Комбинация феррохина и производного артемизинина для лечения малярии

012630 Настоящее изобретение относится к новой комбинации противомалярийных действующих веществ,а именно феррохина и производного артемизинина, а также к фармацевтической композиции, содержащей такую комбинацию и обладающей полезным действием для лечения и/или профилактики малярии. Малярия является одной из главных причин смертности от инфекций в мире и затрагивает ежегодно более 500 миллионов человек, из числа которых каждый год умирают 3 миллиона. Такое бедствие затрагивает, главным образом, прилежащие к Сахаре регионы Африки, Юго-Восточную Азию и Латинскую Америку. Малярию распространяют четыре типа паразитов рода Plasmodium (P. falciparum, P. malariae, P.vivax и P. ovale), переносимых комарами-анофелесами. Plasmodium falciparum, широко распространенный в Африке, является наиболее вирулентным паразитом и ответствен за летальные формы заболевания. Значительный рост заболеваемости, наблюдаемый в течение нескольких лет, обязан нескольким факторам, среди которых резистентность многочисленных штаммов Plasmodium falciparum к традиционно применяемым лекарственным средствам, таким как хлорохин, мефлохин, амодиахин или также пириметамин. Выделенный в 1972 г. из растения Artemisia annua (цинхаосу), применяемого в течение многих веков в Китае, артемизинин проявляет мощную противомалярийную активность. В коммерческой сети имеются также производные, обладающие улучшенными фармакологическими свойствами, такие как артеметер, артеэтер и артесунат. Артемизинин и его производные в настоящее время составляют часть активных веществ, действующих наиболее эффективно против Plasmodium falciparum. Однако применение артемизинина или его производных при монотерапии может быть фактором, обуславливающим селекцию резистентных штаммов паразитов. Научное сообщество рекомендует в настоящее время применение комбинаций действующих веществ, в частности комбинаций артемизинина или его производных, с другими противомалярийными действующими веществами. Такая политерапия, называемая ACT (Artemisinin-based Combination Therapies (комбинированная терапия на основе артемизинина), рекомендована с 2002 г. Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ). Такая терапия обладает множеством преимуществ: улучшение терапевтической эффективности в отношении резистентных штаммов, защита двумя действующими веществами от появления резистентности, уменьшение передачи болезни и распространения резистентности. Была предложена, например, комбинация артеметера и лумефантрина, производимая под названиемCoartem, а также комбинация артесуната и амодиахина (Arsucam). В соответствии со стратегией, поддерживаемой ВОЗ, необходимо продолжать исследования новых комбинаций противомалярийных действующих веществ. Среди различных противомалярийных действующих веществ, описанных в литературе, феррохин представляет собой соединение, активное в отношении штаммов Plasmodium falciparum, резистентных к хлорохину. Феррохин, называемый также ферроценхлорохин или феррохлорохин, соответствует 7-хлор 4[(2-[(N,N-диметиламино)метил]ферроценилметил)амино]хинолину. Речь идет о производном 4 аминохинолина, присоединенном к ядру ферроцена. Это соединение описывается, в частности, в патенте ЕР 0824536 и в изданиях J. Med. Chem., 1997, 40, 3715-3718, Antimicrob. Agents Chemother., 1998, 42, 540544, J. Org. Chem., 1999, 589, 59-65 и J. Organometallic Chem., 2004, 689, 4678-4682. При том что комбинация хлорохина и артесуната не достигает удовлетворительного уровня эффективности (Am. J. Trop. Med. Hyg., 2003, 69(1), 19-25 и Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 2003, 97, 429-433) и может индуцировать появление резистентных штаммов, в частности, к хлорохину, в настоящее время неожиданным образом было обнаружено, что комбинация феррохина и производного артемизинина, в частности артесуната, артеметера или артеэтера, оказалась эффективной для лечения и/или предупреждения малярии и, в частности, для предупреждения, уменьшения и даже избежания развития штаммов паразитов, резистентных к двум действующим веществам, в том случае, когда упомянутые вещества вводят в курсе монотерапии. Таким образом, настоящее изобретение относится к новой комбинации феррохина (молекула (I),представленной далее, в виде свободного основания, в котором Fe представляет собой ферроценовое ядро), и производного артемизинина. В комбинациях по настоящему изобретению феррохин может содержаться в виде свободного основания, а также в виде соли, гидрата или сольвата (причем последние определяются как комбинации или комбинации феррохина с одной или несколькими молекулами воды или растворителя соответственно). Предпочтительно применяют феррохин в виде свободного основания.-1 012630 Производное артемизинина, содержащееся в комбинациях по настоящему изобретению, присутствует предпочтительно в виде артесуната (II) или артеметера (III) Изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей в качестве действующих веществ комбинацию феррохина (I) и производного артемизинина, предпочтительно артесуната (II) или артеметера (III). Такая фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективные дозы феррохина или фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата феррохина и по меньшей мере одно производное артемизинина, а также по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Указанные эксципиенты выбирают из традиционных эксципиентов, известных специалисту в данной области техники, в соответствии с требуемыми фармацевтической формой и способом введения. Соответствующие лекарственные формы стандартной дозы для введения включают в себя формы для перорального приема, такие как таблетки, капсулы с мягкой или твердой желатиновой оболочкой,порошки, гранулы и растворы или суспензии для приема внутрь, формы для приема сублингвально,трансбуккально, интратрахеально, интраокулярно, интраназально, путем ингаляции, формы для введения топическим, чрескожным, подкожным, внутримышечным или внутривенным путем, формы для введения ректально и имплантаты. Для топического нанесения соединения по настоящему изобретению можно применять в виде кремов, гелей, мазей или лосьонов. Предпочтительными путями введения являются введение перорально, ректально или путем инъекции. Например, при приготовлении твердой композиции в виде таблеток активные ингредиенты смешивают с одним или несколькими фармацевтическими эксципиентами, такими как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, диоксид кремния, гуммиарабик, маннит, микрокристаллическая целлюлоза,гидроксипропилметилцеллюлоза, кроскармеллоза, или аналогичными. Можно покрывать таблетки оболочкой из сахарозы, производного целлюлозы или других веществ, подходящих для нанесения оболочки. Изготовление таблеток может быть осуществлено различными способами, такими как прямое прессование, сухая грануляция, мокрая грануляция или плавление при нагревании. Возможно также изготовление препарата в виде желатиновых капсул смешиванием активных ингредиентов с наполнителем и заполнением полученной смесью мягких или твердых желатиновых капсул. Для парентерального введения можно использовать водные суспензии, солевые изотонические растворы или стерильные растворы для инъекций, содержащие фармакологически совместимые диспергаторы и/или смачиватели, например пропиленгликоль или бутиленгликоль. При пероральном введении суточные дозы каждого из двух действующих веществ комбинации по настоящему изобретению имеют следующие значения: феррохин: в интервале от 50 до 1600 мг, предпочтительно в интервале от 200 до 1200 мг и более предпочтительно в интервале от 400 до 800 мг для одного пациента в день; производное артемизинина: в интервале от 1 до 10 мг/кг/день, предпочтительно в интервале от 2 до 6 мг/кг/день и более предпочтительно около 4 мг/кг/день. Могут иметь место особые случаи, в которых дозы устанавливают увеличенными или уменьшенными; такие дозы также охватывает данное изобретение. По принятой практике соответствующие дозы для каждого пациента определяются врачом в зависимости от способа введения, массы тела и реакции пациента. Комбинация по настоящему изобретению предназначена для введения в течение 3 последовательных дней ежедневно в один или несколько приемов каждого из двух действующих веществ, предпочтительно в один прием в день. Такая длительность лечения, ограниченная 3 днями, является особенно-2 012630 предпочтительной по сравнению с 7 днями, рекомендованными для монотерапии производными артемизинина, поскольку она позволяет лучше наблюдать за лечением пациентов, избегая таким образом преждевременных остановок лечения, которые провоцируют в случае длительного срока резистентность паразитов. Введение каждого из двух действующих веществ может быть осуществлено одновременно, или раздельно, или рассроченно (последовательное введение). В том случае, когда введение осуществляют одновременно, оба действующие вещества могут быть объединены в единую фармацевтическую форму (фиксированная комбинация), такую как таблетка или желатиновая капсула, адаптированные для введения перорально. Оба действующие вещества комбинации по настоящему изобретению, независимо от одновременности или рассроченности их введения, могут также находиться в различных фармацевтических формах. С этой целью комбинации по настоящему изобретению могут представлять собой набор, содержащий, с одной стороны, феррохин или соль, гидрат или сольват феррохина и, с другой стороны, - по меньшей мере одно производное артемизинина, такое как артесунат или артеметер, причем указанный феррохин и указанное производное артемизинина находятся в различных отделениях и предназначены для введения одновременно, раздельно или рассроченно (последовательное введение). В качестве примера лекарственная форма стандартной дозы феррохина в форме таблетки может содержать следующие компоненты: Также в качестве примера лекарственная форма стандартной дозы артесуната в форме таблетки может содержать 50 или 100 мг артесуната и традиционные эксципиенты, например лактозу, кроскармеллозу, коллоидный безводный диоксид кремния, микрокристаллическую целлюлозу и стеарат магния. Настоящее изобретение относится также к способу лечения и/или профилактики малярии, который включает в себя введение пациенту терапевтически эффективной дозы феррохина или фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата феррохина и терапевтически эффективной дозы по меньшей мере одного производного артемизинина, причем указанные дозы вводят одновременно или последовательно указанному пациенту, как было описано ранее. Комбинация по настоящему изобретению была объектом биохимических испытаний in vivo на мышах, инфицированных плазмодием типа Plasmodium falciparum (штамм Plasmodium vinckei vinckei), что позволило показать ее эффективность для лечения малярии. Описанные далее испытания, осуществленные с артесунатом, приведены в качестве примера. Поскольку производные артемизинина имеют в целом тот же метаболит (дигидроартемизинин) и короткий период полураспада, результаты таких испытаний, полученные для артесуната, обобщены для других производных артемизинина, таких как артеметер или артеэтер. Измерение активности in vivo феррохина артесуната и комбинации двух соединений на мышах, инфицированных Plasmodium Vinckei 1. Описание проведенного испытания in vivo. Инфицировали самок мышей линии "Swiss" в возрасте восьми недель и одного дня паразитами типаPlasmodium vinckei vinckei (Rodhain, 1952). Мышей предварительно акклиматизировали в течение двух недель. Мыши получали корм и питье ad libitum. Штамм Plasmodium vinckei vinckei сохраняли еженедельным инфицированием мышей в количестве 107 инфицированных эритроцитов, суспендированных в фосфатном солевом буфере (0,9%). В первый день лечения (J0), через один час после инфицирования (107 инфицированных эритроцитов, суспендированных в фосфатном солевом буфере (0,9%, животному вводили перорально, соответственно случаю, феррохин, артесунат или смесь двух действующих веществ. Такое введение повторяли в течение трех следующих дней (с J1 по J3) (Peter, 1987). При комбинированном введении двух продуктов артесунат вводили первым, а феррохин вводили вторым спустя 45 мин. На четвертый день исследовали мазок крови, отобранной на уровне хвоста мыши. Фиксировали пробу на пластине. Под микроскопом считали число инфицированных клеток крови. Уровень паразитемии выражали в процентном отношении инфицированных эритроцитов, присутствующих в отобранной пробе, в пересчете на 1000 клеток; для одной дозы использовали шесть или семь мышей. Мышей, для которых исследование мазка на 4-й день не показывало каких-либо следов инфекции,проверяли снова на 10-й, 17-й, 24-й, 31-й, 38-й, 45-й, 52-й и 59-й день для того, чтобы обнаружить возможный рецидив инфекции.-3 012630 Приготовление суспензий для разбавления и введения соединений Приготовление суспензии феррохина. Феррохин производства Sanofi-Synthelabo, партия MY18.0088. Смешивают феррохин с метилцеллюлозой (0/5 (мас./мас. и Polysorbate 80 (0/5 (мас./мас Препарат остается стабильным по меньшей мере в течение 7 дней при хранении в темном прохладном месте (4 С) и в течение 4 ч при комнатной температуре. Конечная суспензия феррохина имеет концентрации, варьирующие в интервале от 0,1 до 100 мг/мл. Приготовление суспензии артесуната. Артесунат производства Sanofi-Synthelabo, партия 1.04. Смешивают артесунат с метилцеллюлозой(0/5 (мас./мас. и Polysorbate 80 (0/5 (мас./мас Препарат остается стабильным в течение 4 ч при хранении в темном месте при комнатной температуре. Конечная суспензия артесуната имеет концентрации,варьирующие в интервале от 0,8 до 20 мг/мл. 2. Определение CI50 и терапевтических доз артесуната и феррохина, вводимых раздельно. Способ определения CI50.CI50 определяли как концентрацию в мг/кг/день, которая ингибирует паразитемию на 50% на четвертый день (J4) после инфицирования (J0) и четырех дней лечения (J0, J1, J2, J3). 0% ингибирования соответствует среднему уровню паразитемии, наблюдаемой у инфицированных мышей, не подвергавшихся лечению. 100% ингибирования соответствует очень низкому или нулевому уровню паразитемии,меньше 0,1%. CI50 определяли линейной интерполяцией графика отклика дозы, представленной как логарифм концентрации.CI50 феррохина определяли после введения в концентрациях в интервале от 1 до 10 мг/кг/день. В течение 4 дней использовали концентрации 0; 1; 1,47; 2,1; 3,2; 4,6; 6,8 и 10 мг/кг/день.CI50 артесуната определяли после введения в концентрациях в интервале от 1 до 15 мг/кг/день. В течение 4 дней использовали концентрации 0; 1; 1,6; 2,5; 3,9; 6,1; 9,5 и 15 мг/кг/день. Полученные значения CI50 представлены в приведенной далее табл. I. Таблица I Для феррохина терапевтическая доза составляет 10 мг/кг/день. Для артесуната терапевтическая доза в данном исследовании не была достигнута и составляет, таким образом, более 15 мг/кг/день. Представлялось важным осуществить исследование взаимодействия при нетерапевтических дозах(субоптимальных) артесуната и феррохина, близких к CI50, полученных для обоих испытуемых соединений, вводимых раздельно. Терапевтическая доза феррохина (тотальная выживаемость мышей, подвергавшихся лечению) является близкой к CI50. Для артесуната разница между терапевтической дозой и CI50 является большей и,таким образом, можно применять дозы, превышающие CI50. Таким образом, при исследовании комбинации было принято совместное и раздельное введение 3 мг/кг/день для феррохина и 6 мг/кг/день для артесуната в течение 4 дней. 3. Измерение противомалярийной активности in vivo комбинации феррохин/артесунат на штамме паразита Plasmodium vinckei vinckei. 3.1. Определение уровня паразитемии. Совместное и раздельное введение 3 мг/кг/день для феррохина и 6 мг/кг/день для артесуната в течение 4 дней осуществляли инфицированным мышам по сравнению с группой, не подвергавшейся лечению. В табл. II приведены средние уровни паразитемии (процентное содержание инфицированных эритроцитов), наблюдаемые на четвертый день после инфицирования. Таблица II Как следует из табл. II, совместное введение феррохина с дозой 3 мг/кг/день и артесуната с дозой 6 мг/кг/день в течение 4 дней позволяет значительно уменьшить паразитемию инфицированных животных по сравнению с раздельным введением обоих продуктов. 3.2. Определение смертности мышей. Каждый день, начиная с 5-го дня после инфицирования, подсчитывали число мертвых мышей для-4 012630 определения процента смертности (число мертвых мышей, отнесенное к числу мышей в соответствующей группе). Терапевтической дозой является первая доза, при которой все мыши в группе выживают. На чертеже показан процент выживаемости животных, начиная с пятого дня после инфицирования. Как следует из чертежа, срок выживаемости животных улучшается при совместном введении субоптимальных доз соединений (феррохин с дозой 3 мг/кг/день и артесунат с дозой 6 мг/кг/день в течение 4 дней) по сравнению с раздельным введением (феррохин с дозой 3 мг/кг/день или артесунат с дозой 6 мг/кг/день в течение 4 дней). Результаты, полученные in vivo на мышах, инфицированных Р. vinckei vinckei, ясно показывают отсутствие антагонизма между обоими действующими веществами и доказывают, что комбинация по настоящему изобретению артесуната (или производного артемизинина в общем случае) и феррохина обладает полезным эффектом для лечения малярии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Комбинация, содержащая в качестве действующих веществ феррохин в виде свободного основания, соли, гидрата или сольвата и производное артемизинина. 2. Комбинация по п.1, отличающаяся тем, что производное артемизинина представляет собой артесунат, артеэтер или артеметер. 3. Комбинация по любому из пп.1 или 2, отличающаяся тем, что производное артемизинина представляет собой артесунат или артеметер. 4. Комбинация по п.1, отличающаяся тем, что суточная доза феррохина находится в интервале от 50 до 1600 мг, предпочтительно в интервале от 200 до 1200 мг и предпочтительно в интервале от 400 до 800 мг для одного человека в день. 5. Комбинация по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что ежедневная доза производного артемизинина находится в интервале от 1 до 10 мг/кг/день, предпочтительно в интервале от 2 до 6 мг/кг/день и предпочтительно около 4 мг/кг/день. 6. Комбинация по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что она предназначена для введения в течение периода от 3 или от 4 дней последовательно. 7. Комбинация по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что каждое из действующих веществ предназначено для введения одновременно или последовательно. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективные дозы феррохина или фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата феррохина и по меньшей мере одного производного артемизинина, а также по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. 9. Фармацевтическая композиция по п.8, отличающаяся тем, что производное артемизинина представляет собой артесунат, артеэтер или артеметер. 10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.8 или 9, отличающаяся тем, что производное артемизинина представляет собой артесунат или артеметер. 11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.8-10, отличающаяся тем, что она адаптирована для введения перорально, ректально или в виде инъекции. 12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.8-11, отличающаяся тем, что она предназначена для лечения и/или профилактики малярии. 13. Применение комбинации по любому из пп.1-7 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики малярии. 14. Набор для лечения или предупреждения малярии, содержащий, с одной стороны, феррохин или соль, гидрат или сольват феррохина и, с другой стороны, по меньшей мере одно производное артемизинина, причем указанный феррохин и указанное производное артемизинина находятся в различных отделениях и предназначены для введения одновременно или последовательно.