Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа

МОНОПЕГИЛИРОВАННЫЙ ИНТЕРФЕРОН-АЛЬФА РАЗВЕТВЛЕННОЙ СТРУКТУРЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АКТИВНОСТЬЮ ИНТЕРФЕРОНА-АЛЬФА Изобретение относится к области фармацевтики и медицины, в частности к монопегилированному интерферону IFN -2b разветвлнной структуры, в котором фрагмент полиэтиленгликоля присоединен к белку с помощью амидной связи. Технический результат изобретения заключается в создании ковалентного конъюгата IFN -2b с длительной циркуляцией в кровотоке и улучшенными характеристиками противовирусной активности и иммуногенности, а также фармацевтической композиции для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферонаальфа. Марков Илья Александрович,Маркова Елена Алексеевна, Гапонюк Полина Петровна, Маркова Инна Николаевна (RU), Гапонюк Петр Яковлевич (умер) Скибневский А.Ю. (RU) Область техники, к которой относится изобретение Изобретение относится к областям фармацевтики и медицины, в частности к соединению с активностью интерферона-альфа, представляющему собой монопегилированный интерферон IFN -2b разветвлнной структуры, в котором фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ) присоединен к белку с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I) где n - целое число в интервале от 200 до 950; q - целое число в интервале от 1 до 5; m - целое число в интервале от 1 до 5 и IFN обозначает остаток интерферона -2b. Изобретение также предоставляет фармацевтическую композицию для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа, активным веществом которой является указанный монопегилированный IFN -2b. Предшествующий уровень техники Интерфероны (IFN) - биологически активные белки или гликопротеиды, продуцируемые в организме в ответ на вирусную инфекцию (Pestka S. The interferons: 50 years after their discovery, there is muchmore to learn. J. Biol. Chem. Vol. 282. No. 28 (July 2007). P. 20047-20051. IFN взаимодействуют с рецепторами, что индуцирует синтез ряда внутриклеточных белков, которые опосредуют противовирусное,иммуномодулирующее и антипролиферативное действие IFN (Pestka S., Krause С.D., Walter M.R.Interferons, interferon-like cytokines, and their receptors. Immunol. Rev. Vol. 202 (2004). P. 8-32). Лекарственные средства, содержащие рекомбинантные IFN, применяются в лечении вирусных, онкологических и иммунных заболеваний. Наиболее широко препараты IFN применяют для лечения вирусных гепатитов, представляющих одну из наиболее значимых социальных и медицинских проблем(Chevaliez S., Pawlotsky J.M. Interferons and their use in persistent viral infections. Handb. Exp. Pharmacol. 2009. P. 203-241). Эффективность препаратов IFN ограничена их быстрым выведением, малой стабильностью, большим объемом распределения, коротким периодом циркуляции, а также высокой иммуногенностью и реактогенностью (Wills R.J. Clinical pharmacokinetics of interferons. Clin. Pharmacokinet. 1990. No. 19. P. 390-399). Эффективность IFN увеличивается при использовании препаратов пролонгированного действия,например ковалентных конъюгатов с полимером (Hadziyannis S. et al. Ann. Intern. Med. Vol. 140 (2004). P. 346). Полиэтиленоксид или полиэтиленгликоль (ПЭГ) является широко распространенным полимером для ковалентной модификации (пегилирования) биологических макромолекул, например полипептидов,имеющей большое значение в современной фармакологии и медицине. Цель пегилирования - предотвращение деградации белков протеолитическими ферментами и защита от антигенных и иммуногенных эпитопов. Кроме того, пегилирование увеличивает размеры полипептидов, уменьшая почечную фильтрацию, а также изменяет объем биораспределения. Наибольшее значение в пегилировании полипептидов имеет выбор пегилирующего агента и способа конъюгации, от которых зависит вид и структура конечного конъюгата и, следовательно, его биологическая активность, стабильность и время циркуляции в крови. Так, например, противовирусная активность пегилированных IFN в значительной степени зависит как от размера и геометрии ПЭГ, так и от места прикрепления полимера к молекуле белка, т.е. от функциональной группы IFN, с которой непосредственно взаимодействует соответствующий пегилирующий агент (Roberts M.J. et al. Chemistry for peptide and protein PEGylation. Adv. Drug Delivery Rev. Vol. 54.(2002). P. 459-476). Известны конъюгаты ПЭГ-IFN -2b, полученные конъюгацией IFN -2b с линейным (RU 2311930,опубл. 20.08.2008) или разветвленным (RU 2382048, опубл. 20.02.2010) производными ПЭГ с молекулярной массой 13-17 кДа, обладающие противовирусной активностью от 29 до 38% от активности немодифицированного IFN. Недостатки полученных конъюгатов и способов их синтеза обусловлены применением трезил-производных ПЭГ, имеющих время полужизни в водных растворах не более 20 мин. В результате реакции трезил-производных ПЭГ с аминогруппами белков образуются не только стабильные амиды, но также и нестабильные сульфаматы (Gais H.J., Ruppert S. Modification and immobilization ofproteins with polysaccharide tresylates: evidence suggesting a revision of the coupling mechanism and the structure of the polymer-polymer linkage. Tetrahedron Lett. Vol. 36. No. 22 (1995). P. 3837-3838). Известен конъюгат IFN -2b, полученный конъюгацией IFN -2b с разветвленным триазиновым производным мПЭГ с молекулярной массой 7,5-35 кДа (RU 2298560, опубл. 10.05.2007), противовирусная активность которого составляет 7% от активности немодифицированного IFN. Недостатками данного конъюгата являются низкая противовирусная активность и использование цианурхлоридного производного ПЭГ, способного помимо целевых аминогрупп реагировать с другими функциональными группами аминокислот с образованием нестабильных или фармацевтически неактивных соединений. Цианурхлоридные производные также проявляют высокую токсичность (Veronese F., Pasut G. PEGylation, successful approach to drug delivery. Drug Discovery Today. Vol. 10. No. 21 (2005). P. 1451-1458), что требует тщательной очистки продукта перед приготовлением медицинского препарата. Наиболее часто для пегилирования применяют активированные эфиры ПЕГ-производных, которые взаимодействуют с аминогруппами белков. Активированные эфиры представляют собой удобные в обращении ацилирующие агенты с высокой реакционной способностью. Однако им присущ ряд недостатков, к которым, в первую очередь, относятся невысокая стабильность при хранении и способность вызывать рацемизацию субстрата, что в конечном итоге может сказаться на биологической активности полученного конъюгата. Их типичные представители - активированные эфиры, как правило, не являются высокоспецифичными реагентами и помимо аминогрупп способны взаимодействовать с имидазольным фрагментом гистидина, фенольным гидроксилом тирозина, спиртовыми гидроксилами серина и треонина, а также тиольной группой цистеина, что, в свою очередь, снижает долю высокоактивных конъюгатов в общей смеси позиционных изомеров. В настоящее время наиболее изученными и широко применяемыми в клинике препаратами данной группы являются пегилированные интерфероны-альфа (IFN-). Препарат Пегасис (товарный знак, зарегистрированный фирмой Hoffmann La Roche) является монопегилированным IFN -2a, в котором белок ковалентно связан с разветвленной молекулой ПЭГ с молекулярной массой 40 кДа. Препарат получен с применением гидроксисукцинимидных эфиров ПЭГ соответствующей структуры. Препарат ПегИнтрон (товарный знак, зарегистрированный фирмой Schering-Plough) представляет собой монопегилированный IFN -2b, ковалентно связанный с линейной молекулой ПЭГ, имеющей молекулярную массу 12 кДа. ПегИнтрон получают взаимодействием линейного сукцинимидилкарбонат-активированного ПЕГ с IFN -2b (US 5951974, опубл. 14.09.1999). Противовирусная активность препарата ПегИнтрон составляет 28% активности немодифицированного белка, время циркуляции - порядка 72 ч. В качестве ближайшего аналога настоящего изобретения авторы рассматривают монопегилированный IFN -2a, ковалентно связанный с разветвленной молекулой ПЭГ массой 40 кДа - препарат Пегасис, описанный в патенте RU 2180595 (опубл. 20.03.2002), который получают взаимодействием Nгидроксисукцинимидного эфира дипегилированного лизина с IFN -2a. Масса каждого из двух полимерных фрагментов, которые присоединены к аминогруппам лизина посредством карбаматных связей, оценивается в 20 кДа. Активность полученного конъюгата составляет 1-7% от показателя для немодифицированного IFN -2a, а время циркуляции в крови не превышает 7 дней (Boulestin A., Kamar N., SandresSaun K., Legrand-Abravanel F., Alric L., Vinel J.P., Rostaing L., Izopet J. Twenty-four hour kinetics of hepatitis С virus and antiviral effect of alpha-interferon. J. Med. Virol. Vol. 78. No. 3 (2006). P. 365-371). Недостатками данного конъюгата являются весьма низкие показатели противовирусной активности и времени циркуляции в крови, что, вероятно, обусловлено частичной рацемизацией субстрата и существенной долей легкогидролизуемых сложноэфирных и карбаматных связей с функциональными группами аминокислотных фрагментов. Причиной тому служит применение N-гидроксисукцинимидного пегилирующего агента. Таким образом, задачей изобретения является разработка пегилированного интерферона-альфа, создание содержащей его фармацевтической композиции с улучшенными фармакологическими свойствами и расширение арсенала противовирусных средств на основе интерферона-альфа. Техническим результатом изобретения является получение ковалентного конъюгата IFN -2b с ПЭГ, характеризующегося длительной циркуляцией в кровотоке и улучшенными характеристиками противовирусной активности и иммуногенности, а также получение фармацевтической композиции для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа. Для достижения указанного технического результата монопегилированный интерферон-альфа (IFN-2b) разветвлнной структуры согласно изобретению содержит фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ),присоединенного к белку с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I)IFN обозначает остаток интерферона -2b (IFN -2b). Кроме того, в монопегилированном интерфероне общей формулы (I) согласно изобретению m и q равны 3. Фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активно-2 022617 стью интерферона-альфа, содержащая активное вещество и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, согласно изобретению в качестве активного вещества содержит монопегилированный интерферон IFN -2b разветвлнной структуры, в котором фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ) присоединен к белку через фенилаланиновый линкер с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I)IFN обозначает остаток интерферона -2b (IFN -2b). Кроме того, в фармацевтической композиции согласно изобретению в соединении общей формулы(I) m и q равны 3. Сущность изобретения В результате обширных исследований авторы установили, что техническая задача изобретения может быть решена применением азидного метода для образования пептидной связи между полимером и белком. Данный метод не приводит к рацемизации субстрата и не затрагивает гидроксильных групп полипептида (Гринштейн Дж., Винниц М. Химия аминокислот и пептидов. М.: Мир, 1965, с. 446-464). Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает монопегилированный интерферон-альфа (IFN-2b) разветвлнной структуры, который содержит фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ), присоединенного к белку с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I)IFN обозначает остаток интерферона -2b (IFN -2b). Изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа, содержащую активное вещество и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, которая в качестве активного вещества содержит монопегилированный интерферон IFN -2b разветвлнной структуры, в котором фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ) присоединен к белку с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I)IFN обозначает остаток интерферона -2b (IFN -2b). В предпочтительных осуществлениях изобретения в формуле (I) m и q равны 3. Выбор фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ для целей настоящего изобретения очевиден среднему специалисту в области фармакологии. Например, вспомогательными веществами могут быть натрия гидрофосфат, натрия дигидрофосфат, натрия ацетат, уксусная кислота, лимонная кислота, цитрат натрия, глутамат натрия, сахароза, бензиловый спирт, полисорбаты и др. За счет отсутствия карбаматных связей в структуре конъюгата в соответствии с изобретением увеличивается его стабильность в биологических средах, таких как кровь, чему дополнительно способствует разветвлнная структура предлагаемого конъюгата ПЭГ-IFN-. Активность конъюгата повышается вследствие применения для его синтеза азидной конденсации, не приводящей к рацемизации субстрата. Для получения заявляемого монопегилированного IFN -2b разветвлнной структуры (конъюгата) применяют IFN -2b и гидразидное производное ПЭГ с молекулярными массами 40 и 60 кДа следующей структуры: Пегилированный IFN -2b получают конденсацией азидного производного ПЭГ, приготовленного из гидразида ПЭГ-производного непосредственно перед пегилированием, со свободной аминогруппой белка. Гидразидные производные ПЭГ получают взаимодействием активированных эфиров с избытком гидразингидрата, например, в соответствии с известной общей методикой (Гершкович А., Кибирев В. Химический синтез пептидов. Киев: Наукова Думка, 1992). Состав полученного конъюгата определяют обычными методами обращено-фазовой ВЭЖХ и эксклюзионной ВЭЖХ. Например, для этого можно применять колонку VYDAC MS C18 1504,6 мм (22 С, расход элюента: 1 мл/мин в линейном градиенте от 0,1% ТФУ/Н 2 О до 0,085% ТФУ/MeCN в течение 20 мин) или колонку Superose 6, 10/300 GL (22 С,расход элюента (50 ммоль натрия фосфат, 300 ммоль NaCl, 10% этанол, рН 6,8): 0,4 мл/мин) соответственно. Значение индекса n в формуле (I) определяют методами исследования, известными из уровня техники. В частности, ориентировочные значения можно вычислить с помощью метода MALDI по молекулярной массе конъюгата. Фармакологические и медицинские преимущества конъюгата в соответствии с изобретением следуют из результатов определений, выполненных в соответствии с действующими нормативными актами с использованием сертифицированных приборов и/или диагностических наборов, рекомендованных уполномоченными органами к применению в этих целях. В исследованиях in vivo на беспородных лабораторных белых мышах было показано, что конъюгаты ПЭГ-IFN- в соответствии с изобретением являются нетоксичными при введении максимально переносимой дозы 10 млн МЕ/мышь. Время циркуляции немодифицированного и монопегилированных IFN -2b определяют на мышиной модели по содержанию IFN- в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, например, с помощью набора Human IFN- ELISA Kit (номер в каталоге CK2003-1). Время циркуляции конъюгатов ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b в 1,5 раза превосходит аналогичный показатель для известного препарата Пегасис. Приведнные данные показывают, что заявляемые конъюгаты IFN -2b при сопоставимом времени циркуляции в кровотоке превосходят препарат сравнения по биологической активности. Далее приведены примеры, подтверждающие возможность осуществления изобретения с достижением технического результата. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Пример 1. Получение монопегилированного IFN -2b К охлажденному раствору 5 мкмоль гидразида ПЭГ-производного в 0,1 М СН 3 СООН приливают раствор 10 мкмоль NaNO2 и перемешивают в течение 15 мин. Далее избыток NaNO2 удаляют добавлением азида натрия и полученный раствор азида ПЭГ-производного приливают к охлажденному раствору 1 мкмоль IFN -2b в фосфатном буфере с рН 8. Реакционную смесь при охлаждении перемешивают в течение 8 ч и через различные промежутки времени из реакционной смеси отбирают аликвоты, которые анализируют обращено-фазовой ВЭЖХ. По достижении необходимой степени превращения IFN -2b (порядка 75-85%) реакцию останавливают прибавлением избытка глицина. Далее реакционную смесь разбавляют в 10 раз, добавляют уксусную кислоту до рН 5,0 и наносят на СМ-сефарозу, предварительно уравновешенную 20 мМ ацетатным буфером с рН 5,0. После нанесения реакционной смеси сорбент промывают уравновешивающим буфером и далее градиентом от 0,1 до 0,8 М NaCl. Отбирают фракции, которые далее анализируют обращенофазовой ВЭЖХ на содержание моно-ПЭГ-IFN -2b (колонка VYDAC MS С 18 1504,6 мм, 22 С, расход элюента: 1 мл/мин в линейном градиенте от 0,1% ТФУ/Н 2 О до 0,085% ТФУ/MeCN в течение 20 мин). Целевые фракции объединяют, повторно определяют чистоту и содержание моно-ПЭГ-IFN -2b. Выходы очищенного ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b (в пересчете на IFN -2b) составляют 46 и 39% соответственно. Чистота 98,2% для ПЭГ 40-IFN -2b и 96,9% для ПЭГ 60-IFN -2b. Времена удерживания даны в табл. 1. Перед проведением последующих исследований проводят стерилизующую фильтрацию водного раствора полученного продукта. Пример 2. Исследование токсичности ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b Самцам белых нелинейных мышей массой 201 г вводят ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b в дозах от 1 до 10 млн ME в объеме 0,1 мл. У животных ежедневно в течение недели регистрируют клинические симптомы, взвешивают, отбирают пробы крови для проведения общего и биохимического анализа. Гибели подопытных животных на протяжении всего исследования выявлено не было, показатели крови были в норме. В последний день животных подвергают эвтаназии и некропсии с забором органов для последующего гистологического анализа. При патологоморфологическом исследовании органов (печень, почки,сердце, лгкие) лабораторных животных значимых патологических изменений обнаружено не было. Таким образом, конъюгаты ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b не обладают токсичностью и реактогенностью и соответствуют требованиям 4 класса опасности вещества малоопасные (ГОСТ 12.1.007-76 Вредные вещества). Пример 3. Исследование времени циркуляции немодифицированного IFN и монопегилированныхIFN -2b Конъюгаты ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b в дозе 1 млн ME внутрибрюшинно вводят самцам белых нелинейных мышей массой 202 г. Параллельно другим группам мышей вводят немодифицированный IFN -2b и препарат Пегасис. Через каждые 6 ч у животных отбирают пробы крови и стандартным методом готовят из не сыворотку. Содержание IFN- в образцах сыворотки (нг/мл) определяют с помощью иммуноферментного аналитического набора (ИФА-набора) Human IFN- ELISA Kit (номер в каталоге CK2003-1). Результаты представлены в табл. 2. Таблица 2 Пример 4. Исследование уровня бактериальных эндотоксинов Уровень бактериальных эндотоксинов в образцах конъюгатов ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b определяют с помощью ЛАЛ-теста в соответствии с ОФС Бактериальные эндотоксины (42-000-2-00). Используют диагностический набор фирмы Associates of Cape Cod, Inc. . Содержание эндотоксинов в пробах конъюгата не превышает 0,03 ЕЭ/мкг, что значительно ниже значения 0,25 ЕЭ/мкг, допустимого для пегилированных интерферонов. Пример 5. Исследование антипролиферативной активности ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b Антипролиферативную активность определяют на человеческих клетках линии Daudi колориметрическим тестом с бромидом 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразола. Препаратом сравнения служит международный стандарт IFN -2b (код 95/566). Клетки (2104) в 100 мкл среды RPMI 1540, содержащей 10%-ную сыворотку эмбриона теленка и 2 мМ глутамина, вносят в лунки планшетов для микротитрования. В лунки добавляют серии разведений объемом 100 мкл, содержащие различные концентрации ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b, а также стандарта IFN -2b. Планшеты инкубируют при 37 С в 5% СО 2 в течение 72 ч, после чего добавляют раствор МТТ (5 мг/мл) в фосфатно-солевом буфере до концентрации 0,5 мг/мл и инкубируют в течение 3 ч в тех же условиях. Среду удаляют, к клеткам добавляют по 100 мкл ДМСО и измеряют поглощение при 570 и 620 нм. Относительные активности IFN -2b и исследуемых конъюгатов определяют, сравнивая дозы, вызывающие 50% снижение пролиферации для стандартного и испытуемых препаратов. Антипролиферативная активность ПЭГ 40-IFN -2b составляет 39%, а конъюгата ПЭГ 60-IFN -2b равна 24% от активности стандарта. Пример 6. Определение специфической противовирусной активности конъюгатов ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b Противовирусную активность конъюгатов определяют микрометодом в 96-луночных планшетах с плоским дном по подавлению цитопатического действия тест-вируса везикулярного стоматита в диплоидной культуре клеток MDBK, чувствительных к интерферону-альфа. Для этого используют тест-вирус в дозе 100 ЦПД 50 и питательную среду Игла MEM с добавлением 10% сыворотки КРС. В качестве стандарта применяют международный стандарт IFN -2b. Результаты приведены в табл. 2. Пример 7. Исследование иммуногенности конъюгатов IFN -2b Конъюгаты ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b, полученные в соответствии с примером 1, в дозе 1 млн ME в объеме 0,1 мл внутримышечно вводят мышам СВА с массой тела 18-22 г 1 раз в неделю в течение 8 недель. Аналогично вводят немодифицированный IFN-. По прошествии 8 недель у животных отбирают пробы крови и готовят сыворотку стандартным методом. Титр антител определяют прямым методом твердофазного иммуноферментного анализа. В лунки микропланшета вносят по 100 мкл раствора немодифицированного IFN -2b в концентрации 0,2 мкг/100 мкл. Антисыворотки от разных групп животных вносят в лунки планшета в серии из последовательных разведений в два раза. Иммунный комплекс обнаруживают антимышиными иммуноглобулинами, конъюгированными с пероксидазой. Иммуногенность конъюгатов ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b в 4 раза ниже, чем у немодифицированногоIFN-. Пример 8. Приготовление фармацевтической композиции, содержащей конъюгаты ПЭГ 40-IFN -2b и ПЭГ 60-IFN -2b Все операции проводят в стерильных условиях. В мерный стакан вместимостью 100 мл, снабжнный комбинированным потенциометрическим электродом ЭКОМ рН ком, соединнным с рН-метром Экотест-2000 при перемешивании магнитной мешалкой последовательно вносят стерильные растворы 550 мг моногидрата лимонной кислоты в 10 мл воды, 400 мг NaH2PO4 Н 2 О в 10 мл, 2,00 г сорбита в 10 мл воды, 500 мг L-глутамата натрия в 10 мл воды и 10 мг полисорбата 20 в 10 мл воды. К полученной смеси при перемешивании по каплям прибавляют 5% NaOH до установления величины рН 6,5-6,7 и приливают 50 мл раствора соответствующего ПЭГ-ИНФ -2b с концентрацией 1 мг/мл. Значение рН полученного раствора корректируют прибавлением 5% NaOH и общий объем смеси доводят до 100 мл водой для инъекций. Раствор фильтруют через стерилизующий фильтр с размером пор 0,22 мкм и в асептических условиях разливают в стерильные флаконы по 100 мл с содержанием конъюгата ПЭГ 40-IFN -2b или ПЭГ 60-IFN -2b 0,5 мг/мл. На флаконы наносят маркировку для целей идентификации и дальнейшего применения. Таким образом, приведенные примеры подтверждают достижение технического результата изобретения, заключающегося в создании монопегилированного IFN -2b с длительной циркуляцией в кровотоке и улучшенными характеристиками противовирусной активности и иммуногенности, а также композиции для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Монопегилированный интерферон-альфа (IFN -2b) разветвлнной структуры, отличающийся тем, что содержит фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ), присоединенного к белку с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I)IFN обозначает остаток интерферона -2b (IFN -2b). 2. Монопегилированный интерферон по п.1, отличающийся тем, что в соединении общей формулы(I) m и q равны 3. 3. Фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа, содержащая активное вещество и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит монопегилированный интерферон IFN -2b разветвлнной структуры, в котором фрагмент полиэтиленгликоля (ПЭГ) присоединен к белку с помощью амидной связи, как представлено общей формулой (I)IFN обозначает остаток интерферона -2b (IFN -2b). 4. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что в соединении общей формулы (I)