Комбинированная противоопухолевая терапия, включающая применение производных замещенного акрилоилдистамицина и алкилирующих агентов

008502 Данное изобретение относится к области лечения рака и представляет собой противоопухолевую композицию, содержащую производное замещенного акрилоилдистамицина, точнее производное бром- или -хлоракрилоилдистамицина, и алкилирующий агент, проявляющие синергическое противоопухолевое действие. Дистамицин А и его аналоги, в дальнейшем называемые дистамицин и дистамицинподобные производные, известны в данной области как цитотоксические агенты, используемые в противоопухолевой терапии. Дистамицин А является антибиотиком с антивирусной и антипротозойной активностью, содержащим полипиррольную структуру (Nature 203: 1064 (1964); J. Med. Chem. 32: 774-778 (1989. В международных патентных заявках WO 90/11277, WO 98/04524, WO 98/21202, WO 99/50265, WO 99/50266 и WO 01/40181 (заявляющих приоритет заявки на патент Великобритании 9928703,9), все на имя заявителя и включенных в изобретение в качестве ссылок, приведено описание производных акрилоилдистамицина,в которых амидинофрагмент дистамицина необязательно замещен азотсодержащими концевыми группами, такими как, например, цианамидино, N-метиламидино, гуанидино, карбамоил, амидоксим, циано и т.п., и/или в которых полипиррольная структура дистамицина или ее часть замещена карбоциклическим либо гетероциклическим фрагментом. В первом аспекте данного изобретения представляют фармацевтическую композицию для применения в противоопухолевой терапии млекопитающих, включая человека, содержащую фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель; производное акрилоилдистамицина формулы (I) где R1 означает атом брома или хлора,R2 означает дистамицин или дистамицинподобную структуру; или его фармацевтически приемлемую соль; и алкилирующий агент. В объем данного изобретения включены фармацевтические композиции, содержащие любой из возможных изомеров соединений формулы (I), рассматриваемых отдельно или в смеси, а также метаболиты и фармацевтически приемлемые биопредшественники (иначе говоря, известные как пролекарства) соединений формулы (I). Если не указано особо, в данном описании изобретения дистамицин или дистамицинподобная структура R2 означает любой фрагмент, структурно прочно связанный с самим дистамицином, например,возможно посредством замещения концевого амидинофрагмента дистамицина и/или его полипиррольной структуры или ее части. Алкилирующие агенты широко известны в данной области и описаны в различных научных публикациях. Представителями указанного класса соединений являются, например, горчицы, такие как мелфалан,хлорамбуцил, мехлоретамин, циклофосфамид, ифосфамид и бусульфан; нитрозомочевины, такие как кармустин, лормустин, семустин и фотемустин; тетразины, такие как дакарбазин и темозоломид; азиридины, такие как тиотера и митомицин С, и производные платины, такие как цисплатин, карбоплатин,оксалиплатин, недаплатин и лобаплатин и т.п. См. Cancer Principles and Practice of Oncology, LippincottRaven Ed. (1997), 405-432. В соответствии с предпочтительным аспектом изобретения в настоящем описании представлены вышеуказанные фармацевтические композиции, в которых алкилирующий агент выбран из горчиц и производных платины, таких как цисплатин, карбоплатин и оксаплатин. Согласно другому предпочтительному аспекту изобретения представлены вышеуказанные фармацевтические композиции, в которых в производном акрилоилдистамицина формулы (I) R1 имеет вышеуказанные значения, a R2 означает группу формулы (II)G означает фенилен, 5- или 6-членное насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо с 1-3 гетероатомами, выбранными из N, О или S, или группу формулы (III) где Q означает атом азота или группу СН,W означает атом кислорода или серы либо является группой NR3, в которой R3 означает водород или С 1-С 4 алкил; В выбран из группы, состоящей из где R5, R6 и R7, одинаковые или разные, означают водород или C1-С 4 алкил; или его фармацевтически приемлемую соль; и алкилируюший агент. Если не указано особо, в данном описании под группами С 1-С 4 алкил или алкокси подразумевают группу с прямой или разветвленной цепью, выбранную из метила, этила, н-пропила, изопропила, нбутила, изобутила, втор-бутила, трет-бутила, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси или трет-бутокси. Более предпочтительными являются фармацевтические композиции изобретения, содержащие вышеуказанное производное акрилоилдистамицина формулы (I), где R1 означает бром или хлор; R2 означает вышеуказанную группу формулы (II), где r равно 0, m равно 0 или 1, n равно 4, а B имеет описанные выше значения. В пределах названного класса еще более предпочтительными являются фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы (I), где R1 означает бром или хлор; R2 представляет вышеуказанную группу формулы (II), в которой r равно 0, m равно 0 или 1, n равно 4, а Х и Y оба означают СНгруппы, а В выбран из и R5, R6 и R7, одинаковые или разные, означают водород или C1-C4-алкил. Фармацевтически приемлемыми солями соединений формулы (I) являются соли фармацевтически приемлемых неорганических или органических кислот, таких как, например, хлористоводородная, бромистоводородная, серная, азотная, уксусная, пропионовая, янтарная, малоновая, лимонная, винная, метансульфоновая, п-толуолсульфоновая кислота и т.п. Примеры предпочтительных производных акрилоилдистамицина формулы (I) в композициях изобретения, необязательно в форме фармацевтически приемлемых солей, предпочтительно хлористоводородной кислоты: 1. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминоэтил)амино]карбонил-1-метил 1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида. 2. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминопропил)амино]карбонил-1-метил 1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил)4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида. 3. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(5-[(3-амино-3-иминопропил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3 ил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида. 4. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(5-[(3-амино-3-иминопропил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3 ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-имидазол-2-карбоксамида. 5. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(5-[(3-амино-3-иминопропил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3 ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-3-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиразол-5-карбоксамида. 6. N-(5-[(5-[(5-[(3-амино-3-оксопропил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-3-[(2-бромакрилоил)амино]-1 метил-1 Н-пиразол-5-карбоксамид.-2 008502 7. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминоэтил)амино]карбонил-1-метил 1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)4-[(2-хлоракрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида. 8. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(3-[амино(имино)метил]амино-пропил)амино]карбонил-1-метил-1 Нпиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Нпиррол-2-карбоксамида. 9. Гидрохлорид N-(5-[(5-[(3-амино-3-иминопропил)амино]карбонил-1-метил-1H-пиррол-3-ил) амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2 карбоксамида. 10. N-5-[(5-[(5-[(3-[(аминокарбонил)амино]пропиламино)карбонил]-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил амино)карбонил]-1-метил-1 Н-пиррол-3-иламино)карбонил]-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил-4-[(2-бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида. Вышеуказанные соединения формулы (I), или конкретно охарактеризованные как таковые либо посредством общей формулы, являются известными или могут быть легко получены известными способами, которые описаны, например, в международных публикациях патентных заявок WO 90/11277,WO 98/04524, WO 98/ 21202, WO 99/50265 и WO 99/50266, а также в WO 01/40181. Кроме того, данное изобретение представляет собой продукт, содержащий производное акрилоилдистамина формулы (I), которое охарактеризовано выше, и алкилирующий агент в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в противоопухолевой терапии. Следующим аспектом данного изобретения является способ лечения млекопитающего, в том числе человека, страдающего неопластическим заболеванием, включающим введение указанному млекопитающему вышеупомянутого производного акрилоилдистамицина формулы (I) и алкилирующего агента в количествах, эффективных для достижения синергического противоопухолевого действия. В данном изобретении также предусматривают способ снижения побочных эффектов, вызванных противоопухолевой терапией антибластомным агентом, у млекопитающего, в том числе человека, при необходимости такого снижения. Способ включает в себя введение указанному млекопитающему комбинированного препарата, содержащего алкилирующий агент и производное акрилоилдистамицина формулы (I), описанного выше, в количестве, эффективном для достижения синергического противоопухолевого действия. Под используемым в описании термином "синергическое противоопухолевое действие" подразумевают ингибирование роста опухоли, предпочтительно полную регрессию опухоли, в результате введения эффективного количества комбинированного препарата, содержащего производное акрилоилдистамицина формулы (I) и алкилирующий агент, млекопитающим, включая человека. Под используемым термином "введенный" или "введение" подразумевают парентеральное и/или пероральное применение; термин "парентеральное" означает внутривенное, подкожное и внутримышечное введение. Согласно способу данного изобретения производное акрилоилдистамицина может быть введено одновременно с алкилирующим агентом или, альтернативно, оба соединения могут быть введены последовательно в любом порядке. В этом отношении очевидно, что фактический, предпочтительный способ и порядок введения будут изменяться, кроме прочего, в зависимости от используемого конкретного препарата акрилоилдистамицина формулы (I), от конкретного препарата алкилирующего агента, конкретного вида опухоли, которую лечат, а также субъекта, которого лечат. Для введения производного акрилоилдистамицина формулы (I) согласно способу изобретения курс обычно применяемой терапии включает в себя дозы, варьирующиеся приблизительно от 0,05 до 100 мг/м 2 поверхности тела и более предпочтительно приблизительно от 0,1 до 50 мг/м 2 поверхности тела. Что касается введения алкилирующего агента согласно способу изобретения, курс обычно используемой терапии включает в себя при введении соединений горчицы, дозы, варьирующиеся приблизительно от 1 до 5000 мг/м 2 поверхности тела и более предпочтительно от 10 до 1000 мг/м 2 поверхности тела; для введения производных нитрозомочевины, дозы, варьирующиеся приблизительно от 1 до 1000 мг/м 2 поверхности тела и более предпочтительно от 10 до 1000 мг/м 2 поверхности тела; для введения соединений тетразина и азиридина, дозы, варьирующиеся приблизительно от 1 до 1000 мг/м 2 поверхности тела и более предпочтительно от 10 до 1000 мг/м 2 поверхности тела; при введении производных платины, дозы, варьирующиеся приблизительно от 1 до 1000 мг/м 2 поверхности тела и более предпочтительно от 10 до 500 мг/м 2 поверхности тела. Противоопухолевая терапия данного изобретения особенно подходит для лечения опухолей молочной железы, яичников, легких, прямой кишки, почек, желудка, поджелудочной железы, печени, меланомы, лейкоза и опухолей мозга у млекопитающих, в том числе у человека.-3 008502 Следующий аспект данного изобретения направлен на получение фармацевтической композиции,содержащей эффективное количество производного акрилоилдистамицина формулы (I), описанного выше, и алкилирующего агента, на получение лекарственного средства для применения в целях предупреждения или лечения метастаза или лечения опухолей посредством ингибирования ангиогенеза. Как сказано выше, эффект производного акрилоилдистамицина формулы (I) и алкилирующего агента, например цисплатины и карбоплатины, значительно повышается без параллельного увеличения токсичности. Другими словами, комбинированная терапия данного изобретения повышает противоопухолевое действие производного акрилоилдистамицина и алкилирующего агента и, следовательно, обеспечивает наиболее эффективное и наименее токсичное лечение опухолей. Синергический или супераддитивный эффект комбинированных препаратов изобретения продемонстрирован, например, с помощью следующих тестов in vivo, которые предназначены для иллюстрации данного изобретения без какого-либо его ограничения. В табл. 1 представлена антилейкозная активность в отношении диссеминированного лейкоза L1210 у мышей, полученная при комбинировании репрезентативного соединения формулы (I) изобретения гидрохлорида N-(5-[(5-[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминоэтил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2 бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамида, внутренний код PNU 166196, с цисплатином. Цисплатин один в дозе 5,9 мг/кг (день +3) и PNU 166196 один в дозе 0,26 мг/кг (дни +1,2) были ассоциированы со значениями %ILS 67 и 33 соответственно без проявления токсичности. При комбинировании цисплатина и PNU 166196 в тех же дозах по той же схеме наблюдали увеличение активности со значением %ILS 125, что, таким образом, указывает на синергическое противоопухолевое действие. В табл. 2 представлена антилейкозная активность в отношении диссеминированного лейкоза L1210 у мышей, полученная при комбинировании вышеупомянутого производного PNU 166196 с карбоплатином. Карбоплатин один в дозе 135 мг/кг (день +3) и PNU 166196 один в дозе 0,26 мг/кг (дни +1,2) были ассоциированы со значениями %ILS 50 и 33 соответственно без проявления токсичности. При комбинировании карбоплатина и PNU 166196 в тех же дозах по той же схеме наблюдали увеличение активности со значением %ILS 92, что снова указывает на эффект выше аддитивного. В табл. 3 представлено противоопухолевое действие в отношении подкожной имплантированной карциномы НСТ-116 прямой кишки человека, полученное при комбинировании PNU 166196 с цисплатином. Цисплатин один в дозе 2 мг/кг (7 дней 3) и PNU 166196 один в дозе 0,4 мг/кг (7 дней 3) были ассоциированы со значениями %Т/С 92 и 61 соответственно без токсичности. Вместо этого при комбинировании цисплатина и PNU 166196 наблюдали значительное замедление роста опухоли, указывающее, следовательно, на терапевтическое преимущество комбинации (синергизм) по сравнению с применением лекарственных средств отдельно. Для описанных экспериментов PNU 166196 солюбилизировали в воде для инъекций, тогда как в случае цисплатина и карбоплатина использовали стандартные фармацевтические препараты. Таблица 1 Антилейкозная активность производного (I) акрилоилдистамицина в сочетании с цисплатином в отношении мышиного диссеминированного лейкоза L12101 Лейкозные клетки L1210 (105/мышь CD2F1) вводили внутривенно на 0-й день. Лечение проведено внутривенно. 3 Увеличение продолжительности жизни: [(среднее время выживания леченых мышей/среднее время выживания контролей)100]-100. 4 Количество токсических случаев смерти/количество мышей. 2 Таблица 2 Антилейкозная активность производного акрилоилдистамицина в комбинации с карбоплатиномв отношении мышиного диссеминированного лейкоза L12101 Лейкозные клетки L1210 (105/мышь CD2F1) вводили внутривенно на 0-й день. Лечение проведено внутривенно. 3 Увеличение продолжительности жизни: [(среднее время выживания леченых мышей/среднее время выживания контролей)100]-100. 4 Количество токсических случаев смерти/количество мышей. 2 Таблица 3 Противоопухолевая активность в отношении карциномы НСТ-116 прямой кишки человека (низкая/средняя недостаточность GST и MMR) производного акрилоилдистамицина в сочетании с цисплатином Внутривенное лечение начинали на 7-й день после имплантации опухоли. схема 7 дней 3 PNU-166196, вводимого через 48 ч после цисплатина.b Опухолевая регрессия (Т/С, %) на 20-й день после лечения (в соответствии со стандартами NCI (Национального онкологического института) Т/С 42 эффективные). с На 40-й день после имплантации опухоли.d 27 дней после имплантации опухоли. е Тест Фишера (Fisher) против как цисплатина, так и PNU-166196. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель и в качестве активного ингредиента производное акрилоилдистамицина формулы (I) где R1 означает атом брома или хлора;R2 означает группу формулы (II)G означает фенилен, 5- или 6-членное насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо с 13 гетероатомами, выбранными из N, О или S, или группу формулы (III) где Q означает атом азота или группу СН,W означает атом кислорода или серы или является группой NR3, в которой R3 означает водород или С 1-С 4 алкил; В выбран из группы, состоящей из где R5, R6 и R7, одинаковые или разные, означают водород или C1-С 4 алкил; или его фармацевтически приемлемую соль; и алкилирующий агент. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой алкилирующий агент выбран из группы, состоящей из горчиц, таких как мелфалан, хлорамбуцил, мехлоретамин, циклофосфамид, ифосфамид и бусульфан; нитрозомочевин, таких как кармустин, лормустин, семустин и фотемустин; тетразинов, таких как дакарбазин и темозоломид; азиридинов, таких как тиотепа и митомицин С, и производных платины,таких как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, недаплатин и лобаплатин. 3. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая производное акрилоилдистамицина формулыN-(5-[(5-[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминоэтил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3 ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2 бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамид, необязательно в форме его фармацевтически приемлемой соли. 4. Продукт, содержащий производное акрилоилдистамицина формулы (I), определенное в п.1, или его фармацевтически приемлемую соль; и алкилирующий агент, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения опухолей. 5. Продукт по п.4, в котором алкилирующий агент выбран из горчиц, таких как мелфалан, хлорамбуцил, мехлоретамин, циклофосфамид, ифосфамид и бусульфан; нитрозомочевин, таких как кармустин,лормустин, семустин и фотемустин; тетразинов, таких как дакарбазин и темозоломид; азиридинов, таких как тиотепа и митомицин С, и производных платины, таких как цисплатин, карбоплатин, оксаплатин,недаплатин и лобаплатин. 6. Продукт по п.4, в котором производное акрилоилдистамицина выбрано из группы, определенной в п.3. 7. Применение производного акрилоилдистамицина формулы (I), определенного в п.1 для получения лекарственного средства для использования в комбинированной терапии с алкилирующим агентом для лечения опухолей. 8. Применение по п.7, где лекарственное средство дополнительно содержит указанный алкилирующий агент. 9. Применение по п.7 или 8, где алкилирующий агент является таким, как определено в п.2. 10. Применение по п.7 или 8, где производное акрилоилдистамицина выбрано из группы, которая определена в п.3. 11. Применение по любому одному из пп.7-10, где опухоль выбрана из опухолей молочной железы,яичников, легкого, прямой кишки, почек, желудка, поджелудочной железы, печени, меланомы, лейкоза и опухолей мозга. 12. Применение производного акрилоилдистамицина формулы (I), определенного в п.1, для получения лекарственного средства для использования в комбинированной терапии с алкилирующим агентом для предупреждения или лечения метастаза или для лечения опухолей посредством ингибирования ангиогенеза. 13. Применение по п.12, где лекарственное средство дополнительно содержит указанный алкилирующий агент. 14. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой производным акрилоилдистамицина являетсяN-(5-[(5-[(5-[(2-[амино(имино)метил]аминоэтил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3 ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)амино]карбонил-1-метил-1 Н-пиррол-3-ил)-4-[(2 бромакрилоил)амино]-1-метил-1 Н-пиррол-2-карбоксамид необязательно в форме фармацевтически приемлемой соли, а алкилирующим агентом является производное платины, выбранное из группы, состоящей из цисплатина, карбоплатина, оксаплатина, недаплатина и лобаплатина. 15. Способ лечения млекопитающего, в том числе человека, страдающего неопластическим заболеванием, включающий введение указанному млекопитающему производного акрилоилдистамицина фор-6 008502 мулы (I), которое определено в любом одном из пп.1-6, и алкилирующего агента в количествах, эффективных для осуществления синергического противоопухолевого действия. 16. Способ снижения побочных эффектов, вызванных противоопухолевой терапией антибластомным препаратом, у млекопитающего, в том числе у человека, при необходимости такого снижения, включающий введение указанному млекопитающему комбинированного препарата, содержащего алкилирующий агент и производное акрилоилдистамицина формулы (I), которое определено в любом одном из пп.1-6, в количествах, эффективных для достижения синергического противоопухолевого эффекта.