Комбинированная терапия ингибитором киназы p70 s6 и ингибитором mtor

КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ ИНГИБИТОРОМ КИНАЗЫ p70 S6 И ИНГИБИТОРОМ mTOR Джиджанейдж Сандаруван, Донохо Грегори Пол (US) Медведев В.Н. (RU) В изобретении предложен продукт,включающий соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR, представляющий собой рапамицин, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии, в частности для лечения мультиформной глиобластомы,аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии,рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы, почечноклеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина,лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы; применение указанного продукта для лечения перечисленных выше заболеваний; и способ лечения ракового заболевания, выбранного из перечисленных выше, включающий введение пациенту, который в этом нуждается, 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1 ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина или его фармацевтически приемлемой соли и ингибитораmTOR, представляющего собой рапамицин, в количествах, которые являются эффективными в комбинации.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US) Уровень техники Путь "фосфотидилинозитол-3-киназа (PI3K)/АКТ/мишень рапамицина у млекопитающих" (mTOR) включает ряд сигнальных точек, которые играют важную роль в контроле роста и выживания клеток.mTOR представляет собой серин-треонинкиназу, которая участвует в контролировании множества клеточных функций, таких как клеточная пролиферация, выживание клеток, синтез белка и транскрипция. Было показано, что подавление активности mTOR в опухолевых клетках приводит к остановке роста G1,вызванного нарушением трансляции белков, регулирующих клеточный цикл. Киназа p70 S6 представляет собой серин-треонинпротеинкиназу, которая является расположенным ниже эффектором сигнального пути PI3K/AKT/mTOR. Киназа p70 S6 фосфорилирует рибосомальный белок S6 в клетках и регулирует биогенез рибосом, рост клеток и протекание клеточного цикла в ответ на митогенное стимулирование. Киназа p70 S6, как правило, активирована во многих солидных опухолях. Ингибиторы киназы p70 S6,применяемые для лечения указанных опухолей, описаны в WO 2006/046024 и WO 2008/075109. Рапамицин представляет собой макролидное соединение, продуцируемое бактерией Streptomyceshygroscopicus. Рапамицин связывается с внутриклеточным белком FKBP-12 и образует комплекс, который подавляет активность mTOR. Аналоги рапамицина, которые представляют собой ингибиторы mTOR и находят применение для лечения раковых заболеваний, описаны в ЕР 1413581, WO 95/28406 иWO 03/64383. Существует необходимость в усовершенствованной терапии для лечения раковых заболеваний. Кроме того, существует необходимость в терапии, обладающей значительно большей эффективностью по сравнению с существующей терапией. Предпочтительные комбинированные терапии согласно настоящему изобретению демонстрируют повышенную эффективность по сравнению с лечением лишь одним терапевтическим агентом. Более предпочтительные комбинированные терапии согласно настоящему изобретению демонстрируют повышенную эффективность при введении каждого из терапевтических агентов в дозе, меньшей оптимальной. Краткое описание изобретения В настоящем изобретении предложен продукт,включающий соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии. Также в настоящем изобретении предложен продукт,включающий 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения мультиформной глиобластомы, аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии,рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы, почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина, лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы. Также в настоящем изобретении предложено применение соединения 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидин или его фармацевтически приемлемая соль для применения одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с ингибитором mTOR для лечении мультиформной глиобластомы, аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии, рака поджелудочной железы,рака простаты, карциномы молочной железы, почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы,саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина, лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы. В настоящем изобретении также предложен способ лечения ракового заболевания, выбранного из группы, состоящей из мультиформной глиобластомы, аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии, рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы, почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина,лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы, включающий введение пациенту,который в этом нуждается, соединения 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина или его фармацевтически приемлемой соли и ингибитора mTOR в количествах, которые являются эффективными в комбинации. Подробное описание изобретения Соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин представляет собой ингибитор киназы p70 S6. Соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин представляет собой основание и, соответственно, реагирует с любыми органическими или неорганическими кислотами с образованием фармацевтически приемлемых солей. Термин "фармацевтически приемлемая соль", используемый в настоящем описании, относится к солям соединения 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина, которые являются, по существу, нетоксичными для живых организмов. Указанные соли включают фармацевтически приемлемые соли, перечисленные в Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977), которые известны специалистам в данной области техники. Предпочтительными являются тозилатная (также известная как п-толуолсульфонатная) и гидрохлоридная соли. Особенно предпочтительной является тозилатная соль."Ингибитор mTOR" означает любое соединение, пептид или антитело, которое представляет собой ингибитор mTOR. Предпочтительные ингибиторы mTOR включают рапамицин (также известный как сиролимус) и его аналоги. Рапамицин имеет следующую структуру: Предпочтительные аналоги рапамицина включают эверолимус (42-O-(2-гидрокси)этилрапамицин,описанный в ЕР 1413581), темсиролимус (42-(3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропаноат)рапамицин, Torisel, описанный в WO 95/28406) и дефоролимус (42-(диметилфосфинат)рапамицин,описанный в WO 03/64383). Особенно предпочтительными аналогами рапамицина являются эверолимус и темсиролимус. Некоторые аналоги рапамицина также представляют собой пролекарства рапамицина,так как они метаболизируются в организме с образованием рапамицина. Термин "комбинированная терапия" относится к лечению, включающему введение соединения 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидина или его фармацевтически приемлемой соли и ингибитора mTOR ("терапевтические агенты") в комбинации. Терапевтические агенты могут быть введены одновременно, раздельно или последовательно. Термин "лечащий" или "лечение" включает замедление, прерывание, подавление, контроль, остановку, снижение или обращение прогрессирования или степени тяжести симптома, нарушения, состояния или болезни. Термин "количества, которые являются эффективными в комбинации" означает количество соединения 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Нпиразоло[3,4-d]пиримидина или его фармацевтически приемлемой соли и количество ингибитора mTOR,которые являются эффективными для лечения нарушений, описанных в настоящем изобретении, при введении в комбинации. Количество каждого из фармацевтических агентов, которое является эффективным в комбинации, может быть равным количеству, которое является эффективным при введении терапевтического агента в отдельности, или может быть меньше количества, эффективного при введении терапевтического агента в отдельности (т.е. может представлять собой дозу, меньшую оптимальной). Комбинированную терапию, описанную в настоящем изобретении, можно применять для лечения пролиферативных нарушений, таких как рак, и для подавления ангиогенеза у млекопитающих. Во всех вариантах реализации настоящего изобретения предпочтительно рак, подвергаемый лечению, выбран из мультиформной глиобластомы, аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии, рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы, почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина, лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы. Особенно предпочтительно рак, который подвергают лечению, представляет собой почечно-клеточную карциному или мультиформную глиобластому. Предпочтительно млекопитающее, нуждающееся в лечении, представляет собой человека. В альтернативном варианте реализации настоящего изобретения ингибитор mTOR можно применять одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с соединением 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидином или его фармацевтически приемлемой солью для лечения рака, в частности раковых заболеваний, описанных выше. Соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль можно применять для получения лекарственного средства, подходящего для применения в комбинированной терапии для лечения рака, в частности раковых заболеваний, описанных выше, при этом указанное лекарственное средство предназначено для введения в комбинации с ингибитором mTOR. В другом альтернативном варианте реализации настоящего изобретения ингибитор mTOR можно применять для получения лекарственного средства, подходящего для применения в комбинированной терапии для лечения рака, в частности раковых заболеваний, описанных выше, где указанное лекарственное средство предназначено для введения в комбинации с 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидином или его фармацевтически приемлемой солью. В другом альтернативном варианте реализации предложен фармацевтический состав, содержащий соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Нпиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и mTOR в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем. Соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтическую соль и ингибитор mTOR можно вводить различными способами. Указанные вещества можно вводить одинаковыми способами или различными способами. Предпочтительно соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально. Ингибитор mTOR, представляющий собой эверолимус, предпочтительно вводят перорально. Ингибитор mTOR, представляющий собой темсиролимус, предпочтительно вводят внутривенно. Оптимальные режимы дозировки каждого из терапевтических агентов, применяемых в комбинированной терапии согласно настоящему изобретению, можно варьировать в зависимости, например, от способа введения, болезни, подвергаемой лечению, и применяемого ингибитора mTOR. Например, дозировка соединения 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина или его фармацевтически приемлемой соли может находиться в диапазоне от 100 до 2000 мг/день. Предпочтительные дозировки находятся в диапазоне от 600 до 1600 мг/день. В предпочтительном варианте реализации соединение вводят дважды в день, и каждая доза находится в диапазоне от 300 до 800 мг. Дозировка ингибитора mTOR, представляющего собой эверолимус, может составлять от 2 до 20 мг/день. Предпочтительные дозировки эверолимуса составляют 5 или 10 мг/день. Дозировка ингибитора mTOR, представляющего собой темсиролимус, может составлять от 12,5 до 50 мг/неделю. Предпочтительная дозировка темсиролимуса составляет 25 мг в неделю. Комбинированную терапию можно проводить в течение единственного установленного периода времени, например 6 месяцев. Комбинированную терапию можно проводить в циклическом режиме, в котором присутствуют периоды альтернативного лечения и отсутствия лечения. Предпочтительно комбинированную терапию проводят непрерывно (исключая прогрессирование болезни или неприемлемую токсичность). В одном из вариантов реализации соединение 4-[4-[4(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Нимидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR вводят раздельно. При раздельном введении соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR можно вводить согласно различным режимам дозировки и при помощи различных способов введения. В другом варианте реализации соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Нимидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR вводят последовательно. В указанном варианте реализации каждый из терапевтических агентов можно вводить первым. Предпочтительно время между введением дозы одного из терапевтических агентов и введением дозы другого терапевтического агента составляет менее чем 8 ч, более предпочтительно менее чем 4 ч, еще более предпочтительно менее чем 1 ч. В другом варианте реализации соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Нимидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR вводят одновременно. В указанном варианте реализации агенты можно вводить в одном и том же составе или одновременно при помощи различных способов введения. Терапевтический агент, представляющий собой тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина, предпочтительно вводят перорально. Также предпочтительно в течение курса лечения в день вводят две дозы тозилата 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидина, и каждая из доз находится в диапазоне от 300 до 800 мг. В одном из вариантов реализации терапевтические агенты, применяемые в комбинированной терапии, представляют собой тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина и эверолимус. Предпочтительно тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидина вводят перорально согласно предпочтительному режиму дозировки, описанному выше. В указанном варианте реализации предпочтительно эверолимус также вводят перорально. Также предпочтительно в день вводят одну дозу эверолимуса, и каждая из доз составляет 10 мг. В указанном варианте реализации предпочтительно комбинированную терапию проводят непрерывно. В другом варианте реализации терапевтические агенты, применяемые в комбинированной терапии,представляют собой тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина и темсиролимус. Предпочтительно тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидина вводят перорально согласно предпочтительному режиму дозировки, описанному выше. В указанном варианте реализации предпочтительно темсиролимус вводят внутривенно. Также предпочтительно в неделю вводят одну дозу темсиролимуса, и каждая из доз составляет 25 мг. В указанном варианте реализации предпочтительно комбинированную терапию проводят непрерывно. Соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин и его фармацевтически приемлемые соли могут быть получены согласно способам, описанным ниже. Получение промежуточного 4-хлор-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина. К раствору аллопуринола (20 г, 146,94 ммоль) в толуоле (205,71 мл) добавляли фосфорилхлорид(68,27 мл, 734,68 ммоль) и диизопропилэтиламин (56,38 мл, 323,26 ммоль) и нагревали смесь при 80 С в течение 2 ч. Удаляли растворитель в вакууме до половины объема и добавляли смесь в 2 М раствор двухосновного фосфата калия (734,68 мл, 1,47 моль) в воде при 4C. Перемешивали смесь в течение ночи при комнатной температуре (КТ). Отфильтровывали осадок через целитовую пластину и затем промывалиEtOAc. Отделяли фильтрат, промывали водный слой дополнительным количеством EtOAc, объединяли органические слои, сушили MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения (16 г, выход 70,45%) в виде желтого твердого вещества. МС (APCI): m/z=155,1 [М+Н]. Получение гидрохлорида 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина. К раствору 4-фтор-3-(трифторметил)фенацилбромида (60,00 г, 1,00 экв., 210,50 ммоль) в этилацетате (450 мл, 4,60 моль) добавляли метенамин (1,10 экв., 231,55 ммоль, 32,46 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме и растирали твердое вещество в метил-трет-бутиловом эфире (МТБЭ). Фильтровали и сушили при пониженном давлении. Добавляли этанол (450 мл, 7,73 моль), затем хлороводород (150 мл, 8,30 экв., 1,75 моль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение ночи. Удаляли растворитель в вакууме и сушили твердое вещество в вакууме при 50C в течение недели с получением гидрохлорида 2-амино-1-(4-фтор-3 трифторметилфенил)этанона (54,23 г, выход 100%) в виде белого твердого вещества. К раствору моно-трет-бутилового эфира пиперидин-1,4-дикарбоновой кислоты (1,20 экв.,252,61 ммоль, 57,92 г) в тетрагидрофуране (ТГФ) (400 мл) добавляли N-метилморфолин (3 экв.,631,52 ммоль, 69,66 мл). Охлаждали смесь до -10C в бане сухой лед/ацетон. Поддерживая температуру равной ниже -5C, по каплям добавляли изобутилхлорформиат (1,1 экв., 231,56 ммоль, 30,26 мл). Через 30 мин при -5-10C добавляли гидрохлорид 2-амино-1-(4-фтор-3-трифторметилфенил)этанона (54,23 г,1,00 экв., 210,51 ммоль), суспендированный в ТГФ (300 мл), и перемешивали смесь в бане при -5C в течение 20 мин. Перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляли воду и EtOAc, затем промывали органический слой водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия. СушилиMgSO4, фильтровали и удаляли растворитель в вакууме. Суспендировали неочищенное вещество в МТБЭ и перемешивали в течение 2 ч. Фильтровали твердое вещество в вакууме с получением трет-бутилового эфира 1-[2-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-2-оксоэтилкарбамоил]пиперидин-4 карбоновой кислоты (64,44 г, выход 70,79%). К раствору трет-бутилового эфира 1-[2-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-2 оксоэтилкарбамоил]пиперидин-4-карбоновой кислоты (29,4 г, 1,00 экв., 67,99 ммоль) в 1-бутаноле(150 мл, 1,64 моль) добавляли ацетат аммония (15 экв., 1,02 моль, 78,61 г), затем добавляли триэтиламин(1 экв., 67,99 ммоль, 9,48 мл). Перемешивали смесь при 160C в запаянной трубке в течение 3 ч. Добавляли EtOAc и воду, затем дополнительно промывали органический слой водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия и концентрировали в вакууме. Растирали твердое вещество в МТБЭ, фильтровали и сушили при пониженном давлении с получением трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (18,23 г,44,10 ммоль, выход 64,86%) в виде белого твердого вещества. К раствору гидроксида калия (1,5 экв., 58,16 ммоль, 3,26 г) в 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) добавляли трет-бутиловый эфир 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1 карбоновой кислоты (16,03 г, 1,00 экв., 38,77 ммоль) в 40 мл ДМСО. Через 5 мин при комнатной температуре добавляли одну порцию метилйодида (1,1 экв., 42,65 ммоль, 2,66 мл). Перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем добавляли смесь в ледяную воду. Фильтровали твердое вещество,промывали водой и сушили при пониженном давлении. Твердое вещество растирали в горячем гептане,фильтровали и сушили при пониженном давлении с получением трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-фторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1 карбоновой кислоты (8,7 г, выход 52,49%) в виде белого твердого вещества. К раствору трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-фторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (8,7 г, 1,00 экв., 20,35 ммоль) в дихлорметане (101,77 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид водорода (4,00 экв., 81,41 ммоль, 20,35 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли неочищенное вещество в изопропиловом спирте (101,77 мл). Добавляли 4-хлор-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидин (1,65 экв., 33,58 ммоль, 5,19 г) и триэтиламин (10 экв., 203,54 ммоль, 28,37 мл). Перемешивали смесь при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растирали неочищенное вещество в воде и оставляли на ночь. Твердое вещество фильтровали и растирали в горячем ацетонитриле, фильтровали и сушили в вакууме. Получали 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-3-метил-1H-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил-1H-пиразоло[3,4d]пиримидин (8,42 г, 18,86 ммоль, выход 92,66%) в виде светло-желтого твердого вещества. К суспензии 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-3-метил-1H-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина (7,5 г, 1,00 экв., 16,84 ммоль) в дихлорметане (50 мл) добавляли хлороводород (1,1 экв., 18,52 ммоль, 4,63 мл) и перемешивали смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Удаляли растворитель в вакууме и растирали неочищенное вещество в МТБЭ в течение 1 ч. Фильтровали твердое вещество и сушили в вакууме в течение ночи с получением гидрохлорида 4-4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-3-метил-1H-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина(7,99 г, 16,58 ммоль, выход 98,47%) в виде белого твердого вещества. 1 Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО):14,01-13,99 (м, 1 Н), 8,57-8,54 (м, 2 Н), 8,26-8,19 (м, 3 Н), 7,72-7,63 (м,1 Н), 5,23-5,20 (м, 2 Н), 3,89 (с, 3 Н), 3,41 (м, 2 Н), 2,15-2,07 (м, 3 Н), 1,10 (с, 2 Н). Получение п-толуолсульфоната 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1H-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина. Охлаждали раствор 4-фтор-3-(трифторметил)фенацилбромида (93% чистота, определена при помощи ВЭЖХ, 1000 г, 3,51 моль) и ТТФ (5 л) до 5C на ледяной бане. По каплям в течение 1 ч при 5C добавляли раствор азида натрия (239 г, 3,68 моль, 1,05 экв.) в воде (800 мл). После перемешивания при 5C в течение 1 ч отделяли и отбрасывали водный слой. Остающийся холодным органический слой медленно добавляли в течение 3 ч к раствору трифенилфосфина (920,2 г, 3,51 моль, 1,0 экв.), моногидрата п-толуолсульфокислоты (1335 г, 7,02 моль, 2,0 экв.) и ТГФ (5 л). Поддерживали температуру 15C в течение указанного добавления, при этом в ходе добавления осаждались твердые вещества. Перемешивали реакционную смесь при 20C в течение 2 ч, затем фильтровали твердое вещество,промывали ТГФ (32 л) и сушили при 50C в вакууме с получением 1167,4 г (85%, 92% с поправкой на чистоту исходного вещества) п-толуолсульфоната 2-амино-1-(4-фтор-3-трифторметилфенил)этанона в виде белого кристаллического твердого вещества. Смешивали п-толуолсульфонат 2-амино-1-(4-фтор-3-трифторметилфенил)этанона (1133 г,2,88 моль), 1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновую кислоту (795 г, 3,47 моль, 1,20 экв.), ТГФ(3450 мл) и этилацетат (7500 мл) с получением жидкой белой суспензии. Суспензию охлаждали до 5C в ледяной бане и добавляли ангидрид 2-пропанфосфоновой кислоты (Т 3 Р) (50% раствор в EtOAc) (2385 г,3,75 моль, 1,3 экв.). Затем в течение 1 ч добавляли N-метилморфолин (795 мл, 7,21 моль, 2,5 экв.), поддерживая температуру 10C. Нагревали полученную суспензию до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 2 ч. Реакцию гасили путем добавления воды. Отделяли органическую фазу, затем промывали воднымNaHCO3, водным NaCl. Органическую фазу нагревали до 50C в роторном испарителе и добавляли н-гептан. Отгоняли растворитель в вакууме до конечного объема суспензии, составляющего примерно 5 л. Охлаждали суспензию до комнатной температуры и фильтровали твердые вещества, промывали н-гептаном (21 л) и затем сушили в вакуумируемом сушильном шкафу при 50C в течение ночи с получением трет-бутилового эфира 1-[2-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-2-оксоэтилкарбамоил]пиперидин-4-5 018824 карбоновой кислоты (1124,8 г,90%) в виде белого твердого вещества. Смешивали трет-бутиловый эфир 1-[2-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-2-оксоэтилкарбамоил]пиперидин-4-карбоновой кислоты (100 г, 231 ммоль), ацетат аммония (178,3 г, 2,31 моль, 10 экв.) и метанол (1000 мл). Реактор, применяемый для указанного превращения, представлял собой спиральную трубку из нержавеющей стали с внутренним диаметром 1/16 (общий внутренний объем трубки в печи составляет 541 моль). Нагревали реактор в печи до 140C. Контролировали давление реакционной смеси в указанной трубке, равное 250 psig (1,72 МПа) при помощи регулятора, что обеспечивает нагревание раствора выше его стандартной температуры кипения. Непрерывно откачивали раствор, полученный выше,из нагретой трубки под давлением со скоростью 6,01 мл/мин (достигая общего времени выдерживания в нагретой трубке, равного 90 мин). После выхода раствора из сушильного шкафа охлаждали раствор до 20C в теплообменнике типа "труба в трубе". После того как весь раствор проходил через реактор (общее время процесса составляет 8 ч), концентрировали полученный оранжевый раствор в вакууме при 30C до достижения общего объема, равного 600 мл. Добавляли ацетонитрил (200 мл) и нагревали раствор до 50C. По каплям добавляли воду (700 мл) с затравкой в течение 2 ч для кристаллизации продукта. Охлаждали полученную суспензию до 20C и отфильтровывали твердое вещество, затем промывали 20% раствором МеОН в воде (2200 мл). Полученное твердое вещество сушили в вакууме при 50C. Повторно суспендировали твердое вещество в ацетонитриле (200 мл) при 50C. Охлаждали суспензию до температуры окружающей среды, отфильтровывали твердое вещество и промывали ацетонитрилом (100 мл) с получением трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1 карбоновой кислоты (54,43 г, 132 ммоль, 57%) в виде грязно-белого твердого вещества. Растворяли трет-бутиловый эфир 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (80,02 г, 183,69 ммоль) в ДМСО (1060 мл). Добавляли одну порциюKOH (18,47 г, 279,82 ммоль, 1,5 экв.). Добавляли метилйодид (27,74 г, 193,48 ммоль, 1,05 экв.) в течение 30 мин при 25C. Перемешивали раствор при 25C в течение 1 ч. В течение 5 мин к раствору добавляли смесь затравочных кристаллов трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Нимидазол-2-ил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (0,17 г) и воды (80 мл). Перемешивали полученную жидкую суспензию при 25C в течение 30 мин. Дополнительно добавляли воду (240,73 мл) в течение 30 мин при 25C. Отфильтровывали твердое вещество и промывали 20% ДМСО в воде (2120 мл), затем водой (120 мл). Сушили твердое вещество в вакууме при 60C. Растворяли полученные твердые вещества в этаноле (480 мл) при 50C. Добавляли воду (240 мл) в течение 5 мин. Затем в течение 30 мин добавляли затравку трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (0,038 г) и дополнительное количество воды (240 мл). Охлаждали полученную суспензию до 25C в течение 2 ч. Отфильтровывали твердые вещества и промывали осадок 20% раствором EtOH в воде. Осуществляли сушку твердого вещества в вакууме при 60C с получением трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1 карбоновой кислоты (72,36 г, 92%) в виде белого твердого вещества. Готовили раствор безводной HCl путем медленного добавления ацетилхлорида (193,14 мл,2,71 моль, 4,00 экв.) к метанолу (1160 мл) в течение 45 мин при 5C. Полученный раствор добавляли в отдельную колбу, содержащую раствор трет-бутилового эфира 4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-карбоновой кислоты (290 г, 678,46 ммоль) в метаноле (2320 мл) в течение 90 мин при 20C. Перемешивали реакционную смесь при 20C в течение ночи. Концентрировали реакционную смесь в вакууме при 30C. Добавляли ДМСО (1080 мл, 15,20 моль, 1,08 л, 1,19 кг) и продолжали перегонку до достижения внутренней температуры 50C при давлении 20 мм рт. ст. (2,67 кПа). Добавляли ДМСО до достижения общего объема, равного 2030 мл. Затем добавляли триэтиламин(473 мл, 3,39 моль, 5 экв.) через капельную воронку в течение 30 мин. Помещали твердый 4-хлор-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин (110,29 г, 713,58 ммоль, 1,05 экв.) равными порциями равномерно в течение 30 мин. Полученную суспензию перемешивали при 20C в течение ночи. Нагревали суспензию до 80C. Добавляли воду (229 мл) с получением прозрачного раствора. Добавляли в реакционную смесь затравку и медленно добавляли дополнительное количество воды (1273 мл) в течение 4 ч до полной кристаллизации продукта. Охлаждали суспензию до 50C и отфильтровывали твердое вещество. Промывали осадок 30% раствором воды в ДМСО (2290 мл), затем водой (290 мл). Сушили твердые вещества в вакууме при 60C с получением 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина (301 г, 99%) в виде грязно-белого твердого вещества. Растворяли 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил 1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин (20 г, 44,9 ммоль) в смеси 20:1 H2O:ацетон (360 мл). К реакционной смеси добавляли раствор моногидрата п-толуолсульфокислоты (10,25 г, 53,9 ммоль, 1,2 экв.) в смеси 20:1 Н 2 О:ацетон (40 мл) в течение 20 мин при 20C. Реакционную смесь нагревали до 55C, выдерживали в течение 1 ч, затем охлаждали до 25C в течение 1 ч. Твердое вещество отфильтровывали и промывали осадок водой (40 мл). Сушка в вакууме при 50C позволила получить п-толуолсульфонат 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидина (23,9 г, 86%) в виде белого твердого вещества. Получение кристаллического п-толуолсульфоната 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил 1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина. В круглодонную колбу вместимостью 1 л, снабженную подвесной мешалкой, помещали 60,12 г 4-4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил-1 Н-пиразоло[3,4d]пиримидина (полученного в соответствии с любым из представленных выше примеров получения без конечной стадии получения соли), затем 250 мл 5% водного раствора MeOH. Полученную суспензию перемешивали и добавляли моногидрат п-толуолсульфокислоты (26,88 г), затем промывали оставшимися 50 мл 5% водного раствора MeOH. Полученную суспензию перемешивали и охлаждали кристаллы до 5C. Через 1 ч при 5C перемешивание останавливали и фильтровали суспензию через воронку Бюхнера. Ополаскивали колбу 75 мл холодного 5% водного раствора MeOH и применяли указанный промывочный раствор для промывки осадка на фильтре. Твердые вещества переносили во взвешенную емкость и сушили при 50C в вакууме в течение дня и ночи с медленным откачиванием воздуха. Конечная масса составляла 71,44 г. Проводили анализ методом порошковой рентгеновской дифракции при помощи дифракторметра D4 Определение эффективности in vivo. Самкам бестимусных мышей подкожно имплантировали в бок клетки человеческой глиобластомыU87MG в 0,2 мл матригеля. Примерно через 1 неделю после имплантации, когда размер опухоли достигал примерно 100 мг, мышей случайным образом разделяли на группы по 10 мышей и вводили им перорально один раз в день 3 мг/кг тозилата 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина (ингибитор киназы p70 S6, в составе 35% ПЭГ 300/10% ГПБЦД/10% ПС 80 в H2O, концентрация ингибитора составляла 0,38 мг/мл) или 3 мг/кг рапамицина (в составе Na CMC Tween 80, концентрация рапамицина составляла 2,5 мг/мл) или комбинацию (3 мг/кг ингибитора киназы р 70 S6 и 3 мг/кг рапамицина). Группа носителей состояла из 2 носителей (NaCMC Tween 80 и 35% ПЭГ 300/10% ГПБЦД/10% ПС 80 в H2O) в комбинации. Лечение продолжали в течение 23 дней. Объемы опухолей измеряли с применением стандартных процедур дважды в неделю и фиксировали результаты. Размер опухоли и массу тела записывали и анализировали дважды в неделю. Объем опухоли оценивали согласно формулеv=lw20,536,где l = больший из измеренных диаметров, aw = меньший из перпендикулярных диаметров. Для анализа применяли программное обеспечение SAS версии 8.2 (SAS Institutes Inc, Cary, NC) для определения логарифма объема опухоли с применением модели повторяющихся измерений ANOVA с пространственной ковариационной структурой. Для каждого измеренного периода времени группы, содержащие лекарственные средства, сравнивали с контрольными группами, содержащими носитель. Значения объемов опухолей даны в виде "значениестандартная ошибка" для каждой из групп, содержащей лекарственное средство, определенные при помощи повторяющихся измерений ANOVA для каждой группы. (SAS for Mixed Models, 2nd Ed., Littell et al., SAS Institutes Inc., Cary, NC). Результаты проведенного исследования представлены ниже в таблице, где n (число мышей) составляет 10 для всех данных, за исключением данных, полученных для дня 27 в группе, получавшей рапамицин индивидуально, и данных, полученных для дня 23 в группе, получавшей комбинацию лекарственных средств, где число мышей равно 9. Данные в столбце, озаглавленном "Значим.", отражали, является ли различие по сравнению с группой, содержащей носитель, статистически значимым: НЗ = Незначительно(р 0,05), =0,01 р 0,05, =0,001 р 0,01, =р 0,001. Группа, получавшая в качестве лекарственного средства рапамицин индивидуально, незначительно отличается от группы, получавшей носители. Результаты показали, что тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2 ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина в комбинации с рапамицином ингибирует рост ксенотрансплантанта глиобластомы U87MG у бестимусных мышей. Тозилат 4-[4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина вводили в дозировке 3 мг/кг один раз в день, а рапамицин вводили в дозировке 3 мг/кг ежедневно в течение 35 дней. Указанные дозировки были меньше оптимальных дозировок для каждого из агентов. При указанных дозировках указанная комбинация проявила повышенную эффективность по сравнению с лечением каждым из агентов в отдельности. Комбинация статистически отличается (р 0,001) от носителя,тогда как лечение в группах, получавших лекарственные средства в отдельности, незначительно отличается от группы, получавшей носитель. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Продукт, включающий соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол 2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR, представляющий собой рапамицин, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии. 2. Продукт, включающий соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол 2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор mTOR, представляющий собой рапамицин, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения мультиформной глиобластомы,аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии, рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы, почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина, лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы. 3. Продукт по п.2, отличающийся тем, что комбинированный препарат предназначен для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения почечно-клеточной карциномы или мультиформной глиобластомы. 4. Продукт по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой п-толуолсульфонат 4-[4-[4-(4-фтор-3-8 018824 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина. 5. Продукт по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что соединение 4-[4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемая соль предназначено для перорального введения. 6. Применение 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемая соль для применения одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с ингибитором mTOR, представляющим собой рапамицин, для лечения мультиформной глиобластомы, аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких,рака яичников, лейкемии, рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы,почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина, лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы. 7. Применение по п.6 для лечения почечно-клеточной карциномы или мультиформной глиобластомы. 8. Применение по любому из пп.6, 7, отличающееся тем, что указанная соль 4-[4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина представляет собой п-толуолсульфонат. 9. Применение по любому из пп. 6-8, отличающееся тем, что указанное соединение предназначено для перорального введения. 10. Способ лечения ракового заболевания, выбранного из группы, состоящей из мультиформной глиобластомы, аденокарциномы толстой кишки, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, резистентного к цисплатину мелкоклеточного рака легких, рака яичников, лейкемии, рака поджелудочной железы, рака простаты, карциномы молочной железы, почечно-клеточной карциномы, множественной миеломы, саркомы Капоши, лимфомы Ходжкина, лимфангиолейомиоматоза, неходжкинской лимфомы или саркомы, включающий введение пациенту, который в этом нуждается, 4-[4-[4-(4-фтор-3 трифторметилфенил)-1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина или его фармацевтически приемлемой соли и ингибитора mTOR, представляющего собой рапамицин, в количествах, которые являются эффективными в комбинации. 11. Способ по п.10, отличающийся тем, что раковое заболевание представляет собой почечноклеточную карциному или мультиформную глиобластому. 12. Способ по любому из пп.10, 11, отличающийся тем, что 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой п-толуолсульфонат 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-1 метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина. 13. Способ по любому из пп.10-12, отличающийся тем, что 4-[4-[4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)1-метил-1 Н-имидазол-2-ил]пиперидин-1-ил]-1 Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально.