Комбинация на основе производного камптотецина и комбретастатина

005400 В данной заявке устанавливается приоритет предварительных заявок на патент США 60/243341,поданной 27 октября 2000 г.,60/245582, поданной 6 ноября 2000 г., и 60/250138, поданной 1 декабря 2000 г. Настоящее изобретение относится к терапевтическим комбинациям, включающим эффективное количество 7-этил-10-[4-(1-пиперидино)-1-пиперидино]карбонилоксикамптотецина (СРТ-11) и эффективное количество производного стильбена, такого как комбретастатин, для лечения рака. Изобретение относится к лечению рака, особенно солидных опухолей, и в особенности немелкоклеточного рака легкого и колоректального рака, комбинациями производных камптотецина и других противоопухолевых препаратов, и использованию таких комбинаций для улучшенной терапии. Более конкретно, изобретение относится к противоопухолевой терапии комбинациями иринотекана(СРТ-11; Campto) и производного стильбена, такого как комбретастатин. Рак кишечника является главной причиной заболеваемости и смертности примерно в 300000 новых случаев и 200000 смертей в Европе и США каждый год (см. Р. Boyle, Some Recent Developments in thefor Colorectal Cancer, стр.126-127 в Management of Colorectal Cancer, Bleiberg H., Rougier P., Wilke H.D.,eds, (Martin Dunitz, London 1998). Хотя примерно 50% пациентов вылечивают одним хирургическим вмешательством, другая половина в конечном счете умирает вследствие метастазирования, которое включает примерно 25% пациентов,которые имеют проявления метастаз во время диагноза. Европейский патент ЕР 137145 описывает производные камптотецина формулы где, в частности, R1 представляет водород, галоген или алкил, Х представляет атом хлора или NR2R3, гдеR2 и R3, которые могут быть одинаковыми или различными, могут представлять атом водорода, необязательно замещенный алкильный радикал, необязательно замещенный карбоцикл или гетероцикл, или алкильные радикалы (необязательно замещенные), образующие с атомом азота, к которому они присоединены, гетероцикл, необязательно содержащий другой гетероатом, выбранный из О, S и/или NR4, причемR4 является атомом водорода или алкильным радикалом, и где группа Х-СО-O- находится в положении 9, 10 или 11 кольца А. Данные производные камптотецина являются противоопухолевыми средствами, которые ингибируют топоизомеразу I, среди которых иринотекан или СРТ-11, в котором Х-СО-O- представляет собой[4-(1-пиперидино)-1-пиперидино]карбонилокси, является действующим началом, которое особенно эффективно при терапии солидных опухолей, и в частности колоректального рака. Европейская заявка на патент ЕР 74256 также описывает другие производные камптотецина, которые также указываются в качестве противоопухолевых средств, в частности производные со структурой,аналогичной вышеприведенной структуре, и где Х-СО-O- заменен радикалом -X'R', для которого X' представляет О или S, а R' представляет атом водорода или алкильный или ацильный радикал. Также были описаны другие производные камптотецина, например, в патентах или заявках на патент ЕР 56692, ЕР 88642, ЕР 296612, ЕР 321122, ЕР 325247, ЕР 540099, ЕР 737686, WO 90/03169, WO 96/37496, WO 96/38146, WO 96/38449, WO 97/00876, US 7104894, JP 57116015, JP 57116074, JP 59005188,JP 60019790, JP 01249777, JP 01246287 и JP 9112070 или в Саnc. Res., 38 (1997) Abst. 1526 или 95 (Сан Диего - 12-16 апреля), Canc. Res., 55(3):603-609 (1995) или AFMC Int. Med. Chem. Symp. (1997) Abst. PB55 (Сеул - 27 июля - 1 августа). Обычно производные камптотецина вводят инъекцией, более конкретно внутривенно в форме стерильного раствора или эмульсии. Однако производные камптотецина также можно вводить орально в форме твердых или жидких композиций. Камптотецин является цитотоксичным алкалоидом, который обладает сильной противоопухолевой активностью. Однако в то время как производные камптотецина рассматриваются в качестве одних из наиболее эффективных веществ, обладающих противоопухолевой активностью по отношению к колоректальному раку, использование данных соединений в клинической терапии можно улучшить комбинацией с другими противоопухолевыми препаратами. Неожиданно было обнаружено, что комбинация производного камптотецина с производным стильбена является особенно эффективной при лечении многих солидных опухолей, включая колоректальный-1 005400 рак. Среди эффективных производных стильбена находится комбретастатин А-4 и производное данного соединения, которое будет называться просто комбретастатином. Оба данныx соединения показывают сильную активность в отношении ингибирования митоза, цитотоксичность и подавляют полимеризацию тубулина. Комбретастатин А-4 имеет следующую формулу: Комбретастатин по данному изобретению имеет следующую формулу: Данные комбретастатины растворимы в воде и могут использоваться в форме соли, примерами которой являются гидрохлорид, ацетат, фосфат, метансульфонат и аналогичные соединения. Получение производных стильбена, включая комбретастатин А-4, которые могут находиться в форме фармацевтически приемлемых солей, гидратов и сольватов, и изготовление оральной и/или парентеральной фармацевтической композиции, содержащей вышеуказанное соединение, их инертный(е) фармацевтически приемлемый(е) носитель(и) и/или разбавитель(и), описаны в патенте США 5525632. Вышеуказанный патент и патент США 5674906 описывают, что производные стильбена, включая комбретастатин, при использовании по отдельности in vivo имеют низкую токсичность и канцеростатическое действие. Недавно было обнаружено, что комбинация камптотецина и комбретастатина значительно снижает рост объема опухоли по сравнению с тем, что можно предсказать при введении каждого соединения по отдельности пораженным опухолью млекопитающим. Фактически, последовательная комбинация СРТ 11, производного камптотецина, и производного стильбена, комбретастатина, является более активной в более низкой дозе, чем наиболее высокая нетоксичная доза каждого препарата по отдельности для лечения рака, особенно аденокарциномы ободочной кишки. См. ниже табл. 4. Эффективность комбинации можно продемонстрировать определением ее терапевтического синергизма. Комбинация проявляет терапевтический синергизм, если она терапевтически превосходит один или другой из составляющих, используемых в их оптимальной дозе (Т.Н. Corbett et al., Cancer TreatmentReports, 66, 1187 (1982. Эффективность комбинации также можно продемонстрировать сравнением предельно допустимой дозы комбинации с предельно допустимой дозой каждого компонента по отдельности в данном исследовании. Данную эффективность можно определить количественно в виде lоg10 убитых клеток, который определяется по cледующей формуле:lоg10 убитых клеток=Т-С(дней)/3,32xTd где Т-С представляет время, требующееся клеткам для роста, которое представляет собой среднее время в днях, необходимое, чтобы опухоли в подвергаемой лечению группе (Т) достигли предварительно определенной величины (например, 1 г) и опухоли в контрольной группе (С) достигли такой же величины, и Тd представляет время в днях, необходимое, чтобы объем опухолей в контрольной группе удвоился (Т.Н.lоg10 убитых клеток больше или равен 0,7. Считается, что продукт очень активный, если lоg10 убитых клеток больше чем 2,8. В настоящем изобретении производное стильбена, такое как комбретастатин, в количестве, достаточном для ингибирования разрастания опухоли, можно использовать с производным камптотецина, таким как СРТ-11, и вводить млекопитающим, при необходимости лечения, облегчения или профилактики опухолей, особенно человеку, страдающему от разрастания опухолевых клеток, чтобы ингибировать рост опухолевых клеток. Ингибирование пролиферации опухолевых клеток означает ингибирование опухолевых клеток,чувствительных к терапии, включающее введение эффективного количества комбретастатина и эффективного количества СРТ-11 человеку, страдающему от пролиферации опухолевых клеток. В приемлемых случаях данное введение подавляет пролиферацию опухолевых клеток или уменьшает измеримый размер опухолей. В оптимальном случае опухоль подвергается полной регрессии. Как описано выше, нет особенных ограничений на способ введения противоопухолевых препаратов по настоящему изобретению млекопитающим, которых подвергают лечению. Они могут вводиться орально или парентерально, например внутривенным, подкожным или внутримышечным путем. Для-2 005400 быстрой эффективности предпочтительным является парентеральное введение комбретастатина, например внутривенное и подкожное введение, вливание и т.д. В способе введения фармацевтического препарата согласно настоящему изобретению комбретастатин можно вводить одновременно с СРТ-11 или оба компонента можно вводить последовательно в произвольном порядке. На практике способ и последовательность введения различаются в зависимости от препарата комбретастатина, препарата СРТ-11, индивидуальных клеток опухоли, которые подвергают лечению, организма, который подвергают терапии. Соответственно, оптимальный способ и последовательность введения комбретастатина и СРТ-11 могут быть выбраны специалистом в данной области с помощью обычных методик и информации, содержащейся в настоящем описании. Эффективное, ингибирующее пролиферацию опухоли, количество комбретастатина и камптотецина означает лечебную дозу, ингибирующую пролиферацию опухолевых клеток, чувствительных к введению, у человека, страдающего от пролиферации опухолевых клеток. С практической точки зрения, желательные лечебные дозы варьируются в зависимости от индивидуальных лекарственных форм используемого комбретастатина, индивидуальных лекарственных форм используемого СРТ-11, подвергаемых лечению индивидуальных опухолевых клеток и подвергаемого терапии индивидуального хозяина. Соответственно, оптимальные лечебные дозы для предварительно установленных данных состояний могут быть выбраны специалистами в данной области с помощью тестовых лечебных доз и информации, содержащейся в настоящем описании. Противоопухолевый препарат по настоящему изобретению представляет собой фармацевтический препарат, включающий, по меньшей мере, комбретастатин и соединение камптотецина, как описано выше, так что два активных ингредиента могут содержаться в фармацевтическом препарате в виде смеси. Однако два активных ингредиента по настоящему изобретению могут содержаться по отдельности в различных фармацевтических препаратах, чтобы использоваться последовательно и в комбинации. Отмечается, что такой фармацевтический препарат, содержащий другие препараты (третий и четвертый ингредиенты и так далее), например другие противоопухолевые средства, естественно может охватываться настоящим изобретением, в такой мере, пока в фармацевтическом препарате содержатся используемые в настоящем изобретении эффективные ингредиенты. Кроме того, является возможным, чтобы противоопухолевый препарат по настоящему изобретению содержал носители, разбавители и другие вещества,фармацевтически приемлемые для любых фармацевтических препаратов по настоящему изобретению(один фармацевтический препарат, содержащий оба ингредиента по настоящему изобретению, и отдельные фармацевтические препараты, каждый из которых содержит один из двух ингредиентов по отдельности, для использования в комбинации). В противоопухолевом(ых) препарате(ах) по настоящему изобретению при необходимости можно использовать подходящие фармацевтически приемлемые носители и разбавители, известные специалисту в области приготовления фармацевтических препаратов. Соответственно, противоопухолевый препарат по настоящему изобретению может применяться парентерально, как обсуждено выше. В данном случае противоопухолевый(е) препарат(ы) изготавливают различными способами, известными специалистам в данной области, в виде внутривенного вливания или инъекции вместе с фармацевтически приемлемыми носителями. Предпочтительно, фармацевтический препарат изготавливают общепринятым методом, например в виде стандартной лекарственной формы и в форме высушенной вымораживанием смеси двух эффективных ингредиентов, и повторным разбавлением водой или другой подходящей для вливания жидкости при введении. В каждой дозе фармацевтического препарата по настоящему изобретению можно объединять от 20 до 116,5 мг комбретастатина, предпочтительно от 36 до 60 мг и от 144 до 400 мг СРТ-11, предпочтительно от 240 до 400 мг СРТ-11. Физиологическую фармацевтическую эффективность фармацевтической композиции, используемой в качестве жидкости для инъекции или вливания, соответственно регулируют содержанием буфера, хорошо известного из уровня техники. Далее настоящее изобретение будет более детально объяснено со ссылкой к предпочтительным вариантам его осуществления. Необходимо отметить, что они даются только в качестве примеров и не предназначены для ограничения изобретения. Противоопухолевый эффект и тесты на безопасность Эффект комбинации СРТ-11 и комбретастатина оценивают на мышах с аденокарциономой ободочной кишки С 51. СРТ-11 дают орально со второго по пятый день, 4 раза в сутки, при различных уровнях дозы. Комбретастатин вводят внутривенно, 2 раза в сутки, с первого по пятый день. При комбинировании три различные дозы СРТ-11 вводят орально 2 раза в сутки со второго по пятый день и три различные дозы комбретастатина вводят внутривенно дважды в сутки с первого по пятый день. Результаты, полученные в исследовании препаратов СРТ-11 и комбретастатина по отдельности и в одновременно вводимой комбинации СРТ-11/комбретастатин, даны в следующей ниже табл. 1. Частичная реакция - число подвергнутых тестированию мышей, которые имели уменьшение объема опухоли,составляет, по меньшей мере, 50%; т.е. из 5 подвергнутых тестированию мышей 5 имели, по меньшей мере, частичную реакцию. Табл. 1 иллюстрирует влияние комбретастатина и СРТ-11 в виде даваемых по отдельности препаратов, введенных в их наиболее высоких нетоксичных дозах. Она также иллюстрирует, что, в случае, когда противоопухолевые соединения даются одновременно, показатель эффективности лечения увеличивается при пониженных дозах (45% от наиболее высокой нетоксичной дозы даваемых по отдельности препаратов). Таким образом, эффективная терапия может проводиться при пониженной токсичности. Табл. 2 иллюстрирует последовательное введение комбретастатина, после чего следует СРТ-11. Таблица 2 Последовательные комбинации комбретастатина (IV) с СРТ-11 (орально) Комбретастатин вводят первым. Комбретастатин - HNTD=116,5 мг/кг/инъекция - доза мг/кг/% HNTD; 60 (51%); 36 (31%); 21,6 (18%). Данные дозы по отдельности не вызывают регрессию. Когда комбретастатин вводят первым, наиболее эффективная последовательная комбинация составляет 60 мг/кг комбретастатина (51% HNTD), после чего следует 240 мг/кг СРТ-11 (60% HNTD). Данная комбинация приводит к логарифму убитых клеток 1,7 и частичной регрессии опухоли ободочной кишки 51 у всех 5 мышей, подвергнутых тестированию. Поэтому комбинация терапевтически превосходит каждый из препаратов по отдельности, используемых в их оптимальной дозе. В то время как комбретастатин при 51 и 31% от его наиболее высокой нетоксичной дозы (HNTD),после чего следовала наиболее высокая нетоксичная доза СРТ-11 (400 мг/кг), оказался токсичным для тестируемых животных, только 18% комбретастатина в комбинации с наиболее высокой нетоксичной дозой СРТ-11 приводит к lоg10 убитых клеток 1,4 и частичной реакции у всех 5 тестируемых мышей. Данный lоg10 убитых клеток выше, чем log убитых клеток каждого препарата, соответственно, и демонстрирует терапевтическую эффективность данной комбинации. Неожиданно было обнаружено, что, когда вводят 18% комбретастатина, после чего следует СРТ-11 при 60% от наиболее высокой нетоксичной дозы, логарифм убитых клеток остается таким же (1,4) и показывает явную эффективность. Приведенная ниже табл. 3 показывает, что последовательное введение сначала СРТ-11 при его наиболее высокой нетоксичной дозе (400 мг/кг), после чего следует 36 мг/кг комбретастатина (31% от наиболее высокой нетоксичной дозы), дает lоg10 убитых клеток, равный 1,9. Вновь lоg10 убитых клеток наиболее высокой нетоксичной дозы как СРТ-11, так и комбретастатина в виде препаратов, вводимых по отдельности, составлял 1,1 и 1,3, соответственно, показывая, что данная комбинация СРТ-11, за которым следует комбретастатин, обладает терапевтическим синергизмом. Таблица 3 Последовательные комбинации комбретастатина (IV) с СРТ-11 (орально)-4 005400 СРТ-11 вводят первым. 2 Частичная реакция - количество подвергнутых испытанию мышей, которые имели снижение объема опухоли,равное, по меньшей мере, 50%. Комбретастатин, вводимый внутривенно, и СРТ-11, вводимый орально, испытывают несколькими различными схемами введения, как сообщается в табл. 4. При использовании в виде одного препарата комбретастатин вводят 2 раза в сутки в течение 5 последовательных дней. При введении одного СРТ-11 он дается 1 раз в сутки в течение 4 последовательных дней. При последовательном введении используют две схемы введения. Когда первым дается комбретастатин, его вводят на первый день, после чего водят СРТ-11 1 раз в сутки на второй-пятый дни. Когда первым соединением при последовательном введении является СРТ-11, его вводят 1 раз в сутки на первый-четвертый день, после чего следует комбретастатин на пятый день. Таблица 4 Комбинации комбретастатина (IV) с СРТ-11 (орально) при наиболее высокой нетоксичной дозе (HNTD) Частичная реакция - количество подвергнутых испытанию мышей, которые имели снижение объема опухоли,равное, по меньшей мере, 50%. Приведенная выше табл. 4 показывает, что последовательное введение комбретастатина и СРТ-11 в любом порядке, по существу, более эффективно, чем введение любого из соединений, используемого по отдельности, или при одновременной комбинации. Видно, что последовательная комбинация СРТ 11/комбретастатин является синергетически активной по отношению к аденокарциноме ободочной кишки. Кроме того, комбинация СРТ-11/комбретастатин является более активной при более низких дозах,чем наиболее высокие дозы СРТ-11, либо комбретастатина по отдельности. Данные тесты показывают, что комбретастатин и СРТ-11 могут вводиться различными путями так,чтобы получить максимальную эффективность соединений, когда они используются в комбинации. В результате, изобретение не ограничивается композициями, полученными физической комбинацией лекарственных препаратов, но также включает композиции, которые позволяют введение по отдельности,которое может быть одновременным или последовательным. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая комбинация, включающая эффективное количество 7-этил-10-[4-(1-пиперидино)-1-пиперидино]карбонилоксикамптотецина (СРТ-11) в комбинации с эффективным количеством комбретастатина для лечения солидных опухолей, где указанный комбретастатин имеет следующую формулу: 2. Комбинация по п.1, где указанная солидная опухоль является аденокарциномой ободочной кишки.