Иммуномодулирующие гетероциклические соединения

Мэтьюс Йен Ричард (GB) Изобретение относится к соединениям формулы (I), которые являются ингибиторами CD80 и применимы в иммуномодулирующей терапии где R1 и R3, независимо, обозначают Н; F; Cl; Br; -NO2, -CN; C1-C6-алкил, необязательно замещнный F или Cl; или C1-C6-алкокси, необязательно замещнный F; R4 обозначает карбоксильную кислотную группу (-СООН) или е эфир или -C(=O)NR6R7, - NR7C(=O)R6, -NR7C(=O)OR6,-NHC(=O)NR7R6 или -NHC(=S)NR7R6, где R6 обозначает Н или радикал формулы -(Alk)m-Q, гдеm обозначает 0 или 1, Alk обозначает необязательно замещнный двухвалентный линейный или разветвлнный C1-C12-алкиленовый, или C2-C12-алкениленовый, или C2-C12-алкиниленовый радикал, или двухвалентный C3-C12-карбоциклический радикал, любой из этих радикалов может содержать одну или более -О-, -S- или -N(R8)-связей, где R8 обозначает Н или C1-C4-алкил, C3-C4 алкенил, C3-C4-алкинил или C3-C6-циклоалкил и Q обозначает Н; -NR9R10, где R9 и R10, независимо, обозначают Н; C1-C4-алкил; C3-C4-алкенил; C3-C4-алкинил; C3-C6-циклоалкил; сложноэфирную группу; необязательно замещнную карбоциклическую или гетероциклическую группу; илиR9 и R10 вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют цикл, который, необязательно,является замещнным; и R7 обозначает Н или C1-C6-алкил, или R6 и R7 вместе с атомом или атомами, с которым(и) они связаны, образуют необязательно замещнный моноциклический гетероцикл, содержащий 5, 6 или 7 атомов в цикле; и X обозначает связь или двухвалентный радикал формулы -(Z)n-(Alk)- или -(Alk)-(Z)n-, где Z обозначает -О-, -S- или -NH-, Alk имеет значение по определению для R6, а n обозначает 0 или 1. 014080 Область техники Настоящее изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям, способам их получения, к содержащим их композициям и к способам и применению для клинического лечения медицинских состояний, на которые может благотворно воздействовать иммуномодуляция, например аутоиммунного заболевания, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, диабета, астмы, трансплантации, системной красной волчанки и псориаза. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым гетероциклическим соединениям, которые являются антагонистами CD80, способными ингибировать взаимодействие между CD80 и CD28, пригодными для иммуноингибирования. Уровень техники Иммунная система обладает способностью контролировать гомеостаз между активацией и инактивацией лимфоцитов с помощью различных регуляторных механизмов в процессе и после иммунного ответа. Среди этих механизмов такие, которые специфически ингибируют и/или выключают иммунный ответ. Так, когда антиген представлен молекулами МНС к Т-клеточному рецептору, Т-клетки становятся соответствующим образом активированными только в присутствии дополнительных костимулирующих сигналов. В отсутствие этих дополнительных сигналов активации лимфоцитов нет, и индуцируется либо состояние функциональной инактивации, называемое анергией, либо толерантность или Т-клетки специфически удаляются с помощью апоптоза. Один такой "костимулирующий" сигнал включает взаимодействие CD80 на специализированных антигенпрезентирующих клетках с CD28 на Т-клетках, и показано, что этот сигнал важен для полной Т-клеточной активации (Lenschow et al. (1996), Annu. Rev. Immunol., 14, 233-258). Поэтому было бы желательно получить соединения, которые ингибируют взаимодействие CD80/CD28. Раскрытие изобретения Согласно настоящему изобретению предлагается соединение формулы (I) и его фармацевтически приемлемая или приемлемая в ветеринарии соль, гидрат или сольватR4 обозначает карбоксильную кислотную группу (-СООН) или е эфир или -C(=O)NR6R7,-NR7C(=O)R6, -NR7C(=O)OR6, -NHC(=O)NR7R6 или -NHC(=S)NR7R6, гдеR6 обозначает Н или радикал формулы -(Alk)m-Q, гдеAlk обозначает необязательно замещнный двухвалентный линейный или разветвлнныйC3-C12-карбоциклический радикал, любой из этих радикалов может содержать одну или более -О-, -Sили -N(R8)-связей, где R8 обозначает Н, или C1-C4-алкил, C3-C4-алкенил, C3-C4-алкинил, илиQ обозначает Н, -NR9R10, где R9 и R10, независимо, обозначают Н, C1-C4-алкил, C3-C4-алкенил,C3-C4-алкинил, C3-C6-циклоалкил, сложноэфирную группу, необязательно замещнную карбоциклическую или гетероциклическую группу; или R9 и R10, вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют цикл, который, необязательно, является замещнным; иR7 обозначает Н или C1-C6-алкил или R6 и R7, вместе с атомом или атомами, с которым(и) они связаны, образуют необязательно замещнный моноциклический гетероцикл, содержащий 5, 6 или 7 атомов в цикле; иX обозначает связь или двухвалентный радикал формулы -(Z)n-(Alk)- или -(Alk)-(Z)n-, где Z обозначает -O-, -S- или -NH-, Alk имеет значение по определению для R6, а n обозначает 0 или 1. Далее в данном описании соединения по изобретению могут быть представлены в любой таутомерной форме и могут называться любой таутомерной формой (I), и следует понимать, что любая таутомерная форма и все таутомерные формы структуры (I), в частности (I1) и (I2), входят в объем изобретения. Соединение общей формулы (I) представляет собой антагонисты CD80. Они ингибируют взаимодействие между CD80 и CD28 и, следовательно, активацию Т-клеток, тем самым модулируя иммунный ответ. Соответственно изобретение также включает:(i) применение соединения формулы (I) или его приемлемой фармацевтически или приемлемой в ветеринарии соли при лечении состояний, на которые может благотворно воздействовать иммуномодуляция, и, в частности, для иммуноингибирования;(ii) применение соединения формулы (I) или его приемлемой фармацевтически или приемлемой в ветеринарии соли для производства лекарственных препаратов для лечения состояний, на которые может благотворно воздействовать иммуномодуляция, и, в частности, для иммуноингибирования;(iii) способ иммуномодуляции, в частности иммуноингибирования, у млекопитающих, включая людей, заключающийся во введении млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективную иммуномодулирующую дозу соединения формулы (I) или его приемлемой фармацевтически или приемлемой в ветеринарии соли;(iv) фармацевтическую или ветеринарную композицию, содержащую соединение формулы (I) или его приемлемую фармацевтически или приемлемую в ветеринарии соли вместе с приемлемым в фармации или в ветеринарии эксципиентом или носителем. Состояния, на которые благотворно воздействует иммуномодуляция, включают следующее: острый рассеянный энцефаломиелит; недостаточность надпочечников; аллергический васкулит и гранулматоз; амилоидоз; анкилозирующий спондилоартрит; астму; аутоиммунную болезнь Аддисона; аутоиммунную алопецию; аутоиммунный хронический активный гепатит; аутоиммунную гемолитическую анемию; аутоиммунную Neutrogena; аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру; болезнь Бехчета; церебеллярную дегенерацию; хронический активный гепатит; хроническую воспалительную демиелинизирующую полирадикулоневропатию; хроническую нейропатию с моноклональной гаммопатией; классический узелковый полиартериит; врожднную гиперплазию надпочечников; криопатии; герпетиформный дерматит; диабет; миастенический синдром Итон-Ламберта; энцефаломиелит; приобретенный буллзный эпидермолиз;-2 014080 узелковую эритему; глютензависимую энтеропатию; синдром Гудпасчера; синдром Гийена-Барре; тиреоидит Хашимото; гипертиреоз; идиопатический гемохроматоз; идиопатический мембранозный гломерулонефрит; изолированный васкулит центральной нервной системы; болезнь Кавасаки; болезнь минимальных изменений (почек); смешанные васкулиты; смешанную соединительнотканную болезнь; мультифокальную моторную невропатию с блоком проведения импульсов; рассеянный склероз; тяжлую псевдопаралитическую миастению; синдром пляшущих глаз; пемфигоид; пузырчатку; злокачественную анемию; полимиозит/дерматомиозит; послеинфекционные артритиды; первичный билиарный склероз; псориаз; реактивные артритиды; болезнь Рейтера; ретинопатию; ревматоидный артрит; склерозирующий холангид; синдром Сгрена; синдром негнущегося человека; подострый тиреоидит; системную красную волчанку; системные некротизирующие васкулиты; системный склероз (склеродермию); аортоартериит (болезнь Такаясу); височный артериит; облитерирующий тромбоангиит; аутоиммунный полигландулярный синдром типа I и типа II; язвенный колит; увеит; гранулматоз Вегенера. Применяемый в данном описании термин "сложный эфир" относится к группе вида -COOR, где R обозначает радикал, умозрительно образованный из спирта ROH. Примеры сложноэфирных групп включают физиологически гидролизуемые сложные эфиры, такие как метиловые, этиловые, н- и изопропиловые, н-, вт- и трет-бутиловые и бензиловые сложные эфиры. Применяемый в данном описании термин "алкилен" относится к линейной или разветвлнной алкильной цепи, имеющей две свободные (несвязанные) валентности, например -CH2-, -CH2CH2-,-CH2CH2CH2-, -CH2(CH3)CH2-, -CH(CH2CH3)CH2-CH2CH2- и -C(CH3)3. Применяемый в данном описании термин "алкенилен" относится к линейной или разветвлнной алкенильной цепи, имеющей две свободные (несвязанные) валентности, например -CH=CH-, -CH2CH=CH-,-С(CH3)=CH и -CH(CH2CH3)CH=CHCH2-. Применяемый в данном описании термин "алкинилен" относится к линейной или разветвлнной алкинильной цепи, имеющей две свободные (несвязанные) валентности, например -CHH-, -CH2CH=CH- и-CH(CH2CH3)CCCH2-. Если не указано иначе, в контексте, в котором встречается данный термин, термин "замещнный" в применении к любому фрагменту по данному описанию означает замещнный по меньшей мере одним заместителем, выбранным, например, из (C1-C6)алкила, (C1-C6)алкенила, (C2-C6)алкинила,фторзамещнного (C1-C6)алкила, фторзамещнного (C1-C6)алкенила, фторзамещнного (C2-C6)алкинила,(C1-C6)алкокси и фторзамещнного (C1-C6)алкокси (включая особый случай, когда цикл является замещнным по прилегающим циклическим С атомам группой алкилендиокси, такой как метилендиокси или-3 014080 этилендиокси), (C1-C6)алкилтио, фенила, бензила, фенокси, бензилокси, гидрокси, меркапто, амино,фтор, хлор, бром, циано, нитро, оксо, -СООН, -SO2OH, -CONH2, -SO2NH2, -CORA, -COORA, -SO2ORA,-NHCORA, -NHSO2RA, -CONHRA, -SO2NHRA, -NHRA, -NRARB, -CONRARB или -SO2NRARB, где RA и RB,независимо, обозначают (C1-C6)алкильную или (C2-C6)алкоксильную группу или моноциклическую карбоциклическую или гетероциклическую 5-7-членную группу или RA и RB вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют цикл. В случае когда "замещнный" означает замещнный фенильной,бензильной, фенокси- или бензилоксигруппой, фенильное кольцо в этих группах может само быть замещнным любым из вышеприведнных заместителей, за исключением фенила, бензила, фенокси или бензилокси. Применяемый в данном описании термин "арил" относится к моно-, би- или трициклическому ароматическому радикал, и к двум таким радикалам, ковалентно связанным друг с другом; примерами, иллюстрирующими такие радикалы, являются фенил, бифенил и нафтил. Применяемый в данном описании неопределнный (неточный) термин "карбоциклил" или "карбоциклический" включает арил, циклоалкил и циклоалкенил и относится к циклической системе (моноциклической, бициклической, трициклической или мостиковой), в которой все атомы в цикле являются углеродными атомами. Применяемый в данном описании неопределнный (неточный) термин "циклоалкил" относится к карбоциклической системе, которая содержит только простые связи между углеродными атомами в цикле. Применяемый в данном описании неопределнный (неточный) термин "циклоалкенил" относится к карбоциклической системе, которая содержит по меньшей мере одну двойную связь между двумя углеродными атомами в цикле. Применяемый в данном описании термин "гетероарил" относится к моно, би- или трициклическому ароматическому радикалу, содержащему один или более гетероатомов, выбранных из S, N и О; примерами, иллюстрирующими такие радикалы, являются тиенил, бензотиенил, фурил, бензофурил, пирролил,имидазолил, бензимидазолил, тиазолил, бензотиазолил, изотиазолил, бензизотиазолил, пиразолил, оксазолил, бензоксазолил, изоксазолил, бензизоксазолил, триазолил, бензтриазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, индолил и индазолил. Применяемый в данном описании неопределнный (неточный) термин "гетероциклил" или "гетероциклический" включает "гетероарил", по определению выше, и, в частности, означает моно-, би или трициклический или мостиковый неароматический радикал, содержащий один или более гетероатомов, выбранных из S, N и О, и группы, состоящие из моноциклического неароматического радикала, содержащего один или более гетероатомов, который ковалентно связан с другим таким же радикалом или с моноциклическим карбоциклическим радикалом. Примерами, иллюстрирующими такие радикалы, являются пирролил, фуранил, тетрагидрофуранил, тиенил, пиперидинил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил,тиазолил, тиадиазолил, пиразолил, пиридинил, пирролидинил, пиримидинил, морфолинил, пиперазинил,индолил, морфолинил, бензофуранил, пиранил, тетрагидропиранил, хинуклидинил, изоксазолил, бензимидазолил, метилендиоксифенил, этилендиоксифенил, малеинимидо и сукцинимидогруппы. Такие соединения по изобретению содержат один или более хиральный центр вследствие наличия асимметрических углеродных атомов. Присутствие асимметрических углеродных атомов служит причиной появления стереоизомеров или диастереоизомеров с R- и S-стереохимией при каждом хиральном центре. Изобретение включает все такие стереомеры и диастереоизомеры (диастереомеры) и их смеси. Соли солеобразующих соединений по изобретению включают физиологически приемлемые соли присоединения кислоты или основные соли. Пригодные соли присоединения кислоты получают из кислот, образующих нетоксические соли. Примеры включают следующие соли: ацетат, аспартат,бензоат, безилат, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, борат, камзилат, цитрат, эдизилат,эзилат, формиат, фумарат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, гексафторфосфат, гибензат, гидрохлорид/хлорид, гидробромид/бромид, гидройодид/йодид, изетионат, лактат, малат, малеат, малонат,мезилат, метилсульфат, нафтилат, 2-напсилат, никотинат, нитрат, оротат, оксалат, пальмитат, памоат,фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, сахарат, стеарат, сукцинат, тартрат, тозилат и трифторацетат, соответствующие основные соли получают из оснований, образующих нетоксические соли. Примеры включают соли алюминия, аргинина, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, диоламина, глицина, лизина,магния, меглумина, оламина, калия, натрия, трометамина и цинка.-4 014080 Методы. Соединения по изобретению, в которых R4 представляет собой амидную группу -C(=O)NR6R7,можно получать по реакции соответствующего амина HNR6R7 с соединением формулы (II) с амидированием кислотной карбоксильной группы символы R1, R3, X, R6 и R7 имеют значение по определению, данному выше, в связи с формулой (I). Соединения (II) (т.е. соединения (I) по изобретению, в которых R4 означает кислотную карбоксильную группу) можно получать по реакции соединения формулы (III) с гидразином формулы (IV) В результате этой реакции может получиться смесь изомеров положения (IIA) и (IIB) Соединения (I), в которых R4 обозначает сложноэфирную или амидную группу, можно также получать из интермедиата (III) по реакции с соответствующим гидразином (IVA) где R4 обозначает сложноэфирную или амидную группу. И опять в результате реакции может получиться смесь сложноэфирных или амидных аналогов карбоновых кислот (IIA) и (IIB), из которой можно выделить нужный изомер сложного эфира или амида. Или же, карбоновую кислоту (II) можно просто этерифицировать или амидировать. Соединения (I), в которых R4 обозначает "обращенную амидную" группу -NR7C(=O)R6, можно получать перегруппировкой Курциуса (см. Ninomiya, K.; Shiori, Т.; Yamada, S. Tetrahedron (1974), 30(14),2151-7) карбоновой кислоты (II) в изоцианат (V) с последующим гидролизом изоцианатной группы до аминогруппы и ацилированием аминогруппы, например хлорангидридом кислоты Cl-C(=O)R6. В тех случаях, когда R7 не обозначает водород, заместитель R7 может быть введн после стадии восстановления изоцианата или после стадии ацилирования. В альтернативном способе получения "обращенных амидов" (R4=-NR7C(=O)R6) по изобретению соединение структуры (V), в котором изоцианатный фрагмент заменяется на нитрогруппу, можно восстановить до соответствующего амина, который можно затем ацилировать с образованием нужного обращенного амида. Соединения (I), в которых R4 обозначает мочевино-, -NHC(=O)HNR6, или тиомочевиногруппу-NHC(=S)HNR6, можно получать также из изоцианата (V) или соответствующего изотиоцианата по реакции с соответствующим амином H2NR6. Соединения (I), в которых R4 обозначает карбаматную группу, -NR7C(=O)OR6, можно получать реакцией изоцианата с соответствующим спиртом R6OH. Дополнительные подробности синтетических методов получения соединений (I) по изобретению и интермедиатов, таких как (III), можно найти в приведнных ниже примерах.-5 014080 В соединениях по изобретению радикал R4X предпочтительно находится в положении 4 фенильного кольца;X может обозначать, например, связь или -CH2- или -CH2CH2-радикал. В данном изобретении предпочтительной является связь;R1 может обозначать, например, Н, F, Cl, метил, метокси или метилендиокси. В данном изобретении предпочтительно, когда R3 обозначает водород или фтор, в особенности в положении 6 циклической системы 3 оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ила;R4 обозначает кислотную карбоксильную группу (-СООН) или сложноэфирную группу (эфир данной кислоты), или C(=O)NR6R7, -NR7C(=O)OR6 или -NR7C(=O)OR6, все по определению выше. Когда R4 обозначает сложноэфирную группу, примеры включают сложноэфирные группы -COOR,где R обозначает метил, этил, н- или изопропил, н-, вт- или трет-бутил или бензил;R6, в тех случаях, когда он присутствует, обозначает Н или радикал формулы -(Alk)m-Q, где m, Alk и Q имеют значения по определению выше. Если m обозначает 1, Alk может обозначать, например, линейный или разветвлнный C1-C6-алкиленовый радикал, такой как -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- и-CH2CH(CH3)CH2-. Alk может также обозначать, например, двухвалентный радикал циклопропилен, циклопентилен или циклогексилен. Радикал Alk, необязательно, может быть замещнным, например иметь заместители ОН, оксо, CF3, метокси или этокси. Радикал Alk, необязательно, может содержать гетероатом, например, в виде простой эфирной, тиоэфирной или аминосвязи; группа Q может, например, обозначать водород, -NR9R10, где R9 и R10 могут быть одинаковыми или различными и выбираются из водорода, метила, этила, н- или изопропила или трет-бутила; сложноэфирную группу, например метиловый, этиловый или бензиловый эфир; или необязательно замещнную арильную, арилокси, циклоалкильную, циклоалкенильную или гетероциклическую группу, например фенильную, фенокси, циклопентильную, циклогексильную, фурильную, тиенильную, хинуклидильную,пиперидильную или пиперазинильную группу;R7, в тех случаях, когда он присутствует, обозначает Н или C1-C6-алкил, например метил, этил, нили изопропил, н-, вт- или трет-бутил; или R6 и R7, вместе с атомом или с атомами, с которыми они связаны, образуют моноциклический гетероцикл, содержащий 5, 6 или 7 атомов в цикле. Особенно предпочтительны варианты, в которых R4 обозначает C(=O)NR6R7 или -NHC(=O)NR7R6,где R7 обозначает водород, a R6 обозначает радикал формулы -(Alk)m-Q, где m обозначает 1, а двухвалентный радикал Alk содержит 3 или 4 углеродных атома и является незамещнным и Q обозначает-NR9R10, где R9 и R10, независимо, обозначают Н, C1-C4-алкил, C3-C4-алкенил, C3-C4-алкинил,C3-C6-циклоалкил, сложноэфирную группу, необязательно замещнную карбоциклическую или гетероциклическую группу; или R9 и R10, вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют цикл, который, необязательно, является замещнным. Специфическая предпочтительная подгруппа соединений по изобретению имеет формулу (IC) где X и R4 имеют значение по определению выше. В этой подгруппе радикал R4X- может находиться в положении 4 фенильного ядра. Эта подгруппа включает, в частности, соединения, в которых X обозначает связь, a R4 обозначает -C(=O)NR6R7, где R6 иR7 имеют значения по определению выше. Например, в таких соединениях R6 может обозначать хинуклидил, a R7 может обозначать водород. Конкретные соединения по изобретению включают соединения, приведнные в примерах в данном описании. Предпочтительным соединением по изобретению является 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидропиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)-N-(2,2-дифторэтил)бензамид формулы (А)-6 014080 или его применимые в фармации или в ветеринарии соль, гидрат или сольват. Другим предпочтительным соединением по изобретению является или его применимые в фармации или в ветеринарии соль, гидрат или сольват. Как указывалось выше, изобретение включает фармацевтическую или ветеринарную композицию,содержащую соединение формулы (I) или его применимую в фармации или в ветеринарии соль вместе с применимым в фармации или в ветеринарии эксципиентом или носителем. Ясно, что в таких композициях конкретный уровень дозы для каждого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол,питание, время введения, способ введения, скорость экскреции, комбинацию лекарственных препаратов,а также причину и тяжесть конкретного заболевания, подлежащего лечению. Оптимальные уровни доз и частота прима доз определяется клиническими испытаниями. Соединения, которые относятся к данному изобретению, можно получать для введения любым способом, согласующимся с их фармакокинетическими свойствами. Композиции для перорального применения могут быть в виде таблеток, капсул, порошков, гранул, лепшек, жидких или гелеобразных препаратов, таких как растворы или суспензии для перорального или местного применения или стерильные растворы или суспензии для парентерального применения. Таблетки и капсулы для перорального применения могут быть в виде выпускаемой стандартной дозы и могут содержать обычные эксципиенты, такие как связующие, например сироп, аравийская камедь, желатин, сорбит, смола трагаканта или поливинилпирролидон; наполнители, например лактоза, сахар, маисовый крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; смазку для таблетирования, например стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или оксид кремния; вещества, способствующие измельчению, например картофельный крахмал, или приемлемые поверхностно-активные вещества, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты оболочкой в соответствии с методами, хорошо известными в обычной фармацевтической практике. Оральные жидкие препараты могут быть, например, в форме водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров или могут выпускаться в сухом виде (в виде тврдого продукта), который перед употреблением восстанавливается в присутствии воды или другого подходящего носителя. Такие жидкие препараты могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, например сорбит, сироп, метилцеллюлоза, сироп глюкозы, желатин, гидрированные пищевые жиры; эмульгаторы,например лецитин, сорбитан моноолеат или аравийская камедь; неводные носители (которые могут включать пищевые масла), например миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, маслообразные эфиры, такие как глицерин, пропиленгликоль или этиловый спирт; консерванты, например метил- или пропиловый эфир п-гидроксибензойной кислоты или сорбиновая кислота, и, при желании,обычные добавки, придающие вкус и запах, или красители. Для местного применения на коже лекарственный препарат может быть приготовлен в виде крема,лосьона или мази. Составы крема или мази, которые можно использовать для лекарственного препарата,являются обычными составами, хорошо известными в технике, например, описанными в стандартных учебниках по фармации, таких как British Pharmacopoeia. Для местного применения в офтальмологии лекарственный препарат можно приготовить в виде раствора или суспензии в подходящем стерильном водном или неводном носителе. Могут также быть включены добавки, например буферы, такие как метабисульфит натрия или динатрия эдеат (edeate); консерванты, включая бактерицидные и фунгицидные агенты, такие как фенилртуть ацетат или нитрат,бензалкония хлорид или хлоргексидин, и загустители, такие как гипромеллоза. Активный ингредиент можно вводить также парентерально в стерильной среде. В зависимости от применяемого носителя и используемой концентрации лекарственный препарат может быть в носителе в суспендированном или растворнном виде. Предпочтительно адъюванты, такие как местные анестетики,консерванты и буферизующие агенты, могут быть растворены в носителе. Варианты изобретения описаны в нижеприведнных примерах, не являющихся ограничивающими.-7 014080 При описании эксперимента используются следующие сокращения: ДМФА - диметилформамид; ДМАА - диметилацетамид; ДМСО - диметилсульфоксид;HBTU - гексафторфосфат О-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилурония; ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография; ЖХ-МС (LCMS) - жидкостная хроматография-масс-спектрометрия; ЯМР - спектроскопия ядерного магнитного резонанса. Пример 1. Стадия 1. Получение (фенилгидразон)малоновой кислоты Моногидрат мезоксалата натрия (5,00 г, 27,8 ммоль) растворяют в 1 М соляной кислоте (50 мл), получают бесцветный мутный раствор. К этой смеси при перемешивании при комнатной температуре по каплям прибавляют фенилгидразин (3,00 г, 2,72 мл, 27,8 ммоль). Образуется жлтый осадок, через 90 мин его отфильтровывают и промывают водой (50 мл). Осадок растирают со смесью этилацетат/гексан [1:1], отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде жлтого порошка (4,74 г, 22,7 ммоль, 82%).LCMS: m/z 207 [М-Н]+. Или же продукт можно экстрагировать из водной фазы этилацетатом (2250 мл), органическую фазу сушить сульфатом магния, отфильтровывать и растворитель отгонять в вакууме. Стадия 2. Получение (фенилгидразон)малоноилдихлорида (дихлорангидрида (фенилгидразон)малоновой кислоты)(Фенилгидразон)малоновую кислоту (1,00 г, 4,80 ммоль) смешивают в атмосфере инертного газа с сухим хлороформом (15 мл), получают жлтую суспензию. Смесь перемешивают при комнатной температуре и порциями прибавляют пятихлористый фосфор (2,19 г, 10,5 ммоль). Реакционную смесь кипятят в течение 1,5 ч, получают зелный раствор. Смесь охлаждают до комнатной температуры и прибавляют гексан (15 мл). Образуется зелный осадок, его отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде порошка зелного цвета (645 мг, 2,63 ммоль, 53%). Стадия 3. Получение метилового эфира 4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты Дихлорангидрид (фенилгидразон)малоновой кислоты (2,45 г, 0,01 ммоль) в инертной атмосфере смешивают с 1,2-дихлорэтаном (15 мл), получают жлтую суспензию. Прибавляют по каплям четырххлористый титан (1,89 г, 1,09 мл), образуется коричневый раствор. Смесь кипятят в течение ночи и прибавляют метанол (15 мл). Продолжают перемешивание ещ в течение 30 мин и летучие отгоняют в вакууме. Прибавляют воду (100 мл) и полученную суспензию экстрагируют н-бутанолом (250 мл). Объединнные органические вытяжки промывают водой (220 мл) и упаривают в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества зелного цвета (1,04 г, 5,10 ммоль, 51%).LCMS: m/z 205 [М+Н]+. Стадия 4. Получение метилового эфира 4-хлорциннолин-3-карбоновой кислоты К метиловому эфиру 4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты (0,50 г, 2,45 ммоль) по каплям в атмосфере инертного газа прибавляют хлористый тионил (8,15 г, 5 мл). Смесь кипятят 1,5 ч, охлаждают до комнатной температуры и избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют толуол (5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества бурого (коричневого) цвета (248 мг, 1,11 ммоль, 45%). 4-Гидроксибензойную кислоту (68,4 мг, 0,45 ммоль) при комнатной температуре смешивают с этанолом (5 мл), получают суспензию кремового цвета. Прибавляют метиловый эфир 4-хлорциннолин-3 карбоновой кислоты (100 мг, 0,45 ммоль) и смесь нагревают при 45-50 С в течение 1 ч. Охлаждают до комнатной температуры и растворитель отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют этилацетата (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение получают в виде коричневого порошка (120 мг, 0,39 ммоль, 86%).H ЯМР [ДМСО-d6]:7,69-7,77 (м, 1 Нарил); 7,81-7,90 (м, 2 Нарил); 8,05 (д, J=8,85 Гц, 2 Нарил); 8,20 (д,J=7,92 Гц, 1 Нарил); 8,33 (д, J=8,85 Гц, 2 Нарил); 14,64 (с, NH). Или же реакцию можно проводить при комнатной температуре. В этом случае для проведения реакции может потребоваться более продолжительное время, 2-3 ч. Пример 2. Получение N-[(диметиламино)пропил]-4-(3-оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензамидаHBTU (30,3 мг, 0,08 ммоль). Перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Продукт очищают препаративной ВЭЖХ. Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества красного цвета(18,2 мг, 18,6 мкл, 0,17 ммоль), а затем HBTU (64,5 мг, 0,17 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Продукт очищают препаративной ВЭЖХ. Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества красного цвета (6,6 мг, 0,02 ммоль, 10%). К 4-(3-оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойной кислоте (2,36 г, 7,70 ммоль) прибавляют хлористый тионил (90 мл). Смесь кипятят в течение 2 ч под азотом. Получают тмнокрасный раствор, охлаждают до комнатной температуры и избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют толуол (30 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре под азотом до прекращения выпадения осадка. Осадок отфильтровывают и промывают толуолом (230 мл). Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества красного цвета (2,20 г, 6,77 ммоль, 88%).LCMS: m/z 321 [М+Н]+ (метиловый эфир, полученный в результате того, что образец готовили в метаноле). Стадия 2. Получение N-[(циклогексиламино)пропил]-4-(3-оксо-1,3-дигидро-2H-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензамидаN-циклогексил-1,3-пропандиамин (52 мг, 0,60 ммоль). Смесь перемешивают в течение 30 мин. Прибавляют воду, получают тмно-красную суспензию. Экстрагируют н-бутанолом (220 мл). Объединнные органические вытяжки промывают водой и упаривают в вакууме до тех пор, пока не начнт выпадать осадок. Прибавляют гексан (20 мл) и этилацетат (10 мл), осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Продукт выделяют в виде тмно-красного порошка (82 мг, 0,18 ммоль, 62%). Моногидрат мезоксалата натрия (2,21 г, 12,3 ммоль) растворяют в 1 М соляной кислоте (50 мл), получают бесцветный мутный раствор. К этой смеси при перемешивании при комнатной температуре порциями прибавляют 2-фторфенилгидразина гидрохлорид (2,00 г, 12,3 ммоль). Образуется жлтый осадок,к смеси прибавляют воду (50 мл) и продолжают перемешивание в течение ночи. Прибавляют этилацетат(150 мл), интенсивно перемешивают до растворения осадка. Фазы разделяют и водный слой промывают этилацетатом (50 мл). Объединнные органические вытяжки сушат сульфатом магния, фильтруют и растворитель отгоняют в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде жлтого порошка (2,55 г,11,7 ммоль, 92%).(2-Фторфенилгидразон)малоновую кислоту (1,33 г, 5,88 ммоль) смешивают в атмосфере инертного газа с сухим хлороформом (20 мл), получают жлтую суспензию. Смесь перемешивают при комнатной температуре и порциями прибавляют пятихлористый фосфор (2,69 г, 12,9 ммоль). Реакционную смесь кипятят в течение 2 ч, получают тмно-жлтый раствор. Смесь охлаждают до комнатной температуры и упаривают в вакууме, пока не начнт выпадать осадок. Осадок отфильтровывают, промывают гексаном(30 мл) и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде порошка жлтого цвета (760 мг,2,89 ммоль, 49%). Стадия 3. Получение метилового эфира 8-фтор-4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты Дихлорангидрид (2-фторфенилгидразон)малоновой кислоты (19,4 г, 74 ммоль) в инертной атмосфере смешивают с 1,2-дихлорэтаном (100 мл), получают жлтую суспензию. Прибавляют по каплям четырххлористый титан (13,9 г, 8,08 мл, 74 ммоль), образуется коричневый раствор. Смесь кипятят в течение ночи. Прибавляют дополнительное количество четырххлористого титана (13,9 г, 8,08 мл, 74 ммоль) и продолжают нагревать ещ в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0-5 С и по каплям прибавляют метанол (50 мл). Продолжают перемешивание при комнатной температуре ещ в течение 1 ч и летучие отгоняют в вакууме. Прибавляют воду (300 мл) и полученную суспензию экстрагируют этилацетатом (3100 мл). Объединнные органические вытяжки сушат сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Получают тврдое вещество жлтого цвета (12 г, сырой продукт). Сырой эфир 8-фтор-4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты из предыдущей стадии (1,00 г,4,95 ммоль) растворяют в хлористом тиониле (50 мл). Раствор кипятят 2-3 ч до прекращения выделения газа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и избыточный хлористый тионил отгоняют в вакууме. Сырой интермедиат сушат азеотропной перегонкой с толуолом (325 мл). Получают тмно-коричневое тврдое вещество, к которому прибавляют этанол (25 мл). Прибавляют 4-гидразинбензойную кислоту (640 мг, 4,21 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают, суспендируют в 1 М HCl (100 мл), фильтруют, промывают гексаном (50 мл) и сушат в вакууме. Продукт выделяют в виде тврдого вещества коричневого цвета (890 мг сырого продукта). Сырую 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойную кислоту из предыдущей стадии (1,45 г) растворяют в хлористом тиониле (50 мл). Раствор 2 нагревают при 70 С 2-3 ч до прекращения выделения газа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и избыточный хлористый тионил отгоняют в вакууме. Остаток сушат азеотропной перегонкой с толуолом (220 мл),получают тврдое вещество Осадок отфильтровывают, промывают толуолом и сушат в вакууме. Продукт выделяют в виде жлтого порошка (670 мг, 1,95 ммоль).LCMS: m/z 339 [М+Н]+ (метиловый эфир, полученный в результате приготовления образца в метаноле). Стадия 2. Получение 4-(6-фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)-N(пирролидин-1-илбутил)бензамида 4-(6-Фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензоилхлорид (100 мг, 0,29 ммоль) растворяют в сухом ДМАА (2 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (75 мг, 101 мкл, 0,58 ммоль), а затем 1-(4-аминобутил)пирролидин (41 мг). Перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Прибавляют воду (5 мл) и н-бутанол (5 мл). Фазы разделяют. Органическую фазу промывают водой (25 мл). Летучие отгоняют в вакууме. Продукт выделяют в виде порошка коричневого цвета (50 мг, 0,11 ммоль,37%). 4-(6-Фтор-3-оксо-1,3-дигидро-2 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензоилхлорид (100 мг, 0,29 ммоль) растворяют в сухом ДМАА (2 мл). Прибавляют диизопропилэтиламин (75 мг, 101 мкл, 0,58 ммоль), а затем 4-амино-1,2,2,6,6-пентаметилпиперидин (49 мг, 0,29 ммоль). Перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Прибавляют воду (5 мл) и н-бутанол (5 мл). Фазы разделяют. Органическую фазу промывают водой (25 мл) и раствор упаривают в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества тмно-красного цвета (50 мг, 0,105 ммоль, 36%). К метиловому эфиру 4-гидроксициннолин-3-карбоновой кислоты (10,0 г, 49 ммоль) в атмосфере инертного газа по каплям прибавляют хлористый тионил (326 г, 200 мл). Смесь кипятят 2,5 ч, охлаждают до комнатной температуры и избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют толуол (100 мл) и отгоняют в вакууме. Эту процедуру повторяют, добавляя и отгоняя ещ 100 мл толуола. Получают коричневый полужидкий остаток, его растворяют в метаноле (200 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Нагревают при 40-45 С в течение 1 ч и охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, растирают с этанолом (100 мл) и сушат в вакууме. Титульное соединение выделяют в виде тврдого вещества бурого (коричневого) цвета (8,42 г, 27,4 ммоль, 70%). 2-(4-Нитрофенил)-1,2-дигидро-3 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-3-он (11,4 г, 37,2 ммоль) суспендируют в смеси этанола (100 мл) и воды (100 мл). Добавляют порошок железа (11,1 г, 200 ммоль) и хлористый алюминий (5,34 г, 100 ммоль). Смесь нагревают при 80 С в течение ночи, охлаждают до комнатной температуры и подщелачивают до рН 9-10, добавляя карбонат калия. Осадок удаляют фильтрованием через слой целита (Celite). Фильтрат экстрагируют н-бутанолом (2200 мл). Объединнные органические вытяжки упаривают в вакууме, получают тврдый остаток красного цвета. Растирают с метанолом(100 мл), отфильтровывают и сушат в вакууме. Титульное соединение получают в виде тмно-красного порошка (5,58 г, 20,1 ммоль, 57%). 2-(4-Аминофенил)-1,2-дигидро-3 Н-пиразоло[4,3-с]циннолин-3-он (44 мг, 6 ммоль) суспендируют в толуоле (0,5 мл) в атмосфере азота при 0-5 С. Прибавляют ДМАА (0,5 мл), а затемN,N'-карбонилдиимидазол (26 мг, 0,16 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0-5 С, а затем смешивают с раствором 3-диметиламинопропиламина (18 мг, 0,18 ммоль) в толуоле (0,5 мл). Перемешивание продолжают в течение 1 ч и продукт очищают препаративной ВЭЖХ. Титульное соединение выделяют в виде порошка тмно-красного цвета (2,6 мг, 6 мкмоль, 4%).- 13014080 Пример 9. Получение этилового эфира 4-(3-оксо-1,3-дигидро-2H-пиразоло[4,3-с]циннолин-2-ил)бензойной кислоты Титульное соединение получают по методике, описанной в примере 1, стадия 5, но вместо 4-гидразинбензойной кислоты берут е этиловый эфир.MS: MH+=335,2. Результаты Анализ биомолекулярных взаимодействий BIAcore. Биотинилированная человеческая молекула CD80 (hCD80-ВТ) представляет собой рекомбинантную растворимую форму мебраносвязанной рецепторной молекулы (CD80), которая связывается с CD28 для инициации Т-клеточной активации. Взаимодействие между CD80 и CD28 интенсивно исследовалось(Collins et al., 2002). Биотинилированная человеческая молекула HLA-A2-tax представляет собой рекомбинантную растворимую форму мембраносвязанной рецепторной молекулы, которую используют в данном примере в качестве контрольного белка, при этом не предполагается, что она реагирует с соединениями. Система BIAcore S51 используется для скрининга соединений из вышеприведнных примеров 14. Сенсорный чип СМ 5 серии S помещают на BIAcore S51. Стрептавидин присоединяют по карбоксиметильной группе на поверхности обычной реакцией присоединения аминов. Поверхность чипа активируют с помощью 0,2 М EDC/0,05 M NHS с последующим связыванием стрептавидина (0,25 мг/мл в 10 мМ ацетата натрия рН 5,0) и насыщением незанятых сайтов с помощью 1 М этилендиамина. Сенсорный чип BIAcore S51 имеет два раздельных сенсорных участка для иммобилизации белков.hCD80-ВТ иммобилизуют на покрытой стрептавидином поверхности одного сенсорного участка до тех пор, пока не наблюдается ответ около 3000 RU. Белок для контроля неспецифического связывания соединения иммобилизуют на втором сенсорном участке. Контрольный белок, применяемый в этих экспериментах, представляет собой биотинилированную растворимую форму человеческого HLA белка. Ряды разведения соединений (1000-0,05 нМ) готовят в рабочем буфере (10 нМ, рН 7,4, 140 мМBIAcoreS51 пропускают при скорости потока 30 мкл/мин, используя рабочий буфер. Вводят (инъецируют) растворы соединений и стандарта ДМСО для корректировки данных с учтом влияния растворителя. Данные записываются автоматически и их анализируют с помощью программного обеспеченияBIAcoreS51 Evaluation. Взаимодействие между СВ 80 и эндогенным белковым лигандом (CD28) является высокоспецифическим, но сравнительно слабым, с KD 4750 нМ и скоростью выключения (off-rate) выше 0,2 с-1. В случае соединений из примеров 2-4, 6, 7 наблюдаются более высокая аффинность и более продолжительное время пребывания на CD80, чем на CD28, при этом значения KD составляют менее 100 нМ и скорости выключения (off-rate) 210-2, это указывает, что циннолины способны эффективно конкурировать с эндогенным лигандом. Взаимодействие циннолинов с контрольным белком не обнаруживается. СсылкиRPMI-1640, дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки, 1% пенициллина/стрептомицина, 1% глутамина (среда RPMI) в 96-луночном U-образном (круглодонном) микротитрационном планшете. Исследуемые соединения (раствор в 100% ДМСО) разводят в восемь раз до нужной конечной концентрации в среде RPMI и добавляют до требуемой конечной концентрации до общего объма 200 мкл в лунке. После инкубации в течение 20 мин при 37 С добавляют Т-клетки Jurkat в концентрации 2105 клеток/лунка. К культурам прибавляют моноклональное антитело к CD3 (UCHT1, RD Systems) с конечной концентрацией 1 мкг/мл и, где указано, добавляют также моноклональное антитело к CD28 (CD28.2,BD-Pharmingen) в концентрации 2,5 мкл/мл. Клетки культивируют при 37 С в течение 5 ч, после чего планшеты центрифугируют и супернатанты собирают для анализа ELISA IL-2 с использованием парного набора IL-2 Eli-pair (DIACLONE Research, Besancon, France) в соответствии с инструкциями производителя.- 14014080 В качестве примера соединение из примера 2 (AV1142005) показывает ингибирование 65% при 30 мкМ. Анализ методом гомогенной времяразрешнной флуоресценции. Вещества, полученные в описанных выше примерах, испытывают методом гомогенной времяразрешнной флуоресценции (HTRF) в бесклеточной среде с целью определения их активности в качестве ингибиторов взаимодействия CD80-CD28. По методике анализа европий и аллофикоцианин (АРС) ассоциируются с CD28 и CD80 опосредованно (через линкерные антитела) с образованием комплекса, который помещает европий и АРС в непосредственной близости, вызывая сигнал. Комплекс содержит следующие шесть белков: флуоресцентную метку 1, линкерное антитело 1, слитый белок CD28, слитый белок CD80, линкерное антитело 2 и флуоресцентную метку 2. В табл. 1 эти реагенты описаны более подробно. Таблица 1 При образовании комплекса европий и АРС сближаются (находятся в тесной близости) и возникает сигнал. Неспецифическое взаимодействие измеряют, заменяя мышиный Fab-фрагмент (С 215) на гибридный белок CD80-мышиный Fab-фрагмент (1,9 мкг/мл). Анализ проводят в чрных 384-луночных планшетах при конечном объме 30 мкл. Буфер для анализа: 50 мМ Tris-HCl, 150 мМ NaCl pH 7,8, содержащий 0,1%BSA (вес/объм), добавляемый непосредственно перед применением. Соединения добавляют к вышеуказанным реагентам в серийных концентрациях в интервале 100 мкМ-1,7 нМ. Реакционную смесь инкубируют в течение 4 ч при комнатной температуре. Производят двойные измерения с помощью счтчика Wallac Victor 1420 Multilabel Counter. Первое измерение: возбуждение 340 нм, эмиссия 665 нм, время запаздывания 50 мкс, время отображения 200 мкс. Второе измерение: возбуждение 340 нм, эмиссия 615 нм, время запаздывания 50 мкс, время отображения 200 мкс. При подсчте делаются поправки на флуоресцентный переход, гашение и флуоресцентный фон. ЕС 50 активность испытуемых соединений регистрируются следующим образом: ЕС 50:=10 мкМ, =1-10 мкМ, =10 мкМ. Соединения из примеров 1-9 имеют следующую активность в описанном выше анализе HTRF: пример 1 ; пример 2 ; пример 3 ; пример 4 ; пример 5 ; пример 6 ; пример 7 ; пример 8 ; пример 9 .- 15014080 Дополнительные примеры. Дополнительные примеры соединений по изобретению синтезируют методами, аналогичными методам, приведнным выше в примерах 1-8. Структура синтезированных соединений показана в табл. 2 вместе с их активностью в описанном выше анализе HTRF. Таблица 2