Фармацевтическая композиция, содержащая ингибитор иммуноглобулин-рецепторного взаимодействия

1 Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей пептид, способный ингибировать взаимодействие между иммуноглобулинами и их рецепторами. Известно, что взаимодействие между иммуноглобулинами (Igs) и родственными им рецепторами, находящимися на клеточной поверхности, вызывает ряд различных реакций,зависящих от изотипа Ig, распознаваемого определенным рецептором. Например, связывание на макрофагах иммуноглобулинов G с родственными им рецепторами FcgR приводит к эндоцитозу, к комплексной лизосомальной деградации антиген-антитело и к секреции сильных воспалительных медиаторов вроде простагландинов, лейкотриенов, промежуточных кислородных соединений и нейтральных протеаз(Unkeless с соавт., 1981 г., J. Exp. Med. 171, 597611). Известно также, что иммуноглобулины взаимодействуют с родственными им рецепторами с помощью своей константной части, а именно, Fc, независимо от специфичности антиген-антитела (Fridman с соавт., 1992 г., Immunol.Rew. 125, 49-76). Синтетические соединения, способные препятствовать взаимодействию иммуноглобулин/рецептор еще не доступны. Только растворимые формы естественных рецепторов, называемых sFcR, получаемые в виде рекомбинантных продуктов с помощью генноинженерных методов, действительно способны действовать в качестве ингибиторов этого важного взаимодействия (Sautes с соавт., 1994 г., J.Chrom. 662,197-207). Очевидно поэтому, что ингибирование взаимодействия иммуноглобулинов и рецепторов является важным терапевтическим способом во всех тех случаях, когда необходимо контролировать действие избыточного образованияIg и когда эффекты, производимые в результате распознавания Ig/рецептор, отрицательно влияют на клеточный цикл. Например, что касается множественной миеломы, неизлечимого ракового заболевания,поскольку оно резистентно к обычной химиотерапии, экспериментальные данные свидетельствуют, что фланкирующая иммунотерапия, основанная на введении растворимых рецепторов Fc,тормозит рост раковых клеток и секрецию иммуноглобулинов (Hoоver с сoавт., J. Clin. Invest,95, 241-247). В свою очередь, что касается приобретенного иммунодефицита (AIDS), в сыворотке пациентов присутствуют антитела, которые повышают эффект взаимодействия вирусной инфекции с соответствующими клеточными рецепторами (Homsy с соавт., 1989 г., Science 244,1357-1360) и поэтому терапия, основанная на введении молекул, способных препятствовать взаимодействию Igs с рецепторами, обладает исключительным терапевтическим значением при инфекции вирусом HIV. 2 Что касается воспалительных заболеваний,таких как ревматоидный артрит, событие, которое приводит к патологическому состоянию,представляет собой взаимодействие иммуноглобулинов с соответствующими клеточными рецепторами (FearonWong, 1993, Ann. Rev.Immunol. 1, 243) и, так же как и в предыдущих случаях, лечение основывается на введении молекул, способных препятствовать распознаванию пары Ig/рецепторов, что может давать четкий терапевтический эффект. Даже аллергические реакции запускаются в результате взаимодействия иммуноглобулинов, в данном случае Е-класса, с соответствующими клеточными рецепторами. Данный широкий спектр терапевтического применения и уровень патологии очень зависит поэтому от синтетических соединений, свободных от контаминантов биологического происхождения, и низкой себестоимости, которые могли бы препятствовать взаимодействию иммуноглобулинов и их рецепторов. В настоящее время установлено, что этими свойствами обладает пептид формулы (I)(I) в которой Х 1 и Х 2, отличающиеся друг от друга,представляют собой аминокислотные остатки тирозина и аргина, в форме L или D, в которых гидроксигруппа треонина и гуанидиновая составляющая аргинина могут быть защищены соединением, традиционно используемым в химии пептидов для защиты, соответственно,гидроксигруппы и гуанидиновой составляющей,n равно 2, 3 или 4, аR представляет собой группу, способную образовывать, соответственно, димерный, тримерный и тетрамерный пептид. Получение этих соединений описано в Европейской патентной заявке 96201706.7 от 19.06.1996 г. этого же заявителя. В указанной заявке, еще не опубликованной, описаны свойства данных соединений в виде иммуноглобулиновых лигандов. Таким образом, первая цель настоящего изобретения заключается в создании фармацевтической композиции, включающей биологически эффективное количество пептида формулыX1 и Х 2, отличающиеся друг от друга,представляют собой аминокислотные остатки тирозина и аргинина, в форме L и D, в которых гидроксигруппа треонина и гуанидиновая составляющая аргинина могут быть защищены соединением, традиционно используемым в химии пептидов для защиты, соответственно,гидроксигруппы и гуанидиновой составляющей,n равно 2, 3 или 4, а мерный и тетрамерный пептид, и, по меньшей мере, фармацевтически приемлемый инертный ингредиент,n предпочтительно равно 4. Каждая аминокислота соединения формулы (I) может обладать L- или D-конфигурацией. В настоящем описании и в формуле изобретения термины димер, тример и тетрамер подразумевают пептиды, включающие,соответственно, две, три и четыре последовательности H2N-X1-Thr-X2-CO-, где X1 и Х 2 обладают вышеуказанными значениями. Типичный пример группы, подходящей для образования димера (n=2), представляет собой остаток лизина. Типичный пример группы, подходящей для образования тримера (n=3),представляет собой дипептид лизин-лизин формулы Lys-Lys. Типичные примеры групп, подходящих для образования тетрамера (n=4),представляют собой разветвленный трипептид формулы Lys-Lys(Lys) и разветвленный тетрапептид формулы Gly-Lys-Lys (Lys). Типичный пример тетрамера формулы (I) обладает нижеследующей формулой в которой Х 1 и Х 2 обладают вышеуказанными значениями, и в которой гидроксигруппа треонина и тирозина и гуанидиновая составляющая аргинина могут быть защищены соединением, традиционно используемым в химии пептидов для защиты, соответственно, гидроксигруппы и гуанидиновой составляющей. В литературе приводятся многочисленные группы, пригодные для защиты гидроксигруппыFreeman, N.Y., 1992 г.). Типичные примеры указанных защитных групп представляют собой трет-бутильную(tBu) (La Joe G., Crivici A., Adamson J.G., Synthesis 571-572 (1990) и бензильную группу (Yojima Tetrahedron 44:805-819 (1988. Из литературных данных известны также многочисленные группы, пригодные для защиты гуанидиновой составляющей аргинина (GrantG.A. Synthetic peptides: a user's guide Freeman,N.Y., 1992). Типичные примеры указанной защитной группы представляют собой: 2,2,5,7,8 пентаметилкроман-6-сульфонил (Рmc) и 4 метокси-2,3,6-триметилбензол (Mtr) (Ramage(1981). Конкретные примеры соединения формулы (IА) представляют собой Как подробно описано ниже, биологическая активность пептидов формулы (I) испытана 4 на ингибирование связывания иммуноглобулина и рецептора (Ig-FCR) и в подавлении образования розеток эритроцитов барана (SRBC),получаемых с IgG и клетками U937 человека, и результатом было, что соединения формулы (I) образуют с Ig-рецептором то же взаимодействие, что и с Ig и что указанное взаимодействие является дозозависимым. Кроме того, определяли биологическую активность in vivo соединений формулы (I) путем пассивного кожного анализа на анафилаксию, что соответствует животной модели по изучению антиаллергических соединений. На мышах в острых опытах на токсичность испытывали соединения формулы (I) на толерантность при пероральном или при внутривенном введении. Типичные примеры патологических состояний, на которые может оказать благотворнoе влияние лечение фармацевтической композицией в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой состояния, когда целесообразно или необходимо воспрепятствовать взаимодействию Ig и его рецепторов. Типичные примеры таких патологических состояний представляют собой ревматоидный артрит и аллергические реакции. Предпочтительно, фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением готовили в надлежащей лекарственной форме, включающей эффективную дозу, по меньшей мере, одного соединения формулы (I) и, по меньшей мере, фармацевтически приемлемого инертного ингредиента. Примеры надлежащей лекарственной формы представляют собой таблетки, капсулы,таблетки в оболочке, гранулы, растворы и сиропы для перорального введения, мази и медицинские пластыри для местного применения; суппозитории для ректального введения и стерильные растворы для инъецируемого, аэрозольного и офтальмологического введения. Данные лекарственные формы могут также содержать другие традиционные ингредиенты: консерванты, стабилизаторы, поверхностноактивные агенты, буферы, соли для регуляции осмотического давления, эмульгирующие агенты, подсластители, красящие агенты, корригенты и тому подобное. При необходимости для определенных терапий фармацевтическая композиция настоящего изобретения может содержать другие активные фармакологические ингредиенты, когда сопутствующее введение терапевтически оправдано. Количество пептида формулы (I) в фармацевтической композиции настоящего изобретения можно варьировать в широком диапазоне в зависимости от известных факторов, таких как,например, вид заболевания, которое лечат, тяжесть заболевания, вес пациента, данной лекарственной формы, выбранного пути введения, 5 частоты ежедневного введения и эффективности выбранного пептида формулы (I). Обычно количество пептида формулы (I) в фармацевтической композиции настоящего изобретения будет таким, чтобы обеспечить уровень введения от 1 до 200 мг/кг/день, предпочтительно от 2 до 50 мг/кг/день. Лекарственные формы фармацевтической композиции настоящего изобретения могут быть приготовлены в соответствии с методиками, хорошо известными химику-фармацевту,включающими перемешивание, грануляцию,прессование, растворение, стерилизацию и тому подобное. Для пептидов Р-РАМ, L-PAM и D-PAM оценивали их способность ингибировать взаимодействие IgG или IgG человека и их соответствующих рецепторов, Fc и Fc. С этой целью провели опыты по ингибированию связывания человеческих иммуноглобулинов (Ig) IgG и IgA и их рецепторов на клеточной линии плазматических мембран U937 человека. Клеточную линию U937 (Sundstron С. andNilsson К., Int. J. Cancer, 17, 565, 1979), поставляемую ЕСАСС (Кат.87010802), получают из гистиоцитарной лимфомы,которая представляет собой одну из нескольких клеточных линий человека, которая отражает многие свойства,подобные моноцитам,демонстрируемые клетками гистиоцитарного происхождения. Поэтому ее широко используют в исследованиях по изучению взаимодействия Ig и Fc-рецепторов (FcR)Fc IgA (Monteiro R.C. с соавт., J. Exp. Med.,177, 597-613, 1990) постоянно выражены в данной клеточной линии. Первая стадия опыта заключается в получении плазматических мембран из клеток U937. Данный препарат получали по протоколу Hubbard A.L. с соавт. (J.Cell Biol., 96, 217-229; 1983), основанном на контроле за гомогенизацией клеток, за тем исключением, что данную гомогенизацию осуществляли с помощью аппарата Dounce с последующей очисткой фракций плазматической мембраны в градиенте плотности сахарозы. Полученные клетки после культивирования в соответствующих условиях собирали и центрифугировали (10', 4 С, 100 хg), промывали три раза холодным D-PBS и вновь центрифугировали. Полученный осадок клеток (1,5 г) взвешивали и суспендировали в 4 мл 0,25 М STM 6 Полученную суспензию хранили при 4 С в течение 10'. Полученные клетки гомогенизировали в гомогенизаторе Dounce [(40 пассажей с помощью пестика А (большой) и столько же с помощью пестика В (маленький)], проверяли под микроскопом разрушение клеток и центрифугировали (4 С, 10', 280 хg) для удаления интактных клеток, ядер и клеточного дебриса. После удаления супернатaнтa данный осадок ресуспендировали в 1/2 начального объемаSTM и обрабатывали с помощью 10 массажей пестиком А в гомогенизаторе Dounce. Полученную суспензию центрифугировали (4 С, 10',280 хg). Супернатант удаляли и объединяли с супернатантом, полученным на предыдущей стадии. Объединенный супернатант центрифугировали (10', 4 С, 1500xg). Полученный осадок ресуспендировали в 0,25 М STM и плотность раствора доводили до 1,18 г/см 3 путем добавления 2 М STM (2 М сахароза в ТМ). На полученный раствор наслаивали 0,25 М STM и затем ультрацентрифугировали(1 ч, 4 С, 78000 хg). Фракцию плазматических мембран извлекали с поверхности раздела двух фаз градиента сахарозы. Вторая фаза, предназначенная для конкурентного анализа, представляла собой биотинилированный Ig человека (IgG, Sigma Cat.14506 и IgA, Sigma Cat.1-0663). 0,5 мл иммуноглобулинового раствора 2 мг/мл в 150 мМ натрий-фосфатном буфере (PBS) смешивали с 0,5 мл раствора биотина 6 мг/мл (Biotinamidocaproate N-Hydroxysuccinimide Ester Sigma Cat.B-2663) в H2O/EtOH 1:1. Полученный раствор инкубировали в течение 15 ч при комнатной температуре при перемешивании. Позже избыток биотина удаляли путем диализа против 50 мМ фосфатного буфера рН 7,5. Для осуществления ингибирования связывания Ig/Fc опыт проводили в условиях линейногo связывания биотилированного Ig и рецепторов, присутствующих в препарате плазматической мембраны. Микропланшеты для определения ELISAU937 в изменяющихся концентрациях от 0,1 до 10 мкг/мл (по общему белку препарата плазматических мембран) в PBS, 100 мкл/лунку, в течение 15 ч при 4 С. Данные планшеты промывал 5 раз с помощью PBS, а насыщение неспецифических участков осуществляли добавлением на каждую лунку 180 мкл раствора PBS, содержащего 3% бычьего сывороточного альбумина (BSA, Sigma Cat.А-9418). Через 1 ч 30' при комнатной температуре,эти планшеты промывали 5 раз с помощью PBST (PBS-Tween 0,05%) и каждую лунку наполняли 100 мкл раствора, содержащего биотинили 7 рованный Ig в изменяющейся концентрации между 0,02 и 2 мкг/мл в 0,5% PBS-BSA. После инкубации в течение 1 ч 30' при 37 С добавляли раствор стрептавидина с пероксидазой (Sigma, Cat.S-5512), разбавленного 1:1000 в 0,5% PBS-BSA, 100 мкл/лунку. После инкубации в течение 1 ч при 37 С данные планшеты промывали 5 раз с помощью PBS-T и каждую лунку заполняли 100 мкл 2,2'-азинобис(3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой кислотой) (Sigma, Cat.А-9941) в фосфатном буфере рН 5,0 и 0,012% перекиси водорода. Через приблизительно 30' с помощью спектрофотометра (Merck, Mod. Mios) при 405 нм определяли поглощение в каждой лунке, а полученные результаты показаны в табл. 1. Таблица 1 Линейное связывание биотинилированного JgG илиJgA человека и препарат плазматических мембран,полученный из клеточной линии U937 мкг/мл Биотинилированный Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют, что IgG или IgA, связанные с рецепторами, присутствуют в препарате плазматических мембран в дозозависимом виде. Опыт по ингибированию Ig/Fc осуществляли с использованием плазматических мембран U937 в концентрации 10 мкг/мл для иммобилизации на планшете и биотинилированногоIgGs инкубировали с пептидами настоящего изобретения (L-РАМ, D-PAM и Р-РАМ) и в двух контролях, т.е. пептидами Arg-Thr-Tyr в Lконфигурации (именуемый CON-L) и в Dконфигурации (именуемый CON-D) в концентрации между 1 и 500 мкг/мл (табл. 2), а опыты по ингибированию с IgA осуществляли в аналогичных условиях с помощью пептидов L-PAM,Р-РАМ и CON-L (табл. 3). Таблица 2 В/Во соответствует проценту ингибирования, вычисленному делением полученных значений ОП, полученных в присутствии конкурентов, на значения, полученные в отсутствие конкурентов. Таблица 3 Ингибирование связывания IgA/FcR Ингибиторы 1 10 100 250 мкг/мл В/Во имеет вышеуказанное значение. Данные, приведенные в табл. 2 и 3, свидетельствуют, что L-PAM, D-PAM и Р-РАМ производят дозозависимым способом такой же уровень взаимодействия, что и IgG. Данное ингибирование является специфическим потому, что оба контроля (BSA) и два пептида CON-L иCON-D не способны подавлять это взаимодействие. Точно так же, пептиды L-PAM и Р-РАМ специфически подавляют взаимодействие IgAFcR, тогда как и BSA и CON-L не способны производить такой эффект.SRBS, производимом с человеческим IgG и клетками U937 с помощью соединений настоящего изобретения. На пептидах L-PAM и D-PAM осуществляли пробу для анализа подавления образования розеток между эритроцитами барана (SRBC),полученными с помощью IgG человека, и клетками U937 (полученными как описано выше). Анализ образования розеток осуществляли в соответствии с протоколом Lund J. с соавт.(FASEB. J. 115-119, 1995), модифицированным следующим образом. Производное SRBS получали с использованием таннированного SRBC (SRBC предварительно обработанные дубильной кислотой,Sigma Cat.R-8128) и JgG человека по протоколу поставщика. В конце получения IgG-SRBC ресуспендировали в растворе, содержащем 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA, SigmaCat.А-9418 ) в DPBS (Sigma, Cat.D-5527). 2,5105 клеток U937, взятых из культуры с плотностью 7,5105 клеток/мл, центрифугировали в течение 5 мин при 80 хg, ресуспенди 9 ровали в 50 мкл 0,1%-ного DPBS-BSA и инкубировали с 50 мкл 0,1%-ного DPBS-BSA, содержащего 2,5107 SRBC-IgG; использовали соотношение 1:100 U937/SRBC-JgG. Через 30 мин при 25 С подсчитывали розетки, в частности U937, обладающие 4 или более SRBC, связанными с поверхностью. В этих условиях было обнаружено, что, в среднем, 45% обработанных U937 давали образование розеток. В вышеописанных условиях осуществляли опыт по ингибированию образования розеток с использованием пептидов L-PAM, D-РАМ,CON-L и CON-D. Дополнительный контрольный анализ осуществляли с использованием IgG в качестве позитивного контроля ингибирования и недериватизированного SRBC в качестве негативного контроля. Результаты данных опытов показаны в табл. 4, из которой следует, что пептиды L-PAM и D-PAM настоящего изобретения способны ингибировать образование розеток между произведенными IgG SRBC и их рецепторами на мембране U937, которые получали для IgG. Данное ингибирование является специфическим, поскольку и контрольные SRBC и пептиды CON-L и CON-D не способны подавлять данное взаимодействие. Таблица 4 Подавление образования розеток между SRBC-IgG и количество ингибитора, необходимое для снижения на 50% образования розеток между SRBCIgG и FcRs U937. Взаимодействие между пептидами формулы (I) и иммуноглобулинами класса Е вначале тестировали путем получения колонки по сродству и оценки ее способности выделять очисткой IgE из биологической жидкости. Для этой цели, пептид (1) (5 мг) растворяли в 5 мл 0,1 М натрийбикарбонатного буфера рН 9,0 и добавляли 1,2 г активированной СН-сефарозной смолы (Pharmacia, Uppsala, Sweden Cat. n. 17-049001), носитель хроматографии по сродству предварительно активировали для непосредственного присоединения пептидов и белков. Данную суспензию перемешивали в течение 24 ч и эффективность присоединения отслеживали с помощью отбора проб реакционной смеси в разное время и последовательного анализа RPHPLC. Почти 90% исходного пептида оказывалось ковалентно связанным с данной смолой через 24 ч. Данную полученную смолу промывали с помощью 50 мл 1 М Триса рН 9,0 и набивали стеклянную колонку размером 1006,6 10 мм I.D. Для выделения очисткой иммуноглобулинов класса Е эту колонку уравновешивали с помощью 25 мМ BIS-TRIS-буфера рН 6,5, при скорости протекания 1 мл/мин, и элюат отслеживали при 280 нм. Один миллилитр асцитической жидкости,содержащей IgE, против овальбумина, нагружали на данную колонку и после элюции несвязавшегося материала элюционный буфер заменяли на 0,1 М уксусную кислоту. Материал, десорбированный при этой обработке, собирали и анализировали с помощью электрофоретического анализа в полиакриламидном геле. Как ясно показал электрофоретический анализ, данная колонка способна удержать иммуноглобулиновую фракцию исследуемой асцитической жидкости, тогда как альбумины не удерживались и элюировались истекающим колоночным объемом. Очищающую способность соединений формулы (I), полученных в виде L- или Dконфигурации аминокислот, не зависела от типа используемого носителя в хроматографии по сродству. Действительно, аналогичные результаты получали с помощью других носителей,подобных носителям Protein-Pak (Waters, USA),Eupergit C30N (Sigma, USA) и Affi-gel (BioRad,USA). Дополнительное подтверждение способности пептидов формулы (I) связывать иммуноглобулины класса Е получили при определении с помощью ELISA. С этой целью осуществляли испытание линейного связывания антигена специфически биотинилированного пептида-IgE формулы (I) путем иммобилизации пептида формулы (I) на микропланшетах в определенияхELISA (Falcon Cat.3912). После соединения с бычьим сывороточным альбумином (BSA SigmaCat.А-9418) пептид формулы (I) помещали в концентрации 50 мкг/мл в 0,1 М NaHCO3 pH 8,5,100 мкл/лунку, на 15 ч при 4 С. Эти планшеты промывали 5 раз с помощью PBS и неспецифичные участки насыщали путем добавления в каждую лунку 180 мкл раствора, содержащего 3% порошкового молока. Через 1 ч 30' при комнатной температуре эти планшеты промывали 5 раз с помощью PBS-T (PBS-Tween 0,05%) и каждую лунку заполняли 100 мкл раствора асцитической жидкости, содержащей IgE, специфичный к овальбуминовому антигену в концентрации 10 мкг/мл в PBS/0,5% порошковом молоке. После инкубации при 37 С в течение 1 ч 30' добавляли биотинилированный овальбуминовый раствор переменной концентрации от 1 до 30 мкг/мл в PBS/0,5% порошковом молоке,100 мкл/лунку. После инкубации при 37 С в течение 1 ч 30' добавляли пероксидаза-стрептавидиновый раствор (100 мкл/лунку) (Sigma Cat.S5512),разбавленный в PBS/0,5% порошковом молоке. После инкубации в течение 1 ч при 37 С планшеты промывали 5 раз с помощью PBS-T и каждую лунку заполняли 100 мл раствора 2,2'азино-бис(3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой) кислоты (Sigma Cat.А-9941) в цитратнофосфатном буфере рН 5,0 и 0,012% перекиси водорода. Приблизительно через 30 мин поглощение каждой лункой считывали с помощью спектрофотометра (Merk Mod. Mios), а полученные результаты показаны в табл. 5. Полученные таким образом данные свидетельствуют, что пептид РАМ связывает иммуноглобулины Е специфическим и дозозависимым способом. Кроме того, определяли in vivo антиаллергическую активность пептидов настоящего изобретения. Крысиную асцитную жидкость, содержащую IgE, специфичный к овальбуминовому антигену, и иммуноглобулины общим количеством 4 мг/мл, разбавленные в пересчете на PBS,инъецировали внутрикожно крысиному самцу разновидности CD. Внутрикожную инъекцию объемом 50 мкл осуществляли животному в выбритую спину. Этим путем получали возможность связывать IgE асцитической жидкости с FcR локальных тучных клеток, сенсибилизирующих их. Через 24 ч внутривенно инъецировали 1 мг овальбумина и красителя Эванса голубого в концентрации 2% в 1 мл PBS. Через 15 мин на коже спины крысы наблюдали наличие окрашенной области, распространение которой и интенсивность окраски которой пропорционально количеству антигенспецифичного IgE, инъецированного вместе с асцитической жидкостью. Подсиненную область поражения получали при инъекции антигена, который связывается с IgE, и определяли дегрануляцию и высвобождение медиаторов на участке внутрикожной инъекции. После наблюдали локальное увеличение сосудистой проницаемости и просачивание красителя из сосуда. В качестве негативного контроля применяли внутрикожную инъекцию (50 мкл PBS,свободного от асцитической жидкости кости),которая не образует подсиненную область поражения. В опыте по ингибированию, асцитическую жидкость, содержащую должным образом разбавленный IgE, инкубировали с пептидами LPAM и D-PAM в общем молярном соотношении иммуноглобулины-пептиды 1:2, 1:20, 1:200,1:2000, 1:20000 и 1:200000, что соответствует 26 12 нг, 260 нг, 2,6 мкг, 26 мкг, 260 мкг и 2600 мкг пептидов L-PAM и D-PAM. По этим двум пептидам осуществляли раздельные эксперименты. Крысам CD1 внутрикожно инъецировали по 50 мкл смеси асцитическая жидкость-пептид в различных концентрациях. В качестве положительного контроля применяли 50 мкл-овую инъекцию асцитической жидкости без пептида. Через 24 ч инъецировали антиген вместе с красителем Эванс голубой, как описано выше. Через 15 мин наблюдали, что интенсивность и область подсиненного поражения на спине крысы были пропорциональны количествам инъецированного пептида и полностью отсутствовали при наивысших пептидных концентрациях. Результаты, полученные с пептидами LPAM и D-PAM, показаны в табл. 6. Эти результаты свидетельствуют, что оба пептида обладают способностью подавлять дозозависимым способом взаимодействие IgE-рецептора до полного исчезновения воспалительной реакции. Таблица 6 Количество ингибитора ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция, содержащая биологически эффективное количество пептида формулы (I)X1 и Х 2, отличающиеся друг от друга,представляют собой аминокислотный остаток тирозина и аргинина в L и D-конфигурации, в котором гидроксигруппа треонина и гуанидиновая составляющая аргинина могут быть защищены соединением, традиционно используемым в химии пептидов для защиты, соответственно,гидроксигруппы и гуанидиновой составляющей,n равно 2, 3 или 4, аR представляет собой группу, способную образовать димерный, тримерный и, соответственно, тетрамерный пептид,и, по меньшей мере, фармацевтически приемлемый инертный ингредиент. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой n равно 4. 3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, в которой каждая из аминокислот соединения формулы (I) обладает L- или Dконфигурацией. 4. Фармацевтическая композиция по п.2 или 3, в которой R представляет собой тетрапептид формулы (Lys)2-Lys-Gly-OH. 5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, в которой X1 представляет собойArg. 6. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-5, в которой Х 2 представляет собой Тyr. 14 7. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4 и 6, в которой X1 представляет собой Arg (Рmc). 8. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-5 и 7, в которой Х 2 представляет собой Тyr (OtBu). 9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-8, в которой в соединении формулы (I) треониновая гидроксигруппа защищена трет-бутильной группой.