Средство, обладающее антиишемической, гипотензивной и антигипоксической активностью

1 Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается средств,влияющих на сердечно-сосудистую систему. Известны различные биологически активные соединения и их композиции, влияющие на сердечно-сосудистую систему. Описано средство [1], представляющее собой 3-метил-5[2-(3 трет.бутиламино-2-оксипропокси)феноксиметил]-1,2,4-оксадиазол, проявляющее антигипертензивную, антиаритмическую, коронарорасширяющую, антиишемическую и антиглаукоматозную активность. Его антиишемическая активность не велика, антигипоксическая активность не описана. Одним из широко применяемых средств,обладающих антиишемической активностью,является обзидан (анаприлин) [2]. Однако применение его ограничено у больных с обструктивными заболеваниями легких из-за бронхоспазматического эффекта и у больных с облитерирующими заболеваниями периферических сосудов из-за наличия у него отрицательного инотропного эффекта. Наиболее известным антигипоксическим средством является пирацетам [3]. Он оказывает положительное влияние на обменные процессы и кровообращение. Имеются данные [4] также и о его положительном действии у больных с ишемической болезнью сердца, но только в пожилом и старческом возрасте. Известно, что янтарная кислота и ее соли обладают адаптогенной способностью и оказывают антигипоксическое, антистрессовое и нейротропное действие, нормализуют энергетический обмен. Известно также кардиотропное и противоишемическое действие янтарной кислоты [5]. Гипотензивное действие янтарной кислоты не описано. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является N-карбамоилметил-4-фенил 2-пирролидон, проявляющий гипотензивную [6] и антигипоксическую активность [7, 8]. Его антиишемическая активность не описана. Задача изобретения заключается в создании эффективного малотоксичного лекарственного средства, обладающего антиишемической,гипотензивной и антигипоксической активностью, расширении арсенала сердечно-сосудистых средств. Поставленная задача реализуется предлагаемым средством, включающим N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон и двух- или трехосновную карбоновую кислоту. В качестве двухосновной кислоты используют или щавелевую, или яблочную, или янтарную кислоту, в качестве трехосновной - лимонную. Причем соотношение N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон (КФП):карбоновая кислота составляет 1:(0,5-2) моль. Изобретение иллюстрируется следующими примерами. 2 Пример 1. В двухгорлую колбу, снабженную мешалкой и обратным холодильником, помещают 60-100 мл спирта (этилового, метилового, изопропилового), затем вносят соответствующие количества N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидона (КФП) и карбоновой кислоты. Смесь нагревают до кипения, затем охлаждают до комнатной температуры и оставляют при перемешивании на 1-1,5 ч. Выпавший кристаллический осадок отделяют и сушат. Количества компонентов приведены в табл. 1. Пример 2. В шаровую мельницу загружают соответствующие количества КФП и карбоновой кислоты. Смесь тщательно перемешивают в течение 0,5-1 ч, затем выгружают полученный продукт. Количества компонентов такие же, как в примере 1. Таблица 1. Соотношение N-карбамоилметил-4-фенил-2 пирролидона (КФП) и карбоновых кислот Щавелевая Янтарная Яблочная Лимонная КФП,кислота,кислота,кислота,кислота,г (моль) г (моль) г (моль) г (моль) г (моль) 10,9 (0,05) 9,0 (0,1) 11,8 (0,1) 13,4 (0,1) 21,0 (0,1) 21,8 (0,1) 9,0 (0,1) 11,8 (0,1) 13,4 (0,1) 21,0 (0,1) 32,7 (0,15) 9,0 (0,1) 11,8 (0,1) 13,4 (0,1) 21,0 (0,1) 43,6 (0,2) 9,0 (0,1) 11,8 (0,1) 13,4 (0,1) 21,0 (0,1) Выход во всех примерах количественный. Отношение КФП:карбоновая кислота равно 1 моль:(0,5-2). Все перечисленные ниже композиции были изучены в опытах на животных в моделях на антиишемическую, гипотензивную и антигипоксическую активность.N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон+лимонная кислота (КФП-Л) Антиишемическая активность КФП и предлагаемых средств Антиишемическое действие изучали в модели кратковременной ишемии, вызванной окклюзией нисходящей ветви левой коронарной артерии (ОНВЛК) на границе верхней и средней трети у кошек и у крыс (для КФП). Эффект препаратов оценивался по их влиянию на динамику суммарной величины подъема сегмента ST эпикардиальной электрограммы, регистрируемой с трех точек поверхности сердца, расположенных в зоне ишемии, на границе ишемии и интактной зоны, интактном участке, что отражает функциональное состояние очага ишемии. В качестве препарата сравнения использовали обзидан. 3 КФП вводили в/брюшино в дозе 50 мг/кг за 30 мин до ОНВЛКА, морфометрическим методом исследовали миокард животных, определяя площадь зоны некроза, зоны ишемии и совокупной зоны поражения (некроз+ишемия)(при введении физ. раствора за 10 мин до ОНВЛКА и обзидана в дозе 0,5 мг/кг за 30 мин до ОНВЛКА). Результаты исследования представлены в табл. 2. Таблица 2. Результаты исследований по влиянию КФП на зону поражения миокарда при экспериментальном инфаркте у крыс, вызванном ОНВЛКА Площадь зо- Площадь зо- Соотношение Площадь зо- Соотношение Площадь зоны СоотношеГруппа ны миокарда, ны ишемии, зона ишемии/ ны некроза, зона некроза/ поражения, ние некроз/ мм 2 миокард мм 2 миокард мм 2 ишемия мм 2 Физ. р-р 485,974,87 233,0911,34 0,4790,022 36,005,84 0,0740,012 269,099,07 0,1650,036 Обзидан 481,138,12 175,214,01 0,3650,009 28,484,08 0,0590,009 203,686,08 0,1630,024 КФП 492,554,85 163,337,84 0,3320,017 19,216,35 0,0390,013 182,5312,16 0,1130,036- Различия достоверны по сравнению с группой, получавшей физиологический раствор. Эти результаты показывают, что КПФ обладает четко выраженной антиишемической активностью, которая превосходит таковую обзидана. Исследуемые вещества в дозе 50 мг/кг и препарат сравнения - обзидан в дозе 0,25 мг/кг вводили за 5 мин до ОНВЛК. Во всех группах исследованных веществ выявлено достоверное уменьшение суммарной величины подъема сегмента ST. Наибольший эффект отмечался при введении КФП-Щ, введение которого вызывало почти 50% снижение суммарной величины подъема сегмента ST к пятой минуте после ОНВЛК. Данный эффект превышал таковой у обзидана. Результаты представлены в табл. 3. Таблица 3. Влияние предлагаемых средств на суммарную величину подъема сегмента ST у кошек после ОНВЛК Название Время после ОНВЛК, мин Время после снятия ОНВЛК, мин Исходно препарата 0,5 1 3 5 0,5 1 3 5 Физ. р-р 1,70,4 3,50,8 3,61,1 4,80,8 4,91 4,11 3,60,6 2,50,9 2,41 1,90,4 1,90,6 2,50,6 2,40,6 1,90,5 1,70,8 1,40,5 1,20,5 КФП-Щ 1,70,6 Таким образом, из приведенных данных видно, что все предлагаемые средства проявляют выраженную антиишемическую активность,превышающую такую активность КФП и обзидана. Гипотензивная активность Ранее было показано [6], что КФП проявляет гипотензивную активность в различных видах артериальной гипертензии, что подтверждается следующими данными. В опытах на наркотизированных и ненаркотизированных кошках КФП в дозах 25-50 мг/кг снижал артериальное давление (АД) на 15-20%,максимум эффекта - на 60-90 мин. При этом снижение общего периферического сопротивления (ОПС) на 267,1% и увеличение минутного объема крови (МОК) на 14,93,8%. Метод определения МОК - терморазведение по Fegler (1954) в модификации М.И. Гуревича (1967), Д.Е. Ванькова и Ю.И. Цибина (1973). Все предлагаемые средства в экспериментах на кошках проявили отчетливый гипотензивный эффект, наибольшую активность пока зала композиция КФП-ЯН. Препарат КФП-ЯН в экспериментах на кошках дает отчетливый гипотензивный эффект (в дозе 50 мг/кг в/венно снижение артериального давления (АД) на 18-20%, максимум эффекта на 60-90 мин, снижение общего периферического сопротивления на 38%) и снижает АД (на 28,2%) и ЧСС (на 15%) при введении в желудочки головного мозга крыс в дозе 10-500 мкг, что свидетельствует о его влиянии на центральные механизмы регуляции кровообращения. Реализация данного эффекта, вероятно, происходит при участии ГАМК-ергической (подавление гипотензивного действия КФП-ЯН бикукулином и пикротоксином) и норадренергической (подавление эффекта фентоламином, 2-адреноблокатором йохимбином и предварительным введением резерпина) систем мозга. При почечной (25 кошек), надпочечниково-регенеративной (25 кошек) и нейрогенной 5 снижение АД за счет уменьшения общего периферического сопротивления (ОПС) при одновременном увеличении сердечного выброса. Прекращение лечения не вызывало синдрома отмены (табл. 4). Таблица 4.Гипотензивный эффект КФП-ЯН при различных моделях артериальной гипертензии (р 0,05) Снижение АД (%) Снижение ОПС (%) Непоср. Через Через Вид АГ после 1 нед. по- на протя 2 нед. жении введ-ия сле отмелечения преп-та ны преп-та лечения Надпочечниково-регене 23,3 25,3 25,2 32,5 ративная Нейрогенная 21,1 28,1 23,2 39,4 Почечная 1,3 28,3 28,2 39,4 Композиции КФП-Л, КФП-Щ и КФП-ЯБ также показали отчетливый гипотензивный эффект, сравнимый с эффектом КФП-ЯН и превышающий такой у КФП. Антигипоксическая активность Антигипоксическая активность КФП была изучена на модели нормобарической гипоксической гипоксии [8] на мышах-самцах массой 20-30 г. Защитный эффект оценивался по продолжительности жизни животных, КФП увеличивал продолжительность жизни мышей в гермокамере, т.е. он в условиях нормобарической гипоксической гипоксии обладает антигипокси 002379 6 ческим действием, в отличие от пирацетама,который не проявляет таких свойств. Антигипоксическая активность предлагаемых средств была изучена в условиях острой гипоксической гипоксии, чтобы более глубоко и детально оценить антигипоксическое действие. Все предлагаемые средства проявили выраженную антигипоксическую активность, более высокую, чем у КФП. Наиболее активной была композиция КФП-ЯН. В условиях острой гипоксической гипоксии КФП-ЯН, вводимый крысам внутрибрюшинно, препятствует снижению активности ферментов глутатионовой антиоксидантной системы(на 9,4%), Na+, К+ - АТФ-азы (на 24,9%) и оказывает депримирующее действие на активность лизосомальных ферментов (катепсина D и-глюкозидазы на 25 и 32,8%, соответственно,по сравнению с контрольной группой) и интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в миокарде крыс; в условиях ишемического повреждения миокарда и головного мозга (перевязка сонной артерии) КФП-ЯН(50 мг/кг, в/венно) вызывал значимое снижение диеновых конъюгатов, свободных жирных кислот и малонового диальдегида в миокарде и головном мозге по сравнению с контрольной группой, табл. 5 и 6. Таблица 5. Влияние КФП-ЯН на показатели ПОЛ и содержание энергетических субстратов при экспериментальной ишемии миокарда и головного мозга Экспериментальный инфаркт миоАТФ АДФ Сумма нуклеотидов АМФ карда Без лечения 33,3% 31,5% 23,9% 116,7% Миокард КФП-ЯН 40,0% 21,6% 26,8% 34,7% нд Без лечения 37,1% 26,5% 26,8% Головной мозг нд КФП-ЯН 30,0% 38,2% 31,1% Ишемия головного мозга АТФ АДФ Сумма нуклеотидов АМФ Без лечения 22,4% 22,2% 28,2% 83,0% Головной мозг нд КФП-ЯН 51,9% 31,8% 85,9% Прим:- увеличение,- уменьшение, нд - данные не достоверны;(р 0,05 по сравнению с данными до ишемии). Таблица 6.Снижение (%) содержания продуктов ПОЛ на фоне введения КФП-ЯН 50 мг/кг в/брюшинно при экспериментальной ишемии миокарда и головного мозга крыс Свободные Малоновый Диеновые жирные диальдегид, ммоль/л Продукты конъюгаты,кислоты,ПОЛ Головной мкмоль/л Миокард мкмоль/л мозг Ишемия 18,8 23,9 23,9 47,6 миокарда Ишемия 33,9 29,3 29,3 37,5 головного мозга При исследовании потребления миокардом кислорода манометрическим методом Варбурга показано, что у крыс в условиях острой гипоксической гипоксии привентивное введение КФП-ЯН в/брюшинно ведет к увеличению потребления кислорода миокардом, печенью и полушариями головного мозга. Следовательно, КФП-ЯН препятствует формированию кислородного долга в исследуемых органах, способствуя извлечению тканями животных из крови необходимого количества кислорода. Таблица 7. Влияние КФП-ЯН (50 мг/кг, в/брюшинно) и кордарона(10 мг/кг, в/брюшинно) на потребление кислорода миокардом,печенью и большими полушариями головного мозга Потребление кислорода(мкл/ч/мг сухого вещества) Группа Миокард Печень Головной мозг Исходное 4,80,2 4,30,1 6,00,1 состояние КФП-ЯН 4,80,1 4,40,2 6,10,1 Кордарон 4,70,2 4,30,2 5,90,2 Гипоксическая 6,00,1 5,30,2 7,20,1 гипоксия (ГГ) КФП-ЯН+ГГ 5,00,2 4,50,1 6,30,2 Кордарон+ГГ 5,00,1 4,40,2 5,80,2- Данные достоверны относительно гипоксической гипоксии (р 0.05). КФП-ЯН,предварительно введенный в/брюшинно, предотвращает развитие в миокарде крыс изменений, связанных с повреждающим действием острой гипоксической гипоксии на ультраструктурную организацию гематопаренхиматозного барьера и митохондриального аппарата (данные патаморфологических исследований). Аналогичным действием обладали и остальные предлагаемые средства. Результаты изучения острой токсичности показали, что у всех предлагаемых средствLD 50 при внутрибрюшинном введении мышам составляет 1050-1340 мг/кг (LD 50 КФП 1030 мг/кг). Предлагаемые средства малотоксичны, они могут быть использованы в любых подходящих лекарственных формах, содержащих эффективное количество предлагаемого средства и фармакологически приемлемые носители и/или наполнители. Таким образом, предлагаемые средства обладают антиишемической, гипотензивной и антигипоксической активностью, превышающей аналогичную активность N-карбамоилметил-4 фенил-2-пирролидон (КФП) и ряда известных лекарственных средств. Кроме того, наличие антиишемической активности в совокупности с гипотензивной и антигипоксической делает эти средства перспективными для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Литература 1. Патент РФ 1827067, А 61 К 31/41, БИ 19, 1994 г. 2. М.Д. Машковский. Лекарственные средства. Харьков: Торсинг, 1997, т.1, с.262-264. 3. Там же. с.109-111. 8 4. Л.А. Лещинский, Л.Г.Пименов, В.С. Федоров. Лечебное применение пирацетама у больных инфарктом миокарда//Кардиология,1987,2, с.46-49. 5. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве. Сборник научных статей. Пущино, 1997 г. 6. А.С. СССР 797219, БИ 21, 1995, А 61 К 31/41, С 07 Д 202/26. 7. Ю.Г. Бобков, И.С. Морозов, О.М. Глозман и др. Фармакологическая характеристика нового фенильного аналога пирацетама-4 фенилпирацетама.//Бюл.экспер.биологии и медицины. 1983 г, ХСУ, с.50-53. 8. Патент РФ 2050851. А 61 К 31/40, БИ 36,1995 г. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Средство, обладающее антиишемической, гипотензивной и антигипоксической активностью, включающее N-карбамоилметил-4 фенил-2-пирролидон, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит двух- или трехосновную карбоновую кислоту. 2. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве двухосновной кислоты оно содержит щавелевую, или яблочную, или янтарную кислоту. 3. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве трехосновной кислоты оно содержит лимонную кислоту. 4. Средство по пп.1-3, отличающееся тем,что отношение N-карбамоилметил-4-фенил-2 пирролидон:карбоновая кислота составляет 1:(0,5-2,0) моль.