Вакцины, включающие в качестве адъюванта интерферон типа i, и связанные с этим способы

006211 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к области медицины и касается вакцин, в частности, субъединичных вакцин. Уровень техники Вакцины известны в данной области. Известны вакцины, обычно включающие убитые или ослабленные патогены и субъединичные вакцины, которые вводятся для профилактики, облегчения или лечения инфекционных заболеваний. В частности, субъединичные вакцины - это вакцины, основанные на антигенах, происходящих из тех компонентов патогена, которые считаются важными мишенями для защиты со стороны иммунной системы хозяина. Хотя субъединичные вакцины оказались очень безопасными, они часто вызывают неадекватные иммунные ответы вследствие того, что лежащие в их основе антигены обладают слабой иммуногенностью или неиммуногенны. Поэтому, чтобы повысить иммуногенность, в субъединичные вакцины зачастую приходится добавлять адъювант или вводить вместе с адъювантом, то есть веществом, которое, по определению, при введении вместе с антигеном вызывает более эффективный иммунный ответ, чем один антиген. Несмотря на то, что применялось много типов адъювантов на животных - классические примеры включают масляные эмульсии, соли алюминия или кальция, сапонины и производные LPS, в настоящее время обычно включают в состав вакцин для человека лишь адъюванты на основе минеральных солей алюминия. Такие соли безопасны, но они являются слабыми адъювантами для индукции антител и не способны стимулировать классические клеточные иммунные ответы. Индукция антител вместе с клеточным ответом необходима для обеспечения высокоэффективной защиты от проникающих патогенов с целью ограничения их распространения или их устранения. Вакцины должны обеспечивать или индуцировать 2 типа сигналов для того, чтобы вызвать сильный защитный иммунный ответ. Во-первых, вакцина должна нести антиген, который активирует антиген-специфичные рецепторы на Т- и В-лимфоцитах. Во-вторых, эффективная вакцина должна индуцировать экспрессию стимулирующих молекул антигенпредставляющими клетками, которые затем вызывают сильную реакцию у активированных антигеном лимфоцитов. Этот второй сигнал часто обеспечивается факторами,связанными с инфекцией, когда используют вакцины, содержащие живые патогены, но он обычно отсутствует у субъединичных вакцин, что приводит к ослаблению иммуногенности. Добавление адъюванта,способного обеспечить такой второй сигнал, повышает эффективность вакцины, кроме того, оно может обусловить тип вызываемого иммунного ответа. Руководящая роль этих сигналов для иммунной системы хозяина делает возможной последующую выработку эффекторных механизмов, характеризующих тип и силу общего иммунного ответа к данному возбудителю инфекции. Цитокины являются главными факторами, участвующими в передаче информации между Тклетками, В-клетками, макрофагами, дендритными клетками и другими иммунными клетками в процессе иммунного ответа к антигенам и возбудителям инфекций. В ряде исследований на клонах Т-хелперных(Th) клеток мышей и человека получены обширные данные о существовании различных активностей у клеток Th (названных Th1 и Th2), о чем свидетельствует профиль секреции цитокинов. Так, типичным признаком ответа Th1 или Th2 считается выработка IFN- или IL-4, соответственно. Иммунный ответ типа Th1 обычно связан с продукцией IgG2a у мышей и с выработкой клеточного иммунитета, тогда как ответ типа Th2 связан с продукцией IgE и образованием эозинофилов и тучных клеток. В общем случае считается, что индукция иммунного ответа типа Th1 способствует формированию защитного иммунного ответа к вирусам и некоторым бактериальным инфекциям. В этом отношении следует отметить, что доступные в клинике адъюванты, такие как минеральные соли на основе алюминия, имеют склонность к индукции иммунного ответа типа Th2, тогда как применение некоторых адъювантов, стимулирующихTh1, в общем ограничено вследствие проблем с токсичностью или безопасностью. Отсутствие высокоэффективного адъюванта в указанном выше смысле является значительным препятствием к успешной разработке вакцин, особенно таких, которые направлены против внутриклеточных патогенов, где требуется клеточный иммунитет. Соответственно, несмотря на наличие потенциально эффективных рекомбинантных антигенов, слабая реакция на вакцинацию или ее отсутствие и согласие пациента остаются главными проблемами в отношении профилактических или терапевтических субъединичных вакцин. Слабая иммуногенность субъединичных вакцин создает необходимость в многократном их введении, чтобы вызвать удовлетворительный ответ, при этом значительной проблемой становится нежелание пациента. По этим причинам давно ощущается потребность в таком адъюванте, который улучшает иммуногенность антигена и последовательно вызывает постоянные сильные иммунные ответы, уменьшая число доз вакцины, необходимых для индукции уровни сероконверсии/серозащиты даже после однократной дозы. В этой связи, благодаря тем свойствам, что приведены выше, в данной области в качестве возможных адъювантов рассматривались цитокины. В частности, из их числа некоторое внимание уделялось интерферону (IFN).-1 006211 В настоящее время интерфероны рассматриваются как сложное семейство антивирусных белков,секретируемых различными клетками в ответ на вирусную инфекцию или другой раздражитель, которые обладают множеством биологических активностей. Их подразделяют на 2 основных типа в зависимости от рецепторной системы, через которую они индуцируют связанные с ними биологические активности:i) интерфероны I типа, которые включают семейство IFN-, состоящее по меньшей мере из 13 функциональных подтипов IFN-, IFN- и IFN-;ii) интерферон II типа, который также называют IFN-. Первоначально интерфероны I типа считались простыми антивирусными веществами, но впоследствии было показано, что они демонстрируют разнообразные биологические эффекты, включая противоопухолевое действие на экспериментальных моделях, а также на пациентах. В первых опытах сообщалось о нескольких эффектах IFN типа I на иммунные ответы in vitro и in vivo. Однако некоторые из этих опытов были встречены со скептицизмом, так как во многих случаях препараты IFN не были чистыми. Долгое время вообще считалось, что эффекты IFN типа I на иммунную систему не могут сравниться, в смысле важности, с эффектами IFN типа II, который считался важнейшим медиатором клеточного защитного иммунного ответа, в соответствии с его первоначальным определением как "иммунный IFN". К тому же было показано, что интерфероны I типа оказывают сильное ингибирующее действие на продукцию антител и пролиферацию Т-клеток in vitro, что вызвало вопрос, будут ли эти цитокины действовать как стимуляторы или ингибиторы in vivo. Следует отметить, что некоторые авторы еще недавно делали упор на возможное иммуносупрессивное действие IFN типа I. Эта концепция даже привела к клиническому применению на зараженных HIV-1 пациентах, исходя из принципа нейтрализации эндогенного IFN, считавшегося вероятным имуносупрессорным фактором, участвующим в развитии болезни. С другой стороны, совокупность данных, недавно полученных на различных моделях, подчеркнула важность IFN типа I в индукции иммунного ответа типа Тh1 и в обеспечении пролиферации, функциональной активности и выживания определенных субпопуляций Т-клеток (Bellardelli F. and Gresser I. The neglected role of type I interferon in the T-cell response: implication for its clinical use. Immunol. Today 17: 369372, 1996, и Tough DF, Borrow P, and Sprent J. Induction of bystander Т cell proliferation by viruses and type Iinterferon in vivo. Science 272: 1947-1950,1996). В настоящее время интерфероны I типа - наиболее часто используемые цитокины в клинической практике. В частности, IFN- применяется во всем мире в более 40 странах для лечения некоторых вирусных заболеваний (особенно гепатита С) и различных видов рака у человека, включая некоторые виды рака крови (лейкоз клеток волосяного слоя кожи, хроническая миелоидная лейкемия, некоторые В- и Тклеточные лимфомы) и некоторые твердые опухоли, такие как меланома, почечная карцинома и саркома Капоши. Напротив, IFN- имеет мало случаев клинического применения, в основном из-за токсичности. За последние несколько лет в некоторых исследованиях были получены данные о том, что биологические эффекты интерферонов I и II типа могут значительно отличаться по типу активности в различных экспериментальных моделях. В некоторых случаях, таких как меланома и множественный (рассеянный) склероз, клиническое применение IFNG приводило к противоположным эффектам по сравнению с эффектами IFN типа I. Несмотря на широкое клиническое применение, IFN типа I еще не применяется в качестве адъюванта вакцин. Это вызвано тем, что современные взгляды на роль и важность IFN типа I в регуляции иммунного ответа так или иначе остались нечеткими и противоречивыми. Уместность применения интерферонов in vivo в качестве адъювантов в вакцинах была показана только для IFN типа II (то есть IFN-). В частности, в ЕР 0241725 описана вакцина, содержащая неочищенный белковый экстракт, полученный из клеток крови мышей, инфицированных вирулентным штаммом YM Plasmodium yoelii, которая включала IFN- в качестве адъюванта. Количество включенного в вакцину IFN- указано в пределах от 1000 до 10000 ед. на дозу, при этом количество IFN-, дающее адъювантный эффект, указано от 100 до 50000 ед. Применялась дозировка в 5000 ед., хотя и дозы меньше 200 ед. указаны как эффективные. Несмотря на то, что применение IFN типа I в качестве адъюванта предусматривается в некоторых документах предшествующего уровня техники, однако никаких доказательств эффективности IFN типа I в усилении защитного ответа типа Th1 in vivo при использовании в качестве адъюванта не приводится и не предполагается. Так, в WO/8704076 раскрыто, что возможность применения IFN- для непрямого усиления иммунного ответа возникла в опытах по заражению телят вирусом коровьего инфекционного ринотрахеита(IBR). В частности, согласно WO/8704076, IFN- применяется предпочтительно путем приема внутрь в очень низких дозах, не более 5 ЕД/фунт веса тела в день, предпочтительно 1 ЕД/фунт веса тела в день. Эти количества не только слишком низкие для достижения эффекта, получаемого по настоящему изобретению, но и результаты, приведенные в примере данной заявки, показывают, что повышение количества IFN свыше 5 ЕД/фунт ведет к противоположному эффекту - к уменьшению иммунного ответа.Strchler et а 1. (Vaccine, vol 7, 1989, pp. 457-461) описывают общий адъювантный эффект, который производит IFN- на продукцию антител IgG и IgM после иммунизации добровольцев вакциной противPlasmodium falciparum. Однако умеренное повышение титра IgG и IgM, наблюдавшееся in vitro, не является доказательством защитного эффекта in vivo. Следовательно, защитный эффект in vivo не вытекает из этого документа. Более того, Strchler et al. не описывают и даже не предполагают способность IFN- индуцировать защитный иммунный ответ in vivo типа Тh1 избирательно и нетоксическим образом.Anton P. et al. (Cancer biotherapy and radiopharmaceuticals, Liebert, US, vol. 11, no. 5, 1996, pp. 315318) описывают эксперименты по противоопухолевой вакцине, содержащей инактивированные аутологичные опухолевые клетки и рекомбинантный IFN-2a. Хотя в документе и описана определенная эффективность при иммунизации, однако в нем не проведено различия между вкладом аутологичных клеток и вкладом IFN. Следовательно, адъювантный эффект IFN просто объявлен на словах, уж не говоря о качестве иммунного ответа. Таким образом, из этого документа также не вытекает адъювантный эффектGrob P.J. et al. (Eur. J. Clin. Microbiol., 1994, vol. 3, no. 3, pp. 195-198) описывают введение рекомбинантного IFN- и коммерческой вакцины против гепатита В пациентам, не реагировавшим на предыдущие иммунизации. Результаты свидетельствуют о низкой частоте сероконверсии и о таком небольшом повышении титра антител у пациентов, получавших IFN, что нельзя ожидать защитного эффекта in vivo. Следует подчеркнуть, что в этом случае IFN- вводили отдельно от вакцины. Такой подход концептуально отличается от метода применения веществ в качестве адъювантов, в котором, как правило, адъювант используют вместе с антигеном. Область настоящего изобретения, в отличие от предшествующего уровня техники, заключается в обеспечении безопасного и эффективного средства для усиления гуморального иммунного ответа типаTh1 на вакцину при защитной иммунизации in vivo, особенно на вакцины, содержащие убитые патогены или, более конкретно, субъединичные вакцины. Сущность изобретения Предметом настоящего изобретения является применение IFN типа I для получения нетоксической композиции адъюванта для усиления гуморального иммунного ответа типа Тh1 на вакцину при защитной иммунизации in vivo, при этом IFN применяется в дозировке, большей или равной 100000 ЕД на дозу вакцины. Такое усиление гуморального иммунного ответа вызывает избирательную индукцию продукцииIgG1 и/или IgG2a и/или IgG2b и/или IgG3 и/или IgA и/или IgM. Нетоксическая композиция адъюванта особенно полезна для проведения защитной иммунизации invivo путем подкожной, внутримышечной или внутрикожной инъекции либо путем перорального, мукозного или интраназального введения. В частности, предметом настоящего изобретения является применение IFN типа I для получения нетоксической композиции адъюванта для вышеуказанной цели, при этом композиция составляется для одновременного попадания вместе с вакциной к месту введения. Предпочтительно композиция адъюванта составляется вместе с вакциной. Следующим объектом изобретения является вакцина, включающая IFN типа I в качестве адъюванта в дозировке, большей или равной 100000 ЕД на дозу вакцины, для контролируемого и пролонгированного выделения как антигена, так и адъюванта вместе с любым необходимым фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным средством. Следующим предметом является набор, включающий вышеописанную композицию адъюванта, содержащую IFN, и композицию вакцины для раздельного введения. Первым преимуществом изобретения является то, что полученная таким образом вакцина с адъювантом способна улучшить индукцию иммунного ответа типа Th1, который характеризуется долговременной продукцией антител и иммунологической памятью, что определяется общим уровнем продукции антител. Вторым преимуществом изобретения является то, что вакцина с адъювантом в виде композицииIFN типа I в указанных дозах способна вызвать индукцию специфических защитных гуморальных и клеточных иммунных ответов in vivo типа Th1 даже после однократного введения вакцины. Третьим преимуществом является и высокая эффективность в быстрой индукции иммунной защиты типа Th1 при отсутствии токсичности, в особенности при отсутствии токсичности и проблем с безопасностью, типичных для доступных в настоящее время адъювантов, способных вызывать ответы типа Th1 у животных, таких как CFA или IFA. Иммунный ответ, индуцируемый IFN типа I, относится к ответам типа Th1, которые отличаются особым профилем Ig, а именно - у мышей специфически индуцируются IgG2a и/или IgA, обеспечивающие защиту от таких патогенов, как бактерии и вирусы. В нетоксической композиции адъюванта по изобретению IFN типа I может быть представлен любым интерфероном, принадлежащим к этому семейству, при условии, что он охватывается приведенной-3 006211 выше дозировкой. В этой связи наиболее эффективная дозировка для человека составляет от 1 х 106 до 6x106 ЕД. В предпочтительном воплощении применяются: природный IFN- (смесь различных подтипов IFN или индивидуальный подтип IFN-) из стимулированных лейкоцитов здоровых доноров или лимфобластозный IFN- из клеток Namalwa, синтетический IFN типа I, такой как консенсусный IFN (CIFN) иIFN- или рекомбинантные подтипы IFN-, такие как IFN-a и IFN-b или IFN-, либо новые молекулыIFN, созданные методом перетасовки ДНК, при условии, что они применяются в вышеуказанной дозировке на дозу вакцины. Можно использовать ПЭГилированные подтипы IFN типа I, обладающие преимуществом более высокого периода полужизни IFN in vivo после введения, что в принципе полезно для достижения более выраженного и быстрого иммунного ответа. Слитые гибридные белки, представленные рекомбинантным IFN типа I, слитым с моноклональным антителом, способным достичь дендритных клеток, могут оказаться особенно эффективными адъювантами, которые можно включать в состав вакцины. Композицию адъюванта по изобретению можно комбинировать с одним и даже несколькими антигенами из возбудителя инфекции или других источников в виде вакцины с адъювантом. Антигены включают очищенные или частично очищенные препараты белковых, пептидных, углеводных или липидных антигенов, и/или антигены, связанные с целыми клетками, в особенности дендритными клетками, которые были смешаны с антигеном. В целом любой патоген может рассматриваться как возможный иммуноген, который может сочетаться с IFN типа I как адъювантом, и он может быть легко установлен специалистом в этой области. Количество антигена в каждой дозе вакцины с адъювантом выбирают как количество, способное индуцировать защитный иммунный ответ у вакцинированных лиц. Это количество зависит от конкретного антигена и возможного присутствия других адъювантов, и оно может быть установлено специалистом в этой области. В общем, каждая доза должна содержать 1-1000 мкг антигена, предпочтительно 10200 мкг. Другие компоненты также могут с пользой находиться в композиции адъюванта или в вакцине с адъювантом по изобретению. В частности, в предпочтительном воплощении композиция включает дополнительные адъюванты, в особенности соли алюминия. В отношении формы, композиция адъюванта по изобретению может быть в виде лекарственной формы для одновременной доставки адъюванта и вакцины к месту введения. Предпочтительно композиция адъюванта вместе с вакциной входят в состав одной композиции в виде вакцины с адъювантом. Лекарственная форма композиции адъюванта или вакцины с адъювантом может быть любой, известной в этой области, которая пригодна для введения адъюванта вместе с антигеном. В некоторых случаях композиция адъюванта и вакцина или вакцина с адъювантом может вводиться подкожно или внутримышечно ввиду ожидаемого эффекта и легкости применения. Некоторые вакцины могут быть эффективно введены путем внутрикожной инъекции, а также можно рассматривать и другие системы введения, пригодные для привлечения должного числа дендритных клеток к месту инъекции. Также следует включить и интраназальное и пероральное введение, особенно для тех возбудителей инфекций, которые передаются через эти пути заражения, таких как вирусные респираторные инфекции,например, инфекция вирусом гриппа. Более того, интраназальное, пероральное или любое другое мукозальное введение (через слизистые оболочки) композиции адъюванта и вакцины или непосредственно вакцины с адъювантом является хорошим выбором, который неожиданно и с пользой ведет к индукции сильного защитного местного и/или системного иммунитета при использовании очень практичного способа введения вакцины. Специалист в этой области может определить в этой связи наиболее удобную лекарственную форму в зависимости от антигена, против которого направлена вакцинация. Композиция адъюванта или вакцина с адъювантом по изобретению может быть изготовлена стандартным образом, в виде фармацевтической композиции, включающей стерильные физиологически приемлемые носители, такие как физраствор, наполнители, другие адъюванты (если они есть), консерванты,стабилизаторы. Композиция адъюванта или вакцина с адъювантом может находиться в жидком или лиофилизованном виде для растворения в стерильном носителе перед употреблением. Также возможно присутствие квасцов или липосомных частиц в прописи, так как они полезны для медленного высвобождения IFN и антигена. Другие стратегии для обеспечения замедленного выделения вакцины с адъювантом могут быть легко определены специалистами в этой области и они входят в объем притязаний данного изобретения. Фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное средство может быть легко определено соответственно для каждой лекарственной формы специалистом в этой области. В этой связи предметом настоящего изобретения также является способ получения вакцины с адъювантом по изобретению, включающий стадию:- формулирования вместе антигена и IFN типа I, при этом IFN данного типа находится в дозировке,большей или равной 100000 ЕД на дозу вакцины. Описанная выше вакцина с адъювантом может применяться при профилактике и лечении инфекционных заболеваний и рака. В частности, композиция адъюванта или вакцина с адъювантом по настоящему изобретению может применяться как для профилактики вирусных и бактериальных заболеваний (то есть как профилактическая вакцина), так и для лечения тяжелых хронических инфекционных заболеваний (то есть как лечебная вакцина). Кроме того, композиция адъюванта или вакцина с адъювантом также может применяться для профилактики и лечения рака с использованием подходящих антигенов. Это достигается применением антигенов против возбудителей заболеваний, связанных с возникновением рака у человека (EBV, HPV и Н. pilori), или хорошо изученных опухолевых антигенов типа тех,что исследованы при меланоме у человека (антигены MAGE, тирозиназа gp100, MART) и при других видах рака у человека. В частности, композиция адъюванта или вакцина с адъювантом по изобретению особенно подходит для вакцинации так называемых мало- или невосприимчивых лиц, к примеру, иммунодефицитных лиц типа пациентов на гемодиализе и после трансплантации. В общем, композиция адъюванта или вакцина с адъювантом по настоящему изобретению преимущественно подходит для вакцинации лиц с высоким риском заражения в любых ситуациях, когда нужна ранняя сероконверсия/серозащита. Эти характеристики в особенности относятся к вакцинации против HBV. В качестве дополнительного примера, описанная композиция адъюванта или вакцина с адъювантом может быть особенно ценной для индукции иммунитета против вируса гриппа у пожилых лиц, плохо восприимчивых к стандартной вакцинации. В отношении вакцины против HBV, а также других противовирусных вакцин, подкожное или внутримышечное введение может быть предпочтительным, тогда как в других случаях интраназальное введение может обладать преимуществами в отношении эффективности и/или согласия пациента, особенно в случае возбудителей, способных инфицировать организм хозяина через дыхательную систему. В соответствии со вторым аспектом, адъювантный эффект IFN типа I согласно изобретению может быть достигнут также при раздельном введении IFN типа I и субъединичной вакцины. Чтобы введение было эффективным, оно должно осуществляться таким способом, который обеспечивает одновременное присутствие активных начал в одном месте. Так, у животных оптимальные эффекты достигаются при введении IFN типа I совместно с вакциной в дозах от 100000 до 200000 ЕД или даже в больших дозах (1x106-2x106 ЕД). Еще большее усиление иммунного ответа достигается, когда сначала одновременно вводится вакцина и адъювант, а затем 1 раз в день вводятся дополнительные дозы одной лишь композиции адъюванта в 1-й день или в 1-й и 2-й день после первого введения вакцины. Намного меньшие эффекты наблюдаются при введении одного IFN в день -1 или +1 относительно введения вакцины (фиг. 11 С). Соответственно, настоящее изобретение также включает набор из частей, включающий композицию, включающую IFN типа I и фармацевтически приемлемый носитель; вакцинную композицию, включающую антиген или комбинацию из двух и более антигенов (определенных белков или пептидов) либо убитых или инактивированных патогенов,для раздельного, одновременного или последовательного применения при лечении заболеваний,связанных с присутствием данного антигена (антигенов). Лекарственные формы, виды и способы введения композиций из набора по изобретению - те же,что описаны выше. Изобретение будет описано полнее с помощью прилагаемых фигур. Описание фигур Фиг. 1 - эффект поли(IC) на первичный антительный ответ к -глобулину цыплят (CGG) in vivo. Панель А: конечные титры CGG-специфичных антител, определенные в сыворотке мышей В 6, которым вводили один CGG или CGG + поли(IС), как указано на оси х диаграмм. Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM, IgG1, IgG2b,IgG2a и IgG3). Антительные ответы выражены в виде средних значенийSD конечных титров. Панель В: антительный ответ у мышей дикого типа линии 129sv (белые столбики) или мышей 129sv с рецептором KО к IFN типа I (IFN-IR KО) (черные столбики), которым вводили один CGG или CGG + поли(IC), как указано на оси х диаграмм. Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Антительные ответы выражены в виде средних значенийSD конечных титров. Фиг. 2 А и В - антительный ответ у мышей, иммунизированных овальбумином (OVA) + адъювантами. Панель А: уровни специфических антител, определенные у мышей дикого типа (белые столбики) или мышей IFNR KО линии С 3 Н/HeJ (серые столбики), которым вводили физраствор, OVA, OVA + IFA или OVA + CFA, как указано на оси х диаграмм.-5 006211 Конечные титры антител в сыворотке мышей через 24 дня после иммунизации, измеренные стандартным методом ELISA, по OVA-специфичным иммуноглобулинам или их подклассам IgG2a и IgG1,приведены на диаграммах I, II и III, соответственно. Значения выражены в виде средних значений конечных титров разбавлений 3 индивидуальных сывороток по двум повторам. Панель В: уровни специфических антител у мышей дикого типа (белые столбики) или мышей IFNROVA + квасцы, как указано на оси х диаграмм. Конечные титры антител в сыворотке мышей через 25 дней после иммунизации, измеренные стандартным методом ELISA, по OVA-специфичным иммуноглобулинам или их подклассам IgG2a и IgG1,приведены на диаграммах I, II и III, соответственно. Значения выражены в виде средних значений конечных титров разбавлений 3 индивидуальных сывороток по двум повторам. Фиг. 3 - роль IFN типа I в усилении посредством поли(IС) Т-клеточного ответа к CGG in vivo. Панель А: пролиферативная реакция на CGG in vitro Т-клеток из мышей 129 или мышей IFN-IR KО,примированных путем инъекции поли(IС), CGG или CGG + поли(IС), как указано на оси х диаграмм. Белые и плотно-штрихованные столбики показывают пролиферацию в суспензиях клеток из проточных лимфатических узлов (DrLNs) мышей 129, которые культивировали в присутствии (белые) или в отсутствие (плотно-штрихованные) CGG. Черные и редко-штрихованные столбики показывают пролиферацию в суспензиях клеток из DrLNs мышей IFN-IR KО, которые культивировали в присутствии (черные) или в отсутствие (редкоштрихованные) CGG. Панель В: секреция IFN- Т-клетками CD4+ мышей 129 или мышей IFN-IR KО, примированных путем инъекции поли(IС), CGG или CGG + поли(IС), как указано на оси х диаграмм. Белые и плотно-штрихованные столбики показывают секрецию IFN- Т-клетками CD4+, выделенными из DrLNs иммунизированных мышей 129 и культивированными вместе с Т-обедненными клетками селезенки из неиммунизированных сингенных мышей, которые культивировали в присутствии (черные) или в отсутствие (редко-штрихованные) CGG. Черные и редко-штрихованные столбики показывают секрецию IFN- Т-клетками CD4+, выделенными из DrLNs иммунизированных мышей IFN-IR KО и культивированными вместе с Т-обедненными клетками селезенки из неиммунизированных сингенных мышей, которые культивировали в присутствии(черные) или в отсутствие (редко-штрихованные) CGG. Фиг. 4 - роль эндогенного IFN типа I в примировании Т-клеток к пролиферации in vitro и в реакции отсроченной гиперчувствительности (DTH) у мышей, иммунизированных OVA + адъювантами. Панель А: специфический захват 3 Н-тимидина Т-клетками из нормальных (белые столбики) или мышей IFN-IR KО линии С 3 Н/HeJ (серые столбики), которым вводили физраствор, овальбумин и CFA,как указано на оси х диаграмм. Панель В: специфический захват 3H-тимидина Т-клетками из нормальных (белые столбики) или мышей IFN-IR KО линии С 3 Н/HeJ (серые столбики), которым вводили физраствор, овальбумин и овальбумин + CpG или квасцы, как указано на оси х диаграмм. Панель С: специфическая DTH-реакция у мышей дикого типа (белые столбики) или мышей IFN-IRCFA, как указано на оси х диаграмм. Панель D: специфическая DTH-реакция у мышей дикого типа (белые столбики) или мышей IFN-IRKО линии С 3 Н/HeJ (серые столбики), которым вводили физраствор, овальбумин и овальбумин + CpG или квасцы, как указано на оси х диаграмм. Фиг. 5 - усиление первичного антительного ответа к CGG при инъекции IFN-I. Все мыши получали однократную инъекцию CGG. Мышам, также получавшим растворимый IFN/ или IFN-, вводили соответствующий IFN либо только во время иммунизации (1X), либо они получали дополнительные инъекции IFN через 1 день (2 Х) или через 1 и 2 дня (3 Х). Панель А: антительный ответ у мышей В 6, иммунизированных одним CGG или иммунизированныхCGG и получавших IFN-/, как указано на оси х диаграмм. Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Антительные ответы выражены в виде средних значенийSD конечных титров. Панель В: антительный ответ у мышей В 6, иммунизированных одним CGG или иммунизированныхCGG и получавших IFN-. Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Антительные ответы выражены в виде средних значенийSD конечных титров. Фиг. 6 - усиление первичного антительного ответа к CGG посредством IFN-/ + квасцы. Данные (черные столбики) показывают определение CGG-специфичных антител методом ELISA через 10 дней после иммунизации мышей В 6 путем однократной подкожной инъекции одного CGG или в сочетании с растворимым IFN-/, квасцами или IFN-/ + квасцы, как указано на оси х диаграмм. Обо-6 006211 значение 3 Х означает дополнительные инъекции растворимого IFN-/ через 1 и через 2 дня после иммунизации. Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Данные представлены в виде средних значенийSD (по 3 мыши в группе). Фиг. 7 - усиление антительных ответов посредством IFN типа I по сравнению с масляными адъювантами. Данные (черные столбики) показывают определение CGG-специфичных антител методом ELISA через 10 дней после иммунизации мышей В 6 путем подкожного введения CGG, CGG + IFN-/ (IFN-/ вводили вместе с CGG в день 0, а затем без него в 1-й и 2-й день), CGG в виде эмульсии в IFA (IFA вводили вместе с CGG в день 0, а затем без него в 1-й и 2-й день) или CGG в виде эмульсии в TiterMax(TiterMax вводили вместе с CGG в день 0, а затем без него в 1-й и 2-й день), как указано на оси х диаграмм. Результаты выражены в виде средних значенийSD конечных титров (по 3 мыши в группе). Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр(IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Фиг. 8. Растворимый IFN-/ усиливает антительные ответы в той же степени, что и CFA, адъювантные свойства которого зависят от эндогенного IFN типа I. Сравнивали антительные ответы у мышей 129 дикого типа (белые столбики) и мышей IFN-IR KО(черные столбики) после иммунизации путем подкожного введения одного CGG, CGG + IFN-/ (еще две инъекции IFN-/ в 1-й и 2-й день после иммунизации) или CGG + CFA, как указано на оси х диаграмм. CGG-специфичные антитела определяли методом ELISA через 10 дней после иммунизации. Результаты выражены в виде средних значенийSD конечных титров (по 3 мыши в группе). Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM,IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Фиг. 9 - стимуляция посредством IFN типа I долговременной продукции антител и иммунологической памяти. Панель А: конечные титры антител у мышей В 6, иммунизированных 6 месяцами раньше, путем инъекции одного CGG или CGG + IFN-/. Данные (черные столбики) показывают определение CGG-специфичных антител методом ELISA через 6 месяцев после иммунизации мышей В 6 путем подкожного введения одного CGG или CGG + IFN/ (еще две инъекции IFN-/ в 1-й и 2-й день после иммунизации). Результаты выражены в виде средних значенийSD конечных титров (по 3 мыши в группе). Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр(IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Панель В: специфический антительный ответ через 6 дней после провокационной пробы с однимCGG у наивных мышей (No) и у мышей, иммунизированных 6 месяцами раньше с помощью одного CGG или CGG + IFN-/, как в панели А. Результаты представляют конечные титры антител до (белые столбики) и через 6 дней после пробы(черные столбики) и выражены в виде средних значенийSD конечных титров (по 3 мыши в группе). Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр (IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Фиг. 10. Восприимчивость дендритных клеток (DC) к IFN типа I достаточна для усиления продукции антител и переключения изотипа посредством IFN типа I. Данные показывают определение CGG-специфичных антител стандартным методом ELISA через 10 дней после иммунизации. Дендритные клетки (DC) селезенки выделяли из мышей 129 (дикий тип) или мышей IFN-IR KО (как указано на оси х диаграмм), инкубирали быстро (недолго) с CGG и вводили подкожно вместе с IFN-/ (черные столбики) или без него (белые столбики) мышам IFN-IR KО (в последнем случае проводили еще две инъекции IFN-/ в 1-й и 2-й день после иммунизации). Результаты выражены в виде средних значенийSD конечных титров (по 3 мыши в группе). Каждая диаграмма обозначена по тому подклассу антител, к которому относится измеряемый конечный титр(IgM, IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3). Фиг. 11. Адъювантная активность IFN типа I на антительный ответ у мышей, иммунизированных вакциной против гриппа. Придерживались следующей стандартной схемы иммунизации: 7-8 недельным мышам C57BL/6 внутримышечно вводили 0,2 мл препарата, содержащего 15 мкг очищенной вакцины против гриппа и 2 х 105 ед. мышиного IFN типа I, либо одну вакцину или физраствор в качестве контроля. Через 14 дней у мышей брали кровь и тестировали сыворотку стандартным методом ELISA для измерения уровня специфических к гриппу антител. Представлены средние значения из 5 индивидуальных сыворотокSD. Панель А: эксперимент типа доза/ответ, в котором мышам внутримышечно вводили различные препараты, содержащие вакцину в смеси с разведениями log10 IFN типа I (2 х 105, 2 х 104 или 2 х 103 единиц),-7 006211 либо одну вакцину или физраствор в качестве отрицательного контроля. Титр антител измеряли через 7 дней после иммунизации. Панель В: эффект адъюванта на антительный ответ у мышей, которым вводили вакцину и однократную или многократную дозу IFN типа I. Мышам внутримышечно вводили вакцину против гриппа в смеси с IFN либо вакцину против гриппа в смеси с IFN с последующей дополнительной инъекцией IFN в то же место на протяжении 2 дней после первой инокуляции. В качестве контроля использовали одну вакцину против гриппа или физраствор. Панель С: эффект адъюванта IFN типа I при его введении одновременно или в разное время до или после введения вакцины против гриппа. Мышам внутримышечно вводили IFN за 2 дня или 1 день до или после введения вакцины либо в то же время, что и вакцину, в то же место. В качестве контроля использовали одну вакцину против гриппа или физраствор. Фиг. 12 - панель А: антительный ответ у мышей при интраназальном введении IFN типа I и вакцины против гриппа. 7-8 недельных мышей C57BL/6 анестезировали и вводили интраназально одну каплю (50 мкл) препарата вакцины против гриппа (15 мкг), содержащей 5 х 104 единиц IFN типа I. Через 14 дней повторяли обработку, а еще через 7 дней брали пробы крови и определяли стандартньм методом ELISA присутствие различных подклассов специфических к гриппу антител. В качестве контроля использовали одну вакцину против гриппа или физраствор. Результаты выражали как среднее значениеSD конечных титров в группе из 5 мышей. Панель В: защитный эффект вакцины с адъювантом в виде IFN у мышей, инокулированных живым вирусом гриппа. 7-8 недельных мышей C57BL/6 вакцинировали внутримышечно 0,2 мл раствора, содержащего вакцину против гриппа (15 мкг), одну или вместе с IFN типа I (2 х 105 ед.), либо физраствором в качестве контроля. Вакцины вводили в день 0 и на 14-й день. Через 50 дней после начала вакцинации мышам вводили интраназально одну каплю (50 мкл), содержащую 10 LD50 живого вируса гриппа (A/Beijing/262/95)(A/H1N1). Всех мышей после этого взвешивали ежедневно. Результаты выражали как средний вес в группе из 5 мышей. Указано число выживших из общего числа мышей в каждой группе. Фиг. 13 - анализ изотипов специфичных к гриппу антител у контрольных и мышей IFN-IR KО, иммунизированных внутримышечно одной вакциной против гриппа (FLU) или в смеси с IFN типа I в качестве адъюванта. Контрольным мышам (дикий тип) и мышам IFN-IR KО линии С 3 Н/HeN вводили внутримышечно в день 0 и на 14-й день одну вакцину FLU, вакцину FLU + IFN типа I или вакцину FLU + адъювант MF59. Через 13 дней после первой и 19 дней после второй иммунизации (на 13-й день и 33-й день, соответственно) выделяли сыворотки и анализировали FLU-специфичный антительный ответ. Данные представлены как средние значенияS.E. титров специфических антител из 5 сывороток в каждой экспериментальной группе по двум повторам.р 0,002;р 0,05 по сравнению с мышами IFN-IR KО; NS - нет значимых отличий. Белые столбики - контрольные мыши дикого типа, темные столбики - мыши IFN-IR KО. Фиг. 14 - сильный адъювантный эффект IFN типа I при интраназальном введении вместе с вакциной FLU. Панель a: анализ FLU-специфичных титров HAI, изотипа антител в сыворотке и IgA в бронхоальвеолярном смыве (BAL) мышей C57/BL6, иммунизированных интраназально одной вакциной FLU или в смеси с IFN типа I. Мышам в день 0 и на 14-й день вводили в нос 50 мкл вакцины FLU, одной или в смеси с IFN типа I (105 ед.). Получали сыворотки через 14 дней после первой иммунизации (левая диаграмма). Через 14 дней после второй иммунизации (правая диаграмма) мышей забивали и брали пробы крови и бронхо-альвеолярного смыва (BAL) для анализа Ig. Данные представлены как средние значенияS.E. титров специфических антител из 5 сывороток в каждой экспериментальной группе по двум повторам.р 0,002 по сравнению с одной вакциной FLU; NS - нет значимых отличий. Белые столбики одна вакцина, темные столбики - вакцина + IFN. Панель b: выживаемость мышей C57/BL6, иммунизированных путем двух введений в нос вакциныFLU, одной или в смеси с IFN типа I (105 ед.) либо физраствором в качестве контроля, после провокационной пробы в 10 LD50 вируса гриппа через 38 дней. Данные представлены как средние значения веса (S.E.) инфицированных мышей и как процент выживших мышей от общего числа животных. В каждой группе было по 5 мышей. Черные кружочки - физраствор, белые кружочки - вакцина FLU, белые квадратики - вакцина FLU+IFN. Панель с: контрольным мышам и мышам IFN-IR KО линии С 3 Н/HeN вводили в день 0 и на 14-й день одну вакцину FLU, вакцину FLU + IFN типа I или вакцину FLU + адъювант MF59. Через 13 дней после первой (верхние панели) и через 19 дней после второй иммунизации (нижние панели) получали сыворотки и анализировали FLU-специфичный антительный ответ. Данные представлены как средние-8 006211 значенияS.E. титров специфических антител из 5 образцов в каждой экспериментальной группе по двум повторам.р 0,004 по сравнению с мышами IFN-IR KО; NS - нет значимых отличий. Белые столбики - контрольные мыши дикого типа, темные столбики - мыши IFN-IR KО. Фиг. 15 - адъювантные эффекты IFN типа I у мышей C57/BL6, вакцинированных путем внутримышечного (системного) или интраназального (мукозального) введения вакцины FLU после однократной иммунизации. Панель а: титры антител через 14 дней после иммунизации и выживамость мышей после однократной внутримышечной иммунизации. Внутримышечную иммунизацию проводили как описано ранее. Провокационную пробу вирусом проводили через 38 дней после иммунизации. Панель b: титры антител через 14 дней после иммунизации и выживамость мышей после однократной интраназальной иммунизации. Мукозальную иммунизацию проводили как описано ранее. Провокационную пробу вирусом проводили через 38 дней после иммунизации. Черные кружочки - физраствор, белые треугольнички - вакцина FLU внутримышечно или интраназально, белые кружочки - вакцина FLU+ IFN внутримышечно или интраназально. Подробное описание изобретения Для изобретения подходит любой IFN типа I, принадлежащий к этому семейству, как в виде отдельной рекомбинантной молекулы, так и в виде пула природных или рекомбинантных молекул, или консенсусный IFN (CIFN). Для применения на человеке предпочтительным адъювантом является человеческий IFN типа I. Адъювант может представлять собой рекомбинантный IFN-, IFN- или IFN-, природный IFN- (смесь различных подтипов IFN- или индивидуальные подтипы IFN-) из стимулированных лейкоцитов здоровых доноров или лимфобластоидный IFN- из клеток Namalwa, либо CIFN, или новые молекулы IFN,полученные in vitro методом перетасовки ДНК и обладающие биологической активностью. Для применения в ветеринарии IFN типа I представлен теми интерферонами, что встречаются в или тесно связаны с тем видом, для которого приготовлена вакцина; опять же, такие IFN типа I могут быть рекомбинантными или природными, полученными из соответствующих клеток животных. Такие типы интерферона обладают приблизительно одинаковой адъювантной активностью. Количество интерферона, необходимое для достижения оптимальной адъювантной активности, зависит от типа антигена (скажем, его иммуногенности), но в типичном случае должно быть больше, чем 100 000 ЕД на дозу вакцины. У мышей оптимальные эффекты достигаются при введении высоких дозIFN типа I (2 х 105-106 ЕД на дозу вакцины. Оптимальная дозировка у человека заключается в пределах 106-6x106 ЕД на дозу вакцины. ПЭГилированные подтипы IFN типа I обладают преимуществом более высокого периода полужизни IFN in vivo после введения, что может быть полезным для достижения более выраженного и быстрого иммунного ответа. Слитые гибридные белки, представленные рекомбинантным IFN типа I, слитым с моноклональным антителом, способным достичь дендритных клеток (например, антителом к DEC-205 или к CD11 с), могут быть особенно эффективными адъювантами, которые можно включать в состав композиции адъюванта или вакцины с адъювантом. В дополнение к введению белка IFN или в качестве альтернативы адъювант также может быть представлен аминокислотной последовательностью с соответствующими регуляторными участками для ее правильной экспрессии, кодирующей один или более представителей IFN типа I (то есть плазмидой,содержащей ген, кодирующий IFN типа I, под контролем подходящего промотора и сигнальной последовательности терминации транскрипции, для экспрессии в эукариотической клеточной системе). Адъювантная активность касается любой части интерферона, способной усилить антигенспецифический иммунный ответ. Композиция по изобретению должна предпочтительно содержать и антиген, и адъювант, смешанные в одном флаконе, в физиологически приемлемых носителях (например, стерильном физрастворе,забуференном при физиологическом рН). В связи с этим вакцина с адъювантом по изобретению может включать один и даже несколько антигенов возбудителя инфекции или других источников, а также убитые или ослабленные патогены вместе с эффективным количеством биологически активного IFN типа I. Вакцина с адъювантом может также включать целые клетки, в частности, аутологичные дендритные клетки. Антигены для такой композиции могут быть представлены природным или рекомбинантным очищенным антигеном любого типа, включая белковые, пептидные, липидные или углеводородные антигены, происходящие из внутриклеточного или внеклеточного патогена, включая вирусы, бактерии, простейшие и грибы, а также клеточные антигены, связанные с опухолями. Количество антигена (антигенов), находящихся в одной дозе вакцины с адъювантом, выбирают как количество, способное индуцировать иммунозащитный ответ у вакцинированных лиц. Это количество зависит от конкретного антигена и возможного присутствия других типичных адъювантов. В общем,каждая доза должна содержать 1-1000 мкг антигена, предпочтительно 10-200 мкг.-9 006211 Антигены могут быть представлены любым из природных или рекомбинантных антигенов или его частью, происходящей из внутриклеточных или внеклеточных патогенов, а также и самим патогеном,включая вирусы (пикорнавирусы, калицивирусы, коронавирусы, аренавирусы, парвовирусы, тогавирусы,флавивирусы, коронавирусы, рабдовирусы, филовирусы, ортомиксовиусы, парамиксовиусы, буниавирусы, ретровирусы, паповавирусы, аденовирусы, герпесвирусы, поксвирусы, гепаднавирусы), бактерии(Streptococci, Staphylococci, Neisseria, Spirochetes, Clostridia, Corynebacteria, Listeria, Erysipelothrix, Anthrax, Mycobacteria, Enterobacteriaceae, Vibrio, Campylobacter, Helicobacter, Haemophilus, Bordetella, Brucella, Farncisella, Pasteurella, Yersinia, Chlamydia, Ricketsiae и другие неферментирующие грамотрицательные бациллы, Mycoplasma и Legionella, простейшие (Sarcodina, Ciliophora, Mastigophora, Sporozoa, Cryptosporodium, Pneumocystis), грибы (Coccidioidea, Histoplasma, Blastomycoses, Cryptococcus,Candida, Aspergillus, Mucorales, Zygomyces). Антигены, связанные с опухолями, включают антигены меланомы (антигены MART-1, gp100,MAGE), а также другие антигены, известные в этой области. Композиция адъюванта или вакцина с адъювантом по изобретению может быть составлена общепринятым способом, с использованием стерильных физиологически совместимых носителей, таких как физраствор, наполнителей, других адъювантов (если применимо), консервантов, стабилизаторов. Они могут находиться в жидкой или лиофилизованной форме, для растворения в стерильном носителе перед употреблением. В другом аспекте данное изобретение предоставляет способ формулирования вакцины с адъювантом, включающей антигены или их части из патогена, вместе с эффективным количеством биологически активного IFN типа I, действующего как адъювант, для доставки и антигена, и адъюванта одновременно по месту введения. Количество IFN типа I должно быть достаточно высоким для локального действия и в течение достаточного времени для оказания адъювантного эффекта. Важным аспектом вакцины с адъювантом является поддержание антигена и адъюванта смешанными вместе в той же самой относительной концентрации после инъекции и их одновременное предъявление антиген-представляющим клеткам, находящимся в месте инъекции, на которые антиген и адъювант оказывают свое функциональное действие. Наряду с применениями в области профилактических вакцин, благодаря способности IFN типа I действовать в качестве сильного адъюванта не только в отношении гуморального иммунитета, но и клеточных иммунных ответов, настоящее изобретение также распространяется на разработку терапевтических вакцин для лечения хронических заболеваний, таких как хронические вирусные инфекции и рак. В этом случае рецептура такой новой вакцины с адъювантом должна содержать опухолевый антиген или соответствующий вирусный антиген (или последовательность ДНК, кодирующую этот антиген),в комбинации с эффективным количеством IFN типа I, для введения пациентам при лечении рака или хронических вирусных заболеваний. Подкожное введение композиции адъюванта и вакцины или вакцины с адъювантом предпочтительно вследствие его простоты. Однако можно использовать любые другие способы введения, включая внутримышечное, интрадермальное и мукозальное (введение через слизистые оболочки типа интраназального и перорального). При некоторых вирусных инфекциях лучше всего выбрать интраназальное введение, которое ведет к индукции сильного защитного местного и/или системного иммунитета при использовании очень практичного способа введения вакцины. Настоящее изобретение также касается IFN типа I как сильного мукозального адъюванта. Идентификация мукозальных адъювантов является важной задачей исследований в области вакцин,так как индукция защитного мукозального иммунитета имеет решающее значение для местной иммунной защиты по месту проникновения патогена. При применении IFN типа I в качестве адъюванта для мукозальной вакцинации композицию можно смешивать с подходящими антигенами и вводить, к примеру, путем нанесения капель на слизистую оболочку рта или носа. Мукозальное введение обычно повышает продукцию антител, особенно IgG2a и/илиIgA, уже после первой иммунизации (фиг. 14, а и b). Мукозальное введение композиции адъюванта по изобретению вместе с вакциной индуцирует in vivo полный местный (мукозальный) и/или системный иммунитет против воздействия патогенов. Например, коммерчески доступная вакцина, полученная путем очистки вируса гриппа H1N1, циркулировавшего в 1995 г. (A/Beijing/262/95 (A/H1N1, оказалась слабо иммуногенной при инъекции мышам. Так, у значительного числа мышей не выработался заметный антительный ответ даже после трех инъекций вакцины. Когда же вакцину вводили внутримышечно вместе с IFN типа I, у 100% мышей наблюдалась сероконверсия после однократной иммунизации, и титры антител значительно повысились после второй инъекции. Кривая доза-ответ показала, что имеется линейная зависимость между дозой IFN и титром антител(фиг. 11). Анализ изотипа антител, специфичных к гриппу, показал увеличение подкласса антител IgG2a,являющегося типичным маркером защитного иммунного ответа типа Th1 у мышей (не показано). Интересно, что у мышей, получавших интраназально 50 мкл препарата, содержащего вакцину и IFN типа I,развивался системный и мукозальный антительный ответ, тогда как одна только вакцина была полностью неэффективна (фиг. 12 а). В частности, антительный ответ у мышей, иммунизированных вакциной с- 10006211 адъювантом, защищал мышей in vivo от летальной дозы вируса (фиг. 12b). Еще более важно то, что защита in vivo от летальной дозы вируса наблюдалась уже после однократной иммунизации, независимо от способа иммунизации. Кроме того, выживаемость животных после заражения оказалась совсем не связанной с повышением титра IgG. В действительности, как видно из фиг. 15, иммунизация одной только вакциной, хотя и приводила к значительному увеличению титра IgG, не вызывала заметного повышения выживаемости. Количество интерферона, необходимое для такого интраназального введения, близко тому, что требуется при подкожном введении. Например, как показывают результаты с вакциной от гриппа у мышей,одна подходящая доза IFN типа I может оказаться достаточной для индукции значительного уровня специфического имунного ответа. Однако введение дальнейших доз адъюванта через один или два дня после первой дозы вакцины с адъювантом в виде IFN увеличивает общую величину иммунного ответа. В частности, смешивание IFN типа I с соответствующим антигеном и квасцами перед инъекцией может оказаться выгодным (фиг. 6). Так, после адсорбции на квасцах однократное введение IFN мышам усиливало антигенспецифичный антительный ответ в такой же или большей степени, чем 3 инъекции растворимого IFN(фиг. 6). Усиливающее действие адсорбции на квасцах было наиболее выраженным в отношении продукции IgG2a, что свидетельствует о преимущественной реакции типа Th1. Соответственно, продолжительное присутствие IFN типа I в самом деле увеличивает его адъювантную активность. В этом отношении ПЭГилированный IFN типа I может обладать некоторым преимуществом вследствие его большого периода полужизни после инъекции. Более того, предусматривается и композиция вакцины, пригодная для применения у человека, которая отличается контролируемым и продолжительным высвобождением и антигена, и адъюванта. Такая композиция исходит из общепринятых методов улучшения функциональной активности терапевтических белков посредством составов для пролонгированного выделения. В таких методах применяются рецептуры, в которых белки подвергаются инкапсулированию в микросферы, состоящие из биодеградируемых полимеров или липосом, из которых они медленно выделяются. При необходимости, после введения первой дозы вакцины можно вводить повторные дозы пациентам, в зависимости от иммуногенности используемого антигена и параметра объема иммунизации, установленного для данной программы иммунизации. В качестве альтернативы адъювантный эффект IFN, даже если он и будет менее выраженным, можно получить при введении IFN типа I отдельно от антигена как часть набора, но только очень близко к месту введения антигена и в тоже самое время. Подкожное введение предпочтительно также в составе композиции из набора, вследствие его простоты. Однако можно применять и любые другие способы введения, включая внутримышечное, интрадермальное, интраназальное и пероральное введение. Количество интерферона, которое необходимо для этих способов применения, близко к тому, что требуется для подкожного введения. Настоящее изобретение основывается на следующих неожиданных основных результатах:i) одновременное введение мышам хорошо изученных антигенов в смеси с соответствующим количеством IFN типа I приводит к сильной индукции первичного антительного ответа, связанного с типичным иммунным ответом типа Th1 (фиг. 5, 6, 9), который превышает то, что наблюдается при использовании общедоступных адъювантов (фиг. 7), и не вызывает токсичности;ii) эндогенный IFN типа I является главным медиатором стимулирующих Th1 иммунных ответов,индуцируемых такими адъювантами, как IFA, CFA, CpG, при введении совместно со стандартными антигенами (фиг. 1-4, 8) (и все эти адъюванты представляют соответствующие проблемы безопасности при применении на человеке);iii) коммерчески доступная вакцина против гриппа, при введении мышам внутримышечно или интраназально вместе с соответствующим количеством IFN типа I, становится сильно иммуногенной и защищает от воздействия вируса (фиг. 11, 12). Значение и подробности этих результатов раскрываются на приведенных ниже примерах. Примеры Материалы и методы Мыши Мышей приобретали у фирмы Charles River-UK (Margate, Kent, UK), Charles River-Italy (Calco, Italy) или в группе SPF в Институте здоровья животных (Compton, UK). Мышей С 3 Н/HeJ приобретали у фирмы Harlan UK Ltd. (Blackthorn, UK). Мышей 129 SvEv (129) приобретали в группе SPF в Институте здоровья животных. Мышей на основе линии 129, дефектных по функции рецептора IFN типа I (IFN-IR KО),первоначально получили у фирмы ВK Universal (North Humberside, UK), содержали и разводили в группе SPF в Институте здоровья животных. ИнтерфероныIFN-/ с высоким титром порядка 107 ед/мг белка получали из клеток линии С 243-3 методом,представляющим адаптацию метода Tovey et al. (Tovey MG, Begon-Lours J and Gresser I. A method for thelarge scale production of potent interferon preparations. Proc Soc Exp Biol Med 146: 809-815, 1974). Конфлу- 11006211 энтные клетки примировали добавлением 10 ед/мл IFN в среде MEM с добавлением 10% FCS и 1 мМ бутирата натрия. После 16 ч культивирования при 37 С клетки С 243-3 инфицировали вирусом болезни Ньюкастл (повторность инфицирования = 1) в MEM + 0,5% FCS + 5 мМ теофиллина. Через 18 ч после инфицирования получали супернатант культуры и центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин. Супернатант доводили до рН 2,0 и выдерживали 6 дней при 0 С, а затем титровали IFN. IFN определяли по ингибированию цитопатогенного эффекта вируса везикулярного стоматита на клетки L в монослойной культуре в микропланшетах Falcon. Эти препараты IFN обладали удельной активностью 2 х 106 ед/мг белка после удаления центрифугированием примесного белка, который выпадал в осадок во время обработки при рН 2,0 и диализа противPBS. Единицы в тексте выражены в виде международных единиц по мышиному стандарту. IFN концентрировали и частично очищали посредством осаждения сульфатом аммония и диализа против PBS. Все препараты дополнительно подвергали диализу в течение 24 ч при 4 С против 0,01 М хлорной кислоты, а затем против PBS, после чего тестировали на возможную остаточную токсичность на клетках линииL1210, резистентных к IFN. Эти частично очищенные препараты IFN имели титр не менее 2 х 107 ед/мг белка и были свободны от эндотоксина, как показывает определение на амебоцитах Limulus. Как оказалось, они состоят из IFN- примерно на 75% и IFN- на 25%, как показывает определение методом нейтрализации с помощью mAbs к IFN, как описано подробно в Bellardelli et al. "Studies on the expression ofmouse interferons", J Gen Virol 68: 2203-2212, 1987. Очищенный IFN- с высоким титром (2 х 109 ед/мг белка) получали методом аффинной хроматографии на колонке с сефарозой, конъюгированной с моноклональными антителами крыс к IFN- (Kawade Y and Watanabe Y. Characterization of rat monoclonal antibodies to mouse interferonand . Proceedings of the third international TNO meeting on the biology of theLtd, Luton, UK, и Sigma Chemical Co. Вакцина против гриппа - это субъединичная одновалентная вакцина Х-127, полученная из штамма вируса гриппа A/Beijing/262/95 (H1/N1) и любезно предоставленная ChironCorporation (Emeryville, CA). Антигены растворяли в PBS и стерилизировали фильтрованием. Неполный (IFA) и полный (CFA) адъюванты Фрейнда (Sigma Chemical Co.) смешивали с раствором антигена в соотношении 1:1 и эмульгировали с помощью двух стеклянных шприцев и вставной перемычки до получения стабильной эмульсии. Квасцы (гель гидроокиси алюминия, Sigma Chemical Co.) растворяли в растворе антигена в соотношении 1:20 (вес/об) и доводили до рН 6,5. После инкубации 1 ч при комнатной температуре раствор центрифугировали и осадок ресуспендировали в прежнем объеме физраствора. ODN CpG (CpG) был синтезирован фирмой Roche Diagnostics, Milan, Italy. 200 мкг CpG растворяли до конечного объема 1 мл в растворе, содержащем 200 мкг OVA. Данный CpG получен на фосфоротиоатной основе и имеет последовательность TsGsAsCsTsGsTsGsAsAsCsGsTsTsCsGsAsGsAsTsGsA. Полиинозиновую-полицитидиловую кислоту (поли(IС (Sigma Chemical Co.) растворяли в физрастворе до концентрации 10 мг/мл. Замороженные порции оттаивали непосредственно перед каждым экспериментом и вводили внутрибрюшинно 0,15 мг поли(IС) в объеме физраствора 0,15 мл.MF59 смешивали с раствором антигена в соотношении 1:1 и эмульгировали с помощью пипетки. Протоколы иммунизации при помощи куриного -глобулина (CGG) Все иммунизации проводили путем подкожного введения 100 мкг CGG. CGG вводили в растворимом виде (в PBS) как при введении одного CGG, так и в смеси со 100 мкг поли(IС) (Sigma Chemical Co.Ltd, Dorset, UK), 105 ед. IFN- или 105 ед. очищенного IFN-, как указано. При введении вместе с адъювантом Titermax (CytRx Corporation, Norcross, GA), IFA (Sigma) или CFA (Sigma) вместе с ним эмульгировали равный объем CGG в PBS перед инъекцией. В некоторых экспериментах IFN типа I, Titermax илиIFA вводили по несколько раз. Во всех случаях инъекции мышам делали подкожно в месте первой инъекции. При тестировании иммунологической "памяти" у мышей брали пробы крови непосредственно перед проведением пробы с CGG, чтобы определить уровень антител до провокационной пробы. У тех же мышей брали пробы крови через 6 дней пробы с CGG. Протоколы иммунизации овальбумином (OVA) За исключением поли(IС), все адъюванты всегда вводили интрадермально в объеме 50 мкл/мышь вместе с OVA или без него. Концентрация OVA всегда составляла 10 мкг/мышь. Использовали два разных протокола иммунизации. Для получения хорошей антительной реакции и пролиферации мышам в день 0 вводили OVA + адъювант и через 10 и 17 дней повторно иммунизировали одним OVA. С другой стороны, для определения отсроченной гиперчувствительности (DTH) мышам вводили OVA + адъювант и в день 0, и через 10 и 17 дней. Все опыты по иммунизации также включали серии, состоящие из обработки одним OVA и физраствором в качестве контроля. Пробы крови брали из ретро-орбитального венозного узла непосредственно перед введением антигена. Получали сыворотки и хранили при -20 С до проведения анализа.- 12006211 Протоколы иммунизации вакциной против гриппа (FLU) При внутримышечной иммунизации мышам вводили 200 мкл (конечный объем) раствора, содержащего вакцину (15 мкг) и физраствор, вакцину (15 мкг) и IFN (2 х 105 ед.) либо один физраствор. При интраназальной иммунизации мышам под легким наркозом вводили в нос каплю (50 мкл) раствора, содержащего такие же количества вакцины и физраствора, вакцины и IFN либо одного физраствора. Для повторной иммунизации применяли дозы, содержащие такие же количества вакцины и физраствора, через 14 дней после первичной иммунизации. Определение антител в сыворотке методом ELISA Микроплашки на 96 лунок (Falcon, Becton Dickinson, Oxford, UK) покрывали CGG (5 мкг/мл в карбонатном буфере рН 9,6) в течение ночи при комнатной температуре. Плашки блокировали с помощью(0,05%) в PBS. В лунки добавляли 12-кратные серийные разведения сывороток в PBS с 1% молока на 1 час при комнатной температуре. После 3 отмывок в лунки добавляли биотинилированные антитела крыс против мышей [anti-mouse IgM (R6-60.2), IgG1 (A85-1), IgG2a (R19-15), IgG2b (12-3), IgG3 (R40-82) илиIgE (R35-72) (Becton Dickinson)] на 1 ч при комнатной температуре. После 3 отмывок добавляли стрептавидин-HRP (Becton Dickinson) на 1 ч при комнатной температуре. В качестве субстрата пероксидазы использовали таблетки OPD (Sigma). Реакцию останавливали добавлением 50 мкл 3 М НСl перед тем, как самое высокое разведение сыворотки с наибольшим титром повышалось выше уровня фона. Оптические плотности измеряли при 492 нм на приборе SPECTRAmax (Molecular Devices, Sunnyvale,CA). Результаты выражали в виде величин, обратных конечным титрам, которые определяли с помощью автоматизированной программы на основе Excel. Рассчитывали порог положительности для значенийOD по каждому изотипу антител как среднее + 3 SD из всех разведений 3 сывороток контрольных мышей (сыворотки мышей, не подвергавшихся обработке, или мышей, получавших один IFN-/ или поли(IС). Фоновый уровень был очень низким у всех разведений (обычно около 0,08) и не проявлял значительных колебаний от опыта к опыту. Для данного образца сыворотки конечный титр определяли как первое разведение ниже порога положительности. Поскольку конечные титры представлены в произвольных единицах, то результаты следует рассматривать только в пределах одной серии определений и нельзя сравнивать между различными экспериментами. По этой причине все образцы в каждом эксперименте анализировали в одно и то же время. Для определения приблизительной концентрации CGG-специфичных антител в сыворотках мышей анализ методом ELISA проводили полуколичественным способом, путем сравнения со стандартами Ig мышей. Детектирование CGG-специфичных антител осуществляли как описано выше, только антитела проявляли с помощью конъюгированных со щелочной фосфатазой (ЩФ), специфичных к изотипу поликлональных козьих антител против мышей (все от фирмы Southern Biotechnology Associates Inc., Birmingham, AL, USA). Для создания стандартов плашки покрывали немеченными, специфичными к изотипу, поликлональными козьими антителами против мышей (5 мкг/мл) (Southern Biotechnology). Плашки блокировали, как описано выше, а затем добавляли очищенные мышиные антитела (набор стандартов мышиных Ig фирмы Southern Biotechnology). После отмывки все стандарты проявляли с помощью конъюгированных со ЩФ, специфичных к изотипу, поликлональных козьих антител против мышей. В качестве субстрата ЩФ использовали таблетки p-NPP (Sigma). Реакцию фермента останавливали добавлением 3 М NaOH. Измеряли OD при 405 нм. С помощью программы SoftmaxPro (Molecular Devices,Sunnyvale, CA) строили стандартные кривые для каждого изотипа и рассчитывали содержание CGGспецифичных антител. Для измерения содержания OVA-специфичных антител проводили стандартный, прямой анализ методом ELISA. Микропланшеты на 96 лунок с плоским дном (DYNEX Immulon 4MBX) покрывали овальбумином (Sigma Chemical Co., St. Louis, МО) по 100 мкл его раствора 1 мкг/мл (для выявления всех IgG) или 4 мкг/мл (для выявления IgG2a и IgG1) в NaHCO3-бyфepe, рН 9,6 (покрывной буфер). После инкубации в течение ночи при 4 С плашки отмывали 3 раза с помощью PBS +0,01% Tween 20 (отмывочный раствор) и блокировали с помощью PBS, содержащего 5% бычьего сывороточного альбумина (SigmaChemical Co., St. Louis, МО), в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл заранее разведенных (до 1:2) образцов сывороток и инкубировали 1 ч 30 мин при 37 С. После отмывки планшеты инкубировали 1 ч при 37 С в присутствии 100 мкл конъюгированного с пероксидазой вторичного антитела. Использовали следующие вторичные антитела: против всех IgG мышей (SigmaProducts, Durham, NC), разведенное 1:200; против IgG1 мышей (Cappel Research Products, Durham, NC),разведенное 1:400. По окончании инкубации планшеты отмывали 3 раза и в каждую лунку добавляли по 100 мкл раствора субстрата фермента (4 мг ортофенилендиамина в 20 мл 0,1 М фосфат-цитратного буфера, содержащего 0,001% H2O2) и оставляли в темноте примерно на 20 мин. Реакцию фермента останавливали с помощью 50 мкл 4N H2SO4 и планшеты помещали в считывающее устройство при 450 нм. Результаты выражали как среднее конечное разведение из 3 сывороток на 1 экспериментальное условие, причем конечное разведение определяли как такое конечное разведение сыворотки, которое дает значение- 13006211 поглощения, превышающее среднее значение + 2 SD из трех образцов отрицательного контроля, включаемых в каждую серию определений. Получение и введение дендритных клеток (DC)DC выделяли из селезенки ранее описанным методом (Vremec D et al. "The surface phenotype of dendritic cells purified from mouse thymus and spleen: investigation of the CD8 expression by a subpopulation ofdendritic cells" J Exp Med 176: 47-58, 1992). Селезенки из мышей линии 129 или мышей IFN-IR KО нарезали на мелкие кусочки и расщепляли в среде RPMI, содержащей 5% FCS, коллагеназу III (1 мг/мл, LorneLaboratories, Reading, UK) и ДНКазу I (Sigma, St. Louis, МО), в течение 5 мин при 37 С и еще 15 мин при комнатной температуре. Обогащенные DC-клетками популяции получали при помощи градиентов Nycodenz (Life Technology Paisley, UK). Клеточные фракции низкой плотности подвергали мечению с помощью анти-CD11c-FITC (Becton Dickinson, Oxford, UK) в PBS-EDTA-FCS в течение 20 мин на льду. После отмывки клетки фильтровали (сито на 70 мкм, Falcon) и сортировали клетки CD11c+ на проточном цитометре MoFlow (Cytomation, Fort Collins, CO), при этом в конечной популяции CD11 с+ составляли 98%. После 2 отмывок в PBS очищенные DC инкубировали либо в одном PBS, либо в PBS, содержащем 100 мкг CGG, в течение 30 мин при 37 С. Отбирали 5-7 х 105 клеток DC, вместе с CGG или без него, и вводили подкожно мышам IFN-IR KО 105 ед. IFN-/. Мышам, получавшим CGG + DC + IFN-/, через 1 и 2 дня дополнительно вводили подкожно 105 ед. IFN-/. Анализ пролиферации Т-клеток и определение цитокинов Анализ CGG-специфичной пролиферации Проточные лимфатические узлы (DrLNs) нарезали на мелкие кусочки и расщепляли в среде RPMI,содержащей 5% FCS, коллагеназу III (1 мг/мл) и ДНКазу I (0,6 мг/мл) в течение 20 мин при комнатной температуре с частым помешиванием. Затем суспензии клеток фильтровали (70 мкм), промывали и центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин. Для анализа пролиферации неразделенные клетки (5 х 105 клеток/лунку) культивировали в полной среде (RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированного нагреванием FCS (PAA Laboratories), 50 мкМ 2-МЕ (Sigma), 10 мМ HEPES, 5% среды NCTC, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 250 мкг/мл гентамицина (все от фирмы Life Technologies по 3 повтора в 96-луночных плашкахCGG (20 мкг/лунку). На 4-й день культивирования в лунки вносили по 1 мкКи [3H]-тимидина на 8 ч. Затем планшеты убирали и измеряли включение [3H]-тимидина на счетчикеMicroBeta TRILUX (Wallac, Turku, Finland). Для определения цитокинов клетки DrLN инкубировали с антителами анти-Class II (TIB120), aнти-CD8 (3155) и анти-CD11b (М 1/70) в течение 15 мин на льду. После отмывки Т-клетки CD4+ очищали путем отрицательной селекции с помощью овечьих антител к IgG крыс и к IgG мышей на магнитных шариках Dynabeads (Dynal, Oslo, Norway). Отбирали 2 х 104 очищенных Т-клеток CD4+ и культивировали в полной среде по 3 повтора в 96-луночных плашках вместе с 5 х 105 Т-обедненных спленоцитов из неподвергавшихся обработке сингенных мышей. Т-обедненные спленоциты получали путем инкубации клеток селезенки в течение 45 мин при 37 С с крысиными антителами к Thy-1 мышей (Т 24) и комплемента морских свинок (VH BIO Ltd, Gosford, UK). Перед культивированием Т-обедненные спленоциты преинкубировалиCGG (20 мкг/лунку) в течение 1 ч при 37 С и облучали в дозе 3000 рад. После 3 дней культивирования отбирали супернатанты и измеряли цитокины с помощью наборов Quantikine M для IFN- и IL-4 мышей фирмы RD (Abingdon, Oxon, UK) согласно инструкциям производителя. Анализ OVA-специфичной пролиферации Для анализа антиген-индуцированной пролиферации мышей забивали через 32-35 дней после первой иммунизации. Клетки из суспензии клеток селезенки, полученной из одной селезенки каждой из мышей, культивировали в 96-луночном планшете с плоским дном при концентрации 5 х 105 клеток в 0,2 мл/лунку в среде RPMI с 10% FCS, содержащей различные концентрации OVA (0, 50, 100 и 200 мкг/мл). После 4 дней инкубации при 37 С в увлажненной атмосфере 5% СО 2 добавляли 0,5 мкКи 3H-тимидина(DuPont-NEN, Boston, MA). После следующих 18 ч инкубации клетки собирали с помощью фильтровальной установки Filtermate A (Wallac, Turku, Finland) и измеряли радиоактивность на сцинтиллятореBetaplate (Wallac, Turku, Finland). Результаты выражали как среднее число cpmSD из 3 мышей при определении по 3 повторам.CGG-специфичный анализ методом ELISpot Стерильные плашки для ELISpot Multi-Screen-IP (Millipore, Walford, UK) в течение ночи покрывалиCGG (20 мкг/мл в карбонатном буфере, рН 9,6). После 5 отмывок в PBS планшеты блокировали в течение 2 часов раствором 4% молока в PBS при 37 С и отмывали 5 раз в PBS. Суспензии клеток из DrLNs получали, как описано выше, промывали, центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин и ресуспендировали в полной среде с добавлением 15% FCS. Все образцы высевали в 3 повторах при нескольких различных концентрациях (от 2 х 104 до 5 х 105 клеток/лунку). После культивирования в течение ночи при 37 С в атмосфере 5% CO2 планшеты тщательно промывали раствором PBS-Tween (0,05%). CGG-специфичные антитела выявляли при инкубации лунок со специфичньми к изотипу поликлональными козьими антителами против мышей, конъюгированными со ЩФ (Southern Biotechnology) в течение 2 ч при комнатной температуре. После отмывки в качестве субстрата ЩФ использовали BCIP (Sigma), разведенный до 1- 14006211 мг/мл в 0,1 М трис/HCl, рН 9,5, 10% диэтаноламина, 0,1M NaCl, 5 мМ MgCl2. Реакцию останавливали промыванием планшет водой из-под крана. Пятна просчитывали под микроскопом. Пример 1. Антительные ответы у мышей, иммунизированных CGG + поли(IС): важность IFN типа I Способность IFN типа I действовать в качестве адъюванта сначала тестировали с применением синтетической двунитчатой РНК - полиинозиновой: полицитидиловой кислоты (поли(IС для индукции выработки IFN типа I in vivo. Мышей C57BL/6 (В 6) иммунизировали путем подкожного введения куриного -глобулина (CGG) в PBS и исследовали эффекты совместного введения поли(IС). При иммунизации мышам В 6 вводили подкожно 100 мкг CGG в PBS или такое же количество CGG в смеси со 100 мкг поли(IС) в PBS. Через 10 дней после иммунизации анализировали сыворотки методом ELISA на присутствие различных изотипов CGG-специфичных антител. Соответствующие результаты представлены на фиг. 1 А. Сам CGG был слабо иммуногенным, и реакция в основном ограничивалась антителами подкласса IgG1, a антитела IgM, IgG2b, IgG2a и IgG3 обнаруживались на очень низком уровне. Совместное введение поли(IС) вызывало четкое повышение титра CGG-специфичных антител, которое распространялось на все подклассы IgG (фиг. 1 А). Оно включало повышение титров антител IgG1, IgG2b, IgG2a и IgG3 в 3, 4,2, 9 и 8,4 раза, соответственно. Хотя поли(IС), как известно, является сильным индуктором IFN типа I, однако он индуцирует и другие цитокины. Поэтому было важно установить, зависит ли на самом деле адъювантная активность поли(IC) от IFN типа I. С этой целью сравнивали способность поли(IC) усиливать антительные ответы у мышей, не имеющих функционального рецептора IFN типа I (мышей IFN-IR КО на основе линии 129), и контрольных мышей линии 129 (иммунизация проводилась, как описано выше). Как и у мышей В 6, поли(IC) заметно усиливал антительный ответ на CGG у контрольных мышей 129 (фиг. 1 В). Однако эта способность поли(IC) была сильно снижена у мышей IFN-IR KО. Наблюдалось небольшое повышение титров IgM, IgG1 и IgG2b у мышей IFN-IR KО, что свидетельствует о том, что поли(IC) может усиливать выработку этих изотипов независимо от IFN типа I. Однако большая часть эффекта поли(IC) зависела от IFN типа I, так как титры этих антител были значительно ниже у мышейIFN-IR KО, чем у контрольных мышей. Более того, продукция антител к CGG типа IgG2a и IgG3 вообще не стимулировалась поли(IC) у мышей IFN-IR KО. В совокупности эти данные показывают, что индукция экспрессии IFN типа I в организме хозяина вызывает заметное повышение антительного ответа на растворимый белковый антиген,что распространяется на все подклассы антител IgG. Пример 2. Антительные ответы у мышей, иммунизированных OVA + адъювантами: важность IFN типа I Мышам делали первую иммунизацию путем интрадермального введения OVA, OVA + IFA, OVA +CFA, OVA + CpG или OVA + квасцы. Доза антигена составляла 10 мкг в 50 мкл, IFA и CFA смешивали с антигеном в соотношении 1:1 и эмульгировали до получения стабильной эмульсии, CpG использовали в количестве 10 мкг и смешивали с антигеном, а квасцы использовали в количестве, достаточном для абсорбции OVA. После первой иммунизации проводили второе (10-й день) и третье (17-й день) введение одного лишь OVA. Контрольным мышам вводили физраствор. Результаты показали, что сам OVA был слабо иммуногенным, вызывая очень низкие антительные ответы, тогда как совместное введение адъюванта вызывало повышение OVA-специфичного антительного ответа (фиг. 2). Это повышение было особенно заметным в случае IFA, CFA или CpG и менее заметным в случае квасцов. Определение подклассов IgG показало, что IFA и CFA действовали как эффективные адъюванты для двух подклассов IgG1 иIgG2a (которые обычно связаны с антительными ответами типа Th-2 и Th-1, соответственно) (фиг. 2 А),тогда как CpG был более специфичным к IgG2a (тип Th-1), а квасцы - к IgG1 (тип Th-2) (фиг. 2 В). Чтобы установить, обусловлена ли адъювантная активность IFN типа I, сравнили способность всех этих адъювантов к усилению антительных ответов у мышей, не имеющих функционального рецептора IFN типа IIgG3 лишь слегка повышались у мышей IFN-IR KО по сравнению с контрольными мышами (фиг. 2 А и 2 В). Этим подтверждается, что IFN типа I играет функциональную роль в усилении антительных ответов, вызываемых типичными адъювантами, стимулирующими Th-1. Пример 3. Пролиферация и продукция IFN- in vitro Т-клетками из мышей, иммунизированныхCGG + поли(IC): важность IFN типа I Также оценивали влияние IFN типа I на примирование Т-клеток. Сначала это осуществлялось путем измерения способности Т-клеток лимфатических узлов к пролиферации при повторной стимуляции с помощью CGG in vitro. Проточные лимфатические узлы (DrLN) извлекали через 10 дней после иммунизации (как описано в примере 1) и полученные суспензии клеток культивировали в присутствии и в отсутствие CGG. Совместное с CGG введение поли(IC) у контрольных мышей (линии 129) приводило к значительно большей CGG-специфичной пролиферации in vitro, чем иммунизация одним лишь CGG(фиг. 3 А), а добавление BrdU показало, что большая часть пролиферирующих in vitro клеток представлена CD4+ (данные не приводятся). Усиление примирования Т-клеток частично не зависело от IFN типа I,поскольку введение поли(IC) мышам IFN-IR KО также вело к некоторому повышению пролиферации invitro (фиг. 3 А). Однако пролиферация клеток из мышей IFN-IR KО, получавших CGG + поли(IC), была значительно ниже, чем у клеток из контрольных мышей, получавших CGG + поли(IС), свидетельствуя,что IFN типа I в самом деле сильно усиливает Т-клеточный ответ in vivo. Это также стало ясным при исследовании продукции цитокинов повторно стимулированными Т-клетками CD4+ in vitro (фиг. 3 В). Таким образом, хотя клетки CD4+ из DrLN мышей, иммунизированных одним лишь CGG, почти не секретировали IFN- при стимуляции CGG in vitro, однако значительно большее количество IFN- вырабатывалось клетками CD4+ из мышей, получавших поли(IC) + CGG. Важно и то, что поли(IC) усиливал примирование секретирующих IFN- Т-клеток CD4+ в значительно большей степени у контрольных мышей, чем у мышей IFN-IR KО. Напротив, IL-4 секретировался в низких количествах клетками CD4+ во всех группах, и они не отличались значительно друг от друга. Таким образом, индукция IFN типа I invivo усиливает примирование Т-клеток, стимулируя выработку секретирующих IFN- T-клеток CD4+. Пример 4. Роль эндогенного IFN типа I в пролиферации Т-клеток in vitro и в реакции отсроченной гиперчувствительности (DTH) у мышей, иммунизированных OVA + адъювантами По окончании иммунизации, описанной в примере 2, мышей забивали и извлекали селезенку для анализа на пролиферацию против OVA. На фиг. 4 представлены результаты по захвату 3H-тимидина спленоцитами, культивированными в среде, содержащей 100 мкг OVA. В этом опыте все клетки селезенки, происходившие из мышей IFN-IR+/+, иммунизированных OVA, OVA + CFA (фиг. 4 А) или OVA, OVA+ CpG или OVA + квасцы (фиг. 4 В), проявляли значительную пролиферацию (кроме OVA + квасцы) по сравнению с получавшими физраствор контролями, тогда как пролиферация не обнаруживалась ни в одной опытной группе мышей IFN-IR KО. В параллельном эксперименте некоторых нормальных мышей и мышей IFN-IR KО иммунизировали по слегка измененному протоколу, в котором адъюванты вводили также при второй и третьей иммунизации, а затем делали провокационную пробу на введение OVA в подушечку лап для измерения реакции DTH (фиг. 4 С и 4D). Недостаточная реакция DTH у мышей IFNIR KО по сравнению с контрольными свидетельствует, что индуцированная адъювантами реакция DTH опосредована эндогенным IFN типа I. В этой связи следует отметить, что все адъюванты, способные вызывать DTH, также стимулируют продукцию IFN типа I при введении мышам (не показано). Пример 5. Стимуляция первичных антительных ответов при введении IFN типа I Влияние экзогенного IFN типа I на антительные ответы сначала исследовали с применением частично очищенных препаратов мышиного IFN типа I с высоким титром, который содержал как IFN-, так и IFN-. Мышам В 6 вводили подкожно 100 мкг одного CGG или такую же дозу CGG + 105 ед. IFN-/(IFN 1X). Кроме того, отдельным группам мышей, получивших CGG + IFN-/, делали вторую подкожную инъекцию одного лишь IFN-/ (105 ед.) через 1 день (IFN 2X) либо подкожные инъекции IFN-/(105 ед.) через 1 день и через 2 дня (IFN 3 Х). Как показывает фиг. 5 А, введение мышам IFN-/ сильно увеличивает CGG-специфичный антительный ответ, причем этот эффект наиболее выражен у мышей,получавших 3 инъекции IFN типа I, и проявляется по всем подклассам IgG. CGG-специфичный IgE не обнаруживался ни в одной группе мышей (данные не приводятся). Введение IFN-/ сходным образом усиливало антительный ответ у мышей С 3 Н/HeJ, нечувствительных к LPS, что исключает возможность загрязнения эндотоксином (данные не приводятся). Аналогичный эксперимент проводили с применением IFN-, очищенного методом аффинной хроматографии (фиг. 5 В). В этом случае было достаточно одной инъекции IFN- для усиления первичного антительного ответа, хотя, как и в случае частично очищенного IFN-/, самые высокие титры антител получали после трех инъекций IFN-. После одной, двух и трех инъекций IFN- титры антител повышались соответственно в 5, 6 и 8 раз в отношении IgM, в 6,4, 8,5 и 12,8 раз в отношении IgG1, в 13,3, 16 и 26,6 раз в отношении IgG2b, в 25,6, 32 и 153,6 раз в отношении IgG2a, в 16,6, 64 и 117,3 раз в отношенииIgG3. В сочетании с экспериментом с применением частично очищенного IFN-/ эти результаты ясно показывают, что введение IFN типа I на ранней стадии иммунного ответа заметно увеличивает антительный ответ на растворимый белковый антиген. Пример 6. Антительный ответ у мышей, иммунизированных CGG + IFN типа I, предварительно адсорбированном на квасцах Чтобы установить, будет ли пролонгирование периода полужизни IFN типа I усиливать его способность действовать в качестве адъюванта, IFN-/ типа I смешивали с CGG (100 мкг) и с насыщающим количеством квасцов перед подкожным введением; было показано, что такая стратегия сильно увеличивает адъювантные свойства IL-12 (24). На удивление, после адсорбции на квасцах однократная инъекцияIFN типа I повышала CGG-специфичный антительный ответ в такой же или в большей степени, чем 3 инъекции растворимого IFN типа I (фиг. 6). Усиливающее действие преадсорбции на квасцах было наиболее выраженным в отношении продукции IgG2a. Такой результат свидетельствует, что пролонгирование присутствия IFN типа I действительно повышает его адъювантную активность и может иметь практические последствия для применения- 16006211 Пример 7. Сравнение IFN типа I с другими адъювантами Для дальнейшей оценки эффективности IFN типа I в качестве адъюванта проводили сравнение его с коммерческими адъювантами по способности усиливать первичный антительный ответ. Сначала проводили сравнение с двумя масляными адъювантами: неполным адъювантом Фрейнда (IFA) и Titermax. Адъюванты смешивали с раствором антигена, содержащим 100 мкг CGG, в соотношении 1:1, и эмульгировали до получения стабильной эмульсии. Затем иммунизировали мышей и анализировали сыворотки на наличие антител к CGG. Хотя IFA и Titermax вызывали более высокие уровни антител IgG1,однако IFN типа I был равносилен этим адъювантам в способности индуцировать антитела IgM и IgG2b и сильно превосходил в повышении продукции антител IgG2a и IgG3 (фиг. 7). В качестве более жесткого теста адъювантной активности IFN типа I сравнивали с полным адъювантом Фрейнда (CFA). CFA уже давно считается "золотым стандартом" для адъювантной активности у мышей, также известно, что он повышает продукцию антител всех изотипов. Итак, сравнивали титрыCGG-специфичных антител через 10 дней после иммунизации у контрольных мышей (дикий тип 129) и мышей IFN-IR KО, которым вводили один CGG, CGG + CFA или CGG + IFN-/ (фиг. 8). У контрольных мышей титры антител были выше у тех, которым вводили CGG + IFN-/ или CGG+ CFA, чем у тех, которых иммунизировали одним CGG. Примечательно, что адъювантная активностьIFN-/ не уступала активности CFA. В самом деле, хотя CFA и индуцировал более высокие титры антител IgM (но лишь на фоне линии 129), однако IFN-/ вызывал близкие титры антител IgG1 и IgG2b. Более того, IFN-/ индуцировал более высокие, чем CFA, уровни антител IgG2a и, по крайней мере, на фоне 129sv, IgG3. Таким образом, эти результаты свидетельствуют, что IFN-/ действительно обладает сильной адъювантной активностью. Эти эффекты особенно значительны, если учесть, что сравнению подвергались ответы на растворимый белок + растворимый IFN-/, которые могут быстро подвергнуться клиренсу, причем сравнивали с масляной эмульсией CFA, которая может оставаться на месте инъекции в течение длительного времени. Пример 8. Роль эндогенного IFN типа I в адъювантной активности CFA и в стимуляции ответа только на введение белка Значительное отличие между адъювантным действием CFA и IFA или Titermax состоит в том, что лишь первый способен индуцировать значительные титры антител IgG2a или IgG3. Поскольку это свойство присуще и IFN типа I, оно поднимает вопрос о том, связана ли такая способность CFA с индукцией эндогенного IFN типа I этим адъювантом. Возможность того, что CFA индуцирует IFN типа I, весьма вероятна, учитывая, что главным компонентом CFA являются убитые нагреванием микобактерии, а такие бактериальные компоненты, как ДНК CpG, как известно, стимулируют продукцию IFN типа I. Для проверки этой гипотезы сравнивали способность IFN-/ и CFA усиливать антительный ответ на CGG у мышей IFN-IR KО по сравнению с контрольными мышами (фиг. 8). Как и ожидалось, IFN-/ был совершенно не способен усиливать ответ на CGG у мышей IFN-IR КО. Важно отметить, что и способность CFA усиливать антительный ответ также была сильно нарушена у мышей IFN-IR KО. ХотяCFA все-таки индуцировал высокие титры антител IgG1 у мышей IFN-IR KО, однако уже не отмечалось повышения антител IgM, IgG2b, IgG2a или IgG3 по сравнению с иммунизацией одним CGG. Эти результаты свидетельствуют о важной роли IFN типа I в адъювантной активности CFA. Пример 9. Индукция долговременной продукции антител и "памяти" посредством IFN типа I Убедившись в том, что IFN типа I повышает первичный антительный ответ, представляло интерес установить, является ли этот ответ долговременным. Сначала проверка на долговременную продукцию антител проводилась путем анализа сывороток мышей через 6 месяцев после однократной инъекцииCGG либо CGG + 3 инъекции IFN-/, как описано в примере 5 (фиг. 9 А). У мышей, примированных одним CGG, уровни CGG-специфичных антител были чрезвычайно низкими через 6 мес. Наоборот, в сыворотке мышей, примированных CGG + IFN-/, сохранялись значительные титрыCGG-специфичных антител. За исключением IgG3, титры которого были очень низкими и не отличались статистически от титров у мышей, примированных одним CGG, присутствовали антитела всех исследуемых изотипов. Таким образом, введение IFN типа I во время примирования вызывает долговременную продукцию антител. Оставалось спорным, поддерживается ли долговременная продукция антител долгоживущими плазматическими клетками или же она идет через восполнение продуцирующих антитела клеток из Вклеток памяти. Следовательно, представляло интерес выяснение того, происходит ли также индукция"памяти" при иммунизации в присутствии IFN типа I. С этой целью исследовали способность мышей,примированных за 6 месяцев до этого, к оказанию вторичного ответа на CGG. Итак, мышам, которым за 6 месяцев до этого вводили один CGG либо CGG + 3 инъекции IFN-/, делали повторные инъекции одного CGG (100 мкг). Чтобы свести к минимуму вклад от первичного ответа на CGG, вторичный ответ исследовали на 6-й день после пробы и в качестве контроля использовали "наивных", непримированных мышей. Сравнивали титры CGG-специфичных антител у мышей до и после повторного введения CGG- 17006211 У мышей, примированных за 6 мес. до этого одним CGG, реакция на пробу с CGG не отличалась от реакции у "наивных" мышей, свидетельствуя, что через 6 мес. после примирования одним CGG никакой"памяти" на CGG не осталось. В разительном отличии от этого, однако, у мышей, примированных за 6 месяцев до того CGG + IFN-/, возникала быстрая вторичная реакция на CGG. Однако вторичный ответ, по-видимому, ограничивался изотипами антител IgG2b и IgG2a, несмотря на то, что у этих мышей сохранялись высокие титры антител IgG1. Эти результаты четко свидетельствуют, что IFN типа I способствует выработке долговременной "памяти" после однократного введения растворимого белкового антигена. Пример 10. Усиление антительного ответа и переключение изотипа происходят посредством стимуляции IFN типа I дендритных клеток Несмотря на то, что IFN типа I явно способен заметно усиливать как величину антительного ответа, так и переключение между различными подклассами IgG, механизм его действия in vivo оставался неясным. Мы разработали модель приемного переноса, в которой дендритные клетки (DC) были единственными клетками, способными к реакции на IFN-/. В этих опытах 5-7 х 105 высокоочищенных клеток DC из селезенки мышей дикого типа линии 129 или мышей IFN-IR KО инкубировали быстро в присутствии 100 мкг CGG и вводили подкожно мышам-реципиентам IFN-IR KО вместе с IFN-/ (105 ед.) или без него. Мышам, получившим CGG + DC +IFN-/, делали две дополнительные инъекции IFN-/, как перед этим. Затем измеряли титры CGGспецифичных антител на 10-й день после иммунизации (фиг. 10). Как и ожидалось, введение IFN-/ мышам, получившим до этого CGG + DC из мышей IFN-IR КО,не вызывало усиления антительного ответа, так как у этих мышей не было клеток, способных к реакции на IFN типа I. Напротив, введение IFN-/ мышам, получившим до этого CGG + DC дикого типа, вызывало повышение титра антител из всех 4 подклассов IgG по сравнению с введением только CGG + DC дикого типа. Таким образом, стимуляция DC посредством IFN типа I не только усиливает антительный ответ на введенный совместно с ним белок, но она достаточна и для переключения изотипа. Пример 11. Антительный ответ у мышей, иммунизированных вакциной против гриппа с IFN типа I в качестве адъюванта Мышам C57BL/6 (В 6) вводили внутримышечно или интраназально 15 мкг очищенной субъединичной вакцины против гриппа, одной или вместе с 2 х 105 ед. IFN типа I. Через 7 или 14 дней после иммунизации сыворотки анализировали методом ELISA на присутствие специфичных к гриппу антител. Введение вместе с IFN типа I оказывало сильный дозозависимый адъювантный эффект на специфичный к гриппу антительный ответ (фиг. 11 А). Как показывает фиг. 11 В, продолжение введения IFN типа I в течение 2 дней после инъекции антигена еще больше усиливало специфичный к гриппу антительный ответ. Примечательно, что вакцина с IFN в качестве адъюванта вызывала однородные ответы у всех получавших ее мышей, тогда как сама вакцина индуцировала антительный ответ лишь у ограниченного числа мышей (около 30%) даже после многократных иммунизаций. На фиг. 11 С представлены разнообразные эффекты применения IFN типа I в качестве адъюванта при введении в различное время до, после или вместе с вакциной. Оптимальный эффект адъюванта наблюдался при введении IFN вместе с вакциной. Как видно из фиг. 12 А, интраназальная иммунизация вакциной с IFN в качестве адъюванта делала вакцину против гриппа сильно иммуногенной. Интересно, что анализ изотипа специфичных к гриппу антител показал индукцию антител подкласса IgG2a, который обычно связан с иммунным ответом типа Th-1. Примечательно, что вакцина с IFN в качестве адъюванта оказывала более сильное защитное действие против воздействия вируса, чем сама вакцина (фиг. 12 В). Пример 12. IFN типа I является необычайно сильным мукозальным адъювантом вакцины против гриппа В первой серии экспериментов мышей C57BL/6 иммунизировали путем 2 интраназальных введений, с интервалом в 14 дней, вакцины против гриппа, одной или в смеси с IFN типа I, и через 2 недели после каждой иммунизации измеряли уровень антител (фиг. 14 а). Отмечалось общее повышение продукции антител (особенно IgG2a) у получавших IFN животных после первой иммунизации. Через 2 недели после второй иммунизации отмечалось дальнейшее повышение титра антител у получавших IFN мышей по сравнению с животными, получавшими одну лишь вакцину. Примечательно, что именно в это время наблюдалось разительное повышение титров IgG2a и IgA (в 1000 и 100 раз, соответственно) у животных,иммунизированных вакциной в смеси с IFN, по сравнению с мышами, получавшими одну лишь вакцину. Мыши, иммунизированные IFN в качестве адъюванта, также проявляли более высокий уровень секреторного IgA в легких, чем контрольные животные. Интересно, что все мыши, получавшие вакцину с IFN в качестве адъюванта интраназально, выработали иммунитет против заражения вирусом гриппа, о чем свидетельствуют показатели выживаемости и отсутствие снижения веса мышей после провокационной пробы, тогда как у животных, иммунизированных одной лишь вакциной, отмечался только частичный иммунитет (фиг. 14b). В аналогичном эксперименте по иммунизации на мышах IFN-IR KО и контрольных мышах С 3 Н/HeN оказалось, что IFN типа I превосходит MF59 в индукции IgG2a и IgA у контрольных животных на обеих временных точках, тогда как MF59 более эффективно индуцировал антителаIgG1 после двух иммунизации (фиг. 14 с, нижняя часть). Как и ожидалось, у животных IFN-IR KО, имму- 18006211 низированных интраназально с IFN в качестве адъюванта, не наблюдалось значительных антительных ответов по всем подклассам Ig. Напротив, MF59 все-таки был способен индуцировать антитела IgGI у мышей IFN-IR KО, но индукция IgG2a и IgA сильно уменьшилась по сравнению с реакцией у контрольных животных (фиг. 14 с). Пример 13. Выживаемость мышей после заражения вирусом не имеет жесткой связи с повышением титров IgG Мышей C57BL/6 вакцинировали посредством однократной внутримышечной (системной) или интраназальной (мукозальной) иммунизации вакциной FLU, как описано ранее, и измеряли титры IgG через 14 дней. Как видно из фиг. 15, однократное введение вакцины с адъювантом оказалось достаточным для оказания полной защиты животных после провокационной пробы. Кроме того, выживаемость мышей после заражения вирусом не имеет жесткой связи с повышениемIgG. В самом деле, значительное повышение титра IgG, вызванное вакциной без адъюванта, не вызывает какого-либо значительного увеличения выживаемости: примерно 10% мышей выжило после заражения вирусом. С другой стороны, действие IFN типа I как адъюванта в сочетании с вакциной, хотя оно ведет к умеренному повышению титра IgG по сравнению с действием одной лишь вакцины, приводит к разительному увеличению выживаемости (около 100%) мышей после заражения вирусом, даже после однократной иммунизации. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение IFN типа I для получения нетоксической композиции адъюванта для усиления гуморального иммунного ответа типа Th-1 на вакцину при защитной иммунизации in vivo, в котором при первичной иммунизации вакцина и композиция IFN вводятся одновременно в одном и том же месте введения, причем IFN применяется в дозировке, большей или равной 100000 ЕД на дозу вакцины. 2. Применение по п.1, в котором усиление гуморального иммунного ответа сопровождается избирательной индукцией продукции IgG1, и/или IgG2a, и/или IgG2b, и/или IgG3, и/или IgA, и/или IgM. 3. Применение по п.1 или 2, в котором защитная иммунизация осуществляется путем подкожной,внутримышечной или интрадермальной инъекции либо перорального или мукозального введения. 4. Применение по п.3, в котором мукозальное введение представляет собой интраназальное или пероральное введение и приводит к местной и/или системной защитной иммунизации. 5. Применение по любому из пп.1-4, в котором композиция и вакцина составляют рецептуру для одновременной доставки адъюванта и вакцины к месту введения. 6. Применение по любому из пп.1-5, в котором защита in vivo достигается после однократной иммунизации. 7. Применение по любому из пп.1-5, в котором защита in vivo достигается после одновременного введения сначала вакцины и композиции адъюванта, а затем введения дополнительной дозы одной лишь композиции адъюванта в 1-й день или в 1-й и во 2-й день после инъекции вакцины. 8. Применение по любому из пп.1-7, в котором IFN типа I представляет собой природный IFN-,синтетический рекомбинантный IFN типа I, рекомбинантные подтипы IFN-, IFN-, IFN- или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей один или несколько представителей IFN типа I. 9. Применение по п.8, в котором IFN типа I представляет собой ПЭГилированный подтип IFN типа I. 10. Применение по любому из пп.1-9, в котором доза IFN типа I находится в пределах 1x106-6x106 ЕД. 11. Применение по любому из пп.1-10, в котором IFN типа I представляет собой рекомбинантныйIFN типа I, слитый с моноклональным антителом, способным достичь дендритных клеток. 12. Применение по любому из пп.1-11, в котором вакцина включает один или несколько антигенов из возбудителя инфекции или из других источников. 13. Применение по п.12, в котором вакцина включает один или несколько антигенов из опухолей. 14. Применение по п.11 или 13, в котором антиген находится в количестве 1-1000 мкг. 15. Применение по п.14, в котором антиген находится в количестве 10-200 мкг. 16. Вакцина для подкожной, внутримышечной или интрадермальной инъекции либо перорального или мукозального введения, включающая IFN типа I в качестве адъюванта в дозировке, большей или равной 100000 ЕД на дозу вакцины, для контролируемого, пролонгированного и одновременного высвобождения и антигена, и адъюванта. 17. Вакцина по п.16, в которой мукозальное введение представляет собой интраназальное или пероральное введение. 18. Вакцина по любому из пп.16-17, в которой IFN типа I представляет собой природный IFN-,синтетический рекомбинантный IFN типа I, рекомбинантные подтипы IFN-, IFN-, IFN- или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей один или несколько представителей IFN типа I. 19. Вакцина по любому из пп.16-18, в которой IFN типа I представляет собой ПЭГилированный подтип IFN типа I.- 19006211 20. Вакцина по любому из пп.16-19, в которой дозировка IFN типа I находится в пределах 1x1066x10 ЕД. 21. Вакцина по любому из пп.16-20, в которой IFN типа I представляет собой рекомбинантный IFN типа I, слитый с моноклональным антителом, способным достичь дендритных клеток. 22. Вакцина по любому из пп.16-21, при этом вакцина включает один или несколько антигенов из возбудителя инфекции или из других источников. 23. Вакцина по любому из пп.16-22, при этом вакцина включает один или несколько антигенов из опухолей. 24. Вакцина по любому из пп.16-23, в которой антиген находится в количестве 1-1000 мкг. 25. Вакцина по п.24, в которой антиген находится в количестве 10-200 мкг. 26. Вакцина по любому из пп.16 или 25, в которой дозировка IFN типа I находится в пределах 1x1066 6x10 ЕД. 27. Вакцина по любому из пп.16-26, дополнительно включающая соли алюминия. 28. Набор, состоящий из нетоксической композиции адъюванта, включающей IFN типа I в дозировке, большей или равной 100000 ЕД; и вакцины, включающей по меньшей мере один антиген и фармацевтически приемлемый носитель, растворитель или вспомогательное средство; для раздельного, одновременного введения в близкие места инъекции при профилактике или лечении заболевания, связанного с присутствием данного антигена. 29. Способ получения вакцины по любому из пп.16-28, включающий стадию формулирования в композиции для контролируемого и пролонгированного высвобождения антигена вместе с IFN типа I в дозировке, большей или равной 100000 ЕД на дозу вакцины. 6