Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Фармацевтическая композиция, включающая конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа, буфер, стабилизатор, криопротектор и растворитель, в котором указанный буфер представляет собой сукцинат натрия, а указанным криопротектором является лактоза.

2. Композиция по п.1, в которой стабилизатор выбирают из додецилсульфата натрия или из подходящих полисорбатов.

3. Композиция по п.2, в которой полисорбат выбран из Polysorbate 20, 40 или 80.

4. Композиция по пп.1-3, которая дополнительно содержит в качестве криопротектора трегалозу.

5. Композиция по любому из пп.1-4, в которой концентрация указанных конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа составляет от 0,03 до 2,0 мг/мл.

6. Композиция по п.1, в которой концентрация натрий-сукцинатного буфера находится в интервале от 0,001 до 0,5 % мол.

7. Композиция по любому из пп.1-6, где рН указанной композиции находится в интервале от 4,0 до 6,8.

8. Композиция по любому из пп.1-7, в которой указанный стабилизатор присутствует в концентрации от 0,01 до 1,0 мг/мл.

9. Композиция по любому из пп.1-8, в которой концентрация криопротектора находится между 10 и 100 мг/мл.

10. Композиция по любому из пп.1-9, в которой указанным растворителем является вода.

11. Композиция по любому из пп.1-10, где композиция дополнительно включает глицин.

12. Композиция по любому из пп.1-11, в котором указанные конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа включают преимущественно единичные молекулы ПЭГ, конъюгированные с единичными молекулами интерферона альфа.

13. Композиция по любому из пп.1-12, в которой указанные молекулы интерферона альфа выбраны из группы, состоящей из интерферона альфа-2а, интерферона альфа-2b, интерферона альфа-2с и их подходящих вариантов.

14. Композиция по п.13, в которой указанные молекулы интерферона альфа являются интерфероном альфа-2b.

15. Способ получения композиции по п.1 в форме лиофилизированного порошка, включающий:

a) получение композиции по п.1 и

b) лиофилизацию указанной композиции.

16. Лиофилизованная композиция, полученная согласно способу по п.15.

17. Лиофилизованная композиция по п.16, которая может быть восстановлена водой.

Текст

Смотреть все

Изобретение относится к новым лиофилизованным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа и к способу их получения. Новые составы конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа, о которых сообщают авторы настоящего изобретения, требуют меньшего цикла лиофилизации и являются более конкурентноспособными.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: КАДИЛА ХЕЛЗКЭР ЛИМИТЕД (IN) Область изобретения Настоящее изобретение относится новым лиофилизированным и стабилизированным композициям конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа и к способам их получения. Предпосылки к созданию изобретения Основным недостатком терапевтического применения большинства биологических лекарственных соединений является то, что их вводят парентеральным путем, например внутривенно (i.v.), подкожно(s.c.), внутримышечно (i.m.) и т.д., что означает, что их доставка пациенту связана с болью и дискомфортом. Далее, из-за своего обычно короткого времени полувыведения биологические лекарственные соединения требуют частого ввода пациенту для поддержания терапевтически эффективной концентрации лекарственного вещества в крови. Многие типы инъекций, которые не могут вводиться самостоятельно,требуют частых визитов в клинику, добавляя пациенту дополнительный дискомфорт. Существует множество примеров таких биологических лекарств, которые требуют частого ввода. Интерферон альфа-2 а(Roferon, Roche) 2-b (Intron A, Schering AG), две рекомбинантные формы интерферона альфа человека,используемые при лечении хронических гепатитов В и С, имеют период полвыведения из сыворотки крови менее 12 ч (McHutchison, et al., Engl. J. Med. 1998, 339, 1485-1492, Glue, et al., Clin. Pharmacol. Ther. 2000, 68, 556-567) и поэтому требуют введения три раза в неделю. Повторные инъекции интерферона бета-1b (Betasteron) требуются также при лечении пациентов с рассеянным склерозом (MS). Рекомендованным дозированием является подкожное введение через день. Другим примером лекарственного соединения, где требуются повторные инъекции, является фильграстин (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, ГКСФ), где инъекции делаются ежедневно на протяжении двух недель лечения. Одним весьма успешным и хорошо воспринимаемым способом преодоления вышеназванных недостатков частых инъекций больших доз для поддержания пороговых уровней лекарственного соединения в организме является увеличение периода полувыведения in vivo терапевтического белка путем конъюгации его с полимером, предпочтительно полиэтиленгликолем (ПЭГ). Молекулы ПЭГ со своими длинными цепями не только создают защитный экран вокруг ПЭГированной молекулы лекарственного средства в водном растворе, понижая тем самым антигенность белковых лекарственных средств, в тоже время защищая их от воздействия протеаз, но они дополнительно помогают увеличить время циркуляционного полувыведения лекарства увеличением его гидродинамического объема, что понижает его потери за счет механизмов фильтрации сетью почечных клубочков. После своего отделения от молекул белка молекулы ПЭГ очищаются без каких-либо структурных изменений, и их клиренс пропорционален их молекулярному весу. О конъюгации белков к ПЭГ сообщалось, начиная с 1970-х годов. Обычно фрагменты ПЭГ присоединяют к белку путем первоначальной активации фрагмента ПЭГ, а затем реакции его с боковой цепью радикала лизина и/или с N-терминальной аминогруппой белка. Наиболее часто используемым ПЭГ является монофункциональный ПЭГ, так как этот фрагмент сопротивляется сшивке и агрегированию. Один такой пример описан Davis, et al. в патенте США 4179337. Конъюгаты ПЭГ-протеин были образованы реакцией биологически активного вещества с мольной избыточной концентрацией сильно активированного полимера, имеющего концевую связующую группу, безотносительно к тому,где полимер будет присоединен к белку, приводящему к физиологически активной неиммуногенной водорастворимой полипептидной композиции. О ПЭГировании интерферонов сообщалось в патентах США 4766106 и 4917888, в которых описан, среди прочего, бета-интерферон, конъюгированный с активированными полимерами, включающими мПЭГ-2,4,6-трихлор-S-триазин, мПЭГ-N-сукцинимидилглутарат или мПЭГ-N-сукцинимидилсукцинат. Одно такое раскрытие в патенте США 5951974 описывает конъюгацию интерферона к практически неиммуногенному полимеру на участке гистидина. Другое такое раскрытие в патенте США 5981709 описывает конъюгат альфа-интерферон-полимер с относительно долгого периода циркуляционного полувыведения in vivo. Некоторые имеющиеся в продаже ПЭГированные терапевтические белки включают ADAGEN(ПЭГированная бычья аденозин-деаминаза), который используют для лечения сцепленного с Ххромосомой синдрома острой комбинированной иммуногенности; PEGASYS (ПЭГированный альфаинтерферон 2 а), который используют при лечении гепатита С; PEG-Intron (ПЭГированный альфаинтерферон 2b) для хронического гепатита С; Oncaspar (ПЭГированная L-аспарагиназа) для лечения острой лимфобластной лейкемии у пациентов, которые гиперчувствительны к нативной немодифицированной форме L-аспарагиназы; и Neulasta (ПЭГированный рекомбинантный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор человека) для химиотерапии рака, вызванного нейтропенией. Вирус гепатита С (HCV) является одной из главных причин заболеваний печени в мире. Им поражено в мире почти 200 млн людей. Было показано, что интерферон в комбинации с рибавирином являются эффективными при снижении вирусной нагрузки у пациентов с хроническим гепатитом С, однако его следует давать три раза в неделю. ПЭГ-интерферон альфа-2b является ковалентным конъюгатом рекомбинантного интерферона альфа-2b с монометоксиПЭГ в молярном соотношении 1:1 (Glue P., et al.,Clin. Pharmacol. Ther. 2000; 68; 556-567). Средний период полуабсорбции ПЭГ-интерферона альфа-2b в 5 раз больше, чем у неконъюгированного с ПЭГ интерферона альфа-2b. Средний период полувыведения составляет 40 ч у пациентов с инфекцией гепатита С. Другим продуктом является ПЭГ-интерферон альфа-2 а, который имеет молекулу в 40 кДа с разветвленной цепью с каждой цепью ПЭГ со средним моле-1 018440 кулярным весом в 20 кДа. Две цепи монометокси ПЭГ присоединены через гидролитически стабильные уретановые связи к молекуле лизинового линкера: одна к альфа-аминогруппе лизина, а другая - к аминогруппе лизина. Средний период полуабсорбции ПЭГ-интерферона альфа-2 а в 10 раз больше, чем у неприсоединенного к ПЭГ интерферона альфа-2 а. Средний период полувыведения составляет примерно 60 ч у пациентов с инфекцией гепатита С. Оба эти улучшенные продукты требуют режима введения только один раз в неделю. Хотя некоторые конъюгаты белок-полимер стабильны в жидком виде, другие нестабильны. Например, в отличие от случая конъюгата ПЭГ-интерферон альфа-2 а, где ПЭГирование приводит к стабильной уретановой связи, которая изначально стабильна в водной среде, продукт ПЭГ-интерферон альфа 2b,который содержит ПЭГ, главным образом присоединенный к гистидиновой (His 34) группе, сильно нестабилен в жидком виде. Для таких конъюгатов белок-полимер следует использовать такие методы, как лиофилизация (сушка вымораживанием) - процесс, благодаря которому воду сублимируют из композиции после того, как она заморожена, что может обеспечить стабильность биологически активного продукта в течение желаемого периода времени. Таким образом, для того чтобы получить стабильную композицию ПЭГ-интерферон альфа-2b, необходимо осторожно лиофилизировать композицию с подходящими криопротектором (криопротекторами) или лиопротектором (лиопротекторами) и стабилизатором,которые стабилизируют конъюгаты ПЭГированного интерферона альфа для предотвращения отщепления от них ПЭГ во время и после лиофилизации - явления, обычно связанного с продуктом ПЭГинтерферон альфа-2b. Далее, кроме криопротектора и стабилизаторов лиофилизированная композиция содержит также наполнитель для увеличения количества твердого вещества в сосуде. Конкретным путем решения проблемы нестабильности уретановой связи по группе His 34 в случае ПЭГ-интерферона альфа-2b является использование композиции, которая была описана в патенте США 6180096, где конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа-2b лиофилизировали в присутствии буфера, криопротекторов, стабилизатора и растворителя и где одна такая композиция содержит дисахарид сахарозу в качестве криопротектора вместе с дигидратом одноосновного фосфата натрия и безводным двухосновным фосфатом натрия в качестве буфера, с полисорбатом-80 в качестве стабилизатора и водой в качестве растворителя. Хотя такая композиция имела коммерческий успех при лечении гепатита С, она тем не менее связана с несколькими проблемами, некоторые из которых были тщательно проработаны в другой патентной заявке, WO 2006/020720, которая указывает на продолжительные циклы лиофилизации, приводящие к увеличенной стоимости производства и к более высокому содержанию влаги, связанные с продажным препаратом, как на некоторые из причин для того, чтобы открыть и описать новые составы вWO 2006/020720. В WO 2006/020720 авторы описывают другой модифицированный состав ПЭГинтерферон альфа-2b, в которой криопротектор включает по меньшей мере 60% трегалозы, буферные компоненты включают дигидрат одноосновного фосфата натрия и безводный двухосновный фосфат натрия, и где состав дополнительно включает полисорбат-80 в качестве стабилизатора и воду в качестве растворителя, и который способен преодолеть описанные выше проблемы промышленного приготовления смеси. Необходимость дополнительной разработки составов для защиты конъюгатов ПЭГинтерферон альфа-2b не может быть лучше подчеркнута, чем тем фактом, что владельцы патента США 6180096 (коммерческий состав) и заявители WO 2006/020720 работают в одной и той же компании,Schering Corporation, которая продолжает разрабатывать и раскрывать новые лиофилизованные составы для ПЭГ-ИФН альфа-2b. Существует потребность разработки составы ПЭГ-интерферон альфа дополнительно к существующим с целью не только защитить конъюгат ПЭГ-интерферон альфа во время и после лиофилизации, но также и иметь долговременное хранение при комнатной температуре, когда композиция лиофилизирована в соответствующем контейнере. Такой способ получения состава должен быть легким в осуществлении и более рентабельным, чем те, которые используют для приготовления смеси в настоящее время (на основе сахарозы). Современные коммерческие составы ПЭГ-интерферон альфа-2b на основе сахарозы(какие описаны в патенте США 6180096) имеют довольно продолжительный цикл лиофилизации примерно в 5 суток. Составы, раскрытые в настоящем изобретении, используют цикл лиофилизации, который значительно короче по времени приблизительно 24-48 ч, что должно помочь значительно снизить стоимость производства этого лекарственного средства. Настоящее изобретение относится к новым лиофилизованным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа и к способу их получения. Осуществление изобретения Главная цель изобретения - предложить новые лиофилизированные и стабилизированные составы конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа. Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу получения новых составов конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа. Описание изобретения Настоящее изобретение относится к новым лиофилизованным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа и к способу (способам) их получения. Получение составов включает составление конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа с подходящими криопротектором (криопротекторами),-2 018440 стабилизатором (стабилизаторами) и растворителем, необязательно с подходящими эксципиентами, которую затем лиофилизуют. Должно быть ясно, что настоящее изобретение не ограничено концентрациями компонентов в новых составах, которые раскрыты в описании изобретения. Конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа согласно настоящему изобретению представляют собой молекулы интерферона альфа или их вариантов, ковалентно связанные с одной молекулой или с несколькими молекулами ПЭГ. Конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа согласно настоящему изобретению могут включать интерферон альфа-2 а, интерферон альфа-2b или интерферон альфа-2 с и их подходящие варианты. Предпочтительно конъюгат ПЭГ-интерфорон альфа представляет собой моноПЭГированный интерферон альфа-2b. Полимеры являются молекулами, включающими ковалентно связанные повторяющиеся химические элементарные звенья. Части приблизительный молекулярный вес полимера обозначают числом,следующим за названием повторяющегося химического элементарного звена. Например, "ПЭГ 12000" или "полиэтиленгликоль (12000)" относится к полимеру полиэтиленгликоля, имеющему средний молекулярный вес приблизительно 12000 Да. Конъюгация полимеров к белкам может дать в результате единичную молекулу полимера, конъюгированную к белку, или множество таких конъюгаций к единичному белку. Степень конъюгации зависит от условий реакции и желаемого результата. В предпочтительном осуществлении конъюгат ПЭГинтерферон альфа в составах по настоящему изобретению включает единичный интерферон альфа-2b,конъюгированный к единичной молекуле ПЭГ. В еще одном предпочтительном варианте осуществления конъюгат ПЭГ-интерферон альфа в составах по настоящему изобретению включает единичный интерферон альфа-2b, конъюгированный к единичному ПЭГ 12000. В особо предпочтительном варианте осуществления молекула интерферона альфа-2b присоединена к молекуле ПЭГ 12000 уретановой связью. Некоторые способы получения конъюгатов ПЭГ-ИФН известны в практике, и такие способы и получаемые такими способами продукты рассматриваются как входящие в объем настоящего изобретения. Примеры таких способов для получения этого конъюгата белок-полимер можно найти в патенте США 5612460(Zalipsky) и патенте США 5711944 (Gilbert et al.). Без ограничения объема настоящего изобретения, когда такой конъюгат белок-полимер используют при получении растворов по настоящему изобретению,предпочтительная концентрация конъюгата ПЭГ-интерферон альфа составляет от 0,03 до 2,0 мг интерферона альфа на 1 мл. Когда единичная молекула интерферона альфа связана с единичной молекулой ПЭГ-12000, получаемые в результате конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа могут быть в форме единственного позиционного изомера или смеси позиционных изомеров. При осуществлении настоящего изобретения одна такая смесь позиционных изомеров может означать, что один конъюгат ПЭГ-интерферон альфа соединен по гистидиновой группе молекулы интерферона альфа, в то время как другой конъюгат ПЭГ-интерферон альфа скреплен по другому месту молекулы интерферона альфа, например по лизиновой группе. Для сохранения конъюгата ПЭГ-интерферон альфа в наиболее стабильной и активной форме может быть использована лиофилизация. Лиофилизация представляет собой процесс сушки замораживанием,при котором замороженную водную смесь обрабатывают для удаления воды. Обычно процесс включает сублимацию воды из водных растворов, обычно в условиях пониженного давления. После лиофилизации конъюгат (конъюгаты) ПЭГ-интерферон альфа могут храниться в течение продолжительных периодов времени. Однако во время и после лиофилизации конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа подвергаются повреждению (US 6.180.096). Следовательно, необходимо должным образом составлять рецептуру конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа, чтобы защитить их от разложения во время и после лиофилизации. Кроме того,было бы также полезно, если бы такие составы обеспечили физическую прочность композиции. Настоящее изобретение защищает конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа от повреждения путем включения их в композиции, которые предотвращают повреждение во время и после лиофилизации. Хотя настоящее изобретение не ограничено конкретным составом в составах, описанных здесь, используют подходящие буфер (буферы), стабилизатор (стабилизаторы), криопротектор (криопротекторы) и/или лиопротектор (лиопротекторы), наполнитель (наполнители) и растворитель (растворители), по одному или в подходящей комбинации, необязательно с другими подходящими эксципиентами, в дополнение к конъюгату ПЭГ-интерферон альфа. Различные возможные комбинации выбранных групп буферов, стабилизаторов и криопротекторов, как описано ниже, могут быть использованы для приготовления новых составов по настоящему изобретению. Буферы пригодны для поддержания рН состава. Буферная система, которая может быть использована, представляет собой сукцинат натрия, который обеспечивает желаемый интервал рН. Предпочтительный интервал рН составляет от 4,5 до 7,1, предпочтительно 6,5-7,1 и наиболее предпочтительно составляет 6,8. Предпочтительная молярная концентрация находится в интервале от 0,001 до 0,5 мол.%. Для поддержания желаемого интервала рН могут быть использованы также другие буферные системы. Термин "криопротекторы" обычно включает агенты, которые обеспечивают стабильность белка при напряжениях, вызванных замораживанием, однако этот термин включает также агенты, которые обеспе-3 018440 чивают стабильность, например, сыпучих композиций во время хранения от воздействий, не вызванных замораживанием. Примеры подходящих криопротекторов включают лактозу. Термин "криопротектор" включает агенты, которые обеспечивают стабильность белка во время удаления воды из системы во время процесса сушки, предположительно поддерживая должную конформацию белка водородными связями. Криопротекторы могут также оказывать лиопротекторное действие, поэтому термины "криопротектор" и "лиопотектор" использованы здесь взаимозаменяемо. Стабилизирующий агент используют для предотвращения адсорбции конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа на поверхностях из стекла и нержавеющей стали технологического оборудования, используемого для приготовления и хранения композиции. Подходящими стабилизаторами, которые могут быть использованы, являются додецилсульфат натрия (SDS), полисорбаты (например, Polysorbate 20, 40 или 80,по одному или в комбинации). Примеры могут быть из класса производных поли(окси-1,2-этандиила). Одним из таких предпочтительных стабилизаторов является моноолеат полиоксиэтилен-20-сорбитана,полисорбат-80 (Tween-80) в предпочтительной концентрации от 0,01 до 1 мг/мл. Настоящее изобретение не ограничено конкретным криопротектором или каким-либо конкретным количеством. Криопротектор может быть использован индивидуально или в подходящих комбинациях. В одном осуществлении криопротектор присутствует в количестве от 0,05 до 90%, предпочтительно от 0,05 до 50% и наиболее предпочтительно в количестве 0,15-20% в расчете на суммарную массу раствора ПЭГ-интерферона альфа. В конкретном примере, где в качестве криопротектора используют одну лактозу, предпочтительная концентрация составляет 10-100 мг/мл. Подходящим растворителем для настоящих композиций является вода, предпочтительно растворителем может быть вода для инъекций. Другие подходящие эксципиенты могут быть, необязательно, добавлены в композиции. Такие эксципиенты включают глицин в подходящей концентрации для того, чтобы дополнительно стабилизировать композицию. Новые композиции конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа готовят, используя подходящие сочетания буфера, стабилизатора, криопротектора (криопротекторов) и/или лиопротектора (лиопротекторов) и растворителя, необязательно с другими эксципиентами, и подходящим образом лиофилизируют и хранят в виде сухого порошка, который должен быть восстановлен перед употреблением. Приготовленные таким образом композиции содержат эффективное количество биологически активных конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа и используются при лечении некоторых заболеваний, таких как гепатиты В и С, рак и т.д. Они предпочтительно используются в виде водных растворов для инъекций. Следующие неограничительные примеры поясняют описанные фармацевтические композиции по настоящему изобретению и способы осуществления изобретения для получения стабильной фармацевтической дозировочной формы конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа. Должно быть ясно, что примеры являются иллюстративными, и те другие подходящие модификации/дополнения и т.п., которые полностью находятся в сфере компетенции специалистов, подразумеваются охватываемыми объемом изобретения. Примеры. Различные составы конъюгированного белка ПЭГ-интерферон альфа-2b, растворенного в натрийсукцинатном буфере, готовили в присутствии лактозы при различных условиях эксперимента для лиофилизации в стеклянных сосудах для того, чтобы получить в этих композициях стабильный конъюгированный белок ПЭГ-интерферон альфа-2b. После лиофилизации пробы хранили при 5(3 С), и в разные периоды времени пробы восстанавливали водой для анализа. Восстановленные пробы анализировали на визуальную прозрачность, содержание белка, антивирусную активность и концентрацию свободного интерферона. При анализе антивирусной активности свежеприготовленный не введенный в композицию очищенный конъюгат ПЭГ-интерферон альфа-2b показывает специфичную активность в интервале от 0,2108 до 0,8105 межд. ед. на 1 мг белка интерферона. Пример 1. Конъюгат ПЭГ-интерферон альфа, приготовленный известными ранее способами, растворяли в водной среде, содержащей 10 мМ натрий-сукцинатного буфер с рН 6,8, лактозу (18 мг/мл) и полисорбат-80 (0,1 мг/мл), как суммировано в табл. 1. Таблица 1 Компоненты композиции ПЭГ-интерферон альфа. Конъюгат, представленный для лиофилизации в расчете на массу белка Лиофилизацию проводили, помещая охарактеризованный выше раствор в стеклянные контейнеры с последующей загрузкой стеклянных контейнеров в лиофилизатор при давлении окружающей среды и температуре между 10 и 30 С. Образцы постепенно замораживали регулируемым образом под давлением окружающей среды и при температуре между -40 и -55 С за период от 3 до 12 ч. Затем замороженные образцы подвергали первичной сушке на стадии, проводимой обычным образом, в течение по меньшей мере 16 ч при различных температурах в интервале от -45 до 0 С, поддерживая в это время вакуум с давлением от 66,7 кПа (500 торр) до 6,67 кПа (50 торр). После циклов первичной сушки проводили циклы вторичной сушки в течение по меньшей мере 6 ч под вакуумом под давлением между 2,666 и 4,0 кПа (20 и 30 торр). По завершении циклов лиофилизации стеклянные контейнеры, содержащие лиофилизированные лепешки, выгружали при давлении и температуре окружающей среды. После лиофилизации сосуды, содержащие лиофилизированные лепешки без дефектов (таких как разрушившиеся лепешки, или покрывшиеся корочкой лепешки, или съежившиеся лепешки, или оплавленные лепешки и т.п.), собирали и хранили при 5(3)С до использования для дальнейшего анализа. Образцы восстанавливали водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 2. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГинтерферон альфа в лиофилизированной композиции оценивали, сравнивая содержание белка, антивирусную активность и концентрацию свободного интерферона (степень отсоединения от ПЭГ), наличествующие в растворе до и после лиофилизации (табл. 2). Таблица 2 Стабильность введенного в композицию конъюгата ПЭГ-интерферон альфа после лиофилизации Пример 2. Конъюгат ПЭГ-интерферон альфа растворяли в водной среде, содержащей 10 мМ натрийсукцинатного буфер с рН 6,8, лактозу (100 мг/мл) и полисорбат-80 (0,1 мг/мл), как суммировано в табл. 3. Таблица 3 Компоненты композиции ПЭГ-интерферон альфа. Конъюгат, представленный для лиофилизации в расчете на массу белка Лиофилизацию проводили, помещая охарактеризованный выше раствор в стеклянные контейнеры с последующей загрузкой стеклянных контейнеров в лиофилизатор при давлении окружающей среды и температуре между 10 и 30 С. Образцы постепенно замораживали регулируемым образом под давлением окружающей среды и при температуре между -40 и -55 С за период от 3 до 12 ч. Затем замороженные образцы подвергали циклам первичной сушки при температуре между -35 и 45 С, поддерживая в это время вакуум с давлением от 66,7 кПа (500 торр) до 6,67 кПа (50 торр). После циклов первичной сушки проводили циклы вторичной сушки в течение по меньшей мере 6 ч под вакуумом с давлением между 2,666 и 4,0 кПа (20 и 30 торр). По завершении циклов лиофилизации стеклянные контейнеры, содержащие лиофилизированные лепешки, выгружали при давлении и температуре окружающей среды. После лиофилизации сосуды, содержащие лиофилизированные лепешки без дефектов, собирали и хранили при 5(3)С до использования для дальнейшего анализа. Образцы восстанавливали водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 4. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГ-интерферон альфа в лиофилизированной композиции оценивали, сравнивая содержание белка, антивирусную активность и концентрацию свободного интерферона (степень отсоединения от ПЭГ), наличествующие в растворе до и после лиофилизации, как показано в табл. 4. в расчете на массу белка Лиофилизацию проводили, помещая охарактеризованный выше раствор в стеклянные контейнеры с последующей загрузкой стеклянных контейнеров в лиофилизатор при давлении окружающей среды и температуре между 10 и 30 С. Образцы постепенно замораживали регулируемым образом под давлением окружающей среды и при температуре между -40 и -55 С за период от 3 до 12 ч. Затем замороженные образцы подвергали циклам первичной сушки при температуре между -35 и -45 С, поддерживая в это время вакуум с давлением от 66,7 кПа (500 торр) до 6,67 кПа (50 торр). После циклов первичной сушки проводили циклы вторичной сушки в течение по меньшей мере 6 ч под вакуумом под давлением между 2,666 и 4,0 кПа (20 и 30 торр). По завершении циклов лиофилизации стеклянные контейнеры, содержащие лиофилизированные лепешки, выгружали при давлении и температуре окружающей среды. После лиофилизации сосуды, содержащие лиофилизированные лепешки без дефектов, собирали и хранили при 5(3)С до использования для дальнейшего анализа. Образцы восстанавливали водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 6. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГ-интерферон альфа в лиофилизированной композиции оценивали, сравнивая содержание белка, антивирусную активность и концентрацию свободного интерферона (степень отсоединения от ПЭГ), наличествующие в растворе до и после лиофилизации, как показано в табл. 6. Таблица 6 Стабильность введенного в композицию конъюгата ПЭГ-интерферон альфа после лиофилизации в расчете на массу белка Лиофилизацию проводили, помещая охарактеризованный выше раствор в стеклянные контейнеры с последующей загрузкой стеклянных контейнеров в лиофилизатор при давлении окружающей среды и температуре между 10 и 30 С. Образцы постепенно замораживали регулируемым образом под давлением окружающей среды и при температуре между -40 и -55 С за период от 3 до 12 ч. Затем замороженные образцы подвергали циклам первичной сушки при температуре между -35 и -45 С, поддерживая в это время вакуум с давлением от 66,7 кПа (500 торр) до 6,67 кПа (50 торр). После циклов первичной сушки проводили циклы вторичной сушки в течение по меньшей мере 6 ч под вакуумом под давлением между 2,666 и 4,0 кПа (20 и 30 торр). По завершении циклов лиофилизации стеклянные контейнеры, содержащие лиофилизированные лепешки, выгружали при температуре и давлении окружающей среды. После лиофилизации сосуды, содержащие лиофилизированные лепешки без дефектов, собирали и хранили при 5(3)С до использования для дальнейшего анализа. Образцы восстанавливали водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 8. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГ-интерферон альфа в лиофилизированной композиции оценивали, сравнивая содержание белка, антивирусную активность и концентрацию свободного интерферона (степень отсоединения от ПЭГ), наличествующие в растворе до и после лиофилизации, как показано в табл. 8. Таблица 8 Стабильность введенного в композицию конъюгата ПЭГ-интерферон альфа после лиофилизации в расчете на массу белка Лиофилизацию проводили, помещая охарактеризованный выше раствор в стеклянные контейнеры с последующей загрузкой стеклянных контейнеров в лиофилизатор при давлении окружающей среды и температуре между 10 и 30 С. Образцы постепенно замораживали регулируемым образом под давлением окружающей среды и при температуре между -40 и -55 С за период от 3 до 12 ч. Затем замороженные образцы подвергали циклам первичной сушки при температуре между -35 и -45 С, поддерживая в это время вакуум с давлением от 66,7 кПа (500 торр) до 6,67 кПа (50 торр). После циклов первичной сушки проводили циклы вторичной сушки в течение по меньшей мере 6 ч под вакуумом под давлением между 2,666 и 4,0 кПа (20 и 30 торр). По завершении циклов лиофилизации стеклянные контейнеры, содержа-7 018440 щие лиофилизированные лепешки, выгружали при температуре и давлении окружающей среды. После лиофилизации сосуды, содержащие лиофилизированные лепешки без дефектов, собирали и хранили при 5(3)С до использования для дальнейшего анализа. Образцы восстанавливали водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 10. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГ-интерферон альфа в лиофилизированной композиции оценивали, сравнивая содержание белка, антивирусную активность и концентрацию свободного интерферона (степень отсоединения от ПЭГ), наличествующие в растворе до и после лиофилизации, как показано в табл. 10. Таблица 10 Стабильность введенного в композицию конъюгата ПЭГ-интерферон альфа после лиофилизации Содержание свободного ИНФ во всех вышеприведенных примерах определяли, используя анализ методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (HPSEC). Новые лиофилизированные и стабилизированные композиции конъюгатов ПЭГ-интерферон альфа,описанные в настоящем изобретении, обладают следующими преимуществами: 1) приводят к технологической простоте; 2) влекут за собой использование криопротекторов и/или лиопротекторов, которые менее гигроскопичны по природе; 3) обеспечивают лучшую физическую прочность лиофилизированных композиций; 4) все вышеуказанные факторы вносят свой вклад в эффективность затрат на способ по данному изобретению. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция, включающая конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа, буфер, стабилизатор, криопротектор и растворитель, в котором указанный буфер представляет собой сукцинат натрия, а указанным криопротектором является лактоза. 2. Композиция по п.1, в которой стабилизатор выбирают из додецилсульфата натрия или из подходящих полисорбатов. 3. Композиция по п.2, в которой полисорбат выбран из Polysorbate 20, 40 или 80. 4. Композиция по пп.1-3, которая дополнительно содержит в качестве криопротектора трегалозу. 5. Композиция по любому из пп.1-4, в которой концентрация указанных конъюгатов ПЭГинтерферон альфа составляет от 0,03 до 2,0 мг/мл. 6. Композиция по п.1, в которой концентрация натрий-сукцинатного буфера находится в интервале от 0,001 до 0,5 % мол. 7. Композиция по любому из пп.1-6, где рН указанной композиции находится в интервале от 4,0 до 6,8. 8. Композиция по любому из пп.1-7, в которой указанный стабилизатор присутствует в концентрации от 0,01 до 1,0 мг/мл. 9. Композиция по любому из пп.1-8, в которой концентрация криопротектора находится между 10 и 100 мг/мл. 10. Композиция по любому из пп.1-9, в которой указанным растворителем является вода. 11. Композиция по любому из пп.1-10, где композиция дополнительно включает глицин. 12. Композиция по любому из пп.1-11, в котором указанные конъюгаты ПЭГ-интерферон альфа включают преимущественно единичные молекулы ПЭГ, конъюгированные с единичными молекулами интерферона альфа. 13. Композиция по любому из пп.1-12, в которой указанные молекулы интерферона альфа выбраны из группы, состоящей из интерферона альфа-2 а, интерферона альфа-2b, интерферона альфа-2 с и их подходящих вариантов. 14. Композиция по п.13, в которой указанные молекулы интерферона альфа являются интерфероном альфа-2b. 15. Способ получения композициипо п.1 в форме лиофилизированного порошка, включающий:a) получение композиции по п.1 иb) лиофилизацию указанной композиции. 16. Лиофилизованная композиция, полученная согласно способу по п.15. 17. Лиофилизованная композиция по п.16, которая может быть восстановлена водой.

МПК / Метки

МПК: A61K 9/19, A61K 38/21, A61K 47/12

Метки: композиции, пэг-интерферон, альфа, конюгатов

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/10-18440-kompozicii-konyugatov-peg-interferon-alfa.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Композиции конъюгатов пэг-интерферон альфа</a>

Похожие патенты