Смеси полисахаридов на основе гепарина, их получение и фармацевтические композиции, их содержащие

005995 Настоящее изобретение касается смесей полисахаридов на основе гепарина, способа их получения и фармацевтических композиций, их содержащих. Гепарин представляет собой смесь сульфатированных мукополисахаридов животного происхождения, используемую, в частности, из-за ее антикоагуляционных и антитромботических свойств. Однако гепарин обладает недостатками, которые ограничивают условия его применения. В частности, его значительная антикоагуляционная активность (активность анти-IIa) может вызывать кровотечения. Были предложены (ЕР 40144) низкомолекулярные гепарины, полученные щелочной деполимеризацией сложных эфиров гепарина; однако данные продукты еще имеют значительную активность анти-IIa. Изобретение относится к смесям полисахаридов на основе гепарина, обладающим активностью, более избирательной по отношению к активированному фактору X (фактор Ха) и активированному фактору II (фактор IIа), чем у гепарина. Более конкретно, предметом настоящего изобретения являются смеси сульфатированных полисахаридов, имеющих обычную структуру полисахаридов, входящих в состав гепарина, и обладающих следующими характеристиками:- они имеют среднюю молекулярную массу в диапазоне от 1500 до 3000 Да, активность анти-Ха в диапазоне от 100 до 150 МЕ/мг, активность анти-IIa в диапазоне от 0 до 10 МЕ/мг и отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa больше 10,- полисахариды, входящие в состав смесей, содержат от 2 до 26 сахаридных звеньев и содержат на одном из их концов звено 2-О-сульфата 4,5-ненасыщенной глюкуроновой кислоты,в форме соли щелочного или щелочно-земельного металла. В качестве солей щелочного или щелочно-земельного металла предпочтительными являются соли натрия, калия, кальция и магния. Среднюю молекулярную массу определяют методом жидкостной хроматографии при высоком давлении с использованием двух последовательно соединнных колонок, например колонок, поставляемых под названием TSK G3000 XL и TSK G2000 XL. Детекцию осуществляют рефрактометрически. Используемый элюент представляет собой нитрат лития, и расход составляет 0,6 мл/мин. Систему калибруют по стандартам, полученным хроматографическим фракционированием эноксапарина (AVENTIS) на полиакриламид-агарозном геле (IBF). Упомянутое получение осуществляют согласно методике, описанной в статье Barrowcliffe et coll., Thromb. Res., 12, 27-36 (1977-78) или в статье D.A. Lane et coll., Thromb. Res.,12, 257-271 (1977-78). Результаты вычисляют с использованием программного обеспечения GPC6 (PerkinElmer). Активность анти-Ха измеряют амидолитическим методом на хромогенном субстрате, описанном в статье Teien et coll., Thromb. Res., 10, 399-410 (1977), с использованием в качестве эталона первого международного эталона низкомолекулярных гепаринов. Активность анти-IIa измеряют техникой, описанной Anderson L.O. et coll., Thromb.Res., 15, 531-541(1979), с использованием в качестве эталона первого международного эталона низкомолекулярных гепаринов. Предпочтительно, смеси, такие как описанные выше, имеют активность анти-Ха в интервале от 125 до 150 МЕ/мг. В частности, смеси, такие как описанные выше, имеют активность анти-Ха, находящуюся в интервале от 140 до 150 МЕ/мг, и среднюю молекулярную массу, находящуюся в диапазоне от 2000 до 3000 Да. Предпочтительно, смеси согласно изобретению имеют активность анти-IIa от 0 до 5 МЕ/мг. Еще более предпочтительно, смеси имеют отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa больше 25. Смеси олигосахаридов согласно изобретению могут быть получены деполимеризацией четвертичной аммониевой соли сложного бензилового эфира гепарина в органической среде при помощи сильного органического основания с рKа 20 или имидазолата натрия, превращением деполимеризованной четвертичной аммониевой соли сложного бензилового эфира гепарина в натриевую соль, омылением сложного эфира и, в случае необходимости, очисткой. Четвертичная аммониевая соль сложного бензилового эфира гепарина представляет собой предпочтительно соль бензэтония, цетилпиридиния или цетилтриметиламмония. Обычно деполимеризацию осуществляют в среде инертного органического растворителя, такого как хлорсодержащий растворитель (например, дихлорметан), тетрагидрофуран, анизол, при температуре от -20 до 40 С. В качестве сильного органического основания с рKа больше 20 можно использовать 1,5,7 триазабицикло[4.4.0]дец-5-ен, 2-трет-бутилимино-2-диэтиламино-1,3-диметилпергидро-1,3,2-диазафосфорин, основания семейства гуанидина и фосфазенов. Основания семейства гуанидинов представляют собой предпочтительно основания формулы в которой R1 обозначает водород или алкил, R2, R3, R4 и R5, одинаковые или разные, обозначают алкильный радикал. Более конкретно, R1 обозначает водород и R2, R3, R4 и R5 представляют собой метильные радикалы. Сильные органические основания, принадлежащие к семейству фосфазенов, определены, например,согласно R.Schwesinger et coll., Angew.Chem. Int. Ed. Engl., 26, 1167-1169 (1987), R.Schwesinger et coll.,Angew. Chem., 105, 1420 (1993). Среди оснований семейства фосфазенов используют предпочтительно основания формулы в которой радикалы R1-R7 являются одинаковыми или разными и представляют собой алкильные радикалы. В предыдущих формулах алкильные радикалы содержат от 1 до 6 атомов углерода в неразветвленной или в разветвленной цепи. Преимущественно, молярное отношение сильное органическое основание с рKа больше 20 или имидазолат натрия/четвертичная аммониевая соль сложного бензилового эфира гепарина находится в интервале от 0,2 до 5, предпочтительно от 1 до 4. Более конкретно, степень этерификации четвертичной аммониевой соли сложного бензилового эфира гепарина находится в интервале от 50 до 100%, предпочтительно в интервале от 70 до 90%. Данная степень этерификации соответствует молярному проценту этерификации уроновых кислот гепарина. Превращение деполимеризованной четвертичной аммониевой соли сложного бензилового эфира гепарина в натриевую соль осуществляют обычно обработкой реакционной среды спиртовым раствором ацетата натрия, предпочтительно 10%-ным раствором ацетата натрия в метаноле (масса/объем), при температуре в интервале от 15 до 25 С. Массовый эквивалент добавляемого ацетата предпочтительно в три раза больше массы четвертичной аммониевой соли сложного бензилового эфира гепарина, вводимой в реакцию деполимеризации. Омыление обычно осуществляют при помощи гидроксида щелочного металла, такого как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития, в водной среде при температуре в интервале от 0 до 20 С, предпочтительно от 0 до 10 С. Обычно используют от 1 до 5 молярных эквивалентов гидроксида щелочного металла. Предпочтительно омыление осуществляют в присутствии 2-3 молярных эквивалентов гидроксида щелочного металла. Конечный продукт, в случае необходимости, может быть очищен любым известным способом очистки деполимеризованных гепаринов, в частности способом, описанным в европейском патенте ЕР 0037319. Предпочтительно очищают при помощи пероксида водорода в водной среде при температуре от 10 до 50 С. Предпочтительно указанную операцию осуществляют в интервале от 20 до 40 С. Четвертичная аммониевая соль сложного бензилового эфира гепарина может быть получена согласно следующей реакционной схеме: а) превращение гепарина в форме натриевой соли при помощи бензэтонийхлорида с получением гепарината бензэтония,б) этерификация бензэтониевой соли, полученной перед этим, при помощи бензилхлорида и обработка спиртовым раствором ацетата натрия с получением натриевой соли сложного бензилового эфира гепарина,в) превращение натриевой соли сложного бензилового эфира гепарина в четвертичную аммониевую соль, предпочтительно в соль бензэтония, цетилпиридиния или цетилтриметиламмония. Реакцию стадии а) осуществляют в водной среде воздействием бензэтоний хлорида, взятого в избытке, на гепарин в форме натриевой соли при температуре, близкой к температуре в интервале от 15 до 25 С. Преимущественно, молярное отношение бензэтонийхлорид/гепарин в форме натриевой соли находится в интервале от 2 до 3 и более конкретно равно 2,5. Используемый исходный гепарин в форме натриевой соли представляет собой предпочтительно свиной гепарин. Исходный гепарин может быть предварительно очищен с целью уменьшения процентного содержания в нем дерматансульфата согласно способу, описанному во французском патенте FR 2663639. Этерификацию стадии б) осуществляют предпочтительно в среде хлорсодержащего органического растворителя (например, хлороформ, метиленхлорид) при температуре в интервале от 25 до 45 С, пред-2 005995 почтительно в интервале от 30 до 40 С. Сложный эфир в форме натриевой соли выделяют затем осаждением 10%-ным (масса/объем) раствором ацетата натрия в спирте, таком как метанол. Обычно используют от 1 до 1,2 объема спирта на один объем реакционной среды. Количество бензилхлорида и время реакции подобраны для получения степени этерификации в интервале от 50 до 100%, предпочтительно от 70 до 90%. Предпочтительно используют от 0,5 до 1,5 мас.ч. бензилхлорида на 1 мас.ч. бензэтониевой соли гепарина. Также предпочтительно время реакции находится в интервале от 10 до 35 ч. Превращение одной соли в другую на стадии в) осуществляют при помощи хлорида четвертичного аммония, предпочтительно при помощи бензэтонийхлорида, цетилпиридинийхлорида или цетилтриметиламмоний-хлорида, в водной среде при температуре в интервале от 10 до 25 С. Преимущественно молярное отношение хлорид четвертичного аммония/натриевая соль сложного бензилового эфира гепарина находится в интервале от 2 до 3. Смеси согласно изобретению в форме натриевой соли могут быть превращены в другую соль щелочного или щелочно-земельного металла. В случае необходимости, от одной соли к другой переходят,используя способ, описанный в американском патенте US 4168377. Смеси согласно изобретению нетоксичны и, таким образом, могут быть использованы в качестве лекарственных средств. Смеси по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве антитромботических препаратов. В частности, их используют для профилактики венозных тромбозов, осложнений, связанных с артериальным тромбозом, в частности в случае инфаркта миокарда. Их также используют при профилактике и лечении пролиферации гладких мышечных клеток, ангиогенеза и в качестве нейропротекторов атеросклероза и артериосклероза. Настоящее изобретение касается также фармацевтических композиций, содержащих в качестве действующего начала смесь полисахаридов согласно изобретению, в случае необходимости, в сочетании с одним или несколькими инертными эксципиентами. Фармацевтические композиции представляют собой, например, растворы, пригодные для подкожного или внутривенного инъецирования. Равным образом их используют для введения легочным путем(ингаляция). Дозировка может варьировать в зависимости от возраста, веса и состояния здоровья пациента. Для взрослого она составляет обычно от 20 до 100 мг в день внутримышечно или подкожно. Следующие примеры иллюстрируют изобретение. Пример А. Получение бензэтониевой соли сложного бензилового эфира гепарина. Гепаринат бензэтония К раствору 10 г гепарина в форме натриевой соли в 100 мл воды при температуре, близкой к 20 С,добавляют раствор 25 г хлорида бензэтония в 125 мл воды. Продукт фильтруют, промывают водой и сушат. Сложный бензиловый эфир гепарина (натриевая соль) К раствору 20 г гепарината бензэтония в 80 мл метиленхлорида добавляют 16 мл бензилхлорида. Раствор нагревают при температуре 30 С в течение 12 ч. Тогда добавляют 108 мл 10%-ного раствора ацетата натрия в метаноле, фильтруют, промывают метанолом и сушат. Таким образом получают 7,6 г сложного бензилового эфира гепарина в форме натриевой соли, степень этерификации которого равна 77%. Сложный бензиловый эфир гепарина (бензэтониевая соль) В колбу Эрленмейера А объемом 2 л вводят 36 г (0,0549 моль) сложного бензилового эфира гепарина (натриевая соль) и 540 мл дистиллированной воды. После гомогенизации при температуре около 20 С получают бледно-желтый раствор. При перемешивании на магнитной мешалке в колбе Эрленмейера В объемом 1 л готовят раствор 64,45 г (0,1438 моль) хлорида бензэтония в 450 мл воды. Раствор из колбы Эрленмейера В приблизительно за 35 мин при перемешивании приливают к раствору, находящемуся в колбе Эрленмейера А. Наблюдают образование обильного белого осадка. Колбу Эрленмейера В ополаскивают 200 мл дистиллированной воды и промывную воду вводят в колбу Эрленмейера А. Перемешивание прекращают и суспензию оставляют оседать в течение 12 ч. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют. К осевшему осадку (внешний вид кашицы) добавляют 560 мл воды и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (560 мл). С осевшим осадком два раза повторяют описанную операцию промывки приблизительно 560 мл дистиллированной воды. При последней операции промывки оставляют осадок в суспензии и фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Осадок затем промывают 4 раза 200 мл дистиллированной воды. Влажное белое твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 87,5 г бензэтониевой соли сложного бензилового эфира гепарина. Полученный выход составляет 94,9%. Пример 1. Деполимеризация и превращение в натриевую соль. В колбу Эрленмейера А объемом 50 мл вводят 28 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 4 г (0,00238 моль) сложного бензилового эфира гепарина (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль), полученного как описано в примере А. После полного растворения добавляют 1,32 г(0,00948 моль) 1,5,7-триазабицикло[4.4.0]дец-5-ена. Перемешивают при температуре, близкой к 20 С, в течение 3 ч 30 мин. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 12 г ацетата натрия в 120 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке реакционную смесь, находящуюся в колбе Эрленмейера А, приливают к метанольному раствору ацетата натрия. Появляется квазипрозрачный студенистый желтый осадок. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение одного часа. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют (62 мл). К осевшему осадку(внешний вид желтой кашицы) добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (49 мл). К осевшему осадку добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 4. Полученный золотисто-желтый осадок промывают затем 2 раза 25 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 1,21 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Полученный выход составляет 77,2%. Омыление В колбу Эрленмейера объемом 25 мл вводят 1,21 г (0,0018 моль) деполимеризованного гепарина(сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, и 11 мл воды. При перемешивании на магнитной мешалке вводят 0,18 мл (0,0018 моль) 30%-ного натрового щелока. После добавления смесь охлаждают до 4 С и перемешивают в течение 2 ч. Добавляют 1,43 г NaCl и нейтрализуют раствор добавлением раствора 1 моль/л НСl (14 мл). Смесь переливают в колбу Эрленмейера объемом 100 мл и добавляют 52 мл метанола. Наблюдают образование желтого осадка. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 12 ч при температуре, близкой к 20 С. Затем супернатант отбирают и удаляют (44 мл). К осевшему осадку (внешний вид желтой кашицы) добавляют 25 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (21 мл). К осевшему осадку добавляют 25 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Полученный светло-желтый осадок промывают затем 2 раза 10 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 0,66 г неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль). Полученный выход составляет 60%. Очистка В колбу Эрленмейера объемом 10 мл вводят 0,66 г неочищенного деполимеризованного гепарина,полученного перед этим, и 5,9 мл дистиллированной воды. Смесь поддерживают при 40 С при перемешивании на магнитной мешалке. Добавлением раствора 1 моль/л гидроксида натрия создают рН в интервале от 9 до 10 и добавляют 33 мкл 30%-ного водного раствора пероксида водорода. Приблизительно после 2 ч перемешивания добавляют 0,65 г хлорида натрия. Затем смесь нейтрализуют добавлением раствора 0,1 моль/л НСl. Затем раствор фильтруют и переливают в колбу Эрленмейера объемом 25 мл. Вливают 23,3 мл метанола. Наблюдают образование белого осадка. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 12 ч при температуре, близкой к 20 С. Затем отбирают и удаляют супернатант (5 мл). К осевшему осадку (внешний вид кашицы) добавляют 5 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют(5 мл). К осевшему осадку добавляют 5 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Полученный белый осадок промывают затем 2 раза 5 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 0,51 г очищенной смеси полисахаридов (натриевая соль). Полученный выход составляет 77,2%. Характеристики полученной смеси следующие:- средняя молекулярная масса 1600 Да;- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa 100. Пример 2. Деполимеризация и превращение в натриевую соль. В колбу Эрленмейера А объемом 100 мл вводят 70 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 10 г (0,00595 моль) сложного бензилового эфира гепарина (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль), полученного как описано в примере А. После полного растворения добавляют 1,7 мл(0,00587 моль) 2-трет-бутилимино-2-диэтиламино-1,3-диметилпергидро-1,3,2-диазафосфорина. При температуре, близкой к 20 С, позволяют реакции протекать приблизительно в течение 3 ч 30 мин. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 30 г ацетата натрия в 300 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке реакционную смесь, находящуюся в колбе Эрленмейера А,приливают к метанольному раствору ацетата натрия. Появляется квазипрозрачный студенистый желтый осадок. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 1 ч. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют (204 мл). К осевшему осадку (внешний вид желтой кашицы) добавляют 125 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение-4 005995 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (162 мл). К осевшему осадку добавляют 125 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем студенистый осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Полученный желтый студенистый осадок промывают затем 2 порциями метанола по 63 мл. Студенистое твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 3,34 г деполимеризованного гепарина(сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Полученный выход составляет 85,3%. Омыление Омыляют 1,67 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, согласно способу омыления, описанному в примере 1. Получают 0,94 г светложелтого порошка. Выход неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль) составляет 61%. Очистка Очищают 0,94 г неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль), полученного перед этим, согласно способу очистки, описанному в примере 1. Получают 0,71 г белого порошка. Выход составляет 75,5%. Полученная очищенная смесь полисахаридов (натриевая соль) обладает следующими характеристиками:- средняя молекулярная масса 2500 Да;- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa 68. Пример 3. Деполимеризация и превращение в натриевую соль В колбу Эрленмейера А объемом 50 мл вводят 28 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 4 г (0,00238 моль) сложного бензилового эфира гепарина (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль), полученного согласно примеру А. После полного растворения и охлаждения до 2 С добавляют 0,333 г (0,00239 моль) 1,5,7-триазабицикло[4.4.0]дец-5-ена. При температуре, близкой к 20 С,позволяют реакции протекать приблизительно в течение 3 ч 30 мин. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 12 г ацетата натрия в 120 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке реакционную смесь, находящуюся в колбе Эрленмейера А, приливают к метанольному раствору ацетата натрия. Появляется желтый осадок. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 1 ч. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют (90 мл). К осевшему осадку (внешний вид желтой кашицы) добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (61 мл). К осевшему осадку добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 4. Полученный осадок промывают затем 2 раза 25 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 1,19 г деполимеризованного гепарина(сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Твердое вещество имеет интенсивную желтую окраску. Полученный выход составляет 75,9%. Омыление Омыляют 1,19 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, согласно способу омыления, описанному в примере 1. Получают 0,78 г светложелтого порошка. Выход неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль) составляет 71,5%. Очистка Очищают 0,7 8 г неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль), полученного перед этим, согласно способу очистки, описанному в примере 1. Получают 0,58 г белого порошка. Выход составляет 72,5%. Полученная очищенная смесь полисахаридов (натриевая соль) обладает следующими характеристиками:- средняя молекулярная масса 2700 Да;- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa 27,3. Пример 4. Деполимеризация и превращение в натриевую соль. В колбу Эрленмейера А объемом 50 мл вводят 28 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 4 г (0,00238 моль) сложного бензилового эфира гепарина (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль), полученного как описано в примере А. После полного растворения и при 2 С добавляют 0,6 мл (0,00222 моль) 2-трет-бутилимино-трис(диметиламино)фосфорана. При температуре, близкой к 0 С, позволяют реакции протекать приблизительно в течение 3 ч 30 мин. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 12 г ацетата натрия в 120 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке реакционную смесь, находящуюся в колбе Эрленмейера А, приливают к мета-5 005995 нольному раствору ацетата натрия. Появляется квазипрозрачный студенистый желтый осадок. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 1 ч. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют (108 мл). К осевшему осадку (внешний вид желтоватой кашицы) добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (60 мл). К осевшему осадку добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем желтовато-белый осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 4. Полученный осадок промывают затем 2 раза 25 мл метанола. Твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 1,22 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Полученный выход составляет 77,8%. Омыление Омыляют 1,22 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, согласно протоколу омыления, описанному в примере 1. Получают 0,69 г очень светлого желтого порошка. Выход неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль) составляет 61,6%. Очистка Очищают 0,69 г неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль), полученного перед этим, согласно протоколу очистки, описанному в примере 1. Получают 0,67 г белого порошка. Выход составляет 97,1%. Полученная очищенная смесь полисахаридов (натриевая соль) обладает следующими характеристиками:- средняя молекулярная масса 2900 Да;- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIа 32,6. Пример 5. Деполимеризация и превращение в натриевую соль. В колбу А объемом 50 мл вводят 28 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 4 г(0,00238 моль) бензилгепарината (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль). После полного растворения и при 40 С добавляют 0,95 г (0,00949 моль) имидазолата натрия. При орошении дихлорметаном позволяют реакции протекать приблизительно в течение 4 ч. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 12 г ацетата натрия в 120 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке реакционную смесь, находящуюся в колбе Эрленмейера А, приливают к метанольному раствору ацетата натрия. Появляется квазипрозрачный студенистый желтый осадок. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 1 ч. Прозрачную часть оранжевого супернатанта отбирают и удаляют (88 мл). К осевшему осадку (внешний вид оранжевой кашицы) добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (51 мл). К осевшему осадку добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем оранжевый осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 4. Полученный осадок промывают затем 2 раза 25 мл метанола. Твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 1,34 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Полученный выход составляет 7 6,6%. Омыление Омыляют 1,2 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, согласно протоколу омыления, описанному в примере 1. Получают 0,63 г бежевого порошка. Выход неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль) составляет 52,5%. Очистка Очищают 0,63 г неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль), полученного перед этим, согласно способу очистки, описанному в примере 1. Получают 0,42 г чистого бежевого порошка. Выход составляет 66,7%. Полученная очищенная смесь полисахаридов (натриевая соль) обладает следующими характеристиками:- средняя молекулярная масса 2250 Да;- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa 90,5. Пример 6. Деполимеризация и превращение в натриевую соль. В колбу Эрленмейера А объемом 50 мл вводят 28 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 4 г (0,00238 моль) сложного бензилового эфира гепарина (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль), полученного как описано в примере А. После полного растворения добавляют 1,33 г-6 005995 течение 3 ч 30 мин. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 12 г ацетата натрия в 120 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке реакционную смесь, находящуюся в колбе Эрленмейера А, приливают к метанольному раствору ацетата натрия. Появляется квазипрозрачный студенистый желтый осадок. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 1 ч. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют (56 мл). К осевшему осадку (внешний вид желтой кашицы) добавляют 60 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 30 мин. Супернатант отбирают и удаляют (70 мл). К осевшему осадку добавляют 50 мл метанола и перемешивают в течение 15 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 4. Полученный золотисто-желтый осадок промывают затем 2 раза 50 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 0,92 г деполимеризованного гепарина(сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Полученный выход составляет 64%. Омыление В колбу Эрленмейера объемом 25 мл вводят 0,92 г (0,0014 моль) деполимеризованного гепарина(сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, и 17,5 мл воды. При перемешивании на магнитной мешалке вводят 0,38 мл (0,0037 9 моль) 30%-ного натрового щелока. После добавления смесь поддерживают при температуре, близкой к 20 С, и перемешивают в течение 5 ч. Добавляют 1,8 г NaCl и нейтрализуют раствор добавлением концентрированной НСl (конечный объем раствора около 18 мл). Смесь переливают в колбу Эрленмейера объемом 100 мл и добавляют 46 мл метанола. Наблюдают образование желтого осадка. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 12 ч при температуре, близкой к 20 С. Затем отбирают и удаляют супернатант (52 мл). К осевшему осадку(внешний вид желтой кашицы) добавляют 25 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 1 ч. Супернатант отбирают и удаляют (27 мл). К осевшему осадку добавляют 25 мл метанола и перемешивают приблизительно в течение 1 ч. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 4. Полученный осадок промывают затем 2 раза 10 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 3 ч сушки получают 0,42 г неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль). Полученный выход составляет 45,6 %. Очистка В колбу Эрленмейера объемом 10 мл вводят 0,42 г неочищенного деполимеризованного гепарина,полученного перед этим, и 3,8 мл дистиллированной воды. Смесь поддерживают при 38 С при перемешивании на магнитной мешалке. Добавлением раствора 0,1 моль/л гидроксида натрия, создают рН в интервале от 9 до 10 и добавляют 25 мкл 30%-ного водного раствора пероксида водорода. Приблизительно после 2 ч 30 мин перемешивания добавляют 0,5 г хлорида натрия. Затем смесь нейтрализуют добавлением раствора 0,1 моль/л НСl. Затем раствор фильтруют и переливают в колбу Эрленмейера объемом 25 мл. Вливают 11,3 мл метанола. Наблюдают образование белого осадка. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 12 ч при температуре, близкой к 20 С. Затем отбирают и удаляют супернатант (9,8 мл). К осевшему осадку (внешний вид кашицы) добавляют 5 мл метанола и перемешивают в течение 15 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 3 ч. Супернатант отбирают и удаляют (6,2 мл). К осевшему осадку добавляют 5 мл метанола и перемешивают в течение 20 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Полученный белый осадок промывают затем 2 раза 5 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После приблизительно 2 ч 20 мин сушки получают 0,39 г чистого деполимеризованного гепарина (натриевая соль). Полученный выход составляет 92,8%. Характеристики деполимеризованного гепарина, полученного таким образом, следующие:- средняя молекулярная масса 1950 Да;- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa 57. Пример 7. Деполимеризация и превращение в натриевую соль. В реактор А объемом 400 мл вводят 140 мл дихлорметана. При перемешивании медленно загружают 20 г (0,0119 моль) сложного бензилового эфира гепарина (степень этерификации: 77%, бензэтониевая соль), полученного как описано в примере А. После полного растворения методом Карла Фишера (KarlFisher) измеряют содержание воды в реакционной смеси. Полученная величина составляет 0,1% (воды). Добавляют 3,5 мл (0,0121 моль) 2-трет-бутилимино-2-диэтиламино-1,3-диметилпергидро-1,3,2 диазафосфорина. При температуре, близкой к 25 С, позволяют реакции протекать приблизительно в течение 24 ч. В течение этого времени при 4 С в колбе Эрленмейера В готовят раствор 30 г ацетата натрия в 300 мл метанола. При перемешивании на магнитной мешалке половину реакционной смеси, находящейся в реакторе А, приливают к метанольному раствору ацетата натрия. Появляется квазипрозрачный студенистый желтый осадок. Перемешивание поддерживают в течение 1 ч и дают суспензии осесть в течение приблизительно 12 ч при 4 С. Прозрачную часть супернатанта отбирают и удаляют (220 мл). К-7 005995 осевшему осадку (внешний вид желтой кашицы) добавляют 220 мл метанола и перемешивают в течение 50 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 40 мин. Супернатант отбирают и удаляют (204 мл). К осевшему осадку добавляют 204 мл метанола и перемешивают в течение 40 мин. Затем студенистый осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Полученный желтый студенистый осадок промывают затем 2 порциями метанола по 100 мл. Студенистое твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После приблизительно 12 ч сушки получают 2,6 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль). Полученный выход составляет 7 0,6% (вычислен в расчете на обработанную половину реакционной смеси). Омыление Омыляют 2,6 г деполимеризованного гепарина (сложный бензиловый эфир, натриевая соль), полученного перед этим, согласно способу омыления, описанному в примере 1. Получают 1,48 г светложелтого порошка. Выход неочищенного деполимеризованного гепарина (натриевая соль) составляет 62,9%. Очистка В колбу Эрленмейера объемом 50 мл вводят 1,48 г неочищенного деполимеризованного гепарина,полученного перед этим, и 15 мл дистиллированной воды. Смесь поддерживают при 40 С при перемешивании на магнитной мешалке. Добавлением раствора 1 моль/л гидроксида натрия создают рН в интервале от 9 до 10. Раствор фильтруют через фильтрационную мембрану с размером пор 1 мкм. Затем добавляют 76 мкл 30%-ного водного раствора пероксида водорода. Приблизительно после 2 ч перемешивания добавляют 1,5 г хлорида натрия. Затем смесь нейтрализуют добавлением раствора 1 моль/л НСl. Раствор фильтруют через фильтрационную мембрану с размером пор 1 мкм. Вливают 38 мл метанола. Наблюдают образование белого осадка. Перемешивание прекращают и дают суспензии осесть в течение 1 ч при температуре, близкой к 20 С. Затем отбирают и удаляют супернатант (37 мл). К осевшему осадку добавляют 37 мл метанола и перемешивают в течение 45 мин. Дают осадку повторно осесть приблизительно в течение 45 мин. Супернатант отбирают и удаляют (34 мл). К осевшему осадку добавляют 34 мл метанола и перемешивают в течение 15 мин. Затем осадок в форме суспензии фильтруют через фильтр из пористого стекла 3. Полученный белый осадок промывают затем 2 раза 25 мл метанола. Влажное твердое вещество отжимают и затем сушат при пониженном давлении (2,7 кПа) при температуре, близкой к 60 С. После 12 ч сушки получают 1,2 9 г чистого деполимеризованного гепарина (натриевая соль). Полученный выход составляет 87,2%. Полученный очищенный деполимеризованный гепарин обладает следующими характеристиками:- средняя молекулярная масса 22 50 Да- отношение активность анти-Ха/активность анти-IIа 176. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Смеси сульфатированных полисахаридов, имеющих общую структуру полисахаридов, входящих в состав гепарина и обладающих следующими характеристиками: они имеют среднюю молекулярную массу в диапазоне от 1500 до 3000 Да, активность анти-Ха в диапазоне от 100 до 150 МЕ/мг, активность анти-IIa в диапазоне от 0 до 10 МЕ/мг и отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa больше 10,полисахариды, входящие в состав смесей, содержат от 2 до 26 сахаридных звеньев и содержат на одном из их концов звено 2-О-сульфата 4,5-ненасыщенной глюкуроновой кислоты,в форме соли щелочного или щелочно-земельного металла. 2. Смеси по п.1, отличающиеся тем, что активность анти-Ха находится в диапазоне от 125 до 150 МЕ/мг. 3. Смеси по п.1 или 2, отличающиеся тем, что активность анти-Ха находится в диапазоне от 140 до 150 МЕ/мг и средняя молекулярная масса находится в диапазоне от 2000 до 3000 Да. 4. Смеси по любому из пп.1-3 в форме соли натрия, калия, кальция или магния. 5. Смеси по любому из пп.1-4, имеющие активность анти-IIa в диапазоне от 0 до 5 МЕ/мг. 6. Смеси по любому из пп.1-5, имеющие отношение активность анти-Ха/активность анти-IIa больше 25. 7. Способ получения смесей по п.1, отличающийся тем, что четвертичную аммониевую соль сложного бензилового эфира гепарина деполимеризуют в органической среде при помощи сильного органического основания с рKа 20 или имидазолата натрия, превращают деполимеризованную четвертичную аммониевую соль сложного бензилового эфира гепарина в натриевую соль, омыляют сложный эфир и, в случае необходимости, очищают продукт. 8. Способ по п.7, для которого четвертичная аммониевая соль сложного бензилового эфира гепарина представляет собой соль бензэтония, цетилпиридиния или цетилтриметиламмония. 9. Способ по п.7, для которого сильное органическое основание с рKа 20 выбрано среди 1,5,7 триазабицикло[4.4.0]дец-5-ена, 2-трет-бутилимино-2-диэтиламино-1,3-диметилпергидро-1,3,2-диазафос-8 005995 форина, оснований семейства гуанидина и фосфазенов. 10. Способ по п.9, для которого основания семейства гуанидинов представляют собой основания формулы в которой R1 обозначает водород или алкил, R2, R3, R4 и R5, одинаковые или разные, обозначают алкильный радикал, при этом алкильные радикалы содержат от 1 до 6 атомов углерода в неразветвленной или в разветвленной цепи. 11. Способ по п.10, для которого R1 обозначает водород и R2, R3, R4 и R5 представляют собой метильные радикалы. 12. Способ по п.9, для которого основания семейства фосфазенов представляют собой основания формулы в которой радикалы R1-R7 являются одинаковыми или разными и представляют собой алкильные радикалы, содержащие от 1 до 6 атомов углерода в неразветвленной или в разветвленной цепи. 13. Способ по одному из пп.7-12, для которого молярное отношение сильное органическое основание с рKа больше 20 или имидазолат натрия/четвертичная аммониевая соль сложного бензилового эфира гепарина находится в интервале от 0,2 до 5. 14. Способ по одному из пп.7-13, для которого четвертичная аммониевая соль сложного бензилового эфира гепарина имеет степень этерификации в интервале от 50 до 100%. 15. Способ по одному из пп.7-14, для которого превращение четвертичной аммониевой соли сложного бензилового эфира гепарина в натриевую соль осуществляется обработкой реакционной среды спиртовым раствором ацетата натрия. 16. Способ по одному из пп.7-15, для которого омыление осуществляется при помощи гидроксида щелочного металла. 17. Способ по одному из пп.7-16, для которого очистка осуществляется при помощи пероксида водорода. 18. Смеси, такие как определенные в любом из пп.1-6, в качестве лекарственных средств. 19. Смеси, такие как определенные в любом из пп.1-6, в качестве антитромботических лекарственных средств. 20. Фармацевтические композиции, содержащие в качестве действующего начала смесь по одному из пп.1-6.