Ингибиторы каспазы на основе пиридазинонового каркаса

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента ИНГИБИТОРЫ КАСПАЗЫ НА ОСНОВЕ ПИРИДАЗИНОНОВОГО КАРКАСА Настоящее изобретение относится к производному пиридазинона формулы (1), которое можно использовать в качестве ингибитора каспазы, к способу его получения и включающей его фармацевтической композиции для ингибирования каспазы. Чанг Хие Киунг, Ох Йеонг Соо, Дзанг Ионг Дзин (KR) Медведев В.Н. (RU)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛ ДЖИ ЛАЙФ САЙЕНСИЗ ЛТД. 015886 Область техники Настоящее изобретение относится к производному пиридазинона или его фармацевтически приемлемой соли в качестве ингибитора различных каспаз, включая каспазу-1 [интерлейкин-1 превращающий фермент, ICE], каспазу-3 [апопаин/СРР-32], каспазу-8 и каспазу-9, и к содержащей его фармацевтической композиции для ингибирования каспазы. Предшествующий уровень Каспаза представляет собой новый вид цистеинпротеазы в виде 22 тетрамера, открытый в течение последних 10 лет. К настоящему моменту известно около 14 ее видов. Один из них, каспаза-1 (ICE), является разновидностью цитокина и участвует в превращении биологически неактивного проинтерлейкина-1 в активный интерлейкин-1. Интерлейкин-1 включает интерлейкин-1 и интерлейкин-1, оба из которых синтезируются в моноцитах в виде 31 кДа предшественника. Только проинтерлейкин 1 активируется посредством ICE. Положениями, гидролизуемыми каспазой-1, являются Asp27-Gly28 иAsp116-Ala117. Гидролиз в последнем положении приводит к интерлейкину-1. Сообщалось, что интерлейкин-1 действует в качестве важного медиатора при появлении воспаления (1, 3). Впервые каспаза-1 была открыта в 1989 г., а ее трехмерные пространственные структуры были определены рентгеновским кристаллографическим методом двумя независимыми группами исследователей. Широко исследуется роль или механизм действия каспазы-3 (СРР-32), и ее трехмерная пространственная структура была определена в 1996 г. (2). Каспаза-3 (апопаин), активированная из прокаспазы-3,гидролизуется в положении мотива (P4)Asp-X-X-Asp(P1), и известный субстрат включает поли(ADPрибоза)полимеразу, U1 70000 Mr небольшой ядерный рибонуклеопротеин, каталитическое звено, состоящее из 460000 Mr, ДНК-зависимой протеинкиназы и т.д. По данным рентгеноструктурного исследования, как сообщалось, структура каспазы-7 очень близка к структуре каспазы-3 (4). Каспазы-8 и -9 находятся в 3'-5' направлении каспазы-3,6,7, и известно, что все эти каспазы принимают участие в каскаде апоптоза. Молекулярная структура каспазы-8 была определена методом рентгеноструктурного исследования в 1999 г. (5), и, в частности, ее ингибиторы могут преимущественно использоваться для лечения заболеваний, связанных с апоптозом. Под ингибиторами каспазы подразумеваются те соединения, которые ингибируют активность каспазы и тем самым контролируют такие симптомы, как воспаление, апоптоз и т.д., вызываемые активностью каспазы. Заболевания или симптомы, которые можно лечить или ослаблять путем введения ингибиторов, включают следующие: слабоумие, церебральный инсульт, мозговые нарушения вследствие СПИД, диабет, язва желудка, церебральное повреждение вирусом гепатита, вызванные гепатитом заболевания печени, острый гепатит, молниеносная печеночная недостаточность, сепсис, отторжение трансплантированного органа, ревматический артрит, ишемическая болезнь сердца и цирроз печени (6). Среди ингибиторов каспазы, известных к настоящему времени, наиболее значимыми необратимыми ингибиторами являются следующие: Оба вышеуказанных ингибитора проявляют активность, основанную на том общем механизме, по которому они необратимо инактивируют фермент, подавляя апоптоз клеток (необратимый ингибитор широкого спектра). Сообщалось, что необратимый ингибитор обладает намного более эффективной ингибирующей активностью, чем обратимый ингибитор (7). Как IDN-1965 от IDUN Co., так и МХ-1013 отMaxim Co., как сообщалось, проявляют активность на модели апоптоза клеток при повреждении печени(8, 9). В настоящее время данные соединения находятся на стадии предклинических испытаний. Необратимый ингибитор IDN-6556 в настоящее время находится на стадии II клинических исследований в качестве терапевтического агента при повреждении печени (10, 11).function of the clinical progression of Alzheimer disease (Экспрессия гена каспазы в мозге как функция клинического прогрессирования болезни Альцгеймера). Pompl P.N., Yemul S., Xiang Z., Ho L.,Haroutunian V., Purohit D., Mohs R., Pasinetti G.M. Церебральный инсульт: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, Nov. 12; 99(23): 15188-93, Caspase activationdeprivation (Активация каспазы и нейропротекция у каспазы-3 дефицитных мышей после церебральной ишемии in vivo и in vitro потери кислорода глюкозы). Le D.A., Wu Y., Huang Z., Matsushita K., Plesnila N.,Augustinack J.C., Hyman B.T., Yuan J., Kuida K., Flavell R.A., Moskowitz M.A. Мозговые нарушения вследствие СПИД: J. Neurosci. 2002, May 15; 22(10): 4015-24, Caspase cascadesmitochondrial cytochrome C-mediated caspase-3 activation pathway (Вызванный гипергликемией апоптоз миокарда мыши: опосредованный митохондриальным цитохромом С путь активации каспазы-3). Cai L.,Li W., Wang G., Guo L., Jiang Y., Kang Y.J. Язва желудка: J. Physiol. Pharmacol. 1998, Dec; 49(4): 489-500, Role of basic fibroblast growth factor inthe suppression of apoptotic caspase-3 during chronic gastric ulcer healing (Роль основного фактора роста фибробластов в подавлении апоптической каспазы-3 во время заживления хронической язвы желудка).Slomiany B.L., Piotrowski J., Slomiany A. Церебральное повреждение вирусом гепатита: J. Viral Hepat. 2003, Mar.; 10(2): 81-6, Cerebraldysfunction in chronic hepatitis С infection (Церебральная дисфункция при хронической инфекции гепатитом С). Forton D.M., Taylor-Robinson S.D., Thomas H.C. Молниеносная печеночная недостаточность: Gastroenterology 2000, Aug.; 119(2): 446-60, Tumornecrosis factor alpha in the pathogenesis of human и murine fulminant hepatic failure (Фактор-альфа некроза опухоли при патогенезе молниеносной печеночной недостаточности человека и мыши).role of the lymphocyte (Ингибиторы каспазы улучшают выживание при сепсисе: решающая роль лимфоцита). Hotchkiss R.S., Chang K.C., Swanson Р.Е., Tinsley K.W., Hui J.J., Klender P., Xanthoudakis S., Roy S.,Black C., Grimm E., Aspiotis R., Han Y., Nicholson D.W., Karl I.E. Отторжение трансплантированного органа: Xenotransplantation 2001, May; 8(2): 115-24, In vitrokidney cells (In vitro предотвращение опосредованного клетками отторжения ксенотрансплантата посредством Fas/Fas1-пути для CrmA-трансдуцированных клеток почек свиньи). Fujino M., Li X.K., Suda Т.,Hashimoto M., Okabe K., Yaginuma H., Mikoshiba K., Guo L., Okuyama Т., Enosawa S., Amemiya H.,Amano Т., Suzuki S. Ревматоидный артрит: Prog. Med. Chem. 2002; 39: 1-72, Caspase inhibitors as antiinflammatory andantiapoptotic agents (Ингибиторы каспазы в качестве противовоспалительных и антиапоптических агентов). Graczyk P.P. Ишемические сердечные заболевания: Am. J. Physiol Heart Circ. Physiol. 2002, Sep.; 283(3): H990-5,Hypoxia-induced cleavage of caspase-3 and DFF45/ICAD in human failed cardiomyocytes (H990-5, Вызванное гипоксией расщепление каспазы-3 и DFF45/ICAD у человека ослабляет кардиомиоциты). Todor A.,Sharov V.G., Tanhehco E.J., Silverman N., Bernabei A., Sabbah H.N. Противовоспалительное действие: J. Immunol. 2003, Mar 15; 170(6): 3386-91. A broad-spectrumcaspase inhibitor attenuates allergic airway inflammation in murine asthma model (Ингибитор каспазы широкого действия ослабляет аллергическое воспаление дыхательных путей на мышиной модели астмы).-2 015886 Вызванные гепатитом заболевания печени: i) J. Viral Hepat. 2003, Sep.; 10(5): 335-42, Apoptosis inhepatitis С (Апоптоз при гепатите С). Kountouras J., Zavos C, Chatzopoulos D.; ii) Apoptosis. 2003,Dec; 8(6): 655-63. Apoptosis participates to liver damage in HSV-induced fulminant hepatitis (Апоптоз участвует в повреждении печени при HSV-индуцированном молниеносном гепатите). Pretet J.L., Pelletier L.,Bernard В., Coumes-Marquet S., Kantelip В., Mougin C.; iii) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003, Jun. 24; 100(13): 7797-802. Caspase 8 small interfering RNA prevents acute liver failure in mice (Небольшое влияние на РНК каспазы 8 предотвращает печеночную недостаточность у мышей). Zender L., Hutker S., Liedtke С.,Tillmann H.L., Zender S., Mundt В., Waltemathe M., Gosling Т., Flemming P., Malek N.P., Trautwein C.,Manns M.P., Kuhnel F., Kubicka S. Цирроз печени: i) J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, Mar.; 308(3): 1191-6, The caspase inhibitor IDN-6556attenuates hepatic injury and fibrosis in the bile duct ligated mouse (Ингибитор каспазы Idn-6556 ослабляет повреждение печени и фиброз у мышей с лигированным желчным протоком). Canbay A., Fledstein A.,Baskin-Bey E., Bronk F.S. Gores G.J.; ii) Hepatology. 2004, Feb.; 39(2): 273-8, Apoptosis: the nexus of liverinjury и fibrosis (Апоптоз: связь повреждения печени и фиброза). Canbay A., Friedman S., Gores G.J.; iii)and cytokine expression (Поглощение клетками Купффера апоптотических тел стимулирует смерть лиганда и экспрессию цитокина). Canbay A., Feldstein A.E., Higuchi H., Werneburg N., Grambihler A., Bronk S.F.,Gores G.J.attenuates hepatic injury and fibrosis in the bile duct ligated mouse (Ингибитор каспазы IDN-6556 ослабляет повреждение печени и фиброз у мышей с лигированным желчным протоком). Подробное описание изобретения Техническая задача. Авторы настоящего изобретения провели широкое исследование для создания соединений, которые могут использоваться в качестве эффективных и более селективных ингибиторов каспаз. Способы решения задачи. Для решения поставленной задачи авторы настоящего изобретения осуществили синтез различных соединений и определили их связывающую способность и ингибирующую активность в отношении каспаз. В результате авторы настоящего изобретения установили, что соединение следующей формулы (1) отвечает таким требованиям и позволяет осуществить настоящее изобретение: в которой R, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 и X являются такими, как определено ниже. Следовательно, настоящее изобретение относится к новому производному пиридазинона формулы(1) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающему эффективной ингибирующей, в частности,композиции для предупреждения воспаления и апоптоза, включающей соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Благоприятное действие. Соединение формулы (I) согласно настоящему изобретению обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении каспазы и поэтому благоприятным образом может быть использовано для лечения различных заболеваний и симптомов, опосредованных каспазой. Лучший способ осуществления изобретения. Во-первых, важные термины настоящего изобретения определены следующим образом:a) C1-C5-алкил: линейные или разветвленные углеводороды, имеющие от 1 до 5 атомов углерода,которые включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил и т.д., но не ограничиваются указанным;b) C3-C10-циклоалкил: циклические углеводороды, имеющие от 3 до 10 атомов углерода, которые включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, и т.д., но не ограничиваются указанным;c) арил: арильная группа включает все ароматические, гетероароматические и их частично восстановленные производные. Ароматическая группа означает 5-15-членный отдельный или конденсированный ненасыщенный углеводород. Гетероароматическая группа означает ароматическую группу, содержащую от 1 до 5 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из кислорода, серы и азота. Арильная группа включает фенил, нафтил, индолил, хинолинил, изохинолил, имидазолинил, изоксазолил, оксазолил, тиазолил и т.д., но не ограничиваются указанным. Один или несколько водородов в указанных C1-C5-алкильной, C3-C10-циклоалкильной или арильной группе могут быть заменены на группу(ы), выбранную(ые) из следующего: ацил, амино, карбоалкокси,карбокси, карбоксиамино, циано, галоген, гидрокси, нитро, тио, алкил, циклоалкил, алкокси, арил,арилокси, сульфокси и гуанидино группы;d) природные аминокислоты включают следующие: глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин, цистеин, метионин, пролин, аспарагиновую кислоту, аспарагин, глутаминовую кислоту,глутамин, лизин, аргинин, гистидин, фенилаланин, тирозин и триптофан. Далее настоящее описание включает следующие сокращения:N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2'-этансульфоновая кислота): HEPES; 3-[(3-холамидопропил)диметиламино]-1-пропансульфонат: CHAPS; этилендиаминтетрауксусная кислота: EDTA; дитиотреитол: DTT. Настоящее изобретение будет далее объяснено более подробно. Один аспект настоящего изобретения относится к производному пиридазинона следующей формулы (1):R5 представляет собой C1-C5-алкил, замещенный C3-C10-циклоалкилом или C6-C10-арилом, который является незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-C5-алкила, C1-C5-алкила, замещенного галогеном, C1-C5-алкокси и галогена, или гетероарилом, выбранным из изохинолинила, изоксазолила, замещенного C1-C5-алкилом, и тиазолила,замещенного C1-C5-алкилом, или представляет собой C6-C10-арил; каждый из R6 и R7 независимо друг от друга представляет собой Н;X представляет собой -CH2OR9 (R9 представляет собой C6-C10-арил, замещенный галогеном),-СН 2 ОС(О)R10 (R10 представляет собой C6-C10-арил, замещенный галогеном), -СН 2-ОР(=O)R112(R11 представляет собой C6-C10-арил) или -CH2-W (W представляет собой галоген),или его фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к соединению формулы (1), гдеR5 представляет собой C1-C5-алкил, замещенный C3-C10-циклоалкилом или C6-C10-арилом, который является незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-C5-алкила, C1-C5-алкила, замещенного галогеном, C1-C5-алкокси и галогена, или гетероарилом, выбранным из изохинолинила, изоксазолила, замещенного C1-C5-алкилом, и тиазолила,замещенного C1-C5-алкилом, или представляет собой C6-C10-арил; каждый из R6 и R7 независимо друг от друга представляет собой Н;-СН 2 О-(2,3,5,6-тетрафторфенил),-СН 2 О-(2,6-дифторфенил), -СН 2 О-(2,6-дихлорбензоил) или -СН 2-F,или его фармацевтически приемлемой соли.-4 015886 Наиболее предпочтительные соединения представляют собой те, которые выбраны из следующей группы: 5-фтор-3-[2-(5-метил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-4-оксопентановая кислота (1); 3-[2-(2-бензил-5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота (2); 3-[2-(2-бензил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота (3); 3-[2-(2-бензил-5-хлор-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота (4); 3-[2-(2-бензил-5-метокси-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4 оксопентановая кислота (5); 3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота (6); 3-2-[2-(3-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота (7); 5-фтор-3-2-[2-(2-метилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-4-оксопентановая кислота (8); 5-фтор-3-2-[2-(3-метилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-4-оксопентановая кислота (9); 5-фтор-3-2-[2-(3-метоксибензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-4 оксопентановая кислота (10); 5-фтор-3-[2-(2-нафталин-1-илметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-4 оксопентановая кислота (11); 5-фтор-3-[2-(2-нафталин-2-илметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-4 оксопентановая кислота (12); 5-фтор-3-2-[2-(2-метилоксазол-4-илметил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-4 оксопентановая кислота (13); 5-фтор-3-2-[2-(2-метилтиазол-4-илметил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-4 оксопентановая кислота (14); 3-2-[2-(3,5-диметилизоксазол-4-илметил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор 4-оксопентановая кислота (15); 3-[2-(2-циклогексилметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4-оксопентановая кислота (16); 5-фтор-3-[2-(2-изохинолин-1-илметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-4-оксопентановая кислота (17); 3-2-[2-(2-хлорбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота (18); 3-2-[2-(3-хлорбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота (19); 3-2-[2-(3-бромбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота (20); 5-фтор-4-оксо-3-2-[3-оксо-2-(2-трифторметилбензил)-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламинопентановая кислота (21); 5-фтор-4-оксо-3-2-[3-оксо-2-(3-трифторметилбензил)-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламинопентановая кислота (22);(S)-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5(дифенилфосфиноилокси)-4-оксопентановая кислота (28). В другом аспекте настоящее изобретение относится к конкретным соединениям, таким как 3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота и 3-2-[2-(3-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-5-фтор-4 оксопентановая кислота. В ещ одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для ингибирования каспазы, включающей соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель. Указанная фармацевтическая композиция предназначена для предупреждения воспаления и апоптоза. Кроме того, фармацевтическая композиция предназначена для лечения или предупреждения слабоумия, церебрального инсульта, мозговых нарушений вследствие СПИД, диабета, язвы желудка, церебрального повреждения при гепатите,вызванных гепатитом заболеваний печени, острого гепатита, молниеносной печеночной недостаточности, сепсиса, отторжения органа при трансплантации, ревматического артрита, апоптоза клеток сердца вследствие ишемических болезней сердца или цирроза печени. В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция предназначена для лечения острого гепатита или цирроза печени, а также для лечения ревматоидного артрита. Способы получения новых производных пиридазинона формулы (1), проявляющих ингибирующую активность в отношении каспаз, указаны на следующих реакционных схемах 1-4. Однако проиллюстрированное на следующих реакционных схемах представляет собой только типичные способы, использованные в данном изобретении. Без ограничений могут быть изменены порядок проведения реакций, реагент, реакционные условия, растворитель и т.д. Реакционная схема 1 На приведенной выше реакционной схеме 1 алкилальдегид (2), например пропиональдегид, и вторичный амин, например диэтиламин, подвергают дегидратации в присутствии сульфата магния, получая енаминное соединение (3). Данный енамин (3) подвергают взаимодействию с диалкилмалеатом, например диметилмалеатом, в подходящем растворителе, например хлористом метилене, и обрабатывают уксусной кислотой, получая соединение альдегида (4). Затем соединение альдегида (4) и гидразингидрат подвергают взаимодействию в подходящем растворителе, например этаноле, получая соединение дигидропиридазинона (5). Соединение дигидропиридазинона (5) окисляют с использованием подходящего окислителя, например хлористого тионила, в подходящем растворителе, например хлористом метилене,получая целевое соединение, имеющее пиридазиноновую структуру (6). Реакционная схема 2-6 015886 На реакционной схеме 2 4,5-дихлор-3(2H)-пиридазинон (7) защищают метоксиметильной защитной группой (8) и подвергают взаимодействию с диэтилмалонатом и этоксидом натрия, получая производное диэтилмалоната (9). Производное (9) нагревают с NaCl в ДМСО, получая моноацетат (10). Полученный таким образом моноацетат (10) обрабатывают Pd/C в атмосфере водорода для синтеза производного (11). В данном производном (11) удаляют защитную группу с использованием BBr3 и полученное производное (12) подвергают взаимодействию с подходящим алкилгалогенидом, получая производное (13). Данное производное (13) подвергают взаимодействию с LiHMDS и подходящим алкилгалогенидом, получая производное (14), которое в дальнейшем гидролизуют, при необходимости, получая производное карбоновой кислоты (15), не содержащее защитной группы. Реакционная схема 3 На реакционных схемах 3 и 4 Z представляет собой -OR9 (R9 представляет собой C1-C5-алкил,C3-C10-циклоалкил или арил), -OC(=O)R10 (R10 представляет собой C1-C5-алкил, C3-C10-циклоалкил или арил), или -W (W представляет собой галоген). Как указано на приведенной выше реакционной схеме 3, производное карбоновой кислоты (15) конденсируют с производным аспарагиновой кислоты (18) (см. следующую реакционную схему 4), получая соединение (16), которое затем подвергают реакции окисления с периодинаном Десса-Мартина и реакции удаления защитной группы, если это необходимо, получая целевое соединение формулы (1). Функциональная группа Z в соединении (1) на реакционной схеме 3 может быть образована первоначально посредством синтеза соединения (18), уже содержащего желательную группу Z, в соответствии со способом по реакционной схеме 4, и путем взаимодействия соединения (18) с соединением карбоновой кислоты (15) (см. WO 00/23421). Или же желаемая группа Z может быть введена позднее в соответствии со способом по реакционной схеме 4, после того как соединение карбоновой кислоты (15) соединяют с метиловым сложным эфиром аспарагиновой кислоты (-трет-Bu) и гидролизуют. Когда Z представляет собой F, рацемическое соединение может быть получено в соответствии со способом, известным по публикации в Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696. Реакционная схема 4 Соединение формулы (1) согласно настоящему изобретению обладает широким спектром ингибирующей активности в отношении каспаз, как продемонстрировано в представленных далее экспериментах и таким образом обладает действием для предотвращения воспаления и апоптоза. Таким образом,настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для ингибирования каспаз, в частности к терапевтической композиции для предотвращения воспаления и апоптоза, включающей соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым носителем. В частности, композиция по настоящему изобретению обладает терапевтическим или предупреждающим действием при слабоумии, церебральном инсульте, мозговых нарушениях вследствие СПИД, диабете, язве желудка, церебральном повреждении при гепатите,вызванных гепатитом заболеваниях печени, остром гепатите, молниеносной недостаточности печени,сепсисе, отторжении органа при трансплантации, ревматическом артрите, апоптозе клеток сердца вслед-7 015886 ствие ишемической болезни сердца или циррозе печени. С целью применения соединение формулы (1) может быть введено в состав различных фармацевтических форм. Для получения фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению эффективное количество соединения формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли смешивают с фармацевтически приемлемым носителем, который может принимать различное множество форм в зависимости от получаемого препарата. Соединение - ингибитор каспазы может быть введено в состав препарата для парентеральной инъекции или подкожного или орального препарата, в зависимости от целей его применения. Для легкости введения и однородности дозировки особенно выигрышным является получение композиции в виде единичной препаративной дозированной лекарственной формы. Для орального препарата можно использовать любой обычный фармацевтический носитель. Например, для таких жидких оральных препаратов, как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы можно использовать воду, гликоли, масла, спирты и т.п.; или крахмалы, сахара, каолин, лубриканты, связующие вещества, дезинтегрирующие агенты и т.п. можно использовать для таких твердых препаратов, как порошки, пилюли, капсулы и таблетки. Благодаря легкости введения таблетки и капсулы являются наиболее предпочтительными дозированными препаративными лекарственными формами. Также желательно,чтобы таблетки или пилюли были получены в виде препаратов, покрытых оболочкой для растворения в кишечнике. Для парентерального препарата обычно в качестве носителя используют стерильную воду, хотя можно использовать другие ингредиенты, такие как повышающие растворимость добавки. Препараты для инъекций, например стерилизованные водные или масляные суспензии для инъекций, могут быть получены в соответствии с известным способом с использованием подходящего диспергирующего агента, смачивающего агента или суспендирующего агента. Растворители, которые можно использовать для получения препаратов для инъекций, включают воду, раствор Рингера и изотонический раствор NaCl, а также в качестве растворителя или суспендирующей среды удобно использовать стерилизованные нелетучие масла. В этих целях можно использовать любое нестимулирующее нелетучее масло, включая моно- и диглицериды. Для инъекций также можно использовать жирную кислоту, такую как олеиновая кислота. Для подкожного введения носитель может включать агент, усиливающий проницаемость, и/или подходящий смачивающий агент необязательно в сочетании с подходящими вспомогательными добавками, не оказывающими раздражающего действия на кожу. Указанные вспомогательные добавки могут облегчать введение через кожу и/или могут способствовать получению желаемой композиции. Такие подкожные препараты вводят различным образом, например в виде чрескожных пластырей, точечных аппликаций или мази. При использовании ингибитора каспазы в клинических целях его предпочтительно вводят субъекту-пациенту в количестве от 0,1 до 100 мг на 1 кг веса тела в день. Общую дневную дозировку можно вводить однократно или за несколько приемов. Однако конкретная вводимая дозировка для индивидуального пациента может изменяться в зависимости от конкретного используемого соединения, массы тела, пола, гигиенического состояния или питания субъекта-пациента, времени или способа введения,скорости выведения, соотношения в смеси агента, тяжести заболевания, подвергаемого лечению, и т.д. Варианты практического осуществления изобретения. Настоящее изобретение будет более конкретно объяснено с помощью следующих примеров. Однако следует понимать, что данные примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения каким-либо образом объема настоящего изобретения. Получение 1-1. Метиловый эфир (5-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. Сульфат магния (3,6 кг, 30,0 моль) вводили в диэтиламин (6,6 кг, 90,0 моль), к которому затем добавляли пропионовый альдегид (1,76 кг, 30,3 моль), поддерживая температуру при 0 С. Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 ч. К этой смеси добавляли 18 л хлористого метилена и затем охлаждали смесь до 0 С. Добавляли диметилмалеат (3,04 кг, 21,1 моль) и полученную смесь перемешивали в течение 20 ч. Реакционную смесь фильтровали для удаления твердого вещества и фильтрат перегоняли при пониженном давлении, получая неочищенный диметиловый эфир 3-диэтиламино-4-метилциклобутан-1,2-дикарбоновой кислоты. К полученному выше диметиловому эфиру 3-диэтиламино-4-метилциклобутан-1,2-дикарбоновой кислоты добавляли тетрагидрофуран (10 л) и дистиллированную воду (5 л), добавляли к этому уксусную кислоту (2,54 кг, 42,3 моль) и смесь перемешивали при кипении с обратным холодильником в течение 1 ч. Тетрагидрофуран удаляли отгонкой при пониженном давлении. Этилацетат добавляли к остатку,который затем экстрагировали-сушили-концентрировали обычным образом, получая неочищенный диметиловый эфир 2-(1-метил-2-оксоэтил)янтарной кислоты (3,44 кг).-8 015886 К этому диметиловому эфиру 2-(1-метил-2-оксоэтил)янтарной кислоты добавляли этанол (13 л), который был охлажден до 0 С. Поддерживая эту температуру, добавляли уксусную кислоту (1,2 кг,20 моль). К реакционной смеси добавляли гидразин гидрат (1,08 кг, 21,6 моль), затем смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Этанол удаляли отгонкой при пониженном давлении, хлористый метилен добавляли к остатку, который затем экстрагировали-сушиликонцентрировали обычным образом, получая указанное в заголовке соединение (2,80 кг, выход: 51%). 1(д, 1,5 Н). Получение 1-2. Метиловый эфир (5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. К соединению получения 1-1 (2,70 кг, 14,7 моль) добавляли хлористый метилен (27 л), охлаждая затем смесь до 0 С. К смеси добавляли хлористый тионил (2,08 кг, 17,6 моль) в течение 40 мин. Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4,5 ч. К реакционной смеси добавляли 20 кг 10%-ного водного раствора хлорида натрия и 16 кг хлористого метилена. Органический слой, полученный при разделении фаз, сушили-концентрировали общепринятым образом, получая указанное в заголовке соединение (1,72 кг, выход: 64%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1H-ЯМР (CDCl3, 500 МГц)12,08 (ушир.с, 1 Н), 7,66 (с, 1 Н), 3,70 (с, 3 Н), 3,68 (с, 2 Н), 2,19 (с, 3 Н). Получение 1-3. Метиловый эфир (5-метил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. К смеси соединения получения 1-2 (182 мг, 1,0 ммоль), фенилбороновой кислоты (244 мг, 2,0 экв.),Cu(OAc)2H2O (40 мг, 0,2 экв.), пиридина (0,16 мл, 2,0 экв.), TEMPO (172 мг, 1,1 экв.) и молекулярных сит (120 мг, 4, предварительно высушенный порошок) добавляли CH2Cl2 (10 мл), после чего смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре в атмосфере газообразного азота. Реакционную смесь подвергали действию воздуха и перемешивали в течение 1 дня. К смеси добавляли насыщенный раствор ацетата аммония (30 мл) и смесь экстрагировали дважды этилацетатом (100 мл). Экстракт промывали разбавленным раствором гидрокарбоната натрия (NaHCO3, 2100 мл), сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (20-35% этилацетат-гексан), получая 258 мг указанного в заголовке соединения со стехиометрическим выходом. 1H-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,75 (с, 1 Н), 7,58 (д, 2 Н), 7,44 (т, 2 Н), 7,36 (т, 1 Н), 3,70 (с, 3 Н), 3,68 (с,2 Н), 2,25 (с, 3 Н). Получение 1-4. Метиловый эфир 2-(5-метил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановой кислоты. Соединение получения 1-3 (258 мг, 1,0 ммоль) растворяли в безводном ТГФ (10 мл) в атмосфере азота и выдерживали при температуре -78 С. Добавляли к раствору 1,0 М LiHMDS/ТГФ (1,20 мл,1,2 экв.) и смесь перемешивали в течение 10 мин. Добавляли йодистый этил (0,12 мл, 1,5 экв.) и смесь медленно нагревали до комнатной температуры при перемешивании в течение ночи. Воду (20 мл) добавляли и смесь экстрагировали этилацетатом (250 мл), промывали водным раствором хлорида натрия(100 мл), сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая 286 мг указанного в заголовке соединения со стехиометрическим выходом. Данное соединение использовали в следующей реакции без дополнительной очистки. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,72 (с, 1 Н), 7,60 (д, 2 Н), 7,44 (т, 2 Н), 7,35 (т, 1 Н), 3,77 (дд, 1 Н), 3,70 (с,3 Н), 2,28 (м, 1 Н), 2,26 (с, 3 Н), 1,90 (м, 1 Н), 0,92 (т, 3 Н). Получение 1-5. 2-(5-Метил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановая кислота. Соединение получения 1-4 (286 мг) растворяли в смеси растворителей (6 мл, тетрагидрофуран:MeOH:H2O = 3:2:1), добавляли к этому LiOHН 2 О (126 мг, 3,0 экв.) и смесь нагревали примерно 2 ч при перемешивании. Реакционный раствор нейтрализовали 1 н. водным раствором хлористо-водородной кислоты и отгоняли при пониженном давлении, чтобы почти полностью удалить тетрагидрофуран. Остаток растворяли в избытке этилацетата (50 мл), промывали водным раствором хлорида натрия, сушили(безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (272 мг) со стехиометрическим выходом. Данное соединение использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.-9 015886 Получение 1-6. трет-Бутиловый эфир 5-фтор-3-[2-(5-метил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-4-оксопентановой кислоты. Смесь производного карбоновой кислоты из получения 1-5 (271 мг, 1,00 ммоль), трет-бутилового эфира 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентановой кислоты (см. Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696,248 мг, 1,2 экв.) и HATU (494 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0 С, добавляли к ней триэтиламин (0,56 мл,4,0 экв.) в ДМФ в качестве растворителя (5 мл) и смесь оставляли для протекания реакции на 1 день. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом (230 мл), промывали водой, водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили(безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. К данному соединению и реагенту Десса-Мартина (848 мг, 2,0 экв.) добавляли безводный дихлорметан (4 мл), после чего смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали с помощью изопропилового спирта (1 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом (220 мл). Экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли колоночной хроматографией (30-40% этилацетат-гексан),получая 330 мг (72%) указанного в заголовке соединения. 1 Соединение получения 1-6 (100 мг, 0,218 ммоль) растворяли в дихлорметане (4 мл) и добавляли при 0 С трифторуксусную кислоту (2 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч, за время которого она медленно нагревалась до комнатной температуры. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (10% метанол-дихлорметан), получая 68 мг (78%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6)7,93 (м, 1 Н), 7,84 (ушир.с, 1 Н), 7,45-7,37 (м, 5 Н), 5,03 (м, 2 Н), 4,574,49 (м, 1 Н), 3,69 (м, 1 Н), 2,68-2,47 (м, 2 Н), 2,19 (с, 3 Н), 2,08-1,68 (м, 2 Н), 0,76 (м, 3 Н). Масса М+Н+ 402,74. Получение 2-1. Метиловый эфир (2-бензил-5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. К смеси соединения получения 1-2 (364 мг, 2,0 ммоль) и Cs2CO3 (977 мг, 1,5 экв.) добавляли ДМФ(8 мл) и бромистый бензил (0,31 мл, 1,3 экв.), затем ее перемешивали в течение 3 ч при 60 С в атмосфере азота. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток экстрагировали дважды этилацетатом (100 мл). Экстракт промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (NaHCO3,2100 мл) и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (30% этилацетатгексан), получая 484 мг (89%) указанного в заголовке соединения. 1(с, 2 Н), 2,15 (с, 3 Н). Получение 2-2. Метиловый эфир 2-(2-бензил-5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановой кислоты. Соединение получения 2-1 (471 мг, 1,73 ммоль) растворяли в безводном ТГФ (6 мл) в атмосфере азота и поддерживали температуру смеси при -78 С. Добавляли к смеси 1,0 М LiHMDS/ТГФ (2,10 мл,1,2 экв.) и смесь перемешивали в течение 10 мин. Добавляли йодистый этил (0,21 мл, 1,5 экв.) и смесь медленно нагревали до комнатной температуры при перемешивании в течение ночи. Реакцию останавливали с помощью насыщенного раствора ацетата аммония. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (250 мл), промывали водным раствором хлорида натрия (100 мл), сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (20% этилацетат-гексан), получая 400 мг (77%) указанного в заголовке соединения. 1- 10015886 Получение 2-3. 2-(2-Бензил-5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановая кислота. Соединение получения 2-2 (400 мг, 1,31 ммоль) растворяли в смеси растворителей (6 мл, тетрагидрофуран:МеОН:Н 2 О = 3:2:1), добавляли к этому LiOHН 2 О (165 мг, 3,0 экв.) и смесь нагревали в течение 2 ч при перемешивании. Реакционную смесь нейтрализовали 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты, отгоняли при пониженном давлении для почти полного удаления тетрагидрофурана. Остаток растворяли в избытке этилацетата (50 мл), промывали водным раствором хлорида натрия,сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая 356 мг (выход 100%) указанного в заголовке соединения. Данное соединение использовали в следующей реакции без дополнительной очистки. Получение 2-4. трет-Бутиловый эфир 3-[2-(2-бензил-5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5 фтор-4-оксопентановой кислоты. Смесь производного карбоновой кислоты получения 2-3 (153 мг, 0,535 ммоль), трет-бутилового эфира 3-амино-5-фтор-4-гидроксипентановой кислоты (см. Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696,133 мг, 1,2 экв.) и HATU (265 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0 С, добавляли к этому триэтиламин (0,30 мл,4,0 экв.) в ДМФ в качестве растворителя (5 мл) и смесь оставляли реагировать на 1 день. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом (230 мл), промывали водой,водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (40-60% этилацетат-гексан), получая 233 мг (92%) трет-бутилового эфира 3-[2-(2-бензил-5 метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4-гидроксипентановой кислоты. К этому соединению и реагенту Десса-Мартина (312 мг, 3,0 экв.) добавляли безводный дихлорметан (4 мл),после чего смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали с помощью изопропилового спирта (1 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом (220 мл). Экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (30-40% этилацетат-гексан), получая 201 мг (79%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)8,13 (ушир.с, 1 Н), 7,62 (с, 1 Н), 7,38-7,25 (м, 5 Н), 5,38-5,20 (м, 2 Н), 5,204,80 (м, 2 Н), 4,80-4,68 (м, 1 Н), 3,76 (м, 1 Н), 2,88-2,57 (м, 2 Н), 2,26 (с, 3 Н), 2,26-1,98 (м, 2 Н), 1,41 (м, 9 Н),0,87 (м, 3 Н). Пример 2. 3-[2-(2-Бензил-5-метил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4 оксопентановая кислота Соединение получения 2-4 (198 мг, 0,418 ммоль) растворяли в дихлорметане (4 мл) и добавляли при 0 С трифторуксусную кислоту (2 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч, за данное время она медленно нагревалась до комнатной температуры. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (10% метанол-дихлорметан), получая 175 мг (стехиометрический выход, белый порошок) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6)12,31 (ушир.с, 1 Н), 7,95-7,86 (дд, 1 Н), 7,79 (с, 1 Н), 7,28-7,22 (м, 5 Н),5,34-4,86 (м, 4 Н), 4,49-4,39 (м, 1 Н), 3,60 (м, 1 Н), 2,70-2,35 (м, 2 Н), 2,14 (с, 3 Н), 2,05-1,68 (м, 2H), 0,70 (м,3 Н). Получение 3-1. 2-Бензил-4,5-дихлор-2 Н-пиридазин-3-он. К смеси 4,5-дихлор-2 Н-пиридазин-3-она (3,3 г, 20,0 ммоль) и Cs2CO3 (9,77 мг, 1,5 экв.) добавляли ДМФ (15 мл) и бромистый бензил (3,10 мл, 1,3 экв.), после чего ее перемешивали в течение 3 ч при 60 С в атмосфере азота. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток экстрагировали дважды этилацетатом (200 мл). Экстракт промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия(NaHCO3, 2100 мл) и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (10% этилацетат-гексан), получая 4,48 г (88%) указанного в заголовке соединения. 1- 11015886 Получение 3-2. Этиловый эфир (2-бензил-5-хлор-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. Диэтилмалонат (1,73 г, 1,64 мл, 2,5 экв.) растворяли в изопропиловом простом эфире (2 мл), добавляли к этому при комнатной температуре этоксид натрия (0,73 г, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 30 мин. К реакционной смеси добавляли соединение получения 3-1 (1,10 г, 4,31 ммоль), после чего ее нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 1 дня. Смесь экстрагировали этилацетатом(250 мл), промывали водным раствором хлорида натрия (100 мл), сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии(10-20% этилацетат-гексан), получая 1,34 г (82%) смеси диэтилового эфира 2-(2-бензил-5-хлор-3-оксо 2,3-дигидропиридазин-4-ил)малоновой кислоты и диэтилового эфира 2-(1-бензил-5-хлор-6-оксо-1,6 дигидропиридазин-4-ил)малоновой кислоты в соотношении 1:1. Эту смесь растворяли в 12 мл смеси растворителей (Н 2 О:ДМСО =1:5), добавляли к этому NaCl (1,0 г, 5 экв.) и смесь нагревали при 120 С в течение 1 дня. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток экстрагировали дважды этилацетатом (200 мл). Экстракт промывали водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (NaHCO3,2100 мл) и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (10-20% этилацетатгексан), получая 530 мг (49%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,76 (с, 1 Н), 7,39 (д, 2 Н), 7,33-7,26 (м, 3 Н), 5,29 (с, 2 Н), 4,17 (кв.т, 2 Н),3,75 (с, 2 Н), 1,24 (т, 3 Н). Получение 3-3. Этиловый эфир (2-бензил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. Соединение получения 3-2 (1,15 г, 3,75 ммоль) растворяли в 30 мл EtOH, добавляли 10% Pd/C(200 мг, Aldrich) и смесь перемешивали в течение 3 ч в атмосфере водорода. Реакционную смесь пропускали через целит, промывали дважды этанолом и этанольный экстракт концентрировали при пониженном давлении, получая 1,00 г (98%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,74 (д, 1 Н), 7,42 (д, 2 Н), 7,33-7,26 (м, 3 Н), 7,17 (д, 1 Н), 5,33 (с, 2 Н),4,18 (кв.т, 2 Н), 3,59 (с, 2 Н), 1,25 (т, 3 Н). Получение 3-4. Этиловый эфир 2-(2-бензил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановой кислоты. Соединение получения 3-3 (272 мг, 1,00 ммоль) растворяли в безводном ТГФ (5 мл) в атмосфере азота и поддерживали раствор при температуре -78 С. Добавляли к нему 1,0 М LiHMDS/ТГФ (1,50 мл,1,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 10 мин. Добавляли йодистый этил (0,14 мл, 1,8 экв.) и смесь медленно нагревали до комнатной температуры при перемешивании в течение ночи. Реакцию останавливали с помощью насыщенного раствора ацетата аммония. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (250 мл), промывали водным раствором хлорида натрия (100 мл), сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (10-20% этилацетат-гексан), получая 220 мг (73%, масло) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,74 (д, 1 Н), 7,42 (д, 2 Н), 7,33-7,26 (м, 3 Н), 7,17 (д, 1 Н), 5,32 (АВквартет, 2 Н), 4,18-4,10 (м, 2 Н), 3,87 (т, 2 Н), 2,01-1,77 (м, 2 Н), 1,21 (т, 3 Н), 0,95 (т, 3 Н). Получение 3-5. трет-Бутиловый эфир 3-[2-(2-бензил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4 оксопентановой кислоты. Соединение получения 3-4 гидролизовали в соответствии с такой же методикой, как в получении 2-3, получая производное карбоновой кислоты. Смесь данного производного карбоновой кислотыTetrahedron Letters, 1994, 35 (52), 9693-9696, 170 мг, 1,2 экв.) и HATU (337 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0 С,добавляли триэтиламин (0,38 мл, 4,0 экв.) в ДМФ в качестве растворителя (5 мл) и смеси давали возможность реагировать в течение 1 дня. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом (230 мл), промывали водой, водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении,получая трет-бутиловый эфир 3-[2-(2-бензил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор 4-гидроксипентановой кислоты. К этому соединению и реагенту Десса-Мартина (580 мг, 2,0 экв.) добавляли безводный дихлорметан (4 мл), после чего смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали с помощью изопропилового спирта (1 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом (220 мл). Экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (20-30% этилацетат-гексан), получая 242 мг (77%) указанного в заголовке соединения. Соединение получения 3-5 (242 мг, 0,527 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как в примере 2, получая 195 мг (92%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6)12,40 (ушир. с, 1 Н), 8,70 (м, 1 Н), 7,87 (м, 1 Н), 7,27-7,24 (м, 6 Н),5,25-5,16 (м, 2 Н), 5,21 (м, 2 Н), 4,58-4,47 (м, 1 Н), 3,64 (м, 1 Н), 2,69-2,47 (м, 2 Н), 1,72-1,62 (м, 2 Н), 0,82 (м,3 Н). Получение 4-1. Этиловый эфир 2-(2-бензил-5-хлор-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановой кислоты. Соединение получения 3-2 (170 мг, 0,554 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как в получении 3-4, получая 137 мг (74%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,74 (с, 1 Н), 7,38-7,26 (м, 5 Н), 5,37-5,17 (АВ-квартет, 2 Н), 4,18-4,02 (м,2 Н), 3,91 (дд, 1 Н), 2,27 (м, 1 Н), 1,90 (м, 1 Н), 1,08 (т, 3 Н), 0,89 (т, 3 Н). Получение 4-2. 2-(2-Бензил-5-хлор-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановая кислота и 2-(2-бензил-5-метокси 3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановая кислота. Соединение получения 4-1 (132 мг, 0,395 ммоль) растворяли в смеси растворителей (6 мл, тетрагидрофуран:МеОН:Н 2 О = 3:2:1), добавляли к этому LiOHН 2 О (50 мг, 3,0 экв.) и смесь перемешивали в течение 1 дня. Реакционную смесь нейтрализовали 1 н. водным раствором хлористо-водородной кислоты и отгоняли при пониженном давлении для почти полного удаления тетрагидрофурана. Остаток растворяли в избытке этилацетата (50 мл), промывали водным раствором хлорида натрия, сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая 118 мг указанного в заголовке соединения, которое затем было идентифицировано по данным ЯМР как смесь хлорпроизводного и метоксипроизводного в соотношении 0,4:1,0. Данные соединения использовали в следующей реакции без дополнительной очистки. Получение 4-3. трет-Бутиловый эфир 3-[2-(2-бензил-5-хлор-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5 фтор-4-оксопентановой кислоты и трет-бутиловый эфир 3-[2-(2-бензил-5-метокси-3-оксо-2,3 дигидропиридазин-4-ил)бутириламино]-5-фтор-4-оксопентановой кислоты. Два соединения, полученные в получении 4-2, подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как в получении 2-4, и разделяли с помощью колоночной хроматографии (30-50% этилацетат-гексан), получая хлорпроизводное (45 мг, 23%) и метоксипроизводное (62 мг, 32%). Хлорпроизводное: 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,78 (с, 1 Н), 7,70 (м, 1 Н), 7,42-7,27 (м, 5 Н), 5,35-4,86 (м, 4 Н), 4,78-4,67 Хлорзамещенное соединение из получения 4-3 (45 мг, 0,091 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как в примере 2, получая 23 мг (58%) указанного в заголовке соединения. 1 Метоксизамещенное соединение из получения 4-3 (62 мг, 0,127 моль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как в примере 2, получая 28 мг (51%) указанного в заголовке соединения. 1H-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6)8,17 (с, 1 Н), 7,89-7,81 (м, 1 Н), 7,26-7,21 (м, 5 Н), 5,34-5,09 (Abквартет, 2 Н), 5,29-4,70 (м, 2H), 4,52-4,40 (м, 1 Н), 3,90 (д, 3 Н), 3,62 (м, 1 Н), 2,65-2,46 (м, 2 Н), 1,97-1,64 (м,2 Н), 0,68 (м, 3 Н). Получение 6-1. 4,5-Дихлор-2-метоксиметил-2 Н-пиридазин-3-он. 4,5-Дихлор-2 Н-пиридазин-3-он (30 г, 182 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (47,5 мл, 258 ммоль) и 4-диметиламинопиридин (2,20 г, 18,2 ммоль) растворяли в 200 мл хлористого метилена, к которому медленно добавляли по каплям хлорметил-метиловый эфир (16,6 мл, 21,8 ммоль), поддерживая температуру при 0 С. Смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, отгоняли при пониженном давлении и разделяли-очищали с помощью колоночной хроматографии (10% хлористый метилен/этилацетат), получая указанное в заголовке соединение (26,6 г, выход: 70%) в виде желтого твердого вещества. 1 Н-ЯМР (CDCl3, 400 МГц)7,81 (с, 1 Н), 5,45 (с, 2 Н), 3,48 (с, 3 Н). Получение 6-2. Диэтиловый эфир 2-(5-хлор-2-метоксиметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)малоновой кислоты и диэтиловый эфир 2-(5-хлор-1-метоксиметил-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)малоновой кислоты. Соединение получения 6-1 (26,6 г, 127 ммоль) и этоксид натрия (13 г, 191 ммоль) суспендировали в диизопропиловом эфире (100 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Добавляли к этому диэтилмалонат(29,0 мл, 191 ммоль) и смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 1 дня. После завершения реакции смесь отгоняли при пониженном давлении для удаления диизопропилового эфира. Остаток снова растворяли в хлористом метилене, промывали 1 н. соляной кислотой и насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и отгоняли при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (14,3%, этилацетат/гексан), получая указанную в заголовке смесь в соотношении 1:1 (32 г, выход: 76%) в виде бледно-желтой жидкости. Получение 6-3. Этиловый эфир (5-хлор-2-метоксиметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. Соединение получения 6-2 (32,0 г, 96,2 ммоль) и хлорид натрия (228 г, 481 ммоль) растворяли в смеси вода/диметилсульфоксид (120 мл, 1/5) и перемешивали в течение 16 ч при 170 С. Диметилсульфоксид удаляли отгонкой в вакууме. Остаток растворяли в хлористом метилене, промывали водой, перегоняли при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (33%, этилацетат/гексан), получая указанное в заголовке соединение (12 г, выход: 48%) в виде бесцветной жидкости. 1 Н-ЯМР (CDCl3, 500 МГц)7,78 (с, 1 Н), 5,42 (с, 2 Н), 4,18 (т, 2 Н), 3,77 (с, 2 Н), 3,44 (с, 3 Н), 1,26 (кв,3 Н). Получение 6-4. Этиловый эфир (2-метоксиметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)уксусной кислоты. Соединение получения 6-3 (405 мг, 1,55 ммоль) растворяли в 10 мл EtOH, добавляли 10% Pd/C(100 мг, Aldrich) и смесь перемешивали в течение 1 ч в атмосфере водорода. Реакционную смесь пропускали через целит и промывали дважды этанолом. Этанольный экстракт концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (40-50%, этилацетат/гексан), получая указанное в заголовке соединение (240 мг, выход: 68%) в виде бесцветной жидкости. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,76 (д, 1H), 7,21 (д, 1 Н), 5,45 (с, 2 Н), 4,18 (кв.т, 2 Н), 3,45 (с, 3 Н), 1,27BBr3 (70 мкл или 1,1 экв./1,0 М раствора в CH2Cl2) и смесь перемешивали в течение 2 ч при медленном нагревании до комнатной температуры. Реакцию останавливали с помощью насыщенного раствора ацетата аммония. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и промывали водным раствором хлорида натрия. Экстракт концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью препаративной ТСХ (70%, этилацетат/гексан), получая указанное в заголовке соединение (132 мг, выход: 91%) в виде бесцветной жидкости. 1H-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,76 (д, 1 Н), 7,26 (д, 1 Н), 4,18-4,10 (м, 2 Н), 3,88 (м, 1 Н), 2,00-1,75 (два м, 2 Н), 1,23 (т, 3 Н), 0,94 (т, 3 Н). Получение 6-7. 1-Бромметил-2-трет-бутилбензол. К 1-трет-бутил-2-метилбензолу (940 мг, 6,34 ммоль), NBS (1,24 г, 1,1 экв.) и AIBN (20 мг, каталитическое количество) добавляли CCl4 (12 мл), после чего смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 1 ч. Суспендированные частицы удаляли фильтрованием и промывали CCl4. Органические слои объединяли и концентрировали при пониженном давлении, получая 1,5 г желтой жидкости со стехиометрическим выходом. 1(т, 1 Н), 6,67 (м, 1 Н), 5,50 (Ab-квартет, 2 Н), 5,02 (м, 2 Н), 4,58-4,48 (м, 1 Н), 3,69 (м, 1 Н), 2,63 (м, 2 Н), 1,751,64 (м, 2 Н), 1,40 (с, 9 Н), 0,83 (м, 3 Н). Получение 7-1. 1-Бромметил-3-трет-бутилбензол. К 1-метил-3-трет-бутилбензолу (551 мг, 3,72 ммоль), NBS (730 мг, 1,1 экв.) и AIBN (14 мг, каталитическое количество) добавляли CCl4 (8 мл), после чего смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч. Суспендированные частицы удаляли фильтрованием и промывали CCl4. Органические слои объединяли и концентрировали при пониженном давлении, получая 860 мг желтой жидкости (которая, как было показано методом ЯМР, содержит примерно 15% дибромпроизводного). 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,39-7,19 (м, 4 Н), 4,51 (с, 2 Н), 1,35 (с, 9 Н).- 15015886 Получение 7-2. Этиловый эфир 2-[2-(3-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутановой кислоты. К смеси соединения получения 6-6 (50 мг, 0,238 ммоль) и Cs2CO3 (116 мг, 1,5 экв.) добавляли ДМФ(3 мл) и 1-бромметил-3-трет-бутилбензол из получения 7-1 (70 мг, 1,3 экв.), после чего смесь перемешивали в течение 2 ч при 60 С в атмосфере азота. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток экстрагировали дважды этилацетатом (50 мл). Экстракт промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (NaHCO3, 230 мл) и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью препаративной ТСХ (30% этилацетат-гексан), получая 57 мг (67%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,74 (д, 1 Н), 7,43 (с, 1 Н), 7,30-7,16 (м, 4 Н), 5,32 (АВ-квартет, 2 Н), 4,184,10 (м, 2 Н), 3,88 (т, 1 Н), 1,99-1,76 (два м, 2 Н), 1,29 (с, 9 Н), 1,20 (т, 3 Н), 0,95 (т, 3 Н). Получение 7-3. трет-Бутиловый эфир 3-2-[2-(3-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4 ил]бутириламино-5-фтор-4-оксопентановой кислоты. Соединение получения 7-2 (56 мг, 0,157 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 3-5, получая указанное в заголовке соединение (49 мг, 60%). 1(2-Метилоксазол-4-ил)метанол. К LiAlH4 (304 мг, 1,5 экв.) добавляли безводный ТГФ (20 мл). К этому добавляли при -78 С метиловый эфир 2-метилоксазол-4-карбоновой кислоты (см. J. Org. Chem., 2003, 68, с. 4215-4234), растворенной в ТГФ (20 мл), и перемешивали в течение 1 ч при той же температуре. Реакцию останавливали с помощью воды. Реакционную смесь пропускали через целит и экстрагировали этилацетатом (350 мл). Органический слой промывали водным раствором хлорида натрия, отгоняли при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (этилацетат), получая указанное в заголовке соединение (308 мг, выход: 51%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1CBr4 (1,17 г, 1,3 экв.) и PPh3 (1,07 г, 1,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь сушили при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (25% этилацетат/гексан), получая указанное в заголовке соединение (139 мг, выход: 29%) в виде бесцветной жидкости. 1 Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3)7,58 (с, 1 Н), 4,39 (с, 2 Н), 2,50 (с, 3 Н). Получение 13-3. Этиловый эфир 2-[2-(2-метилоксазол-4-илметил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутановой кислоты. Соединение получения 6-6 (160 мг, 0,761 ммоль) и 4-бромметил-2-метилоксазол (139 мг, 1,3 экв.) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 2-1, получая указанное в заголовке соединение (159 мг, 69%). 1- 20015886 Получение 17-1. 1-Бромметилизохинолин. К 1-метилизохинолину (0,99 г, 6,91 ммоль), NBS (1,35 г, 1,1 экв.) и AIBN (10 мг, каталитическое количество) добавляли CCl4 (15 мл), после чего смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч. Суспендированные частицы удаляли фильтрованием и промывали CCl4. Органические слои объединяли, концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (30%, этилацетат/гексан), получая указанное в заголовке соединение (270 мг, выход: 18%) в виде фиолетового твердого вещества. 1 Н-ЯМР (500 МГц, CDCl3)8,48 (д, 1 Н), 8,25 (д, 1 Н), 7,87 (д, 1 Н), 7,75-7,67 (два т, 2 Н), 7,65 (д, 1 Н). Получение 17-2. Этиловый эфир 2-(2-изохинолин-1-илметил-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4-ил)бутановой кислоты. Соединение получения 6-6 (110 мг, 0,52 ммоль) и 1-бромметилизохинолин (151 мг, 1,3 экв.), полученный в получении 17-1, подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 2-1, получая указанное в заголовке соединение (135 мг, 73%). 1H-ЯМР (500 МГц, CDCl3)0,96 (м, 3 Н), 1,68 (м, 1 Н), 2,06 (м, 1 Н), 2,50-3,16 (м, 2 Н), 3,84 (м, 1 Н),4,77 (м, 3 Н), 5,29 (м, 2 Н), 7,19-7,52 (м, 6 Н), 7,91 (м, 1 Н). Получение 21-1. Этиловый эфир 2-[3-оксо-2-(2-трифторметилбензил)-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутановой кислоты. Соединение получения 6-6 (104 мг, 0,50 ммоль), DIAD (диизопропил азодикарбоксилат, 151 мг,1,5 экв.), (2-трифторметилфенил)метанол (131 мг, 1,5 экв.) и трифенилфосфин (261 мг, 2,0 экв.) растворяли в ТГФ (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (30% ЕА/гексан), получая указанное в заголовке соединение (125 мг, 68%). 1H-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,92 (дд, 1 Н), 7,70 (д, 1 Н), 7,60 (ушир.с, 1 Н), 7,45 (т, 1 Н), 7,39 (т, 1 Н),7,35 (м, 1 Н), 6,95 (д, 1 Н), 5,64-5,51 (м, 2 Н), 4,77-4,35 (м, 3 Н), 3,84 (м, 1 Н), 3,06-2,90 (м, 1 Н), 2,68-2,58 (м,1 Н), 2,12 (м, 1 Н), 1,74 (м, 1 Н), 0,97 (т, 3 Н). Получение 22-1. Этиловый эфир 2-[3-оксо-2-(3-трифторметилбензил)-2,3-дигидропиридазин-4-ил]бутановой кислоты. Соединение получения 6-6 (100 мг, 0,48 ммоль), DIAD (диизопропил азодикарбоксилат, 192 мг,2,0 экв.), (3-трифторметилфенил)метанол (168 мг, 2,0 экв.) и трифенилфосфин (312 мг, 2,5 экв.) растворяли в ТГФ (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (30% ЕА/гексан), получая указанное в заголовке соединение (158 мг, 90%). 1(3S)-3-[(Бензилокси)карбонил]амино-5-(трет-бутокси)-2-гидрокси-5-оксопентил-2,6 дихлорбензоат. К N-бензилоксикарбонилтрет-бутиласпарагиновой кислоте (5,03 г, 15,6 ммоль) и NMM (1,90 мл,17,1 ммоль) добавляли безводный тетрагидрофуран (60 мл) в атмосфере азота и поддерживали температуру смеси при -15 С. Добавляли изобутилхлорформиат (2,12 мл, 16,3 ммоль) и смесь перемешивали в течение примерно 20 мин. К реакционной смеси, поддерживая температуру при 0 С, добавляли раствор диазометана в простом эфире (синтезирован из 2,0 экв. 1-метил-3-нитро-1-нитрозогуанидина, 60 мл),после чего смесь перемешивали в течение 30 мин при 0 С, получая производное диазокетона. Добавляли к смеси при 0 С 30% HBr/AcOH (6,42 мл, 2,0 экв.) и перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом, промывали водой, дважды насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая производное бромметилкетона (6,4 г). Производное бромметилкетона (4,36 г) и 2,6-дихлорбензойную кислоту (2,28 г, 1,1 экв.) растворяли в диметилформамиде (18 мл), добавляли к этому KF (1,58 г, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Остаток, полученный при концентрировании при пониженном давлении,экстрагировали этилацетатом, промывали водой, дважды насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая производное 2,6-дихлорбензоксиметилкетона. Это соединение растворяли в метаноле (20 мл) и подвергали взаимодействию, добавляя раствор NaBH4 (412 мг) в метаноле (40 мл). Реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч. Реакцию останавливали с помощью уксусной кислоты. Реакционную смесь отгоняли при пониженном давлении для удаления метанола, экстрагировали этилацетатом (250 мл), промывали водой и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4), концентрировали при пониженном давлении и разделяли с помощью колоночной хроматографии (этилацетат-гексан, 1:5), получая 4,80 г (86%) указанного в заголовке соединения. 1(3S)-3-Амино-5-(трет-бутокси)-2-гидрокси-5-оксопентил-2,6-дихлорбензоат. Соединение получения 23-1 (4,80 г, 9,37 ммоль) растворяли в EtOH и подвергали дебензилоксикарбонилированию (Pd/C) под действием водорода из баллона в течение 40 мин, получая 3,47 г (98%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6)8,2 (ушир., 2H), 7,6-7,5 (м, 3 Н), 6,1 (м, 1 Н), 4,4-3,9 (м, 3 Н), 3,0-2,6(S)-4-трет-Бутоксикарбонил-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4 ил]бутириламино-2-оксобутиловый эфир 2,6-дихлорбензойной кислоты. Соединение получения 6-8 гидролизовали в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 2-3, получая производное карбоновой кислоты. Смесь данного производного карбоновой кислоты (100 мг, 0,304 ммоль), соединение получения 23-2 (151 мг, 1,2 экв.) и HATU (337 мг, 1,3 экв.) охлаждали до 0 С, добавляли к этому триэтиламин (0,17 мл, 4,0 экв.) в ДМФ (4 мл) в качестве растворителя и смесь оставляли для протекания реакции в течение 1 ч. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом (230 мл), промывали водой, водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая (S)-4-трет-бутоксикарбонил-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3 дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-2-гидроксибутиловый эфир 2,6-дихлорбензойной кислоты. К этому соединению и реагенту Десса-Мартина (260 мг, 2,0 экв.) добавляли безводный дихлорметан (4 мл),после чего смесь перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали с- 24015886 помощью изопропилового спирта (1 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом (220 мл). Экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли с помощью колоночной хроматографии (20-25% этилацетат-гексан), получая 163 мг (78%) указанного в заголовке соединения. 1 Соединение получения 23-3 (159 мг, 0,29 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в примере 2, получая указанное в заголовке соединение в виде смеси двух диастереомеров, которые затем разделяли с помощью препаративной ТСХ (70% EtOAc/гексан), получая 62 мг (42%) и 50 мг (34%) каждого из диастереомеров. Соединение, имеющее меньшую полярность по данным ТСХ, было отнесено к соединению примера 23-1 и соединение с более высокой полярностью - к соединению примера 23-2, но их конкретные диастереомерные формы не были установлены. Соединение с меньшей полярностью: 1 Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6)8,78 (ушир., 1 Н), 7,93 (м, 1 Н), 7,56-7,52 (м, 3 Н), 7,40 (м, 1 Н), 7,34 (т,1 Н), 7,11 (м, 1 Н), 7,05 (м, 1 Н), 6,67 (д, 1 Н), 5,58-5,42 (АВ-квартет, 2 Н), 5,30-4,60 (ушир.м, 3 Н), 4,58 и 4,50N-Бензилоксикарбонилтрет-бутиласпарагиновую кислоту (17,9 г, 55,5 ммоль) и 2,3,5,6 тетрафторфенол подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 23-1 и 23-2, получая 13,2 г (68%) указанного в заголовке соединения. 1 Соединение получения 6-8 (104 мг, 0,29 моль) гидролизовали в соответствии с такой же методикой,как описано в получении 2-3, получая производное карбоновой кислоты. Смесь данного производного карбоновой кислоты (95 мг, 0,29 ммоль), соединение получения 24-1 (113 мг, 1,2 экв.) и HATU (143 мг,1,3 экв.) охлаждали до 0 С, добавляли к этому триэтиламин (0,16 мл, 4,0 экв.) в ДМФ (5 мл) в качестве растворителя и смесь оставляли для взаимодействия в течение 2 ч. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом (230 мл), промывали водой, водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4), концентрировали при пониженном давлении и предварительно очищали с помощью препаративной ТСХ (500% ЕА/гексан), получая 172 мг (89%) трет-бутилового эфира (S)-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3 дигидропиридазин-4-ил]бутириламино-4-гидрокси-5-(2,3,5,6-тетрафторфенокси)пентановой кислоты. К данному соединению и реагенту Десса-Мартина (220 мг, 2,0 экв.) добавляли безводный дихлорметан(4 мл), после чего смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию останавливали с помощью изопропилового спирта (1 мл). Твердое вещество удаляли фильтрованием через целит при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом (220 мл). Экстракт промывали водой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводныйNa2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (30% ЕА/гексан), получая 74 мг (38%) указанного в заголовке диастереомера с более низкой полярностью и 67 мг (35%) - с более высокой полярностью. Диастереомер с меньшей полярностью: 1- 26015886 указанных в заголовке соединений (58 мг, 87%), которому была приписана структура соединения примера 24-1. 1H-ЯМР (500 МГц, CDCl3)7,91 (д, 1 Н), 7,43 (д, 1 Н), 7,39 (ушир.с, 1 Н), 7,18 (т, 1 Н), 7,05 (т, 1 Н),6,75 (м, 1 Н), 6,70 (д, 1 Н), 5,65 (с, 2 Н), 5,40-4,50 (м, 3 Н), 3,95 (м, 1 Н), 3,01 (м, 1 Н), 2,55 (м, 1 Н), 2,13 (м,1 Н), 1,73 (м, 1 Н), 1,47 (с, 9 Н), 0,97 (т, 3 Н) (пример 24-1). Соединение с более высокой полярностью, полученное в получении 24-2 (67 мг, 0,10 ммоль), подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в примере 2, получая другое указанное в заголовке соединение (60 мг, 98%), которому была приписана структура соединения примера 24-2. 1 Соединение получения 25-1 (75 мг, 0,11 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в примере 2, получая указанное в заголовке соединение в виде смеси двух диастереомеров, которые затем разделяли с помощью препаративной ТСХ (70% EtOAc/гексан), получая 31 мг (44%) диастереомера с более низкой полярностью (пример 25-1) и 33 мг (48%) диастереомера с более высокой полярностью (пример 25-2). Диастереомер с более низкой полярностью: 1(100 мл) и MeI (2,74 мл, 3 экв.), после чего смесь перемешивали в течение 2-3 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом(2100 мл), промывали водой, водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (30% этилацетат/гексан), получая 4-трет-бутиловый эфир 1-метиловый эфир (S)-2-бензилоксикарбониламино янтарной кислоты со стехиометрическим выходом. Данное соединение растворяли в МеОН (100 мл), добавляли концентрированную HCl (1,1 мл, 1,0 экв.) и подвергали дебензилоксикарбонилированию (Pd/C) в течение 40 мин в атмосфере водорода из баллона, получая при этом 3,28 г (96%) указанного в заголовке соединения.(S)-2-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3 дигидропиридазин-4-ил]бутириламиноянтарной кислоты. Соединение получения 6-8 гидролизовали в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 2-3, получая производное карбоновой кислоты. Смесь данного производного карбоновой кислоты (938 мг, 2,86 ммоль), соединения получения 26-1 (753 мг, 1,1 экв.) и HATU (1,41 г, 1,3 экв.) охлаждали до 0 С, добавляли к этому триэтиламин (2,00 мл, 5,0 экв.) в ДМФ (18 мл) в качестве растворителя и смесь оставляли реагировать в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток экстрагировали этилацетатом (250 мл), промывали водой, водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (50% этилацетатгексан), получая 1,24 г (84%) указанного в заголовке соединения. 1 Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3)7,84 (дд, 1 Н), 7,48 (д, 1 Н), 7,41-7,32 (дд, 1 Н), 7,30 (д, 1 Н), 7,23 (м, 1 Н),7,14 (м, 1 Н), 6,92-6,83 (дд, 1 Н), 5,76-5,65 (м, 2 Н), 4,82 (м, 1 Н), 3,91 (м, 1 Н), 3,76-3,68 (два с, 3 Н), 2,92-2,63(м, 2 Н), 2,19 (м, 1 Н), 1,76 (м, 1 Н), 1,55 (с, 9 Н), 1,46, 1,42 (два с, 9 Н), 1,02 (м, 3 Н). Получение 26-3. трет-Бутиловый эфир (S)-5-бром-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4 ил]бутириламино-4-оксопентановой кислоты. Соединение получения 26-2 (1,24 г, 2,41 ммоль) гидролизовали в соответствии с такой же методикой, как описано в получении 2-3, получая производное карбоновой кислоты (1,15 г, 95%). К данному производному карбоновой кислоты (1,15 г, 2,30 ммоль) и NMM (0,28 мл, 2,53 ммоль) добавляли безводный тетрагидрофуран (20 мл) в атмосфере азота и температуру смеси поддерживали при 0 С. Добавляли изобутилхлорформиат (0,31 мл, 2,42 ммоль) и смесь перемешивали в течение примерно 30 мин. К реакционной смеси, температуру которой поддерживали при 0 С, добавляли раствор диазометана в простом эфире (синтезирован из 4,0 экв. 1-метил-3-нитро-1-нитрозогуанидина, 40 мл), после чего смесь перемешивали в течение 4 ч при 0 С для получения производного диазокетона. Добавляли к этому 30%HBr/AcOH (1,02 мл, 2,0 экв.) при 0 С и перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом, промывали водой, дважды насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении, получая производное бромметилкетона (1,30 г, 98%). Данное соединение использовали в следующей реакции без дополнительной очистки. 1(S)-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4 ил]бутириламино-4-оксо-5-(2,3,6-трифторфенокси)пентановой кислоты. Соединение получения 26-3 (100 мг, 0,17 ммоль) и 2,3,6-трифторфенол (31 мг, 1,2 экв.) растворяли в диметилформамиде (2 мл), добавляли к этому KF (25 мг, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Остаток, полученный при концентрировании при пониженном давлении,экстрагировали этилацетатом, промывали водой, дважды насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (70% этилацетат/гексан), получая 77 мг (69%) указанного в заголовке соединения. 1- 28015886 Соединение получения 26-4 (77 мг, 0,12 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в примере 2, получая указанное в заголовке соединение в виде смеси двух диастереомеров, которые затем разделяли с помощью препаративной ТСХ (50% этилацетат/гексан), получая 24 мг (34%) диастереомера с более низкой полярностью (пример 26-1) и 17 мг (24%) диастереомера с более высокой полярностью (пример 26-2). Диастереомер с более низкой полярностью: 1(S)-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4 ил]бутириламино-5-(2,6-дифторфенокси)-4-оксопентановой кислоты. Соединение получения 26-3 (100 мг, 0,17 ммоль) и 2,6-дифторфенол (27 мг, 1,2 экв.) растворяли в диметилформамиде (2 мл), добавляли к этому KF (25 мг, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Остаток, полученный при концентрировании при пониженном давлении,экстрагировали этилацетатом, промывали водой, дважды насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (70% этилацетат/гексан), получая 77 мг (71%) указанного в заголовке соединения. 1 Соединение получения 27 (75 мг, 0,11 ммоль) подвергали взаимодействию в соответствии с такой же методикой, как описано в примере 2, получая указанное в заголовке соединение в виде смеси двух диастереомеров, которые затем разделяли с помощью препаративной ТСХ (50% EtOAc/гексан), получая 25 мг (36%) диастереомера с более низкой полярностью (пример 27-1) и 24 мг (35%) диастереомера с более высокой полярностью (пример 27-2). Диастереомер с более низкой полярностью: 1(S)-3-2-[2-(2-трет-бутилбензил)-3-оксо-2,3-дигидропиридазин-4 ил]бутириламино-5-(дифенилфосфиноилокси)-4-оксопентановой кислоты. Соединение получения 26-3 (100 мг, 0,17 ммоль) и дифенилфосфиновую кислоту (45 мг, 1,2 экв.) растворяли в диметилформамиде (2 мл), добавляли к этому KF (25 мг, 2,5 экв.) и смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Остаток, полученный при концентрировании при пониженном давлении, экстрагировали этилацетатом, промывали водой, дважды насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водным раствором хлорида натрия, сушили (безводный Na2SO4) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (50% этилаце- 29