Композиции на основе антагонистов pd-1 и их применение
Формула / Реферат
1. Терапевтическая композиция для увеличения Т-клеточного ответа, включающая слитый белок, содержащий первую и вторую пептидные части, где указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 полипептида В7-DC дикого типа, аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1 и которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, внеклеточного домена B7-DC, имеющего SEQ ID NO: 3, или полипептида, отличающегося от него только консервативными аминокислотными заменами, и который конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, где указанная вторая пептидная часть содержит Fc-область антитела и агент, усиливающий эффективность действия указанного белка, выбранный из группы, включающей циклофосфамид, аналог циклофосфамида, сунитиниб, анти-TGNFβ, иматиниб, антрациклины, оксалиплатин, доксорубицин, антагонисты TLR4 и антагонисты IL-18, в фармацевтически приемлемом носителе.
2. Композиция по п.1, где указанный агент представляет собой циклофосфамид или аналог циклофосфамида.
3. Композиция по п.1, дополнительно включающая по меньшей мере один дополнительный агент, выбранный из группы, состоящей из антитела против PD-1, антитела против CTLA4, ингибитора митоза, ингибитора ароматазы, антагониста A2AR и ингибитора ангиогенеза.
4. Композиция по любому из пп.1-3, где указанный B7-DC представляет собой B7-DC человека.
5. Композиция по любому из пп.1-4, где указанная первая пептидная часть состоит из внеклеточного домена B7-DC дикого типа.
6. Композиция по п.5, где указанный внеклеточный домен В7-DC представляет собой растворимый внеклеточный домен.
7. Композиция по любому из пп.1-4, где указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3 или полипептида, отличающегося от него только консервативными аминокислотными заменами.
8. Композиция по любому из пп.1-4, где указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1.
9. Композиция по любому из пп.1-4, где указанная первая пептидная часть состоит из последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1.
10. Композиция по любому из пп.1-4, где указанный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности SEQ ID NO: 9, 10, 12 или 13, которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1.
11. Композиция по любому из пп.1-4, где указанный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 10, 12 или 13.
12. Композиция по любому из пп.1-11, где указанный слитый белок представляет собой мономер.
13. Композиция по любому из пп.1-11, где указанный слитый белок образует димер.
14. Композиция по п.13, где указанный димер представляет собой гомодимер.
15. Композиция по п.13, где указанный димер представляет собой гетеродимер.
16. Композиция по п.1, где указанный слитый белок содержит первую пептидную часть, которая состоит из аминокислот 20-221 SEQ ID NO: 1, и вторую пептидную часть, которая состоит из шарнирной области, участков СН2 и СН3 Cγ1 иммуноглобулина человека.
17. Композиция по любому из пп.1-16, где указанная вторая пептидная часть содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
18. Фармацевтическая композиция для увеличения Т-клеточного ответа, включающая слитый белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13 или ее вариант, имеющий 95% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 13, который конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, фармацевтический приемлемый носитель и циклофосфамид.
19. Композиция по пп.1, 2 или 18, содержащая циклофосфамид в количестве от около 0,45 до около 4,5 мг.
20. Применение композиции по любому из пп.1-19 для производства лекарственного средства, увеличивающего Т-клеточный ответ, для лечения заболевания, поддающегося лечению путем увеличенного Т-клеточного ответа.
21. Применение по п.20, где указанное заболевание представляет собой инфекционное заболевание.
22. Применение по п.20, где указанное заболевание представляет собой рак.
23. Применение по п.22, где указанный рак представляет собой рак мочевого пузыря, рак мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, рак пищевода, рак почек, рак печени, рак легких, назофарингеальный рак, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак кожи, рак желудка, рак матки, рак яичников, рак яичка или гематологический рак.
24. Способ увеличения Т-клеточного ответа у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему композиции по любому из пп.1-19.
25. Способ по п.24, где композиция содержит слитый белок в дозе 1-40 мг/кг.
26. Способ по п.24, где указанное заболевание представляет собой инфекционное заболевание.
27. Способ по п.24, где указанное заболевание представляет собой рак.
28. Способ по п.27, где указанный рак представляет собой рак мочевого пузыря, рак мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, рак пищевода, рак почек, рак печени, рак легких, назофарингеальный рак, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак кожи, рак желудка, рак матки, рак яичников, рак яичка или гематологический рак.
29. Терапевтическая композиция для увеличения Т-клеточного ответа, содержащая слитый белок, включающий первую и вторую пептидные части, где указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из последовательности внеклеточного домена B7-DC, его фрагментов и вариантов, отличающиеся только консервативными аминокислотными заменами, которые конкурируют in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, и где указанная вторая пептидная часть содержит Fc-область антитела и агент, усиливающий эффективность действия указанного белка, выбранный из группы, включающей циклофосфамид, аналог циклофосфамида, сунитиниб, анти-TGNFβ, иматиниб, антрациклины, оксалиплатин и доксорубицин, в фармацевтически приемлемом носителе.
30. Способ увеличения Т-клеточного ответа у человека, включающий введение указанному человеку
слитого белка, содержащего первую и вторую пептидные части, где указанная первая часть состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1 полипептида B7-DC дикого типа и которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1;
аминокислотной последовательности фрагмента полноразмерного B7-DC, которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, и аминокислотной последовательности внеклеточного домена B7-DC или ее варианта, отличающегося от исходной последовательности только консервативными аминокислотными заменами, где указанная вторая пептидная часть содержит Fc-область антитела; и
агента, усиливающего эффективность действия указанного белка, выбранного из группы, включающей циклофосфамид, аналог циклофосфамида, сунитиниб, анти-TGNFβ, иматиниб, антрациклины, оксалиплатин, доксорубицин, антагонисты TLR4 и антагонисты IL-18, в фармацевтически приемлемом носителе, где указанный агент вводят перед указанным слитым белком.
31. Способ по п.1, где указанный агент представляет циклофосфамид или аналог циклофосфамида.
32. Способ по п.30 или 31, где указанный агент вводят по меньшей мере за X часов перед введением указанного слитого белка, где X выбирают из 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 24 и 30.
33. Способ по п.30 или 31, где циклофосфамид вводят указанному человеку по меньшей мере за 24 ч перед введением слитого белка.
Текст
КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ АНТАГОНИСТОВ PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Описаны терапевтические композиции для увеличения Т-клеточного ответа, включающие слитый белок и агент, усиливающий эффективность действия указанного белка, и применение указанных композиций для производства лекарственного средства, увеличивающего Т-клеточный ответ, для лечения заболевания, поддающегося лечению путем увеличенного Т-клеточного ответа. Также раскрыт способ увеличения Т-клеточного ответа у человека, включающий введение указанному человеку слитого белка и агента, усиливающего эффективность действия указанного белка. Заявка на данное изобретение утверждает приоритет предварительных заявок США 61/211697,зарегистрированной 2 апреля 2009 г., 61/091694, зарегистрированной 25 августа 2008 г., 61/091709 зарегистрированной 25 августа 2008 г., и 61/091705 зарегистрированной 25 августа 2008 г., раскрытия которых включены посредством ссылки в настоящем описании во всей полноте. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к терапевтическим композициям, содержащим соединение, которое препятствует передаче ингибиторного сигнала на Т-клетки в комбинации с потенцирующими агентами, и к применению указанных компонентов вместе или по отдельности для индукции Т-клеточных ответов, важных для лечения заболевания. Уровень техники изобретения Ответ Т-лимфоцитов на болезненные состояния, такие как инфекция и хронические заболевания,подобные раку, является сложным и включает в себя межклеточные взаимодействия и продукцию растворимых медиаторов (называемых цитокинами или лимфокинами). Активация Т-клеток обычно зависит от антигенспецифического сигнала в результате контакта Т-клеточного рецептора (TCR) с антигенным пептидом, представленным с помощью главного комплекса гистосовместимости (МНС), тогда как степень указанной реакции контролируется положительными и отрицательными антиген-независимыми сигналами, испускаемыми рядом костимуляторных молекул. Указанные молекулы обычно являются членами семейства CD28/B7. Напротив, белок программируемой гибели клеток-1 (PD-1) является членом семейства рецепторов CD28, который передает отрицательный иммунный ответ, когда он индуцирован,на Т-клетки. Контакт между PD-1 и одним из его лигандов (В 7-Н 1 или B7-DC) индуцирует ингибиторный ответ, который уменьшает размножение Т-клеток и/или силу и/или продолжительность Т-клеточного ответа. Таким образом, Т-лимфоцитарный ответ регулируется различными факторами, включающими в себя молекулы клеточной поверхности, которые работают как рецепторы, где рецепторы включают в себя комплекс TCR, а также другие молекулы клеточной поверхности. В целом, антигенспецифический Т-клеточный ответ опосредуется двумя сигналами: 1) взаимодействие TCR с антигенным пептидом, представленным в окружении НС (сигнал 1); и 2) второй антигеннезависимый сигнал, передаваемый с помощью контакта между различными парами рецептор/лиганд(сигнал 2). Указанный "второй сигнал" является критическим для определения типа Т-клеточного ответа(активация или толерантность), а также для силы и продолжительности указанного ответа и регулируется положительными и отрицательными сигналами от костимуляторных молекул, таких как семейство белков В 7. Наиболее подробно охарактеризованным Т-клеточным путем является B7-CD28, в котором В 7-1(CD80) и В 7-2 (CD86), каждый, могут вовлекать стимулирующий рецептор CD28 и ингибирующий рецептор CTLA-4 (CD152). В сочетании с передачей сигнала посредством Т-клеточного рецептора связывание CD28 увеличивает антигенспецифическую пролиферацию Т-клетки, увеличивает продукцию цитокинов, стимулирует дифференцировку и эффекторную функцию и способствует выживаемости Т-клетки (Lenshow, et al., Annu. Rev. Immunol., 14:233-258 (1996); Chambers и Allison, Curr. Opin.Immunol., 9:396-404 (1997) и Rathmell и Thompson, Annu. Rev. Immunol., 17:781-828 (1999. Напротив,полагают, что передача сигнала через CTLA-4 служит для передачи отрицательного сигнала, который ингибирует Т-клеточную пролиферацию, продукцию IL-2 и развитие клеточного цикла (Krummel иAllison, J. Exp. Med., 183:2533-2540 (1996) и Walunas, et al., J. Exp. Med., 183:2541-2550 (1996. Другие члены семейства В 7 костимуляторных молекул включают в себя В 7-H1 (Dong, et al., Nature Med., 5:13651369 (1999) и Freeman, et al., J. Exp. Med., 192:1-9 (2000, B7-DC (Tseng, et al., J. Exp. Med., 193:839-846(2003); Sica, et al., Immunity, 18:849-861 (2003); Prasad, et al., Immunity, 18:863-873 (2003) и Zang, et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 100:10388-10392 (2003. B7-H5 (описан в WO 2006/012232) является недавно открытым членом семейства В 7. Молекулы семейства В 7 имеют мембранный проксимальный IgC (константный) домен и мембранный дистальный IgV (вариабельный) домен. Семейство CD28-подобных рецепторов указанных лигандов имеет общий внеклеточный IgV-подобный домен. Взаимодействия пар рецептор-лиганд опосредуются,главным образом, через остатки IgV-доменов лигандов и рецепторов (Schwartz, et al., Nature Immunol.,3:427-434 (2002. В целом, IgV-домены, описывают как содержащие два листа, каждый из которых содержит слой -тяжей (Williams и Barclay, Annu. Rev. Immunol., 6:381-405 (1988. Передний и задний листы CTLA-4 содержат цепи A'GFC'C и ABEDC соответственно (Ostrov, et al., Science, 290:816-819(2000, тогда как передний и задний листы IgV-доменов В 7 образованы из цепей AGFCCC" и BED соответственно (Schwartz, et al., Nature, 410:604-608 (2001); Stamper, et al., Nature, 410:608-611 (2001) иIkemizu, et al., Immunity, 12:51-60 (2000. Кристаллографический анализ показал, что поверхность связывания CTLA-4/B7 имеет решающую роль при взаимодействии CDR3-аналогичной петли CTLA-4, состоящей из мотива MYPPPY, с поверхностью В 7, образованной в основном цепями G, F, С, С' и С"(Schwartz, et al., Nature, 410:604-608 (2001) и Stamper, et al., Nature, 410:608-611 (2001. Данные, полученные на основе аминокислотной гомологии, изменчивости и компьютерного моделирования, подтверждают концепцию, что указанный мотив также является главным В 7-связывающим сайтом для CD28(Bajorath, et al., J. Mol. Graph. Model., 15:135-139 (1997. Хотя мотив MYPPPY не является консервативным в ICOS, исследованный рецептор В 7-Н 2 показал, что родственный мотив, содержащий последовательность FDPPPF и расположенный в аналогичном положении, представляет собой главную детерминанту для связывания ICOS с В 7-Н 2 (Wand, et al., J. Exp. Med., 195:1033-1041 (2002. B7-DC (называемый также PD-L2 или CD273) является относительно новым членом семейства В 7 и обладает аминокислотной последовательностью, которая приблизительно на 34% идентична последовательности В 7-Н 1(называемого также PD-L1). Ортологи B7-DC человека и мыши характеризуются приблизительно 70%ной идентичностью по аминокислотной последовательности. Несмотря на то что транскрипты В 7-Н 1 и В 7-DC обнаружены в различных тканях (Dong, et al., Nature Med., 5:1365-1369 (1999); Latchman, et al.,Nature Immunol., 2:261-268 (2001) и Tamura, Blood, 97:1809-1816 (2001, профили экспрессии белков совершенно различны. В 7-Н 1 широко экспрессируется на многих типах тканей и клеток, в то время как экспрессия B7-DC ограничивается, главным образом, активированными дендритными клетками (DC) и макрофагами. Показано, что В 7-Н 1 и B7-DC связываются с PD-1 (Freeman, et al., J. Exp. Med., 192:1027-1034(2000, отдаленным членом семейства CD28 с иммунорецепторным тирозиновым ингибирующим мотивом (ITIM) в цитоплазматическом домене (Ishida, et al., EMBO J., 11:3887-3895 (1992. PD-1, член семейства рецепторов CD28, индуцированно экспрессируется на активированных Т-клетках, В-клетках, натуральных киллерных (NK) клетках, моноцитах, DC и макрофагах (Keir, et al., Curr. Opin. Immunol. 19:309314 (2007. Основным результатом связывания PD-1 с его лигандами является ингибирование передачи сигнала после Т-клеточного рецептора (TCR). Следовательно, сигнальная трансдукция с помощью PD-1 обычно предоставляет супрессивный или ингибиторный сигнал Т-клетке, что приводит к уменьшению Т-клеточной пролиферации или другому уменьшению Т-клеточной активации. В 7-Н 1 является основным лигандом PD-1, вызывающим передачу ингибиторного сигнала в Т-клетки. Настоящее изобретение решает проблему нежелательного Т-клеточного ингибирования с помощью предоставления агентов, которые связываются с PD-1 и, таким образом, предотвращают передачу ингибиторного сигнала или иначе связываются с лигандами PD-1, такими как В 7-Н 1, тем самым предотвращая связывание лиганда с PD-1 для передачи ингибиторного сигнала. И в том, и в другом случае стимулируются Т-клеточные ответы,такие как Т-клеточная пролиферация или активация. В 7-Н 1 является главным лигандом PD-1, вероятно, вследствие его более широкого распространения и более высоких уровней экспрессии. Ингибирование PD-1 происходит, только если PD-1 и TCR тесно связаны друг с другом в контексте иммунного синапса. PD-1 и его лиганды являлись предметом обсуждения нескольких обзорных статей. Повышенная экспрессия В 7-Н 1 также наблюдается при многих видах рака (включая рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак желудка, глиому, лейкемию, рак легких, меланому,множественную миелому, рак яичников, рак поджелудочной железы, почечно-клеточную карциному и рак уротелия), и связана с неблагоприятным прогнозом. В 7-Н 1 экспрессируется многими линиями опухолевых клеток, в особенности после стимуляции интерфероном гамма (IFN-), и также активируется на инфильтрирующих опухоль миелоид-зависимых супрессорных клетках (MDSC). Например, PD-1 активируется на опухоль-специфических CD8 Т-клетках и ассоциируется с функциональной недостаточностью, анергией, истощением и апоптозом. Повышение экспрессии PD-1 также ассоциировано с дисфункциональными и/или супрессивными фенотипами дополнительных типов клеток, таких как регуляторные Т-клетки (T-reg) и натуральные киллерные Т-клетки (NKT). Настоящее изобретение использует указанные молекулярные функции путем предоставления схем лечения заболеваний с помощью увеличения Т-клеточной активности, в частности лечения рака и инфекционных заболеваний. Сущность изобретения В одном аспекте настоящее изобретение относится к терапевтической композиции для увеличения Т-клеточного ответа, включающей слитый белок, содержащий первую и вторую пептидные части, где указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 полипептида B7-DC дикого типа, аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1 и которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, внеклеточного домена B7-DC, имеющего SEQ ID NO: 3, или полипептида, отличающегося от него только консервативными аминокислотными заменами и который конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, где указанная вторая пептидная часть содержит Fc-область антитела и агент, усиливающий эффективность действия указанного белка, выбранный из группы, включающей циклофосфамид,аналог циклофосфамида, сунитиниб, анти-TGNF, иматиниб, антрациклины, оксалиплатин, доксоруби-2 023148 цин, антагонисты TLR4 и антагонисты IL-18, в фармацевтически приемлемом носителе. В конкретном варианте осуществления указанный агент представляет собой циклофосфамид или аналог циклофосфамида. Кроме того, в конкретном варианте осуществления композиция может дополнительно включать по меньшей мере один дополнительный агент, выбранный из группы, состоящей из антитела против PD-1,антитела против CTLA4, ингибитора митоза, ингибитора ароматазы, антагониста A2AR и ингибитора ангиогенеза. В другом аспекте изобретение относится к композиции, в которой указанный B7-DC представляет собой B7-DC человека. В конкретном варианте осуществления указанная первая пептидная часть состоит из внеклеточного домена B7-DC дикого типа. В другом конкретном варианте осуществления указанный фрагмент полноразмерного B7-DC состоит из растворимой части полноразмерного B7-DC. Настоящее изобретение также относится к композиции, в которой указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3 или полипептида, отличающегося от него только консервативными аминокислотными заменами. В конкретном варианте осуществления указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1, более предпочтительно указанная первая пептидная часть состоит из последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1. В другом конкретном варианте осуществления указанный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности SEQ ID NO: 9,10, 12 или 13 и которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, предпочтительно указанный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 10, 12 или 13. Также настоящее изобретение относится к композиции, в которой указанный слитый белок представляет собой мономер. В другом конкретном варианте осуществления указанный слитый белок образует димер, при этом указанный димер может представлять собой гомодимер или гетеродимер. В еще одном конкретном варианте осуществления указанный слитый белок содержит первую пептидную часть, которая состоит из аминокислот 20-221 SEQ ID NO: 1, и вторую пептидную часть, которая состоит из шарнирной области, участков CH2 и CH3 C1 иммуноглобулина человека, при этом указанная вторая пептидная часть предпочтительно содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для увеличения Т-клеточного ответа, включающей слитый белок, содержащий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 13 или е вариант, имеющий 95% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 13 и который конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, фармацевтический приемлемый носитель и циклофосфамид. В конкретном варианте осуществления композиция содержит циклофосфамид в количестве от около 0,45 до около 4,5 мг. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к применению указанной композиции для производства лекарственного средства, увеличивающего Т-клеточный ответ, для лечения заболевания,поддающегося лечению путем увеличенного Т-клеточного ответа, в частности инфекционного заболевания или рака. В конкретном варианте осуществления рак представляет собой рак мочевого пузыря, рак мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, рак пищевода, рак почек, рак печени, рак легких, назофарингеальный рак, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак кожи, рак желудка, рак матки, рак яичников, рак яичка или гематологический рак. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения Т-клеточного ответа у млекопитающего, включающему введение указанному млекопитающему указанной композиции. В конкретном варианте осуществления способа указанная композиция содержит слитый белок в дозе 1-40 мг/кг. В другом конкретном варианте осуществления указанное заболевание представляет собой инфекционное заболевание. В еще одном конкретном варианте осуществления указанное заболевание представляет собой рак, в частности рак мочевого пузыря, рак мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак,рак пищевода, рак почек, рак печени, рак легких, назофарингеальный рак, рак поджелудочной железы,рак предстательной железы, рак кожи, рак желудка, рак матки, рак яичников, рак яичка или гематологический рак. В другом аспекте настоящее изобретение относится к терапевтической композиции для увеличения Т-клеточного ответа, содержащей слитый белок, включающий первую и вторую пептидные части, где указанная первая пептидная часть состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из последовательности внеклеточного домена В 7-Н 1, его фрагментов и вариантов, отличающиеся только консер-3 023148 вативными аминокислотными заменами, которые конкурируют in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1, и где указанная вторая пептидная часть содержит Fc-область антитела, и агент, усиливающий эффективность действия указанного белка, выбранный из группы, включающей циклофосфамид, аналог циклофосфамида, сунитиниб, анти-TGNF, иматиниб, антрациклины, оксалиплатин и доксорубицин, в фармацевтически приемлемом носителе. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения Т-клеточного ответа у человека, включающему введение указанному человеку слитого белка, содержащего первую и вторую пептидные части, где указанная первая часть состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична последовательности аминокислот 20-221 или 20-121 SEQ ID NO: 1 полипептида B7-DC дикого типа и которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1; аминокислотной последовательности фрагмента полноразмерного B7-DC, которая конкурирует in vitro с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1,и аминокислотной последовательности внеклеточного домена B7-DC или ее варианта, отличающегося от исходной последовательности только консервативными аминокислотными заменами, и где указанная вторая пептидная часть содержит Fc-область антитела; и агента, усиливающего эффективность действия указанного белка, выбранного из группы, включающей циклофосфамид, аналог циклофосфамида, сунитиниб, анти-TGNF, иматиниб, антрациклины, оксалиплатин, доксорубицин, антагонисты TLR4, и агонисты IL-18, в фармацевтически приемлемом носителе, где указанный агент вводят перед указанным слитым белком. В конкретном варианте осуществления указанный агент представляет циклофосфамид или аналог циклофосфамида. В другом конкретном варианте осуществления указанный агент вводят по меньшей мере за X часов перед введением указанного слитого белка, где X выбирают из 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 24 и 30. В следующем конкретном варианте осуществления изобретения циклофосфамид вводят человеку по меньшей мере за 24 ч перед введением слитого белка. Краткое описание фигур На фиг. 1 показано, что B7-DC-Ig связывается с PD-1. Меченый B7-DC-Ig инкубировали в различных концентрациях с клетками линии СНО, конститутивно экспрессирующими PD-1, или с родительскими клетками СНО, которые не экспрессируют PD-1. Связывание анализировали с помощью проточной цитометрии. Среднее значение интенсивности флуоресценции (MFI) B7-DC-Ig (ось у) представлено в виде функции от концентрации зонда (ось х). B7-DC-Ig связывается с клетками CHO.PD-1 (темный кружок), но не с нетрансфицированными клетками СНО (серый треугольник). На фиг. 2 показано, что B7-DC-Ig конкурирует с В 7-Н 1 за связывание с PD-1. НемеченныйB7-DC-Ig в различных концентрациях вначале инкубировали с клетками линии СНО, конститутивно экспрессирующими PD-1 перед добавлением меченого B7-H1-Ig к клеточной смеси. Среднее значение интенсивности флуоресценции (MFI) B7-H1-Ig (ось у) показано в виде функции от концентрации добавленного конкурента немеченного B7-DC-Ig (ось х). По мере того как возрастает концентрация немеченного B7-DC-Ig, количество меченого B7-H1-Ig, связавшегося с клетками СНО, уменьшается, что показывает, что B7-DC-Ig конкурирует с В 7-Н 1 за связывание с PD-1. На фиг. 3 представлены результаты экспериментов, в которых комбинация циклофосфамида (СТХ или цитоксан) и димерный мышиный B7-DC-Ig вызывали в результате уничтожение привитых опухолей СТ 26 (карцинома толстой кишки) у мышей. На графике А показан объем опухоли (мм 3) против дней после прививки опухоли у мышей, получавших 100 мг/кг СТХ на 10-й день, тогда как на графике В показан объем опухоли (мм 3) против дней после прививания опухоли у мышей, получивших СТХ на 10-й день,на следующий день после первого введения B7-DC-Ig. Каждая линия на каждом графике соответствует одной мыши. Черная стрелка обозначает введение B7-DC-Ig. На графике С показаны средние значения объема опухоли. На фиг. 4 показаны результаты экспериментов, в которых комбинация СТХ и димерного мышиногоB7-DC-Ig уничтожала привитые опухоли СТ 26 (карцинома толстой кишки) у мышей и защищала при повторном введении СТ 26. Мышам, которые получили СТХ и B7-DC-Ig и у которых не обнаружили опухолевого роста на 44-й день после прививания опухоли, повторно прививали опухоль. Позже мышам вновь проводили повторное введение опухолевых клеток на 70-й день. Ни у одной из мышей не наблюдали опухолевого роста к 100-му дню. На фиг. 5 показано, что лечение СТХ и B7-DC-Ig приводило к формированию опухольспецифических CTL памяти. Мышам с уничтоженными прижившимися подкожными опухолями СТ 26 после лечения СТХ и B7-DC-Ig повторно прививали клетки СТ 26. Спустя семь дней выделяли спленоциты и активировали либо яичным альбумином, иррелевантным пептидом, либо АН 1, СТ 26 специфическим пептидом. Клетки окрашивали вначале антителом анти-CD8 последующим внутриклеточным окрашиванием антителом анти-IFN перед анализом FACS. На фиг. 6 показаны эффекты различных доз B7-DC-Ig в комбинации с СТХ на уничтожение привитых опухолей СТ 26 у мышей. Мышам породы Balb/C в возрасте 9-11 недель прививали подкожно 1 Е 05 клеток СТ 26. На 9-й день мышам вводили IP 100 мг/кг СТХ. Через 24 ч, на 10-й день, мыши получали 30,100 или 300 мкг B7-DC-Ig с последующими 2 инъекциями каждую неделю, всего до 8 введений. Рост опухоли измеряли два раза в неделю. На фиг. 7 представлены результаты экспериментов, в которых комбинация СТХ и антитела антиPD-1 вызывала уничтожение привитых опухолей СТ 26 (карцинома толстой кишки) у мышей. На графике А показан объем опухоли (мм 3) в зависимости от дней после прививания опухоли у нелеченых мышей(т.е. мышей, получавших только среду для лекарства), на графике В представлен объем опухоли (мм 3) в зависимости от дней после прививания опухоли у мышей, получавших только анти-PD-1, начиная с 11-го дня, по 300 мкг на инъекцию, 3 раза в неделю, до 12 инъекций, и на графике С показан объем опухоли(мм 3) в зависимости от дней после прививания опухоли у мышей, получавших СТХ на 11-й день и первое введение анти-PD-1 на 12-й день, по 300 мкг на инъекцию, 3 раза в неделю, до 12 инъекций. Каждая линия на каждом графике обозначает одну мышь. Черная стрелка указывает введение анти-PD-1. На фиг. 8 представлены результаты экспериментов, в которых комбинация СТХ и антитела антиCTLA4 приводила к уничтожению привитых опухолей СТ 26 (карцинома толстой кишки) у мышей. Здесь на графике А показан объем опухоли (мм 3) в зависимости от дней после введения опухоли у мышей, получивших 100 мг/кг СТХ на 11-й день, тогда как на графике В показан объем опухоли (мм 3) в зависимости от дней после введения опухоли у мышей, получавших СТХ на 11-й день и анти-CTLA4 на 12-й день,в дозе 100 мкг на инъекцию, два раза в неделю, всего до 8 инъекций. Каждая линия на каждом графике обозначает одну мышь. Черная стрелка указывает введение анти-CTLA-4. На фиг. 9 представлены результаты экспериментов, в которых мышам породы Balb/C в возрасте 911 недель прививали 1105 клеток СТ 26 подкожно. На 9-й день мышам вводили 100 мг/кг СТХ, IP. Через 24 ч, на 10-й день, мышам вводили 100 мкг B7-DC-Ig. В эксперименте использовали 5 групп: интактные мыши, которым не вводили каких-либо опухолевых клеток, мыши, которым вводили среду для лекарства, только СТХ, СТХ + B7-DC-Ig или только B7-DC-Ig. Две интактные мыши и 4 мыши из других групп были удалены из исследования на 11-й день (2 дня после СТХ) и на 16-й день (7 дней после СТХ) для анализа Т-клеток. Левая панель показывает, что на 11-й день, через 2 дня после инъекции СТХ, количество T-reg в селезенке мышей, получавших СТХ, было значительно ниже, чем количество T-reg у мышей,которым прививали опухоль и вводили среду для лекарства. Правая панель показывает, что на 16-й день,через 7 дней после введения СТХ и через 6 дней после введения B7-DC-Ig, B7-DC-Ig существенно уменьшал количество CD4+ Т-клеток, экспрессирующих высокий уровень PD-1. Указанное снижение наблюдали как у мышей, получавших B7-DC-Ig, так и у мышей, получавших СТХ + B7-DC-Ig. Предполагали, что мыши с привитыми опухолевыми клетками имели больше PD-1+/CD4+ Т-клеток в дренированном лимфоузле, по сравнению с интактными мышами. На фиг. 10 представлены результаты экспериментов, в которых комбинация СТХ и B7-DC-Ig приводила к увеличению выживаемости у мышей при введении в хвостовую вену опухолевых клеток линии простаты мышей. Клетки SP-1 выделяли из легких мышей, у которых развивались метастазы в результате инъекции клеток опухоли простаты TRAMP. Мышам породы B10.D2 сначала вводили 3105 клетокSP-1 с помощью инъекции в хвостовую вену. В дни 5, 12 и 19 мышам вводили 50 мг/кг СТХ, где указано. В дни 6, 13 и 20 мышам вводили 5 мг/кг B7-DC-Ig, где указано. Здесь "NT" обозначает "не обработан". Фиг. 11. Мышам породы Balb/C в возрасте 11-13 недель вводили изолированные печеночные метастазы с помощью инъекции в часть селезенки с ее последующим удалением (hemispleen injectiontechnique). Селезенки анестезированных мышей делили на две половины и накладывали на половины скобки. Клетки СТ 26 (1 Е 05) вводили в одну половину селезенки и через 30 с указанную половину селезенки удаляли и накладывали скобки на селезеночную дренирующую вену. На 10-й день мыши получали 1 инъекцию СТХ в дозе 50 мг/кг, IP. Через 24 ч, на 11-й день, мышам вводили рекомбинантный пептид листерии, несущий АН 1, иммунодоминантный эпитоп СТ 26, в дозе 0,1 LD50 (1107 КОЕ), затем вводили на 14- и 17-й дни. Мышам также вводили B7-DC-Ig на 11-й день и затем на 18-й день. Наблюдали общую выживаемость мышей. Определения Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в описании, обладают теми же значениями, как обычно понимаемые специалистом в данной области техники, к которой принадлежит раскрытое изобретение. В частности, следующие термины и фразы имеют следующее значение. Термин "передача ингибиторного сигнала" предназначен для обозначения любой сигнальной трансдукции, обладающей эффектом отмены, или в других случаях уменьшения Т-клеточных ответов против антигена либо с помощью уменьшения Т-клеточной пролиферации, либо с помощью другого ингибиторного механизма, в результате чего величина или продолжительность иммуногенного Т-клеточного ответа уменьшается. Указанная передача ингибиторного сигнала может происходить вследствие связыванияPD-1 с природным лигандом, например связывания PD-1 с В 7-Н 1 или некого другого члена указанного класса лигандов, B7-DC, или может происходить вследствие связывания CTLA4 с лигандами, такими как В 7-1 или В 7-2. В целом, соединения изобретения уменьшают указанную передачу ингибиторного сигна-5 023148 ла и включают в себя, но без ограничения, антагонисты PD-1 и антагонисты CTLA4. Термин "антагонист PD-1" обозначает любую молекулу, которая ослабляет передачу ингибиторного сигнала, опосредованного PD-1, находящегося на поверхности Т-клеток, В-клеток, натуральных киллерных (NK) клеток, моноцитов, DC и макрофагов. Указанный антагонист включает в себя молекулу, которая прерывает любой ингибиторный сигнал,создаваемый молекулой PD-1 на Т-клетке. В конкретных примерах изобретения антагонист PD-1 представляет собой молекулу, которая ингибирует, уменьшает, отменяет или иным способом уменьшает передачу ингибиторного сигнала через PD-1 рецепторный сигнальный путь. Указанное снижение может происходить, в случае если (i) антагонист PD-1 изобретения связывается с рецептором PD-1 без инициирования сигнальной трансдукции для уменьшения или блокирования передачи ингибиторного сигнала;(ii) антагонист PD-1 связывается с лигандом (например, с агонистом) рецептора PD-1, предотвращая его связывание с рецептором (например, в тех случаях, когда указанный агонист представляет собой В 7-Н 1);(iii) антагонист PD-1 связывается или иным способом ингибирует активность молекулы, которая является частью регуляторной цепи, которая, когда она не ингибирована, в результате стимулирует или иным способом способствует передаче PD-1 ингибиторного сигнала; или (iv) антагонист PD-1 ингибирует экспрессию рецептора PD-1 или экспрессию его лиганда, в частности, путем уменьшения или отмены экспрессии одного или более генов, кодирующих PD-1, или одного или более его природных лигандов. Таким образом, антагонист PD-1 изобретения представляет собой молекулу, которая осуществляет уменьшение передачи PD-1 ингибиторного сигнала, увеличивая тем самым Т-клеточный ответ на один или более антигенов. Используемый в описании термин "антагонист CTLA4" обозначает соединение, которое уменьшаетCTLA4-опосредованное ингибирование Т-клеточных реакций. Например, в Т-клетке CTLA4 доставляет ингибиторный сигнал после связывания лигандов В 7, таких как В 7-1 и В 7-2. Антагонист CTLA4 представляет собой антагонист, который нарушает связывание указанных лигандов с CTLA4 на активированных Т-клетках. В одном варианте осуществления антагонист представляет собой антитело анти-CTLA4,которое связывается с CTLA4, чтобы предотвратить связывание лиганда. Используемый в описании термин "активный фрагмент" относится к части природного полипептида или к полипептиду с высокой гомологией последовательностей (например, по меньшей мере 80, 85,90, 95, 98 или 99% идентичности аминокислотной последовательности) с натуральным полипептидом и демонстрирует активность антагониста PD-1, например, при связывании PD-1 или при связывании с лигандом PD-1. В предпочтительных воплощениях указанный фрагмент состоит из внеклеточного домена(ECD) белка B7-DC, который связывается с PD-1, например, SEQ ID NO: 3, предпочтительно из его аминокислот 20-221. В случае полипептида PD-1 активный фрагмент представляет собой часть указанного полипептида, включающего в себя связывающий домен, который связывается с природным лигандомPD-1 для предотвращения стимуляции PD-1-опосредованной передачи ингибиторного сигнала с помощью указанного лиганда. Активные фрагменты могут быть идентифицированы по их способности конкурировать с молекулой, из которой они получены, при связывании с природным сайтом связывания. Например, активные фрагменты будут конкурировать с B7-DC дикого типа за связывание с PD-1. В отношении антитела термин "активный фрагмент" означает антигенсвязывающую часть антитела,которая является меньше, чем цельный иммуноглобулин. Указанные фрагменты включают в себя Fab иF(ab')2 фрагменты, способные реагировать или связываться с любым из полипептидов, раскрытых в описании, которые являются рецепторами или лигандами. Указанные фрагменты Fab и F(ab')2, лишенные Fcчасти интактного антитела, выводятся более быстро из циркуляции и могут обладать меньшим неспецифическим тканевым связыванием, чем интактное антитело (Wahl et al., J. Nuc. Med. 24:316-325 (1983. Также включены Fv-фрагменты (Hochman, J. et al. (1973), Biochemistry, 12:1130-1135; Sharon, J. et al.(1976), Biochemistry, 15:1591-1594). Указанные различные фрагменты получают с помощью обычных технологических приемов, таких как протеазное расщепление или химическое расщепление (см., например, Rousseaux et al., Meth. Enzymol., 121:663-69 (1986. Используемый в описании термин "растворимая часть" антагониста PD-1 означает часть полноразмерного полипептида, которая не включает в себя какую-либо часть трансмембранного участка или сегмента. Например, в отношении B7-DC растворимая часть включает в себя внеклеточную часть (сN-терминальной сигнальной последовательностью или без нее), но не включает в себя какую-либо часть трансмембранного участка (или, по меньшей мере, не достаточную, чтобы уменьшить растворимость). Таким образом, ECD B7-DC человека показана как SEQ ID NO: 3 и состоит из IgV-подобного иIgC-подобного доменов полноразмерной молекулы (т.е. аминокислоты 20-221 полноразмерной последовательности (SEQ ID NO: 1). Используемый в описании "костимуляторный полипептид" представляет собой полипептид, который при взаимодействии с молекулой клеточной поверхности на Т-клетках модулирует активность Т-клетки. Таким образом, ответ Т-клетки может быть эффекторным (например, CTL или антителопродуцирующая В-клетка) ответом, хелперным ответом, обеспечивающим помощь одному или более эффекторным (например, CTL или антитело-продуцирующая В-клетка) ответам, или супрессивным ответом. Используемый в описании термин "схема лечения" относится к лечению заболевания или к способу достижения желаемого физиологического изменения, такому как увеличенный или сниженный ответ иммунной системы на антиген или иммуноген, например увеличение или уменьшение числа или активности одной или более клеток или типов клеток, которые вовлечены в указанный ответ, где указанное лечение или способ включают в себя введение животному, такому как млекопитающее, в частности человеку, достаточного количества двух или более химических агентов или компонентов указанной схемы для эффективного лечения заболевания или для получения указанного физиологического изменения, где указанные химические агенты или компоненты вводят вместе как часть одной композиции или вводят отдельно и независимо в то же самое время или в разные моменты времени (т.е. введение каждого агента или компонента отделено ограниченным периодом времени от введения одного или более агентов или компонентов) и где введение указанного одного или более агентов или компонентов обеспечивает результат, больший, чем результат, получаемый при введении любого из указанных агентов или компонентов по отдельности или изолированно. Используемый в документе термин "изолированный" предназначен для описания соединения, представляющего интерес, (например, либо полинуклеотида, либо полипептида), которое находится в окружении, которое отличается от окружения, в котором соединение присутствует естественным образом,например, выделенный из своей природной среды, например, с помощью концентрирования полипептида до концентрации, в которой он не встречается в природе. "Изолированный" предназначен для включения соединений, которые находятся в образцах, которые значительно обогащены изобретением, представляющим интерес, и/или в которых соединение, представляющее интерес, частично или в основном очищают. Используемый в описании термин "полипептид" относится к цепи аминокислот любой длины, без учета модификации (например, фосфорилирование или гликозилирование). Полипептид настоящего изобретения может представлять собой рекомбинантный полипептид, природный полипептид или синтетический полипептид, предпочтительно рекомбинантный полипептид. Используемый в описании "вариантный" полипептид содержит по меньшей мере одно изменение аминокислотной последовательности по сравнению с аминокислотной последовательностью соответствующего полипептида дикого типа. Используемое в описание "изменение аминокислотной последовательности" может представлять собой, например, замену, удаление или вставку одной или более аминокислот. Используемые в описании термины "часть", "сегмент" и "фрагмент", при использовании в отношении полипептидов, относятся к непрерывной последовательности остатков, например аминокислотных остатков, последовательность которых образует часть большей последовательности. Например, если полипептид обрабатывали любой из обычных эндопептидаз, таких как трипсин или химотрипсин, олигопептиды, полученные в результате такой обработки, представляют собой части, сегменты или фрагменты исходного полипептида. "Фрагмент" полипептида, таким образом, относится к любой части полипептида, которая представляет собой более короткий полипептид полноразмерного белка. В целом, фрагменты будут иметь пять или более аминокислот в длину. Производное, аналог или гомолог полипептида (или его фрагмента) изобретения могут представлять собой (i) полипептид, в котором один или более аминокислотных остатков заменены консервативным или неконсервативным аминокислотным остатком (предпочтительно консервативным аминокислотным остатком) и указанный замещенный аминокислотный остаток может представлять собой или может не представлять собой остаток, кодированный генетическим кодом; или (ii) полипептид, в котором один или более аминокислотных остатков включают в себя замещающую группу; или (iii) полипептид, в котором зрелый полипептид соединяют с другим соединением, таким как соединение для увеличения времени полужизни полипептида (например, полиэтиленгликоль); или (iv) полипептид, в котором дополнительные аминокислоты соединяют со зрелым полипептидом, таким как лидирующая или секреторная последовательность или с последовательностью, которая применяется для очистки зрелого полипептида или пропротеиновой последовательности. Подразумевается, что указанные производные и аналоги входят в объем знаний специалистов в данной области техники, если исходить из идей настоящего документа. Используемая в описании "валентность" относится к числу доступных сайтов связывания в молекуле. В соответствии с настоящим изобретением термин "процентная идентичность" или "процент идентичности", когда относится к последовательности, означает, что последовательность сравнивают с заявленной или описанной последовательностью после выравнивания последовательности, которую нужно сравнить ("сравниваемая последовательность") с описанной или заявленной последовательностью ("референсная последовательность"). Затем процентную идентичность определяют по следующей формуле: Процентная идентичность=100[1-(C/R)],где С представляет собой число различий между референсной последовательностью и сравниваемой последовательностью на протяжении длины выравнивания между референсной последовательностью и сравниваемой последовательностью, где (i) каждое основание или аминокислота в референсной последовательности, которая не имеет соответствующего выровненного основания или аминокислоты в сравниваемой последовательности, и (ii) каждый гэп в референсной последовательности, и (iii) каждое выровненное основание или каждая выровненная аминокислота в референсной последовательности, которая отличается от выровненного основания или аминокислоты в сравниваемой последовательности,представляет собой отличие;R является числом оснований или аминокислот в референсной последовательности на протяжении длины выравнивания со сравниваемой последовательностью, с любым гэпом, созданным в референсной последовательности, который также считают основанием или аминокислотой. Если имеет место выравнивание между сравниваемой последовательностью и референсной последовательностью, для которых процентная идентичность, как рассчитано выше, приблизительно равна или больше, чем установленная минимальная процентная идентичность, в таком случае сравниваемая последовательность обладает установленной минимальной процентной идентичностью к референсной последовательности, даже если могут иметь место выравнивания, в которых вышеуказанная рассчитанная процентная идентичность является меньше, чем установленная процентная идентичность. Используемый в описании термин "консервативная замена аминокислот" означает замену, при которой замененная аминокислота обладает сходными структурными или химическими свойствами, и "неконсервативная" замена аминокислот представляет собой замены, при которых заряд, гидрофобность или объем замененной аминокислоты существенно отличаются. Неконсервативные замены будут более существенно отличаться по их эффекту на сохранение (а) структуры пептидного каркаса в области замены,например конформации листа или спиральной конформации; (b) заряда или гидрофобности молекулы в сайте-мишени или (с) объема боковой цепи. Примеры консервативных замен аминокислот включают в себя такие замены, в которых замена происходит в пределах одной из пяти следующих групп: 1) малые алифатические неполярные или слабополярные остатки (Ala Ser, Thr, Pro, Gly); 2) полярные, отрицательно заряженные остатки и их амиды (Asp, Asn, Glu, Gln); полярные, положительные заряженные остатки(His, Arg, Lys); большие алифатические неполярные остатки (Met, Leu, Il, Val, Cys) и большие ароматические остатки (Phe, Tyr, Trp). Примерами неконсервативных замен аминокислот являются замены, где 1) гидрофильный остаток, например серил или треонил, заменяют на гидрофобный остаток, например лейцил, изолейцил, фенилаланил, валил или аланил; 2) цистеин или пролин заменяют на любой другой остаток; 3) остаток, содержащий положительно заряженную боковую цепь, например лизил, аргинил или гистидил, заменяют на отрицательно заряженный остаток, например глутамил или аспартил; или 4) остаток, содержащий объемную боковую цепь, например фенилаланин, заменяют на остаток, который не содержит боковой цепи, например глицин. Термины "индивид", "хозяин", "субъект" и "пациент" используют в описании взаимозаменяемо, и они относятся к млекопитающему, включая, но без ограничения, приматов, например человека, а также грызунов, таких как мыши и крысы и другие лабораторные животные. Используемый в описании термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" означает дозу, достаточную для лечения, ингибирования или уменьшения одного или более симптомов болезненного состояния, которое нужно вылечить, или для обеспечения иным способом желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта, в частности усиления Т-клеточного ответа к выбранному антигену. Точная доза будет варьировать в соответствии с множеством факторов, таких как субъект-зависимые переменные (например, возраст, состояние иммунной системы и т.д.), заболевание и лечение, которое нужно назначить. Используемый в описании термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает в себя любые и все растворители, дисперсные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты,изотонические и задерживающие абсорбцию агенты и т.п. Применение указанных сред и агентов для фармацевтически активных субстанций хорошо известно в данной области техники. Кроме случаев, когда общеупотребительные среды или агент несовместимы с активным соединением, предусматривается их применение в терапевтической композиции. Дополнительные активные соединения также могут быть включены в композиции. Термин "антитело" предназначен для включения интактных молекул, а также их фрагментов, которые включают в себя антигенсвязывающий сайт. Структура целого антитела часто предоставляется в виде H2L2 и отражает тот факт, что антитела обычно содержат две легкие (L) аминокислотные цепи и две тяжелые (Н) аминокислотные цепи. Обе цепи содержат области, способные к взаимодействию со структурно комплементарной антигенной мишенью. Области, взаимодействующие с мишенью, обозначают как "вариабельные" или "V"-области, и они характеризуются отличиями в аминокислотной последовательности от антител другой антигенной специфичности. Вариабельные области Н- или L-цепей содержат аминокислотные последовательности, способные к специфическому связыванию с антигенными мишенями. В пределах указанных последовательностей расположены меньшие последовательности, получившие название "гипервариабельных" благодаря их чрезвычайной вариабельности среди антител с отличающейся специфичностью. Указанные гипервариабельные области также обозначают как "определяющие комплементарность области" или "CDR"-области. Указанные CDR-области отвечают за основную специфичность антитела в отношении определенной антигенной детерминантной структуры. Облас-8 023148 ти CDR представляют собой неконтактирующие участки аминокислот в пределах вариабельных областей, но было обнаружено, что независимо от видов позиционные расположения указанных критических аминокислотных последовательностей в пределах вариабельных областей тяжелых и легких цепей имеют сходные локализации в аминокислотных последовательностях вариабельных цепей. Вариабельные тяжелые и легкие цепи всех антител, каждая, содержат три CDR-области, которые не соприкасаются с другими (обозначаемыми L1, L2, L3, H1, H2, Н 3) для соответствующих легких (L) и тяжелых (Н) цепей. Распространенные CDR-области описаны Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616(1977). Антитела, раскрытые в соответствии с изобретением, также могут быть полностью синтетическими, в которых полипептидные цепи антител синтезированы и, возможно, оптимизированы для связывания с полипептидами, раскрытыми в описании в качестве рецепторов. Указанные антитела могут представлять собой химерные или гуманизированные антитела и могут быть полностью тетрамерными по структуре или могут быть димерными и включать в себя только одну тяжелую и одну легкую цепи. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение предоставляет схему лечения или комбинированной терапии для лечения заболевания у млекопитающих, включающую в себя соединение, которое уменьшает или прекращает передачу ингибиторного сигнала в Т-клетки, предпочтительно Т-клетки человека, вводимое в сочетании с потенцирующим агентом для увеличения иммунного ответа. Способы изобретения также относятся к применению широкого спектра иммуномодуляторов и их композиций. В целом, повышенный Т-клеточный ответ, полученный в результате указанных способов,является выше, чем повышенный Т-клеточный ответ, полученный в результате введения аналогичной дозы указанного антагониста PD-1 или указанного потенцирующего агента по отдельности. Раскрытые композиции и схемы являются полезными для стимулирования или усиления иммунных ответов, вовлекающих Т-клетки. Таким образом, способы изобретения наиболее полезны в лечении болезненного состояния, которое может улучшиться при увеличении активности Т-клеток, где повышенный Т-клеточный ответ необходим или достаточен для лечения указанного заболевания, даже если заболевание не вызвано специфически или не отягощено сниженным Т-клеточным ответом. В предпочтительном варианте осуществления тип заболевания, которое нужно вылечить или предотвратить, представляет собой злокачественную опухоль или хроническое инфекционное заболевание, вызванное бактерией, вирусом, простейшим, гельминтом или другим внутриклеточным микробным патогеном, который подвергается атаке цитотоксических Т-лимфоцитов. Активация Т-клеток с использованием раскрытых композиций также полезна для лечения или предотвращения состояний, характеризующихся иммуносупрессией. В соответствии с настоящим изобретением Т-клеточный ответ может регулироваться молекулами,которые связываются с рецепторами на поверхности Т-клеток и молекулами, которые связываются с лигандами указанных рецепторов. В случае PD-1 молекулы, которые связывают PD-1 чтобы уменьшить его ингибиторный эффект, и/или молекулы, которые связывают один или более лигандов PD-1, чтобы уменьшить их способность связываться с PD-1, обладают эффектом уменьшения способности PD-1 ингибировать Т-клеточный ответ, увеличивая, тем самым, указанный ответ и его иммунологические эффекты. А. Антагонисты рецептора PD-1. Предоставляются композиции, содержащие антагонисты рецепторов PD-1, и они включают в себя соединения или агенты, которые или связываются с лигандом PD-1 и блокируют его, чтобы препятствовать связыванию лиганда с рецептором PD-1 или ингибировать указанное связывание, или непосредственно связываются с рецептором PD-1 и блокируют его, не вызывая передачи ингибиторного сигнала через рецептор PD-1. В другом варианте осуществления антагонист рецептора PD-1 непосредственно связывается с рецептором PD-1 без инициирования передачи ингибиторного сигнала и также связывается с лигандом рецептора PD-1, чтобы уменьшить или ингибировать инициирование лигандом сигнальной трансдукции через рецептор PD-1. При уменьшении числа и/или количества лигандов, которые связываются с рецептором PD-1 и запускают трансдукцию ингибиторного сигнала, меньшее число клеток ослабляется негативным сигналом, передаваемым с помощью PD-1-сигнальной трансдукции, и может быть достигнут более сильный иммунный ответ. В соответствии с настоящим изобретением сигнальная система PD-1 требует связывания с лигандом PD-1 (таким как В 7-Н 1 или B7-DC) в непосредственной близости с пептидным антигеном, представленным главным комплексом гистосовместимости (МНС) (см., например, Freeman Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 105:10275-10276 (2008. Следовательно, белки, антитела или малые молекулы, которые предотвращают косвязывание PD-1 и TCR на Т-клеточной мембране, являются эффективными антагонистамиPD-1, предусмотренными настоящим изобретением. Типичные антагонисты рецептора PD-1 включают в себя, но без ограничения, полипептиды B7-DC,включая их гомологи и варианты, а также активные фрагменты любого из вышеперечисленного, и гибридные белки, которые включают в себя любое из вышеперечисленного. В предпочтительном варианте осуществления гибридный белок включает в себя растворимую часть B7-DC, соединенную с Fc-частью антитела, такого как IgG человека, и не содержит весь трансмембранный участок B7-DC человека или его часть. Антагонисты рецептора PD-1 также могут представлять собой малые молекулы антагонистов или антитела, которые уменьшают или нарушают PD-1-рецепторную сигнальную трансдукцию путем связывания с лигандами PD-1 или с самим PD-1, в особенности в тех случаях, когда косвязывание PD-1 сTCR не наступает после такого связывания, при этом не запускается передача ингибиторного сигнала через рецептор PD-1. Антагонисты рецептора PD-1, предоставляемые в описании, в целом применимы in vivo и ex vivo в качестве лекарств, стимулирующих иммунный ответ. В целом, раскрытые композиции антагонистов полезны для лечения субъекта, страдающего от заболевания или нарушения или имеющего предрасположенность к заболеванию или нарушению, где иммунная система субъекта увеличивает иммунный ответ. 1. Полипептиды B7-DC. В определенных воплощениях белки B7-DC могут быть использованы в качестве антагонистов рецептора PD-1. B7-DC представляет собой природный лиганд PD-1 и связывается с PD-1 с более высокой аффинностью, чем В 7-Н 1, и может, таким образом, ингибировать взаимодействия B7-H1:PD-1. Подходящие полипептиды B7-DC, включая их варианты, гомологи и фрагменты, могут быть получены из следующих полноразмерных полипептидов B7-DC человека с эндогенным сигнальным пептидом(SEQ ID NO: 1) или без него (SEQ ID NO: 2). Семейство молекул В 7, включающее в себя B7-DC, экспрессируется на поверхности клетки с мембранным проксимальным константным доменом IgC и мембранным дистальным доменом IgV. Рецепторы указанных лигандов имеют общий внеклеточный IgV-подобный домен. Взаимодействия пар рецептор-лиганд опосредуются главным образом с помощью аминокислотных остатков в доменах IgV лигандов и рецепторов. В целом, домены IgV описываются, как имеющие два листа, каждый из которых содержит слой -тяжей. Указанные -тяжи обозначают как А', В, С, С', С", D, E, F и G. Структура указанных полипептидов описана в литературе (см. Molnar et al., Crystal structure of the complex betweenprogrammed death-1 (PD-1) и its ligand PD-L2, PNAS, vol. 105, p. 10483-10488 (29 July 2008. Трансмембранный белок, B7-DC, в мономерной форме включает в себя домены IgV и IgC, которые составляют внеклеточную часть молекулы (внеклеточный домен, или ECD), причем IgV-подобный домен ответственен целиком или частично за связывание PD-1, a также за другие функции, перечисленные в способах изобретения. В отношении человеческого белка IgV-домен отличается тем, что он обладает соединенными дисульфидной связью тяжами В и F (как указано выше), что представляется характерным для многих IgV-доменов, и обладает трехмерной структурой, сходной с доменами IgV как В 7-1, так и В 7-2 (см. Molnar et al. (2008), supra). В одном варианте осуществления вариантные полипептиды В 7-DC содержат аминокислотные изменения (т.е. замены, делеции или вставки) в пределах одного или более указанных -тяжей в любой возможной комбинации. В другом варианте осуществления варианты B7-DC содержат одно или более аминокислотных изменений (т.е. замены, делеции или вставки) в -тяжах А', С, С', С", D, E, F или G. В предпочтительном варианте осуществления варианты B7-DC включают в себя одно или более аминокислотных изменений в -тяже G. В другом варианте осуществления фрагменты вариантного полипептидаB7-DC включают в себя домены IgC и IgV B7-DC. В другом варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в себя IgV-домен B7-DC. Белки B7-DC человека и мыши содержат короткий внутриклеточный домен, один трансмембранный домен и внеклеточный домен. Внеклеточный домен содержит два Ig-домена; мембранный проксимальный IgC-домен и мембранный дистальный IgV-домен. Используемые фрагменты вариантных полипептидов B7-DC включают в себя растворимые фрагменты. Растворимые фрагменты B7-DC представляют собой фрагменты B7-DC, которые могут быть "слущены", секретированы или выделены другим путем из продуцирующих клеток. В одном варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в себя полный внеклеточный домен B7-DC. Внеклеточный домен B7-DC включает в себя аминокислоты приблизительно 20-221 B7DC мыши или человека или их активные фрагменты. В другом варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в себя домены IgC и IgV B7-DC. В другом варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в себя домен IgV B7-DC. Считают, что сигнальная система PD-1 требует связывания с лигандом PD-1 (обычно В 7-Н 1) в непосредственной близости с пептидным антигеном, представленным главным комплексом гистосовместимости (МНС) (Freeman Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105:10275-10276 (2008. Поэтому белки, антитела или малые молекулы, которые предотвращают совместное связывание PD-1 и TCR на Т-клеточной мембране, являются эффективными антагонистами PD-1, предусмотренными настоящим изобретением. Антагонист PD-1, применяемый в способах и композициях изобретения, включает в себя фрагменты белка B7-DC, содержащие ECD. Альтернативно, фрагменты B7-DC включают в себя часть внеклеточного домена, которая содержит IgV- или IgV-подобный домен, предпочтительно аминокислоты 20-221,более предпочтительно 20-121, которые являются достаточными для связывания с рецептором PD-1,чтобы препятствовать или предотвратить или иным способом уменьшить передачу ингибиторного сигнала через рецептор PD-1. В предпочтительном варианте осуществления фрагмент B7-DC конкурирует с В 7-Н 1 за связывание с рецепторами PD-1. В одном варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC могут содержать область полипептида, которая является важной для связывания с PD-1. Указанные полипептидные фрагменты могут быть использованы для конкурирования за связывание с PD-1 и для предотвращения связывания нативного В 7-DC с PD-1. Ввиду конкурирования за связывание с PD-1 указанные фрагменты могут быть полезны для усиления иммунного ответа, поскольку ингибирующие взаимодействия В 7-Н 1 иB7-DC с PD-1 ингибируют супрессию иммунных ответов, которая происходила бы в противном случае. Полипептидный фрагмент мышиного или человеческого B7-DC, который мог бы конкурентно связаться с PD-1, может содержать, например, аминокислоты 101-108 или 110-114. Связывание B7-DC дикого типа с PD-1 обычно ингибируется по меньшей мере на 50, на 60, на 70, на 75, на 80, на 90, на 95 или более чем на 95% по сравнению с уровнем связывания B7-DC дикого типа с PD-1 в отсутствие фрагмента указанного B7-DC дикого типа. Типичные фрагменты B7-DC, используемые в способах и/или композициях изобретения, включают в себя, но не ограничиваются, следующие внеклеточные домены B7-DC: внеклеточный домен (ECD)B7-DC человека: Многочисленные последовательности других приматов, используемые в способах и композициях изобретения, предоставлены в Onlamoon et al., Immunology, vol. 124, p. 277-293 (2008). Антагонист PD-1, используемый в композициях и способах изобретения, также включает в себя гибридный белок (как описано ниже), который включает в себя первую и вторую полипептидные части, где указанный гибридный белок или по меньшей мере его первая полипептидная часть, обладает активностью антагониста PD-1, в особенности если указанный гибридный белок связывается с PD-1 и блокирует его или связывается с лигандом PD-1 и блокирует его. Первая полипептидная часть указанного гибридного белка может включать в себя или состоять из любого из полипептидов-антагонистов PD-1 или ихPD-1-связывающих фрагментов, перечисленных здесь иным образом, для применения в качестве антагонистов PD-1 в способах изобретения. В предпочтительном варианте осуществления указанного гибридного белка упомянутая первая полипептидная часть является N-концевой по отношению к упомянутой второй полипептидной части. В отдельном варианте осуществления упомянутая первая полипептидная часть соединяется с упомянутой второй полипептидной частью с помощью олигопептида в дополнение к аминокислотам, составляющим упомянутые первую и вторую полипептидные части, указанные соединяющие аминокислоты не снижают существенно PD-1-антагонистическую активность указанного гибридного белка. В предпочтительном димерном гибридном белке димер получают в результате ковалентного связывания остатков Cys в СН-областях двух тяжелых цепей Ig, которые представляют собой те же остаткиCys, которые соединены дисульфидной связью в димеризованных нормальных тяжелых цепях Ig. Большое число полипептидных последовательностей, которые обычно используют в качестве связывающих партнеров гибридных белков, хорошо известны в данной области техники. Примеры используемых полипептидных связывающих партнеров включают в себя, но без ограничения, зеленый флуоресцентный белок (GFP), глутатион-S-трансферазу (GST), полигистидин, myc, гемаглютинин, Flag tag(Kodak, New Haven, CT), мальтоза-связывающий белок Е и протеин А. Другой вариант осуществления предоставляет тетрамерную конструкцию, содержащую субстрат BirA, соединенный с внеклеточным доменом вариантного полипептида B7-DC. Способы создания тетрамерной конструкции известны в данной области техники (см. Pertovas, et al., J. Exp. Med., 203:2281 (2006. Типичные мышиные гибридные белки B7-DC содержат аминокислоты 20-221 мышиного B7-DC,соединенные с аминокислотами 237-469 мышиного IgG2a (CAA49868). В одном неограничивающем примере человеческие гибридные белки B7-DC содержат аминокислоты 20-221 B7-DC человека, соединенные с аминокислотами 245-476 IgG1 человека (ААА 02914). Сигнальные пептиды гибридных белков B7DC включают в себя эндогенные сигнальные пептиды или любой другой сигнальный пептид, который способствует секреции гибридного белка из "хозяина". В другом варианте осуществления первый полипептид включает в себя только IgV-домен. Другие варианты осуществления могут включать в себя шарнирный домен и Fc-домен антитела IgG, такого как IgG1, причем не представлено ни одного домена вариабельной области. Другие варианты осуществления включают в себя применение шарнирной области и Fc-области IgG2 или IgG4, особенно содержащие N297Q или другую мутацию, которая уменьшает эффекторную функцию. В соответствии со способами и композициями изобретения полипептид, применяемый в качестве антагониста PD-1, или первая полипептидная часть гибридного белка, применяемого в качестве антагониста PD-1, включает в себя аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере 60% или по меньшей мере 65%, или по меньшей мере 70%, или по меньшей мере 75%, или по меньшей мере 80%, или по меньшей мере 85%, или по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95%, или по меньшей мере 99%-ной идентичностью с аминокислотами 1-221 SEQ ID NO: 1, предпочтительно с аминокислотами 20-221 SEQ ID NO: 1, или с аминокислотами 26-221 SEQ ID NO: 1, или с аминокислотами 1-202 SEQ ID NO: 3 или 4, более предпочтительно с аминокислотами 20-121 SEQ ID NO: 1 или с аминокислотами 1-102 SEQ ID NO: 3 или 4. В одном варианте осуществления полипептид, применяемый в качестве антагониста PD-1, или первая полипептидная часть гибридного белка, используемого в качестве антагониста PD-1, состоит из аминокислот 1-221 SEQ ID NO: 1, или состоит из аминокислот 20-221 SEQ ID NO: 1, или состоит из аминокислот 26-221 SEQ ID NO: 1, или состоит из аминокислот 1-202 SEQ ID NO: 3 или 4. В одном варианте осуществления (SEQ ID NO: 2), полипептид не включает в себя аминокислоты 1-19 SEQ ID NO: 1. В других конкретных примерах антагонист полипептида PD-1 или первая полипептидная часть гибридного белка-антагониста PD-1 включает в себя аминокислотную последовательность 20-121SEQ ID NO: 1, где предпочтительно он включает в себя аминокислотную последовательность WDYKY в положении остатков 110-114 или где он включает в себя аминокислоты 1-102 SEQ ID NO: 3, где предпочтительно он включает в себя аминокислотную последовательность WDYKY в положении остатков 91-95. В предпочтительном варианте осуществления указанные процентные идентичности достигаются с помощью применения консервативных аминокислотных замен, как определено в другом месте настоящего описания. В одном указанном варианте осуществления полипептидный антагонист PD-1 или первая полипептидная часть гибридного белка-антагониста PD-1 не включает в себя аминокислоты 1-19 SEQ ID NO: 1,или не включает в себя какую-либо часть трансмембранного домена, особенно указанный полный домен,или не включает в себя какую-либо часть внутриклеточного (или растворимого) домена, особенно указанный полный домен, лиганда PD-1 или другого белкового антагониста PD-1. В предпочтительном варианте осуществления указанный антагонист или первая полипептидная часть включает в себя только внеклеточный домен (ECD) SEQ ID NO: 1, и, таким образом, включается в состав только растворимая часть полипептида указанной последовательности или фрагмент указанной растворимой части. В других подобных вариантах осуществления полипептидный антагонист PD-1 или первая полипептидная часть гибридного белка-антагониста PD-1 включает в себя IgV-домен или IgV-подобный домен или его PD-1-связывающий фрагмент лиганда PD-1 или состоит из IgV-домена, или IgV-подобного домена, или его PD-1-связывающего фрагмента лиганда PD-1. В конкретных примерах указанный лигандPD-1 представляет собой молекулу B7-DC или В 7-Н 1 дикого типа, предпочтительно молекулу B7-DC или В 7-Н 1 дикого типа мыши или примата, предпочтительно человека. В других подобных вариантах осуществления полипептидный антагонист PD-1 или первая полипептидная часть гибридного белкаантагониста PD-1, PD-1-связывающий фрагмент IgV-домена или IgV-подобного домена, лиганда PD-1,особенно в случае IgV-домена или IgV-подобного домена состоит из аминокислот 20-121 SEQ ID NO: 1 или аминокислот 1-102 SEQ ID NO: 3. Антагонист PD-1 изобретения также включает в себя PD-1-связывающий фрагмент аминокислот 20-121 SEQ ID NO: 1 (человеческой полноразмерной) или аминокислот 1-102 SEQ ID NO: 3 (внеклеточный домен или ECD). В конкретных воплощениях полипептид или PD-1-связывающий фрагмент также включает в себя аминокислоты WDYKY в положении остатков 110-114 SEQ ID NO: 1 или WDYKY в положении остатков 91-95 SEQ ID NO: 3. В качестве неограничивающих примеров указанный PD-1-связывающий фрагмент включает в себя по меньшей мере 10, или по меньшей мере 20, или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50, или по меньшей мере 60, или по меньшей мере 70, или по меньшей мере 75, или по меньшей мере 80, или по меньшей мере 85, или по меньшей мере 90, или по меньшей мере 95, или по меньшей мере 100 расположенных рядом аминокислот последовательности аминокислот 20-121 SEQ ID NO: 1, где в предпочтительном варианте осуществления каждый PD-1 связывающий фрагмент включал бы в себя в качестве подфрагмента аминокислоты WDYKY, находящиеся в положении остатков 110-114 SEQ ID NO: 1, или WDYKY в положении остатков 91-95SEQ ID NO: 3. Другие предпочтительные полипептиды и PD-1-связывающие фрагменты, специально предусмотренные изобретением, включают в себя полипептидную последовательность аминокислот 20-121SEQ ID NO: 1 (человеческую полноразмерную) и их PD-1-связывающие фрагменты, где в указанном полипептиде или PD-1-связывающем фрагменте цистеин представлен в положении остатков 42 и/или 102,причем цистеин в обеих позициях является предпочтительным, и/или где фенилаланин представлен в положении остатка 21, и/или где глутаминовая кислота представлена в положении остатка 28, и/или где треонин и/или глутамин представлен в положении остатка 60, и/или где глутаминовая кислота представлена в положении остатка 101, и/или где изолейцин представлен в положении остатка 103, и/или где изолейцин представлен в положении остатка 105, и/или где глицин представлен в положении остатка 107,и/или где валин представлен в положении остатка 108, и/или где триптофан представлен в положении остатка 110, и/или где аспарагиновая кислота представлена в положении остатка 111, и/или где тирозин представлен в положении остатка 112, и/или где лизин представлен в положении остатка 113, и/или где тирозин представлен в положении остатка 114, при условии, что в случае PD-1-связывающих фрагментов указанный фрагмент является достаточно большим, чтобы включать в себя указанные положения аминокислот. Дополнительные предпочтительные полипептиды и PD-1-связывающие фрагменты, специально предусмотренные изобретением, включают в себя полипептидую последовательность аминокислот 1-102SEQ ID NO: 3 (ECD человека) или SEQ ID NO: 4 (ECD мыши) и их PD-1-связывающие фрагменты, где в указанном полипептиде или PD-1-связывающем фрагменте цистеин представлен в положении остатка 23 и/или 83, причем цистеин в обеих позициях является предпочтительным, и/или где фенилаланин представлен в положении остатка 2, и/или где глутаминовая кислота представлена в положении остатка 9,и/или где треонин или аргинин представлен в положении остатка 37, причем треонин является предпочтительным, и/или где глутамин представлен в положении остатка 41, и/или где аргинин представлен в положении остатка 82, и/или где лейцин представлен в положении остатка 84, и/или где изолейцин представлен в положении остатка 86, и/или где глицин представлен в положении остатка 88, и/или где аланин представлен в положении остатка 89, и/или где триптофан представлен в положении остатка 91, и/или где аспарагиновая кислота представлена в положении остатка 92, и/или где тирозин представлен в положении остатка 93, и/или где лизин представлен в положении остатка 94, и/или где тирозин представлен в положении остатка 95, при условии, что в случае PD-1-связывающих фрагментов указанный фрагмент является достаточно большим, чтобы включать в себя указанные положения аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления любой из указанных выше полипептидов также может включать в себя части или фрагменты, например, с 1 по 10 расположенных рядом аминокислот, извлеченных из сигнального, трансмембранного или С-концевого доменов полипептида B7-DC или В 7-Н 1,например, мыши или примата, предпочтительно человека. Указанные полипептиды и/или PD-1 связывающие фрагменты также могут быть представлены в любом из гибридных белков изобретения,например, где указанный полипептид или PD-1-связывающий фрагмент представляет собой "первый полипептид" указанного гибридного белка. В конкретных примерах молекула, скомбинированная с потенцирующим агентом для применения в схеме лечения изобретения, включает в себя PD-1-связывающий фрагмент аминокислот 20-221SEQ ID NO: 1. В одном подобном варианте осуществления фрагмент состоит из аминокислот 20-121SEQ ID NO: 1, где предпочтительно фрагмент включает в себя аминокислоты 110-114 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления представлен более чем один указанный фрагмент (как описано в другом месте настоящего документа) и молекула включает в себя по меньшей мере 2, 3, 4, 5 или более фрагментов белка B7-DC, в особенности где фрагмент является частью или содержит часть аминокислот 20-221 SEQ ID NO: 1. В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере один указанный фрагмент состоит из аминокислот 20-121 SEQ ID NO: 1, более предпочтительно по меньшей мере один указанный фрагмент включает в себя аминокислоты 110-114 SEQ ID NO: 1 (т.е. последовательностьWDYKY (SEQ ID NO: 14. В предпочтительных воплощениях PD-1-связывающий фрагмент включает в себя по меньшей мере 10, или по меньшей мере 25, или по меньшей мере 50, или по меньшей мере 75,или по меньшей мере 100 расположенных рядом аминокислот. Эндогенный сигнальный пептид человека имеет следующую последовательность:MIFLLLMLSL ELQLHQIAA (SEQ ID NO: 5) и представляет собой первые 19 аминокислот SEQ ID NO: 1. В определенных воплощениях полипептидные фрагменты B7-DC могут включать в себя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9 или 10 расположенных рядом аминокислот эндогенного или гетерологичного сигнального пептида(который может быть использован для получения рекомбинантного полипептида B7-DC путем экспрессии и экспрессии из трансформированной клетки). Также следует понимать, что полезный полипептидB7-DC может включать в себя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 расположенных рядом аминокислот трансмембранного домена B7-DC и/или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 расположенных рядом аминокислот цитоплазматического домена или их комбинации при условии, что фрагмент B7-DC сохраняет антагонистическую способность в отношении рецептора PD-1. Фенотипы мышей PD-1-/- предоставляют прямое доказательство того, что PD-1 является отрицательным регулятором иммунных ответов in vivo. В отсутствие PD-1 у мышей на фоне C57BL/6 медленно развивается волчаночно-подобный гломерулонефрит и прогрессирующий артрит (Nishimura, et al., Immunity, 11:141-151 (1999. У мышей PD-1-/- на фоне Balb/c стремительно развивается летальная аутоиммунная дилатационная кардиомиопатия (Nishimura, et al., Science. 291:319-322 (2001. Однако важное свидетельство указывает, что B7-DC может функционировать как костимуляционный активатор Т-клеточных ответов. В присутствии субоптимальных сигналов B7-DCTCR вызывает увеличение пролиферации и продукцию цитокинов in vitro (Tseng, et al., J. Exp. Med. 193:839-846 (2001. В то же время исследования in vitro показали отрицательную регуляторную рольB7-DC в Т-клеточных ответах. Представленные, на первый взгляд, противоречивые данные могут быть успешно объяснены экспрессией дополнительных рецепторов для B7-DC на Т-клетках, других, чем PD-1. Следовательно, белки B7-DC, их варианты, фрагменты и гибриды могут обладать преимуществом непосредственного усиления Т-клеточных ответов при связывании с неизвестным рецептором, который активирует Т-клетку, в дополнение к усилению Т-клеточных ответов путем предотвращения PD-1 опосредованной передачи ингибиторного сигнала. 2. Полипептиды В 7-Н 1. В другом варианте осуществления соединение для применения в комбинации с потенцирующим агентом в схеме лечения изобретения представляет собой или включает в себя фрагмент В 7-Н 1 млекопитающего, предпочтительно мыши или примата, предпочтительно человека, где указанный фрагмент связывается с PD-1 и блокирует его, но не вызывает передачи ингибиторного сигнала через PD-1, и указанный фрагмент представляет собой по длине по меньшей мере 10, или по меньшей мере 20, или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50, или по меньшей мере 60, или по меньшей мере 70, или по меньшей мере 80, или по меньшей мере 90, или по меньшей мере 100 расположенных рядом аминокислот. В других воплощениях фрагмент может быть различной длины при условии,что он характеризуется функцией связывания с PD-1, но не вызывает передачу ингибиторного сигнала,что приводит к уменьшению Т-клеточной пролиферации. Указанные фрагменты В 7-Н 1 также нашли применение в качестве первой полипептидной части гибридных белков изобретения. Последовательности В 7-Н 1 являются следующими: полипептид В 7-Н 1 человека (SEQ ID NO. 16):(опубл. 10 октября 2002 г.). 3. PD-1 и другие полипептиды. Другие полезные полипептиды изобретения включают в себя полипептиды, которые связываются с лигандами рецептора PD-1. Они включают в себя рецепторный белок PD-1 или его растворимые фрагменты, которые могут связываться с лигандами PD-1, такими как В 7-Н 1 или B7-DC, и предотвращать связывание с эндогенным рецептором PD-1, предотвращая, таким образом, передачу ингибиторного сигнала. Также показано, что В 7-Н 1 связывается с белком В 7.1 (Butte et al., Immunity, vol. 27, p. 111-122,(2007. Указанные фрагменты также включают в себя растворимую часть ECD белка PD-1, которая включает в себя мутации, такие как мутация A99L, которая увеличивает связывание с природными лигандами (Molnar et al., Crystal structure of the complex between programmed death-1 (PD-1) и its ligandPD-L2, PNAS, vol. 105, p. 10483-10488 (29 July 2008. B7-1 или его растворимые фрагменты, которые могут связываться с лигандом В 7-Н 1 и предотвращать связывание с эндогенным рецептором PD-1, предотвращая, тем самым, передачу ингибиторного сигнала, также являются полезными. Полипептиды PD-1, применяемые в способах изобретения, представляют собой следующие полипептиды: В соответствии с изобретением, поскольку В 7-1 и его фрагменты также могут связываться с В 7-Н 1 и передавать ингибиторную трансдукцию Т-клеткам через В 7-Н 1, блокирование указанного взаимодействия также может уменьшить передачу ингибиторного сигнала, которая происходит через В 7-Н 1. Соединения, применяемые в изобретении, включают в себя молекулы, которые блокируют указанный тип взаимодействия. Данные молекулы раскрыты в Butte et al. (2007) ранее и включают в себя антитела антиВ 7-Н 1 с "двойной" специфичностью, которые блокируют взаимодействие В 7-Н 1:В 7-1 и B7-H1:PD-1, а также антитела, демонстрирующие моноспецифичность, которые блокируют взаимодействиеPD-L1:B7-1. Соединения, которые препятствуют указанному взаимодействию путем блокирования В 7-1,также являются полезными и включают в себя анти-В 7-1 антитела. 4. Вариантные полипептиды. Полипептиды, используемые в изобретении, как описано, включают в себя полипептиды, которые изменены таким образом, что содержат одну или более аминокислотных замен, делеций или вставок. Способы мутагенеза известны в данной области техники. Мутированные или вариантные полипептиды ингибируют или уменьшают передачу ингибиторного сигнала через рецепторы PD-1 благодаря связыванию с лигандами PD-1. Альтернативно, варианты (например, полипептиды B7-DC) могут связываться с рецептором PD-1 и ингибировать, уменьшать или блокировать передачу ингибиторного сигнала через рецептор PD-1. Вариантные полипептиды могут представлять собой полипептиды, полученные из видов любого происхождения. В одном варианте осуществления вариантный полипептид является полипептидом, полученным из видов млекопитающих. В предпочтительном варианте осуществления вариантный полипептид является по происхождению полипептидом мыши или примата, предпочтительно человека. В одном варианте осуществления вариантный полипептид представляет собой полипептид B7-DC,который обладает такой же связывающей способностью в отношении PD-1, как B7-DC дикого типа или невариантный B7-DC, но не обладает или обладает менее чем 10% способностью запускать передачу ингибиторного сигнала через рецептор PD-1, по сравнению с немутировавшим полипептидом B7-DC. В других воплощениях вариантный полипептид B7-DC обладает связывающей способностью в отношенииPD-1 сигнальной трансдукции. Вариантный полипептид (например, вариантный полипептид В 7-DC) включает в себя полипептиды,характеризующиеся любой комбинацией аминокислотных замен, делеций или вставок при условии, что антагонистическая активность в отношении PD-1 не уменьшается существенно в сравнении с диким типом. Однако, в случае если указанное уменьшение существует, оно должно составлять не более чем половину значения активности дикого типа, так что указанный вариант характеризуется по меньшей мере 50% антагонистической активностью белка дикого типа в отношении PD-1, предпочтительно по меньшей мере 60%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 90 или 95%, при этом по меньшей мере 100% антагонистическая активность является особенно предпочтительной. Повышенные значения такой активности, полученные в результате применения указанного варианта, являются еще больше желательными. В одном варианте осуществления изолированные вариантные полипептиды B7-DC имеют аминокислотные изменения, такие что их аминокислотная последовательность характеризуется по меньшей мере 60, 70, 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99, 99,5 или 100% идентичностью с аминокислотной последовательностью полипептида B7-DC дикого типа, особенно с аминокислотной последовательностью дикого типа млекопитающего, предпочтительно мыши, или примата, предпочтительно человека, полипептида B7-DC дикого типа. Идентичность полипептидной последовательности может быть рассчитана с помощью определения% идентичности, предоставленного выше. Замены аминокислот в полипептидах могут быть "консервативными" или "неконсервативными". Молекулы семейства В 7, включая B7-DC, экспрессируются на клеточной поверхности с мембранным проксимальным константным IgC-доменом и мембранным дистальным IgV-доменом. Рецепторы указанных лигандов содержат общий внеклеточный IgV-подобный домен. Взаимодействия пар рецепторлиганд опосредуется главным образом через остатки в IgV-доменах лигандов и рецепторов. В целом,IgV-домены описывают как содержащие два листа, каждый из которых содержит слой -тяжей. Указанные -тяжи обозначают А', В, С, С', С", D, E, F и G. В одном варианте осуществления вариантные полипептиды B7-DC содержат аминокислотные изменения (т.е. замены, делеции или вставки) в одном или более -тяжей в любой возможной комбинации. В другом варианте осуществления варианты B7-DC содержат одно или более аминокислотных изменений (т.е. замен, делеций или вставок) в А', С, С', С", D, E,F или G -тяжах. В одном варианте осуществления варианты B7-DC содержат одно или более аминокислотных изменений в -тяже G. Что касается B7-DC мыши или примата, предпочтительно человека, вариантный полипептид B7-DC может содержать, без ограничения, замены, делеции или вставки в положениях, которые не уменьшат существенно связывание с PD-1 по сравнению с немутантным B7-DC. Следует понимать, однако, что замены в перечисленных положениях аминокислот могут быть выполнены с применением аминокислоты или аналога аминокислоты. Например, замены в перечисленных положениях могут быть выполнены с помощью одной из встречающихся в природе аминокислот (например, аланин, аспарагиновая кислота,аспарагин, аргинин, цистеин, глицин, глутаминовая кислота, глутамин, гистидин, лейцин, валин, изолейцин, лизин, метионин, пролин, треонин, серии, фенилаланин, триптофан или тирозин). Несмотря на то что описанные здесь замены, являются заменами в отношении B7-DC мыши и примата, предпочтительно человека, указано, что специалист в данной области техники может без труда произвести аналогичные изменения в соответствующих полипептидах других видов (например, крысы,хомяка, морской свинки, песчанки, кролика, собаки, кошки, лошади, свиньи, овцы, коровы или низшего примата). Предпочтительные фрагменты включают в себя весь или часть внеклеточного домена B7-DC, полезного для связывания с PD-1. В одном варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC представляют собой фрагменты, которые сохраняют способность связываться с PD-1 без инициирования передачи PD-1 ингибиторного сигнала. Один вариант осуществления предоставляет вариантный полипептид B7-DC, который является фрагментом полноразмерного B7-DC и характеризуются обычно по меньшей мере 20, 30,40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99, 100 или еще выше чем 100% антагонистической активностью полноразмерного вариантного полипептида B7-DC в отношении PD-1. Полезные фрагменты вариантных полипептидов B7-DC включают в себя растворимые фрагменты. Растворимые фрагменты B7-DC представляют собой фрагменты B7-DC, которые могут быть "слущены" с поверхности, секретированы или выделены иным способом из продуцирующих клеток. В одном варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в себя полный внеклеточный домен B7-DC. Внеклеточный домен В 7-DC включает в себя аминокислоты приблизительно от 20 до 221 аминокислоты B7-DC мыши или примата, предпочтительно человека. В другом варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в себя домены IgC и IgV B7-DC. В другом варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC включают в IgV-домен B7-DC. В одном варианте осуществления фрагменты вариантного полипептида B7-DC содержат участок полипептида, который является важным для способности связываться с PD-1. Указанные полипептидные фрагменты являются полезными для связывания и блокирования рецептора PD-1, чтобы предотвратить связывание природных лигандов с рецептором PD-1, усиливая, таким образом, иммунный ответ. Ингибирующие взаимодействия нативного В 7-Н 1 или B7-DC с PD-1 ингибируют супрессию иммунных ответов, которая происходила бы в противоположном случае. Фрагмент полипептида B7-DC мыши или примата, предпочтительно человека, который связывается с PD-1, содержит в качестве неограничивающего примера аминокислоты 101-105 или 111-113. Связывание В 7-Н 1 с рецептором PD-1 обычно ингибируется по меньшей мере на 50%, или по меньшей мере 60%, или по меньшей мере на 70%, или по меньшей мере 75%, или по меньшей мере на 80%, или по меньшей мере на 90%, или по меньшей мере на 95% или больше по сравнению с уровнем связывания В 7-Н 1 с PD-1 в отсутствие указанного фрагмента. Мутант A99L человеческого PD-1 связывает B7-DC и В 7-Н 1 с более высокой аффинностью, чем немутированный PD-1 человека (Lazar Molnar et al. PNAS, 105, p. 10483-10488 (2008. В одном варианте осуществления изобретения соединение, предназначенное для уменьшения передачи ингибиторного сигнала, представляет собой растворимый белок, такой как ECD PD-1, включающий в себя указанную мутацию. 5. Модифицированные полипептиды. Полипептиды, применяемые в изобретении, как описано, включая варианты, гомологи и их фрагменты, могут быть модифицированы с помощью химических функциональных групп, которые обнаруживают в ассоциации с полипептидами в нормальной клеточной среде, например, с помощью фосфорилирования, метилирования, амидирования, сульфатирования, ацилирования, гликозилирования, сумоилирования и убиквитинирования полипептида. Указанные полипептиды также могут быть модифицированы с помощью химических функциональных групп, которые обычно не являются частью полипептидов в клеточной среде. Указанные модификации могут быть введены в молекулу путем реакции аминокислотных остатков-мишеней полипептида с органическим агентом, используемым для получения производных, который способен реагировать с выбранными боковыми цепями или с концевыми остатками. Другая полезная модификация представляет собой циклизацию белка. Указанные модификации также включают в себя введение метки, способной обеспечить детектируемый сигнал, прямо или косвенно,включающей в себя, но без ограничения, радиоактивные изотопы и флуоресцентные соединения. Примеры химических производных полипептидов включают в себя остаток лизина и аминоконцевые остатки, образующие производные с сукциновым ангидридом или с другими ангидридами карбоновых кислот. Получение производных с циклическим карбоксильным ангидридом обладает эффектом изменения заряда остатков лизина. Другие подходящие реагенты для получения производных аминосодержащих остатков включают в себя имидоэфиры, такие как метилпиколинимидат; пиридоксальфосфат; пиридоксаль; хлорборгидрид; тринитробензолсульфоновая кислота; О-метилизомочевина; 2,4-пентандион и реакция с глиоксилатом, катализируемая трансаминазой. Карбоксильные боковые группы, аспартил или глутамил, могут быть выборочно модифицированы с помощью реакции с карбодиимидами (R-N=C=N-R'), такими как 1-циклогексил-3-(2-морфолинил-(4-этил)карбодиимид или 1-этил 3-(4-азония-4,4-диметилфенил)карбодиимид. Кроме того, остатки аспартила и глутамила могут быть превращены в остатки аспарагинила и глутаминила с помощью реакции с аммиаком. Полипептиды изобретения также могут включать в себя одну или более D-аминокислот, которыми заменяют одну или болееL-аминокислот. В других воплощениях потенцирующий агент, такой как СТХ 1 сам может быть частью соединения,которое уменьшает передачу ингибиторного сигнала, например, в случае, если потенцирующий агент химически связан с антагонистом PD-1 изобретения. 6. Гибридные белки. Также предоставлены гибридные полипептиды, содержащие первый гибридный партнер или полипептидую часть, включающую в себя весь или часть белкового антагониста PD-1, например полипептидB7-DC (включая, варианты, гомологи и их фрагменты), соединенный (i) непосредственно со вторым полипептидом или (ii) при желании, соединенный с линкерной пептидной последовательностью, которая объединена со вторым полипептидом. Наличие гибридного партнера может изменять, например, растворимость аффинность и/или валентность полипептидного антагониста PD-1. Раскрытые гибридные белки включают в себя любую комбинацию изменений аминокислот (т.е. замена, делеция или вставка), фрагмента и/или модификации пептидного антагониста PD-1, как описано выше. В одном варианте осуществления гибридные белки B7-DC включают в себя внеклеточный домен белка B7-DC в качестве первого связывающего партнера. В другом варианте осуществления указанные гибридные белки B7-DC включают в себя домен IgV и IgC белка B7-DC в качестве первого связывающего партнера. В другом варианте осуществления вариантные гибридные белки B7-DC включают в себя IgV-домен белка B7-DC в качестве первого связывающего партнера. Типичные первые гибридные партнеры включают в себя полипептид B7-DC примата, предпочтительно человека, или мыши, его фрагменты и их варианты, раскрытые выше. Предпочтительные фрагменты включают в себя внеклеточный домен B7-DC. Как описано, внеклеточный домен может включать в себя 1-10 расположенных рядом аминокислот сигнального пептида, трансмембранного домена B7-DC или их обоих. В одном варианте осуществления композиции и/или продукты и/или способы изобретения применяют антагонист рецептора PD-1, в особенности полипептиды, включая варианты, гомологи и их фрагменты, которые соединяют с другими полипептидами для создания гибридных белков, которые противодействуют рецептору PD-1 путем связывания лиганда PD-1, такого как В 7-Н 1, тем самым ингибируют взаимодействие ингибирующего лиганда с PD-1. В другом варианте осуществления полипептидные антагонисты рецептора PD-1 или их варианты соединяют с другими полипептидами для создания гибридных белков, которые оказывают антагонистическое действие на рецептор PD-1 путем связывания и блокирования рецептора PD-1 и ингибируют или уменьшают передачу ингибиторного сигнала через PD-1. Второй полипептидный связывающий партнер или вторая полипептидная часть могут представлять собой N-конец или С-конец относительно полипептидого антагониста PD-1. В предпочтительном варианте осуществления второй полипептид представляет собой С-конец полипептидного антагониста PD-1. В предпочтительном варианте осуществления гибридный белок, предусмотренный для применения в способах и композициях и/или продуктах изобретения, включает в себя по меньшей мере часть антитела. С появлением методов молекулярной биологии и рекомбинантной технологии теперь возможно производить молекулы антител рекомбинантными способами и создавать, таким образом, нуклеотидные последовательности генов, которые кодируют специфические аминокислотные последовательности, обнаруженные в полипептидной структуре антител. Указанные антитела могут быть получены либо с помощью клонирования нуклеотидных последовательностей генов, кодирующих полипептидные цепи указанных антител, либо с помощью прямого синтеза указанных полипептидных цепей со сборкой in vitro синтезированных цепей для создания активных тетрамерных (H2L2) структур с аффинностью к специфическим эпитопам и антигенным детерминантам. Указанные способы обеспечивают легкое получение антител, имеющих последовательности, типичные для нейтрализующих антител, полученных из различных видов и источников. Независимо от источника антител или их рекомбинантной конструкции или того, как они синтезированы, in vitro или in vivo, с использованием трансгенных животных, например коров, коз и овец, с использованием больших клеточных культур лабораторного или коммерческого объема в биореакторах или с помощью прямого химического синтеза без использования живых организмов на какой-либо стадии процесса все антитела обладают сходной общей трехмерной структурой. Указанная структура часто представляется в виде H2L2 и отражает тот факт, что антитела обычно включают в себя две легкие (L) аминокислотные цепи и две тяжелые (Н) аминокислотные цепи. Обе цепи содержат области, способные взаимодействовать со структурно комплементарной антигенной мишенью. Области, взаимодействующие с мишенью, обозначают как "вариабельные" или "V" области, и они характеризуются отличиями в аминокислотной последовательности от антител другой антигенной специфичности. В предпочтительных воплощениях полипептидные антагонисты рецептора PD-1, включая фрагменты, мутанты и другие варианты, имеют первого партнера слияния, имеющего весь или часть белкаB7-DC, или его варианта, слитого (i) непосредственно со вторым полипептидом, или (ii) необязательно слитого с пептидной линкерной последовательностью, которая слита со вторым полипептидом. Присутствие партнера слияния может изменить растворимость, аффинность и/или валентность B7-DC полипептида. В более предпочтительных воплощениях полипептиды B7-DC соединены с одним или более доменами константной области тяжелой цепи Ig, более предпочтительно с аминокислотной последовательностью, соответствующей шарнирной области, участкам СН 2 и СН 3 цепи C1 иммуноглобулина человека,или шарнирной области, участкам СН 2 и СН 3 цепи C2 а иммуноглобулина мыши. В предпочтительном варианте осуществления константная область предпочтительно включает в себя мутацию (например,N297Q), чтобы исключить или уменьшить связывание Fc-рецептора. Шарнирная область, участки СН 2 и СН 3 цепи C1 иммуноглобулина человека, имеют следующую аминокислотную последовательность: Шарнирная область, участки СН 2 и СН 3 цепи C2 а иммуноглобулина мыши имеют следующую аминокислотную последовательность: Типичные гибридные белки B7-DC мыши содержат аминокислоты 20-221 мышиного B7-DC, соединенного с аминокислотами 237-469 мышиного IgG2a (CAA49868). Гибридные белки B7-DC человека могут содержать аминокислоты 20-221 человеческого B7-DC, соединенного с аминокислотами 245-476 человеческого IgG1 (AAA02914). Сигнальные пептиды гибридных белков B7-DC могут быть эндогенными сигнальными пептидами или любым другим сигнальным пептидом, который способствует секреции гибридного белка из клетки-хозяина. Репрезентативный гибридный белок B7-DC-Ig мыши кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 8. Следует понимать, что раскрытые последовательности нуклеиновых кислот могут быть кодоноптимизированными для увеличения уровней экспрессии для синтеза гибридных белков, применяемых в способах и композициях настоящего изобретения. Способы оптимизации кодонов известны в данной области техники. Мышиный гибридный белок B7-DC-Ig, кодированный SEQ ID NO: 8, имеет следующую аминокислотную последовательность:SEQ ID NO: 10 предоставляет аминокислотную последовательность мышиного гибридного белка В одном варианте осуществления человеческий B7-DC-Ig кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 11, кодирующей аминокислотную последовательность B7-DC-Ig человека: Настоящее изобретение, в частности, предусматривает вариант осуществления, где зрелый гибридный белок, используемый в способах и композициях изобретения, характеризуется удаленной сигнальной последовательностью. В предпочтительном варианте осуществления сигнальная последовательность полностью удалена.SEQ ID NO: 13 предоставляет аминокислотную последовательность человеческого B7-DC-Ig без сигнальной последовательности: Настоящее изобретение, в частности, предусматривает варианты осуществления, где раскрытые гибридные белки B7-DC-Ig, используемые в раскрытых здесь способах и композициях, обладают последовательностью, идентичной по меньшей мере на 80, 85, 90, 99 или 100% по отношению к SEQ ID NO: 9,10, 12 или 13. В другом варианте осуществления изобретения гибридный полипептид может характеризоваться биспецифической функцией, в соответствии с которой первый гибридный партнер связывается с лигандом PD-1, таким как В 7-Н 1, и второй гибридный партнер связывается с рецептором PD-1 без инициации передачи ингибиторного сигнала через рецептор PD-1. Несмотря на то что полипептид, применяемый в изобретении, может быть мономерным или димерным, сами гибридные белки могут быть представлены в мономерной или олигомерной форме, предпочтительно в виде димера. В конкретных воплощениях гибридные белки, применяемые в качестве антагонистов PD-1 в способах и композициях изобретения, могут собираться спонтанно в олигомерные, в частности, димерные формы или могут быть химически связаны для создания указанных олигомеров с помощью способов, хорошо известных в данной области техники. Например, гибридный белок, применяемый в изобретении, может включать в себя часть полипептида B7-DC, соединенную с частью антитела, и указанные части далее могут быть собраны в димер. В одном примере полипептид для применения в изобретении гибридизируют в виде одной аминокислотной цепи с Fc-областью антитела (например, где указанная конструкция экспрессируется из одного рекомбинантного полипептида), после чего два таких гибридных продукта соединяют друг с другом для создания гомодимера, например, с помощью дисульфидной связи между соответствующими Fc-областями. Указанные димерные продукты могут представлять собой гомодимеры (где оба мономерных гибридных белка идентичны) или могут представлять собой гетеродимеры (где два различных гибридных белка связаны друг с другом). Отдельные мономеры указанных димеров могут быть связаны способами,известными в данной области техники, например, с помощью ковалентной связи (например, дисульфидная связь) или с помощью нековалентной связи (такой как ионное взаимодействие). B7-DC-Ig, применяемый в примерах изобретения, представлен в форме гомодимера, содержащего две копии SEQ ID NO: 10, связанных вместе дисульфидной связью. Кроме того, гетеродимеры изобретения включают в себя биспецифические белки и гибридные белки, в которых одна мономерная часть связывается с PD-1 и другая часть связывается с природным лигандом PD-1. Указанные гетеродимеры создают путем соединения полипептидов и гибридных белков, полностью описанных в другой части настоящего документа. В другом полезном варианте осуществления изобретения антагонист PD-1 представляет собой гетеродимер, где, например, два гибридных белка соединены вместе, но они не являются идентичными по аминокислотной последовательности. В конкретном примере каждый мономер может включать в себяFc-часть антитела, соединенную с активным фрагментом полипептида B7-DC, где указанные активные фрагменты являются фрагментами из различных частей полипептида B7-DC или где гибридный белок,включающий в себя Fc-часть антитела, соединенную с полноразмерным нативным B7-DC полипептидом,связан (например, поперечной связью) с гибридным белком, содержащим Fc-часть антитела и активный фрагмент полноразмерного нативного полипептида BY-DC. В каждом указанном случае часть антитела,использованная для создания каждого мономерного гибридного белка, может отличаться в двух мономерных единицах. Любая указанная димерная комбинация в частности предусмотрена способами и композициями изобретения. В предпочтительном димерном гибридном белке димер получают в результате ковалентного связывания Cys-остатков в СН-областях двух тяжелых цепей Ig, которые представляют собой те же самые Cysостатки, которые соединены дисульфидной связью в димеризованных тяжелых цепях обычного Ig. Другое воплощение предоставляет тетрамерную конструкцию, содержащую субстрат BirA, соединенный с внеклеточным доменом вариантного полипептида B7-DC. Способы создания тетрамерных конструкций известны в данной области техники (см. Pertovas, et al., J. Exp. Med., 203:2281 (2006. 7. Анти-PD-1 и другие антитела. Другие антагонисты PD-1, предусмотренные способами изобретения, включают в себя антитела,которые связываются с PD-1 или с лигандами PD-1, и другие антитела. В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения Т-клеточного ответа у млекопитающего, который в этом нуждается, включающему в себя назначение указанному млекопитающему эффективной схемы лечения, включающей в себя антитело анти-PD-1 и потенцирующий агент, где указанная схема лечения является эффективной для увеличения Т-клеточного ответа млекопитающего на указанный антиген. Антитела анти-PD-1, применяемые в схеме (схемах) лечения изобретения, включают в себя, но без ограничения, антитела, описанные в следующих публикациях:al., WO 2007/005874), PCT US2008/084923 (Terrett et al., WO 2009/073533), Berger et al., Clin. Cancer Res.,vol. 14, p. 30443051 (2008). Конкретным примером антитела анти-PD-1, применяемого в способах изобретения, являетсяMDX-1106 (см. Kosak, патент США 20070166281 (опубл. 19 июля 2007 г.), абзац 42), человеческое антитело анти-PD-1, предпочтительно вводимое в дозе 3 мг/кг. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения Т-клеточного ответа у млекопитающего, который в этом нуждается, включающему в себя назначение указанному млекопитающему эффективной схемы лечения, включающей в себя антитело анти-PD-1 лиганда, например антитело анти-В 7-Н 1, и потенцирующий агент, где указанная схема лечения является эффективной для увеличения Т-клеточного ответа указанного млекопитающего на указанный антиген. Антитела анти-В 7-Н 1, применяемые в схеме (схемах) лечения изобретения, включают в себя, но без ограничения, антитела, описанные в следующих публикациях:US 2006/0110383 (опубл. 25 мая 2006 г.). Конкретным примером антитела анти-В 7-Н 1, применяемого в способах изобретения, являетсяMDX-1105 (WO 2007/005874, опубл. 11 января 2007 г., человеческое антитело анти-В 7-Н 1. Для антитела анти-B7-DC см. патентные заявки США 7411051, 7052694, 7390888, 20060099203. Другой вариант воплощения изобретения включает в себя биспецифическое антитело, которое включает в себя антитело, которое связывается с рецептором PD-1, соединенное мостиковой связью с антителом, которое связывается с лигандом PD-1, таким как В 7-Н 1. В предпочтительном варианте осуществления часть, связывающая PD-1, уменьшает или ингибирует сигнальную трансдукцию через рецептор PD-1. Антитело для применения в изобретении необязательно должно быть антителом анти-PD-1 или антителом анти-PD-1 лиганда, но может представлять собой другое антитело, используемое в опосредовании эффектов Т-клетки в иммунном ответе. В указанном аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения Т-клеточного ответа на антиген у млекопитающего, который в этом нуждается,включающему в себя введение указанному млекопитающему эффективной схемы лечения, включающей в себя антитело анти-CTLA4 и потенцирующий агент, где указанная схема лечения является эффективной для увеличения Т-клеточного ответа указанного млекопитающего на указанный антиген. Пример антитела анти-CTLA4, предусмотренного для применения в способах изобретения, включает в себя антитело, которое описано в PCT US2006/043690 (Fischkoff et al., WO 2007/056539). Конкретные примеры антитела анти-CTLA4, применяемого в способах изобретения представляют собой ипилимумаб, также известный как MDX-010 или MDX-101, человеческое антитело анти-CTLA4,предпочтительно вводимое в дозе 10 мг/кг, и тремелимумаб человеческое антитело анти-CTLA4, предпочтительно вводимое в дозе 15 мг/кг. 8. Малые молекулы антагонистов PD-1. Антагонисты рецептора PD-1 также могут представлять собой малые молекулярные антагонисты. Термин "малая молекула" относится к небольшим органическим соединениям с молекулярным весом более 100 и менее 2500 Да, предпочтительно от 100 до 2000 Да, более предпочтительно приблизительно от 100 до 1250 Да, более предпочтительно приблизительно от 100 до 1000 Да, более предпочтительно приблизительно от 100 до 750 Да, более предпочтительно от 200 до 500 Да. Малые молекулы часто включают в себя циклический углерод или гетероциклические структуры и/или ароматические или полиароматические структуры, замещенные одной или более функциональными группами. Малые молекулярные антагонисты уменьшают или препятствуют сигнальной трансдукции через рецептор PD-1 путем связывания с лигандами PD-1, такими как В 7-Н 1 и B7-DC и предотвращения взаимодействия лиганда сPD-1 или путем связывания и блокирования непосредственно рецептора PD-1 без инициирования сигнальной трансдукции через рецептор PD-1. В одном варианте осуществления указанная малая молекула может быть введена в комбинации с другим антагонистом PD-1 или с антагонистом CTLA4, таким как антитело, специфичное к PD-1, или один из его лигандов или как антитело, специфичное к CTLA4, или один из его лигандов. Таким образом, указанные малые молекулы могут быть введены в качестве соединений в один или более способов изобретения или могут быть введены в комбинации с другими соединениями, применяемыми в способах изобретения. Например, показано, что серии малых органических соединений связываются с лигандом В 7-1 для предотвращения связывания с CTLA4 (см. Erbe et al., J. Biol. Chem., vol. 277, p. 7363-7368(2002). Указанные малые органические соединения могут быть введены отдельно или вместе с антителом анти-CTLA4, в комбинации с введением СТХ, для уменьшения передачи ингибиторного сигнала Т-клеток. В одном варианте осуществления антагонисты PD-1 или антагонисты CTLA4, предусмотренные для применения в способах изобретения, включают в себя антисмысловые нуклеиновые кислоты, как ДНК,так и РНК, а также молекулы siPHK. Указанные антисмысловые молекулы предотвращают экспрессиюPD-1 на Т-клетках, а также продукцию Т-клеточных лигандов, таких как В 7-H1, PD-L1 и PD-L2. Например, siPHK (например, длиной приблизительно 21 нуклеотид, которая специфична для гена, кодирующего PD-1 или кодирующего лиганд PD-1, и олигонуклеотиды которого могут быть без труда приобретены коммерчески), объединенный с носителями, такими как полиэтиленимин (см. Cubillos-Ruiz et al., J. CHn.Invest. 119(8):2231-2244 (2009), легко поглощается клетками, которые экспрессируют PD-1, а также лиганды PD-1 и уменьшает экспрессию указанных рецепторов и лигандов, чтобы обеспечить снижение передачи ингибиторного сигнала в Т-клетки, активируя, тем самым, Т-клетки. В. Потенцирующие агенты. В соответствии с изобретением активность антагониста PD-1 увеличивается, предпочтительно синергически, благодаря присутствию потенцирующего агента. Потенцирующий агент воздействует на увеличение эффективности антагониста рецептора PD-1, возможно с помощью более чем одного механизма, хотя точный механизм действия не является существенно важным для широкой лечебной практики настоящего изобретения. В предпочтительном варианте осуществления потенцирующий агент представляет собой циклофосфамид. Циклофосфамид (СТХ, Цитоксан, или Неосар) представляет собой лекарство оксазафосфорин и аналоги и включает в себя ифосфамид (IFO, Ифекс), перфосфамид, трофосфамид (трофосфамид; иксотен) и фармацевтически приемлемые соли, сольваты, пролекарства и их метаболиты (патентная заявка США 20070202077, которая включена во всей полноте). Ифосфамид (МИТОКСАНА) является структурным аналогом циклофосфамида и механизм его действия считают идентичным или в основном сходным с механизмом действия циклофосфамида. Перфосфамид(4-гидропероксициклофосфамид) и трофосфамид также являются алкилирующими агентами, которые структурно связаны с циклофосфамидом. Например, перфосфамид алкилирует ДНК, ингибируя тем самым репликацию ДНК и РНК и синтез белка. Новые производные оксазофосфоринов были созданы и оценены в качестве попытки улучшить селективность и получить ответ с меньшей цитотоксичностью для хозяина (Liang J, Huang M, Duan W, Yu XQ, Zhou S. Design of new oxazaphosphorine anticancer drugs.Curr Pharm Des. 2007; 13(9):963-78. Review). Указанные производные включают в себя мафосфамид(СВМ-11), NSC 612567 (альдофосфамид пергидротиазин) и NSC 613060 (альдофосфамид тиазолидин). Мафосфамид представляет собой аналог оксазафосфорина, который является химически стабильной солью 4-тиоэтансульфоновой кислоты 4-гидрокси-СРА. Глуфосфамид является производным IFO, в котором изофосфорамид горчицы, алкилирующий метаболит IFO, связан гликозидной связью с молекулой бета-D-глюкозы. Дополнительные аналоги циклофосфамида описаны в патенте США 5190929 под названием "Аналоги циклофосфамида, применяемые в качестве противоопухолевых агентов", который включен в описание посредством ссылки во всей своей полноте. В других воплощениях потенцирующий агент представляет собой агент, который уменьшает активность и/или число регуляторных Т-лимфоцитов (T-reg), предпочтительно сунитиниб (SUTENT),анти-TGF или иматиниб (GLEEVAC). Описанная схема лечения также может включать в себя введение адъюванта. Подходящие потенцирующие агенты также включают в себя ингибиторы митоза, такие как паклитаксел, ингибиторы ароматазы (например, летрозол) и ингибиторы ангиогенеза (ингибиторы VEGF, например авастин, VEGF-Trap) (см., например, Li et al., Vascular endothelial growth factor blockade reduces С. Фармацевтические композиции. В одном аспекте изобретение относится к терапевтической композиции, содержащей молекулу, которая предотвращает передачу ингибиторного сигнала через PD-1, или антагонист CTLA4, и потенцирующий агент, в фармацевтически приемлемом носителе. Компоненты указанной композиции представлены в количестве, эффективном для увеличения Т-клеточного ответа у млекопитающего. В конкретных воплощениях потенцирующий агент представляет собой циклофосфамид или аналог циклофосфамида,примеры таких аналогов перечислены выше. В других конкретных примерах потенцирующий агент представляет собой агент, который уменьшает активность регуляторных Т-лимфоцитов (T-reg), где предпочтительно активность снижается вследствие уменьшения числа указанных Т-reg. В предпочтительных неограничивающих вариантах осуществления, агент представляет собой сунитиниб (SUTENT), анти-TGF или иматиниб (GLEEVAC). Потенцирующий агент, применяемый в составлении композиции изобретения, также включает в себя ингибиторы митоза, такие как паклитаксел, ингибиторы ароматазы (например, летрозол), ингибиторы ангиогенеза (ингибиторы VEGF, например авастин, VEGF-Trap), антрациклины, оксалиплатин, доксорубицин, антагонисты TLR4 и антагонисты IL-18. Терапевтическая композиция изобретения также, по желанию, включает в себя по меньшей мере один дополнительный агент, который может представлять собой одно или более антитело анти-PD-1,антитело анти-CTLA4, ингибитор митоза, ингибитор ароматазы, антагонист рецептора аденозина А 2 а(A2AR) или ингибитор ангиогенеза. Любая из терапевтических композиций изобретения также может содержать один или более адъювантов, которые описаны в настоящем документе. Антагонист PD-1, применяемый в качестве компонента терапевтической композиции изобретения,включает в себя любой из антагонистов PD-1, перечисленных в описании для применения в любом из способов изобретения. Например, указанный антагонист PD-1 включает в себя любой из гибридных белков, перечисленных в описании. Указанный антагонист также может представлять собой любой из полипептидов или PD-1-связывающих фрагментов, перечисленных в описании для применения в качестве первой полипептидной части любого из гибридных белков, описанных для применения в любом из способов изобретения. Такой антагонист может далее представлять собой антитело, такое как любое из известных антител анти-PD-1, анти-137-DC или ант-В 7-Н 1, упомянутых в описании. Терапевтическая композиция изобретения также включает в себя в дополнение или вместо вышеупомянутого антагониста PD-1 антитело анти-CTLA4. Такая композиция, соответственно, содержит указанное антитело анти-CTLA4 и потенцирующий агент из числа уже описанных здесь. Терапевтическая композиция изобретения находит применение в любом из способов изобретения,раскрытых в описании. Указанная композиция, несмотря на то что предназначена для применения в качестве активного лечения состояния болезни, также может найти применение в качестве профилактической композиции для предотвращения любого из заболеваний, перечисленных в описании. В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает терапевтическую композицию, содержащую антагонист PD-1 и потенцирующий агент в фармацевтически приемлемом носителе, где антагонистPD-1 и потенцирующий агент представлены в количестве, эффективном для увеличения Т-клеточного ответа у млекопитающего. Терапевтические композиции в объеме изобретения включают в себя композиции, содержащие любую и все комбинации антагонистов PD-1 и/или антител, раскрытых в описании, с любым из перечисленных потенцирующих агентов. В качестве неограничивающих примеров терапевтическая композиция изобретения включает в себя композицию, содержащую эффективное количество одного или более антагонистов PD-1, например комбинацию любого или всех полноразмерных полипептидов, приведенных здесь в виде конкретных SEQ ID NO или их гомологов, вместе с одним или более фрагментами любого из указанных полипептидов, включая комбинации, где любое или все из них соединены с другими белками, например соединены с одним или более иммуноглобулинами, перечисленными здесь, или не соединены, и комбинации содержат один или более потенцирующих агентов, таких как циклофосфамид отдельно, или циклофосфамид плюс один или более его аналогов, только один или более аналогов циклофосфамида, или потенцирующий агент может состоять из циклофосфамида и агента, который уменьшает число T-reg у млекопитающего, получающего композицию, или может состоять из аналога циклофосфамида плюс агент, который уменьшает число Т-reg, или потенцирующий агент может состоять только из одного или более агентов, которые уменьшают число T-reg или другую активность T-reg. Все указанные комбинации предусмотрены изобретением, если только композиция включает в себя по меньшей мере один антагонист PD-1 и/или антитело, опосредующее Т-клеточную активность, и по меньшей мере один потенцирующий агент. Композиции изобретения также могут включать в себя дополнительные активные агенты. В предпочтительных воплощениях любой композиции изобретения фармацевтическая или терапевтическая композиция далее включает в себя по меньшей мере один дополнительный агент, выбранный из группы,включающей в себя антитело анти-PD-1, антитело анти-CTLA4, ингибитор митоза, такой как паклитаксел, ингибитор ароматазы, такой как летрозол, антагонист A2AR, ингибитор ангиогенеза, антрациклины,- 23023148 оксалиплатин, доксорубицин, антагонисты TLR4 и антагонисты IL-18. Антагонист PD-1 и/или потенцирующий агент могут быть введены с помощью любых подходящих средств. В предпочтительном варианте осуществления антагонист PD-1 и/или потенцирующий агент вводят в водном растворе с помощью парентеральной инъекции. Композиция также может быть в форме суспензии или эмульсии. В целом, предоставляют фармацевтические композиции, включающие в себя эффективные количества пептида или полипептида, и дополнительно включают в себя фармацевтически приемлемые растворители, консерванты, солюбилизаторы, эмульгаторы, адъюванты и/или носители. Указанные композиции включают в себя растворители: стерилизованную воду, забуференный физиологический раствор с различным буферным составом (например, Tris-HCl, ацетат, фосфат), различными значениями рН и ионной силы; и, по желанию, добавки, такие как детергенты и солюбилизирующий компонент (например, TWEEN 20, TWEEN 80, Polysorbate 80), антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, матабисульфит натрия) и консерванты (например, тимерсол, бензиловый спирт) и объемообразующие субстанции (например, лактоза, маннитол). Примерами неводных растворителей или сред для лекарства являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло и кукурузное масло, желатин, и органические эфиры для инъекций, такие как этилолеат. Композиции могут быть лиофилизированы и повторно растворены/ресуспендированы непосредственно перед употреблением. Композиции могут быть простерилизованы, например, путем фильтрования через фильтры, задерживающие бактерии, с включением в композиции стерилизующих агентов, путем облучения композиции или путем нагревания композиции. Фармацевтические композиции изобретения могут быть введены парентеральным (внутримышечная, внутрибрюшинная, внутривенная (IV) или подкожная инъекция), трансдермальным (либо пассивно,либо с использованием электрофореза или электропорации) или трансмукозальным (назальным, вагинальным, ректальным или сублингвальным) способом введения. Способы изобретения не исключают введение антагониста PD-1 и потенцирующего агента отдельными и различными путями (например, местно). Антагонист PD-1 и потенцирующий агент могут быть введены в одно и то же время или в разные моменты времени, при этом потенцирующий агент вводят до или после введения антагонистаPD-1. В одном варианте осуществления потенцирующий агент вводят как до, так и после введения антагонистаPD-1. В одном таком варианте осуществления один и тот же потенцирующий агент вводят до и после введения антагониста PD-1. В другом варианте осуществления потенцирующий агент вводят до введения антагониста PD-1. Используемый в описании термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" означает дозу, достаточную для лечения ингибирования или облегчения одного или более симптомов нарушения, которое лечат, или для предоставления иным образом желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Точная дозировка будет варьировать в зависимости от ряда факторов, таких как субъект-зависимые переменные (например, возраст, состояние иммунной системы и т.д.), заболевание, и производимое лечение. Терапевтически эффективные количества антагонистов рецепторов PD-1 и/или антител вместе с потенцирующими агентами вызывают иммунный ответ, который должен быть достигнут или поддержан. Выбранная доза зависит от желаемого терапевтического эффекта, от пути введения, и от продолжительности требуемого лечения. Обычно уровни доз 0,001-50 мг/кг массы тела вводят млекопитающим ежедневно. Предпочтительно указанная доза составляет 1-50 мг/кг, более предпочтительно 1-40 мг/кг или даже 1-30 мг/кг, при этом доза 2-20 мг/кг является также предпочтительной дозой. Примеры других доз включают в себя 2-15 мг/кг, или 2-10 мг/кг или даже 3-5 мг/кг, при этом доза 4 мг/кг представляет собой конкретный пример. В схемах лечения с применением потенцирующего агента и антитела, такого как антитело анти-PD-1 или антитело анти-CTLA4, дозы обычно соответствуют интервалу 0,1-100 мг/кг, при этом более узкие интервалы от 1 до 50 мг/кг являются предпочтительными и диапазоны от 10 до 20 мг/кг являются более предпочтительными. Подходящая доза для субъекта человека составляет 5-15 мг/кг, при этом доза антитела 10 мг/кг (например, человеческое антитело анти-PD-1, аналогичное MDX-1106) является наиболее предпочтительной (плюс подходящая доза циклофосфамида или другого потенцирующего агента, введенная приблизительно за 24 ч перед введением антитела). В целом, только в качестве примера лекарственные формы на основе веса тела для любого из антагонистов сигнальной трансдукции, применяемого в способах изобретения, включают в себя дозы в диапазоне 5-300 мг/кг, или 5-290 мг/кг, или 5-280 мг/кг, или 5-270 мг/кг, или 5-260 мг/кг, или 5-250 мг/кг,или 5-240 мг/кг, или 5-230 мг/кг, или 5-220 мг/кг, или 5-210 мг/кг, или 20-180 мг/кг, или 30-170 мг/кг, или 40-160 мг/кг, или 50-150 мг/кг, или 60-140 мг/кг, или 70-130 мг/кг, или 80-120 мг/кг, или 90-110 мг/кг,или 95-105 мг/кг, причем дозы 3, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 50 и 100 мг/кг являются конкретными примерами предпочтительных доз. Указанные дозы, разумеется, могут быть введены повторно. Доза, разумеется,будет коррелировать с видом млекопитающего, получающего указанную дозу. Дозы перечисленных выше интервалов мг/кг являются пригодными для млекопитающих, включая грызунов, таких как мыши и крысы, и для приматов, в особенности для человека, дозы, составляющие приблизительно 5, 10 и 15 мг/кг, являются особенно предпочтительными для лечения человека. В соответствии со схемой лечения изобретения потенцирующий агент, например циклофосфамид,вводят в нетоксических дозах, которые варьируют в зависимости от вида животного. В конкретных воплощениях потенцирующий агент вводят с помощью любого подходящего способа введения, включая парентеральный или пероральный, первый способ из двух упомянутых выше включает в себя системное введение, такое как внутривенное введение. Например, потенцирующий агент, подобный циклофосфамиду, обычно вводят перорально. Указанное введение может происходить в любой удобной дозе, зависящей от потенцирующего агента. Доза в каждом случае может быть основана на массе тела или доза может быть введена в виде единичной дозы. Несмотря на то что СТХ сам по себе не токсичен, некоторые из его метаболитов являются цитотоксическими алкилирующими агентами, которые индуцируют образование перекрестных связей в ДНК и, в высоких дозах, разрывы цепи. Многие клетки являются устойчивыми к СТХ, потому что они экспрессируют высокие уровни детоксицирующего фермента альдегиддегидрогеназы (ALDH). СТХ воздействует на пролиферирующие лимфоциты, поскольку лимфоциты (но не гемопоэтические стволовые клетки) экспрессируют низкие уровни ALDH, и делящиеся клетки являются наиболее чувствительными к ДНКалкилирующим агентам. Низкие дозы СТХ (200 мг/кг) могут обладать иммуностимулирующими эффектами, включающими в себя стимуляцию противоопухолевых иммунных ответов в человеческих и мышиных моделях рака(BrodeCooke Crit Rev. Immunol. 28:109-126 (2008. Указанные низкие дозы являются субтерапевтическими и не обладают непосредственной противоопухолевой активностью. Напротив, высокие дозы СТХ ингибируют противоопухолевый ответ. Роль СТХ в потенцировании противоопухолевого иммунного ответа можно объяснить несколькими механизмами: (а) истощение CD4+CD25+FoxP3+T-reg (и в особенности пролиферирующих T-reg, которые могут быть особенно супрессивными); (b) истощение В-лимфоцитов; (с) индукция оксида азота (NO), приводящая к супрессии роста опухолевых клеток;(d) мобилизация и размножение CD11b+Gr-1+ MDSC. Указанные первичные эффекты обладают многочисленными вторичными эффектами; например, после истощения T-reg макрофаги производят большее количество IFN- и меньшее количество IL-10. Также показано, что СТХ индуцирует экспрессию IFN типа I и усиливает гомеостатическую пролиферацию лимфоцитов. Истощение T-reg наиболее часто упоминают в качестве механизма, с помощью которого СТХ потенцирует противоопухолевый иммунный ответ. Указанное заключение основано отчасти на результатах экспериментов по адаптивному переносу. В модели с применением опухолевых клеток АВ 1-НА обработка СТХ на 9-й день обеспечивала показатель эффективности лечения 75%. Перенос очищенных T-reg на 12-й день почти полностью ингибировал СТХ-ответ (van der Most et al. Cancer Immunol. Immunother. 58:1219-1228 (2009). Сходный результат наблюдали в модели с опухолевыми клетками HHD2: адаптивный перенос CD4+CD25+ T-reg после предварительной обработки СТХ устранял терапевтический ответ на вакцину (Taieb. J. J. Immunol. 176:2722-2729 (2006. Многочисленные клинические испытания с участием людей показали, что СТХ в низкой дозе является безопасным, хорошо переносимым и эффективным агентом для стимулирования противоопухолевых иммунных ответов (Bas,Mastrangelo Cancer Immunol. Immunother. 47:1-12 (1998. Оптимальной дозой СТХ для потенцирования противоопухолевого иммунного ответа является доза, которая понижает в целом количества Т-клеток при снижении уровней T-reg ниже диапазона нормальных значений, но которая является субтерапевтической дозой (см. Machiels et al. Cancer Res. 61:3689-3697 (2001. В клинических испытаниях с участием людей, где СТХ использовали в качестве иммунопотенцирующего агента, обычно применяли дозу 300 мг/м 2. Для человека средней комплекции (6 футов,170 фунтов (78 кг) с площадъю поверхности тела 1,98 м 2), 300 мг/м 2 составляет 8 мг/кг, или 624 мг общего белка. В мышиной модели рака эффективность наблюдали в дозах, изменявшихся в диапазоне 15-150 мг/кг, что соответствует 0,45-4,5 мг общего белка у мыши весом 30 г (Machiels et al. Cancer Res. 61:3689-3697 (2001), Hengst et al. Cancer Res. 41:2163-2167 (1981), Hengst Cancer Res. 40:2135-2141(1980. Для более крупных млекопитающих, таких как примат, предпочтительно человек, пациент, могут быть использованы указанные дозы мг/м 2, но стандартные дозы, вводимые в течение конечного промежутка, могут быть предпочтительными. Указанные стандартные дозы могут быть введены на ежедневной основе в течение конечного промежутка времени, например вплоть до 3 дней, или вплоть до 5 дней,или вплоть до 7 дней, или вплоть до 10 дней, или вплоть до 15 дней, или вплоть до 20 дней, или вплоть до 25 дней, все специфически предусмотрены изобретением. Аналогичные схемы введения могут быть применены для других потенцирующих агентов, перечисленных в описании. Все указанные введения могут происходить до или после введения PD-1-связывающей молекулы изобретения. Альтернативно, одна или более дозы PD-1-связывающей молекулы изобретения могут быть разнесены во времени с введением потенцирующего агента для формирования однообразного или неоднообразного курса лечения, при котором вводят одну или более дозы потенцирующего агента с последующими одной или более дозами PD-1-связывающего соединения с последующими одной или более дозами потенцирующего агента, согласно графику, выбранному или заданному исследователем или врачом, которые вводят указанные агенты. В других конкретных вариантах осуществления схема лечения включает в себя многократные введения одного или более антагонистов PD-1. В некоторых вариантах осуществления указанные многократные введения антагонистов PD-1 происходят в сочетании с многократными введениями одного и того же или различных потенцирующих агентов. Как и в других воплощениях изобретения, здесь потенцирующий агент вводят по меньшей мере за 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 24 или 30 ч до или после введения антагониста PD-1. Фармацевтические композиции, используемые здесь, также содержат фармацевтически приемлемый носитель, включающий в себя любой подходящий растворитель или среду для лекарства, который включает в себя любой фармацевтический агент, который сам не вызывает продукции антител, вредных для субъекта, принимающего композицию, и который может быть введен без неспецифической токсичности. Фармацевтически приемлемые носители включают в себя, но без ограничения, жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и этанол и т.п., включая носители, используемые для создания спреев для назальной доставки и другой доставки через респираторный тракт или для доставки в зрительную систему. Полное обсуждение фармацевтически приемлемых носителей, растворителей и других сред для лекарства представлено в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., N.J. currentedition). Композиции вакцин (как обсуждается ниже) далее могут включать в себя дополнительные вещества для стабилизации значения рН или для функционирования в качестве адъювантов, увлажняющих агентов или эмульгирующих агентов, которые могут служить для улучшения эффективности вакцины. Вакцины обычно создают для парентерального введения и вводят либо подкожно, либо внутримышечно. Указанные вакцины также могут быть созданы в виде суппозиториев или для перорального введения с помощью методов, известных в данной области техники, или для введения через назальный или респираторный пути.D. Способы получения. Изолированный полипептидный антагонист PD-1, включая варианты, гомологи и их фрагменты,либо дикого типа, либо мутировавшие, и гибридные белки, содержащие любое из указанного, все предусмотрены для включения в изобретение, могут быть получены, например, с помощью химического синтеза или с помощью рекомбинантной продукции в клетке-хозяине. Для рекомбинантного получения костимулирующего полипептида нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, может быть использована, чтобы трансформировать, трансдуцировать или трансфицировать бактериальную или эукариотическую клетку-хозяин (например, клетку насекомого,дрожжей или млекопитающего). Следует понимать, что нуклеотидные последовательности могут быть кодон-оптимизированными для увеличения уровней экспрессии белка в определенном типе клеткихозяина. Способы оптимизации кодонов хорошо известны в данной области техники. В целом, конструкции нуклеиновых кислот включают в себя регуляторную последовательность, функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей костимуляторный полипептид. Регуляторные последовательности (также обозначаемые здесь как последовательности контроля экспрессии) обычно не кодируют генный продукт, но вместо этого воздействуют на экспрессию последовательностей нуклеиновой кислоты, с которой они функционально связаны. Сигнальные пептиды, используемые, чтобы секретировать белки из клетки, могут быть эндогенными сигнальными пептидами или любым другим сигнальным пептидом, который облегчает секрецию гибридного белка из хозяина. Для общих молекулярно-биологических процедур, используемых в осуществлении настоящего изобретения, имеется ряд стандартных ссылок, которые содержат процедуры, хорошо известные в области молекулярной биологии и генной инженерии, и нет необходимости описывать указанные процедуры далее в настоящем документе. Полезные ссылки включают в себя Sambrook, et al., Molecular Cloning: AMolecular Biology, vol. 62 (Tuan, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 1997), раскрытия которых, таким образом,включены посредством ссылки. Е. Лечение заболевания. Заболевания, которые лечат или предотвращают с помощью введения терапевтической комбинации, предоставленной настоящим изобретением, включают в себя злокачественную опухоль или хроническое инфекционное заболевание, вызванное бактерией, вирусом, простейшим, гельминтом или другим микробным патогеном, который проникает внутрь клетки. Указанные заболевания часто лечат с помощью атаки цитотоксических Т-лимфоцитов. Поскольку настоящее изобретение предоставляет комбинированные терапии, полезные для усиления Т-клеточных ответов с помощью увеличения Т-клеточной активности, увеличения Т-клеточной пролиферации и уменьшения Т-клеточных ингибиторных сигналов,комбинированные терапии изобретения обладают уникальным преимуществом в лечении (или даже в предотвращении) указанных заболеваний. В одном варианте осуществления, поскольку вирусные инфекции устраняются, главным образом, Т-клетками, увеличение Т-клеточной активности является тера- 26023148 певтически целесообразным для усиления выведения инфекционного вирусного агента из организма животного или примата, предпочтительно человека, субъекта. Таким образом, раскрытые соединения изобретения, с активностью антагониста рецептора PD-1, вместе с потенцирующим агентом действуют в комбинации для лечения местных или системных вирусных инфекций. Инфекции, которые лечат с помощью соединений изобретения, включают в себя, но без ограничения, иммунодефицит (например,HIV), папиллому (например, HPV), герпес (например, HSV), энцефалит, грипп (например, вирус гриппа человека А), гепатит (например, HCV, HBV) и простудные (например, риновирус человека) вирусные инфекции. Фармацевтические составы композиций антагонистов рецептора PD-1 также могут быть введены для лечения системных вирусных заболеваний, включая, но без ограничения, СПИД, грипп, простудные заболевания или энцефалит. Невирусные инфекции, поддающиеся лечению соединениями изобретения, включают в себя, но без ограничения, инфекции, вызываемые микроорганизмами, включая, но без ограничения: В одном варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет способы и композиции для индуцирования или усиления иммунного ответа хозяина для лечения рака. Типы рака, которые можно лечить предоставляемыми композициями и способами, включают в себя, но без ограничения, следующие: рак мочевого пузыря, рак мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, рак пищевода, рак почек, рак печени, рак легких, назофарингеальный рак, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак кожи, рак желудка, рак матки, рак яичников, рак яичек и гематологический рак. Злокачественные опухоли, которые могут быть подвергнуты воздействию, классифицируют здесь в соответствии с эмбриональным происхождением ткани, из которой развивается опухоль. Карциномы представляют собой опухоли, возникающие из эндодермальной или эктодермальной тканей, таких как кожа или эпителиальная выстилка внутренних органов и желез. Саркомы, которые возникают реже, происходят из мезодермальных соединительных тканей, таких как кость, жир и хрящ. Лейкемии и лимфомы являются злокачественными опухолями гемопоэтических клеток костного мозга. Лейкемии пролиферируют в виде отдельных клеток, тогда как лимфомы проявляют тенденцию к росту в виде опухолевых масс. Злокачественные опухоли могут выявляться в различных органах и тканях организма при постановке диагноза рака. В качестве демонстрации полезности схем лечения изобретения мышиный аналог B7-DC-Ig (в котором мышиный B7-DC ECD, который характеризуется 72% идентичности последовательности с белком человека, соединен с Fc-доменом мышиного IgG2a) тестировали в сингенных мышиных опухолевых моделях колоректального рака, мастоцитомы и других типов опухоли, включающих в себя предварительную обработку циклофосфамидом (СТХ), как описано в настоящем документе. Результаты показали, что лечение однократной субтерапевтической дозой СТХ, который действует как иммунопотенцирующий агент, с последующим введением мышиного B7-DC-IG ликвидирует привитые опухоли СТ 26 карциномы толстой кишки у 80% животных. Далее, в исследованиях с повторным введением клеток линии СТ 26 карциномы толстой кишки не обнаружили повторного роста опухоли у мышей с ранее уничтоженными опухолями после лечения СТХ + мышиный B7-DC-Ig. Также показано,- 27023148 что указанные мыши характеризовались повышенной популяцией опухоль-специфических CTL по сравнению с нативными мышами. В одном варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает применение соединения,которое уменьшает передачу ингибиторного сигнала в Т-клетку, как описано в другом разделе настоящего документа, для получения лекарства для увеличения Т-клеточного ответа с помощью комбинированной терапии, где указанное соединение вводят в сочетании с потенцирующим агентом. Далее, соединение, которое уменьшает передачу ингибиторного сигнала в Т-клетку, и указанный потенцирующий агент предоставляют в виде отдельных медикаментов для введения в разные моменты времени, где предпочтительно потенцирующий агент вводят раньше, чем соединение, которое уменьшает передачу ингибиторного сигнала, например, вплоть до 24 ч до введения ингибиторного соединения (или другие интервалы времени, перечисленные в описании). Предпочтительно соединение и потенцирующий агент предназначены для лечения инфекционного заболевания или рака, включая заболевания, вызванные любыми инфекционными агентами или видами рака, перечисленными в настоящем документе. В предпочтительном варианте осуществления соединение, применяемое в указанных способах, представляет собой рекомбинантный белок, состоящий из ECD человека B7-DC соединенного с Fc-доменом человека IgG1, обозначаемый здесь как B7-DC-Ig. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к медицинскому набору для введения соединения, которое уменьшает передачу ингибиторного сигнала в Т-клетку, как раскрыто в описании, в комбинации с потенцирующим агентом, указанный набор включает в себя:(a) запас дозы соединения, которое уменьшает передачу ингибиторного сигнала в Т-клетку;(c) запас фармацевтически приемлемого носителя;(d) отпечатанные инструкции по введению соединения при применении, как описано выше.F. Комбинированное лечение. Вакцины вызывают сильный Т-клеточный ответ для уничтожения раковых клеток и инфицированных клеток или инфекционных агентов. Антагонисты рецептора PD-1, описанные в настоящем документе, могут быть введены в виде компонента вакцины вместе с потенцирующим агентом для предоставления костимуляторного сигнала Т-клеткам. Вакцины, раскрытые в описании, включают в себя антигены,антагонист рецептора PD-1 и дополнительно адъюванты и таргентные молекулы. Антигены, против которых усиливают Т-клеточный ответ с помощью способов и композиции изобретения, включают в себя пептиды, белки, полисахариды, сахариды, липиды, нуклеиновые кислоты или их комбинации. Антигены в случае заболевания представлены в результате патологического процесса. Раскрытые композиции антагонистов рецептора PD-1 могут быть введены в сочетании с профилактическими вакцинами, которые вызывают у субъекта устойчивость к последующему воздействию инфекционных агентов, или в сочетании с терапевтическими вакцинами, которые могут быть использованы, чтобы инициировать или усилить иммунный ответ у субъекта на заданный антиген, такой как опухолевый антиген у субъекта, имеющего рак, или вирусный антиген у субъекта, инфицированного вирусом. Желаемый результат профилактического, терапевтического или десенсибилизационного иммунного ответа может варьировать в зависимости от заболевания, исходя из принципов, хорошо известных в данной области техники. Например, иммунный ответ против инфекционного агента может полностью предотвратить колонизацию и репликацию инфекционного агента, вызывая "стерильный иммунитет" и отсутствие симптомов заболевания. Однако вакцина против инфекционных агентов может считаться эффективной, если она уменьшает количество, тяжесть или продолжительность симптомов; если она уменьшает количество субъектов в популяции, имеющих симптомы заболевания; или уменьшает передачу инфекционного агента. Аналогичным образом, иммунные ответы против рака, аллергенов или инфекционных агентов могут полностью вылечить заболевание, могут уменьшить симптомы или могут представлять собой одну грань общего терапевтического воздействия на заболевание. Например, стимуляция иммунного ответа против рака может сочетаться с хирургическим, химиотерапевтическим, радиологическим, гормональным и другими иммунологическими подходами, чтобы воздействовать на лечение. Способы и продукты изобретения не исключают применение адъюванта в дополнение к потенцирующему агенту. Такой адъювант может быть добавлен, например, вместе с антагонистом PD-1. Адъюванты, используемые в композициях и способах изобретения, включают в себя, но без ограничения, один или более из следующих: масляные эмульсии (например, адъювант Фрейнда); препараты сапонина; виросомы и вирусоподобные частицы; бактериальные и микробные производные; иммуностимулирующие олигонуклеотиды; АДФ-рибозилирующие токсины и обезвреженные производные; квасцы; BCG; минералсодержащие композиции (например, минеральные соли, такие как соли алюминия и соли кальция,гидроксиды, фосфаты, сульфаты и т.д.); биоадгезивы и/или мукоадгезивы; микрочастицы; липосомы; композиции эфиров полиоксиэтилена и сложных эфиров полиоксиэтилена; мурамиловые пептиды; полифосфазен; соединения имидазолхинолона; и поверхностно-активные вещества (например, лизолецитин, полиолы плюроника, полианионы, пептиды, масляные эмульсии, гемоцианин лимфы улитки и динитрофенол). Полезные адъюванты также включают в себя иммуномодуляторы, такие как цитокины,интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 и т.д.), интерфероны (например, интер- 28023148 ферон-), макрофагальный колониестимулирующий фактор и фактор некроза опухоли. Нет никаких препятствий для введения раскрытого антагониста рецептора PD-1, включая полипептиды, фрагменты, варианты, гомологи и гибридные белки, раскрытые здесь, субъекту, который нуждается в них, в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами (в дополнение к потенцирующему агенту). Дополнительные терапевтические агенты выбирают, исходя из состояния,нарушения или заболевания, которое нужно вылечить. Например, антагонисты рецептора PD-1 могут быть введены совместно с одним или более дополнительными агентами, функцией которых является усиление или способствование развитию иммунного ответа, и которые рассматривают в описании как активные агенты. Указанные агенты включают в себя, но без ограничения, амсакрин, блеомицин, бусульфан, капецитабин, карбоплатин, кармустин,хлорамбуцил, цисплатин, кладрибин, клофарабин, кризантаспазу, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, доцетаксел, доксорубицин, эпирубицин, этопозид, флударабин, фторурацил, гемцитабин, гидроксикарбамид, идарубицин, ифосфамид, иринотекан, лейковорин, липосомальный доксорубицин, липосомальный даунорубицин, ломустин, мелфалан, меркаптопурин, месну, метотрексат, митомицин, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, пеметрексед, пентостатин, прокарбазин, ралтитрексед, сатраплатин, стрептозоцин, тегафур-урацил, темозоломид, тенипозид, тиотепа, тиогуанин, топотекан, треосульфан, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин или их комбинации. Типичные проапоптатические агенты включают в себя, но без ограничения,флударабин, стауроспорин, циклогексимид, актиномицин D, лактозилцерамид, 15d-PGJ(2) и их комбинации. Виды терапии, предоставляемые способами и композициями настоящего изобретения, также могут быть использованы в сочетании с другими типами терапии, например с лучевой терапией, хирургическим вмешательством и т.п.G. Анализы активности антагониста. Настоящее изобретение описывает ряд специфических структур, полезных в осуществлении способов изобретения. Другие соединения, обладающие антагонистической активностью и используемые в способах изобретения, также могут быть идентифицированы с помощью ссылки на хорошо известные методики анализа для идентификации химических структур, которые связываются с PD-1, CTLA4, и их лигандов, которые также обладают способностью уменьшать передачу ингибиторного сигнала в Т-клетки. Некоторые указанные анализы представляют собой анализы связывания, применяемые для определения, связывается ли выбранная химическая структура с рецепторами; указанные анализы хорошо известны в данной области техники, и нет необходимости подробно рассматривать их в настоящем документе (см., например, патент США 2008/0274490 (опубл. 6 ноября 2008 г.) и патент США 7105328(опубл. 12 сентября 2006 г.), в каждом из которых показаны тесты для определения модуляторов сигнальной системы PD-1, использующих Т-клетки), раскрытия которых, таким образом, включены посредством ссылки во всей своей полноте. Другие тесты используют для определения эффектов агентов изобретения, таких как активные фрагменты, на активацию Т-клеток с помощью увеличения пролиферации и/или продукции цитокинов. Указанные анализы также хорошо известны в данной области техники. Например, повышенная пролиферация клеток может быть продемонстрирована с помощью увеличения захвата 3 Н-тимидина (в результате увеличенного синтеза ДНК, необходимого для клеточного размножения) или с помощью ИФА и/или РИА для обнаружения повышенной продукции цитокинов Т-клетками в культуре. В одном таком эксперименте PD-1-связывающую активность В 7-DC-Ig человека оценивали с помощью ИФА. 96-луночные планшеты для теста ИФА покрывали 100 мкл 0,75 мкг/мл рекомбинантного человеческого PD-1/Fc (RD Systems), разведенного в буфере BupH карбонат/бикарбонат, рН 9,4 (Pierce) на 2 ч и затем блокировали раствором BSA (Jackson ImmunoResearch) в течение 90-120 мин. Серийные разведения B7-DC-Ig человека (дикий тип, а также мутеин D111S, и мутанты K113S, которые выбрали по причине сниженного связывания с PD-1), а также изотипа IgG1 человека в качестве контроля вводили для связывания в течение 90 мин. Связанный B7-DC-Ig обнаруживали с применением 100 мкл 0,5 мкг/мл биотина, конъюгированного с античеловеческим B7-DC клоном MIH 18 (Bioscience) с последующим применением HRP-стрептавидина в разведении 1:1000 (BD Bioscience) и субстрата ТМВ (BioFX). Абсорбцию считывали при длине волны 450 нм с применением планшетного ридера (Molecular Devices) и данные анализировали с помощью программы SoftMax с применением логического соответствия по четырем параметрам. Данные показали, что человеческий B7-DC-Ig (дикий тип) связывался с PD-1, но мутанты K113S и D111S не связывались PD-1. При осуществлении методик настоящего изобретения следует понимать, что ссылки на конкретные буферы, среды, реагенты, клетки, условия культивирования и т.п. не являются ограничивающими, но предназначены для включения всех смежных материалов, которые специалист в данной области техники определит как представляющие интерес или ценность в конкретном контексте, в котором представлено данное обсуждение. Например, часто возможно заменить одну буферную систему или культуральную среду на другую и достичь сходных, если не идеальных, результатов. Специалистам в данной области техники известны указанные системы и методики, чтобы без неоправданных экспериментов произвести указанные замены, которые будут наилучшим образом служить их целям в применении способов и мето- 29
МПК / Метки
МПК: C07K 14/00, C07K 16/00
Метки: основе, применение, антагонистов, композиции
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-23148-kompozicii-na-osnove-antagonistov-pd-1-i-ih-primenenie.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Композиции на основе антагонистов pd-1 и их применение</a>
Фармацевтические композиции на основе антагонистов кининового рецептора в2 и кортикостероидов и их применение
Номер патента: 19903
Опубликовано: 30.07.2014
Авторы: Маджи Карло Альберто, Джулиани Сандро
МПК: A61K 31/437, A61K 31/496, A61K 31/4709...
Метки: композиции, фармацевтические, применение, рецептора, кининового, основе, кортикостероидов, антагонистов
Формула / Реферат:
1. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активных ингредиентов кортикостероид и антагонист кининового рецептора В2 вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами, где:а) кортикостероид, либо натуральный, либо синтетический, выбран из кортизона, гидрокортизона, беклометазона, бетаметазона, будесонида, дексаметазона, флуметазона, флунизолида, флуокортона, флутиказона, метилпреднизолона, метилпреднизона, параметазона,...
Кристаллические формы пролекарства на основе амида гемцитабина, композиции на их основе и их применение
Номер патента: 14909
Опубликовано: 28.02.2011
Автор: Облезов Александр Евгеньевич
МПК: A61P 35/00, A61P 31/12, A61K 31/513...
Метки: композиции, гемцитабина, формы, кристаллические, применение, основе, амида, пролекарства
Формула / Реферат:
1. Соединение, представляющее собой кристаллический 1-(2,2-дифтор-2-дезокси-b-D-рибофуранозил)-4-(2-пропил-1-оксопентил)аминопиримидин-2-он моно-п-толуолсульфонат или кристаллический полугидрат 1-(2,2-дифтор-2-дезокси-b-D-рибофуранозил)-4-(2-пропил-1-оксопентил)аминопиримидин-2-он гемибензолсульфоната.2. Соединение по п.1, представляющее собой кристаллический 1-(2,2-дифтор-2-дезокси-b-D-рибофуранозил)-4-(2-пропил-1-оксопентил)аминопиримидин-2-он...
Бициклические ароматические соединения, фармацевтическая и косметическая композиции на их основе, и применение косметической композиции
Номер патента: 1216
Опубликовано: 25.12.2000
Автор: Бернардон Жан-Мишель
МПК: C07D 333/24, A61K 31/38, C07C 69/618...
Метки: ароматические, косметическая, применение, косметической, композиции, основе, фармацевтическая, бициклические, соединения
Формула / Реферат:
1. Биароматические соединения пропинила общей формулы (I) где R1 является (I) радикалом -СН3; (II) радикалом -CH2-O-R5; (III) радикалом -СО-R6, где R5 и R6 имеют значения, приведенные ниже, Аr является радикалом, выбираемым из радикалов формул (а)-(е): где R5 и R7 имеют значения, приведенные ниже, Х является радикалом формулы где R8 и R9 имеют значения, приведенные ниже, R2 и R3, одинаковые или различные, являются (I) атомом водорода;...
Применение иммуномодулирующей композиции на основе липидов
Номер патента: 2364
Опубликовано: 25.04.2002
Авторы: Шенфельд Авнер, Шиницкий Мейр
МПК: A61K 31/66, A61P 25/34
Метки: основе, применение, иммуномодулирующей, композиции, липидов
Формула / Реферат:
1. Применение липидного препарата, полученного из натурального источника, обогащенного, по меньшей мере, примерно на 10% фосфатидной кислотой, для получения фармацевтической композиции для активации иммунной системы у людей со стрессом. 2. Применение по п.1, при котором указанный стресс является результатом лечения индивидуума по поводу прекращения курения. 3. Применение по п.1, при котором указанный липидный препарат содержит, по меньшей мере,...
Композиции на основе пирроло [2,3d] пиримидинов и их применение
Номер патента: 3604
Опубликовано: 26.06.2003
Авторы: Маккиббен Брайан, Кастелано Арлиндо Л., Уиттер Дэвид Дж.
МПК: C07D 487/04, A61P 9/00, A61K 31/505...
Метки: пирроло, применение, 2,3d, композиции, пиримидинов, основе
Формула / Реферат:
1. Соединение, имеющее формулу I где каждый из R1 и R2 независимо представляет собой атом водорода, замещенный прямой (C1-C30)алкил, замещенный разветвленный (C3-C30)алкил, замещенный (C4-C10)циклоалкил, замещенный циклопропил или замещенный или незамещенный арил; где только один из R1 и R2 может быть водородом; где, когда алкил представляет собой (C1)алкил или (C2)алкил, тогда любой заместитель фенила, если он имеется, замещен; или R1 и R2...
Предыдущий патент: Трансдермальный пластырь для лечения мигрени
Случайный патент: Способ изготовления термоэлектрического охлаждающего устройства