Соли е-2-метокси-n-(3- (4- (3- метилпиридин -3- илокси) фениламино) хиназолин -6- ил-аллил)ацетамида, их получение и их применение против рака

007412 Уровень техники Данное изобретение относится к солям Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3 илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида, имеющего формулу I Формула I в виде свободного основания описана в совместно рассматриваемой заявке на патент США с серийным 09/883752, поданной 18 июня 2001 г., описание которой включено сюда в качестве ссылки полностью. Представленная ниже заявка подается вместе с данной заявкой. Свободное основание формулы I применяют при лечении гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак. В данном изобретении представлены сукцинат и малонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6 метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. В данном изобретении также представлены сесквисукцинат и дималонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3 метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. Данное изобретение также относится к способам получения сесквисукцината и дималоната Е-2 метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим сесквисукцинат и дималонат соединения формулы I. Соли в соответствии с данным изобретением применяют для лечения гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак, у млекопитающих, особенно человека. Изобретение также относится к способам введения солей формулы I для лечения гиперпролиферативных заболеваний. Краткое описание изобретения Данное изобретение относится к сукцинату и малонату Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6 метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида, имеющего следующую формулу I Один из предпочтительных вариантов относится к сесквисукцинату и дималонату Е-2-метокси-N(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. Данное изобретение также относится к способам получения сесквисукцината и дималоната Е-2 метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида,включающим объединение свободного основания с одной из указанных выше солей в присутствии подходящего органического растворителя. Сесквисукцинат и дималонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси) фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида характеризуются элементным анализом. Неожиданно было обнаружено, что сесквисукцинат и дималонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида имеют высокую степень кристалличности, т.е. практически не содержат аморфного материала. Такие соли предпочтительны тем, что они позволяют более воспроизводимое дозирование. Сесквисукцинат и дималонат Е-2-метокси-N-(3-4[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида по существу являются гигроскопически устойчивыми, что облегчает потенциальные проблемы, связанные с изменением веса активного ингредиента во время производства капсул или таблеток. Данное изобретение также относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сукцината или малоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил) ацетамида, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток. В одном из предпочтительных вариантов данное изобретение относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино] хиназолин-6-илаллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток. В одном из вариантов лечимым аномальным ростом клеток является рак. В одном из вариантов данного изобретения рак выбирают из рака легких, рака немаленьких клеток легких (НМКЛ), рака кости, рака поджелудочной железы, рака кожи, рака головы или шеи, кожной или внутриглазной меланомы, рака матки, рака яичников, рака прямой кишки, рака анальной области, рака желудка, рака толстой кишки, рака груди, карциномы фаллопиевых труб, карциномы эндометрия, карци-1 007412 номы шейки, карциномы вагины, карциномы вульвы, болезни Ходжкина, рака эзофага, рака тонкой кишки, рака эндокринной системы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака надпочечника, саркомы мягких тканей, рака уретры, рака пениса, рака простаты, хронический или острой лейкемии, лимфомы лимфоцитов, рака мочевого пузыря, рака почек или мочеточника, карциномы клеток почечного эпителия, карциномы почечной лоханки, неоплазмы центральной нервной системы (ЦНС), колоректального рака (КРР), первичной лимфомы ЦНС, опухолей позвоночного столба, глиомы ствола мозга, аденомы гипофиза или комбинации одного или более из указанных выше видов рака. В предпочтительном варианте данного изобретения рак выбирают из рака груди, рака толстой кишки, рака яичников, рака не маленьких клеток легкого (НМКЛ), колоректального рака (КРР), рака простаты, рака мочевого пузыря, рака почечного эпителия, рака желудка, рака эндометрия, рака головы и шеи и рака эзофага. В более предпочтительном варианте данного изобретения рак выбирают из карциномы клеток почечного эпителия, рака желудка, рака толстой кишки, рака груди и рака яичников. В более предпочтительном варианте данного изобретения рак выбирают из рака толстой кишки, рака груди или рака яичников. Другой вариант данного изобретения относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сукцината или малоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток в комбинации с противоопухолевым агентом, выбранным из группы, включающей миотические ингибиторы, алкилирующие агенты, антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста, радиацию,ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела, цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты. Другой вариант данного изобретения относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино] хиназолин-6-илаллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток в комбинации с противоопухолевым агентом, выбранным из группы, включающей миотические ингибиторы, алкилирующие агенты, антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста,радиацию, ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела, цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты. Другой вариант данного изобретения относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сукцината или малоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток в комбинации с цитотоксичным агентом. В одном из предпочтительных вариантов данного изобретения цитотоксичным агентом являетсяTaxol (паклитаксел). Данное изобретение также относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сукцината или малоната формулы I, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток, в комбинации с соединением, выбранным из группы, включающей циклофосфамид, 5-фторурацил, флоксуридин, гемцитабин, винбластин, винкристин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, тамоксифен, метилпреднизолон, цисплатин, карбоплатин, СРТ-11, гемцитабин, паклитаксел и доцетаксел. В одном из предпочтительных вариантов данное изобретение относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сукцината или малоната формулы I, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток, в комбинации с соединением, выбранным из группы, включающей тамоксифен,цисплатин, карбоплатин, паклитаксел и доцетаксел. Другой вариант данного изобретения относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-ил аллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток в комбинации с цитотоксичным агентом. В одном из предпочтительных вариантов данного изобретения цитотоксичным агентом являетсяTaxol (паклитаксел). Данное изобретение также относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната формулы I, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток, в комбинации с соединением, выбранным из группы, включающей циклофосфамид, 5-фторурацил, флоксуридин,гемцитабин, винбластин, винкристин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, тамоксифен, метилпреднизолон, цисплатин, карбоплатин, СРТ-11, гемцитабин, паклитаксел и доцетаксел.-2 007412 В одном из предпочтительных вариантов данное изобретение относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната формулы I, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток, в комбинации с соединением, выбранным из группы, включающей тамоксифен, цисплатин, карбоплатин, паклитаксел и доцетаксел. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения аномального роста клеток у млекопитающих, которая содержит такое количество сукцината или малоната формулы I, которое эффективно для лечения аномального роста клеток, и фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения аномального роста клеток у млекопитающих, которая содержит такое количество сесквисукцината или дималоната формулы I,которое эффективно для лечения аномального роста клеток, и фармацевтически приемлемый носитель. Данное изобретение также относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, включая человека, включающему введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната формулы I, или его сольвата, или пролекарства, которое эффективно для лечения аномального роста клеток. В одном из вариантов этого способа аномальным ростом клеток является рак, включая, но не ограничиваясь ими, рак легких, рак немаленьких клеток легких (НМКЛ), рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, кожная или внутриглазная меланома,рак матки, рак яичников, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак толстой кишки, рак груди, карцинома фаллопиевых труб, карцинома эндометрия, карцинома шейки, карцинома вагины, карцинома вульвы, болезнь Ходжкина, рак эзофага, рак тонкой кишки, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечника, саркома мягких тканей, рак уретры, рак пениса, рак простаты, хроническая или острая лейкемия, лимфома лимфоцитов, рак мочевого пузыря,рак почек или мочеточника, карцинома клеток почечного эпителия, карцинома почечной лоханки, неоплазмы центральной нервной системы (ЦНС), колоректальный рак (КРР), первичная лимфома ЦНС,опухоли позвоночного столба, глиома ствола мозга, аденома гипофиза или комбинация одного или более из указанных выше видов рака. В другом варианте указанного способа аномальным ростом клеток является доброкачественное пролиферативное заболевание, включая, но не ограничиваясь ими, псориаз, доброкачественную гипертрофию простаты или рестиноз. Данное изобретение также относится к способу лечения аномального роста клеток у млекопитающих, включая человека, включающему введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната формулы I, или его сольвата или пролекарства, которое эффективно для лечения аномального роста клеток, в комбинации с противоопухолевым агентом, выбранным из группы,включающей миотические ингибиторы, алкилирующие агенты, антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста, радиацию, ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела, цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты. Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения аномального роста клеток у млекопитающих, включая человека, содержащую такое количество сесквисукцината или дималоната формулы I, которое эффективно для лечения аномального роста клеток, и фармацевтически приемлемый носитель. В одном из вариантов указанной композиции указанным аномальным ростом клеток является рак, включая, но не ограничиваясь ими, рак легких, рак немаленьких клеток легких(НМКЛ), рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, кожная или внутриглазная меланома, рак матки, рак яичников, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак толстой кишки, рак груди, карцинома фаллопиевых труб, карцинома эндометрия, карцинома шейки, карцинома вагины, карцинома вульвы, болезнь Ходжкина, рак эзофага, рак тонкой кишки, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечника, саркома мягких тканей, рак уретры, рак пениса, рак простаты, хроническая или острая лейкемия, лимфома лимфоцитов, рак мочевого пузыря, рак почек или мочеточника, карцинома клеток почечного эпителия, карцинома почечной лоханки, неоплазмы центральной нервной системы (ЦНС), колоректального рак (КРР), первичная лимфома ЦНС, опухоли позвоночного столба, глиома ствола мозга, аденома гипофиза или комбинация одного или более из указанных выше видов рака. В другом варианте указанной фармацевтической композиции, аномальным ростом клеток является доброкачественное пролиферативное заболевание, включая, но не ограничиваясь ими, псориаз, доброкачественную гипертрофию простаты или рестиноз. Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения аномального роста клеток у млекопитающих, включая человека, включающему введение указанному млекопитающему такого количества сукцината или малоната формулы I, или его сольвата или пролекарства, которое эффективно для лечения аномального роста клеток, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем и противоопухолевым агентом, выбранным из группы, включающей миотические ингибиторы,алкилирующие агенты, антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста, радиацию, ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела, цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты. Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения аномального-3 007412 роста клеток у млекопитающих, включая человека, включающему введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината или дималоната формулы I, или его сольвата или пролекарства,которое эффективно для лечения аномального роста клеток, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем и противоопухолевым агентом, выбранным из группы, включающей миотические ингибиторы, алкилирующие агенты, антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста, радиацию, ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела, цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты. Данное изобретение также относится к способу лечения млекопитающих, страдающих раком, отличающемуся чрезмерной экспрессией егbВ 2, включающему введение млекопитающему сукцината или малоната формулы I в количестве, которое является эффективным для лечения указанного рака, характеризующегося чрезмерной экспрессией егbВ 2. Предпочтительный вариант данного изобретения относится к способу лечения млекопитающих,страдающих раком, отличающемуся чрезмерной экспрессией егbВ 2, включающему введение млекопитающему сесквисукцината или дималоната формулы I в количестве, которое является эффективным для лечения указанного рака, характеризующегося чрезмерной экспрессией егbВ 2. Данное изобретение также относится к способу лечения млекопитающих, страдающих заболеванием, характеризующимся чрезмерной экспрессией егbВ 2, включающему введение млекопитающему сукцината или малоната формулы I в количестве, которое является эффективным для лечения указанного заболевания, характеризующегося чрезмерной экспрессией егbВ 2. Предпочтительный вариант данного изобретения относится к способу лечения млекопитающих,страдающих заболеванием, отличающемуся чрезмерной экспрессией егbВ 2, включающему введение млекопитающему сесквисукцината или дималоната формулы I в количестве, которое является эффективным для лечения указанного заболевания, характеризующегося чрезмерной экспрессией егbВ 2. Данное изобретение также относится к способу индуцирования смерти клеток, включающему обработку клеток, которые чрезмерно экспрессируют егbВ 2, эффективным количеством сукцината или малоната формулы I. В одном из вариантов клетка является раковой клеткой у млекопитающего, предпочтительно человека. Предпочтительный вариант данного изобретения относится к способу индуцирования смерти клеток, включающему обработку клеток, которые чрезмерно экспрессируют егbВ 2, эффективным количеством сесквисукцината или дималоната формулы I. В одном из вариантов клетка является раковой клеткой у млекопитающего, предпочтительно человека. Данное изобретение также относится к способу индуцирования смерти клеток, включающему обработку клеток, которые чрезмерно экспрессируют егbВ 2, эффективным количеством сукцината или малоната формулы I, где указанный способ также включает обработку клеток ингибитором роста. В другом варианте данное изобретение также относится к способу индуцирования смерти клеток,включающему обработку клеток, которые чрезмерно экспрессируют егb2, эффективным количеством сесквисукцината или дималоната формулы I, где указанный способ также включает обработку клеток ингибитором роста. В одном из предпочтительных вариантов клетку обрабатывают химиотерапевтическим агентом или радиацией. Изобретение также относится к способу лечения рака у человека, где рак экспрессирует егbВ 2 рецептор, включающий введение человеку терапевтически эффективного количества сукцината или малоната формулы I. В предпочтительном варианте изобретение относится к способу лечения рака у человека, где рак экспрессирует егbВ 2 рецептор, включающий введение человеку терапевтически эффективного количества сесквисукцината или дималоната формулы I. В одном из предпочтительных вариантов данного изобретения рак не характеризуется чрезмерной экспрессией erbB1 рецептора. В другом предпочтительном варианте рак характеризуется чрезмерной экспрессией erbB1 и егbВ 2 рецептора. Данное изобретение также относится к способу лечения расстройства, связанного с ангиогенезом у млекопитающих, включая человека, который включает введение указанному млекопитающему сукцината или малоната формулы I, или его сольвата или пролекарства, в количестве, которое эффективно для лечения указанного расстройства. В предпочтительном варианте данное изобретение относится к способу лечения расстройства, связанного с ангиогенезом у млекопитающих, включая человека, который включает введение указанному млекопитающему сесквисукцината или дималоната формулы I, или его сольвата или пролекарства, в количестве, которое эффективно для лечения указанного расстройства. Такие расстройства включают раковые опухоли, такие как меланома; глазные болезни, такие как возрастная дегенерация желтого пятна, возможный синдром глазного гистоплазмоза и сетчаточная неоваскуляризация при пролиферативной диабетической ретинопатии; ревматоидный артрит; заболевания с потерей костной ткани, такие как остеопороз, болезнь Педжета, гуморальная гиперкальциемия или злокачественность, гиперкальциемия в результате опухолевых метастазов на костях, и остеопороз, вызванный глюкокортикоидным лечением; коронарный рестеноз; и определенные микробные инфекции, включая те, которые связаны с микробными патогенами, выбранными из аденовирусов, гантавирусов, Borrelia burgdor-4 007412feri, Yersinia spp., Bordetella pertussis и группа A Streptococcus. Аномальный рост клеток в данном описании, если не указано иначе, означает рост клеток, который не зависит от нормальных регуляторных механизмов (например, потеря контактного ингибирования). Он включает аномальный рост: (1) опухолевых клеток (опухолей), экспрессирующих активированный Ras онкоген; (2) опухолевых клеток, в которых Ras белок активирован в результате онкогенной мутации другого гена; (3) доброкачественных и злокачественных клеток других пролиферативных заболеваний, в которых имеет место аберрантная активация Ras; и (4) любых опухолей, которые пролиферируют на основании фарнезилпротеинтрансферазы. Термин лечить в данном описании, если не указано иначе, означает изменение, облегчение, ингибирование развития или профилактику расстройства или состояния, к которому применим данный термин, или одного или более симптомов такого расстройства или состояния. Термин лечение в данном описании, если не указано иначе, относится к акту лечения в том смысле, в котором термин лечить определен выше. Термин соединение, которое снижает сродство для erbB1 рецептора в данном описании, если не указано иначе, означает, что соединение является ингибитором егbВ 2 и имеет интервал селективности для рецептора егbВ 2 над рецептором erbB1 от 50 до 1500, т.е. соединение в 50-1500 раз более селективно по отношению к рецептору егbВ 2 по сравнению с рецептором erbB1. В предпочтительном варианте ингибитор егbВ 2 имеет интервал селективности для егbВ 2 над erbB1 от 60 до 1200. В более предпочтительном варианте ингибитор егbВ 2 имеет интервал селективности для егbВ 2 над erbB1 от 80 до 1000. В еще более предпочтительном варианте ингибитор егbВ 2 имеет интервал селективности для егbВ 2 над erbB1 от 90 до 500. В более предпочтительном варианте ингибитор егbВ 2 имеет интервал селективности для егbВ 2 над erbB1 от 100 до 300. В более предпочтительном варианте ингибитор егbВ 2 имеет интервал селективности для егbВ 2 над erbB1 от 110 до 200. Селективность ингибитора егbВ 2 над ингибиторомerbB1 измеряют с применением исследования цельной клетки (здоровой), описанного ниже. Описание изобретения Данное изобретение относится к сукцинату и малонату Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6 метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. В одном из предпочтительных вариантов данное изобретение относится к сесквисукцинату и дималонату Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил) ацетамида. Изобретение также относится к способу получения сесквисукцината и дималоната Е-2-метокси-N(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. Соли в соответствии с данным изобретением применяют для лечения гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак, у млекопитающих, особенно человека, и к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения. Соли соединения формулы I характеризуются элементным анализом.In vitro активность соединений формулы I может быть определена следующим методом.In vitro активность соединений формулы I в качестве ингибиторов erbB киназы в здоровых клетках может быть определена следующим методом. Клетки, например 3 Т 3 клетки, трансфецированные человеческой EGFR (Cohen et al., J. Virology 67:5303, 1993) или химерной EGFR/erbB2 киназой (EGFR внеклеточной/егbВ 2 внутриклеточной, Fazioli et al., Mol. Cell. Biol. 11:2040, 1991) помещают в 96-ячеечные планшеты в количестве 12000 клеток на ячейку в 100 мкл среды (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (DMEM) с 5% фетальной телячьей сывороткой, 1% пен/стрептомицина, 1% Lглутамина) и инкубируют при температуре 37 С, 5% СO2. Тестируемые соединения солюбилизируют в ДМСО при концентрации 10 мМ и тестируют с конечными концентрациями 0, 0,3 мкМ, 1 мкМ, 0,3 мкМ,0,1 мкМ и 10 мкМ в среде. Клетки инкубируют при температуре 37 С в течение 2 ч. Добавляют EGF (40 нг/мл конечная) в каждую ячейку и клетки инкубируют при комнатной температуре в течение 15 мин с последующим отсасыванием среды, затем добавляют 100 мкл/ячейку холодного фиксатора (50% этанол/50% ацетон, содержащий 200 микромоль ортованадата натрия). Планшет инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре с последующим промыванием промывочным буфером (0,5% Tween 20 в физиологическом растворе с фосфатным буфером). Добавляют блокирующий буфер (3% альбумина бычьей сыворотки, 0,05% Tween 20, 200 мкМ ортованадата натрия в физиологическом растворе с фосфатным буфером, 100 мкл/ячейку) с последующей инкубацией в течение 2 ч при комнатной температуре с последующими двумя промывками промывочным буфером. PY54 моноклональные антифосфотирозиновые антитела, непосредственно конъюгированные с пероксидазой хрена (50 мкл/ячейку, 1 мкг/мл в блокирующем буфере) или блокирующий конъюгат (1 мкг/мл с 1 мМ фосфотирозином в блокирующем буфере для проверки специфичности) добавляют, и планшеты инкубируют в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем ячейки планшета промывают 4 раза промывочным буфером. Колориметрический сигнал получают при добавлении ТМВ Microwell Peroxidase Substrate (Kirkegaard and Perry, Gaithersburg,MD), 50 мкл на ячейку и останавливают добавлением 0,09 М серной кислоты, 50 мкл на ячейку. Абсорбция при 450 нМ подтверждает фосфотирозиновое содержимое белков. Увеличение сигнала в обработанных EGF клетках по сравнению с контролем (не обработанные EGF) подтверждает активность EGFR илиEGFR/химера соответственно. Мощность ингибитора определяют измерением концентрации соединения,необходимого для ингибирования увеличения фосфотирозина на 50% (IС 50) в каждой линии клеток. Селективность соединений по отношению к егbВ 2 к EGFR определяют сравнением IС 50 для EGFR трансфектанта с этим показателем для erbB2/EGFR химера трансфектанта. Таким образом, например, соединение с IС 50 100 нМ для EGFR трансфектанта и 10 нМ для erbB2/EGFR химера трансфектанта считается в 10 раз более селективным по отношению к егbВ 2 киназе. Введение соединений в соответствии с данным изобретением (далее активного соединения(й может осуществляться любым способом, который обеспечивает доставку соединений в место действия. Эти способы включают пероральные способы, интрадуоденальные способы, парентеральное введение(включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или инфузии), местное и ректальное введение. Количество вводимого активного соединения зависит от лечимого пациента, тяжести заболевания или состояния, скорости введения и мнения лечащего терапевта. Однако эффективная доза составляет от около 0,001 до около 100 мг на кг массы тела в день, предпочтительно от около 1 до около 35 мг/кг/день,одной или несколькими дозами. Для человека весом 70 кг доза будет составлять от около 0,05 до около 7 г/день, предпочтительно от около 0,2 до около 2,5 г/день. В некоторых случаях уровни дозы ниже нижнего предела указанного выше интервала могут быть применимы, а в других случаях могут применяться большие дозы без побочных эффектов, при условии, что такие большие дозы разделены на несколько небольших доз для введения в течение дня. Активное соединение может вводиться в чистом виде либо вместе с одним или более другими противоопухолевыми веществами, например, выбранными, например, из миотических ингибиторов, например винбластина; алкилирующих агентов, например цис-платина, карбоплатина и циклофосфамида; антиметаболитов, например 5-фторурацила, цитозинарабинозида и гидроксимочевины, или, например, одного из предпочтительных антиметаболитов, описанных в заявке на европейский патент 239362, таких как N-(5-[N-(3,4-дигидро-2-метил-4-оксохиназолин-6-илметил)-N-метиламино]-2-теноил)-L-глутаминовая кислота; ингибиторов фактора роста; ингибиторов клеточного цикла; внедряющихся антибиотиков,например адриамицина и блеомицина; ферментов, например интерферона; и антигормональных агентов,например антиэкстрогенов, таких как Nolvadex (тамоксифен) или, например, антиандрогенов, таких как Casodex (4'-циано-3-(4-фторфенилсульфанил)-2-гидрокси-2-метил-3'-(трифторметил)пропионанилид). Такое совместное лечение может осуществляться одновременным, последовательным или раздельным введением дозы отдельных компонентов лечения. Фармацевтическая композиция, например, может быть в виде, подходящем для перорального введения в виде таблеток, капсул, пилюль, порошка, лекарственных форм с замедленным выделением, растворов, суспензий, для парентеральных инъекций в виде стерильных растворов, суспензий или эмульсий,для местного введения в виде мазей или кремов, или для ректального введения в виде суппозиториев. Фармацевтическая композиция может быть в виде стандартной лекарственной формы, подходящей для однократного введения определенных доз. Фармацевтическая композиция включает подходящий фармацевтический носитель или наполнитель и соединения в соответствии с данным изобретением в качестве активного ингредиента. Кроме того, она может включать другие медицинские или фармацевтические агенты, носители, адъюванты и т.д. Примеры форм для парентерального введения включают растворы или суспензии активных соединений в стерильных водных растворах, например водном пропиленгликоле или растворе декстрозы. Такие дозированные формы могут содержать подходящий буфер, при необходимости. Подходящие фармацевтические носители включают инертные разбавители или наполнители, воду и различные органические растворители. Фармацевтические композиции могут, при желании, содержать дополнительные ингредиенты, такие как вкусовые добавки, связующие агенты, наполнители и т.д., таким образом, для перорального введения таблетки, содержащие различные наполнители, такие как лимонная кислота, могут применяться вместе с различными разрыхляющими агентами, такими как крахмал, альгиновая кислота и определенные комплексные силикаты, и со связывающими агентами, такими как сахароза, желатин и акация. Кроме того, в таблетках часто применяются смазывающие агенты, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. Твердые композиции подобного типа также могут применяться в мягких и твердых желатиновых капсулах. Предпочтительные материалы включают лактозу или молочный сахар и полиэтиленгликоли с высоким молекулярным весом. Если для перорального введения нужны водные суспензии или эликсиры, активное соединение может быть объединено с различными подсластителями или вкусовыми добавками, красителями и, при желании, эмульгирующими агентами или суспендирующими агентами, вместе с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль,глицерин или их комбинация. Способы получения различных фармацевтических композиций с определенным количеством активного соединения известны или очевидны специалистам в данной области техники. Например, см.Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975). Примеры и препаративные формы, представленные ниже, иллюстрируют и являются примерами соединений в соответствии с данным изобретением и способов получения таких соединений. Должно-6 007412 быть понятно, что объем данного изобретения не ограничен никаким образом объемом представленных ниже примеров и препаративных форм. В представленных ниже примерах молекулы с одним хиральным центром, если не указано иначе, существуют в виде рацемической смеси. Молекулы с двумя или более хиральными центрами, если не указано иначе, существуют в виде рацемической смеси диастереомеров. Индивидуальные энантиомеры/диастереомеры могут быть получены методами, известными специалистам в данной области техники. Если в представленных ниже примерах получения и примерах есть ссылка на ВЭЖХ, общие условия, если не указано иначе, таковы, как представлены ниже. Применяемая колонка - колонка ZORBAXRXC18 (производство Hewlett Packard), расстояние 150 мм и внутренний диаметр 4,6 мм. Образцы обрабатывают на системе Hewlett Packard-1100. Применяют метод градиентного растворителя, включающий 100% ацетат аммония/буфер с уксусной кислотой (0,2 М) до 100% ацетонитрила за 10 мин. Система работает на промывочном цикле со 100% ацетонитрилом в течение 1,5 мин, и затем 100% буферным раствором в течение 3 мин. Скорость потока в течение этого периода постоянная - 3 мл/мин. В следующих примерах и примерах получения Et означает этил, АС означает ацетил, Me означает метил, ЕТОАС или EtOAc означает этилацетат, ТГФ означает тетрагидрофуран и Вu означает бутил. Пример 1. Свободное основание Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси) фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. Свободное основание Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино] хиназолин-6-илаллил)ацетамида получают согласно методике примера 182 (LMRS: 470,1, ВЭЖХ RT: 5,05), применяя методику G, описанную в заявке на патент США 09/883752, поданной 18 июня 2001 г.,описание которой включено сюда в качестве ссылки в полном объеме. Методика G из заявки на патент США 09/883752 представлена ниже. Методика G. Синтез E-N-(3-4-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида (7). Трет-бутиловый сложный эфир Е-(3-4-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино] хиназолин-6-илаллил)карбаминовой кислоты. К раствору 7,53 мл 65 мас.% раствора натрий бис(2 метоксиэтокси)алюмогидрида в толуоле (Red-Al, 24,2 ммоль) в 90 мл тетрагидрофурана при температуре 0 С добавляют 5,0 г трет-бутилового сложного эфира (3-4-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси) фениламино]хиназолин-6-илпроп-2-инил)карбаминовой кислоты в виде твердого вещества. Реакционную смесь перемешивают при температуре 0 С в течение 2 ч, гасят 10% водным карбонатом калия и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы сушат и выпаривают. Неочищенный продукт очищают на 115 г силикагеля, элюируя 80% этилацетатом/гексаном с получением 4,42 г третбутилового сложного эфира Е-(3-4-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)карбаминовой кислоты. 1H-ЯМР (CDCl3):8,66 (с, 1), 8,24 (м, 1), 8,03 (м, 2), 7,77 7,65 (м, 3), 7,13 (м, 2), 6,97 (д, J=8,7 Гц, 1),6,54 (д, 1), 6,35 (м, 1), 4,9 (м, 1), 3,90 (м, 2), 2,52 (с, 3), 1,46 (с, 9). Е-[6-(3-аминопропенил)хиназолин-4-ил]-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фенил]амин. К раствору 4,42 г трет-бутилового сложного эфира Е-(3-4-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси) фениламино]хиназолин-6-илаллил)карбаминовой кислоты в 21 мл тетрагидрофурана добавляют 21 мл 2 н. хлористо-водородной кислоты. Смесь нагревают при температуре 60 С в течение 3 ч, охлаждают до комнатной температуры и подщелачивают 10% водным карбонатом калия. К водной смеси добавляют метиленхлорид и осаждают твердое вещество. Твердое вещество фильтруют и сушат с получением 2,98 г Е-[6-(3-аминопропенил)хиназолин-4-ил]-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фенил]амина. 1 Н-ЯМР (d6-ДМСО):8,62 (с, 1), 8,53 (м, 1), 8,26 (м, 2), 7,99 (м, 1), 7,89 (м, 1), 7,77 (м, 1), 7,30 (м, 3),6,67 (м, 2), 3,44 (м, 2), 2,47 (с, 3).E-N-(3-4-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамид. Смесь 14,4 мл (0,25 ммоль) уксусной кислоты и 40,3 мг (0,33 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 2 мл метиленхлорида перемешивают в течение 10 мин и обрабатывают 100,3 мг Е-[6-3-аминопропенил)хиназолин-4-ил]-[3-хлор-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фенил]амина. Реакцию перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Образовавшийся осадок фильтруют и подвергают хроматографии на силикагеле, элюируя 6-10% метанолом/хлороформом с получением 106 мг указанного в заголовке соединения; т.пл. 254-256 С. 1 Н-ЯМР (d6-ДМСО):9,88 (с, 1), 8,58 (с, 1), 8,48 (м, 1), 8,20 (м, 3), 7,95 (м, 1), 7,83 (м, 1), 7,71 (д,J=8,7 Гц, 1), 7,24 (м, 2), 7,19 (д, J=8,7 Гц, 1), 6,61 (д, J=16,2 Гц, 1), 6,48 (м, 1), 3,90 (м, 2). Пример 2. Сесквисукцинат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. К раствору Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида в горячем ТГФ/ацетоне (5/100) добавляют 2 экв. янтарной кислоты. При охлаждении раствора медленно образуются кристаллы. После суспендирования в течение ночи кристаллы фильтруют и промывают ацетоном. Продукт выделяют в виде белого твердого вещества и подтверждают как сесквисукцинат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-7 007412 6-илаллил)ацетамида CHN анализом. Рассчитано: С=61,29, Н=5,61, N=10,83, получено в эксперименте: С=61,04, Н=5,61, N=10,85. Пример 3. Дималонат E-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино] хиназолин-6-илаллил)ацетамида. К раствору E-2-мeтокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида (1 г) в горячем ацетоне (100 мл) добавляют 2 экв. малоновой кислоты (443 мг). При охлаждении раствора в течение 2 ч образуются кристаллы, которые после суспендирования в течение ночи фильтруют и промывают ацетоном. Светло-желтое твердое вещество (1,36 г, 94%) подтверждают как дималонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида CHN анализом. Рассчитано: С=58,49, Н=5,21, N=10,33, получено в эксперименте: С=58,30, Н=5,12, N=10,33. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Сукцинат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида. 2. Соединение по п.1, в котором сукцинатом является сесквисукцинат Е-2-метокси-N-(3-4-[3 метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. 3. Способ лечения рака у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества сесквисукцината Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3 илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения рака,где упомянутый рак выбран из группы, состоящей из рака груди и рака яичников. 4. Способ лечения рака у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества соединения по п.1, которое является эффективным для лечения рака в комбинации с противоопухолевым агентом, выбранным из группы, включающей миотические ингибиторы, алкилирующие агенты, антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста, радиацию,ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела, цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты, где упомянутый рак выбран из группы, состоящей из рака груди и рака яичников. 5. Способ по п.4, который включает введение указанному млекопитающему такого количества соединения по п.1, которое является эффективным для лечения аномального роста клеток в комбинации с цитотоксическим агентом. 6. Способ лечения рака у млекопитающих, который включает введение указанному млекопитающему такого количества соединения по п.1, которое является эффективным для лечения рака в комбинации с соединением, выбранным из группы, включающей циклофосфамид, 5-фторурацил, флоксуридин,гемцитабин, винбластин, винкристин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, тамоксифен, метилпреднизолон, цисплатин, карбоплатин, СРТ-11, гемцитабин, паклитаксел и доцетаксел. 7. Фармацевтическая композиция, включающая количество соединения по п.1, эффективное для лечения гиперпролиферативного расстройства у млекопитающего, и фармацевтически приемлемый носитель. 8. Малонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида. 9. Соединение по п.8, в котором малонатом является дималонат Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6 метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида. 10. Способ лечения рака, который включает введение указанному млекопитающему такого количества дималоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6 илаллил)ацетамида, которое является эффективным для лечения рака. 11. Способ лечения рака, который включает введение указанному млекопитающему такого количества соединения по п.10, которое является эффективным для лечения рака в комбинации с противоопухолевым агентом, выбранным из группы, включающей миотические ингибиторы, алкилирующие агенты,антиметаболиты, внедряющиеся антибиотики, ингибиторы фактора роста, радиацию, ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологической реакции, антитела,цитотоксические агенты, антигормональные агенты и антиандрогенные агенты, где упомянутый рак выбран из группы, состоящей из рака груди и рака яичников. 12. Способ получения сукцината Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси) фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида, включающий взаимодействие Е-2-метокси-N-(3-4-[3 метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида и янтарной кислоты. 13. Способ получения малоната Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил-4-(6-метилпиридин-3-илокси) фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида, включающий взаимодействие Е-2-метокси-N-(3-4-[3-метил 4-(6-метилпиридин-3-илокси)фениламино]хиназолин-6-илаллил)ацетамида (1 г) и малоновой кислоты. Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2/6