Стимулятор sgc или активатор sgc, применяемый для лечения кистозного фиброза отдельно или в комбинации с ингибитором pde5

СТИМУЛЯТОР sGC ИЛИ АКТИВАТОР sGC, ПРИМЕНЯЕМЫЙ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КИСТОЗНОГО ФИБРОЗА ОТДЕЛЬНО ИЛИ В КОМБИНАЦИИ С ИНГИБИТОРОМ Изобретение касается растворимой гуанилатциклазы (sGC) и фосфодиэстераз (PDE),а также фармакологии стимуляторов sGC, активаторов sGC и ингибиторов PDE. В частности, изобретение касается применения стимулятора sGC или активатора sGC,выбранного из группы, включающей метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат и 3-(4-амино-5-циклопропилпиримидин-2 ил)-1-(2-фторбенил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин, в качестве средства, применяемого для лечения кистозного фиброза отдельно или в комбинации с игнибитором PDE5, варденафилом.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: АДВЕРИО ФАРМА ГМБХ (DE) Настоящее изобретение касается растворимой гуанилатциклазы (sGC) и фосфодиэстераз (PDE), а также фармакологии стимуляторов sGC, активаторов sGC и ингибиторов PDE. В частности, данное изобретение касается применения стимулятора sGC или активатора sGC, выбранного из группы, включающей метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил(метил)карбамат и 3-(4-амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4b]пиридин, в качестве средства для лечения кистозного фиброза отдельно или в комбинации с ингибитором PDE5, варденафилом. Предпосылки к созданию изобретения Несколько десятилетий назад были открыты циклические нуклеотиды, циклические аденозинмонофосфаты (цАМФ) и циклические гуанозинмонофосфаты (цГМФ), которые являются одним из наиболее важных путей вторичных мессенджеров в клетках. Точно установлено, что регуляция внутриклеточных пулов цГМФ значительно влияет на физиологию и патофизиологию, а также является одним из основных принципов фармакологического воздействия (Eugenov et al. 2006; Schmidt et al. 2009). Нитраты и ингибиторы PDE5 (PDE5i), которые могут увеличивать внутриклеточные уровни цГМФ, таким образом представляют собой уже одобренные способы лечения ангины и легочной артериальной гипертензии(РАН) или эректильной дисфункции (ED) соответственно. Недавно открытые стимуляторы и активаторыsGC находятся на последней стадии клинических исследований РАН и сердечной недостаточности. Таким образом, направленное воздействие на путь NO/цГМФ с помощью производства цГМФ (нитратов,стимуляторов sGC, активаторов sGC) или разделения цГМФ (PDE5i) стало очень эффективной стратегией фармакологического воздействия на различные заболевания. На молекулярном уровне производство NO ведет к стимулированию растворимой гуанилатциклазы(sGC), приводя к повышенному образованию цГМФ. Следовательно, цГМФ регулирует различные последующие цели, главным образом регулируемые цГМФ протеинкиназы (G-киназы), регулируемые цГМФ фосфодиэстеразы (PDE), а также регулируемые цГМФ ионные каналы, которые передают сигналNO, и увеличение цГМФ приводит к уменьшению внутриклеточного свободного кальция. Таким образом, наиболее выраженной реакцией на увеличение внутриклеточного цГМФ, в особенности в гладкомышечной клетке (SMC), является расслабление. Кроме того, ведется исследование антипролиферативных, антифиброзных или проапоптозных эффектов цГМФ, которые могут расширить возможности лечения для ингибиторов PDE5 (Sandner et al. 2007, Schmidt et al. 2009). Недавно некоторые научные данные показали, что ингибиторы PDE5 могут также воздействовать на выделение хлорида через каналпереносчик для ионов хлора CFTR и использоваться для лечения кистозного фиброза (Clarke 2008). Кистозный фиброз (CF) является одним из наиболее распространенных генетических заболеваний,вызванных мутацией единственного гена, канала трансмембранного регулятора муковисцидоза, которое проявляется у 1 из 2500-3000 новорожднных. При данном заболевании аномальный перенос ионов по дыхательному эпителию ведет к обезвоживанию поверхности дыхательных путей и появлению вязкой и трудновыводимой слизи. Это влечет за собой появление хронических инфекций дыхательных путей, высокий уровень заболеваемости и смертности в раннем возрасте. До сих пор лечение в основном сводилось к лечению антибактериальными средствами и пересадкой легкого, при этом отсутствует обычная терапия, основанная на коррекции и потенцировании ослабленной функции CFTR. На молекулярном уровне мутация гена CFTR приводит к CF. В гене CFTR было обнаружено большое количество мутаций, вызывающих кистозный фиброз. Однако наиболее распространенной мутацией является исключение фенилаланина в позиции 508 аминокислотной последовательности CFTR, которая называется F508-CFTR. Данная мутация происходит приблизительно в 70-80% случаев CF и считается тяжелым заболеванием. Удаление остатка 508 в F508-CFTR препятствует правильному процессингу и свертыванию зрелого белка. Этот неправильно свернутый CFTR не может или может, но не полностью, выйти из ER и добраться до клеточной мембраны. В результате число каналов, находящихся в мембране пациентов с CFTR,значительно меньше, чем в наблюдаемых клетках CFTR дикого типа. Кроме того, мутировавший канал проявил ослабленную активность. Сокращенное количество каналов в эпителиальных мембранах, а также ослабленная активность канала ведет к значительному ослаблению переноса анионов в эпителии, что приводит к повреждению ионного и флюидного переноса. Это вызывает дисбаланс во флюидном переносе в эпителии легкого и, наконец, значительное накопление вязкой слизи в легких. Более того, нарушенная функция CFTR также влияет, например, на панкреатическую функцию, желудочно-кишечные функции, функцию печени, функции секреторных желез или секрецию инсулина. Таким образом, нарушенная несколькими мутациями функция CFTR ведет к кистозному фиброзу. Следовательно, коррекция и/или потенцирование функции CFTR данных мутаций может представлять собой этиотропное лечение кистозного фиброза (CF). В дополнение, коррекция и/или потенцирование функции CFTR мутаций может представлять собой этиотропное лечение дисфункции поджелудочной железы, дисфункции печени, сухости во рту, сухости глаз, синдрома Шегрена, а также сахарного диабета, вызванного CF. Было установлено, что в эпителиальных клетках легкого силденафил - эффективный и избиратель-1 025177 ный PDE5i - увеличил выделение хлорида (Cobb et al. 2003). В дополнение, PDE5i может in vitro влиять на движение и функциональную активность мутировавших каналов CFTR в клеточной мембране (Dormeret al. 2005, Carlile et al. 2007, Robert et al. 2008). Наряду с данными результатами было установлено, что ингибиторы PDE5, при применении в животных моделях кистозного фиброза (CF) способны сокращать секрецию муцина (Mc Pherson 1999), а также влиять на выделение хлорида (Lubamba et al. 2008). Таким образом, была выдвинута гипотеза о том, что ингибиторы PDE5 могут применяться для лечения кистозного фиброза (Cobb 1999, Lubamba et al. 2008, Clarke 2008). Тем не менее, применение ингибиторов PDE5 ограничено, так как они могут ингибировать только деструкцию цГМФ. В случаях, когда производство NO-зависимых цГМФ является невысоким, их эффективность является, по меньшей мере, ослабленной. Очень интересно, что недавно описанные соединения могут обходить данное ограничение ингибиторов PDE5 посредством прямого стимулирования или активации растворимой sGC. Было установлено два класса соединений, активирующих sGC независимо отNO, гемнезависимые стимуляторы sGC, такие как BAY 41-2272, соединение нижеуказанной формулы (2) и BAY 63-2521, соединение нижеуказанной формулы (1). Следовательно, мы исследовали указанные стимулятор sGC и активатор sGC по отдельности или в комбинации с ингибитором PDE5, т.е. варденофилом, in vitro в клетках, а также в образцах человеческой ткани и in vivo в трансгенных CFTR животных моделей. В частности, указанные ингибитор PDE5, стимулятор sGC и активатор sGC по отдельности или в комбинациях тестировали в клетках BHK, экспрессирующих мутирующий канал CFTR, т.е. теговый канал дельта F508 CFTR,на экспрессию поверхности клетки дельта F508 CFTR; в клетках HEK-293, экспрессирующих мутирующий канал CFTR, т.е. дельта F508 CFTR, на функцию CFTR посредством измерения поступления йода с помощью флуоресценции; в клетках HEK-293, экспрессирующих мутирующий канал CFTR, т.е. дельта F508 CFTR, на улучшенный биосинтез (диск В) и обработку (диск С); в клетках CFBE 410, экспрессирующих мутирующий канал CFTR, т.е. дельта F508 CFTR, на трансэпителиальную проводимость в экспериментах в камере Уссинга; в ректальной биопсии пациентов с CF и в сравнении с ректальной биопсией пациентов без CF на трансэпителиальную проводимость в экспериментах в камере Уссинга; на трансгенных мышах, экспрессирующих канал дельта F508 CFTR, на разность назальных потенциалов и слюноотделение; на трансгенных мышах, не экспрессирующих CFTR, на разность назальных потенциалов и слюноотделение. Впервые мы можем продемонстрировать, что стимуляторы и активаторы растворимой гуанилатциклазы, скорректированная и потенцированная функция CFTR, представляют собой новую этиотропную терапию для пациентов с CF. В дополнение, мы совершенно неожиданно установили, что комбинации стимуляторов sGC или активаторов sGC с PDE5 проявляют больше, чем аддитивные эффекты при коррекции и потенцировании. Таким образом, комбинации могут представлять собой первую этиотропную и эффективную терапию для лечения кистозного фиброза (CF). В частности, мы установили, что ингибиторы PDE5 могут корректировать и потенцировать функцию CFTR, т.е. функцию дельта F508 CFTR in vitro. Мы также установили, что стимуляторы sGC и активаторы sGC - которые до настоящего времени не использовались - способны корректировать и потенцировать функцию CFTR, т.е. функцию дельта F508 CFTR. Наконец, мы установили, что комбинации стимуляторов sGC или активаторов sGC с ингибиторами PDE5 превосходят монотерапию и проявляют сверхаддитивный эффект в функции CFTR, т.е. функции дельта F508 CFTR. Подводя итог, мы установили, что комбинации стимулятора sGC или активатора sGC, выбранного из вышеуказанной группы, по отдельности и в комбинации с ингибитором PDE5, варденафилом, могут корректировать и потенцировать функцию CFTR in vitro и in vivo. Благодаря указанной эффективности стимулятора sGC или активатора sGC и комбинаций стимулятора sGC или активатора sGC с ингибитором PDE5, варденафилом, подобное отдельное лечение и комплексное лечение могут использоваться для лечения кистозного фиброза (CF). Описание изобретения Пульмонологические нарушения, на которые направлены терапевтические средства настоящего изобретения, которые, в частности и со значительным преимуществом, можно лечить вышеуказанными стимуляторами sGC или активаторами sGC по отдельности или в комбинации с вышеуказанным ингибитором PDE5, представляют собой заболевания легких, к которым относится кистозный фиброз (CF). Секреторные нарушения, на которые направлены терапевтические средства настоящего изобретения, которые, в частности и со значительным преимуществом можно лечить вышеуказанными стимуляторами sGC или активаторами sGC по отдельности или в комбинации с вышеуказанным ингибиторомPDE5, включают, в том числе, дисфункцию поджелудочной железы, желудочно-кишечные расстройства,заболевания печени, а также сахарный диабет, связанный с кистозным фиброзом (CFRD). К другим нарушениям, на которые направлены терапевтические средства настоящего изобретения,-2 025177 которые, в частности и со значительным преимуществом, можно лечить вышеуказанными стимуляторами sGC или активаторами sGC по отдельности или в комбинации с вышеуказанным ингибитором PDE5,относится, в том числе, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), сухость глаз, сухость во рту,а также синдром Шегрена. Все заболевания, на которые направлены терапевтические средства настоящего изобретения, которые, в частности и со значительным преимуществом, можно лечить вышеуказанными стимуляторамиsGC или активаторами sGC по отдельности или в комбинации с вышеуказанным ингибитором PDE5,являются заболеваниями, в которых имеет место нарушение выделения хлорида через CFTR. Настоящее изобретение предоставляет стимулятор sGC или активатор sGC из вышеуказанной группы по отдельности или в комбинации с ингибитором PDE5, варденафилом, подходящими для лечения кистозного фиброза (CF), которые также являются более эффективными способами лечения, по сравнению с уже известными. Настоящее изобретение также предоставляет стимулятор sGC или активатор sGC из вышеуказанной группы по отдельности или в комбинации с ингибитором PDE5, варденафилом, подходящими для лечения кистозного фиброза (CF), которые имеют лучший профиль побочного действия, по сравнению с уже известными способами лечения. Вышеуказанные стимулятор гуанилат циклазы (sGC) и активатор sGC имеют следующие формулы(3-(4-амино-5-циклопропилпиридин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин,описанный в примере 1 WO 00/06568). Соединения (1), (2) являются известными стимуляторами растворимой гуанилатциклазы (sGC), которые, как было уже указано, применяют для лечения стабильной стенокардии или эректильной дисфункции. Варденафил(2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3 Нимидазо(5,1-f) (1,2,4)триазин-4-он) может также иметься в виде соли, гидрата или гидрата соли. Фармацевтический состав настоящего изобретения имеет структуру, совместимую с предполагаемым способом введения. К способам введения относится, например, парентеральное, внутривенное,внутрикожное, подкожное, оральное (например, ингаляция), трансдермальное (местное), чресслизистое и ректальное введение. К фармацевтическим составам, подходящим для инъекционного введения, относятся стерильные водные растворы (в которых вода растворяется) или суспензии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных инъекционных растворов или суспензий. Носитель может быть растворителем или диспергатором, содержащим, например, воду, этанол, фармацевтически приемлемый полиолоподобный глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль, а также их возможные смеси. Необходимый уровень текучести может поддерживаться, например, с помощью оболочки, такой как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае рассеивания, либо с помощью ПАВ. Действие микроорганизмов можно предотвратить, используя различные бактерицидные и противогрибковые средства, такие как парабены, хлорбутанол, фенол, аскорбиновая кислота, тимеросал и им подобные. Во многих случаях предпочтительно применение изотонических средств, например сахаров, поли-3 025177 спиртов, таких как маннит, сорбит натрия хлорид в составе. Композиции для орального применения обычно включают инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. Для орального введения активное соединение может быть объединено с наполнителями и использовано в форме таблеток, пастилок или капсул. Композиции для орального применения могут также быть приготовлены с применением жидкого носителя для применения в качестве ополаскивателя для полости рта, в котором жидкий носитель вводится орально и полоскается, отхаркивается или проглатывается. Фармацевтически совместимые связующие вещества и/или вспомогательные вещества могут также входить в состав композиции. Таблетки, драже, капсулы, пастилки и им подобные могут содержать любой из следующих ингредиентов или им подобные соединения: связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагант или желатин; наполнитель, такой как крахмал или лактоза, распадающееся вещество, такое как альгиновая кислота, Примогель или крахмал; скользящее вещество, такое как стеарат магния или стеараты; регулятор сыпучести, такой как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; а также ароматизатор, такой как мята, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор. Для введения путем ингаляции соединения доставляются в форме спрея-аэрозоля из контейнера под давлением или диспергатора, содержащего подходящий пропеллент, например газ, такой как углекислый газ, или распылитель. Систематическое введение может также производиться чресслизистым или трансдермальным способом. В препаративных формах для чресслизистого или трансдермального введения применяют вещества, способствующие прониканию, подходящие для преодоления барьера. Подобные вещества, способствующие прониканию, известны в уровне техники и включают, например, для чресслизистого введения детергенты, соли жлчных кислот и производные фусидовой кислоты. Для чресслизистого введения применяют назальные спреи или суппозитории. Как известно в уровне техники, активные соединения производятся в форме мазей, бальзамов, гелей или кремов для трансдермального нанесения. Соединения могут также быть приготовлены в форме суппозиториев (например, на основе обычных суппозиториев, таких как какао-масло и другие глицериды) или удерживающих клизм для ректального введения. В одном из вариантов осуществления изобретения активные соединения производятся с носителями, защищающими соединение от быстрого выведения из тела, такими как препаративная форма с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут использоваться биологически разлагаемые, биологически совместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолиевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. В другом варианте осуществления изобретения настоящее изобретение предоставляет стимуляторыsGC или активаторы sGC в комбинации с вышеуказанным ингибитором PDE5, а также их применение для приготовления фармацевтических композиций для кистозного фиброза (CF), в которых данные комбинации включают либо i) фармацевтические композиции, содержащие соединение со стимулирующим или активирующим действием sGC и ингибиторной активностью PDE-5, либо ii) фармацевтические композиции, включающие один стимулятор sGC и активатор sGC и по меньшей мере один ингибитор PDE-5 в качестве фиксированной комбинации в единице для однократного приема, либо iii) набор частей, содержащий по меньшей мере два набора фармацевтических композиций, каждый из которых имеет по меньшей мере один фармацевтический препарат, содержащий ингибитор PDE-5 в единицах по меньшей мере одной дозы, и по меньшей мере один фармацевтический препарат, содержащий активатор sGC или стимулятор sGC в единицах по меньшей мере одной дозы, где каждая единица приема указанных фармацевтических композиций применяется в комбинации, последовательно, в качестве однократной дозы или в многократных дозах. В частности, настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для лечения кистозной фиброзы (CF), содержащую по меньшей мере одно из следующих соединений: метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил(метил)карбамат формулы (1); 3-(4-амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин формулы(2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3 Нимидазо (5,1-f) (1,2,4)триазин-4-он). Стимулятор и активатор sGC применяют для приготовления фармацевтической композиции для лечения кистозного фиброза (CF). Комбинацию по меньшей мере одного стимулятора или активатора sGC с вышеуказанным ингибитором PDE5 применяют для приготовления фармацевтической композиции для лечения кистозного фиброза (CF). Применение фармацевтической композиции, как указано выше, для стимулирования и активации растворимой гуанилатциклазы у млекопитающих, страдающих кистозным фиброзом (CF). Применение фармацевтической композиции, как указано выше, для стимулирования и активации растворимой гуанилатциклазы, а также для регуляции активности PDE у млекопитающих, страдающих кистозным фиброзом (CF). Для выяснения эффекта стимуляторов sGC и активаторов sGC, действующих по отдельности и в комбинации с варденофилом, проводят эксперименты. Предпочтительным вариантом осуществления изобретения является комбинация по меньшей мере одного стимулятора или активатора sGC, выбранного из группы, включающей метил-4,6-диамино-2-[1(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат формулы (1) и 3-(4 амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин формулы (2), с ингибитором PDE5, представляющим собой варденафил, где комбинация содержит от 0,1 до 1 мг стимулятора или активатора sGC и от 2,5 до 20 мг ингибитора PDE5. Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является комбинация, в которой стимулятор sGC представляет собой метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1H-пиразоло[3,4b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил(метил)карбамат формулы (1). Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является комбинация, в которой стимулятор sGC представляет собой 3-(4-амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)1 Нпиразоло[3,4-b]пиридин формулы (2). Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является вышеуказанная комбинация для производства лекарственного средства для лечения кистозного фиброза (CF). Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая препаративная форма, содержащая по меньшей мере одну описанную выше комбинацию. Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая препаративная форма, содержащая по меньшей мере одну описанную выше комбинацию для лечения кистозного фиброза (CF). В табл. 1 уровень слюноотделения выражается по возрастающей, после лечения варденофилом(0,07, 0,14, 0,42 мг/кг i.p.) и BAY 41-2272 (соединение по вышеуказанной формуле (2 (0,01, 0,03, 0,1, 0,3 мг/кг i.p.) по сравнению с лечением плацебо, // имеет статистическое значение с величинами р 0,05/0,01/0,001, изученными с помощью дисперсионного анализа, а также критерия Бонферони. Таблица 1 Уровень слюноотделения у мышей с F508 CFTR при лечении плацебо в процентах Пример 1. Эффекты варденафила и стимулятора sGC у трансгенных мышей, экспрессирующие канал дельта F508 CFTR при слюноотделении. Проба слюны мышей с дельта 508-CFTR. Данную пробу брали у самцов и самок в возрасте 10-14 недель, весом 18-36 г с мужскими и женскими гомозиготными и гетерозиготными A508-CFTR (возвратно скрещенные на основе генетического окружения FVB для более чем 12 поколений, изначально полученных в университете им. Эразма Роттердамского; van Doorninck et al., 1995). Растворы варденафила концентрацией 0,07, 0,14 и 0,42 мг/кг BW были изготовлены в стерильном физиологическом растворе, а стимулятор BAY 41-2272 растворили до 0,01, 0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг BW в растворителе, содержащем 50% дистиллированной деминерализированной воды, 40% PEG 400 (полиэтилен гликоль 400) и 10% этанола. Вещества или соответствующие средства вводили мышам посредством внутрибрюшинной инъекции (5 мл/кг BW) за 60 мин. До взятия пробы слюны. Спустя 60 мин мышам вводили анестезию с комбинацией китамина и диазепама. Раствор содержал 1 мл из 5 мг/мл диазепама и 1 мл из 100 мг/мл кетамина в 8 мл стерильного физиологического раствора. Анестезию вводили посредством внутрибрюшинной инъекции раствора (10 мл/кг BW). Для предотвращения взаимостимуляции холинергических рецепторов, после анестезии мышам предварительно делали подкожную инъекцию в левую щеку 1 ммоль атропина (50 мкл). Маленькие полоски фильтрованной бумаги Ватмана помещали в левую щеку на 4 мин для поглощения слюны, выделяемой после инъекции атропина. Первую полоску фильтрованной бумаги удаляли и заменяли второй, предварительно взвешенной, полоской. Затем для индуцирования слюноотделения адренергическими механизмами в левую щеку вводили 50 мкл раствора,содержащего 100 мкМ изопреналина и 1 ммоль атропина. Время введения изопреналина считали началом отсчта, а полоски фильтрованной бумаги меняли каждые 10 мин за общий период сбора 30 мин. Каждую полоску фильтрованной бумаги сразу помещали в предварительно взвешенную пробирку, которую сразу пломбировали. После того, как все образцы были собраны, каждую пробирку снова измеряли,также записывали массу всех образцов. Разницу в общей массе пробирки с бумагой до и после сбора слюны брали в качестве массы нетто слюны, выделенной в период сбора проб. Общее количество слюны рассчитывали следующим образом: масса слюны, деленная на количество минут, необходимое для каждой пробы, затем нормированное по отношению к массе мыши в граммах. Результаты указаны в таблице 1 в качестве среднего увеличения в процентах п мышей, по сравнению с лечением плацебо. Статистические данные проанализировали с помощью дисперсного анализа с использованием критерия Бонферони;// имеет статистическое значение с величинами р 0,05/0,01/0,001, a n.s. означает незначимый. Пример 2. Повторяют описанный в примере 1 опыт с той лишь разницей, что применяют комбинацию 0,01 мг/кг BAY 41-2272 и 0,07 мг/кг варденафила. В данном опыте применяют 10 мышей. При этом уровень слюноотделения составляет 215%, а статистическое значение составляет , т.е. величина р составляет 0,001. Достигнутый уровень слюноотделения представляет собой синергический эффект, о чем свидетельствует следующее сравнение с данными, приведенными в вышеприведенной табл. 1. Согласно этой таблице при применении 0,01 мг/кг BAY 41-2272 уровень слюноотделения составляет 142%, а при применении 0,07 мг/кг варденафила - 111%. Согласно известному уравнению Колби ожидаемое при комбинации двух известных веществ действие Е (Е = х+у - ху/100) составляет только 95,38%(253 (142+111) - 157,62 (111142/100). Пример 3. Результаты испытания метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамата формулы (1). Метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат формулы (1) давали в течение одной недели 16 страдающим хроническим кистозным фиброзом мышам с дельта F508 CFTR в количестве 45 ч/млн, содержащемся в стандартном корме. Кроме того, 16 мышам контрольной группы давался только стандартный корм. До начала опыта мыши анестезировались, после чего у каждой мыши описанным в примере 1 образом определялся средний исходный процентный уровень слюноотделения. После однонедельного лечения мыши снова анестезировались,после чего опять определялся средний уровень слюноотделения в %. Установлено, что средний уровень слюноотделения в случае плацебо составлял 115%, а в случае дачи указанного соединения - 189%. В случае плацебо статистическое значение является незначимым, а в случае дачи указанного соединения оно составляет . Справочная литература: ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение стимулятора или активатора sGC, выбранного из группы, включающей метил-4,6 диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат и 3-(4 амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин, в качестве средства для лечения кистозного фиброза. 2. Применение по п.1, причем в качестве средства для лечения кистозного фиброза применяют метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил(метил)карбамат. 3. Применение по п.1, причем в качестве средства для лечения кистозного фиброза применяют 3-(4 амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин. 4. Применение фармацевтической препаративной формы, содержащей стимулятор или активаторsGC, выбранный из группы, включающей метил-4,6-диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат и 3-(4-амино-5-циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2 фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин, в качестве средства для лечения кистозного фиброза. 5. Средство для лечения кистозного фиброза, представляющее собой комбинацию по меньшей мере одного стимулятора или активатора sGC, выбранного из группы, включающей метил-4,6-диамино-2-[1(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат и 3-(4-амино-5 циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин, и ингибитора PDE5, представляющего собой варденафил. 6. Средство по п.5, в котором стимулятор или активатор sGC представляет собой метил-4,6 диамино-2-[1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-ил]-5-пиримидинил-(метил)карбамат. 7. Средство по п.5, в котором стимулятор или активатор sGC представляет собой 3-(4-амино-5 циклопропилпиримидин-2-ил)-1-(2-фторбензил)-1 Н-пиразоло[3,4-b]пиридин. 8. Фармацевтическая препаративная форма, содержащая средство по п.5.