Способ получения биологически активного препарата из крови крупного рогатого скота и фармацевтическая композиция на его основе с радиопротекторной, антигипоксической, иммуномоделирующей, ранозаживляющей и противогерпетической активностью

1 Изобретение относится к фармакологии и медицине, в частности к технологии получения биологически активных препаратов, и касается способа получения отечественного препарата,выделенного из крови крупного рогатого скота и проявляющего радиопротекторную, антигипоксическую, иммуномоделирующую, ранозаживляющую и противогерпетическую активность, и фармацевтическим композициям на его основе. Известен лекарственный препарат солкосерил, представляющий собой депротеинизированный экстракт, получаемый из крови крупного рогатого скота [I], который обладает свойством стимулировать репаративные процессы,нарушенные в связи с различными заболеваниями, например, ишемическими процессами,дистрофическими изменениями, вызванными хроническим лучевым поражением тканей, вялотекущими инфицированными ранами и т.д.,применяемый для лечения, в частности трофических язв, пролежней, ожогов и при пересадке кожи. Известен также лекарственный препарат актовегин депротеинизированный гемодериват из телячьей крови с низкомолекулярными пептидами и производными нуклеиновой кислоты,который применяется для лечения нарушений периферического кровообращения с трофическими поражениями, ожогов, лучевых поражений кожи, пролежней, поражений роговицы и конъюнктивы [2]. Препарат выпускается в виде раствора для внутривенного и внутримышечного введения, желе, крема, мази для наружного применения, глазного желе. Сырьем для получения действующего начала указанных препаратов служит кровь крупного рогатого скота, которую после предварительной обработки подвергают депротеинизации. Режимы технологического процесса получения указанных препаратов не описаны и являются предметом "ноу-хау" фирм производителей. Препараты-аналоги проявляют недостаточно выраженные противогерпетический и антигипоксический эффекты, а при их применении в терапевтической практике наблюдается образование келоидных рубцов. Известен способ получения препарата,стимулирующего клеточное дыхание, включающий дефибринирование и гемолиз телячьей крови с последующим отделением веществ многоступенчатой ультрафильтрацией и электродиализом [3]. Описанный способ позволяет получать полуфабрикат для производства препарата типа солкосерил. В технологическом отношении способ является трудоемким, требует использования сложной аппаратурной схемы и больших трудозатрат. Задачей настоящего изобретения является повышение специфических свойств лекарственного препарата, выделенного из крови крупного 2 рогатого скота, и получение фармацевтической композиции на его основе, используемой при лечении нарушений церебрального кровообращения, обмена веществ, нарушений периферического кровообращения, термических и лучевых поражений тканей, а также при лечении ран, язв и воспалительных процессов без образования келоидных рубцов. Поставленная задача решается тем, что,для получения биологически активного препарата из крови крупного рогатого скота в качестве сырья используют предварительно обработанную кровь эмбрионов коров, а отделение белковой фракции осуществляют путем ультрафильтрации с последовательным применением мембран, имеющих величины предела задержания по молекулярной массе 100 000 и 10 000, и далее собирают целевой продукт. В соответствии с изобретением биологически активный депротеинизированный экстракт крови эмбрионов коров представляет собой смесь неустановленного состава и содержит высокоактивные низкомолекулярные пептиды, аминокислоты,производные нуклеиновых кислот и другие компоненты. По внешнему виду целевой продукт представляет собой прозрачную жидкость светложелтого цвета со специфическим запахом. Подлинность определяют полярографическим методом и методом тонкослойной хроматографии. Сравнение предлагаемого способа с известными показывает, что общими существенными признаками для них являются подготовка сырья и отделение белковой фракции ультрафильтрацией. Однако, в отличие от аналогичных способов, в заявляемом способе в качестве сырья используют кровь эмбрионов коров, а ультрафильтрацию проводят, последовательно подключая модули с мембранами разной величины номинального молекулярно-массового предела задержания, что позволяет получить биологически активный препарат, обладающий ценным фармакологическим спектром действия на процесс заживления экспериментальных ран,иммунологический и гормональный статус. Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Забор крови эмбрионов коров проводят в соответствующие требованиям емкости объемом 10,0 л. Сырье замораживают до - (18+2)С. Затем кровь размораживают и сепарируют. Подготовленное сырье загружают в ультрафильтрационную установку и подвергают ультрафильтрации, последовательно подключая модули с мембранами разной величины номинального молекулярно-массового предела задержания(ММ 100 000, MM 10 000). В результате получают биологически активный препарат из депротеинизированного экстракта крови. Выход активной субстанции - 60-65%. Для приготовления лекарственной формы препарата, после контроля на соответствие тре 3 бованиям временной фармакопейной статьи(ВФС) к полученной активной субстанции добавляют стабилизатор (1% NaCl) и консервант(0,02 - 0,1%). Затем полученный целевой биологически активный препарат стерильно фильтруют и разливают в ампулы по 2 мл, 5 мл или флаконы по 50 мл. Подлинность определяют полярографическим методом, который позволяет оценить способность препарата стимулировать дыхание клеток гепатоцитов в гомогенате ткани печени. Определение дыхательной активности гепатоцитов проводят на полярографе с помощью ячейки со встроенным электродом Кларка закрытого типа. Ускорение дыхания должно быть не менее 30% при внесении в полярографическую ячейку 100 мкл заявляемого препарата. Вторым методом определения подлинности выделенного продукта является метод тонкослойной хроматографии, основанный на разной подвижности низкомолекулярных компонентов, входящих в состав препарата. На хроматограмме выявляются 4 основных пятна: Кf,1 = 0,0750,015Kf,4 =0,4900,050 Фармакологическое действие препаратов на основе депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров основано на способности улучшать аэробный энергообмен клетки. Препарат повышает поглощение и утилизацию кислорода, а также транспорт и утилизацию глюкозы, увеличивает резервы АТФ, активизирует естественные процессы ранозаживления и регенерации. Объектом изобретения является также фармацевтическая композиция с радиопротекторной, антигипоксической, иммуномоделирующей, ранозаживляющей и противогерпетической активностью, содержащая терапевтически эффективное количество биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови и, по меньшей мере, один нетоксичный инертный фармацевтически приемлемый носитель. Предлагаемая фармацевтическая композиция может представлять собой любую стандартную лекарственную форму, такую как, например, раствор, гель, суппозиторий, которые изготавливают с применением инертных нетоксичных фармацевтически пригодных растворителей или носителей. При этом биологически активный препарат должен содержаться в терапевтически эффективном количестве, как правило, в концентрации 0,4 -99,9 % от веса всей смеси. Фармацевтическая композиция может также содержать и другие активные вещества. Получение фармацевтической композиции осуществляется известными способами, например,при смешении, перемешивании, суспендирова 000633 4 нии, диспергировании, эмульгировании и тому подобных операциях биологически активного препарата с фармацевтически приемлемыми веществами и в переработке в лекарственные формы для различных способов введения. Нижеследующие примеры иллюстрируют,но не ограничивают настоящее изобретение. Пример 1. Проводили забор крови эмбрионов коров в соответствии с требованиями емкости объемом 10,0 л. Емкости с кровью помещали в морозильник и замораживали до температуры - (18+2)С. Затем кровь размораживали и сепарировали. Подготовленное сырье загружали в ультрафильтрационную установку и, последовательно подключая модули с мембранами разной величины номинального молекулярно-массового предела задержания (ММ 100000, MM 10000),получали биологически активный препарат из депротеинизированного экстракта крови. Выход активной субстанции - 60-65%. После контроля на соответствие требованиям временной фармакопейной статьи к полученной субстанции добавляли стабилизатор (1%NaCl) и консервант (0,02-0,1%). Целевой биологически активный препарат стерильно фильтровали и разливали в ампулы по 2 мл, 5 мл или флаконы по 50 мл. В соответствии с изобретением приводятся также примеры фармацевтической композиции в виде различных лекарственных форм, полученных известными способами. Препарат для инъекций Состав. В 100 мл препарата содержится: 1. Натрия хлорида - 0,5 - 1 г; 2. Метилового эфира п-оксибензойной кислоты - 0,02- 0,1 г; 3. Биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров - до 100 мл. Описание. Прозрачная жидкость желтоватого цвета со специфическим запахом. Гель Состав. В 100 г препарата содержится: 1. Биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров - 0,4 г; 2. Натрий карбоксиметилцеллюлозы очищенный 100 %, - 4,5 г; 3. Глицерина - 18 г; 4. Метилового эфира п-оксибензойной кислоты - 0,2 г; 5. Спирта этилового - 4 мл; 6. Воды для инъекций - до 100 г. Описание. Гель представляет собой однородную массу желтоватого цвета со специфическим запахом. Супозиторий Состав 1. 100 г препарата содержит: 5 1. Биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров (по сухому весу) - 2,5 г; 2. Масло какао - 30 г; 3. Кулинарный жир - 52,5 г; 4. Парафин нефтяной - 15 г; Состав 2. 1. Биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров (по сухому весу) - 2,5 г; 2. Желатин медицинский -12 г; 3. Глицерин - 60 г; 4. Вода - до 100 г; Описание: цилиндрической с заостренным концом формы с максимальным диаметром 1,5 см, желтоватого цвета со специфическим запахом. Глазные капли Состав 1. В 100 мл препарата должно содержаться: 1. Метилового эфира п-оксибензойной кислоты - 1 г (нипагин); 2. Биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров - до 100 г; Состав 2. В 100 мл препарата: 1. Натрия сукцината - 0,1 г; 2. Цитохрома - 0,05 г; 3. Аденозина - 0, 2 г; 4. Метилового эфира п-оксибензойной кислоты - 0,1 г (нипагин); 5. Биологически активного препарата из депротеинизированного экстракта крови эмбрионов коров - до 100 мл; Описание: прозрачная жидкость краснокоричневого цвета. Для оценки радиопротекторных свойств препарата выполнены экспериментальные исследования по изучению возможностей биологической противолучевой защиты организма лабораторных животных. Работа выполнялась на 160 белых беспородных крысах-самках/весом 150-170 г. Острая лучевая болезнь у животных создавалась путем однократного тотального равномерного облучения на ЛУЭ-25 (20 МэВ). Учитывая, что между величиной поглощенной дозы жизненно важными органами или системами и средней продолжительностью жизни (СПЖ) существует строгая зависимость, животные были облучены в дозах, вызывающих гибель костного мозга (8 Гр) или необратимое поражение желудочнокишечного тракта (10 Гр). Эксперименты выполнены в двух сериях опытов по 4 группы в каждой. Число животных в каждой группе - 20. Препарат вводился внутрибрюшинно, по 0,5 мл/100 г массы крысы при следующих временных интервалах: 1 серия (8 Гр) 1 гр. - только облучение (контроль); 6 2 гр. - препарат в течение 5 дней + 8 Гр; 3 гр. - 8 Гр + препарат, ежедневно до дня гибели животного; 4 гр. - препарат в течение 5 дней + 8 Гр + препарат до дня гибели животного. 2 серия (10 Гр) 1 гр. - только облучение (контроль); 2 гр. - препарат в течение 5 дней +10 Гр; 3 гр. -10 Гр + препарат ежедневно, до дня гибели животного; 4 гр. - препарат в течение 5 дней + 10 Гр + препарат до дня гибели животного. Критерий оценки: средняя продолжительность жизни павших животных и процент излеченности. В табл. 1 представлены данные продолжительности жизни крыс после облучения в дозе 8 Гр. Таблица 1 Влияние "Препарата" на СПЖ и излеченность крыс при тотальном облучении в дозе 8 Гр 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа"П" +8 Гр 8 Гр+"П" П + 8 Гр+"П" Продолжительность жизни после облучения 3 6 4 8 8 8 5 9 8 9 7 10 8 9 9 10 9 10 9 11 9 10 9 11 9 10 10 11 10 11 10 12 10 11 10 13 10 12 11 14 10 12 11 14 11 13 12 17 11 17 13 19 11 18 17 21 11 23 20 25 14 26 29 29 14 29 32 32 17 17 21n=17 СПЖ павших животных после облучения 11,050,88 13,761,6 12,821,86 15,641,74 Излеченность 3 (15%) 3 (15%) 3 (15%) Р 0,05 по сравнению с контролем Анализ полученных данных показывает,что препарат обладает определенным радиопротекторным действием, наиболее выраженным при введении его животным до и после облучения (гр. 4). Средняя продолжительность жизни(СПЖ) в этой группе составила 15,64 суток (Р 0,05 по сравнению с контролем) . При этом следует отметить наличие 15% выживших животных во всех опытных группах. В табл. 2 представлены данные продолжительности жизни крыс подвергнутых тотальному облучению в дозе 10 Гр. При данной дозе облучения, вызывающей острую кишечную гибель крыс, наблюдается та же закономерность гибели животных как и при дозе 8 Гр. СПЖ 7 павших животных выше и в группе, где препарат вводился до и после облучения, менее выражен радиозащитный эффект при введении препарата за 5 дней до облучения (гр. 2) и совсем отсутствует при введении препарата после облучения (гр. 3). Таблица 2 Влияние "Препарата" на СПЖ и излеченность крыс при тотальном облучении в дозе 10 Гр 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа"П"+10 Гр 10 Гр+"П" "П" + 10 Гр+ "П" Продолжительность жизни после облучения, сутки 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 4 3 3 3 4 3 4 4 4 4 4 4 5 4 4 4 6 4 5 4 6 4 5 4 6 4 6 5 7 5 7 5 7 5 7 5 7 5 7 6 7 7 8 6 7 8 8 7 8 8 8 8 8 8 8 8 8 9 8 8 9 10 8 9 9 10 9 9 9 5,5+0,55 6,2+0,55 5,4+0,46 6,35+0,43 Полученные результаты исследований по изучению возможностей противолучевой защиты организма крыс с помощью полученного препарата из депротеинизированного экстракта крови позволяют утверждать, что данный препарат обладает существенным радиопротекторным действием с одновременным ослаблением непосредственных проявлений острого радиационного поражения организма при условии введения его до и после облучения. Для оценки антигипоксической активности полученного препарата были проведены эксперименты на белых крысах-самцах линии Вистар весом 180-200 г и 400-500 г. В опытах использовали дозы препарата 13,5 мг/кг, 27 мг/кг, 40,0 мг/кг. В табл.3 представлены данные по зависимости антигипоксического эффекта от времени введения препарата. Таблица 3 Влияние времени введения препарата на продолжительность жизни крыс при гипоксической гипоксии Время введения Продолжительность жизни (мин) Контроль Опыт За 1 час до подъема 17,01 24,93 За 2 часа до подъема 10,06 20,05 За 3 часа до подъема 15,8 14,7 Введение препарата за 20 мин до "подъема" животных вызывало увеличение продолжительности жизни крыс, в среднем на 39,1%, возрастание времени до потери позы при этом составляло 47,6%. 8 Введение препарата в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно крысам весом 180-220 г за 1 ч до гипоксии удлиняло время жизни животных на 47%, введение препарата за 2 ч до гипоксии -на 50%, и введение за 3 ч до "подъема" животным не оказывало никакого эффекта на устойчивость крыс к гипоксии. Хорошо известен тот факт, что скорость проникновения лекарственных препаратов и,вообще биологических субстратов через мембранные структуры клетки тесно связаны со старением организма. Проницаемость мембран с возрастом снижается и также уменьшается скорость поступления биоактивных веществ. Введение препарата крысам в возрасте 6-7 месяцев (400-500 г) в дозе 13,5 мг/кг и 40 мг/кг,соответственно, в отличие от молодых половозрелых крыс не вызывало эффекта повышения устойчивости к гипоксической гипоксии. Время жизни и в контроле, и в опыте было одинаковым и составляло, в среднем, 12-13 мин. Увеличение дозы препарата в 3 раза (45-50 мг/кг) вызывало повышение устойчивости крыс к гипоксии. Таким образом, можно сказать, что полученный препарат оказывает влияние на устойчивость животных к гипоксической гипоксии. Среднее увеличение продолжительности жизни в разных вариантах опыта при этом составило 40-50 %. Экспериментальные исследования по влиянию системного применения полученного предлагаемым способом препарата из депротеинизированного экстракта крови на процесс заживления экспериментальных ран, иммунологический и гормональный статус проведены на 115 белых крысах-самцах линии Вистар в возрасте 7 -7,5 месяцев. Животные были сформированы в следующие группы (табл.4). Таблица 4 Экспериментальные животные Группы Количество животных 1. Контроль + рана 10 2. Облучение + рана 12 3. Контроль + рана + препарат 9 4. Облучение + рана + препарат 12 5. Облучение + препарат 18 6. Контроль + препарат 18 7. Облучение 18 8. Биологический контроль 18 Животным 1-4 групп наносилась рана под легким эфирным наркозом путем ампутации кожного лоскута с правого бедра диаметром 1 см (площадь раны 78,54 кв.мм). Крыс 2 и 4 групп (за 12 ч до нанесения раны), а также 5 и 7 групп облучали в дозе 3,5 Гр на ИГУР (мощность дозы 4 рад/мин, ЛД 20/20). Животным 3, 4 и 5-ой группы вводился 1,0 мл препарата внутрмибрюшинно ежедневно в течение 6 дней до облучения. Седьмая инъекция проводилась за 2 9 ч до облучения. Лечение животных после нанесения раны, а также облучения проводили ежедневным смазыванием раны и введением 0,5 мл препарата. Группа "биологический контроль" представлена интактными животными, которые не подвергались никаким воздействиям. Контроль за общим состоянием животных проводили взвешиванием крыс на 7, 15 и 21 сутки после облучения. Динамику изменения массы тела оценивали путем сравнения с исходной массой каждого животного. Оценку иммунологического статуса животных проводили на 8, 14 и 21 сутки после облучения и введения препарата (6-я группа). Для иммунологических исследований применялись тесты, характеризующие количественный состав иммунокомпетентных клеток периферической крови, тимуса и костного мозга. В работе определялось процентное и абсолютное содержание лимфоцитов, Т-лимфоцитов, Т-хелперов и супрессоров, а также лимфоцитов, несущих Вфенотип. Для изучения концентративного содержания гормонов щитовидной железы трийодтиронина (Т 3) и тироксина (Т 4) использовали сыворотку крови животных 5-8 групп на 14 - 21 день от начала эксперимента. Количество Т 3 и Т 4 определяли с помощью наборов рио-Т 3-ПГ и рио-Т 4-ПГ, рекомендованных комиссией по реактивам Комитета по новой медицинской технике (протокол N 2 от 16.04.90). Концентрацию гормонов Т 3 и Т 4 определяли на счетчике CLINI-GAMMA 1272(ЛКБ, Финляндия). За состоянием регенерационных процессов у животных с нанесенными открытыми ранами наблюдали в течение 23-х дней. У крыс через день регистрировали диаметр и состояние раны и рассчитывали ее площадь. Влияние препарата на площадь кожной раны у подопытных крыс в мм представлено в табл. 5. Таблица 5 Влияние препарата на площадь кожной раны у подопытных 2 крыс, мм НеоблуОблучен- Введение Введение ченные ные крысы препарата препарата крысы необлуоблученченным ным крыкрысам сам 1 2 3 4 5 Исходные 78,5 78,5 78,5 78,5 данные Приведенные данные показывают, что предлагаемый биологически активный препарат обладает ценным фармакологическим спектром действия на процесс заживления экспериментальных ран, иммунологический и гормональный статус. Под влиянием препарата в периферической крови наблюдается снижение отрицательных эффектов ионизирующего облучения. У необлученных животных препарат способствует также увеличению в тимусе общего количества лимфоцитов, а также Т-мю и Т-гамма клеток. В костном мозге отмечается некоторый рост ИС и В-лимфоцитов у необлученных и, особенно,облученных крыс. Введение препарата не вызывает изменений в синтезе гормонов щитовидной железы. Отмечено положительное влияние препарата на заживление кожной раны. Свое влияние он оказывает у необлученных и, особенно, у облученных животных. В последнем случае полное заживление раны наступило у всех крыс. В процессе заживления у этой группы животных не наблюдались нагноительные процессы. Экспериментальные исследования антивирусных свойств и терапевтической эффективности препарата при различных проявлениях герпетической инфекции, вызванной вирусом простого герпеса (ВПГ), проведены на моделях экспериментального герпетического менингоэнцефалита (ЭГМЭ) и генерализованной герпетической инфекции (ЭГТИ) у мышей, герпетического кератоконъюнктивита (ЭГКК) у морских свинок. В работе использованы белые аут 11 бредные мыши массой 6-8 г и морские свинки массой 200-400 г. Животных заражали ВПГ 1 типа (штамм Сl, титр 10 ЛД 50/0,03). При парентеральном внутрибрюшинном введении животным (1 раз в сутки в течение 7-9 суток) препарат использовали в концентрациях 20 мг/кг массы тела животного, что составляло 1/100 от максимальной дозы для мышей при изучении острой токсичности. Лечение начинали через 24 ч после заражения. Животные контрольной (нелеченной) группы не получали препарата. Оценка эффективности препарата проводилась по стандартной методике. При местном применении в виде инстилляций в глаз(по 2 капли 5 раз в сутки) использовали свежеприготовленный раствор препарата с концентрацией 20 мг/мл. В качестве антивирусного референс-препарата использовали растворимый аналог фуравир (50 мг/мл). Лечение ЭГКК начинали через 3 суток после заражения, когда у морских свинок развивалась яркая клиническая картина заболевания, и продолжали в течение 89 суток. Выраженность клинических признаков кератоконъюнктивита оценивали по четырехбальной системе. Для оценки тяжести поражения органа зрения использовалась клиническая градуировка повреждений. Всем животным производилась тщательная биомикроскопия в течение всего эксперимента, морских свинок осматривали каждые 3-4 дня, применяя флюоресцеиновый тест. Результаты изучения терапевтической эффективности препарата при ЭГКК у морских свинок представлены на фиг. 1. Как видно из представленных данных, полученный препарат оказывает определенное терапевтическое действие при лечении ЭГКК. При этом местное применение препарата более эффективно, чем парентеральные инъекции. Местное применение препарата в течение 8-9 дней сокращало продолжительность заболевания на 3 суток и существенно снижало тяжесть проявлений герпетического кератоконъюктивита (особенно во время инстилляций препарата). В то же время по антивирусному действию и терапевтической эффективности исследуемый препарат уступает водорастворимому аналогу фуравиру, который в настоящее время является наиболее эффективным антигерпетическим химиопрепаратом. Результаты использования предлагаемого препарата для лечения ЭГМЭ и ЭГТИ у мышей представлены в таблице 6. 12 Таблица 6 Результаты изучения терапевтической эффективности "Препарата" на моделях ЭГМЭ и Э 1 ТИ у мышей Мо Препарат Процент пав- Средняя продолжительп(доза) ших животных ность жизни На 14 На 21 Павших Всех Всех день на- день живот- живот- животблюнаблю- ных на ных на ных на дения дения 14 день 14 день 21 день ЭГМЭ Препарат Полученные данные свидетельствуют, что внутрибрюшинное введение препарата снижает летальность мышей от ЭГМЭ в первые 2 недели после заражения на 60% и 80%, соответственно,и на 30% и 40 % в конце эксперимента (через 21 день после заражения). При этом четко видно,что, в сравнении с фуравиром, исследуемый препарат оказывает более выраженное защитное и терапевтическое действие в первые 14 дней после заражения. У животных, получавших препарат, не только летальность ниже, чем у животных, леченных фуравиром, но и средняя продолжительность жизни (как на павших, так и на всех животных) существенно больше. Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый препарат как при местном, так и при парентеральном введении оказывает определенное антивирусное действие (возможно, за счет интерфероногенной активности) и характеризуется достаточно выраженной терапевтической эффективностью при таких наиболее тяжелых формах герпетической патологии, как менингоэнцефалит и генерализованная инфекция. Полученные экспериментальные данные позволяют предположить целесообразность использования препарата в составе комплексной этиопатогенетической терапии герпетического энцефалита и генерализованного герпеса. Исследования, проведенные с целью установления характера и выраженности повреждающего действия препарата, полученного заявляемым способом, на организм экспериментальных животных и оценки его безопасности показали следующее (табл.7). Таблица 7 Изучение острой токсичности "Препарата" при введении в брюшинную полость Исход В зависимости от пола В целом Количество Вид Доза препаСамцы Самки Выжило,Погибло,животных в животного рата (мг/кг) абс.число (%) абс.число (%) Выжило,Погибло,Выжило,Погибло,группе абс. число абс.число абс. число абс.число Во-первых, при изучении острой токсичности установлено, что препарат обладает низкой токсичностью (ЛД 450 0 определить не удалось); максимальная доза, которая была введена мышам и крысам, составляла соответственно 2000 мг/кг и 4500 мг/кг. Во-вторых, при изучении препарата в хроническом эксперименте при его ежедневном внутривенном введении в течение 13 недель (в дозах 300, 60 и 12 мг/кг) не выявлено каких-либо существенных функциональных и структурных нарушений со стороны жизненно важных систем организма животных. Выявленные в единичных случаях отклонения некоторых биохимических и физиологических показателей не имели характера закономерностей и, очевидно, обусловлены адаптационной реакцией организма подопытных животных на введение препарата, условиями содержания и кормления. В-третьих, при изучении ряда специфических видов токсичности установлено,что препарат не обладает мутагенным, кожнораздражающим действием, а также не оказывает влияния на гуморальный иммунный ответ. Анализ результатов, полученных при проведении токсикологического изучения заявляемого препарата, позволяет сделать заключение о том, что препарат характеризуется низкой токсичностью и в изученных концентрациях является безвредным для организма подопытных животных. В процессе исследования препарата не выявлены какие-либо побочные эффекты. Заявленный способ обеспечивает получение целевого продукта, характеризующегося высокой биологической активностью и высоким выходом конечного продукта. ботку крови и отделение белковой фракции,отличающийся тем, что для получения препарата используют кровь эмбрионов коровы, а отделение белковой фракции осуществляют путем ультрафильтрации с последовательным применением мембран, имеющих величины предела задержания по молекулярной массе 100 000 и 10 000, и далее собирают целевой продукт. 2. Фармацевтическая композиция с радиопротекторной, антигипоксической, иммуномоделирующей, ранозаживляющей и противогерпетической активностью, содержащая в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество препарата, полученного в соответствии с п.1 формулы, и, по крайней мере, один нетоксичный фармацевтически приемлемый носитель. Использованные источники информации 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Вильнюс, 1993, ч. 2, с. 139. 2. Регистр лекарственных средств России. М., 1993, с. 159-161. 3. Патент СССР 1748637, А 61 К 35/14,1992. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения биологически активного препарата из крови крупного рогатого скота, предусматривающий предварительную обра Фиг. 1