Противораковая комбинация, содержащая производные замещённого акрилоилдистамицина и антитела, ингибирующие факторы роста или их рецепторы

011574 Настоящее изобретение относится к области лечения рака и злокачественных опухолей, а именно к противораковой комбинации, содержащей замещенное производное акрилоилдистамицина, конкретнее производное -бром- или -хлоракрилоилдистамицина, и антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, которые оказывают синергичный противоопухолевый эффект. Дистамицин А и его аналоги, в дальнейшем называемые дистамицином и подобными дистамицину производными, известны в данной области техники как цитотоксические средства, применимые для лечения опухолей. Дистамицин А является антибиотическим веществом с антивирусной и антипротозойной активностью, имеющим полипиррольный каркас [Nature 203: 1064 (1964); J. Med. Chem. 32: 774-778 (1989)]. В международных заявках на патент WO 90/11277, WO 96/05196, WO 98/04524, WO 98/21202,WO 99/50265, WO 99/50266 и WO 01/40181 раскрыты производные акрилоилдистамицина, в которых амидино-остаток дистамицина необязательно замещен азотсодержащими концевыми группами, например, цианамидино, N-метиламидино, гуанидино, карбамоил, амидоксим, циано и т.п., и/или в которых полипиррольный каркас дистамицина или его часть замещена различными карбоциклическими или гетероциклическими остатками. Обнаружено, что моноклональные антитела (mAB) против факторов роста или их рецепторов служат эффективными терапевтическими средствами в противоопухолевом лечении [см. для справки CancerSci. 95: 621-25, (2004); Curr. Mol. Med 4: 539-47, (2004)]. Для этой цели используются многие механизмы действия моноклональных антител. Антитела могут связывать факторы роста и препятствовать активации критически важных рецепторов фактора роста. Показано, что моноклональное антитело, направленное против фактора роста эндотелия (VEGF), является мощным ингибитором неоангиогенеза (бевацизумаб). Антитело против внеклеточного домена рецептора эпидермального фактора роста (EIGF) препятствует связыванию лиганда с рецептором и тем самым его активации (цетуксимаб). Активность EGFR, однако, абсолютно необходима для выживания и пролиферации определенных опухолевых клеток человека. Антитело, которое нарушает димеризацию ErbB2 иErbB3-представителей семейства рецептора EGF, препятствует объединению самого мощного модуля передачи сигналов (пертуксумаб). Сигналы, исходящие от этого димера, определяют многие фенотипические свойства, например, клеток рака молочной железы человека. Моноклональное антитело, также направленное против ErbB2 (онкогена, который кодирует тирозинкиназный рецептор из семейства рецепторов EGF), было самым клинически и коммерчески успешным (трастузумаб). Это антитело вмешивается в сигналы, производимые рецептором, и вызывает остановку клеточного цикла в опухолевых клетках. Выбор этих средств показан в табл. 1. Таблица 1 Неожиданно было обнаружено, что противоопухолевый эффект производного акрилоилдистамицина формулы (I) значительно усиливается, если это производное вводится в комбинации с антителом, ингибирующим фактор роста или его рецептор. Эффект комбинированного введения значительно сильнее(синергетический эффект), чем введения каждого из этих препаратов в виде монотерапии. Первый аспект настоящего изобретения относится к комбинации, содержащей производное акрилоилдистамицина формулы (I) где R1 является атомом хлора или брома;R2 является дистамицином или подобным дистамицину каркасом; или фармацевтически приемлемой его солью; и антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор.-1 011574 В объем настоящего изобретения входит комбинация, содержащая любой из возможных изомеров,охваченных соединениями формулы (I), рассматриваемых как по отдельности, так и в смеси, а также метаболиты и фармацевтически приемлемые биопредшественники (иначе известные как пролекарства) соединений формулы (I). В настоящем описании, если не указано иного, под термином дистамицин или подобный дистомицину каркас R2 подразумевается любой остаток, структурно тесно связанный с дистамицином, например, путем необязательного замещения концевого амидино-остатка дистамицина и/или его полипиррольного каркаса или его части, например, так, как указано ниже. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, выбрано из бевацизумаба (антитело к фактору роста эндотелия), цетуксимаба, панитумумаба, матузумаба, нимотузумаба (антитела к рецептору эпидермального фактора роста),трастузумаба и пертузумаба (антитела к ErbB2). Согласно более предпочтительному варианту осуществления изобретения антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, представляет собой бевацизумаб. Согласно другому предпочтительному варианту осуществления изобретения предлагаются вышеупомянутые комбинации, в которых у производного акрилоилдистамицина формулы (I) R1 имеет вышеупомянутые значения и R2 является группой формулы (II) где m равно целому числу от 0 до 2;n равно целому числу от 2 до 5;X и Y одинаковы или различны и независимы для каждого гетероциклического кольца, являясь атомом азота или группой CH;G является фениленом, 5- или 6-членным насыщенным или ненасыщенным гетероциклическим кольцом, содержащим от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из N, О или S, или является нижеприведенной группой формулы (III) где Q является атомом азота или группой CH и W является атомом кислорода или серы или является группой NR3, в которой R3 является водородом или C1-C4 алкилом; где R4 представляет собой циано, амино, гидрокси или C1-C4 алкокси; R5, R6 и R7 одинаковы или различны, являются водородом или С 1-С 4 алкилом. В настоящем описании, если не указано иного, под термином C1-C4 алкильная или алкоксигруппа подразумевается неразветвленная или разветвленная группа, выбранная из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, сек-бутила, трет-бутила, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, нбутокси, изобутокси, сек-бутокси или трет-бутокси. Предпочтительно комбинация по изобретению содержит вышеупомянутое производное акрилоилдистамицина формулы (I), где R1 является бромом или хлором; R2 является вышеупомянутой группой формулы (II), где r равно 0, m равно 0 или 1, n равно 4 и B имеет вышеупомянутые значения. Внутри данного класса еще более предпочтительными являются комбинации, содержащие соединения формулы (I),где R1 является бромом или хлором; R2 является вышеупомянутой группой формулы (II), где r равно 0, m равно 0 или 1, n равно 4, X и Y являются СН-группами и В выбрано из где R4 представляет собой циано или гидрокси и R5, R6 и R7 одинаковы или различны и являются водородом или C1-C4 алкилом. Даже более предпочтительными комбинациями по изобретению служат те, которые содержат соединение формулы (I), где R1 является бромом, R2 является вышеупомянутой группой формулы (II), где r и m равны 0, n равно 4, X и Y являются CH, В выбрано из группы формулы где R5, R6 и R7 являются атомами водорода, необязательно в форме фармацевтически приемлемой его соли. Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) являются солями, образованными с фармацевтически приемлемыми неорганическими или органическими кислотами, например хлористоводородной, бромисто-водородной, серной, азотной, уксусной, пропионовой, янтарной, малоновой, лимонной, винной, метансульфоновой, п-толуолсульфоновой кислотой и т.п. Примерами предпочтительных производных акрилоилдистамицина формулы (I), находящимися в пределах комбинационной цели изобретения, например в форме фармацевтически приемлемых солей,предпочтительно с хлористо-водородной кислотой, служат: 1)N-5-[(5-[(5-[(3-[(аминокарбонил)амино]пропиламино)карбонил]-1-метил-1 Н-пиррол-3 иламино)карбонил]-1-метил-1 Н-пиррол-3-иламино)карбонил]-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил-4-[(2 бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамид. Даже более предпочтительно производным акрилоилдистамицина формулы (I) служит N-(5-[(5[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминоэтил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2-бромакрилоил)амино]-1 метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида гидрохлорид (бросталлицин), и антителом, ингибирующим фактор роста или его рецептор, является бевацизумаб. Вышеупомянутые соединения формулы (I) либо конкретно идентифицированный как таковые, либо посредством общей формулы, известны или легко синтезируются известными способами, которые упоминаются, например, в вышеупомянутых международных заявках на патент WO 90/11277, WO 96/05196,WO 98/04524, WO 98/21202, WO 99/50265 и WO 99/50266, а также в WO 01/40181.-3 011574 Предполагается, что любая из комбинаций производного акрилоилдистамицина формулы (I), которое определено выше, и антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор, которые перечислены выше, является фиксированной комбинацией для одновременного, раздельного или последовательного применения. Другим аспектом настоящего изобретения, как упомянуто выше, служит комбинация производное акрилоилдистамицина формулы (I), которая определена выше, и антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор, которые перечислены выше, для применения в лечении злокачественной опухоли у субъекта, которому этого требуется. Дополнительным аспектом настоящего изобретения является применение комбинации производного акрилоилдистамицина формулы (I), которое определено выше, и антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор, которые перечислены выше, для приготовления препарата для применения в лечении злокачественной опухоли у субъекта, которому этого требуется. Как используется в данном документе, термин рак относится ко всем формам рака, включая рак системы крови и лимфатической системы, включая болезнь Ходжкина, лейкозы, лимфомы, множественную миелому и болезнь Вальденстрема; рак кожи, включая злокачественную меланому; рак пищеварительного тракта, включая рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак печени, рак ободочной и прямой кишки и рак анального канала; рак половых органов и мочевой системы, включая рак почки, рак мочевого пузыря, рак яичка и рак предстательной железы; гинекологический рак, включая рак шейки матки, рак эндометрия, рак яичников, рак фаллопиевой трубы, рак влагалища и вульвы; рак молочной железы, рак головного мозга, рак костей, карциноиды, рак носоглотки, рак щитовидной железы, забрюшинные саркомы и опухоли мягких тканей. Например, комбинированные препараты по изобретению предназначены для лечения рака головы и шеи, рака ободочной и прямой кишки, забрюшинных сарком и опухолей мягких тканей. Как используется в данном документе, термины лечение или лечить означают облечение симптомов, устранение этиологии либо временно, либо постоянное, или профилактику или замедление появления симптомов. Термин лечение включает облегчение, устранение этиологии или профилактику рака. Помимо того, что они применимы для лечения человека, эти комбинации также применимы для лечения млекопитающих, включая лошадей, собак, кошек, крыс, мышей, овец, свиней и т.д. Термин субъект для целей лечения включает любого субъекта-человека или субъекта-животного,которому требуется профилактика, или у которого имеется рак. Типично субъект является млекопитающим. Млекопитающее, как этот термин используется в данном документе, относится к любому животному, классифицированному как млекопитающее, включая человека, домашних и сельскохозяйственных животных, животных, содержащихся в зоопарке, спортивных или домашних животных, таких как собаки, лошади, кошки, рогатый скот и так далее. Предпочтительно млекопитающим является человек. Термин синергичный противораковый эффект, как используется в данном документе, означает ингибирование роста опухоли, предпочтительно полный регресс опухоли, при применении эффективного количества комбинации, содержащей производное акрилоилдистамицина формулы (I) и антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор. Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к применению комбинации производного акрилоилдистамицина формулы (I), которое определено выше, и антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор, которые перечислены выше, для приготовления препарата для профилактики или лечения метастазов или лечения опухолей путем ингибирования ангиогенеза. Составные части комбинированных препаратов по изобретению могут вводиться пациенту любым приемлемым методом, который является приемлемым с медицинской точки зрения, в том числе перорально, парентерально или с помощью местных терапевтических методов, таких как имплантаты. Пероральный прием включает применение составных частей комбинированного препарата в подходящей пероральной форме, например, в форме таблеток, капсул, пастилок, суспензий, растворов, эмульсий, порошков, сиропов и т.п. Парентеральное введение включает введение составных частей комбинированного препарата посредством подкожных, внутривенных или внутримышечных инъекций. Местные терапевтические методы включают имплантаты, например внутриартериальные имплантаты. Замещенное производное акрилоилдистамицина формулы (I) типично вводится внутривенно; антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, типично вводится внутривенно или перорально. Фактическая предпочтительная доза, метод, порядок и время введения составных частей комбинированных препаратов по изобретению могут меняться, среди прочего, в зависимости от конкретно используемого фармацевтического препарата замещенного производного акрилоилдистамицина формулы (I) и конкретно используемого фармацевтического препарата антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор, конкретной опухоли, подвергающейся лечению, возраста, состояния, пола и распространенности заболевания, подвергающегося лечению, и могут определяться специалистом в данной области техники. Следовательно, режим введения должен быть приспособлен к особенностям состояния пациента,ответа и сопутствующего лечения способом, обычным для любого лечения, и может потребовать коррекции в ответ на изменения состояния и/или в свете других клинических условий.-4 011574 В качестве не ограничивающего примера подходящие дозы производных акрилоилдистамицина формулы (I) могут меняться от приблизительно 0,05 до приблизительно 100 мг/м 2 площади поверхности тела и более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 50 мг/м 2 площади поверхности тела. Что касается введения антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор, то согласно способу по изобретению обычно используемый курс лечения может включать применение от 0,1 до 100 мг/кг. Более предпочтительно, если в курсе используемого лечения применяется от приблизительно 1 до 20 мг/кг. Если активные составные части комбинированного препарата по изобретению находятся вместе с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем, образуется фармацевтическая композиция. Такая фармацевтическая композиция составляет дополнительный вариант осуществления изобретения. Выбираются такие фармацевтически приемлемые носители и наполнители, чтобы минимизировать побочные эффекты фармацевтического соединения и не ослабить или ингибировать его действие до такой степени, что лечение становится неэффективным. Фармацевтически приемлемые носители или наполнители, которые будут использованы в препарате фармацевтической композиции по изобретению, известны специалистам по приготовлению соединений в форме фармацевтических композиций. Например, фармацевтически приемлемый носитель относится к одному или более совместимому твердому или жидкому наполнителю, разбавителю или инкапсулирующим веществам, которые подходят для введения млекопитающим, включают человека. Например, фармацевтически приемлемый наполнитель относится к любому инертному веществу, используемому в качестве разбавителя или растворителя для активного вещества (веществ), которое преднамеренно добавляется к лекарственной форме. Термин включает связующие, наполнители, разрыхлители и смазывающие вещества. Методики приготовления и введения лекарственных средств можно обнаружить в последнем издании "Remington's Pharmacological Sciences"; Mack Publishing Co., Easton, PA. Фармацевтические композиции, подходящие для парентерального введения, приготовляются в стерильной форме. Таким образом, стерильная композиция может быть стерильным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе. Количество активного ингредиента, заключенного в фармацевтической композиции по изобретению, может меняться в очень широких пределах, что зависит от многих факторов, например, пути введения и растворителя. В качестве примера фармацевтические композиции по изобретению могут содержать от приблизительно 0,05 до приблизительно 100 мг/м 2 площади поверхности тела замещенного производного акрилоилдистамицина формулы (I); и от 0,1 до 100 мг/кг антитела, ингибирующего фактор роста или его рецептор. Фармацевтические композиции по изобретению применимы в противораковом лечении. Настоящее изобретение дополнительно относится к коммерческому набору, содержащему в подходящем контейнерном устройстве производное акрилоилдистамицина формулы (I), которое определено выше, и антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор. В наборе по изобретению производное акрилоилдистамицина формулы (I), которое определено выше, и антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, находятся внутри одного контейнерного устройства или внутри различных контейнерных устройств. Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения служит коммерческий набор, содержащий фармацевтическую композицию, которая описана выше. Наборы по изобретению предназначены для одновременного, раздельного или последовательного применения в противораковом лечении. Наборы по изобретению предназначены для применения в противораковом лечении. Синергичный противораковый эффект комбинированных препаратов по настоящему изобретению доказывается, например, следующим in vivo тестом, который предназначен для иллюстрации настоящего изобретения, не представляя собой ограничения для него. Противоопухолевая эффективность in vivo. Мыши-самцы Balb Nu/Nu (бестимусные мыши) от Harlan, Италия, содержались в клетках, накрытых фильтровальной бумагой, пищу и подстилку стерилизовали, и воду подкисляли. Бестимусным мышам подкожно вводили 2,5106 клеток рака предстательной железы человека DU145 (из American TypeCulture Collection). Данная опухолевая модель была выбрана потому, что ранее было показано, что бевацизумаб ингибирует ангиогенез и рост данной модели in vivo [для справки см. The Prostate 36:1-10, 1998]. Лечение начинали через 6 дней после того, как опухоль начинала пальпироваться. Все препараты готовили непосредственно перед приготовлением. Бросталлицин вводили внутривенно в объеме 10 мл/кг в дозе 0,2 мг/кг, и лечение повторяли еженедельно в течение 3 недель. Бевацизумаб вводили интраперитонеально в объеме 10 мл/кг в дозе 20 мг/кг в дни 6, 10, 13, 17, 20 и 24 от дня инъекции клеток. Если оба соединения вводили в один день, бевацизумаб вводили интраперитонеально непосредственно перед внутривенным введением бросталлицина. Каждые 3 дня оценивали рост опухоли и массу тела нетто.-5 011574 Рост опухоли измеряли кронциркулем. Записывали два диаметра и рассчитывали массу опухоли по следующей формуле: длина (мм)ширина 2 (мм)/2. Эффект противоопухолевого лечения определяли как задержку появления экспоненциального роста опухолей [для справки см. Anti Cancer Drugs 7: 437-60, 1996]. Эту задержку (показатель T-C) определяли как разницу времени (в днях), необходимую для того, чтобы опухоли в группе лечения (T) и контрольной группе (С) достигли заранее определенного размера (1 г). Токсичность оценивали по снижению массы тела. Результаты приведены в табл. 2. Бросталлицин, комбинированный с бевацизумабом, оказывал сильный синергичный эффект: T-C были значительно выше, чем ожидалось при простом сложении T-C, полученных с двумя соединениями в виде монотерапии (21,2 дня, когда ожидаемые T-C составляли 14,2 дней). Ни в одной группе лечения не наблюдалось токсичности, в том числе снижения массы тела нетто. Противоопухолевая эффективность in vivo Таблица 2 Препарат вводился интраперитонеально в дни 6, 10, 13, 17, 20 и 24.Препарат вводился внутривенно в дни 6, 13 и 20 (q7d3).Дни 6, 13, 20: бевацизумаб вводили интраперитонеально и немедленно после этого вводили бросталлицин внутривенно; дни 10, 17, 24: мышей лечили только бевацизумабом. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Комбинация, содержащая производное акрилоилдистамицина формулы (I) где R1 является атомом хлора или брома;R2 является дистамицином или подобным дистамицину каркасом или фармацевтически приемлемой его солью; и антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор. 2. Комбинация по п.1, где антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, выбрано из группы, состоящей из бевацизумаба, цетуксимаба, панитумумаба, матузумаба, нимотузумаба, трастузумаба и пертузумаба. 3. Комбинацией по п.2, где антитело, ингибирующее фактор роста или его рецептор, является бевацизумабом. 4. Комбинация по п.1, содержащая производное акрилоилдистамицина формулы (I) где R1 является атомом хлора или брома;R2 является группой формулы (II) где m равно целому числу от 0 до 2;n равно целому числу от 2 до 5;X и Y одинаковы или различны и независимо для каждого гетероциклического кольца являются атомом азота или группой CH;G является фениленом, 5- или 6-членным насыщенным или ненасыщенным гетероциклическим кольцом, содержащим от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из N, О или S, или является нижеприведенной группой формулы (III) где Q является атомом азота или группой CH и W является атомом кислорода или серы или является группой NR3, в которой R3 является водородом или C1-C4 алкилом; где R4 представляет собой циано, амино, гидрокси или C1-C4 алкокси; R5, R6 и R7 одинаковы или различны, являются водородом или C1-C4 алкилом. 5. Комбинация по п.4, содержащая производное акрилоилдистамицина формулы (I), где R1 и R2 таковы, как определено в п.4, r равно 0, m равно 0 или 1, n равно 4, X и Y, оба, являются группами CH и B выбрано из где R4 представляет собой циано или гидрокси и R5, R6 и R7 одинаковы или различны и являются водородом или С 1-С 4 алкилом. 6. Комбинация по п.5, содержащая производное акрилоилдистамицина формулы (I), где R1 является бромом, R2 является группой формулы (II), где r и m равны 0, n равно 4, X и Y представляют собой CH, B является группой формулы где R5, R6 и R7 являются атомами водорода, необязательно в форме фармацевтически приемлемой соли. 7. Комбинация по п.1, содержащая производное акрилоилдистамицина, необязательно в форме фармацевтически приемлемой соли, выбранной из группы, состоящей из(бросталлицин) и бевацизумаб. 9. Комбинация по любому из пп.1-8 для одновременного, раздельного или последовательного применения. 10. Комбинация по любому из пп.1-9, которая является фиксированной комбинацией. 11. Комбинация по любому из пп.1-10 для применения в лечении рака у субъекта, которому это требуется. 12. Применение комбинации по любому из пп.1-10 в приготовлении препарата для применения в лечении рака у субъекта, которому это требуется. 13. Применение по п.12, где рак выбран из рака системы крови и лимфатической системы, включая болезнь Ходжкина, лейкозы, лимфомы, множественную миелому и болезнь Вальденстрема; рака кожи,включая злокачественную меланому; рака пищеварительного тракта, включая рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак печени, рак ободочной и прямой кишки и рак анального канала; рака половых органов и мочевой системы, включая рак почки, рак мочевого пузыря,рак яичка и рак предстательной железы; раковых заболеваний, включая рак шейки матки, рак эндометрия, рак яичников, рак фаллопиевой трубы, рак влагалища и вульвы; рака молочной железы, рака головного мозга, рака костей, карциноидов, рака носоглотки, рака щитовидной железы, забрюшинных сарком и опухолей мягких тканей. 14. Применение по п.13, где рак выбран из рака головы и шеи, рака ободочной и прямой кишки, забрюшинных сарком и опухолей мягких тканей. 15. Применение комбинации по любому из пп.1-10 в приготовлении препарата для профилактики или лечения метастазов или для лечения опухолей путем ингибирования ангиогенеза. 16. Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию по любому из пп.1-10 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. 17. Коммерческий набор, содержащий комбинацию по любому из пп.1-10 для одновременного, раздельного или последовательного применения в противораковом лечении. 18. Коммерческий набор, содержащий фармацевтическую композицию по п.16 для одновременного, раздельного или последовательного применения в противораковом лечении.