрытие изобретения Проблемы, решаемые посредством изобретения С точки зрения вышеупомянутых обстоятельств настоящее изобретение имеет своей целью предоставление молочно-кислых бактерий, имеющих конкретный размер, предпочтительный для индуцирования Th1, наиболее подходящий для стимуляции клеток иммунной системы к продукции IFN-, и превосходную диспергируемость в воде. Средства решения проблем Авторы настоящего изобретения выделили молочно-кислые бактерии, которые повышают продолжительность жизни, из "Sugukizuke" (маринованных листьев suguki, род репы) в Киото, "Sunkizuke" (маринованных листьев sunki, род красной свеклы) в Нагано, Мариами и подобных Матсони в Республике Грузия, ферментированного кобыльего молока в Монголии и различных ферментированных молочных продуктов, и анализировали корреляции между размерами этих молочно-кислых бактерий и способностями антигенпрезентирующих клеток продуцировать IL-12 и IFN-. В результате IL-12 продуцирующая способность антигенпрезентирующих клеток, как результат стимулирования молочно-кислыми бактериями, как показано на фиг. 1 А, повышается, когда размер молочно-кислых бактерий становится меньше до 1 мкм или более (см. ссылочный пример 1). С другой стороны, в случае IFN- продуцирующей способности, IFN- продуцирующая способность, как проиллюстрировано на фиг. 1 В, также повышается, когда размер молочно-кислых бактерий становится меньше, до 1 мкм или более (см. ссылочный пример 1). Однако было обнаружено, что некоторые штаммы показывают отрицательную корреляцию междуIL-12 продуцирующей способностью и IFN- продуцирующей способностью. Например, такие штаммы как EF, KH1 и KH3 демонстрируют высокую IL-12 продуцирующую способность, но низкую IFN- продуцирующую способность. В противоположность такие штаммы, как LL12 и ML4, демонстрируют низкую IL-12 продуцирующую способность, но высокую IFN- продуцирующую способность. С другой стороны, было обнаружено, что SNK имеет такой отличительный признак, что как IL-12 продуцирующая способность, так и IFN- продуцирующая способность являются прямо пропорциональными. Вышеизложенные полученные данные не могут быть получены на основе предшествующего уровня техники (патентная заявка Японии 2007-30324) и, по-видимому, могут быть приписаны разнице в идентификации молочно-кислых бактерий рецепторами, экспрессируемыми на антигенпрезентирующих клетках. В результате было обнаружено, что молочно-кислые бактерии, размеры частиц которых настолько большие, что приближаются к 9 мкм, подобно Lactobacillus brevis FERM BP-4693 (обозначенных "LBR" в табл. 1 и на фиг. 1 А, 1 В и 2), значительно хуже по IFN- продуцирующей способности к бактериям,имеющим размер частиц, равный 1 мкм или около того. Для решения вышеописанных проблем авторы настоящего изобретения с энтузиазмом провели исследование условий, которые обеспечивают клетки молочно-кислых бактерий наименьшими значениями параметра для распределения размеров их частиц и предотвращают реагрегацию самих клеток. По ходу исследования авторы настоящего изобретения уделили внимание тому факту, что молочнокислые бактерии являются положительно заряженными (плюс) на своей поверхности, и обнаружили, что значение параметра (которое далее по тексту может быть названо просто "размер частиц") распределения размеров частиц клеток молочно-кислых бактерий может быть снижено до 1,0 мкм или меньше посредством регулирования рН до нейтрального уровня на стадии культивирования и стадиях переработки. В целом, известно, что форма молочно-кислых бактерий меняется в зависимости от различных условий в способе их культивирования. Однако специалистам в данной области не было общеизвестно, что размер молочно-кислых бактерий можно регулировать до 1,0 мкм или меньше посредством регулирования рН на стадии культивирования и стадиях переработки. Авторы настоящего изобретения обнаружили также, что способность антигенпрезентирующих клеток продуцировать IFN- может быть значительно усилена такими клетками. Как было описано выше, авторы настоящего изобретения обнаружили, что даже у обычных клеток молочно-кислых бактерий, имеющих размер частиц больше чем 1,0 мкм, размер их частиц можно регулировать до 1,0 мкм или меньше посредством их культивирования и переработки при нейтральном диапазоне рН, а также, что данные молочно-кислые бактерии могут усилить IFN- продуцирующую способность антигенпрезентирующих клеток и могут улучшить иммуностимулирующую активность. Эти полученные данные затем привели к завершению настоящего изобретения. В последнее время концентрированные сухие порошки мертвых клеток молочно-кислых бактерий стали широко доступны на рынке. Они предназначены для усиления потребления большого числа молочно-кислых бактерий в небольшом количестве. Даже если размер частиц самих молочно-кислых бактерий в таком сухом порошке составляет 1,0 мкм или меньше, его частицы при доливании воды подвергаются взаимному адсорбированию и агрегированию в комки, если это порошок, полученный посредством простого высушивания концентрированных клеток (см. ссылочный пример 2). Собственно говоря, возможность существования молочно-кислых бактерий, размер частиц которых составляет 1,0 мкм или меньше, в обычных условиях культивирования невысока (см. табл. 1). Конкретно описанное настоящее изобретение представляет собой композицию, усиливающую синтез цитокинов клетками иммунной системы, содержащую клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий, принадлежащих к Lactobacillus brevis, где клетки имеют средний размер не более чем 1,0 мкм при распределении их по размерам, где клетки получают культивированием в питательной среде, содержащей глюкозу, заканчивают культивирование в момент времени, когда в среде истощается глюкоза, и подвергают бактерии дальнейшей обработке, в частности отмыванию, причем на стадии культивирования и дальнейшей обработки бактерий регулируют величину рН в диапазоне от 5 до 8. Другим вариантом композиции является композиция, в которой дальнейшая обработка клеток включает добавление к ним диспергирующей добавки или наполнителя и диспергирование клеток с последующей лиофилизацией или распылительной сушкой полученной дисперсии. Другим вариантом композиции является композиция, в которой Lactobacillus brevis представляет собой штамм FERM ВР-4693. Другим вариантом композиции является композиция, имеющая иммуностимулирующую активность. Другим вариантом композиции является композиция, в которой диспергирующая добавка или наполнитель представляет собой трегалозу, декстрин или снятое молоко. Изобретение также относится к пищевому продукту, содержащему композицию по п.1, напитку,содержащему вышеуказанную композицию, корму, содержащему вышеуказанную композицию, косметическому продукту, содержащему вышеуказанную композицию. Изобретение также относится к способу получения наноразмерных молочно-кислых бактерий Lactobacillus brevis, входящих в состав композиции по п.1, включающий культивирование бактерий в питательной среде, содержащей глюкозу, остановку культивирования в момент времени, когда в среде истощается глюкоза, и дальнейшую обработку бактерий, в частности отмывание, причем на стадии культивирования и дальнейшей обработки бактерий регулируют рН в диапазоне от 5 до 8. Другим вариантом способа является способ, где переработка включает стадии добавления и диспергирования диспергирующей добавки или наполнителя в культуру, содержащую среду с регулируемой величиной рН от 5 до 8 и клетки, диспергирования клеток и затем лиофилизации или распылительной сушки полученной дисперсии. Другим вариантом способа является способ, где диспергирующая добавка или наполнитель представляет собой трегалозу, декстрин или снятое молоко. Другим вариантом способа является способ, где Lactobacillus представляют собой штамм Lactobacillus brevis. В соответствии с настоящим изобретением даже у обычных клеток молочно-кислых бактерий,имеющих размер частиц больше чем 1,0 мкм, размер их частиц можно регулировать до 1,0 мкм или меньше посредством их культивирования и переработки в нейтральном диапазоне рН. Считается, что клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий, которые могут быть получены,как описано выше, являются очень полезными, так как они могут усилить IFN- продуцирующую способность антигенпрезентирующих клеток и могут улучшить иммуностимулирующую активность. Краткое описание чертежей Фиг. 1 - графики, иллюстрирующие корреляции между размером клеточных частиц молочнокислых бактерий и IL-12 и IFN- продуцирующими способностями; фиг. 2 - график, иллюстрирующий корреляцию между IL-12 и IFN- продуцирующими способностями в результате стимулирования молочно-кислыми бактериями; фиг. 3 - график, сравнивающий размеры клеточных частиц; фиг. 4 - графики, иллюстрирующие распределение размеров частиц (А: % частоты, В: кумулятивность %) порошка молочно-кислых бактерий; фиг. 5 - график, иллюстрирующий размер клеточных частиц молочно-кислых бактерий и IFNпродуцирующую способность наноразмерных молочно-кислых бактерий, "LABRE". Наилучший вариант осуществления изобретения Далее настоящее изобретение будет описано более подробно. Клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением имеют значение параметра (размер частиц) распределения размеров частиц, равное 1,0 мкм или меньше. В настоящем изобретении выражение "значение параметра распределения размеров частиц" имеет в виду значение, служащее в качестве показателя, который указывает размер бактерий и означает размер частиц, при котором относительная частота распределения частиц становится максимальной, в процессе измерения размеров частиц. Конкретные примеры молочно-кислых бактерий, используемых в качестве источников для "клеток наноразмерных молочно-кислых бактерий" в настоящем изобретении включают в себя бактерии Lactobacillus, такие как L. acidphilus, L. gasseri, L. mali, L. plantarum, L. buchneri, L. casei, L. johnsonii, L. gallinarum, L. amylovorus, L. brevis, L. rhamnosus, L. kefir, L. paracasei и L. crispatus; бактерии Streptococcus, такие как S. thermophilus; бактерии Lactococcus, такие как L. lactis; бактерии Enterococcus, такие как Е. faecalis и Е. faecium; бактерии Bifidobacterium, такие как В. bifidum, В. longum, В. adolescentis, В. infantis, В.breve и В. catenulatum; и так далее. Клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий по настоящему изобретению могут быть в виде живых клеток или мертвых клеток. Живые клетки могут подвергаться изменению профиля во время доставки или воспроизводства после их производства в качестве продукта, вследствие этого, предпочтительными являются мертвые клетки, которые не подвергаются никаким дополнительным изменениям профиля. Известно, что при ухудшении окружающих условий роста в способе культивирования молочнокислые бактерии изменяют профиль под воздействием стресса. Вследствие этого, по настоящему изобретению можно управлять условиями культивирования и переработки так, чтобы молочно-кислые бактерии имели возможность размножаться при поддержании единообразия своего профиля и получать наноразмерные молочно-кислые бактерии, имеющие вышеупомянутое значение параметра распределения размеров их частиц. Так как молочно-кислые бактерии являются положительно заряженными (плюс) на своей поверхности, как упомянуто выше, мембраны остаются стабильными в результате приведения рН на стадии их культивирования и стадиях переработки к нейтральному диапазону, таким образом, делая возможным избежать двуклеточное образование, которое оставляет разделенные клетки слившимися вместе или обратной адсорбции самих клеток. В качестве способа "регулирования рН до нейтрального диапазона" может быть упомянута нейтрализация кислотой, такой как молочная кислота, или щелочью, такой как гидроксид натрия. Необходимо отметить, что выражение "регулирование рН на стадии культивирования и стадиях переработки до нейтрального диапазона" в настоящем изобретении означает не только регулирование рН до нейтрального диапазона на стадии культивирования, но также регулирование рН до нейтрального диапазона на таких стадиях (стадии переработки), как стерилизация клеток, отмывание и концентрирование после завершения культивирования. рН на стадии культивирования и стадиях переработки предпочтительно может составлять от 5 до 8,более предпочтительно от 5,5 до 7,5. В качестве источника энергии в питательной композиции среды предпочтительной является глюкоза по причине наибольшей доступности своей энергии. Предпочтительно, чтобы ее содержание в среде можно было регулировать от 5 до 10 мас.% или около того. Если использовать в качестве конечной точки культивирования момент времени, когда глюкоза была израсходована, становится возможным избежать изменения клеточного профиля, который иначе бы произошел под воздействием стресса в результате потери питания. Дополнительно "клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий" в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно могут находиться в форме, подвергнутой диспергирующей обработке. На способ диспергирующей обработки не накладывается никаких особых ограничений. Однако, например, может быть упомянут способ, который диспергирует культуру бактерий во влажных условиях в гомогенизаторе высокого давления, управляемом при 150 кгс/см 2 (1,5 МПа) или около того. В этом случае в культуру предпочтительно заблаговременно добавить известный диспергатор или наполнитель. Посредством диспергатора или наполнителя может быть эффективно предотвращена реагрегация клеток. Количество диспергатора или наполнителя, которое необходимо добавить, изменяется в зависимости от свойств клеток, но предпочтительно может быть от 1- до 100-кратным, более предпочтительно от 2- до 20-кратным в переводе на массу относительно клеток. Предпочтительным диспергатором или наполнителем могут являться трегалоза, декстрин, обезжиренное молоко и т.п. Когда желательно в конечном итоге получить в качестве порошка "клетки наноразмерных молочнокислых бактерий" в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно проводить лиофилизацию или распылительную сушку после проведения обработки клеток известным диспергатором, наполнителем и т.п. так, чтобы клетки не подвергались реагрегации. Такая обработка делает возможным получение клеточного порошка, имеющего замечательную способность диспергироваться в воде. Размеры частиц описанных выше клеток наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением были снижены до порядка нанометров (нм) не больше чем 1,0 мкм. При получении в сухом порошке посредством вышеописанного способа и ресуспендирования в физиологическом пищеварительном соке данные клетки также остаются с размером клеток, равным 1 мкм или меньше. Необходимо отметить, что термин "физиологическийпищеварительный сок" означает, как использовано в данном описании, искусственный желудочный сок или кишечный сок, полученный по-4 020627 средством способа, самого по себе известного в данной области. Клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением сами по себе могут быть использованы в качестве продукта. Однако для улучшения их аромата и/или вкуса или придания им требуемой формы или для подобной цели их, в основном, оформляют в конечный продукт посредством добавления или смешивания с различными ингредиентами и дополнительного смешивания с одним или более ароматизаторами. В качестве ингредиентов для добавления или смешивания могут быть упомянуты различные углеводы, подсластители, кислые специи, фруктовые экстракты и т.п. Более конкретно могут быть упомянуты сахара, такие как глюкоза, сахароза, фруктоза и мед; сахарные спирты, такие как сорбитол, ксилитол, эритритол, лактитол и паратинит; эмульгаторы, такие как сложные эфиры жирных кислот и сахарозы, сложные эфиры жирных кислот и глицерина и лецитин. Индукторы Th1 с прекрасным запахом и вкусом также могут быть получены при смешивании даже одного или более различных витаминов, таких как витамин А, витамин Bs, витамин С и витамин Е, растительных экстрактов, компонентов хлебных злаков, растительных компонентов, молочных компонентов и т.п. В качестве ароматизирующих веществ могут быть упомянуты такие ароматизирующие вещества,как ароматическая добавка со вкусом йогурта, ягодная ароматическая добавка, апельсиновая ароматическая добавка, гуинсовая ароматическая добавка, ароматическая добавка со вкусом Японского базилика,лимонная ароматическая добавка, яблочная ароматическая добавка, мятная ароматическая добавка, виноградная ароматическая добавка, грушевая ароматическая добавка, ароматическая добавка со вкусом яичного крема, персиковая ароматическая добавка, ароматическая добавка со вкусом дыни, банановая ароматическая добавка, ароматическая добавка со вкусом тропических фруктов, травяная ароматическая добавка, ароматическая добавка со вкусом черного чая и кофейная ароматическая добавка. Они могут быть использованы либо отдельно или в сочетании. На количество каждой добавляемой вкусовой добавки не накладывается никаких особых ограничений, но с точки зрения вкусового ощущения, каждая вкусовая добавка может быть добавлена предпочтительно от 0,05 до 0,5 мас.% или около того, в частности от 0,1 до 0,3 мас.% или около того. Описанные выше клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением могут быть оформлены в любой форме, такой как твердая форма или жидкая форма. Описанные конкретно, они могут быть оформлены вместе с фармацевтически приемлемыми солями, наполнителями, консервантами, красителями, корригирующими веществами и/или т.п. в продуктах различных форм, такими как напитки, гранулы, таблетки и капсулы, посредством способов, известных в области производства лекарственных или пищевых продуктов. Дополнительно клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением могут также быть использованы для здоровых продуктов питания. Термин "здоровые продукты питания" обозначает продукты питания, предназначенные для здравоохранения или медицинского обеспечения и продвижения в более положительном направлении, чем обычные продукты питания. Эти формы могут быть жидкими, полутвердыми или твердыми. Конкретные примеры включают кондитерские изделия, такие как печенья, рисовые крекеры, желейные конфеты, сладкие желированные драже,йогурт и паровые или печеные сдобы с наполнителем из повидла; прохладительные напитки; диетические напитки и супы. Кроме того, клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением могут также использоваться в наружных косметических средствах для кожи в ряде форм выпуска, таких как лосьоны (косметические жидкости), косметические кремы, эмульсии, косметические жидкости, косметические маски, разновидности молочка для кожи (концентраты эмульсий), косметические гели, порошки, кремы для губ, губные помады, косметические средства для основы под макияж, кремыосновы, косметические средства для ухода при загаре, средства для принятия ванн, шампунь для тела,ополаскиватели для тела, разновидности мыла, разновидности пены для лица, мази, клейкие пластыри для кожи, желеобразные формы и аэрозольные формы. В случае необходимости с клетками наноразмерных молочно-кислых бактерий в соответствии с настоящим изобретением могут быть смешаны различные ингредиенты и добавки, обычно используемые в косметике, квазилекарства и лекарства, такие как представлены примерами ниже. Конкретно, представляется возможным смешивать соответствующим образом хумектанты, такие как глицерин, вазелин, мочевина, гиалуроновая кислота и гепарин; поглотители или рассеиватели ультрафиолетовых лучей, такие как производные РАВА (парааминобензойная кислота, "ESCALOL 507" (ISPJAPAN Ltd.) и т.д.), производные коричной кислоты (неогепарин, "PARSOL МСХ" (DSM Nutrition JapanK.K.), "SUNGUARD В" (Shiseido Co., Ltd.) и т.д.), производные салициловой кислоты (такие как октилсалицилат), производные бензофенона ("ASL-24", "ASL-24S" (Shonan Chemical Services, Inc.) и т.д.), производные дибензоилметана ("PARSOL A", "PARSOL DAM" DSM Nutrition Japan K.K.) и т.д.), производные гетероринга ("TINUVIN" серии и т.д.) и оксида титана; секвестранты металлов, такие как динатрия эдетат, тринатрия эдетат, лимонная кислота, цитрат натрия, яблочная кислота, полинатриевый фосфат, метафосфат натрия и глюконовая кислота; ингибиторы секреции кожного сала, такие как салициловая кислота, сера, кофеин и танин; антисептические дезинфицирующие средства, такие как бензалконий-5 020627 хлорид, бензетонийхлорид и хлоргексидина глюконат; противовоспалительные вещества, такие как дифенгидраминхлорид, транексамовая кислота, гвайазулен, азулен, аллантоин, хинокитиол, глицирризиновая кислота и ее соли, производные глицирризиновой кислоты и глицирретиновой кислоты; витамины,такие как витамин А, витамины В (В 1, В 2, В 6, В 12, В 15), фолиевая кислота, никотиновые кислоты, пантотеновые кислоты, биотин, витамин С, витамины D (D2, D3), витамин Е, убихинон и витамины K (K1,K2, K3, K4); аминокислоты и их производные, такие как аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота,аланин, лизин, глицин, глутамин, серин, цистеин, цистин, тирозин, пролин, аргинин и пирролидонкарбоновая кислота; отбеливающие кожу компоненты, такие как ретинол, токоферолацетат, аскорбат фосфат магния, глюкозид аскорбиновой кислоты, арбутин, койевая кислота, эллагиновая кислота и плацентарный экстракт; антиоксиданты, такие как бутилгидрокситолуол, бутилгидроксианизол и пропилгаллат; вяжущие компоненты, такие как хлорид цинка, сульфат цинка, фенолят цинка, оксид цинка и калийалюминийсульфат; сахара, такие как глюкоза, фруктоза, мальтоза, сахароза, трегалоза, эритритол, маннитол,ксилитол и лактитол; различные растительные экстракты, такие как из лакрицы, ромашки, конского каштана, камнеломки, корня пиона, айвы, скутеларии, коры феллодендрона, ризомы коптиса, травы Гуттуинии и гинкго билоба; а в дополнение маслянистые ингредиенты, поверхностно-активные вещества, загустители, спирты, порошковые ингредиенты, красители и т.п. Примеры Далее настоящее изобретение будет описано более конкретно на основании ссылочных примеров и примеров. Однако необходимо иметь в виду, что настоящее изобретение не должно быть ограничено приведенными ниже примерами. Необходимо отметить, что размер частиц каждой молочно-кислой бактерии был измерен посредством анализатора распределения размера частиц ("SALD-3100", ShimadzuCorporation). Дополнительно посредством имеющегося в продаже набора ELISA были исследованы IL-12 и IFN-, продуцируемые макрофагами в результате стимулирования каждой молочно-кислой бактерией. Ссылочный пример 1. Получение мертвых клеток. Как показано в табл. 1, молочно-кислые бактерии, которые повышают продолжительность жизни,выделили из "Sugukizuke" в Киото, "Sunkizuke" в Нагано, Мариами и подобных Матсони в Республике Грузия, ферментированного кобыльего молока в Монголии и различных ферментированных молочных продуктов, культивировали в среде MRS при 36,5 С в течение 48 ч без регулирования рН в процессе культивирования. После завершения культивирования каждую культуру нагревали при 80 С в течение 10 мин для того, чтобы подвергнуть стерилизующему воздействию. Клетки отмывали PBS и подвергали обработке с целью получить концентрацию клеток, равную 10 мг/мл. Необходимо отметить, что аббревиатура "LBR" в таблице обозначает штамм Lactobacillus brevis,FERM BP-4693. Корреляции между размером частиц клеток и способностями продуцировать IL-12 и IFN-. Корреляции между размером частиц клеток молочно-кислых бактерий и способностями продуцировать IL-12 и IFN- проиллюстрирована на фиг. 1 А и 1 В соответственно. Было выявлено, что продуцирующая способность значительно повышается для цитокинов как IL12, так и IFN-, когда размер (размер частиц) молочно-кислых бактерий уменьшается до 1 мкм или около того (см. табл. 1, фиг. 1 А и 1 В). Однако было обнаружено, что, как проиллюстрировано на фиг. 2, некоторые штаммы показывают отрицательную корреляцию между способностью продуцировать IL-12 и способностью продуцироватьIFN-. Например, были признаны такие отличительные признаки, что штаммы, такие как EF, KH1 иKH3, обладают высокой продуцирующей способностью IL-12, но низкой продуцирующей способностьюIFN-, штаммы, такие как LL12 и ML4, наоборот, обладают низкой продуцирующей способностью IL12, но высокой продуцирующей способностью IFN-, а с другой стороны, SNK обладает относительно высокой как продуцирующей способностью IL-12, так и продуцирующей способностью IFN-. Пример 1. Получение наноразмерных молочно-кислых бактерий EF. Штамм молочно-кислых бактерий Enterococcus faecalis EF культивировали при 36,5 С в известной питательной среде с добавленными туда 5 мас.% глюкозы, при регулировании рН до 6,5 20 мас.% водным раствором гидроксида натрия в процессе культивирования. Момент времени, в который глюкоза была использована, определили как точку окончания культивирования (стадии культивирования). После завершения культивирования культуру нагревали при 80 С в течение 10 мин для того, чтобы подвергнуть ее стерилизующему воздействию. Затем клетки отмывали PBS и получали готовую форму с целью получить концентрацию клеток, равную 10 мг/мл (стадии обработки). Во время стадий обработки рН поддерживали при 6,5. Сравнение размеров частиц. Измеряли размеры клеточных частиц молочно-кислых бактерий EF, полученных в ссылочном примере 1 и примере 1. Результаты проиллюстрированы на фиг. 3. Как проиллюстрировано на фиг. 3, необходимо признать, что в противоположность размеру клеточных частиц, равному 1,215, т.е. большему чем 1 мкм при не нейтрализованном культивировании, размер клеточных частиц при нейтрализованном культивировании был 0,701, т.е. меньше чем 1,0 мкм. Ссылочный пример 2. Получение сухого порошка мертвых клеток. Следуя методике примера 1, культивировали штамм молочно-кислых бактерий Enterococcus faecalisEF. Размер самих молочно-кислых бактерий составлял 0,6 мкм (фиг. 4 А), а кумулятивное распределение частиц, равных 2 мкм и меньше, которые могут выборочно индуцировать цитокины, составляла 99%(фиг. 4 В). Из культуры клетки концентрировали и, не добавляя никаких наполнителей, концентрат подвергли распылительной сушке с получением порошка. Сравнение размеров частиц. Порошок, полученный, как описано выше, снова диспергировали в воде. В результате распределение размеров частиц, которое плавно поднялось до размера частиц, равного 100 мкм, было показано, как проиллюстрировано на фиг. 4 А. Как проиллюстрировано кумулятивным распределением на фиг. 4 В,распределение размеров частиц было разбито на приблизительно 50% частиц до 20 мкм, которые проходят через Пейеровы бляшки, приблизительно 14% частиц, равных от 3 до 7 мкм, которые индуцируют клетки Th2, и небольшую часть из 1% частиц, равных 2 мкм и меньше, которые индуцируют клетки Th1. Это указывает на смесь частиц, которые индуцируют как ответ Th1, так и ответ Th2, и, вследствие этого,ни коим образом не могут считаться физиологически предпочтительной ситуацией. Принимая во внимание деятельность пищеварения in vivo, порошок также обработали искусственным желудочным соком и кишечным соком, полученными способом, известным как таковым в данной области. Даже в этом случае кумулятивное распределение частиц, равных 2 мкм и меньше, которые ин-7 020627 дуцируют клетки Th1, повысилось только на 10% самое большее (фиг. 4). Опасаются, что подобное кумулятивное распределение размеров частиц приведет к тому, что ценное свойство, присущее молочно-кислым бактериям, не будет проявляться полностью (на 10% самое большее). Пример 2. Получение наноразмерных молочно-кислых бактерий Lactobaccillus brevis. Штамм молочно-кислых бактерий, Lactobaccillus brevis BP-4693 культивировали при 36,5 С в известной питательной среде с добавленными в нее 5 мас.% глюкозы при регулировании рН до 6,5 20 мас.% водным раствором гидроксида натрия в способе культивирования. Момент времени, в который завершилось поглощение глюкозы, определили, как точку окончания культивирования (стадии культивирования). После завершения культивирования культуру нагрели при 80 С в течение 10 мин для того, чтобы подвергнуть ее стерилизующему воздействию. Затем клетки отмыли PBS. Добавили декстрин в качестве наполнителя в количестве, превышающем массу клеток в четыре раза. Затем смесь диспергировали в смесителе, а диспергированную смесь лиофилизировали для получения образца. Образец снова суспендировали в PBS с целью получить концентрацию клеток, равную 10 мг/мл (стадии обработки). Во время стадий обработки рН поддерживали при 6,5. Сравнение размеров клеточных частиц и способностей продуцировать IFN-. Измерили размеры клеточных частиц и способности продуцировать IFN- Lactobaccillus brevis BP4693, полученных в ссылочном примере 1 и примере 2. Результаты проиллюстрированы на фиг. 5. Как проиллюстрировано на фиг. 5, необходимо признать, что в случае не нейтрализованного культивирования (обозначенного "LBR"), размер клеточных частиц и способность продуцировать IFN- составляли 8,8 мкм и 16,8 пг/мл соответственно, а, с другой стороны, в случае нейтрализованного культивирования (обозначенного "NANO-LBR") размер клеточных частиц был снижен до 0,7 мкм, т.е. меньше чем 1,0 мкм, и способность продуцировать IFN- составляла 92,9 пг/мл, то есть была увеличена в 5,5 раз по сравнению со способностью продуцировать IFN- в случае не нейтрализованного культивирования. Вышепредставленные результаты подтверждают, что размер частиц клеток может быть понижен до 1,0 мкм или меньше посредством регулирования рН до нейтрального диапазона на стадиях культивирования и переработки, порошок клеток, обладающий прекрасной способностью диспергироваться, может быть получен посредством добавления наполнителя к клеткам в количестве, превышающем массу клеток приблизительно в 4 раза, подвергания смеси диспергирующей обработке, а затем лиофилизации диспергированной смеси, а с превращением в порошок интерферон- может эффективно продуцироваться макрофагами. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Композиция, усиливающая синтез цитокинов клетками иммунной системы, содержащая клетки наноразмерных молочно-кислых бактерий, принадлежащих к Lactobacillus brevis, где клетки имеют средний размер не более чем 1,0 мкм при распределении их по размерам, где клетки получают культивированием в питательной среде, содержащей глюкозу, заканчивают культивирование в момент времени,когда в среде истощается глюкоза, и подвергают бактерии дальнейшей обработке, в частности отмыванию, причем на стадии культивирования и дальнейшей обработки бактерий регулируют величину рН в диапазоне от 5 до 8. 2. Композиция по п.1, где дальнейшая обработка клеток включает добавление к ним диспергирующей добавки или наполнителя и диспергирование клеток с последующей лиофилизацией или распылительной сушкой полученной дисперсии. 3. Композиция по п.1, где Lactobacillus brevis представляет собой штамм FERM ВР-4693. 4. Композиция по п.1, имеющая иммуностимулирующую активность. 5. Композиция по п.1, где диспергирующая добавка или наполнитель представляет собой трегалозу,декстрин или снятое молоко. 6. Пищевой продукт, содержащий композицию по п.1. 7. Напиток, содержащий композицию по п.1. 8. Корм, содержащий композицию по п.1. 9. Косметический продукт, содержащий композицию по п.1. 10. Способ получения наноразмерных молочно-кислых бактерий Lactobacillus brevis, входящих в состав композиции по п.1, включающий культивирование бактерий в питательной среде, содержащей глюкозу, остановку культивирования в момент времени, когда в среде истощается глюкоза, и дальнейшую обработку бактерий, в частности отмывание, причем на стадии культивирования и дальнейшей обработки бактерий регулируют рН в диапазоне от 5 до 8. 11. Способ по п.10, где переработка включает стадии добавления и диспергирования диспергирующей добавки или наполнителя в культуру, содержащую среду с регулируемой величиной рН от 5 до 8 и клетки, диспергирования клеток и затем лиофилизации или распылительной сушки полученной дисперсии. 12. Способ по п.11, где диспергирующая добавка или наполнитель представляет собой трегалозу,декстрин или снятое молоко. 13. Способ по п.10, где Lactobacillus brevis представляет собой штамм FERM ВР-4693.