Применение ингибиторов il-18 для лечения и/или предупреждения заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции

009125 Область изобретения Заявка на данное изобретение заявляет преимущество предварительной заявки США с номером 60/291463, поданной 16 мая 2001 г., описание которой включено здесь в качестве ссылки. Данное изобретение относится к применению ингибиторов IL-18 для лечения и/или предупреждения сепсиса. Предпосылки изобретения В 1989 г. был обнаружен фактор, индуцируемый в сыворотке из мышей, инфицированных Mycobacterium bovis и стимулированных LPS. Этот фактор был способен индуцировать интерферон- (IFN-) в культурах клеток селезенки нормальных мышей в присутствии интерлейкина-2 (IL-2) (Nakamura et al.,1989). Этот фактор действовал не как прямой индуктор IFN-, а скорее как костимулятор вместе с IL-2,анти-СD3 или митогенами. В попытке дополнительной идентификации этой активности из сыворотки мышей после обработки эндотоксином был выявлен, по-видимому, гомогенный белок с М.м. 50-55 кДа,который был связан с вышеупомянутой активностью (Nakamura et al. 1993). Поскольку другие цитокины могут действовать в качестве костимуляторов в отношении продуцирования IFN-, неспособность нейтрализующих антител к IL-1, IL-4, IL-5, IL-6 или TNF блокировать эту сывороточную активность предполагала, что этот фактор был отличающимся фактором. Те же самые авторы документировали, что эндотоксин-индуцируемый костимулятор продуцирования IFN- присутствовал в экстрактах печеней из мышей, предварительно подвергнутных воздействию P. acnes (Okamura et al. 1995). В соответствии с этой экспериментальной моделью, популяция печеночных макрофагов (клеток Купфера) увеличивается,и, следовательно, низкая доза бактериального липополисахарида (LPS) становится летальной. Подобная обработка не является летальной для неподготовленных описанным выше способом мышей. Этот фактор, названный IFNиндуцирующим фактором (IGIF) и позднее названный интерлейкином-18 (IL-18), был очищен до гомогенности из этих обработанных P. acnes печеней мышей, и была получена частичная аминокислотная последовательность. Для клонирования кДНК мышиного IL-18 использовали вырожденные олигонуклеотиды, полученные из аминокислотных последовательностей очищенного IL-18 (Okamura et al. 1995). Человеческая кДНК-последовательность для IL-18 была сообщена в 1996 г. (Ushio et al. 1996). Интерлейкин IL-18 (Tsutsui et al. 1996, Nakamura et al. 1993, Okamura et al. 1995, Ushio et al. 1996) имеет общие структурные признаки с семейством IL-1 белков (Bazan et al. 1996), которые все имеют складчатую структуру в отличие от большинства других цитокинов, которые проявляют структуру четырехспиральных пучков. Подобно IL-1, IL-18 синтезируется в виде биологически неактивного предшественника (проIL-18) и лишен сигнального пептида (Ushio et al. 1996). Предшественники IL-1 и IL-18 расщепляются каспазой 1 (IL-1-конвертирующим ферментом, или ICE), которая расщепляет эти предшественники после остатка аспарагиновой кислоты в положении Р 1. Полученные зрелые цитокины высвобождаются из клетки (Ghayur et al. 1997 и Gu et al. 1997), несмотря на отсутствие сигнального пептида. Известно, что IL-18 действует как костимулятор в отношении продуцирования цитокинов (IFN-,IL-2 и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора) Т-хелперными клетками типа I (Th1) (Kohno et al. 1997), а также как костимулятор в отношении FAS-лиганд-опосредованной цитотоксичности, проявляемой клонами мышиных природных клеток-киллеров (Tsutsui et al. 1996). Интерлейкин-12 (IL-12) является иммунорегуляторным цитокином, продуцируемым моноцитами/макрофагами и другими антигенпрезентирующими клетками. Он является центральным в оркестровке как природных, так и приобретенных клеточно-опосредованных иммунных ответов (Trinchieri 1998). Он состоит из гетеродимера, составленного из ковалентно связанных продуктов двух отдельных генов: тяжелой цепи (р 40) и легкой цепи (р 35). Продуцирование IL-12 стимулируется в ответ на определенные бактерии, бактериальные продукты, внутриклеточные паразиты и вирусы. IL-12 были приписаны следующие функции: 1) он является сильнодействующим индуктором IFN- из Т-клеток и природных клеток-киллеров (NK-клеток), 2) он является комитогенным для таких клеток, 3) он является решающим для развития Th1-реакций в большинстве систем (таким образом, приводя вторично к увеличениям продуцирования IFN- и TNF, активации макрофагов и т.д.), 4) он усиливает цитотоксичность цитотоксических Т-лимфоцитов и NK-клеток, и 5) он является необходимым для гиперчувствительности замедленного типа. Было показано, что продуцирование IL-12 в выделенных мышиных лейкоцитах селезенки, обработанных штаммом Staphylococcus aureus Cowan 1, подавляется IFN- или IFN- (Karp et al. 2000). Недавно сообщалось, что IL-12 участвует в патогенезе органоспецифических аутоиммунных воспалительных заболеваний, таких как рассеянный (множественный) склероз (MS) (Karp et al. 2000) и воспалительное заболевание кишечника (IBD) (Blumberg and Strober 2001 и Fiocchi 1999), и, следовательно,считается потенциальной мишенью лекарственных средств для лечения этих состояний.IL-18 и IL-12 проявляют явный синергизм в индукции IFN- в Т-клетках (Okamura et al. 1998). Исследования механизма этого синергизма обнаружили, что IL-12 повышающим образом регулирует экспрессию обеих цепей рецептора IL-18 на продуцирующих IFN- клетках (Kim et al. 2001). Хотя IL-12 иIL-18 активируют как природный, так и приобретенный иммунитет, их избыточное продуцирование ак-1 009125 тивированными макрофагами может индуцировать нарушения множества органов, в том числе нарушение функции иммунной системы (Seki et al. 2000). Цитокинсвязывающие белки (растворимые рецепторы цитокинов) являются обычно внеклеточными лигандсвязывающими доменами их соответствующих рецепторов цитокинов клеточной поверхности. Они продуцируются либо альтернативным сплайсингом, либо протеолитическим расщеплением рецептора клеточной поверхности. Эти растворимые рецепторы были описаны в прошлом: например, растворимые рецепторы для IL-6 и IFN- (Novick et al. 1989), TNF (Engelmann et al. 1989 и Engelmann et al. 1990), IL-1 и IL-4 (Maliszewski et al. 1990) и IFN-/ (Novick et al. 1994, Novick et al. 1992). Один цитокинсвязывающий белок, названный остеопротегерином (OPG, известный также как ингибирующий остеокласты фактор - OCIF), член TNFR/Fas-семейства, является, по-видимому, первым примером растворимого рецептора, который существует только в виде секретируемого белка (Anderson et al. 1997,Siraonet et al. 1997, Yasuda et al. 1998). Интерлейкин-18-связывающий белок (IL-18BP) был аффинно очищен на IL-18-колонке из мочи(Novick et al. 1999). IL-18BP прекращает IL-18-индукцию IFN- и IL-18-активацию NF-kB in vitro. Кроме того, IL-18BP ингибирует индукцию IFN- в мышах, инъецированных LPS. Ген IL-18BP локализован в хромосоме 11 человека, и в геномной последовательности размером 8,3 т.п.н., содержащей ген IL-18BP,не был найден экзон, кодирующий трансмембранный домен. До настоящего времени у человека были обнаружены четыре изоформы IL-18BP, генерируемые альтернативным сплайсингом мРНК. Они были названы IL-18BP a, b, c и d, причем все они имеют один и тот же N-конец и отличаются по С-концу (Novick et al. 1999). Эти изоформы различаются по их способности связывать IL-18 (Kim. et al. 2000). Известно, что из этих четырех изоформ изоформы а и с IL-18BP человека (hIL-18 ВР) имеют нейтрализующую активность в отношении IL-18. Наиболее представленная изоформа IL-18BP, изоформа а сплайсингового варианта, проявляет высокую аффинность в отношении IL-18 с быстрой скоростью связывания и медленной скоростью диссоциации и константой диссоциации (Kd), составляющей приблизительно 0,4 нМ (Kim et al. 2000). IL-18BP конститутивно экспрессируется в селезенке и принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов. Остатки, участвующие во взаимодействии IL-18 с IL-18BP, были описаны с использованием компьютерного моделирования (Kim et al. 2000) и на основе взаимодействия между сходным белком IL-1 и IL-1R типа I (Vigers et al. 1997). Согласно этой модели связывания IL-18 с IL18BP, было сделано предположение, что остаток Glu в положении 42 и остаток Lys в положении 89 IL-18 связываются с Lys-130 и Glu-114 в IL-18BP соответственно (Kim et al. 2000).IL-18BP конститутивно присутствует во многих клетках (Puren et al. 1999) и циркулирует в кровотоке здоровых людей (Urushihara et al. 2000), представляя уникальный феномен в биологии цитокинов. Вследствие высокой аффинности IL-18BP в отношении IL-18 (Kd = 0,4 нМ), а также высокой концентрации IL-18 ВР, обнаруженной в кровотоке (20-кратного молярного избытка относительно IL-18), было сделано предположение, что большинство молекул, если не все молекулы, IL-18 в кровотоке являются связанными с IL-18BP. Таким образом, циркулирующий IL-18 ВР, который конкурирует с рецепторами клеточной поверхности за IL-18, может действовать в качестве природной противовоспалительной и иммуносупрессивной молекулы. Как упоминалось, IL-18 индуцирует IFN-, который, в свою очередь, как сообщалось недавно, индуцирует генерирование мРНК IL-18BPa in vitro (Muhl et al. 2000). Таким образом, IL-18BPa мог бы служить в качестве сигнала выключения, терминирующего воспалительную реакцию.IL-18BP является значимо гомологичным с семейством белков, кодируемым несколькими поксвирусами (Novick et al. 1999, Xiang and Moss 1999). Ингибирование IL-18 этим предположительным вирусным IL-18BP может аттенуировать воспалительную антивирусную Th1-реакцию. Термин синдром системной воспалительной реакции (SIRS) описывает обычный клинический синдром сепсиса, независимо от его причины. SIRS может быть результатом травмы, панкреатита, реакций на лекарственные средства, аутоиммунного заболевания и других нарушений; когда этот синдром возникает в ответ на инфекцию, говорят о присутствии сепсиса (Nathens and Marshall 1996). Септический шок является распространенной причиной смерти в медицинских и хирургических отделениях интенсивной терапии (Astiz and Rackow 1998). Термины сепсис, тяжелый сепсис и септический шок используются для идентификации развертывания клинической реакции на инфекцию. Пациенты с сепсисом проявляют признаки инфекции и клинических манифестаций воспаления. Пациенты с тяжелым сепсисом развивают гипоперфузию с дисфункцией органов. Септический шок проявляется гипоперфузией и стойкой гипотензией. Смертность находится в диапазоне от 16% у пациентов с сепсисом до 40-60% у пациентов с септическим шоком. Наиболее обычной причиной септического шока является бактериальная инфекция. Наиболее частыми местами инфекции являются легкие, брюшная полость и мочевые пути. Обычные противовоспалительные терапии, такие как применение кортикостероидов, не смогли показать улучшение в выживании от сепсиса и септического шока. Три моноклональных антитела, специфических в отношении эндотоксина, испытывали в клинических испытаниях, и они не смогли улучшить коэффициенты выживаемости. Терапия с использованием антагонистов к фактору некроза опухоли,интерлейкину 1, брадикинина, ибупрофена; и активирующего тромбоциты фактора не обнаруживала-2 009125 улучшения выживания от септического шока (Astiz and Rackow 1998). Сепсис вызывается inter alia грамположительными бактериями, например, Staphylococcus epidermidis. Считается, что липотейхоевые кислоты и пептидогликаны, которые являются основными компонентами клеточной стенки видов Staphylococcus, являются индукторами высвобождения цитокинов в этом состоянии (Grupta et al. 1996 и Cleveland et al. 1996). Однако другие грамположительные компоненты также рассматриваются в качестве стимуляторов синтеза цитокинов (Henderson et al. 1996). Считается, что продуцирование IL-1, TNF- и IFN- вносит основной вклад в патогенез септического шока (Dinarello 1996 и Okusawa et al. 1988). Кроме того, было показано, что хемокин IL-8 индуцируется нейтрофилами в ответ на S. epidermidis (Hachicha et al. 1998). Важными факторами в регуляции индукции IL-1,TNF- и IFN- S. epidermidis являются IL-18, IL-12, IL-1 и TNF-. IL-1 и TNF- могут рассматриваться как костимулы для продуцирования IFN- Т-лимфоцитами, подобно IL-18. Эти два цитокина имеют костимуляторную активность на продуцирование IFN- в контексте IL-12- или бактериальной стимуляции(Skeen et al. 1995 и Tripp et al. 1993). Недавно Nakamura et al. (2000) сообщили, что одновременное введение IL-18 и IL-12 мышам приводит к высокой токсичности, сходной с токсичностью, обнаруженной в индуцированном эндотоксином септическом шоке. Было показано, что уровни IL-18 повышаются в сыворотках пациентов с сепсисом (Endo et al. 2000), но это увеличение коррелировало с уровнями креатинина, что позволяет предполагать, что повышенные уровни IL-18 могут быть результатом почечной недостаточности. В другом исследовании(Grobmyer et al. 2000) уровни IL-18 у 9 субъектов с сепсисом во время первых 96 ч после госпитализации были высокими и не коррелировали с уровнями креатинина. Как видно из вышесказанного, IL-18 является плейотропным интерлейкином, имеющим как усиливающую, так и ослабляющую воспаление функции. С одной стороны, он усиливает продуцирование провоспалительных цитокинов, подобных TNF-, усиливая таким образом воспаление. С другой стороны,он индуцирует продуцирование оксида азота (NO), ингибитора каспазы-1, блокируя таким образом созревание IL-1 и, возможно, ослабляя воспаление. Эта двойственная роль IL-18 подвергает сомнению эффективность ингибиторов IL-18 в лечении воспалительных заболеваний. Кроме того, вследствие участия большого разнообразия различных цитокинов и хемокинов в регуляции воспаления, нельзя всегда ожидать получения благоприятного эффекта блокированием только одного из путей в столь сложной сети взаимодействий.Netea et al. (2000) сообщали, что введение поликлонального антитела против IL-18 защищало мышей против вредных действий LPS, происходящих как из Е. coli, так и из испытанных видов S. typhimurium, подтверждая концепцию, что IL-18 играет важную патогенную роль в летальном эндотоксикозе. Однако неопределенность в отношении эффективности потенциальной композиции для лечения на основе введения ингибиторов IL-18 проявляется в том, что мыши с нокаутом IL-18 не являются менее чувствительными к сепсису по сравнению с животными дикого типа (Sakao et al. 1999), и в том, что недавние сообщения предполагают, что провоспалительная активность IL-18 является существенной для защитной системы хозяина против тяжелых инфекций (Nakanishi et al. 2001 и Foss et al. 2001). Таким образом, существует необходимость в обеспечении средства для лечения и/или предупреждения сепсиса, несмотря на вышеупомянутые соображения, касающиеся применения ингибиторов IL-18. Сущность изобретения Данное изобретение относится к применению ингибитора IL-18 в приготовлении лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса и других заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), выбранных из тяжелого сепсиса и септического шока, а также связанного с сепсисом нарушения функции сердца. Более конкретно, данное изобретение относится к применению ингибитора IL-18, выбранного из ингибиторов каспазы-1 (ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL18 и блокируют IL-18-рецептор, ингибиторов продуцирования IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов, слитых белков, функциональных производных, активных фракций или производных циркулярной перестановки, имеющих, по меньшей мере, по существу, ту же самую активность, что и IL18-связывающий белок.IL-18-связывающий белок, используемый в соответствии с данным изобретением, является его изоформой, мутеином, слитым белком (например, Ig-слитым), функциональным производным (например,ПЭГ-конъюгированным), активной фракцией или производным циркулярной перестановки. Антитела, используемые в соответствии с данным изобретением, могут быть специфическими антителами против IL-18, выбранными из химерных, гуманизированных и человеческих антител. Кроме того, данное изобретение относится к применению ингибитора в приготовлении лекарственного средства, дополнительно содержащего ингибитор IL-12, предпочтительно нейтрализующее IL-12 антитело, интерферон, предпочтительно интерферонили , ингибитор фактора некроза опухоли, предпочтительно растворимый TNFRI, или TNFRII, и/или ингибитор IL-1, предпочтительно антагонист ре-3 009125 цептора IL-1, для одновременного, последовательного или раздельного введения. В одном аспекте данное изобретение обеспечивает применение экспрессирующего вектора, содержащего кодирующую последовательность ингибитора IL-18, выбранного из ингибиторов каспазы-1(ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL-18 и блокируют IL18-рецептор, ингибиторов продуцирования IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов,слитых белков или производных циркулярной перестановки, имеющих, по меньшей мере, по существу,ту же самую активность, что и IL-18-связывающий белок, в приготовлении лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса, например, посредством генотерапии. В другом аспекте данное изобретение обеспечивает применение вектора для индукции и/или усиления эндогенной продукции ингибитора IL-18 в клетке в приготовлении лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса. Кроме того, данное изобретение обеспечивает применение клетки, которая была генетически модифицирована для продуцирования ингибитора IL-18, в приготовлении лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса. В другом варианте данное изобретение относится к способу лечения и/или предупреждения сепсиса и других заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), в том числе связанной с сепсисом дисфункции сердца, предусматривающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества ингибитора IL-18, выбранного из ингибиторов каспазы-1 (ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL-18 и блокируютIL-18-рецептор, ингибиторов продуцирования IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов,слитых белков, функциональных производных, активных фракций или производных циркулярной перестановки, имеющих, по меньшей мере, по существу, ту же самую активность, что и IL-18-связывающий белок. Этот способ может предусматривать совместное введение терапевтически эффективного количества ингибитора цитокинов, выбранного из ингибитора IL-12, предпочтительно нейтрализующих антител, ингибиторов фактора некроза опухоли, предпочтительно растворимой части TNFRI или TNFRII,ингибиторов IL-1, предпочтительно антагонистов рецептора IL-1, и ингибиторов IL-8 и/или интерферона, предпочтительно интерферона- или -. Кроме того, данное изобретение обеспечивает способ лечения и/или предупреждения сепсиса и других заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества вектора, кодирующего последовательность ингибитора IL-18, выбранного из ингибиторов каспазы-1 (ICE),антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL-18 и блокируют IL-18 рецептор, ингибиторов продуцирования IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов, слитых белков или производных циркулярной перестановки. В следующем варианте данное изобретение относится к способу лечения и/или предупреждения сепсиса и других заболеваний, характерных для SIRS, предусматривающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества вектора для индукции и/или усиления эндогенного продуцирования ингибитора IL-18 в клетке. Кроме того, данное изобретение обеспечивает способ лечения и/или предупреждения сепсиса и других заболеваний, характерных для SIRS, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, клетки, которая была генетически модифицирована для продуцирования IL-18. Краткое описание фигур Фиг. 1 показывает распределение сывороточного IL-18BPa у здоровых индивидуумов. Сыворотки здоровых индивидуумов мужского и женского пола в возрасте 20-60 лет, анализированные на присутствие IL-18BPa при помощи специфического ELISA-теста (n=107). Фиг. 2 А показывает средние уровни IL-18 и IL-18BPa у пациентов с сепсисом и здоровых субъектов. IL-18 и IL-18BPa в сыворотке определяли у здоровых индивидуумов (см. фиг. 1) и в 198 пробах из 42 пациентов с сепсисом сразу же после госпитализации и во время госпитализации. Фиг. 2 В показывает распределение индивидуальных уровней IL-18 и IL-18BPa у здоровых субъектов и пациентов, описанных в фиг. 2 А. Средние уровни в сыворотке IL-18 и IL-18BPa у здоровых субъектов показаны пунктирной вертикальной и горизонтальной линией соответственно. Фиг. 3 показывает сравнение между общим и свободным IL-18 у отдельных пациентов с сепсисом после госпитализации. Уровень свободного IL-18 (черные кружки) в сыворотках рассчитывали на основе концентрации общего IL-18 (белые кружки) и IL-18BPa, с учетом стехиометрии 1:1 IL-18 к IL-18BP в комплексе и рассчитанной Kd, составляющей 400 пМ. Каждая вертикальная линия связывает общий и свободный IL-18 в отдельной пробе сыворотки. Фиг. 4 показывает действие IL-18BP на S. epidermidis-индуцированное продуцирование IFN- в цельной крови. Цельная кровь стимулировалась только S. epidermidis или S. epidermidis и рекомбинант-4 009125 ным IL-18BP в указанных концентрациях. После 48 ч инкубации культуру крови лизировали и измерялиIFN-. Результаты выражены в процентах индукции IFN- S. epidermidis. Р 0,01 против одного S. epidermidis. Данные представляют среднеестандартная ошибка среднего (SEM) шести экспериментов. SEM представляет разброс средней величины пробы. SEM дает представление о точности средней величины.SEM=SD/(квадратный корень величины пробы). Эти данные анализировали с использованием спаренного критерия Стьюдента. Фиг. 5 показывает ингибиторное действие, проявляемое двойной активностью IL-18BPa и моноклональных антител против IL-12, на продуцирование IFN- цельной кровью, обработанной S. epidermidis. Цельную кровь стимулировали S. epidermidis в присутствии или в отсутствие IL-18BPa (125 нг/мл), mAb к IL-12 (2,5 мкг/мл) и обоих. После 48 ч инкубации культуру крови лизировали и измеряли IFN-. Результаты выражены в процентах индукции IFN- S. epidermidis. P0,01 против одного S. epidermidis. Данные представляют среднеестандартная ошибка среднего (SEM) шести экспериментов. SEM представляет разброс средней величины пробы. SEM дает представление о точности средней величины.SEM=SD/(квадратный корень величины пробы). Эти данные анализировали с использованием спаренного критерия Стьюдента. Фиг. 6 показывает количественное определение IL-18BPa, отраженное в стандартной кривойELISA. Рекомбинантный IL-18BPa человека серийно разводили и подвергали ELISA, как описано в примере 3. Эти результаты показывают среднюю оптическую плотностьSE (стандартная ошибка) 10 экспериментов. Фиг. 7 показывает ингибиторное действие IL-18 на количество IL-18BPa согласно тесту ELISA. Показан процент ингибирования сигнала. Фиг. 8 показывает иммунологическую перекрестную реактивность изоформ IL-18BP человека. Анализ ELISA IL-18BP выполняли со всеми изоформами (a-d) IL-18BP. Исходные растворы (3,2 мкг/мл) изоформ IL-18BP серийно разводили и тестировали в IL-18BPa-ELISA. Фиг. 9 показывает содержание IL-18 в ткани миокарда после введения LPS. Мышей инъецировалиLPS E.coli (0,5 мг/кг, внутрибрюшинно). Сердца гомогенизировали в указанных на х-оси временных точках. ELISA проводили для определения содержания IL-18 в миокарде (n=4-5 животных на группу). Фиг. 10 показывает действие антитела к IL-18 на индуцированную LPS дисфункцию миокарда. Мышей инъецировали либо носителем (внутривенно инъецируемым физиологическим раствором, n=8),либо LPS E.coli (0,5 мг/кг, инъецируемых внутрибрюшинно, n=8) и определяли развиваемое давление в левом желудочке (LVDP) через 6 ч перфузии выделенного сердца. В отдельных экспериментах мышей предварительно обрабатывали либо сывороткой нормальных кроликов (NRS, n=5), либо антителом к IL18 (анти-IL-18, n=8) за 30 мин перед введением LPS. Подробное описание изобретения Данное изобретение относится к введению ингибиторов IL-18 для предупреждения или лечения сепсиса, и оно основано на открытиях, описанных в примерах. В соответствии с данным изобретением было обнаружено, что уровни эффективного (свободного) циркулирующего IL-18 являются значимо повышенными в сыворотке пациентов с сепсисом по сравнению со здоровыми индивидуумами и что ингибирование IL-18 вызывает уменьшение индукции IFN- грамположительной бактерией Staphylococcusepidermidis. Кроме того, превентивное лечение сепсиса может проводиться введением ингибитора IL-18 в комбинации с ингибиторами других цитокинов, потенциально способными увеличивать его действие. Сепсис, согласно данному изобретению, включает SIRS, тяжелый сепсис, септический шок, эндотоксиновый бактериально-токсический шок и т.д. и может быть вызван грамположительными или грамотрицательными бактериями. Термин ингибитор IL-18 в контексте данного изобретения относится к любой молекуле, модулирующей продуцирование и/или действие IL-18 таким образом, что продуцирование и/или действие IL-18 ослабляется, уменьшается или частично, по существу или полностью предотвращается или блокируется. Ингибитором продуцирования может быть любая молекула, негативно воздействующая на синтез,процессинг или созревание IL-18, например ингибитор ICE. Ингибиторами, рассматриваемыми в соответствии с данным изобретением, могут быть, например, супрессоры экспрессии гена интерлейкина IL18, антисмысловые мРНК, уменьшающие или предотвращающие транскрипцию мРНК IL-18, или рибозимы, приводящие к деградации мРНК, белки, нарушающие правильную укладку, или частично, или по существу предотвращающие секрецию IL-18, протеазы, деградирующие IL-18 и т.п. Ингибиторами действия IL-18 могут быть антагонисты IL-18, например IL-18BP. Антагонисты могут либо связываться с самой молекулой IL-18, либо изолировать молекулу IL-18 с достаточной аффинностью и специфичностью для частичной или, по существу, полной нейтрализации IL-18 или активного сайта (сайтов) IL-18, ответственных за связывание с его лигандами (например, с его рецепторами). Антагонист может также ингибировать путь передачи сигнала с участием IL-18, который активируется в клетках при связывании IL-18/рецептор. Ингибиторами действия IL-18 могут быть также растворимые рецепторы IL-18 или молекулы, ими-5 009125 тирующие эти рецепторы, или агенты, блокирующие рецепторы IL-18 или молекулы, имитирующие эти рецепторы, или агенты, блокирующие рецепторы IL-18, антитела к IL-18, такие как моноклональные антитела, или любой другой агент или молекула, предотвращающие связывание IL-18 с его мишенями,уменьшая или предотвращая таким образом запуск внутриклеточных или внеклеточных реакций, опосредуемых IL-18. Термин IL-18-связывающие белки применяется здесь как синоним IL-18BP. Он включает в себя IL-18-связывающие белки, определенные в WO 99/09063 или в Novick et al., 1999, в том числе сплайсинговые варианты и/или изоформы IL-18-связывающих белков, определенных в Kim et al., 2000. В частности, изоформы а и с IL-18BP человека применимы в соответствии с данным изобретением. Белки,применимые в соответствии с данном изобретением, могут быть гликозилированными или негликозилированными, они могут происходить из природных источников, таких как моча, или предпочтительно они могут быть получены рекомбинантно. Рекомбинантная экспрессия может проводиться в прокариотических системах экспрессии, подобных Е. coli, или в эукариотических системах экспрессии и предпочтительно в системах экспрессии млекопитающих. В применении здесь, термин мутеины относится к аналогам IL-18BP или аналогам вирусного IL18BP, в которых один или несколько аминокислотных остатков встречающегося в природе IL-18 ВР или вирусного IL-18BP заменены отличными аминокислотными остатками или делетированы, или один или несколько аминокислотных остатков добавлены к встречающейся в природе последовательности IL18BP или вирусного IL-18BP без значительного изменения активности полученных продуктов по сравнению с IL-18BP или вирусным IL-18BP дикого типа. Эти мутеины получают известными способами синтеза и/или способами сайт-направленного мутагенеза или любым другим известным способом, подходящим для этого. Любой такой мутеин предпочтительно имеет последовательность аминокислот, достаточно аналогичную последовательности IL-18BP или достаточно аналогичную последовательности вирусного IL18BP, так что он имеет, по существу, одинаковую активность с IL-18BP. Одной из активностей IL-18BP является его способность связывать IL-18. Пока этот мутеин имеет существенную связывающую активность относительно IL-18, он может быть использован для очистки IL-18, например, посредством аффинной хроматографии, и, следовательно, может рассматриваться, как имеющий, по существу, одинаковую активность относительно IL-18BP. Таким образом, можно определить, имеет ли любой конкретный мутеин, по существу, ту же самую активность, что и IL-18BP, при помощи рутинного экспериментирования, включающего в качестве объекта такой мутеин, например, методом простого конкурентного сэндвич-анализа для определения, связывается ли он или не связывается с подходящим образом меченымIL-18, такого как радиоиммуноанализ или анализ ELISA. Мутеины полипептидов IL-18BP или мутеины вирусного IL-18 ВР, которые могут быть использованы в соответствии с данным изобретением, или кодирующие их нуклеиновые кислоты, включают в себя ограниченный набор, по существу, соответствующих последовательностей в качестве заменяющих пептидов или полинуклеотидов, которые могут быть рутинным образом получены специалистом с квалификацией в данной области без чрезмерного экспериментирования на основании представленных здесь описаний и руководящих указаний. Предпочтительными заменами для мутеинов в соответствии с данным изобретением являются так называемые консервативные замены. Консервативные замены аминокислот полипептидов или белковIL-18BP или вирусного IL-18BP могут включать в себя синонимические аминокислоты в группе, которые имеют достаточно сходные физико-химические свойства, так что замена между членами этой группы будет сохранять биологическую функцию данной молекулы (Grantham, 1974). Ясно, что вставки и делеции аминокислот также могут быть произведены в описанных выше последовательностях без изменения их функции, в частности, если эти вставки или делеции включают в себя только небольшое число аминокислот, например менее тридцати и предпочтительно менее десяти, и не удаляют или не заменяют аминокислоты, которые являются критическими для функциональной конформации, например остатки цистеина. Белки и мутеины, продуцируемые такими делециями и/или вставками, входят в объем данного изобретения. Предпочтительными группами синонимических аминокислот являются группы, определенные в табл. I. Более предпочтительно группами синонимических аминокислот являются группы, определенные в табл. II; и наиболее предпочтительно группами синонимических аминокислот являются группы, определенные в табл. III.-6 009125 Таблица I Предпочтительные группы синонимических аминокислот-7 009125 Таблица II Более предпочтительные группы синонимических аминокислот-8 009125 Таблица III Наиболее предпочтительные группы синонимических аминокислот Примеры получения аминокислотных замен в белках, которые могут быть использованы для получения мутеинов полипептидов или белков IL-18BP или мутеинов вирусных IL-18BP для применения в данном изобретении, включают в себя любые известные стадии способа, такие как представленные в патентах США с номерами RE 33653, 4959314, 4588585 и 4737462, Mark et al.; 5116943, Koths et al.; 4965195, Namen et al.; 4879111, Chong et al. и 5017691, Lee et al., и белки с заменами аминокислот лизином, представленные в патенте США 4904584 (Shaw et al.). Термин слитые белки относится к полипептиду, содержащему IL-18BP, или вирусный IL-18BP,или его мутеин, или фрагмент, слитые с другим белком, который, например, имеет продленное время существования в жидкостях тела. Так, IL-18BP или вирусный IL-18BP могут быть слиты с другим белком, полипептидом или т.п., например, иммуноглобулином или его фрагментом. Термин функциональные производные в применении здесь охватывает производные IL-18BP или вирусного IL-18BP и их мутеины и слитые белки, которые могут быть получены из функциональных групп, встречающихся в виде боковых цепей на остатках, или N- или С-концевых групп способами, известными в данной области, и являются включенными в данное изобретение, пока они остаются фармацевтически приемлемыми, т.е. они не нарушают активность данного белка, которая является, по существу, одинаковой с активностью IL-18BP или вирусных IL-18BP, и не придают токсических свойств содержащим их композициям. Эти производные могут, например, включать в себя боковые цепи полиэтиленгликоля (ПЭГконъюгированные), которые могут маскировать антигенные сайты и продлевать существование IL-18BP или вирусного IL-18BP в жидкостях тела. Другие производные включают в себя алифатические сложные эфиры карбоксильных групп, амиды карбокисильных групп, образованные реакцией с аммиаком или с первичным или вторичным аминами, N-ацильные производные свободных аминогрупп аминокислотных остатков, образованные с ацильными группами (например, алканоильной или карбоциклической ароиль-9 009125 ной группами) или O-ацилпроизводные свободных гидроксильных групп (например, серинового или треониного остатков), образованных с ацильными группами. В качестве активных фракций IL-18BP или вирусного IL-18 ВР, мутеинов и слитых белков данное изобретение включает в себя любой фрагмент или предшественники полипептидной цепи только белковой молекулы или вместе с ассоциированными с ней молекулами или связанными с ней остатками, например, сахарными или фосфатными остатками, или агрегаты белковой молекулы или сахарных остатков друг с другом, при условии, что указанная фракция имеет, по существу, одинаковую активность с IL18BP. Функциональные производные IL-18BP могут быть конъюгированы с полимерами для улучшения свойств белка, таких как стабильность, полупериод существования в организме, биодоступность, переносимость организмом человека или иммуногенность. Для достижения этой цели IL-18BP может быть связан, например, с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Конъюгирование с ПЭГ может проводиться известными способами, например, описанными в WO 92/13095. Таким образом, в предпочтительном варианте данного изобретения IL-18BP является конъюгированным с ПЭГ. В следующем предпочтительном варианте осуществления данного изобретения ингибитор IL-18 является слитым белком, содержащим весь IL-18-связывающий белок или часть IL-18-связывающего белка, которые слиты со всем иммуноглобулином или с частью иммуноглобулина. Лицу с квалификацией в данной области будет понятно, что полученный слитый белок сохраняет биологическую активностьIL-18BP, в частности, связывание с IL-18. Это слияние может быть прямым или через короткий линкерный пептид, который может быть таким коротким, как 1-3 аминокислотных остатка в длину, или более длинным, например, имеющим 13 аминокислотных остатков в длину. Указанный линкер может быть,например, трипептидом последовательности E-F-M (Glu-Phe-Met), или состоящей из 13 аминокислот линкерной последовательностью, содержащей Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met,введенные между последовательностью IL-18BP и последовательностью иммуноглобулина. Полученный слитый белок имеет улучшенные свойства, например, продленное время существования в жидкостях тела (полупериод существования в организме), увеличенную удельную активность, увеличенный уровень экспрессии, или облегчается очистка этого слитого белка.IL-18BP может быть слит с константной областью молекулы Ig. Предпочтительно он слит с районами тяжелой цепи, например, с доменами СН 2 и СН 3 IgG1 человека. Генерирование специфических слитых белков, содержащих IL-18BP и часть иммуноглобулина, описаны, например, в примере 11 WO 99/09063. Другие изоформы молекул Ig также пригодны для генерирования слитых белков данного изобретения, например, изоформы IgG2 или IgG4, или других классов Ig, например, таких как IgM или IgA. Слитые белки могут быть мономерными или мультимерными, гетеро- или гомомультимерными. Ингибитор IL-18 может быть, например, антагонистом молекулы, которая связывает рецептор IL18, но способна запускать путь передачи сигнала, активируемый при связывании этого цитокина с указанным рецептором (например, IL-1-Ra, Dinarello 1996). Все группы антагонистов являются приемлемыми, либо в отдельности, либо вместе, в комбинации с ингибитором IL-18 в терапии сепсиса. Ингибитором IL-18 может быть специфическое антитело к IL-18. Антитела к IL-18 могут быть поликлональными или моноклональными, химерными, гуманизированными или даже полностью человеческими. Рекомбинантные антитела и их фрагменты характеризуются высокой аффинностью связывания сIL-18 in vivo и низкой токсичностью. Антитела, которые могут быть использованы в данном изобретении, отличаются их способностью лечить пациентов в течение периода, достаточного, чтобы иметь регресс хорошей - превосходной степени или ослабление патогенного состояния или любого симптома из группы симптомов, связанных с патогенным состоянием, и низкую токсичность. Было показано, что IL-18 увеличивается в ходе дисфункции сердца, вызываемой сепсисом. Одновременное введение LPS вместе с ингибитором IL-18, таким как нейтрализующее поликлональное антитело к IL-18, защищает от LPS-индуцируемой дисфункции миокарда. Нейтрализующие антитела легко индуцируются у животных, таких как кролики, козы или мыши,иммунизацией IL-18. Иммунизированные мыши особенно применимы для обеспечения источников Вклеток для приготовления гибридом, которые, в свою очередь, культивируют для получения больших количеств моноклональных антител к IL-18. Химерные антитела являются молекулами иммуноглобулина, характеризующимися двумя или несколькими сегментами или частями, происходящими из разных видов животных. Обычно вариабельная область химерного антитела происходит из антитела млекопитающего, не являющегося человеком, например, мышиного моноклонального антитела, а константная область иммуноглобулина происходит из молекулы иммуноглобулина человека. Предпочтительно, обе эти области и комбинация их имеет низкую иммуногенность, как можно определить рутинными способами (Elliot et al., 1994). Гуманизированные антитела являются молекулами иммуноглобулина, созданными способами генетической инженерии, в которых мышиные константные области заменены копиями иммуноглобулина человека при сохранении мышиных районов связывания антигена. Полученное химерное антитело мышь-человек предпочтительно имеет уменьшенную иммуно- 10009125 генность и улучшенную фармакокинетику у человека (Knight et al., 1993). Таким образом, в следующем предпочтительном варианте антитело против IL-8 является гуманизированным антителом к IL-18. Предпочтительные примеры гуманизированных антител к IL-18 описаны,например, в Европейской заявке на патент ЕР 0974600. Еще в одном предпочтительном варианте антитело к IL-18 является полностью человеческим. Технология получения антител человека описана подробно, например, в WO 00/76310, WO 99/53049, US 6162963 или AU 5336100. Полностью человеческие антитела являются предпочтительно рекомбинантными антителами, продуцируемыми в трансгенных животных, например, ксеномышах, содержащими все функциональные локусы Ig человека или части функциональных локусов Ig человека. Полипептидные ингибиторы могут быть получены в прокариотических или эукариотических рекомбинантных системах или могут кодироваться в векторах, сконструированных для нацеливания генов. Вместе с ингибиторами IL-18 в лечении сепсиса могут быть использованы ингибиторы других цитокинов. Ингибитор IL-18 может быть использован в комбинации с ингибитором IL-12. Термин ингибитор IL-12 в контексте данного изобретения относится к любой молекуле, модулирующей продуцирование и/или действие IL-12 таким образом, что продуцирование и/или действие IL-12 ослабляется, уменьшается или частично, по существу или полностью предотвращается или блокируется. Ингибитором продуцирования IL-12 может быть любая молекула, негативно воздействующая на его синтез, например, интерферон / (Karp et al. 2000), или молекула, негативно воздействующая на процессинг или созревание IL-12. Ингибиторами, рассматриваемыми в соответствии с данным изобретением, могут быть, например,супрессоры экспрессии гена интерлейкина IL-12, антисмысловые мРНК, уменьшающие или предотвращающие транскрипцию мРНК IL-12, или рибозимы, приводящие к деградации мРНК IL-12, белки, нарушающие правильную укладку, или частично или по существу предотвращающие секрецию IL-12, протеазы, деградирующие IL-12 и т.п. Антагонисты IL-12 проявляют свою активность несколькими путями. Антагонисты могут связываться с самой молекулой IL-12 или могут изолировать молекулу IL-12 с достаточной аффинностью и специфичностью для частичной или, по существу, полной нейтрализации эпитопа или эпитопов IL-12,ответственных за связывание рецептора IL-12 (далее называемые "изолирующими антагонистами"). Изолирующим антагонистом может быть, например, антитело, направленное против IL-12, укороченная форма рецептора IL-12, содержащая внеклеточные домены этого рецептора или его функциональные части и т.д. Антагонисты могут также ингибировать путь передачи сигнала с участием IL-12, который активируется в клетках при связывании IL-12/рецептор (далее называемые "антагонистами передачи сигналов"). Все группы антагонистов применимы, по отдельности или вместе, в комбинации с ингибитором IL-18, в терапии сепсиса. Антагонисты IL-12 легко идентифицируются и оцениваются рутинным скринингом кандидатов на их действие на активность нативного IL-12 на чувствительных клеточных линиях in vitro, например, мышиных спленоцитах, в которых форболовый эфир и IL-12 вызывают пролиферацию. Этот анализ содержит композицию IL-12 в варьирующихся разведениях антагонистакандидата, например, от 0,1- до 100-кратных относительно молярного количества IL-12, используемого в этом анализе, и контроли без IL-12, только с антагонистом или форболовым эфиром и IL-2 (Tucci et al.,1992). Изолирующие антагонисты являются предпочтительными антагонистами IL-12 для использования в соответствии с данном изобретением. Среди изолирующих антагонистов предпочтительными являются антитела, которые нейтрализуют активность IL-12. В соответствии с данным изобретением предпочтительным является одновременное, последовательное или раздельное применение ингибитора IL-18 с антагонистом IL-12. Антитело к IL-12 является предпочтительным антагонистом IL-12 для применения в комбинации с ингибитором IL-18, так же как производные, фрагменты, районы и биологически активные части этого антитела. Ингибитор IL-18 может быть использован одновременно, последовательно или раздельно с ингибитором IL-12. Кроме того, ингибитор IL-18 может быть использован в комбинации с ингибиторами других цитокинов, о которых известно, что они играют важную роль в септическом шоке, например, IL-1, TNF, IL-8 и т.д., Dinarello 1996 и Okusawa et al. 1988. Примером ингибитора IL-1 является антагонист рецептора IL1, a примером ингибитора TNF является растворимая часть рецепторов TNFR1 и TNFR2. Термин ингибитор цитокинов в контексте данного изобретения относится к любой молекуле, модулирующей продуцирование и/или действие указанного цитокина (например, ингибиторам ICE в случаеIL-1) таким образом, что его продуцирование и/или действие ослабляется, уменьшается или частично, по существу или полностью предотвращается или блокируется. Ингибитором продуцирования может быть любая молекула, негативно действующая на синтез,процессинг или созревание указанного цитокина. Ингибиторами, рассматриваемыми в соответствии с данным изобретением, могут быть, например, супрессоры экспрессии гена цитокина, антисмысловые мРНК, уменьшающие или предотвращающие транскрипцию мРНК цитокина, или рибозимы, приводящие к деградации мРНК, белки, нарушающие правильную укладку, или частично или по существу предотвращающие секрецию указанного цитокина, протеазы, деградирующие этот цитокин и т.п.- 11009125 Антагонисты цитокинов проявляют свою активность несколькими путями. Антагонисты могут связываться с самой молекулой цитокина или могут изолировать молекулу цитокина с достаточной аффинностью и специфичностью для частичной или, по существу, полной нейтрализации эпитопа или эпитопов цитокина, ответственных за связывание рецептора цитокина (далее называемые "изолирующими антагонистами"). Изолирующим антагонистом может быть, например, антитело, направленное против цитокина, укороченная форма рецептора цитокина (например, растворимый рецептор TNFRI и TNFRII в случае TNF), содержащая внеклеточные домены рецептора или его функциональные части и т.д. Альтернативно, антагонисты цитокинов могут ингибировать путь передачи сигнала с участием цитокина, который активируется рецептором клеточной поверхности после связывания цитокина (далее называемые"антагонистами передачи сигналов"). Антагонист может быть также молекулой, которая связывает рецептор, но не способна запускать путь передачи сигнала, активируемый после связывания этого цитокина с указанным рецептором (например, IL-1-Ra, Dinarello 1996). Все группы антагонистов применимы, по отдельности или вместе, в комбинации с ингибитором IL-18, в терапии сепсиса. Ингибитор IL-18 может быть использован одновременно, последовательно или раздельно с описанными выше ингибиторами цитокинов. Данное изобретение относится также к применению экспрессирующего вектора, содержащего кодирующую последовательность ингибитора IL-18, в приготовлении лекарственного средства для предупреждения и/или лечения сепсиса. Таким образом, генотерапевтический подход используется для лечения и/или предупреждения этого заболевания. Выгодным образом, экспрессия ингибитора IL-18 будет происходить затем in situ, эффективно блокируя IL-18 непосредственно в ткани (тканях) или клетках,пораженных этим заболеванием. Применение вектора для индукции и/или усиления эндогенного продуцирования ингибитора IL-18 в клетке, в норме, молчащей в отношении экспрессии ингибитора IL-18 или экспрессирующей количества этого ингибитора, которые являются недостаточными, также рассматривается в соответствии с данным изобретением. Этот вектор может содержать регуляторные последовательности, функциональные в клетках, в которых желательно экспрессировать этот ингибитор или IL-18. Такими регуляторными последовательностями могут быть, например, промоторы или энхансеры. Затем эта регуляторная последовательность может быть введена в правильный локус генома гомологичной рекомбинацией для связывания таким образом этой регуляторной последовательности с геном, экспрессия которого должна быть индуцирована или усилена. Этот способ обычно называют активацией эндогенного гена (EGA), и он описан, например, в WO 91/09955. Данное изобретение включает в себя также введение генетически модифицированных клеток, способных продуцировать ингибитор IL-18, для лечения или предупреждения сепсиса. Специалисту с квалификацией в данной области будет понятно, что возможно также выключение экспрессии IL-18 с использованием того же самого способа, т.е. введением элемента отрицательной регуляции, например, элемента, индуцирующего молчание гена, в локус гена IL-18, что приводит к понижению регуляции или прекращению экспрессии IL-18. Лицу с квалификацией в данной области будет понятно, что такое понижение регуляции или индуцирование молчания экспрессии гена оказывает такое же действие, что и применение ингибитора IL-18 для предупреждения и/или лечения заболевания. Выражение фармацевтически приемлемый означает любой носитель, который не влияет на эффективность биологической активности активного ингредиента и который не является токсичным для хозяина, в который его вводят. Например, для парентерального (например, внутривенного, подкожного,внутримышечного) введения активный белок (активные белки) могут быть приготовлены в унифицированной дозированной форме для инъекции в таких носителях, как физиологический раствор, раствор декстрозы, раствор сывороточного альбумина и раствор Рингера. Активные ингредиенты фармацевтической композиции данного изобретения могут вводиться индивидууму различными способами. Способы введения включают интрадермальный, трансдермальный(например, в случае композиций медленного высвобождения), внутримышечный, внутрибрюшинный,внутривенный, подкожный, пероральный, эпидуральный, локальный и интраназальный способы. Может быть использован любой другой терапевтически эффективный способ введения, например, абсорбция через эпителиальные или эндотелиальные ткани или с использованием гемотерапии, в которой пациенту вводят молекулу ДНК, кодирующую активный агент (например, посредством вектора), что вызывает экспрессию и секрецию этого активного агента in vivo. Кроме того, белок (белки) данного изобретения могут вводиться вместе с другими компонентами биологически активных агентов, такими как фармацевтически приемлемые поверхностно-активные вещества, эксципиенты, носители, разбавители и наполнитель. Для парентерального (например, внутривенного, подкожного, внутримышечного) введения активный белок (активные белки) могут быть приготовлены в виде раствора, суспензии, эмульсии или лиофилизированного порошка вместе с фармацевтически приемлемым парентеральным наполнителем (например, водой, физиологическим раствором, раствором декстрозы) и добавками, которые поддерживают изотоничность (например, маннит) или химическую стабильность (например, консерванты или буферы). Готовую форму стерилизуют обычно используемыми для этого способами.- 12009125 Биодоступность активного белка (активных белков) данного изобретения может быть также улучшена с использованием процедур конъюгации, которые увеличивают полупериод существования молекулы в теле человека, например, связыванием этой молекулы с полиэтиленгликолем, как описано в патентной заявке РСТ WO 92/13095. Терапевтически эффективные количества активного белка (активных белков) будут зависеть от многих переменных, в том числе от типа антагониста, аффинности антагониста в отношении IL-18, любой остаточной цитотоксической активности, проявляемой этими антагонистами, способа введения, клинического состояния пациента (в том числе от желательности поддержания нетоксичного уровня активности эндогенного IL-18). Терапевтически эффективным количеством является такое количество, при введении которого ингибитор IL-18 приводит к ингибированию биологической активности IL-18. Доза, вводимая в виде единственной дозы или множественных доз индивидууму, будет варьироваться в зависимости от множества факторов, в том числе от фармакокинетических свойств ингибитора IL-18, способа введения, состояния и характеристик (пола, возраста, веса тела, здоровья, роста) пациента, степени симптомов, сопутствующих лечебных мероприятий, частоты введения и желаемого эффекта. Коррекция и манипулирование в отношении установленных диапазонов доз находятся вполне в компетенции специалистов с квалификацией в данной области, как и способы определения in vitro и in vivo ингибирования IL-18 у индивидуума. Согласно данному изобретению ингибитор IL-18 может вводиться профилактически или терапевтически индивидууму, нуждающемуся в этом, перед применением других программ лечения или агентов,одновременно или последовательно с другими программами лечения или агентами (например, схемами лечения множественными лекарственными средствами) в терапевтически эффективном количестве, в частности, с ингибитором IL-12 и/или ингибитором IL-1, антагонистом интерферона и TNF. Активные агенты, которые вводят одновременно с другими терапевтическими агентами, могут вводиться в тех же самых или в других композициях. Далее, данное изобретение относится к способу приготовления фармацевтической композиции смешиванием эффективного количества ингибитора IL-18, и/или ингибитора IL-12, и/или ингибитора IL-1,антагониста интерферона и/или TNF с фармацевтически приемлемым носителем. После описания данного изобретения оно будет более понятным при ссылке на следующие примеры, которые приведены в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения данного изобретения. Примеры Пример 1. Уровни IL-18BPa и IL-18 сыворотки здоровых индивидуумов и пациентов с сепсисом Измерение специфических циркулирующих в кровотоке цитокинов и их природных ингибиторов у здоровых и больных индивидуумов обеспечивает информацию об их участии в прогрессировании и степени тяжести заболевания. Как упоминалось в разделе предпосылок изобретения, одним из ключевых медиаторов сепсиса является IFN-. Поскольку IL-18 является коиндуктором IFN-, проводили мониторинг уровня IL-18 и его природного ингибитора, сплайсингового варианта IL-18BPa, у пациентов с сепсисом и сравнивали с уровнями, обнаруживаемыми в здоровых субъектах, с использованием специфических анализов ELISA (пример 3). Уровни IL-18 и IL-18BPa у здоровых субъектов Средний уровень IL-18 у 107 здоровых доноров был 6417 пг/мл, как измерено с использованиемECL-анализа (электрохемилюминесцентного анализа) (Pomerantz et al. 2001). ECL-анализ испытывали на интерференцию (помехи), вызываемые родственными белками. Было обнаружено, что на него не влияло присутствие зрелого IL-1 или про-IL-1, тогда как про-IL-18 был перекрестнореактивным. Таким образом, 20% детектируемого зрелого IL-18 в пробах сыворотки человека в данном исследовании могут быть про-IL-18. IL-18BPa при концентрации 160 нг/мл не влиял на ECL-анализ IL-18. Уровни IL-18BPa определяли в сыворотке из 107 здоровых индивидуумов с использованием ELISA(пример 3). Уровни IL-18BPa были в диапазоне от 0,5 нг/мл до такой высокой величины, как 7 нг/мл, при средней величине, составляющей 2,150,15 нг/мл (фиг. 1). Поскольку как IL-18, так и IL-18BPa совместно присутствуют в сыворотке, некоторая часть IL-18 может присутствовать в комплексе с IL-18BPa. Уровень свободного IL-18 рассчитывали на основе среднего уровня общего IL-18 (2,15 нг/мл). Свободный IL-18 определяли в соответствии с законом действия масс. Расчет основывался на следующих параметрах: концентрации общего IL-18, определенные при помощи ECL-анализа; концентрация общего IL-18 ВРа, определенная при помощи ELISA; стехиометрия 1:1 в комплексе IL-18BPa и IL-18 и константа диссоциации (Kd), составляющая 0,4 нМ (Novick et al. 1999 и Kim et al. 2000). В равновесной системе L + RLR, где L представляет IL-18, a R представляет IL18BP, применимы следующие уравнения:Kd=0,4 нМ, было найдено, что у здоровых субъектов приблизительно 51,2 пг/мл IL-18 (около 80% от общего количества) находится в его свободной форме. Уровни IL-18 и IL-18BPa у пациентов с сепсисом Уровни IL-18 и IL-18BPa определяли в 192 пробах сывороток из 42 пациентов с сепсисом сразу же после госпитализации и во время госпитализации. Уровни как IL-18, так и IL-18BPa были значимо более повышенными у пациентов с сепсисом по сравнению со здоровыми субъектами (фиг. 2 А), и наблюдался широкий разброс величин (фиг. 2 В). Кроме того, эти уровни были даже более высокими у этих пациентов в день госпитализации, показывая 22-кратное увеличение в уровне IL-18 по сравнению со здоровыми индивидуумами (1,5-0,4 нг/мл против 0,064-0,17 нг/мл) и 13-кратное увеличение в уровне IL-18BPa (28,64,5 против 2,15-0,15 нг/мл, фиг. 2 А). Не смогли наблюдать статистически значимой корреляции между уровнями креатинина и концентрациями либо IL-18, либо IL-18BPa в этих сыворотках (оцениваемой при помощи оценки APACHE II Knaus et al. (1993), что предполагает, что повышенные уровни IL-18 и IL18BPa у этих пациентов не были обусловлены почечной недостаточностью. Поскольку уровни IL-18 и IL-18BPa в сыворотке пациентов с сепсисом значительно варьировали(фиг. 2 В), рассчитывали уровни свободного IL-18 в сыворотке в индивидуальных пробах. Эти расчеты производили, как описано ранее, с использованием тех же самых трех уравнений и подставлением в них величин Kd, Lобщ, Rобщ, полученных экспериментально. Эти расчеты показывают, что IL-18BPa уменьшал уровень свободного IL-18 у большинства пациентов (фиг. 3). Примечательно, что этот эффект был особенно сильным, когда общий IL-18 был очень высоким. Например, у двух пациентов сывороточный IL18 достигал величины 0,5 нМ (10 нг/мл), 150-кратного увеличения по сравнению со здоровыми индивидуумами. Однако с учетом связывания с циркулирующим IL-18 ВРа (27 нг/мл и 41,2 нг/мл) уровень свободного IL-18 у этих двух пациентов падал на 78 и 84% соответственно (фиг. 3). Таким образом, большая часть сывороточного IL-18 блокируется циркулирующим в кровотоке IL-18BPa. И все-таки, согласно этим расчетам, оставшийся свободный IL-18 является все еще более высоким, чем IL-18, обнаруживаемый у здоровых индивидуумов. Таким образом, ожидается, что введение экзогенного IL-18BPa пациентам с сепсисом дополнительно понижает уровень свободного циркулирующего в кровотоке IL-18, вызывая ослабление исхода заболевания. Пример 2. Действие IL-18BPa на S. epidermidis-индуцированное продуцирование IFN- в клетках,присутствующих в пробах цельной крови из здоровых субъектов Как упоминалось в разделе предпосылок изобретения, известно, что грамположительная бактерияTNF-, которые являются ключевыми медиаторами для этой патологии. Поскольку IL-18 является коиндуктором IFN-, испытывали действие его ингибирования на индукцию IFN- Staphylococcus epidermidis.IL-18BPa, используемый в качестве ингибитора IL-18, был рекомбинантным меченым гистидином вариантом, продуцируемым в клетках СНО. 0,5 мл крови смешивали в круглодонных полипропиленовых пробирках 1275 мм на 5 мл (Falcon,Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NL) с 0,5 мл среды для выращивания RPMI (Cellgro Mediatech,Hendon, VA, дополненной 10 мМ L-глутамином, 100 Е/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 10% ФТС [Gibco BRL, Grand Island, NY]), содержащей S. epidermidis (из АТСС) с IL-18BP или без IL18BP. Пробы инкубировали при 37 С (5% СO2) в течение 48 ч с последующей обработкой Тритоном Х 100 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA) при конечной концентрации 5% для лизиса клеток, присутствующих в пробе цельной крови. Пробирки, содержащие эти пробы, перевертывали несколько раз, пока проба крови не приобретала прозрачный вид. Концентрацию IFN- в этих лизированных пробах крови,которая представляла как внутриклеточный, так и секретированный цитокин, измеряли электрохемилюминесценцией (ECL), как описано Pomerantz et al. (2001). Для этого исследования использовали цельную кровь здоровых некурящих добровольцев. Кровь брали венопункцией и хранили в гепаринизированных пробирках. S. epidermidis размножали в инфузионном бульоне для головного мозга-сердца в течение 24 ч, промывали в апирогенном солевом растворе и кипятили, как описано Aiura et al. (1993). Концентрацию убитых нагреванием бактерий доводили до 10 бактериальных клеток на один лейкоцит (WBC). Результаты, приведенные на фиг. 4, показывают, что IL-18BPa способен ингибировать индукциюIL-18BPa и специфических антител против IL-12 (mAb против IL-12 человека 11.5.14. Preprotech, RockyHill, NY) на индукцию IFN-, вызываемую S. epidermidis. Эту индукцию тестировали в присутствии 125 нг/мл IL-18BPa (меченого гистидином IL-18BPa, продуцируемого в клетках COS и очищенного на talonколонке, как описано Novick et al. 1999) и 2,5 мкг/мл антитела, специфического в отношении IL-12 человека. Результаты, показанные на фиг. 5, предполагают, что специфические антитела против IL-12 стиму- 14009125 лируют ингибиторное действие IL-18BPa на индукцию IFN- S. epidermidis. Пример 3. Разработка IL-18 ВР-специфического теста ELISAELISA содержал два антитела против IL-18BPa: мышиное моноклональное антитело mAb 582.10,субклон mAb 582, описанный в примере 4, в качестве захватывающего антитела и кроличье поликлональное антитело для детектирования (пример 4). Микротитрационные 96-луночные планшеты ELISA(Maxisorb; Nunc A/S, Roskilde, Denmark) покрывали анти-IL-18 ВРа mAb582.10 (субклоном mAb 582, 4 мкг/мл в ФСБ) в течение ночи при 4 С. Эти планшеты промывали ФСБ, содержащим 0,05% Твин 20(промывочным раствором), и блокировали (2 ч, 37 С) исходным раствором БСА (KPL, Geithersburg,MD), разведенным 1:10 в воде. Исходный раствор БСА разводили 1:15 в воде (разбавитель) для разведения всех испытываемых проб и детектирующего антитела. Пробы сыворотки разводили по меньшей мере 1:5 в этом разбавителе, и аликвоты по 100 мкл добавляли в лунки. Высокоочищенный rIL-18 ВРа (полученный в клетках СНО и очищенный иммуноаффинно с использованием белок G-очищенного моноклонального антитела mAb430, специфического в отношении IL-18BP, показанного в табл. 1 примера 4) разводили посредством 7 серийных 2-кратных разведений (4-0,062 нг/мл) и добавляли в каждый планшетELISA для получения стандартной кривой. Эти планшеты инкубировали в течение 2 ч при 37 С и промывали 3 раза промывочным раствором. Добавляли кроличью анти-IL-18 ВРа-сыворотку (1:5000 в разбавителе, 100 мкл на лунку) и планшеты дополнительно инкубировали в течение 2 ч при 37 С. Планшеты промывали 3 раза, добавляли конъюгат козьи анти-кроличьи антитела-пероксидаза хрена (HRP, JacksonImmunoResearch Labs, 1:10000 в ФСБ, 100 пл на лунку), и планшеты инкубировали в течение 1 ч при 37 С. Эти планшеты промывали 3 раза и проявляли добавлением субстрата для пероксидазы OPD (офенилендиаминдигидрохлоридные таблетки, Sigma) и выдерживали в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакцию останавливали 3 н. НСl (100 мкл), и оптическую плотность при 492 нм определялиELISA-ридером. OD представляли в виде графика как функцию концентрации IL-18Bpa, и наблюдали линейный характер кривой в диапазоне 0,12-2,00 нг/мл IL-18BPa (фиг. 6). Стандартная кривая IL-18BPa в отсутствие сыворотки или в присутствии до 20% сыворотки человека оставалась одной и той же. Поскольку IL-18BPa связывает IL-18 с очень высокой аффинностью, было необходимо определить, различает ли анализ ELISA между свободным и связанным IL-18BPa. Было обнаружено, что IL-18 мешает ELISA IL-18, однако это вмешательство в анализ является незначимым в пробах сыворотки. У 90% пациентов с сепсисом уровни IL-18 в сыворотке были ниже 4 нг/мл (см. ниже). Такие пробы сыворотки имели повышенный IL-18BPa, так что требовалось разведение их в 5-20 раз перед измерением IL-18BPa. При таких разведениях помехи IL-18 были менее 10% (фиг. 7). Другие родственные цитокины, в том числе про-IL-18, используемый при 10-кратном молярном избытке относительноIL-18 ВРа, а также 200-кратный избыток зрелого IL-1, не мешали в этом анализе. Наиболее представленной изоформой IL-18BP человека является IL-18BPa, тогда как изоформы b, с и d являются минорными сплайсинговыми вариантами (Novick et al. 1999 и Kim et al. 2000). IL-18BPa проявляет наивысшую аффинность в отношении IL-18 (Kim et al. 2000). Аффинность IL-18BPc в отношении IL-18 является в 10 раз более низкой, тогда как изоформы b и d не связывают или не нейтрализуют IL-18. Таким образом, было важным определить перекрестную реактивность IL-18 ВРа в ELISA с другими изоформами IL-18BP. Как показано на фиг. 8, IL-18BPC человека генерировал в 10 раз более низкий сигнал в расчете на вес по сравнению с IL-18BPa человека, тогда как изоформы IL-18BP человека b иd давали незначимый сигнал в этом анализе ELISA. Пример 4. Получение специфических анти-IL-18 ВР-антител Кролика инъецировали rIL-18BPa-His6 для генерирования поликлональных антител. Для получения моноклональных антител самок мышей Balb/C инъецировали 5 раз 10 мкг рекомбинантного меченого гистидином IL-18BPa (rIL-18BPa-His6). Мыши, проявляющей наивысший титр, определяемый обращенным радиоиммуноанализом (IRIA, пример 5) или твердофазным RIA (sRIA, пример 5),вводили конечную бустер-инъекцию внутрибрюшинно за 4 или за 3 дня перед слиянием. Лимфоциты получали из селезенки, и выполняли слияние с миеломными клетками NSO/1. Гибридомы, которые, как было обнаружено, продуцируют антитела к IL-18BPa, субклонировали способом лимитирующего разведения. Полученные клоны анализировали при помощи IRIA (пример 5). Репрезентативные гибридомы показаны в табл. 1. Планшеты, покрытые козьими антимышиными антителами, и гибридомы, детектируемыеI-IL Планшеты, покрытые IL-18BP мочи, и гибридомы, детектируемые козьими антимышиными 125Iантителами. Гибридомы, секретирующие антитела, направленные против гистидиновой метки, выбрасывали. Антитела дополнительно характеризовали при помощи sRIA по их способности узнавать природно встречающийся IL-18BP (очищенный из мочи). Характеристики связывания нескольких положительных гибридом показаны в табл. 1. Гибридомы 148, 430, 460 и 582 были положительными с обоими IL-18BP, рекомбинантым и выделенным из мочиIL-18BP. Получали антитела, пригодные для Вестерн-блоттинга, иммунопреципитации, иммуноаффинной очистки и для разработки специфических ELISA. Положительные клоны, продуцирующие специфические антитела против IL-18BP, инъецировали в мышей Balb/C, предварительно праймированных пристаном (2,6,10,14-тетраметилпентадеканом), для получения асцитов. Изотипы этих антител определяли с использованием ELISA с антителом против мышиного IgG (Amersham-Pharmacia Biotech). Для сборкиIL-18 ВР-специфического ELISA (пример 3) использовали mAb 582, которое было высокореактивным с рекомбинантным и природным IL-18BP (табл. 1). Антитела испытывали при помощи sRIA в присутствии IL-18 (пример 5) на их способность узнавать комплекс IL-18BPa с IL-18. Большинство антител не были способны узнавать IL-18BP, когда он был в комплексе с IL-18. Таким образом, эти антитела, по-видимому, направлены против лигандсвязывающего домена IL-18 ВРа. Пример 5. Радиоиммуноанализы для детектирования продуцирующих антитело против IL-18BP клеточных клонов Обращенный радиоиммуноанализ (IRIA) Микротитрационные планшеты из PVC (Dynatech Laboratories, Alexandria, VA) покрывали в течение ночи при 4 С аффинно очищенными козьими антимышиными F(ab')2-антителами (10 мкг/мл, 100 мкл на лунку; Jackson ImmunoResearch Labs). Затем планшеты промывали дважды ФСБ, содержащим 0,05% Твин 20 (промывочным раствором), и блокировали БСА (0,5% в промывочном растворе) в течение 2 ч при 37 С. Добавляли культуральные супернатанты гибридом (100 мкл на лунку), и планшеты инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза, в каждую лунку добавляли 125I-rIL-18BPa-His6 (105 имп/мин в 100 мкл), и планшеты инкубировали в течение 5 ч при 22 С. Затем планшеты промывали три раза, и отдельные лунки считали в гамма-счетчике. Гибридомы,генерирующие супернатанты, которые проявляли связанную радиоактивность при уровнях, в 5 раз более высоких, чем отрицательный контроль, рассматривались как положительные. Твердофазный RIA (sRIA)rIL-18BPa (5 мкг/мл) использовали в качестве захватываемого антигена и козьи антимышиные 125Iантитела (100 мкл, 105 имп/мин) использовали для детектирования. Блокирование и промывки выполняли, как описано выше. Положительные клоны дополнительно подвергали скринингу при помощи sRIA на их способность узнавать IL-18BP, выделенный из концентрированной мочи человека (Novick et al. 1999). Микротитрационные планшеты покрывали IL-18BP мочи (1 мкг/мл), аффинно очищенным при помощи лиганда, блокировали и промывали, как описано выше. Супернатанты гибридом (100 мкл) добавляли, и детектирование выполняли с использованием козьих антимышиных 125I-антител (105 имп/мин в 100 мкл).sRIA для антител, специфических в отношении лигандсвязывающего сайта IL-18BP Микротитрационные планшеты покрывали либо выделенным из мочи IL-18BP (0,5 мкг/мл), либо(50 мкл) до конечной концентрации 1,5 мкг/мл (15 мин при комнатной температуре) с последующим добавлением супернатантов гибридом (50 мкл). Детектирование выполняли с использованием козьих анти 2- 16009125 мышиных 125I-антител (105 имп/мин в 100 мкл, 2 ч при комнатной температуре). Пример 6. Содержание миокардиального IL-18 после LPS Предполагалось, что TNF и IL-1 участвуют в дисфункции сердца во время сепсиса. ПосколькуTNF и IL-1, исследовали концентрацию IL-18 при LPS-индуцированной дисфункции сердца. Мышей обрабатывали либо носителем (физиологическим раствором), либо LPS. Сердца собирали через 2, 4 и 6 ч после введения LPS и гомогенизировали для определения содержания миокардиальногоIL-18 при помощи ELISA (с набором, купленным в RD Systems (Minneapolis MN. Результаты на фиг. 9 показывают двухкратное увеличение содержания IL-18 в миокарде через 4 ч после введения LPS, что указывает на то, что IL-18 участвует в дисфункции сердца во время сепсиса. Пример 7. Эффект нейтрализации IL-18 на LPS-индуцированную дисфункцию миокарда В предыдущем примере было обнаружено увеличение содержания IL-18 при дисфункции сердца,индуцированной LPS. Таким образом, оценивали эффект нейтрализации IL-18 на LPS-индуцированную дисфункцию миокарда. Функцию миокарда определяли изоволюметрическим, нерециркулирующим способом Лангендорфа, описанным ранее (Meng et al. 1998). Выделенные сердца перфузировали нормотермическим раствором Кребса-Хензелайта, содержащим 11,0 ммоль/л глюкозы, 1,2 ммоль/л СаСl2, 4,7 ммоль/л KСl, 25 ммоль/л NaHCO3, 119 ммоль/л NaCl, 1,17 ммоль/л MgSO4 и 1,18 ммоль/л KH2PO4. Баллонный катетер из латекса вставляли в левый желудочек через левое предсердие и наполняли водой для получения конечного диастолического давления левого желудочка (LVEDP) 10 мм рт.ст. Задающие ритм проволоки подсоединяли к правому предсердию, и сердца электростимулировали при 300 сокращениях в минуту. Коронарный кровоток определяли количественно сбором эффлюента из легочных артерий. Температуру миокарда поддерживали при 37 С. Развившееся давление в левом желудочке (LVDP), его первые производные (+dP/dt, -dP/dt) и конечное диастолическое давление в левом желудочке (LVEDP) непрерывно регистрировали компьютеризованным чувствительным к давлению усилителем-дигитайзером (Maclab 8,AD Instrument, Cupertino, CA). После 20-минутного периода уравновешивания определяли LVDP и +/dP/dt при варьирующихся уровнях LVEDP левого желудочка (10, 15 и 20 мм рт.ст.) После введения LPS развившееся давление левого желудочка (LVDP) уменьшалось на 38% по сравнению с контролями (физиологическим раствором) (36,3 +/- 1,9 мм рт.ст. против 59,1 +/- мм рт.ст.,Р 0,001, фиг. 10). Предобработка мышей за 30 мин до введения LPS нормальной сывороткой кроликов(NRS) имела минимальное влияние на LPS-индуцированную дисфункцию сердца; однако, предобработка нейтрализующим IL-18 антителом прекращала дисфункцию (фиг. 10). Коронарный кровоток не различался между этими группами (не показано). Эти результаты показывают, что нейтрализация IL-18 защищает против LPS-индуцированной дисфункции миокарда. Ссылкиosteoclastogenesis in vitro." Endocrinology, 139, 1329-37. Цитируемые здесь и во всем описании ссылки включены в виде ссылок в их полном объеме.- 19009125 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение ингибитора IL-18 для приготовления лекарственного средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS),выбранных из сепсиса, тяжелого сепсиса и септического шока. 2. Применение по п.1, согласно которому лекарственное средство предназначено для лечения и/или предупреждения связанной с сепсисом дисфункции сердца. 3. Применение по любому из пп.1 и 2, согласно которому ингибитор IL-18 выбиран из ингибиторов каспазы-1 (ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL-18 и блокируют IL-18-рецептор, ингибиторов продукции IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов,слитых белков, функциональных производных, активных фракций или циклических пермутированных производных, имеющих, по существу, ту же активность, что и IL-18-связывающий белок. 4. Применение по п.3, согласно которому ингибитор IL-18 является IL-18-связывающим белком или его изоформой, мутеином, слитым белком, функциональным производным, активной фракцией или циклическим пермутированным производным. 5. Применение по п.4, согласно которому IL-18-связывающий белок является ПЭГконъюгированным. 6. Применение по любому из пп.3-5, согласно которому слитый белок содержит Ig. 7. Применение по п.3, согласно которому ингибитор IL-18 является специфическим антителом против IL-18, выбранным из химерного, гуманизированного или человеческого антител. 8. Применение по любому из предыдущих пунктов, согласно которому лекарственное средство дополнительно содержит ингибитор IL-12 для одновременного, последовательного или отдельного введения. 9. Применение по п.8, согласно которому ингибитор IL-12 является нейтрализующим антителом. 10. Применение по любому из пп.1-9, согласно которому лекарственное средство дополнительно содержит интерферон для одновременного, последовательного или отдельного введения. 11. Применение по п.10, согласно которому интерферон является интерфероном-. 12. Применение по п.10, согласно которому интерферон является интерфероном-. 13. Применение по любому из предыдущих пунктов, где лекарственное средство дополнительно содержит ингибитор цитокина, выбранного из фактора некроза опухоли (TNF), IL-1 и IL-8, для одновременного, последовательного или отдельного введения. 14. Применение по п.13, согласно которому ингибитор TNF является растворимой частью TNFRI или TNFRII. 15. Применение по п.13, согласно которому ингибитор IL-1 является антагонистом рецептора IL-1. 16. Применение экспрессирующего вектора, содержащего кодирующую последовательность ингибитора IL-18, выбранного из ингибиторов каспазы-1 (ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL18, которые конкурируют с IL-18 и блокируют IL-18-рецептор, ингибиторов продуцирования IL-18 и IL18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов, слитых белков или циклических пермутированных производных, имеющих, по существу, ту же активность, что и IL-18-связывающий белок, для приготовления лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса. 17. Применение по п.16 для генотерапии сепсиса. 18. Применение вектора, индуцирующего и/или усиливающего эндогенную продукцию ингибитораIL-18 в клетке для приготовления лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса. 19. Применение клетки, которая была генетически модифицирована с тем, чтобы продуцировать ингибитор IL-18, для приготовлении лекарственного средства для лечения и/или предупреждения сепсиса. 20. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), выбранных из сепсиса, тяжелого сепсиса и септического шока, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества ингибитора IL-18. 21. Способ по п.20, согласно которому ингибитор IL-18 выбран из ингибиторов каспазы-1 (ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL-18 и блокируют IL-18 рецептор, ингибиторов продукции IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов, слитых белков, функциональных производных, активных фракций или циклических пермутированных производных, имеющих, по существу, ту же самую активность, что и IL-18-связывающий белок. 22. Способ по п.21, дополнительно предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества ингибитора IL-12. 23. Способ по любому из пп.21 и 22, дополнительно предусматривающий введение субъекту ингибитора цитокина, выбранного из группы, состоящей из ингибитора фактора некроза опухоли (TNF), ин- 20009125 гибитора IL-1 и ингибитора IL-8. 24. Способ по п.23, согласно которому ингибитор TNF является растворимой частью TNFRI илиTNFRII. 25. Способ по п.23, согласно которому ингибитор IL-1 является антагонистом рецептора IL-1. 26. Способ по любому из пп.20-25, дополнительно предусматривающий введение субъекту интерферона. 27. Способ по п.26, согласно которому интерферон является интерфероном-. 28. Способ по п.26, согласно которому интерферон является интерфероном-. 29. Способ лечения и/или предупреждения, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), выбранных из сепсиса, тяжелого сепсиса и септического шока, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества экспрессирующего вектора, содержащего кодирующую последовательность ингибитора IL-18, выбранного из группы, состоящей из ингибиторов каспазы-1 (ICE), антител против IL-18, антител против любой из субъединиц рецептора IL-18, ингибиторов пути передачи сигнала с участием IL-18, антагонистов IL-18, которые конкурируют с IL-18 и блокируют IL-18-рецептор, ингибиторов продуцирования IL-18 и IL-18-связывающих белков, их изоформ, мутеинов, слитых белков или циклических пермутированных производных, и фармацевтически приемлемого носителя. 30. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), выбранных из сепсиса, тяжелого сепсиса и септического шока, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества вектора, индуцирующего и/или усиливающего эндогенную продукцию ингибитора IL-18 в клетке, и фармацевтически приемлемого носителя. 31. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, характерных для синдрома системной воспалительной реакции (SIRS), выбранных из сепсиса, тяжелого сепсиса и септического шока, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, клетки, которая была генетически модифицирована для продуцирования ингибитора IL-18, и фармацевтически приемлемого носителя. 32. Способ по любому из пп.20-31 для лечения и/или предупреждения связанной с сепсисом дисфункции сердца.