Гетероарильные производные аминогуанидинов и алкоксигуанидинов (варианты), способ их получения и их применение в качестве ингибиторов протеаз

1 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к новым соединениям, которые проявляют активность ингибиторов протеолитических ферментов, и, в частности, к новому классу ингибиторов тромбина. Уровень техники Протеазами называются ферменты, которые расщепляют белки по одной специфической пептидной связи. Протеазы принято подразделять на четыре основных класса: сериновые,тиоловые или цистеиновые, кислые или аспарагиновые и металлопротеазы (статья Cuypers и соавт. в журнале J. Biol. Chem. 257:7086 (1982. Протеазы играют важную роль в реализации ряда биологических функций, таких как пищеварение, образование и растворение сгустков крови, воспроизведение и иммунный ответ на чужеродные клетки и организмы. Аберрантный(нарушенный) протеолиз связан с рядом болезненных состояний у человека и других млекопитающих. Протеазы из нейтрофильных лейкоцитов человека - эластаза и катепсин G принимают участие в болезненных состояниях, характеризующихся разрушением ткани. К таким болезням относятся эмфизема, ревматоидный артрит, язва роговицы и гломерулярный нефрит(книга Barret "Enzyme Inhibitors as Drugs" под редакцией Sandler, University Park Press, Baltimore, (1980. Другие протеазы, такие как плазмин, эстераза С-1, конвертаза С-3, урокиназа,активатор плазминогена, акрозин и калликреины играют ключевую роль в проявлении нормальных функций в организме млекопитающих. Во многих случаях при терапевтическом лечении млекопитающих представляется целесообразным блокирование функционирования одного или более протеолитических ферментов. Сериновые протеазы включают такие ферменты, как эластаза (лейкоцитов человека), катепсин G, плазмин, эстераза С-1, конвертаза С 3, урокиназа, активатор плазминогена, акрозин,химотрипсин, трипсин, тромбин, фактор Ха и калликреины. Эластаза лейкоцитов человека высвобождается из полиморфноядерных лейкоцитов в очагах воспаления и, таким образом, вносит вклад в возникновение ряда болезненных состояний. Катепсин G является другой сериновой протеазой нейтрофильных лейкоцитов человека. Можно ожидать, что соединения, обладающие ингибиторной активностью по отношению к указанным ферментам, будут оказывать противовоспалительное действие, которое можно использовать при лечении подагры, ревматоидного артрита и других воспалительных заболеваний, а также для лечения эмфиземы. Химотрипсин и трипсин являются пищеварительными ферментами. Ингибиторы этих ферментов используют при лечении панкреатита. 2 Ингибиторы урокиназы и активатора плазминогена используют при лечении болезней, сопровождающихся избыточным ростом клеток, таких как доброкачественная гипертрофия простаты, карцинома простаты и псориаз. Сериновая протеаза тромбин играет центральную роль в процессах гемостаза и тромбоза, а также является многофункциональным белком, оказывающим ряд воздействий на тромбоциты, эндотелиальные клетки, клетки гладкой мускулатуры, лейкоциты, сердце и нейроны. Активация каскада реакций свертывания крови по внутреннему пути (контактная активация) или по внешнему пути (активация путем экспозиции плазмы на неэндотелиальной поверхности, путем повреждения клеток сосудов или путем выделения тканевого фактора) приводит к серии биохимических реакций, которые регулируются тромбином. Тромбин расщепляет фибриноген, что в конечном итоге приводит к образованию гемостатической пробки (сгустка),существенно активирует тромбоциты с помощью уникального протеолитического расщепления рецептора тромбина на поверхности клеток (статья Coughlin в журнале Seminars in Hematology 31(4):270-277 (1994, а также приводит к инициированию образования самого фермента по механизму обратной связи. Таким образом, ингибиторы действия тромбина могут быть потенциальными терапевтическими средствами для лечения сердечно-сосудистых и несердечно-сосудистых заболеваний. Фактор Ха является другой сериновой протеазой, включенной в путь свертывания крови. Фактор Ха связывается с фактором Va и кальцием на фосфолипидной мембране, при этом образуется комплекс протромбиназы, который превращает протромбин в тромбин (статья Claeson в журнале Blood Coagulation and(SuppI 1):S47-S58 (1994. Предполагают, что ингибиторы фактора Ха обладают преимуществом по сравнению с агентами, которые напрямую ингибируют тромбин, так как прямые ингибиторы тромбина стимулируют образование значительного количества новой порции тромбина (статья Lefkovits и Topol в журнале Circulation 90(3): 1522-1536 (1994); статья Harker в журнале Blood Coagulation and Fibrinolysis 5(SuppI 1): S47-S58 (1994. Ранее были описаны способы визуальной диагностики in vivo для выявления внутрисосудистых тромбов. Для этих визуальных способов используют соединения, определяемо меченные радиоактивными или парамагнитными атомами. Например, в качестве агента для получения изображения при обнаружении тромбов могут быть использованы тромбоциты, меченные гаммаизлучателем, In-111 (Thakur M.L и соавт.,Thrombs Res. 9:345 (1976); Powers и соавт., Neurology 32:938 (1982. В качестве агента для по 3 лучения изображения был предложен тромболитический фермент - стрептокиназа, меченнаяTc-99m (Wong, патент США N 4418052, 1983). В качестве агентов для получения изображения были также предложены гамма-излучатели I-125 и I-131 (Pang, патент США N 5011686, 1991). В качестве агентов для получения изображения описаны также моноклональные антитела, специфичные к фибрину (по контрасту с фибриногеном) и меченные Tc-99m (Berger и соавт., патент США N 5024829, 1991); Dean и соавт., патент США N 4980148, 1990). Опубликовано также применение парамагнитного контрастного агента, гадолиний диэтилентриаминопентауксусной кислоты, для получения парамагнитного изображения сосудов пациентов с острым инфарктом миокарда, леченных тромболизом(статья De Roos А. и соавт., Int. J. Card. Imaging 7:133, 1991). В качестве агентов для получения изображения тромбов предложены также радиоактивно-меченые и парамагнитно-меченые альфа-кетоамидные производные (Abelman и соавт., патент США N 5656600). В статье Edwards и соавт., J. Amer. Chem.Soc. 114:1854-63 (1992) описаны пептидил кетобензоксазолы, которые обратимо ингибируют сериновые протеазы - эластазу из лейкоцитов человека и эластазу из поджелудочной железы свиньи. В опубликованной заявке на выдачу европейского патента 363284 описаны аналоги субстратов пептидаз, в которых атом азота в расщепляемой амидной группе пептидного субстрата заменен атомом водорода или замещенным карбонильным остатком. В опубликованной заявке на выдачу австралийского патента 86245677 также описаны ингибиторы пептидаз, содержащие активированный электрофильный кетонный остаток, такие как производные фторметиленкетона или кетокарбоксильные производные. В статье Brown и соавт., J. Med. Chem. 37:1259-1261 (1994) описаны орально активные непептидные ингибиторы эластазы лейкоцитов человека, которые содержат остатки трифторметилкетона и пиридинона. В статье Н. Mack и соавт., J. Enzyme Inhibition, 9:73-86 (1995) описаны ингибиторы тромбина с жесткой структурой: производные амидинофенилаланина, которые в качестве центрального ядра структуры содержат остаток пиридинона. В публикации международной заявки РСТWO 97/01338 описаны соединения пиридинона формулыR2 означает водород, по выбору замещенный фенилом, нафтилом, дифенилом, моно- или бициклическим гетероциклическим кольцом,COOR6, линейным или разветвленным С 1-4 алкилом, С 3-7 циклоалкилом или бициклическим С 7-12 алкилом;R3 означает водород, линейный или разветвленный С 1-4 алкил, С 3-7 циклоалкил или трифторметил; А является одной из следующих структур: 2R6 означает водород или линейный или разветвленный С 1-4 алкил. В публикации международной заявки РСТWO 97/30708 описаны соединения пиридинона общей формулы. Раскрыто использование соединений для ингибирования тромбина и для лечения заболеваний, связанных с тромбозной закупоркой сосудов. В публикации заявки РСТ WO 96/18644 описаны соединения формулы Описанные соединения являются специфическими ингибиторами тромбина. В настоящее время существует необходимость в получении непептидных соединений,являющихся высокоэффективными и селективными ингибиторами протеаз и обладающих более высокой биодоступностью и меньшим количеством побочных эффектов по сравнению с известными доступными ингибиторами протеаз. В связи с этим, особенно ценными терапевтическими агентами являются принадлежащие к новому классу эффективные ингибиторы протеаз,обладающие значительной ингибирующей спо 5 собностью и низкой токсичностью по отношению к млекопитающим, для лечения различных состояний, включая лечение ряда патологических состояний млекопитающих, связанных с протеолитическими ферментами. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к новым производным аминогуанидина и алкоксигуанидина формулы VII (см. ниже). Представлены также способы получения соединений формулыVII. Новые соединения по настоящему изобретению являются эффективными ингибиторами протеаз, особенно трипсинподобных сериновых протеаз, таких как химотрипсин, трипсин, тромбин, плазмин и фактор Ха. Некоторые соединения проявляют антитромботическую активность благодаря прямому селективному ингибированию тромбина или являются промежуточными соединениями, которые используют для образования соединений с антитромбической активностью. Представлены также способы ингибирования или лечения нарушений протеолиза у млекопитающих и способы лечения тромбоза,ишемии, инсульта, рестеноза или воспалительных процессов у млекопитающих путем введения эффективного количества соединения формулы VII. Изобретение включает композицию, ингибирующую потерю тромбоцитов, агрегацию тромбоцитов крови, образование фибрина, ингибирующую образование тромбов и образование эмбола у млекопитающих, которая содержит соединение согласно изобретению на фармацевтически приемлемом носителе. Такие композиции могут во выбору включать антикоагулянты, антитромбоцитарные агенты и тромболитические агенты. Чтобы получить требуемый ингибирующий эффект, композиции можно добавлять в кровь, в продукты крови или органы млекопитающих. В изобретении описаны также способы ингибирования или лечения нарушенного протеолиза у млекопитающих и способы лечения инфаркта миокарда; неустойчивой стенокардии; кровоизлияний; рестеноза; глубокого венозного тромбоза; обширной внутрисосудистой коагулопатии, вызванной травмой, сепсисом или метастазами; применение при гемодиализе; при хирургическом шунтировании; лечение респираторного дистресс-синдрома взрослых; эндотоксинового бактериально-токсического шока; ревматоидного артрита; неспецифического язвенного колита; индурации; метастазов; гиперкоагуляции при хемотерапии; болезни Альцгеймера; синдрома Дауна; образования фибрина в глазной ткани и при ранозаживлении. Другой областью применения упомянутых ингибиторов тромбина является их использование в качестве антикоагулянтов, включенных в материалы или физически связанных с материалами, которые используются для производства медицинского оборудования для сбора и хранения крови, та 004180 6 ких как катетеры, устройство для диализа крови,шприцы и пробирки для сбора крови, соединительные линии для циркуляции крови и стенты. В изобретение включен также способ снижения тромбогенности поверхностей в организме млекопитающих путем ковалентного или нековалентного связывания соединения согласно изобретению с поверхностью, предназначенной для введения в организм. Другим объектом настоящего изобретения являются композиции, которые используют для получения изображения тромбов in vivo у млекопитающих и включающие соединение по изобретению, которое детектируют за пределами тела. Предпочтительные композиции включают соединение по настоящему изобретению и детектируемую метку, такую как радиоактивный или парамагнитный атом. Другим объектом настоящего изобретения являются диагностические композиции, пригодные для получения изображения тромбов in vivo у млекопитающих, включающие фармацевтически приемлемый носитель и диагностически эффективное количество соединения или композиции по настоящему изобретению. Другим объектом изобретения являются способы, используемые для получения изображения in vivo тромбов у млекопитающих. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Соединения по настоящему изобретению включают соединение формулы VII или их сольват, гидрат или фармацевтически приемлемую соль, где R1 означает алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкенил, алкинил,арил, аралкил, гетероцикл или гетероциклоалкил, каждый из которых может быть по выбору замещен. Z означает -SO2-, -OCO-, -CO-,-NR2CO- или ковалентную связь,где R2 означает водород, алкил, аралкил,арил, гидрокси(С 2-10)алкил, амино(С 2-10)алкил,моноалкиламино(С 2-10)алкил,диалкиламино где R3, R4 и R5 независимо означают водород,алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, по выбору замещенный арил, по выбору замещенный аралкил, по выбору замещенный гетероарил, трифторметил, галоген, гидроксиалкил, циано, нитро, карбоксамидо, -CO2Rx, -CH2ORx или-ORx, где Rx в каждом случае независимо означает водород, алкил или циклоалкил, причем упомянутые алкил или циклоалкил могут по выбору содержать одну или более ненасыщенных связей;-(CH2)y-, где у равно от 2 до 7, предпочтительно от 2 до 5, в то время как R14 и R15 определены выше; или R14 и R15 объединены с образованием-(CH2)q-, где q равно от 2 до 7, предпочтительно от 2 до 5, в то время как R12 и R13 определены выше; или R12 и R14 объединены с образованием-(СН 2)r-, где r равно 0 (связь) или от 1 до 7,предпочтительно от 0 до 4, в то время как R13 иR15 определены выше; Х означает кислород или NR9,где R9 означает водород, алкил, циклоалкил или арил, причем упомянутый алкил, циклоалкил или арил могут быть по выбору замещены следующими группами: амино, моноалкиламино, диалкиламино, алкокси, гидрокси,карбокси, алкокси карбонил, арилоксикарбонил,аралкоксикарбонил, арил, гетероарил, ациламино, циано или трифторметил;Rw означает алкил, циклоалкил, фенил,бензил, где Rd и Re независимо означают водород, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил или фенил, Rf означает водород, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил или фенил, Rg означает водород, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил или фенил и Rh означает аралкил или С 1-6 алкил;m равно от 0 до 6. Предпочтительная группа соединений, находящихся в пределах объема настоящего изобретения, включает соединения формулы VII,где R1 означает одну из следующих групп: С 6-10 ар(С 1-4)алкил, С 6-10 арил, С 4-7 циклоалкил(С 1-4) алкил, гетероцикл или гетероцикло(С 1-4)алкил,причем гетероцикл является 5-7-членным моноили 9-10-членным бициклическим гетероциклическим кольцом, которое может содержать насыщенные или ненасыщенные связи и которое содержит от 1 до 3 гетероатомов, выбранных изN, О и S. Любая их указанных R1 групп может быть по выбору замещена 1-5, предпочтительно одной, двумя или тремя следующими группами: гидрокси, нитро, трифторметил, галоген, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил, С 6-10 арил, С 1-6 алкокси, С 6-10 ар(С 1-6)алкокси, С 1-6 аминоалкил, С 1-6 аминоалкокси, амино, моно(С 1-4)алкиламино, ди(С 1-4) алкиламино, С 2-6 алкилкарбониламино, C2-6-алкоксикарбониламино,С 2-6 алкоксикарбонил,карбокси,С 1-6 гидроксиалкил,С 2 гидроксиалкокси,(С 1-6)алкокси(С 2-6)алкокси,6 моно- и ди-(С 1-4) алкиламино(С 2-6)алкокси, C210 мoнo(кapбoкcиaлкил) aминo, бис(С 2-10 карбоксиалкил)амино, С 6-14 ар(C1-6)алкоксикарбонил, С 2-6 алкинилкарбонил,С 1-6 алкилсульфонил, С 2-6 алкенилсульфонил, С 2-6 алкинилсульфонил, С 6-10 арилсульфонил, С 6-10 ар(С 1-6)алкилсульфонил, С 1-6 алкилсульфинил, C1-6 алкилсульфонамидо,С 6-10 арилсульфонамидо,С 6-10 ар(С 1-6)алкилсульфонамидо, амидино, гуанидино, С 1-6 алкилиминоамино, формилиминоамино, С 2-6 карбоксиалкокси, С 2-6 карбоксиалкил,карбоксиалкиламино, циано, трифторметокси или перфторэтокси. Особенно предпочтительная группа соединений включает соединения формулы VII, гдеR1 означает фенил, бензил, нафтил, нафтилметил, пиридил, пиридилметил, тиенил, тиенилметил, хинолинил или хинолинилметил, каждая из которых по выбору замещена одним, двумя или тремя заместителями, которые не являются обязательными и перечислены в предыдущем абзаце, прежде всего следующими группами: галоген, такие как хлор или фтор, метокси, метил,трифторметил, циано, нитро, метилсульфонил,амино или диметиламино. Используемые значения R1 включают, например, бензил, фторбензил, хлорбензил, иодбензил, дихлорбензил, бромбензил, трифторметилбензил, метилсульфонилбензил, ди(трифторметил)бензил, метилбензил, трет-бутилбензил,метоксибензил, диметоксибензил, гидроксибензил, карбоксибензил, аминобензил, метиламинобензил, н-бутиламинобензил, амидинобензил,гуанидинобензил, формилиминоаминобензил,ацетимидоиламинобензил,метоксикарбонилбензил, этоксикарбонилбензил, карбоксиметоксибензил, нафтилметил, гидроксинафтилметил,циклогексилметил, циклопентилметил, фенил,хлорфенил, иодфенил, дихлорфенил, бромфенил, трифторметилфенил, метилсульфонилфенил, ди(трифторметил)фенил, метилфенил,трет-бутилфенил, метоксифенил, диметоксифенил, гидроксифенил, карбоксифенил, аминофенил, метиламинофенил, н-бутиламинофенил,амидинофенил, гуанидинофенил, формилиминоаминофенил, ацетимидоиламинофенил, метоксикарбонилфенил,этоксикарбонилфенил,карбоксиметоксифенил, нафтил, гидроксинафтил, циклогексил или циклопентил. Дополнительные значения R1 включают пиридил, тиенил, изохинолинил, пиридилметил, изохиноли 9 нилметил, тетрагидрохинолинил и тетрагидрохинолинилметил. Более предпочтительные значения R1 включают фенил, 2-хлорфенил, 3-хлорфенил, 4 хлорфенил, 4-бромфенил, 4-иодфенил, 4 метоксифенил, 4-метилфенил, 2-трифторметилфенил, 4-трифторметилфенил, 2-фторфенил,3-фторфенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил, 3 хлор-4-фторфенил, 3,5-дихлорфенил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-этилфенил, 2-метилсульфонилфенил, 4-изопропилфенил, 3,4-диметоксифенил, 2,4,6-триметилфенил, 2,5-диметилфенил, 4-винилфенил, 2-хлор-6-метилфенил,3-бром-6-метоксифенил, 3-хлор-2-метилфенил,2-хлор-5-трифторметилфенил, 2,4-дихлорфенил,2-бутокси-5-(1,1-диметилпропил)фенил, 3-нитрофенил, 4-хлор-3-нитрофенил, 4-метилкарбониламинофенил, 4-трет-бутилфенил, 3-цианофенил, 4-метилсульфонилфенил, пентафторфенил, 2,5-дихлорфенил, 2,4-диметоксифенил, 2 метил-5-нитрофенил, 3-хлор-(2-цианофенокси) фенил, 2-хлор-4-фторфенил, 3-хлор-6-метоксифенил, 2-метокси-5-метилфенил, 4-фенилфенил, 2-пропилбутил, 5-хлор-2-метоксифенил,2-цианофенил, 2-(N-гидрокси)аминофенил, 2-(4 бифенилметокси)фенил, 2-(3-бифенилметокси) фенил, бензил, 2-(фенилсульфонил)фенил, 2,4 бис(метилсульфонил)фенил,2-хлор-4-метилсульфонилфенил, бензил, 3-хлорбензил, 3 трифторметилбензил, 2-трифторметилбензил, 2 иодбензил, 2-хлорбензил, 2-бромбензил, 3 фторбензил, 4-хлорбензил, 2-хлор-6-фторбензил, 2-фторбензил, 2,3-дихлорбензил, 3,4 дифторбензил, 2,4-дихлорбензил, 2,5-дихлорбензил, 3,4-дихлорбензил, 2-метилбензил, 5 хлор-2-метоксибензил, 2-цианобензил, 2-(4 бифенилметокси)бензил, 2-(3-бифенилметокси) бензил, 2-(фенилсульфонил)бензил, 2,4-бис(метилсульфонил)бензил, 3-метилсульфонилбензил, 2-хлор-4-метилсульфонилбензил, 1-нафталинилметил, 2-нафталинилметил и 2-нафталинил. Дополнительные предпочтительные значения R1 включают дансил, тиен-2-ил, пиридин-2 ил, 3-метилхинолин-1-ил, 1-метилимидазол-4 ил, хинолин-5-ил, хинолин-8-ил, 6-бромнафталин-2-ил, 6-хлорнафталин-2-ил, 5-хлортиен-2 ил, 5-метил-8-хинолинил, 8-хинолинилметил, 5 метил-8-хинолинилметил, 4-бензо-2,1,3-тиадиазолил и 5-хлор-1,3-диметил-4-пиразолил. Предпочтительные значения R2 в формулеVII включают водород, С 1-6 алкил, С 6-10 ар(С 1-6) алкил, С 6-10 арил, С 2-10 гидроксиалкил, С 2-10 аминоалкил, С 2-7 карбоксиалкил, моно-(С 1-4 алкил) амино(С 1-8)алкил и ди(С 1-4 алкил)амино-(С 1-8) алкил. Подходящие значения R2 включают водород, метил, этил, пропил, н-бутил, бензил,фенилэтил, 2-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил,4-гидроксибутил, 2-аминоэтил, 2-карбоксиметил, 3-карбоксиэтил, 4-карбоксипропил и 2(диметиламино)этил, причем наиболее предпочтительным является водород. Предпочтительными являются соединения,в которых R3, R4 и R5 независимо означают водород, С 1-4 алкил, С 3-7 циклоалкил, С 6-14 арил, в особенности, С 6-10 арил, С 6-10 ар(C1-4)алкил, трифторметил, галоген, гидроксиалкил, циано, нитро, карбоксамид, карбокси, алкоксикарбонил,карбоксиметил, алкоксикарбонилметил или циклоалкилоксикарбонил. Используемые значения R3, R4 и R5 включают водород, метил, этил, пропил, хлор, бром,трифторметил, гидроксиметил, метокси, этокси,карбоксамид, нитро, фенил, циклопропил, гидрокси, изопропил, метоксикарбонил, этоксикарбонил и бензил. Предпочтительные R3 и R4 группы включают водород, С 1-12 алкил и С 2-6 алкенил. Наиболее предпочтительным значением R3 и R4 является водород. Предпочтительные R5 группы включают водород, галоген, С 1-5 алкил, С 3-6 алкенил, С 3-5 циклоалкил, трифторметил и С 1-4 алкокси, наиболее предпочтительно - С 1-4 алкил, такой как метил, этил, пропил или изопропил. Особенно предпочтительным значением группы Het, если R3 и R4 независимо выбирают из водорода и метильной группы, является где R5 выбирают из группы, включающей водород, метил, этил, пропенил, аллил, пропил, изопропил, бутил, R-втор-бутил, S-втор-бутил, изобутил, 1-пентил, R-2-пентил, S-2-пентил, 3 пентил, S-1-(2-метил)бутил, R-2-(3-метил)бутил,1-(3-метил)-бутил, R-1-(2-метил)бутил, циклопентил, 2-пирролил, 3-пирролил, 1-гексил, S-2 гексил, R-2-гексил, R-3-гексил и S-3-гексил. Особенно предпочтительной в этом смысле является Het группа, в которой R5 означает водород, метил, этил, пропил или изопропил. Предпочтительные значения Z группы включают -SO2- и ковалентную связь. Предпочтительной R7 группой является водород. Предпочтительными являются соединения формулы VII, где R8 означает водород, С 1-6 алкил или С 6-10 арил(С 1-6)алкил. Предпочтительными соединениями, если Х означает NR9, где R9 означает водород или С 1-6 алкил, являются соединения, которые необязательно могут быть замещены одной, двумя или тремя, предпочтительно одной из следующих групп: амино, моноалкиламино, диалкиламино, алкокси, гидрокси, алкоксикарбонил, ари 11 локсикарбонил, аралкоксикарбонил, карбоалкокси, фенил, циано, трифторметил, ацетиламино, пиридил, тиофенил, фурил, пирролил или имидазол. Подходящие значения R9 включают водород, метил, этил, пропил, н-бутил, бензил, фенилэтил, 2-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил, 4 гидроксибутил, карбоксиметил и карбоксиэтил. Наиболее предпочтительными являются соединения, в которых Х является кислородом. Предпочтительными являются соединения формулы VII, где R12, R13, R14 и R15 независимо означают одну из следующих групп: водород,С 1-6 алкил, С 6-10 ар(С 1-6)алкил, С 6-10 арил, С 2-10 гидроксиалкил или С 2-7 карбоксиалкил. Используемые значения R12, R13, R14 и R15 включают водород, метил, этил, пропил, н-бутил, бензил, фенилэтил, 2-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил, 4 гидроксибутил, 2-карбоксиметил, 3-карбоксиэтил и 4-карбоксипропил. Кроме того, предпочтительными являются соединения, в которых-СО 2Rw, где Rw в каждом случае предпочтительно означает одну из следующих групп: С 1-4 алкил, С 4-7 циклоалкил или бензилоксикарбонил. Подходящие значения Ra, Rb и Rc включают водород, метил, этил, пропил, н-бутил, гидрокси,метокси, этокси, циано, -СO2 СН 3, -СО 2 СН 2 СН 3 и-CO2CH2CH2CH3. Согласно наиболее предпочтительному варианту воплощения изобретения каждый Ra, Rb и Rc является водородом. Предпочтительным значением Ra, Rb и Rc является также группа -CO2Rw, где Rw является одним из следующих остатков где Rd-Rh определены выше. Если Ra, Rb и Rc являются -СО 2Rw, где Rw является одним из этих остатков, то полученные соединения являются пролекарствами, которые обладают требуемыми характеристиками по составу и биодоступности. Предпочтительным значением Rd, Re и Rg является водород, Rf означает метил и предпочтительное значение Rh включает бензил или третбутил. Предпочтительные значения n в формулеVII равны от 0 до 6, более предпочтительно от 0 до 4 и наиболее предпочтительно 0, 1 или 2. Предпочтительное значение m равно от 0 до 4, наиболее предпочтительно 0, 1 или 2. В наиболее предпочтительных соединениях тип оба равны нулю. Согласно особенно предпочтительному объекту изобретения, представлены соединения формулы VII, где Z означает -SO2-, R1 означает 12 замещенный или незамещенный арил или аралкил, Het является Х означает О, R8 означает водород, С 1-6 алкил или С 6-10 арил(C1-6)алкил и Ra, Rb и Rc все являются водородом. Более предпочтительными являются такие соединения, в которых R1 означает замещенный или незамещенный бензил или фенил, Х означает О, R8 означает водород,С 1-6 алкил или С 6-10 арил-(С 1-6)алкил, а Ra, Rb и Rc все являются водородом. Предпочтительной является группа соединений формулы VIII или сольват, гидрат их фармацевтически приемлемой соли; где(R )(OR22)CH(CH2)p, где р равно 1-4,(R22)2CH(CH2)k, где k равно 0-4, а R22 могут быть одинаковыми или различными и где (R22)2 может быть циклическим заместителем у СН и означает С 3-7 циклоалкил, С 7-12 бициклоалкил или 5-7-членное моно- или 9-10-членное бициклическое гетероциклическое кольцо, замещенное или незамещенное и содержащее от одного до трех гетероатомов, которые выбирают из группы, включающей N, О и S и R22O(CH2)p, где р равно 1-4.R22 означает водород; фенил, незамещенный или замещенный одной или более следущих групп: С 1-4 алкил, С 1-4 алкокси, галогеном,трифторметилом, гидроксилом, СООН илиCONH2; нафтил; бифенил; 5-7-членное моноили 9-10-членное бициклическое гетероциклическое кольцо, которое может содержать насыщенные связи, или где Rd и Re независимо означают водород, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил или фенил, Rf означает водород, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил или фенил, Rg означает водород, С 1-6 алкил, С 2-6 алкенил или фенил,a Rh означает аралкил или С 1-6 алкил;R32, R33, R34 и R35 независимо означают одну из следующих групп: водород, С 1-6 алкил,С 2-10 карбоксиалкил или С 2-10 гидроксиалкил илиR32 и R33 объединены с образованием -(СН 2)y-,где у равно от 2 до 5, в то время как R34 и R35 определены выше; или R34 и R35 объединены с 13 образованием -(CH2)q-, где q равно от 2 до 5, в то время как R32 и R33 определены выше; или R32 и R34 объединены с образованием-(CH2)r-, где r равно 0 (связь) или от 1 до 4, в то время как R33 и R35 определены выше;n равно от нуля до 4 иm равно от нуля до 2. Подходящим классом соединений является вариант воплощения изобретения, в котором Z' означает ковалентную связь или -SO2-. Дополнительным подходящим подклассом соединений является вариант, в котором R21 означаетR22(CH2)k, (R22)2 СH(СН 2)k, фенил или (фенил)2 СН. Другим подходящим классом соединений является вариант, в котором R25 означает С 1-4 алкил и, в частности, в котором R25 означает метил, этил, пропил или изопропил. Другим подходящим классом соединений является вариант, в котором R28 означает водород или С 1-4 алкил, а X' означает О. Примерами структур соединений, включенных в область изобретения, являются следующие соединения: а также их фармацевтически приемлемые соли,например, гидрохлориды и ацетаты. Примерами новых индивидуальных соединений, включенных в область настоящего изобретения, являются следующие соединения: трифторацетат 3-бензилсульфониламино 6-метил-1-[(3-гуанидинооксипропил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона; 19 трифторацетат 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6-метил-1-[(2-N-метилгуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона; трифторацетат 3-(бензилсульфонил)амино 6-метил-1-[(2-N-метилгуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона; 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6 метил-1-[(2-(N-метоксикарбонил)гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинон; 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6-метил-1-[(2-(N,N',N"-триэтоксикарбонил)гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинон; 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6-метил-1-[(2-(N,N'-диэтоксикарбонил)гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинон и 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6-метил-1-[(2-(N-этоксикарбонил)гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинон. Следует также понимать, что в настоящее изобретение включены стереоизомеры и оптические изомеры, например смеси энантиомеров,а также индивидуальных энантиомеров и диастереомеров, которые образуются из-за наличия ассиметрических центров в молекулах соединений, выбранных из указанных групп (серий) соединений. Соединения формулы VII могут быть также в форме сольватов, прежде всего в форме гидратов. Гидратация может происходить в процессе получения соединений или композиций, содержащих соединения, или гидратация может происходить во времени благодаря гигроскопической природе соединений. Некоторые соединения формулы VII,включенные в область изобретения, являются производными, названными пролекарствами. Термин "пролекарство" означает производное известного лекарственного средства прямого действия, причем указанное производное обладает улучшенными характеристиками по доставке и повышенной терапевтической эффективностью по сравнению с лекарственным средством, и превращается в активное лекарственное средство путем ферментативного или химического процесса. Подходящими пролекарствами являются соединения, в которых Ra, Rb и/или(1994). Если в любой составляющей части или в формуле VII содержится более одного любого изменяемого элемента (заместителя), его определение в каждом случае не зависит от его определения в любом другом случае. Кроме того,комбинация заместителей и/или изменяемых элементов допустима только, если такая комбинация позволяет получить устойчивые соединения. Согласно другому объекту, настоящее изобретение включает композиции, которые могут 20 быть использованы для получения изображения тромбов in vivo у млекопитающих, причем композиции включают соединение по настоящему изобретению, которое можно детектировать за пределами тела. Предпочтительными являются композиции, включающие соединение по настоящему изобретению и детектируемую метку,такую как радиоактивный или парамагнитный атом. Согласно другому аспекту настоящее изобретение включает способы, которые могут быть использованы для получения изображенияin vivo тромбов у млекопитающих. Согласно предпочтительному аспекту подходящими являются соединения, в которых заместитель R1 замещен детектируемым атомом(меткой), таким как атом радиоактивного иода,таким как I-125, I-131 или I-123. В этом случае предпочтительным R1 является фенил, содержащий в пара-положении I-123, I-125 или I-131,или бензил, содержащий в мета-положении I123, I-125 или I-131. Детектируемой меткой может быть также радиоактивный или парамагнитный хелатный остаток, в котором подходящий лиганд (L) присоединен к заместителю R1 напрямую или через двухвалентную связывающую группу А". В альтернативном варианте группы -Z-R1 в формулеVII заменены на группу -A"-L. Термин "подходящий лиганд" означает органический остаток,образующий хелатный комплекс с ионом радиоактивного или парамагнитного металла. В указанных соединениях двухвалентная связывающая группа А" включает группы, способные образовывать ковалентную связь со свободной аминогруппой, а также образовывать хелатные комплексы. Например, А" может означать -C(=S)-, -C(=O)-, -C(=NH)-(CH2)6C(=NH)-, -C(=O)-(CH2)6-C(=O)-,и т.п. В соединениях, представленных формулойVII, хелатный лиганд L включает также группы,способные образовывать ковалентное и нековалентное связывание с радиоактивным или парамагнитным атомом. Указанные хелатные остатки включают известные остатки, используемые для комплексообразования радиоактивных или парамагнитных атомов. Указанные хелатные остатки содержат от 3 до 12, предпочтительно от 3 до 8 остатков метиленфосфониевой кислоты, метиленкарбогидроксамовой кислоты, карбоксиэтилиденовых групп или прежде всего карбоксиметиленовых групп, присоединенных к атому азота. Если к атому азота присоединены только одна или две кислотные группы, то этот атом азота соединен с другим атомом азота, который имеет такие группы, соединенные через этиленовые группы, по выбору замещенные,или через отдельные этиленовые звенья (до четырех звеньев), разделенные атомом азота или 21 кислорода, или серы. Предпочтительным способом комплексообразования является использование диэтилентриамино-N,N,N',N",N"-пентауксусной кислоты (ДТПУ). ДТПУ хорошо известна в данной области техники в качестве хелатного агента для радиоактивных атомов индия-111 (In-111), технеция-99m (Тс-99m) и парамагнитного атома гадолиния (Gd). См. статьюKhaw и соавт., Science 209: 295(1980); патент США No 4652440 (1987), Paik C.H. и соавт.; патент США No 4957939 (1990), Gries H. и соавт. Предпочтительным хелатным лигандом L является 1-(п-аминобензил)диэтилентриаминопентауксусная кислота. В качестве хелатных агентов включены также соединения, содержащие сульфгидрильные или аминные остатки, и любые комбинации, по крайней мере, четырех указанных остатков. Эти сульфгидрильные или аминные остатки разделены друг от друга, по крайней мере, двумя атомами, которыми могут быть атомы углерода, азота, кислорода или серы. Особенно предпочтительным хелатным агентом L является металлотионеин, хорошо известный в области техники в качестве хелатного агента для Тс-99m. Термин "алкил", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, означает линейные или разветвленные углеводородные цепи, содержащие до 12 атомов углерода, такие как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, изобутил, пентил,гексил, изогексил, гептил, 4,4-диметилпентил,оксил, 2,2,4-триметилпентил, нонил, децил, ундецил, додецил. Термин "алкенил", использованный в данном описании, означает линейную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую 220 атомов углерода, если длина цепи особо не ограничена, включая, но не ограничивая область изобретения перечисленным,этенил,1 пропенил, 2-пропенил, 2-метил-1-пропенил, 1 бутенил, 2-бутенил и т.п. Предпочтительная длина алкенильной цепи составляет от 2 до 10 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 8 атомов углерода и наиболее предпочтительно от 2 до 4 атомов углерода. Термин "алкинил", использованный в данном описании, означает линейную или разветвленную цепь, содержащую 2-20 атомов углерода, если длина цепи особо не ограничена, в которой содержится, по крайней мере, одна тройная связь между двумя атомами углерода в цепи, включая, но не ограничивая область изобретения перечисленным, ацетилен, 1-пропилен, 2 пропилен и т.п. Предпочтительная длина алкинильной цепи составляет от 2 до 10 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 8 атомов углерода и наиболее предпочтительно от 2 до 4 атомов углерода. Во всех случаях, если в цепи в качестве заместителя присутствует алкенильный или алкинильный остаток, ненасыщенная связь, то 22 есть винилиденовая или ацетиленовая связь предпочтительно не связана напрямую с остатком, содержащим азот, кислород или серу. Термин "алкокси", использованный в данном описании, означает линейную или разветвленную цепь, содержащую от 1 до 20 атомов углерода, если длина цепи особо не ограничена,и связанную с атомом кислорода, включая, но не ограничивая область изобретения перечисленным, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси и т.п. Предпочтительно длина алкокси цепи составляет от 1 до 10 атомов углерода,более предпочтительно от 1 до 8 атомов углерода. Термин "арил", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, означает моноциклические или бициклические ароматические группы, содержащие от 6 до 12 атомов углерода в циклическом остатке,предпочтительно от 6 до 10 атомов углерода,такие как фенил, нафтил или тетрагидронафтил. Термин "гетероарил", использованный в данном описании, означает группы, содержащие от 5 до 14 атомов в цикле и 6, 10 или 14 общих-электронов в циклической структуре; и содержащие атомы углерода и 1, 2 или 3 атомов кислорода, азота или серы в качестве гетероатомов (если примерами гетероарильных групп являются тиенил, бензо[b]тиенил, нафто[2,3b]тиенил, тиантренил, фурил, пиранил, изобензофуранил, бензоксазолил, хроменил, ксантенил, феноксатиинил, 2 Н-пирролил, пирролил,имидазолил, пиразолил, пиридил, пиразинил,пиримидинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, 3H-индолил, индолил, индазолил, пиринил, 4H-хинолизинил, изохинолил, хинолил,фталазинил, нафтиридинил, хиназолинил, циннолинил, птеридил, 4 Н-карбазолил, карбазолил, -карболинил, фенантридинил, акридинил,перимидинил, фенантролинил, феназинил, изотиазолил, фенотиазинил, изоксазолил, фуразанил и феноксазинил группы). Термин "аралкил" или "арилалкил", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, означает С 1-6 алкил группы, описанные выше и имеющие арильный заместитель, такой как бензил, фенилэтил или 2-нафтилметил. Термин "циклоалкил", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, означает циклоалкильные группы, содержащие от 3 до 9 атомов углерода. Типичными примерами являются циклопропил,циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и циклононил. Термин "C7-12 бициклический алкил" включает бицикло[2.2.1] гептил (норборнил),бицикло[2.2.2]октил,1,1,3-триметилбицикло 23 Термин "алкокси" относится к определенным выше алкильным группам, присоединенным к атому кислорода. Термин "галоген" или "галогенид", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, относится к хлору,брому, фтору или иоду, причем предпочтительно к хлору. Термин "моноалкиламин", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, относится к аминогруппе, замещенной одной алкильной группой, содержащей от 1 до 6 атомов углерода. Термин "диалкиламин", использованный в данном описании самостоятельно или в составе другой группы, относится к аминогруппе, замещенной двумя алкильными группами, каждая их которых содержит от 1 до 6 атомов углерода. Термин "гидроксиалкил", использованный в данном описании, относится к любой из вышеописанных алкильных групп, замещенных одной или более гидроксильными группами. Термин "карбоксиалкил", использованный в данном описании, относится к описанным выше алкильным группам, замещенным одним или более карбоксильными остатками. Термин "гетероцикл" или "гетероциклическое кольцо", использованный в данном описании, если особо не оговорено, представляет стабильную 5-7-членную моно- или бициклическую систему или стабильную 7-10-членную бициклическую гетероциклическую кольцевую систему, любой цикл в которой может быть насыщенным или ненасыщенным и в состав которого включены атомы углерода и от одного до трех гетероатомов, выбранных из группы,включающей атомы N, О и S, причем гетероатомы азота и серы могут быть по выбору окислены, а гетероатом азота может быть по выбору в четвертичном состоянии, а также система включает любую бициклическую группу, в которой любые из определенных выше гетероциклических колец образуют конденсированные с бензолом системы. Прежде всего подходящими являются кольца, содержащие один атом кислорода или серы, от одного до трех атомов азота или один атом кислорода или серы в сочетании с одним или двумя атомами азота. Гетероциклическое кольцо может быть присоединено к любому гетероатому или атому углерода, что приводит к образованию стабильной структуры. Примеры таких гетероциклических групп включают пиперидинил, пиперазинил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролодинил, 2-оксоазепинил, азепинил, пирролил, 4 пиперидонил, пирролидинил, пиразолил, пиразолидинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиридил, парзинил, пиримидинил,пиридазинил, оксазолил, оксазолидинил, изоксазолил, изоксазолидинил, морфолинил, тиазолил, тиазолидинил, изотиазолил, хинуклидинил,изотиазолидинил, индолил, хинолинил, изохи 004180 24 нолинил, бензимидазолил, тиадиазолил, бензопиранил, бензотиазолил, бензоксазолил, фурил,тетрагидрофурил, тетрагидропиранил, тиенил,бензотиенил, тиаморфолинил, тиаморфолинилсульфоксид, тиаморфолинилсульфон и оксадиазолил. Термин морфолино идентичен термину морфолинил. Термин "гетероатом", использованный в данном описании, означает атом кислорода("О"), атом серы ("S") или атом азота ("N"). Следует понимать, что если гетероатомом является атом азота, он может образовать остатокNRaRb, где Ra и Rb независимо друг от друга означают водород или С 1-C8 алкил или объединены вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием насыщенного или ненасыщенного 5-, 6- или 7-членного кольца. На схемах 1 и 2 представлен синтез соединений по настоящему изобретению, в которых где R12-R15, Ra, Rb, Rc, n и m определены выше. Согласно схеме 1, аминоспирт 1 защищают с использованием стандартной защитной группы для аминогрупп, такой как бензилоксикарбонильная группа (Cbz), и получают соединение 2. Защищенный аминоспирт 2 конденсируют сN-гидроксифталимидом с использованием метода конденсации по Митсунобу (Mitsunobu О.,Synthesis, 1 (1981 и получают соединение 3. Предпочтительные условия конденсации включают использование растворителя, такого как тетрагидрофуран или хлористый метилен, и диалкилазодикарбоксилат, такой как диэтилазодикарбоксилат. Удаление фталимидной защитной группы с образованием алкоксиамина 4 проводят в стандартных условиях, известных в области техники (книга Greene T.W., Wuts P.G.W.,Protecting Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе), 2-е издание,John Wiley and Sons, Inc. New York (1991, таких как в присутствии метиламина или гидразина в соответствующем растворителе, таком как этанол или изопропанол. Введение группы гуанидина в полученный алкоксиамин 4 с образованием соединения 5 проводят с использованием замещенных реагентов для введения группы гуанидина,таких какBergeron R.J. and McManis J.S., J.Org.Chem.,52:1700, 1987) или N-Ra, N-Rb, N-Rc-1H-пиразол 25 1-карбоксамидин (статья Bernatowicz M.S. и соавт., Tetrahedron Letter 34:3389, 1993). Удаление защитной группы с аминогруппы проводят с использованием стандартного способа, известного в данной области техники (книгаSons, Inc. New York, 1991), при этом получают промежуточное производное 6. Для удаления защитной группы используют палладий на угле в подходящем растворителе, таком как хлороформ в метаноле или этаноле. В некоторых случаях благоприятное действие оказывает добавление кислоты, такой как хлористоводородная кислота. Схема 2 где R1, R3-R5, R12-R15, R8, Ra, Rb, Rc, m и n определены выше. Согласно схеме 2,2-гидроксипиридинкарбоновая кислота 7 взаимодействует с дифенилфосфорилазидом (DPPA), триэтиламином и бензиловым спиртом в подходящем растворителе,таком как диоксан, при этом получают производное аминопиридинона 8 с защищенной аминогруппой. Полученное производное алкилируют эквивалентом глицина, таким как третбутилбромацетат, с использованием основания,такого как гексаметилдисилазид лития, карбонат цезия или гидрид натрия, в соответствующем растворителе, таком как тетрагидрофуран или N,N-диметилформамид, при этом получают соединение 9. Затем удаляют трет-бутильную группу в стандартных условиях, хорошо известных в данной области техники (книга GreeneNew York (1991, таких как использование га 004180 26 зообразного HCl в этилацетате или трифторуксусной кислоты в хлористом метилене, при этом получают кислоту 10. Кислоту 10 конденсируют с промежуточным производным 6 с использованием стандартных конденсирующих реагентов для пептидного синтеза, таких как реагент Кастро (ВОР) или РуВОР, и основания, такого как диизопропилэтиламин в подходящем растворителе, таком как N,N-диметилформамид, при этом получают соединение 14. Защитную группу Cbz удаляют путем гидрирования в присутствии катализатора, такого как палладий на угле в растворителе, таком как тетрагидрофуран и этанол. Амин 15 обрабатывают сульфонилхлоридом в присутствии основания, такого как 4 метилморфолин, в подходящем растворителе,таком как хлористый метилен, при этом получают соединение 16. По альтернативному варианту защитную группу Cbz в соединении 9 удаляют с использованием стандартного способа, такого как гидрирование в присутствии катализатора, такого как палладий на угле в соответствующем растворителе, таком как тетрагидрофуран и этанол. Амин 11 взаимодействует с сульфонилхлоридом в присутствии основания, такого как 4 метилморфолин, в подходящем растворителе,таком как хлористый метилен, при этом получают соединение 12. Трет-бутильную группу удаляют с использованием стандартного способа, хорошо известного в данной области техники (книга Greene T.W., Wuts P.G.W., Protectingand Sons, Inc. New York (1991, такого как использование газообразного HCl в этилацетате или трифторуксусной кислоты в хлористом метилене, при этом получают кислоту 13. Кислоту 13 конденсируют с промежуточным производным 6 с использованием стандартных конденсирующих реагентов для пептидного синтеза,таких как реагент Кастро (ВОР) или РуВОР, и основания, такого как диизопропилэтиламин в подходящем растворителе, таком как N,Nдиметилформамид, при этом получают соединение 16. Группы Ra, Rb и Rc могут быть по выбору удалены с использованием стандартного способа. В случае, если Ra и Rb означают третбутоксикарбонил (Воc) группу, a Rc означает водород, то группы Boc могут быть удалены с помощью обработки кислотой, такой как трифторуксусная кислота или хлористоводородная кислота в соответствующем растворителе, таком как хлористый метилен или диоксан, при этом получают соединение 17. Затем соединение 17 по выбору алкилируют путем обработки алкилгалогенидом в присутствии основания,такого как бикарбонат натрия, в соответствующем растворителе,таком какN,N'диметилформамид, при этом получают соединение 18. где R3, R5, R12-R15, Ra, Rb, Rc, n и m определены выше, а Аr означает арил. Согласно схеме 3 диэтиловый эфир этоксиметиленмалоновой кислоты 19 обрабатывают амидином 20 в присутствии основания, такого как этоксид натрия, в соответствующем растворителе, таком как этанол, при этом получают замещенный пиримидин 21. Соединение 21 алкилируют эквивалентом глицина, таким как трет-бутилбромацетат, с использованием основания, такого как фторид тетрабутиламмония,гексаметилдисилазид лития или гидрид натрия,в соответствующем растворителе, таком как тетрагидрофуран или N,N-диметилформамид,при этом получают эфир 22. Эфир гидролизуют гидроксидом лития или гидроксидом натрия в подходящем растворителе, таком как метанол или этанол, при этом получают кислоту 23. Затем кислоту обрабатывают дифенилфосфорилазидом (DPPA) в присутствии основания, такого как триэтиламин, с образованием ацилазида,который вступает в реакцию перегруппировки Куртиуса с бензиловым спиртом, при этом образуется 5-аминопиримидион 24 с защитной бензилоксикарбонильной (Cbz) группой. Защитную Cbz группу в соединении 24 удаляют с использованием стандартного способа, такого как гидрирование в присутствии катализатора,такого как палладий на угле в соответствующем растворителе, таком как тетрагидрофуран и этанол. Амин 25 обрабатывают сульфонилхлоридом в присутствии основания, такого как 4 метилморфолин или триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как хлористый метилен, при этом получают соединение 26. Третбутильную группу удаляют с использованием стандартного способа, хорошо известного в данной области техники (книга Greene T.W.,Wuts P.G.W., Protecting Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе), 2-е издание, John Wiley and Sons, Inc. NewYork (1991, такого как использование газооб 004180 28 разного HCl в этилацетате или трифторуксусной кислоты в хлористом метилене, при этом получают кислоту 27. Кислоту 27 конденсируют с промежуточным производным 6 с использованием стандартных конденсирующих реагентов для пептидного синтеза, таких как реагент Кастро (ВОР) или РуВОР, и основания, такого как диизопропилэтиламин или триэтиламин в подходящем растворителе, таком как N,Nдиметилформамид, при этом получают соединение 28. Группы Ra, Rb и Rc могут быть по выбору удалены с использованием стандартного способа. В случае, если Ra и Rb означают третбутоксикарбонил (Boc) группу, a Rc означает водород, то группы Boc могут быть удалены с помощью обработки кислотой, такой как трифторуксусная кислота или хлористоводородная кислота в соответствующем растворителе, таком как хлористый метилен или диоксан, при этом получают соединение 29. Затем соединение 29 по выбору алкилируют путем обработки алкилгалогенидом в присутствии основания,такого как бикарбонат натрия, в соответствующем растворителе,таком какN,Nдиметилформамид, при этом получают соединение 30. Схема 4 На схеме 4 представлено получение соединений по настоящему изобретению, в которых Z означает -ОСО-, -СО- или -NR2CO-. Амин 11 взаимодействует с алкоксикарбонилхлоридом или арилоксикарбонилхлоридом или арилхлоридом в присутствии основания, такого как 4 метилморфолин или триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как хлористый метилен, или взаимодействуете изоцианатом в соответствующем растворителе, таком как хлористый метилен или толуол, при этом получают соединение 31. Трет-бутильную группу удаляют 29 с использованием стандартного способа, хорошо известного в данной области техники (книгаSons, Inc. New York (1991, такого как использование газообразного HCl в этилацетате или трифторуксусной кислоты в хлористом метилене, при этом получают кислоту 32. Кислоту 32 конденсируют в промежуточным производным 6 с использованием стандартных конденсирующих реагентов для пептидного синтеза, таких как реагент Кастро (ВОР) или РуВОР, и основания, такого как диизопропилэтиламин в подходящем растворителе, таком как N,N-диметилформамид, при этом получают соединение 33. По альтернативному способу амин 15 обрабатывают алкоксикарбонилхлоридом или арилоксикарбонилхлоридом или арилхлоридом в присутствии основания, такого как 4-метилморфолин или триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как хлористый метилен, или обрабатывают изоцианатом в соответствующем растворителе, таком как хлористый метилен или толуол, при этом получают соединение 33. Группы Ra, Rb и Rc могут быть по выбору удалены с использованием стандартного способа. В случае, если Ra и Rb означают третбутоксикарбонил (Boc) группу, a Rc означает водород, то группы Boc могут быть удалены с помощью обработки кислотой, такой как трифторуксусная кислота или хлористоводородная кислота в соответствующем растворителе, таком как хлористый метилен или диоксан, при этом получают соединение 34. Затем соединение 34 по выбору алкилируют путем обработки алкилгалогенидом в присутствии основания,такого как бикарбонат натрия, в соответствующем растворителе, таком как N,N-диметилформамид, при этом получают соединение 35. На схемах 5 и 6 представлены примеры промежуточных соединений и стадии синтеза,описанные на схемах 1 и 2, для получения соединений формулы VII, где R1-Z означает R1SO2-. Переменная "m" на схемах равна от 0 до 8,предпочтительно 0 или 1. Стадии синтеза, представленные на этих схемах, описаны в примерах 1 и 2 данного описания изобретения. Схема 5 Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы VII (в форме водно- или маслорастворимых или диспергируемых продуктов) включают обычные нетоксичные соли или соли четвертичного аммония, которые образуются, например, при обработке неорганическими или органическими кислотами или основаниями. Примеры таких кислотно-аддитивных солей включают ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат,бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат,циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат,гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат,метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат,пропионат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Основно-присоединенные соли включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочно-земельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли органических оснований, такие как соли дициклогексиламина,N-метил-D-глюкамина и соли аминокислот, таких как аргинин, лизин и т.д Основные азотсодержащие группы могут быть превращены в группы с четвертичным атомом азота путем обработки агентами, например, низшими алкилгалогенидами, такими как метил, этил, пропил и бутилхлориды, бромиды и иодиды; диалкилсульфатами, такими как диметил, диэтил, дибутил и диамилсульфаты; высшими алкилгалогенидами, такими как децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бромиды и иодиды; аралкилгалогенидами, такими как бензил и фенетилбромиды и т.п Предпочтительные кислоты для получения кислотно-аддитивных солей вклю 31 чают хлористоводородную кислоту и уксусную кислоту. Соединения по настоящему изобретению составляют новый класс эффективных ингибиторов металло, кислых, тиоловых и сериновых протеаз. Примерами сериновых протеаз, которые ингибируются соединениями по изобретению, являются эластаза (нейтрофилов из лейкоцитарной фракции) протеолитический фермент,включенный в патогенез эмфиземы; химотрипсин и трипсин - пищеварительные ферменты; эластаза из поджелудочной железы и катепсинG - химотрипсин-подобная протеаза, также ассоциированная с лейкоцитами; тромбин и фактор Ха - протеолитические ферменты, включенные в путь свертывания крови. Соединения по настоящему изобретению используют также для ингибирования термолизина металлопротеазы, и пепсина - кислой протеазы. Соединения по настоящему изобретению используют предпочтительно для ингибирования трипсин-подобных протеаз. Целевым применением соединений, ингибирующих химотрипсин и трипсин, является лечение панкреатита. Определение эффективности и других биохимических параметров по ингибированию ферментов для соединений по изобретению, можно легко определить с использованием стандартных биохимических методов, хорошо известных в данной области техники. Диапазон действующих доз для специфического целевого применения, естественно, зависит от природы и степени заболевания пациента или животного, подлежащего лечению,причем природа и степень заболевания определяются практикующим диагностом. Предполагается, что используемый диапазон доз для получения эффективного терапевтического эффекта составляет от 0,01 до 10 мг на кг в день. Соединения по настоящему изобретению,различающиеся по их способности ингибировать тромбин, могут быть использованы для ряда терапевтических целей. В качестве ингибиторов тромбина соединения по настоящему изобретению ингибируют образование тромбина. Следовательно, эти соединения могут быть использованы для лечения или профилактики состояний, характеризующихся аномальным венозным или артериальным тромбозом, включая образование или действие тромбина. Эти состояния включают, но не ограничивают область изобретения перечисленным, тромбоз глубоких вен, рассеянную (дессиминированную) внутрисосудистую коагулопатию, которая происходит при септическом шоке, вирусных инфекциях и онкологических заболеваниях; инфаркт миокарда; инсульт; шунтирование коронарной артерии; образование фибрина в глазном яблоке; вправление бедренного сустава и образование тромба,которое происходит либо в результате тромболитической терапии, либо в результате пластической чрескожной операции на коронарных 32 сосудах (РСТА). Другой областью применения является использование упомянутых ингибиторов трипсина в качестве антикоагулянтов, либо введенных в материалы, либо физически связанных с материалами, которые используются для производства устройств для сбора крови,кровообращения и хранения крови, таких как катетеры, аппараты для диализа крови, шприцы и пробирки для отбора крови, системы кровообращения. Соединения по настоящему изобретению могут быть также использованы в качестве антикоагулянтов для аппаратов искусственного кровообращения. Показано, что металлические стенты снижают рестеноз, но являются тромбогенными. Стратегией для снижения тромбогенности стентов является нанесение, включение, адсорбция или ковалентное связывание тромбинингибирующего агента на поверхность или к поверхности стента. Для этой цели могут быть использованы соединения по настоящему изобретению. Соединения по изобретению могут быть связаны или включены в растворимые и/или биоразрушаемые полимеры и затем нанесены в качестве покрытия на материалы для изготовления стентов. Такие полимеры включают поливинилпирролидон, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпарамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенные остатками пальмитоила, полимолочную кислоту, полигликолевую кислоту, сополимеры полимолочной и полигликолевой кислоты, поликапролактон, полигидроксимасляную кислоту, полиортоэфиры, полиацетали, полидигидропираны, полицианоакрилаты и поперечно сшитые или амфипатичные блоксополимеры гидрогелей. См. заявка на выдачу европейского патента 761251, заявка на выдачу европейского патента 604022, канадский патент 2164684 и опубликованные заявки РСТWO 96/11668, WO 96/32143 и WO 96/38136. В виду действия тромбина на типы клеток хозяина, такие как клетки гладкой мускулатуры,эндотелиальные клетки и нейтрофилы, соединения по настоящему изобретению могут быть дополнительно использованы для лечения или профилактики респираторного дистресс-синдрома у взрослых, воспалительных реакций, заживления ран, повреждения после повторной перфузии, атеросклероза и рестеноза, возникающего после повреждения, такого как пластическая операция на сосудах с использованием надувного баллона, атеректомия и установка артериального стента. Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения неоплазии и метастаза, а также нейродегенеративных заболеваний,таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона. При использовании в качестве ингибиторов тромбина соединения по настоящему изобретению можно вводить в эффективном коли 33 честве в диапазоне от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 мг/кг, предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг тела, по схеме приема в виде суточных однократных доз или суточных доз, разделенных на 2-4 порции. При использовании в качестве ингибиторов тромбина соединения по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с тромболитическими агентами, такими как тканевой активатор плазминогена, стрептокиназа и урокиназа. Кроме того, соединения по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с другими средствами, антитромботическими или антикоагулянтами, такими как (без ограничения области изобретения перечисленным) антагонисты фибриногена и антагонисты рецептора тромбоксана. Ингибиторы тромбина могут быть также связаны с растворимыми полимерами, используемыми в качестве целевых носителей лекарственных средств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, сополимер пирана,полигидроксипропилметакриламид-фенол, полигидроксиэтил-аспартамид-фенол или полиэтиленоксид-полилизин, замещенный остатками пальмитоила. Кроме того, ингибиторы тромбина могут быть связаны с классом биоразрушаемых полимеров, используемых для обеспечения управляемого высвобождения лекарственного средства, например, с полимолочной кислотой,полигликолевой кислотой, сополимерами полимолочной и полигликолевой кислоты, поли-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианоакрилатами и поперечно сшитыми или амфипатичными блоксополимерами гидрогелей. Эластаза лейкоцитов человека выделяется полиморфонуклеарными лейкоцитами в очагах воспаления, и таким образом ее выделение является причиной ряда патологических состояний. Предполагается, что соединения по настоящему изобретению будут обладать противовоспалительным действием, которое можно использовать при лечении подагры, ревматоидного артрита и других воспалительных процессов, а также при лечении эмфиземы. Ингибирующие свойства соединений по настоящему изобретению по отношению к эластазе лейкоцитов определяют способом, описанным ниже. Катепсин G также вовлечен в патологические состояния при артрите, подагре и эмфиземе, и,кроме того, при гломерулонефрите и инвазиях легких, вызванных инфекциями в легких. Для целевого применения соединений формулы I в качестве ингибиторов ферментов свойства этих соединений можно легко определить с использованием стандартных биохимических методов,хорошо известных в области техники. Ингибирующие свойства соединений,включенных в область настоящего изобретения,по отношению к катепсину G определяют по 34 следующему методу. Препарат частично очищенного катепсина G человека получают по методике, описанной в статье Baugh и соавт.,Biochemistry 15:836 (1979). Основным источником для получения эластазы лейкоцитов и катепсина G (с химотрипсин-подобной активностью) являются гранулоциты. Лейкоциты подвергают лизису и выделяют гранулоциты. Гранулоциты экстрагируют 0,20 М раствором ацетата натрия, рН 4,0 и экстракты диализуют против 0,05 М трис-буферного раствора, содержащего 0,05 М NaCl, рН 8,0 при 4 С в течение ночи. В процессе диализа белковая фракция выпадает в осадок и ее выделяют центрифугированием. Эта фракция содержит основное количество химотрипсин-подобной активности гранулоцитов. Для каждого фермента получают специфические субстраты, а именно N-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-nнитроанилид иSuc-Ala-Ala-Pro-Рhе-пнитроанилид. Последний не гидролизуется эластазой лейкоцитов. Препараты ферментов анализируют в 2,00 мл 0,10 М буферного раствораHepes, рН 7,5, содержащего 0,50 М NaCl, 10% диметилсульфоксида и в качестве субстрата 0,0020 М Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-п-нитроанилида. Гидролиз субстрата, содержащего п-нитроанилид, контролируют по поглощению при 405 нм и температуре 25 С. Используемый диапазон доз, в случае применения соединений по настоящему изобретению в качестве ингибиторов эластазы нейтрофилов и в качестве ингибиторов катепсинаG, зависит от природы и степени патологического заболевания, которые определяются практикующим диагностом, причем диапазон доз при использовании указанных соединений для лечения вышеупомянутых патологических состояний составляет от 0,01 до 10 мг/кг массы тела в день. Соединения по настоящему изобретению,которые ингибируют урокиназу или активатор плазминогена, могут быть эффективно использованы для лечения патологических состояний,сопровождающихся избыточным ростом клеток. Такие соединения по настоящему изобретению могут быть также использованы при лечении доброкачественной гипертрофии предстательной железы и карциномы предстательной железы, при лечении псориаза и в качестве абортивных средств. Для целевого применения этих соединений эффективность действия и другие биохимические параметры характеристик ингибирующей активности для соединений по настоящему изобретению можно легко определить с использованием стандартных биохимических методов, хорошо известных в области техники. Диапазон действующих доз в случае указанного применения зависит от природы и степени патологического состояния пациента или животного, подлежащего лечению, причем природа и степень заболевания определяется практикующим диагностом. Предполагается, что для дос 35 тижения эффективного терапевтического эффекта диапазон основной дозы составляет от приблизительно 0,01 до 10 мг/кг в день. Дополнительная область применения соединений по настоящему изобретению включает анализ коммерческих ферментативных реагентов для определения концентрации активных центров. Например, химотрипсин выпускается в качестве стандартного реагента для количественного клинического определения активности химотрипсина в соке поджелудочной железы и фекалиях. Такие методы анализа используют для диагноза нарушений в желудочнокишечном тракте и поджелудочной железе. Панкреатическая эластаза также выпускается в качестве реагента для количественного определения 1-антитрипсина в плазме. Концентрация 1-антитрипсина в плазме возрастает в процессе некоторых воспалительных реакций, а недостаточность 1-антитрипсина связана с увеличением частоты заболеваний легких. Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для повышения точности и воспроизводимости таких анализов с помощью титраметрической стандартизации выпускаемых коммерческих препаратов эластазы. См. патент США No 4499082. Активность протеаз в различных белковых экстрактах в процессе очистки определенных белков является широко распространенной проблемой, так как присутствие протеаз усложняет процесс и искажает результаты выделения белка. Некоторые протеазы, содержащиеся в таких экстрактах, можно ингибировать в процессе выделения с помощью соединений по настоящему изобретению, которые прочно связывают различные протеолитические ферменты. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть введены любому животному,на котором можно испытать положительное действие соединений по изобретению. Предпочтительным среди таких животных является человек, хотя область изобретения этим не ограничивается. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть введены любым способом для достижения необходимой цели. Например, способ введения может быть парентеральным, подкожным, внутривенным,внутримышечным, внутрибрюшинным, чрескожным, трансбуккальным или в глазное яблоко. В альтернативном случае или одновременно соединения могут быть введены оральным способом. Вводимая доза зависит от возраста, состояния здоровья и веса пациента, типа одновременного лечения, если такое проводится,частоты лечения и природы ожидаемого эффекта. Новые фармацевтические препараты кроме фармакологически активных соединений могут содержать подходящие фармацевтически при 004180 36 емлемые носители, включающие наполнители и вспомогательные агенты, которые облегчают обработку активных соединений для получения препаратов для фармацевтического применения. Способы получения фармацевтических препаратов по настоящему изобретению сами по себе хорошо известны, например, способы обычного смешивания, гранулирования, получения драже, растворения или лиофилизации. Таким образом, фармацевтические препараты для орального введения могут быть получены путем смешивания активных соединений с твердыми наполнителями, по выбору путем размалывания полученной смеси и обработки смеси гранул, в случае необходимости или по желанию, после добавления вспомогательных агентов для получения таблеток или ядер драже. Подходящими наполнителями прежде всего являются наполнители типа сахаридов, например, лактоза или сахароза, маннит или сорбит, препараты целлюлозы и/или фосфаты кальция, например, фосфат кальция или гидрофосфат кальция, а также связующие вещества, такие как крахмальная паста, например, с использованием маисового крахмала, пшеничного крахмала, рисового крахмала, картофельного крахмала; желатин, трагакант, метилцеллюлоза,гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон. По желанию могут быть добавлены дезинтегрирующие агенты, такие как выше перечисленные крахмалы, а также карбоксиметилированный крахмал, поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия. Вспомогательными агентами прежде всего являются вещества, регулирующие текучесть, и замасливатели, например, кремнезем, тальк, стеариновая кислота и ее соли, такие как стеарат магния или стеарат кальция, и/или полиэтиленгликоль. Ядра драже получают с подходящим покрытием, которое пожеланию может быть устойчивым к желудочным сокам. Для этих целей можно использовать концентрированные растворы сахаридов, которые по выбору могут содержать аравийскую камедь, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана,растворы глазурей и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Для получения покрытий, устойчивых к желудочным сокам, используют подходящие препараты целлюлозы, такие как фталат ацетил целлюлозы или фталат гидроксиметилцеллюлозы. К таблеткам или покрытиям драже могут быть добавлены красители или пигменты, например, для идентификации или характеристики комбинаций доз активных соединений. Другие фармацевтические препараты, используемые для орального введения, включают штампованные капсулы из желатина, а также мягкие герметичные капсулы из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сор 37 бит. Штампованные капсулы могут содержать активные соединения в форме гранул, которые могут быть смешаны с наполнителями, такими как лактоза, связующими веществами, такими как крахмалы, и/или умасливателями, такими как тальк, или стеарат магния, и по выбору стабилизаторами. Для мягких капсул активные соединения предпочтительно растворяют или суспендируют в подходящих жидкостях, таких как растительные (нелетучие) масла или вазелиновое масло. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Подходящие композиции для парентерального введения включают водные растворы активных соединений в водно-растворимой форме, например, водно-растворимые соли, щелочные растворы и циклодекстриновые комплексы включения. Особенно предпочтительными щелочными солями являются соли аммония, полученные, например, в смеси с трис, гидроксидом холина,бис-трис-пропаном,Nметилглюкамином или аргинином. Для стабилизации и увеличения растворимости соединений по настоящему изобретению в воде могут быть использованы один или более модифицированных или немодифицированных циклодекстринов. Использованные для этой цели циклодекстрины описаны в патентах США N 4727064, N 4764604 и N 5024998. Кроме того, активные соединения могут быть введены в виде соответствующих масляных суспензий для инъекций. Подходящими липофильными растворителями или наполнителями являются растительные масла, например,кунжутное масло, или синтетические эфиры жирных кислот, например, этилолеат или триглицериды или полиэтиленгликоль-400 (соединения растворимы в ПЭГ-400). Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества для повышения вязкости суспензии, например, натрий карбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. По выбору суспензия может содержать стабилизаторы. В соединения формулы VII можно ввести метку в виде радиоактивного иода, как описано ниже в примере 3 или с использованием реакции обмена. Обмен холодного иода на горячий иод является известным способом в данной области техники. По альтернативному способу,меченное радиоактивным иодом соединение можно получить из соответствующего бромзамещенного соединения через промежуточное трибутилстаннил-производное. См. патент США No 5122361, включенный в текст данного описания. Настоящее соединение включает также композиции, которые используют для получения изображения тромбов in vivo у млекопитающих, причем композиции включают соединение формулы VII в составе комплекса с радиоактивным атомом. 38 Подходящими радиоактивными атомами для соединений формулы VII являются Со-57,Cu-67, Ga-67, Ga-68, Ru-97, Tc-99m, In-111, In113m, Hg-197, Au-198 и Pb-203. Идеальным радиоактивным атомом для получения изображения прежде всего является технеций-99m (Tc99m) благодаря свойствам его ядра. Этот атом является гамма-излучателем и характеризуется единой энергией фотона, равной 140 кэВ, и периодом полураспада приблизительно 6 ч. Tc99m легко получить с использованием генератора Мо-99/Тс-99. Рений-186 и -188 также характеризуется гамма-излучением, что позволяет использовать этот атом для получения изображения. Предпочтительные композиции содержат радиоактивный атом, Tc-99m. Композиции по настоящему изобретению обычно получают путем заполнения соединения формулы VII радиоактивными изотопами, подходящими для детектирования за пределами тела. Для получения композиции по настоящему изобретению в соединения формулы VII можно ввести метку с использованием любого из методов, широко известных в данной области техники. Например, ввести метку в эти соединения можно с помощью хелатного агента, такого как диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA) или металлотионеин, которые могут быть ковалентно связаны с соединением формулы VII. В основном, композиции по настоящему изобретению, содержащие технеций-99m, получают путем образования водной смеси технеция-99m, восстанавливающего агента и воднорастворимого лиганда с последующим контактированием смеси с соединением по настоящему изобретению формулы VII. Например, соединения для получения изображения по настоящему изобретению получают путем взаимодействия технеция-99m (в окисленном состоянии) с соединением по настоящему изобретению, содержащим хелатную группу, в присутствии восстанавливающего агента, при этом образуется стабильный комплекс между соединением и технецием-99m в восстановленном состоянии (до валентности IV или V). Согласно одному варианту воплощения изобретения композицию по настоящему изобретению получают путем введения метки технеция-99m, в соединение формулы VII, содержащее хелатную группу DTPA. Эту операцию проводят путем смешивания предварительно определенного количества (от 5 мкг до 0,5 мг) соединения по настоящему изобретению с водным раствором, содержащим цитратный буфер и восстанавливающий агент на основе двухвалентного олова, затем добавляют свежеполученный пертехнетат натрия, содержащий предварительно определенный уровень радиоактивности (например, 15 мКи). После инкубирования при комнатной температуре реакционную смесь заливают в экранированный шприц 39 через стерильный фильтр (0,2-0,22 мкм), затем при необходимости смесь распределяют в 0,9% раствор хлористого натрия для инъекций. Согласно другому варианту воплощения изобретения композицию по настоящему изобретению получают путем введения метки технеция-99m, в соединение формулы VII, содержащее хелатные группы - металлотионеин. Эту операцию проводят путем смешивания водного раствора пертехнетата-99m натрия с водным раствором глюкогептоната олова, при этом образуется растворимый комплекс технеция 99m (в восстановленном состоянии) с двумя молекулами глюкогептоната, затем этот раствор смешивают с раствором соединения формулыVII, содержащим ковалентно связанный металлотионеин. После инкубирования смеси в течение определенного периода времени и в условиях, обеспечивающих перенос технеция-99m из глюкогептонатного комплекса в металлотионеин-содержащее соединение формулы VII, образуется меченная технецием композиция по настоящему изобретению. Источник технеция-99m должен быть предпочтительно водно-растворимым. Предпочтительными источниками являются пертехнетаты (ТсO4-) щелочных и щелочно-земельных металлов. Наиболее предпочтительным способом получения технеция-99m является свежий раствор пертехнетата натрия из стерильного генератора технеция-99m (например, из обычного генератора Мо-99/Тс-99m). Однако можно использовать любой другой источник физиологически приемлемого технеция-99m. Восстанавливающими агентами, используемыми в способе, являются физиологически приемлемые агенты для восстановления технеция-99m из его окисленной формы до валентности IV или V или для восстановления окисленной формы рения. В качестве восстанавливающих агентов могут быть использованы хлорид олова, фторид олова, глюкогептонат олова, тартрат олова и дитионит натрия. Предпочтительными агентами являются восстанавливающие агенты на основе двухвалентного олова, прежде всего хлорид олова или глюкогептонат олова. Например, хлорид олова (SnCl2) может быть использован в качестве восстанавливающего агента в диапазоне концентраций от 1 до 1000 мкг/мл. Особенно предпочтительный диапазон концентраций составляет приблизительно от 30 до 500 мкг/мл. При взаимодействии лимонной кислоты с технецием-99m с высокой скоростью образуются стабильные комплексы технеций-99m-цитрат. При контакте с соединением формулы VII происходит быстрый и практически количественный перенос технеция-99m из цитратного комплекса в хелатную группу соединения формулыVII в мягких условиях. Количество лимонной кислоты (в форме цитрата натрия) может находиться в диапазоне от приблизительно 0,5 мг/мл 40 до максимально растворимого в среде количества. Предпочтительный диапазон концентраций лимонной кислоты составляет от 15 до 30 мкг/мл. Количество соединения формулы VII, содержащего хелатную группу, может варьировать в диапазоне от 0,001 до приблизительно 3 мг/мл, предпочтительно от приблизительно 0,017 до приблизительно 0,15 мг/мл. В конечном итоге, технеций-99m в форме пертехнетата может быть использован в количестве, которое предпочтительно составляет приблизительно от 1 до 50 мКи. Количество радиоактивности в единицах мКи на мг соединения по настоящему изобретению составляет предпочтительно от 30 до 150. В альтернативном способе композиции по настоящему изобретению включают соединение по настоящему изобретению, меченное In-111. Настоящее изобретение также включает композиции соединений по настоящему изобретению, которые используют для получения изображения тромбов in vivo у млекопитающих,причем композиции содержат соединение формулы VII в форме комплекса с парамагнитным атомом. Предпочтительными парамагнитными атомами являются двухвалентные или трехвалентные ионы элементов с атомными номерами 21-29, 42, 44 и 58-70. Подходящие ионы включают хром (III), марганец (II), железо (III), железо (II), кобальт (II), никель (II), медь (II), празеодим (III), неодим (III), самарий (III) и иттербий(III). Предпочтительными элементами, благодаря характерным для них сильным магнитным моментом, являются гадолиний (III), тербий(III), диспрозий (III), гольмий (III) и эрбий (III). Особенно предпочтительным парамагнитным атомом является гадолиний (III). Композиции по настоящему изобретению могут быть получены путем смешивания соединения формулы VII с парамагнитным атомом. Например, оксид металла или соль металла (например, нитрат, хлорид или сульфат) подходящего парамагнитного атома растворяют или суспендируют в среде, содержащей воду и спирт, такой как метиловый, этиловый или изопропиловый спирт. Эту смесь добавляют к раствору эквимолярного количества соединения формулы VII в аналогичной водной среде и перемешивают. Затем реакционную смесь слабо нагревают до завершения реакции. При образовании нерастворимых композиций их выделяют фильтрованием, в то время как растворимые композиции выделяют упариванием растворителя. Если кислотные группы еще остаются в составе хелатного остатка в композиции по настоящему изобретению, то для упрощения процессов выделения и очистки гомогенной композиции в исходную композицию можно добавить неорганические или органические основания и даже аминокислоты для превращения кислого 41 комплекса в нейтральный. В качестве нейтрализующих агентов можно использовать органические основания или основные аминокислоты, а также неорганические основания, такие как гидроксиды, карбонаты или бикарбонаты натрия, калия или лития. Настоящее изобретение включает также диагностические композиции, которые используют для получения изображения in vivo тромбов у млекопитающих, причем композиции включают фармацевтически приемлемый носитель и диагностически эффективное количество радиоактивно-меченного соединения формулыVII. Композиции, такие как описанные выше,могут быть использованы обычным способом в этих диагностических композициях."Диагностически эффективное количество" композиции, которое необходимо использовать в виде дозы, зависит от способа введения,рода млекопитающего, подлежащего лечению, и физических характеристик определенного изучаемого млекопитающего. Эти факторы и их взаимосвязь для определения указанной дозы хорошо известны для практикующих специалистов в данной области медицинской диагностики. Диагностически эффективное количество и способ введения могут также подобраны для достижения оптимальной эффективности, однако, эти факторы зависят от таких характеристик,как вес, диета, сопутствующее лечение и другие параметры, известные для специалистов в области медицины. В любом случае, доза для получения изображения должна быть достаточной для детектирования присутствия агента для получения изображения в месте локализации исследуемого тромба. Обычно для получения рентгенологического изображения требуется доза, обеспечиваемая фармацевтической композицией по настоящему изобретению и равная приблизительно от 5 до 20 мКи, предпочтительно приблизительно 10 мКи. Для получения магнитно-резонансного изображения требуется доза соединения формулы VII в составе комплекса с парамагнитным атомом, равная приблизительно от 0,001 до 5 ммоль/кг, предпочтительно от приблизительно 0,005 до 0,5 ммоль/кг соединения формулы VII в составе комплекса с парамагнитным атомом. В любом случае специалистам в данной области медицины известно, что действующая доза зависит от локализации тромба."Фармацевтически приемлемые носители" для применения in vivo хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в книге Remington's Pharmaceutical Sciences (Фармацевтические науки Ремингтона), Mack Publishing Co. (ред. A.R.Gennaro, 1985). Настоящее изобретение включает также диагностические композиции для хранения или введения. Такие композиции могут, кроме того,содержать консерванты, стабилизаторы и красители. Например, в качестве консервантов могут 42 быть добавлены бензоат натрия, сорбиновая кислота и эфиры п-гидроксибензойной кислоты. Идентификационный номер At 1449. Кроме того, могут быть использованы антиоксиданты и суспендирующие агенты. Способы получения изображения по настоящему изобретению также обладают рядом преимуществ по сравнению с известными ранее методами получения изображения, предназначенными для детектирования или контроля присутствия, размера, уменьшения или увеличения тромба. Прежде всего, в настоящем изобретении разработаны соединения, композиции и диагностические композиции, которые чрезвычайно прочно связываются с тромбином, ассоциированным с тромбом, и тем самым снижают"фон", который возникает благодаря циркуляции радиоактивности или парамагнитного излучения, связанных со свободным агентом для получения изображения. Более того, следует ожидать, что изображение in vivo путем внутрикоронарной инъекции соединений, композиций и диагностических композиций по настоящему изобретению будет получено практически мгновенно, так как эти агенты для получения изображения немедленно насыщают тромбин, ассоциированный с тромбом. В связи с этим, настоящее изобретение включает также способы получения изображения in vivo тромба у млекопитающих, включающие следующие стадии: (1) введение млекопитающему диагностически приемлемого количества соединения, композиции или диагностической композиции по настоящему изобретению и (2) детектирование тромба в кровеносном сосуде. Согласно этому способу использования соединений, композиций или диагностических композиций in vivo, "введение" осуществляют парентерально либо системным способом, либо местно-целевым способом. Системное введение осуществляют путем инъекции соединений,композиций и диагностических композиций по настоящему изобретению в обычную и доступную вену или артерию. Способ включает (но не ограничивает область изобретения) введение в локтевую вену. Местно-целевое введение осуществляют путем инъекции соединений, композиций или диагностических композиций по настоящему изобретению в кровоток, соседний с веной или артерией, в которых предполагается наличие тромба, отдаленного от места инъекции. Этот способ включает, но не ограничивает область изобретения, прямое введение в коронарную артериальную сосудистую сеть для получения изображения коронарного тромба, в сонную артерию для получения изображения тромбов в церебральной сосудистой сети или в вену стопы для получения изображения тромбоза глубокой вены ноги. Способ доставки композиции по настоящему изобретению к месту локализации тромба 43 можно рассматривать в пределах термина "введение". Например, соединение формулы VII,содержащее присоединенные хелатные группы,может быть введено млекопитающему через некоторое время после введения радиоактивного атома, при этом в месте локализации тромба образуется in vivo комплекс соединения формулы VII с радиоактивным атомом. По альтернативному способу млекопитающему вводят композицию, содержащую соединение формулы VII в составе комплекса с радиоактивным атомом. Детектирование тромба путем получения его изображения становится возможным в присутствии радиоактивных или парамагнитных атомов, локализованных в месте образования тромба. Изображение радиоактивных атомов, связанных с композициями и диагностическими композициями по настоящему изобретению получают предпочтительно с использованием устройств для определения радиоактивности, которые созданы для определения гамма-излучения,таких как камеры для детектирования гаммаизлучения или т.п. Обычно в камерах для получения рентгенологического изображения используют конверсионную среду (в которой поглощается гамма-излучение высокой энергии,при этом происходит вытеснение электрона,испускающего фотон после возвращения в орбитальное состояние), фотоэлектрические детекторы, расположенные в камере для пространственного детектирования (для определения положения испускаемых фотонов) и электронную схему для анализа фотонов, обнаруженных в камере, и для получения изображения. Парамагнитные атомы, связанные с композициями или диагностическими композициями по настоящему изобретению, детектируют в системах для получения магнитно-резонансного изображения (MRI). В таких системах используют сильное магнитное поле, чтобы синхронизировать векторы ядерных спинов атомов в теле пациента. В присутствии парамагнитных атомов, локализованных в месте образования тромба, поле искажается, и таким образом получают изображение тела пациента в процессе возвращения ядер в состояния их равновесной синхронизации. Следующие примеры приведены для иллюстрации, без ограничения области изобретения, способа и композиций по настоящему изобретению. Для специалистов в данной области техники представляются очевидными другие подходящие модификации и изменения ряда условий и параметров, которые находятся в области изобретения и не изменяют сути изобретения. Пример 1. Трифторацетат 3-бензилсульфониламино-6-метил-1-[(3-гуанидинооксипропил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона. 1. 3-Бензилоксикарбониламино-6-метил-2 пиридинон. Дифенилфосфорилазид (11,9 мл, 55 ммоль) добавляют к раствору 2-гидрокси-6-метилпиридин-3-карбоновой кислоты (7,65 г, 50 ммоль) и триэтиламина (7,7 мл, 55 ммоль) в сухом диоксане (100 мл), полученный раствор нагревают и кипятят с обратным холодильником. Через 16 ч добавляют триэтиламин (7,7 мл, 55 ммоль) и бензиловый спирт (5,7 мл, 50 ммоль) и раствор кипятят с обратным холодильником в течение следующих 24 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и осадок распределяют между метиленхлоридом (200 мл) и солевым раствором (100 мл), подкисленным до рН 1 при помощи 10%-ного раствора HCl. Органический слой промывают насыщенным растворомNаНСО 3 (2 х 100 мл), солевым раствором (100 мл), сушат над Na2SO4 и отфильтровывают. После упаривания растворителя в вакууме к остатку добавляют метанол (100 мл) и гексан (20 мл),твердое вещество собирают, промывают метанолом (50 мл) и сушат, при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (7,2 г, 56%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)12,82 (s,1H),8,06 (d, J=7,0 Гц, 1 Н), 7,69 (s, 1 Н), 7,42 (m, 5H),6,09 (d, J=7,5 Гц, 1 Н), 5,22 (s, 2H), 2,32 (s, 3H). 2. 3-Бензилоксикарбониламино-6-метил-1(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинон. К суспензии 3-бензилоксикарбониламино 6-метил-2-пиридинона (5,15 г, 20 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии,добавляют при перемешивании трет-бутилбромацетат (3,9 г, 20 ммоль) и Сs2CO3 (6,5 г, 20 ммоль) в N,N-диметилформамиде (50 мл), полученную смесь перемешивают в течение ночи при 40 С. Твердое вещество удаляют фильтрованием и фильтрат концентрируют в высоком вакууме. Остаток растворяют в этилацетате (150 мл), промывают водой (2 х 50 мл), солевым раствором (50 мл), сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают при помощи экспресс-хроматографии (25% этилацетат в гексане), при этом получают конечный продукт в виде твердого кристаллического вещества белого цвета (4,2 г, 56%). 1H-ЯМР (300 МГц, СDСl3)7,95 (d, J=7,3 Гц, 1 Н), 7,76 (s, 1H), 7,37 (m, 5H), 6,09 (d, J=7,6 Гц, 1H), 5,19 (s, 2 Н), 4,75 (s, 2 Н), 2,32 (s, 3 Н),1,47 (s, 9H). 3. 3-Амино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинон. Смесь 3-бензилоксикарбониламино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (4,1 г, 11 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, и 10%-ного раствораPd/C (400 мг) в этаноле (100 мл) гидрируют в токе водорода (из баллона) в течение 1,5 ч. Катализатор удаляют фильтрованием через целит и фильтрат концентрируют, при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (2,55 г, 97%). 1(s, 3H), 1,47 (s, 9H). 4. 3-Бензилсульфониламино-6-метил-1(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинон. К раствору 3-амино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (960 мг, 4,0 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, и N-метилморфолина (840 мкл, 8,0 ммоль) в хлористом метилене (40 мл) при 0 С добавляют -толуолсульфонилхлорид (765 мг,4,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч. Затем добавляют дополнительную порцию хлористого метилена (50 мл). Полученный раствор промывают насыщенным раствором NаНСО 3 (2 х 50 мл), 10% лимонной кислотой (3 х 50 мл) и солевым раствором(50 мл) и сушат над Na2SO4. Растворитель концентрируют до образования твердого вещества,которое промывают смесью этилацетат:гексан(1:2, 60 мл) при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (1,4 г, 89%). 1H-ЯМР (300 МГц, СDСl3)7,35 (d, J=7,5 Гц, 1 Н), 7,31 (m, 5H), 7,20 (s, 1 Н), 6,02 (d, J=7,4 Гц, 1H), 4,75 (s,2H), 4,31 (s, 2H), 2,27 (s, 3 Н),1,51 (s, 9H). 5. 3-Бензилсульфониламино-6-метил-1 карбоксиметил-2-пиридинон. Через перемешиваемую суспензию 3 бензилсульфониламино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (1,4 г, 3,57 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, в этилацетате (15 мл) при 0 С пропускают газообразный HCl до получения раствора. Через 2 ч при комнатной температуре образуется густая суспензия. Смесь дегазируют в токе азота и отфильтровывают, при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (1,1 г, 92%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)8,67 (s, 1H),7,34 (m, 5H), 7,12 (d, J=7,5 Гц, 1H), 6,10 (d, J=7,6 Гц, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 2,26 (s, 3H). 6. 3-(Бензилоксикарбониламино)-1-пропанол. К раствору 3-амино-1-пропанола (3,75 г, 50 ммоль) в хлористом метилене (40 мл) при 0 С медленно добавляют бензилхлорформиат (3,4 г,20 ммоль) в хлористом метилене (10 мл), и смесь перемешивают в течение 3 ч при 0 С. Затем добавляют хлористый метилен (50 мл), раствор промывают 10% лимонной кислотой (3 х 50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушат надNa2SO4. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают фильтрованием через 46 силикагель(этилацетат:гексан, 1:1), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (4,05 г, 97%). 1H-ЯМР (300 МГц, СDCl3)7,34 (m, 5H),5,17 (ушир. s, 1H), 5,10 (s, 2H), 3,66 (t, J=5,8 Гц,2H), 3,33 (t, J=6,1 Гц, 2H), 2,63 (ушир. s, 1H),1,69 (пентет, J=6,1 Гц, 2H). 7. N-[3-Бензилоксикарбониламино)-1-пропокси]фталимид. К раствору 3-(бензилоксикарбониламино)1-пропанола(4,0 г, 19 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, N-гидроксифталимида (3,26 г, 20 ммоль) и трифенилфосфина (5,25 г, 20 ммоль) в тетрагидрофуране (80 мл) добавляют диэтиловый эфир азодикарбоновой кислоты (3,5 г, 20 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляют этилацетат (200 мл) и раствор промывают насыщенным раствором NаНСО 3 (2 х 100 мл), солевым раствором (100 мл) и сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают экспресс-хроматографией (градиент: хлористый метилен - до 4% этилацетата в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (6,85 г,100%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)7,83 (m, 2 Н),7,77 (m, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,67 (ушир. s, 1H),5,12 (s, 2H), 4,28 (t, J=5,8 Гц, 2H), 3,51 (q, J=6,1 Гц, 2H), 1,99 (пентет, J=6,0 Гц, 2H). 8. 3-(Бензилоксикарбониламино)-1-пропоксиамин. К раствору N-[3-(бензилоксикарбониламино)-1-пропокси]фталимида (1,42 г, 4,0 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, в этаноле (20 мл) и тетрагидрофуране (20 мл) добавляют 40% метиламина (2 мл,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Раствор упаривают и остаток пропускают через силикагель (градиент: этилацетат: гексан, 3:1 этилацетат), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (870 мг, 97%).[N,N'-Ди(трет-бутоксикарбонил)]-3(бензилоксикарбониламино)-1-пропоксигуанидин. К раствору 3-(бензилоксикарбониламино)1-пропоксиамина (860 мг, 3,84 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, в[N,N'-ди(третбутоксикарбонил)]амидинопиразол (1,25 г, 4,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, растворитель упаривают в высоком вакууме, и осадок 47 очищают экспресс-хроматографией (градиент: 0-5% этилацетат в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде бесцветного масла (1,60 г, 89%). 1[N,N'-Ди(трет-бутоксикарбонил)]-3 амино-1-пропоксигуанидин. Смесь [N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)]-3(бензилоксикарбониламино)-1-пропоксигуанидина (760 мг, 1,7 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, и 10% Pd/C (80 мг) в этаноле (20 мл) и в тетрагидрофуране (20 мл) гидрируют в токе водорода (из баллона) в течение 30 мин. Катализатор удаляют фильтрованием через целит, фильтрат концентрируют в вакууме, и остаток очищают на колонке WatersSep-Pak (10 г, хлористый метилен:метанол, насыщенный аммиаком, в соотношении 95:5), при этом получают конечный продукт в виде бесцветного масла (160 мг, 28%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)4,12 (t, J=6,1 Гц, 2 Н), 2,85 (t, J=6,7 Гц, 2 Н), 1,84 (пентет, J=6,2 Гц, 2 Н), 1,50 (s, 9H), 1,48 (s, 9H). 11. 3-Бензилсульфониламино-6-метил-1[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)]-[(3-гуанидинооксипропил)аминокарбонилметил]-2 пиридинон. К раствору 3-бензилсульфониламино-6 метил-1-карбоксиметил-2-пиридинона (152 мг,0,45 ммоль), полученного, как указано на стадии 5, [N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)]-3-амино-1 пропоксигуанидина (150 мг, 0,45 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, и диизопропилэтиламина (90 мкл, 0,5 ммоль) вN,N-диметилформамиде (10 мл) добавляют реактив Кастро (ВОР) (221 мг, 0,5 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют этилацетат (100 мл),раствор промывают насыщенным растворомNаНСО 3 (2 х 50 мл), 10%-ным раствором лимонной кислоты (2 х 50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают на колонке Waters Sep-Pak (10 г, этилацетат:гексан, в соотношении 4:1), при этом получают конечный продукт в виде бесцветной пены (270 мг, 92%). 1 Н-ЯМР (300 МГц, СDСl3)9,02 (s, 1 Н),8,70 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,27 (t, J=5,6 Гц, 1H),7,34 (m, 5 Н), 7,12 (d, J=7,6 Гц, 1H), 6,08 (d, J=7,7 Гц, 1H), 4,70 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 3,88 (t, J=6,3 Гц, 2H), 3,18 (t, J=6,4 Гц, 2H), 2,24 (s, 3H), 1,75 48 динооксипропил)аминокарбонилметил]-2 пиридинона (130 мг, 0,2 ммоль), полученного,как указано на предыдущей стадии, и трифторуксусной кислоты (2 мл) в хлористом метилене(5 мл) перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают на колонкеWaters Sep-Pak (10 г, 10% метанол в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде бесцветной пены (55 мг, 61%). 1(пентет, J=6,5 Гц, 2H). Масс-спектр MALDI-TOF (MC - MALDITOF: время пролетный МС с ионизацией лазерной десорбцией) 1. N-[2-(Бензилоксикарбониламино)этокси]фталимид. К раствору бензил N-(2-гидроксиэтил) карбамата (5,9 г, 30 ммоль), N-гидроксифталимида (4,9 г, 30 ммоль) и трифенилфосфина (7,9 г, 30 ммоль) в тетрагидрофуране (100 мл) добавляют диэтиловый эфир азодикарбоновой кислоты (5,2 г, 30 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляют этилацетат (200 мл), раствор промывают насыщенным раствором NaHCO3 (2 х 100 мл) и солевым раствором(100 мл) и сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя остаток очищают экспрессхроматографией (градиент: хлористый метилен- 4% этилацетата в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (9,3 г, 91%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)7,84 (m, 2H),7,78 (m, 2 Н), 7,37 (m, 5H), 5,97 (ушир.s, 1 Н),5,14 (s, 2H), 4,27 (t, J=4,9 Гц, 2H), 3,51 (q, J=5,2 Гц, 2H). 2. 2-(Бензилоксикарбониламино)этоксиамин. К раствору N-[2-(бензилоксикарбониламино)этокси]фталимида (1,36 г, 4,0 ммоль),полученного, как указано на предыдущей стадии, в этаноле (20 мл) и тетрагидрофуране (20 мл) добавляют 40% метиламина (2 мл, 25 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После упаривания растворителя остаток фильтруют через силикагель (градиент: этил 49 ацетат:гексан, 3:1- этилацетат), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (800 мг, 95%). 1[N,N'-Ди(трет-бутоксикарбонил)]-2(бензилоксикарбониламино)этоксигуанидин. К раствору 2-(бензилоксикарбониламино) этоксиамина (780 мг, 3,7 ммоль), полученного,как описано на предыдущей стадии, в N,Nдиметилформамиде (20 мл) добавляют [N,N'ди(трет-бутоксикарбонил)]амидинопиразол(1,25 г, 4,0 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, растворитель упаривают в высоком вакууме. Остаток очищают экспресс-хроматографией (градиент 0-5% этилацетата в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде бесцветного масла (1,55 г, 93%). 1(730 мг, 1,5 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, и 10% Pd/C (70 мг) в этаноле (20 мл) и тетрагидрофуране (20 мл) гидрируют в токе водорода (из баллона) в течение 30 мин. Катализатор удаляют фильтрованием через целит, и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток очищают на колонке Waters Sep-Pak (10 г, хлористый метилен: метанол, насыщенный аммиаком, 95:5), при этом получают конечный продукт в виде бесцветного масла (290 мг, 61%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)9,08 (ушир. s,1 Н), 4,08 (t, J=5,2 Гц, 2 Н), 2,99 (q, J=5,1 Гц, 2H),1,50(s, 9 Н), 1,48(s, 9H). 5. 3-Бензилсульфониламино-6-метил-1[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][2-(гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2 пиридинон. К раствору 3-бензилсульфониламино-6 метил-1-карбоксиметил-2-пиридинона (152 мг,0,45 ммоль), полученного, как описано на стадии 5 в примере 1, [N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)]-2-аминоэтоксигуанидина (143 мг, 0,45 ммоль), полученного, как описано на предыдущей стадии, диизопропилэтиламина (90 мкл, 0,5 ммоль) в N,N-диметилформамиде (10 мл) добавляют реактив Кастро (ВОР) (221 мг, 0,5 ммоль). Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляют этилацетат (100 мл), раствор промывают насыщенным раствором NаНСО 3 (2 х 50 мл), 10%ным раствором лимонной кислоты (2 х 50 мл) и солевым раствором (50 мл) и сушат над Nа 2SO4. После упаривания растворителя в вакууме оста 004180 50 ток очищают на колонке Waters Sep-Pak (10 г,этилацетат: гексан, 4:1), при этом получают конечный продукт в виде бесцветной пены (270 мг, 94%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)9,22 (s, 1 Н),8,41 (t, J=5,0 Гц, 1 Н), 8,02 (s, 1 Н), 7,62 (s, 1 Н),7,34 (s, 1 Н), 7,29 (m, 5H), 5,99 (d, J=7,7 Гц, 1 Н),4,89 (s, 2H), 4,31 (s, 2H), 4,13 (t, J=5,0 Гц, 2H),3,62 (q, J=5,1 Гц, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,52 (s, 9H),1,48 (s, 9H). 6. Трифторацетат 3-бензилсульфониламино-6-метил-1-[(2-гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона. Смесь 3-бензилсульфониламино-6-метил 1-[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][(2-гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона (255 мг, 0,4 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, и трифторуксусной кислоты (4 мл) в хлористом метилене (8 мл) перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают на колонке WatersSep-Pak (10 г, 10% метанол в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде бесцветной пены (160 мг, 92%). 1 а. Раствор амина 1 (0,025 г, 0,052 ммоль) в дихлорметане (2 мл) обрабатывают диэтиламиноэтилполистирольной смолой (Fluka, 0,033 г,0,098 ммоль) и 4-иодбензолсульфонилхлоридом(0,03 г, 0,1 ммоль). Смесь встряхивают при температуре окружающей среды в течение 5 ч, затем добавляют аминометилполистирольную смолу (Adv. Chem. Tech., 0,1 г, 0,2 ммоль) для поглощения избытка сульфонилхлорида. Добавляют дихлорметан (2 мл), и смесь встряхивают в течение ночи. Реакционную смесь, содержащую смолы, наносят на колонку с силикагелем (5 гSepPak) и элюируют в градиенте 10-50% этилацетата в дихлорметане. Соответствующие фракции собирают и упаривают досуха на приборе Savant. MC MALDI-TOF (матрикс- 51 циано-4-гидроксикоричная кислота), рассчитано для C27H37N6O9SI-2t-Boc: 549,1, найдено 549,3.(1 мл) при температуре окружающей среды и встряхивают в течение 4 ч. Дихлорметан удаляют на приборе Savant и остаток очищают на колонке с силикагелем (5 г SepPak) путем элюции 5%-ным метанолом в дихлорметане. Соответствующие фракции объединяют и упаривают досуха, при этом получают 19,6 мг (69% после двух стадий) соединения 3 в виде смолы. 1(содержащий холодный иод) может быть заменен на [I-125]-п-иодбензолсульфонилхлорид (А.S. Keston et al., J. Amer. Chem. Soc. 68:1390,1946), при этом получают соединение 3, меченое I-125. Пример 4. Трифторацетат 3-бензилсульфониламино 1-[(2-гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона.N-метилморфолина (1,5 мл, 10,0 ммоль) в хлористом метилене (40 мл) при 0 С добавляют толуолсульфонилхлорид (950 мг, 5,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0 С. Затем добавляют хлористый метилен(50 мл). Полученный раствор промывают насыщенным раствором NаНСО 3 (2 х 50 мл), 10%ным раствором лимонной кислоты (3 х 50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушат над Na2SO4,фильтруют и фильтрат концентрируют, получают твердое вещество, которое промывают смесью этилацетат:гексан (1:2, 60 мл), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (1,8 г, 96%).H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)7,42 (ушир. s,1H), 7,36 (d, J=7,3 Гц, 1H), 7,31 (m, 5H), 6,92 (d,J=7,0 Гц, 1 Н), 6,14 (t, J=7,2 Гц, 1H), 4,58 (s, 2H),4,34 (s, 2H), 1,51 (s, 9 Н). 2. 3-Бензилсульфониламино-1-карбоксиметил-2-пиридинон. Через суспензию 3-бензилсульфониламино-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (1,7 г, 4,5 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, в этилацетате (15 мл) при перемешивании при 0 С пропускают газообразный HCl до получения раствора. Через 2 ч при комнатной температуре образуется густая суспензия. Смесь дегазируют в токе азота и фильтруют, при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (1,4 г, 97%). 1(трет-бутоксикарбонил)][(2-гуанидинооксиэтил) аминокарбонилметил]-2-пиридинон. К раствору 3-бензилсульфониламино-1 карбоксиметил-2-пиридинона (129 мг, 0,4 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, [N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)]-2 аминоэтоксигуанидина (143 мг, 0,45 ммоль),полученного, как описано на стадии 4 в примере 2, диизопропилэтиламина (90 мкл, 0,5 ммоль) вN,N-диметилформамиде (10 мл) добавляют реактив Кастро (ВОР) (221 мг, 0,5 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют этилацетат (100 мл),раствор промывают насыщенным растворомNаНСО 3 (2 х 50 мл), 10%-ным раствором лимонной кислоты (2 х 50 мл), солевым раствором (50 мл) и сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают на колонке Waters Sep-Pak (10 г, этилацетат: гексан,4:1), при этом получают конечный продукт в виде бесцветной пены (170 мг, 68%). 1(s, 9H). 4. Трифторацетат 3-бензилсульфониламино-1-[(2-гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона. Смесь 3-бензилсульфониламино-1-[N,N'ди(трет-бутоксикарбонил)][(2-гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона (155 мг, 0,25 ммоль) полученного, как указано на предыдущей стадии, и трифторуксусной кислоты (2 мл) в хлористом метилене (3 мл) перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают на колонке Waters Sep-Pak (10 53 г, 10% метанол в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде бесцветной пены (160 мг, 92%). 1 1. 3-(3-Метилфенилсульфонил)амино-6 метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинон. К раствору 3-амино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (1,42 г, 5,88 ммоль), полученного как описано на стадии 3 в примере 1, и N-метилморфолина (1,29 мл, 11,76 ммоль) в хлористом метилене (40 мл) добавляют 3-метилбензолсульфонилхлорид (1,12 г, 5,88 ммоль) при 0 С. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляют хлористый метилен (60 мл). Полученный раствор промывают насыщенным раствором NaHCO3 (2 х 50 мл), 10%-ным раствором лимонной кислоты (3 х 50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя остаток очищают экспресс-хроматографией (градиент: от 5 до 10% этилацетат в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета (2,1 г, 91%). 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)7,63 (m, 2H),7,55 (ушир. s, 1H), 7,42 (d, 1H, J=8 Гц), 7,32 (m,2H), 6,01 (d, 1H, J=8 Гц), 4,64 (s, 2H), 2,37 (s,3H), 2,20 (s, 3H), 1,43 (s, 9H). 2. 3-(3-Метилфенилсульфонил)амино-6 метил-1-карбоксиметил-2-пиридинон. Через суспензию 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (2,0 г, 5,09 ммоль), полученного, как описано на предыдущей стадии, в этилацетате (50 мл) при перемешивании при 0 С пропускают газообразный HCl до получения раствора. При нагревании в течение более 2 ч до комнатной температуры образуется густая суспензия. Смесь дегазируют в токе азота и фильтруют, при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета(1,26 г, 3,75 ммоль), полученному, как указано на предыдущей стадии, гидрохлорида [N,N'ди(трет-бутоксикарбонил)]-2-амино-1-этоксигуанидина (1,33 г, 3,75 ммоль), полученного, как указано на стадии 4 в примере 2, и диизопропилэтиламина (1,29 г, 10,0 ммоль) в N,Nдиметилформамиде (30 мл) добавляют реактив Кастро (ВОР) (2,0 г, 4,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют этилацетат (150 мл), раствор промывают насыщенным раствором NаНСО 3 (2 х 50 мл), 10%-ным раствором лимонной кислоты (2 х 50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя в вакууме остаток дважды очищают колоночной хроматографией (этилацетат: гексан, 1:1; затем 2% метанол в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета(s, 2H), 4,10 (t, J=5,3 Гц, 2H), 3,59 (q, J=5,4 Гц,2H), 2,38 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,55 (s, 9H), 1,45 (s,9H). 4. Трифторацетат 3-(3-метилфенилсульфонил)амино-6-метил-1-[(2-гуанидинооксиэтил) аминокарбонилметил]-2-пиридинона. Смесь 3-(3-метилфенилсульфонил)амино 6-метил-1-[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][(2 гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2 пиридинона (2,24 г, 3,44 ммоль), полученного,как указано на предыдущей стадии, и трифторуксусной кислоты (10 мл) в хлористом метилене (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. После упаривания растворителя в вакууме остаток очищают колоночной хроматографией (10% метанол в хлористом метилене), при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества белого цвета. 1 55 аминокарбонилметил]-2-пиридинона (2,75 г, 5,0 ммоль), полученного, как указано на предыдущей стадии, обрабатывают водой (10 мл) и солевым раствором (80 мл). С помощью 20%-ного раствора хлористоводородной кислоты рН смеси доводят до 1, полученную смесь перемешивают до образования кристаллического продукта. Осадок собирают фильтрованием, дважды промывают ледяной водой и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 45 С в течение двух дней, при этом получают конечный продукт в виде твердого вещества серо-белого цвета (2,25 г, 95%). Т. пл. 177-179 С. 1 Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6)11,1 (s,1H), 9,3 (s, 1H), 8,6 (t, J=7,5 Гц, 1H), 7,75 (ушир. Конечный продукт получают из 3-бензилоксикарбониламино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона,полученного,как описано на стадии 2 в примере 1, с использованием методики, описанной на стадии 5 в примере 1 и на стадиях 5 и 6 в примере 2. 1 1. 1-(Бензилоксикарбониламино)циклопропанметанол. К раствору 1-(бензилоксикарбониламино)циклопропанкарбоновой кислоты (500 мг, 2,1 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) при 0 С добавляют B2H6TГФ (1M, 2,1 мл, 2,1 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, обрабатывают К 2 СО 3 (1,0 г в 5 мл H2O) и экстрагируют хлористым метиленом (3 х 10 мл). Органический слой промывают солевым раствором (10 мл) и сушат над Na2SO4. После упаривания растворителя 56 остаток хроматографируют (этилацетат:гексан,1:1) с получением конечного соединения в виде твердого вещества белого цвета (200 мг, 43%). 1(ушир.s, 1 Н), 0,86 (s, 4H). 2. N-[1-(Бензилоксикарбониламино)циклопропанметокси]фталимид. Конечное соединение получают в виде твердого вещества белого цвета (295 мг, 90%) из 1-(бензилоксикарбониламино)циклопропанметанола (200 мг, 0,9 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, с использованием методики, указанной на стадии 1 в примере 2. 1[1-(Бензилоксикарбониламино)циклопропанметокси]амин. Конечное соединение получают в виде бесцветного масла (180 мг, 95%) из N-[1(бензилоксикарбониламино)циклопропанметокси]фталимида (290 мг, 0,8 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, с использованием методики, указанной на стадии 2 в примере 2. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3)7,35 (m, 5H),5,60 (ушир.s, 2H), 5,23 (ушир.s, 1 Н), 5,09 (s, 2H),3,64 (s, 2H), 0,89 (m, 4 Н). 4. [N,N'-ди(трет-Бутоксикарбонил)][1-(бензилоксикарбониламино)циклопропанметокси] гуанидин. Конечное в заголовке соединение получают в виде бесцветного масла (330 мг, 91%) из[1-(бензилоксикарбониламино)циклопропанметокси]амина (180 мг, 0,76 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, и [N,N'ди(трет-бутоксикарбонил)]амидинопиразола[N,N'-ди(трет-Бутоксикарбонил)](1 аминоциклопропанметокси)гуанидин. Конечное соединение получают в виде бесцветного масла (200 мг, 84%) из [N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][1-(бензилоксикарбониламино) циклопропанметокси]гуанидина (330 мг, 0,69 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, с использованием методики, указанной на стадии 4 в примере 2. 1(m, 2H), 0,60 (m, 2H). 6. 3-Бензилсульфониламино-6-метил-1[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][1-(1(гуаниди 57 нооксиметил)циклопропил-амино)карбонилметил]-2-пиридинон. Конечное соединение получают в виде бесцветной пены (120 мг, 60%) из [N,N'-ди(третбутоксикарбонил)](1-аминоциклопропанметокси)гуанидина (100 мг, 0,3 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, и 3 бензилсульфониламино-6-метил-1-карбоксиметил-2-пиридинона (100 мг, 0,3 ммоль), полученного как описано на стадии 5 в примере 1, с использованием методики, указанной на стадии 5 в примере 2. 1H-ЯМР (300 МГц, СDСl3)9,08 (ушир.s,1 Н), 7,74 (s, 1 Н), 7,72 (s, 1H), 7,31 (d, J=7,5 Гц,1H), 7,26 (m, 5 Н), 6,00 (d, J=7,7 Гц, 1H), 4,79 (s,2H), 4,30 (s, 2 Н), 3,97 (s, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,51 (s,9 Н), 1,48 (s, 9H), 1,04 (m, 2H), 0,87 (m, 2H). 7. Трифторацетат 3-(бензилсульфонил) амино-6-метил-1-[(1-(1-гуанидинооксиметил) циклопропил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона. Конечное соединение получают в виде бесцветного твердого вещества белого цвета (85 мг, 89%) из 3-бензилсульфониламино-6-метил 1-[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][1-(1-(гуанидинооксиметил)циклопропиламино)карбонилметил]-2-пиридинона (110 мг, 0,166 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, с использованием методики, указанной на стадии 6 в примере 2. 1 Конечное соединение получают в виде бесцветной пены из 4-гидроксипиперидина с использованием методик, указанных на стадиях 6-10 в примере 1 и на стадиях 5 и 6 в примере 2. 1 1. 3-Хлорбензилсульфонилхлорид. Смесь 3-хлорбензилхлорида (1,61 г, 10 ммоль) и тиосульфата натрия (1,6 г, 10 ммоль) в метаноле (10 мл) и воде (10 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, после чего смесь охлаждают до 0 С и добавляют ледяную уксусную кислоту (10 мл) и лед. Через полученную суспензию пропускают газообразный хлор в течение 40 мин, периодически добавляя лед для сохранения водно-ледяной смеси. Еще через 1 ч смесь экстрагируют эфиром (3 х 20 мл), объединенные экстракты промывают 5%-ным раствором бисульфита натрия (2 х 20 мл), солевым раствором (20 мл) и сушат надNa2SO4. После упаривания растворителя остаток очищают экспресс-хроматографией (хлористый метилен), при этом получают конечное соединение в виде твердого вещества белого цветаH-ЯМР (300 МГц, СDСl3)7,30-7,50 (m,4H), 4,83 (s, 2H). 2. 3-(3-Хлорбензилсульфонил)амино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинон. Конечное соединение получают в виде твердого вещества белого цвета (180 мг, 84%) из 3-хлорбензилсульфонилхлорида (113 мг, 0,5 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, и 3-амино-6-метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (120 мг, 0,5 ммоль), полученного как описано на стадии 3 в примере 1, с использованием методики, указанной на стадии 4 в примере 1. 1 Н-ЯМР (300 МГц, СDСl3)7,37 (d, J=7,6 Гц, 1 Н), 7,30 (m, 4H), 7,20 (s, 1H), 6,02 (d, J=7,7 Гц, 1 Н), 4,78 (s, 2 Н), 4,27 (s, 2 Н), 2,27 (s,3H) 1,50(s, 9H). 3. 3-(3-Хлорбензилсульфонил)амино-6 метил-1-карбоксиметил-2-пиридинон. Конечное соединение получают в виде твердого вещества серо-белого цвета (150 мг,100%) из 3-(3-хлорбензилсульфонил)амино-6 метил-1-(трет-бутоксикарбонилметил)-2-пиридинона (170 мг, 0,4 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, с использованием методики, указанной на стадии 5 в примере 1. 1 59 Конечное соединение получают в виде бесцветной пены (140 мг, 57%) из 3-(хлорбензилсульфонил)амино-6-метил-1-карбоксиметил-2-пиридинона (140 мг, 0,38 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, и[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)]-2-аминоэтоксигуанидина (120 мг, 0,38 ммоль), полученного как описано на стадии 4 в примере 2, с использованием методики, указанной на стадии 5 в примере 2. 1(s, 2H), 4,26 (s, 2H), 4,14 (t, J=5,3 Гц, 2 Н), 3,63 (q,J=5,2 Гц, 2 Н), 2,31 (s, 3H), 1,52 (s, 9H), 1,49 (s,9H). 5. Трифторацетат 3-(3-хлорбензилсульфонил)амино-6-метил-1-[(2-гуанидинооксиэтил) аминокарбонилметил]-2-пиридинона. Конечное соединение получают в виде твердого вещества белого цвета (95 мг, 74%) из 3-(3-хлорбензилсульфонил)амино-6-метил-1[N,N'-ди(трет-бутоксикарбонил)][(2-гуанидинооксиэтил)аминокарбонилметил]-2-пиридинона (140 мг, 0,22 ммоль), полученного как описано на предыдущей стадии, с использованием методики, указанной на стадии 6 в примере 2. 1