Применение производных п-аминофенола для приготовления фармацевтических композиций , используемых при лечении нейродегенеративных заболеваний

1 Настоящее изобретение относится к применению производных п-аминофенола для приготовления фармацевтических композиций, используемых при лечении нейродегенеративных заболеваний. В частности, настоящее изобретение относится к применению производных паминофенола и их пролекарств для приготовления фармацевтических композиций, используемых при лечении нейродегенеративных заболеваний с воспалительным компонентом с продуцированием in loco воспалительных маркеров,таких как протеины комплемента и цитокины. Более конкретно настоящее изобретение относится к применению соединений формулы где R1 представляет водород или низший ацил,иR2 представляет водород или низший алкил, и использованию их пролекарств. Типичными примерами таких соединений являются фенацетин (R1=СОСН 3; R2=C2H5),также известный как ацетофенетидин, и парацетамол (R1=СОСН 3; R2=Н), также известный как ацетаминофен или N-ацетил-п-аминофенол. Типичными примерами пролекарств являются пропацетамол (В. Bannwarth et al., "Br. J.Clin. Pharmac.", 34, 79-81, 1992), ацетаминосалол (R.Q. Brewster, "J. Am. Soc.", 40, 1136, 1918) и его глициновый сложный эфир (I.M. Kovach etand Drug Discovery - Vol. I; Principles and Practice - 5th ed. - Ed. Manfred E. Wolff - pp. 172-178". Ранее было известно, что эти соединения обладают обезболивающим и жаропонижающим действием, которое сравнимо с действием аспирина, хотя в отличие от ацетилсалициловой кислоты они обладают незначительным противовоспалительным действием (Insel A.P. в "TheGilman A. et al. ed., pp. 656-659, Pergamon Press,1990). В настоящее время фенацетин мало используется в терапевтических целях из-за своей общей токсичности и побочных эффектов. Парацетамол, однако, хорошо переносится и не дает значительных побочных эффектов при низких терапевтических дозах от 0,5 до 1 г, 3 или 4 раза в день. Парацетамол быстро поглощается и распределяется равномерно по всем главным частям тканей организма, включая мозг. Его содержание в плазме через несколько минут после перорального введения 1 г парацетамола достигает примерно 10 мг/л (66,2 мкМ) и уменьшает 003251 2 ся до примерно 1,5 мг/л спустя 6 ч. Концентрация в тканях приблизительно та же, что и концентрация в плазме (Prescott L.F., "Br. J. Clin.Pharmacol.", 10 (suppl. 2), 291-298S, 1980). Способ действия парацетамола до сих пор неполностью известен. Общепризнанно, однако,что его активность зависит от его способности ингибировать продуцирование простагландина главным образом в центральной нервной системе. Такое воздействие способно объяснить обезболивающий и жаропонижающий эффект парацетамола. С другой стороны, отсутствие воздействия на периферическую циклоксигеназу могло бы быть причиной его недостаточного противовоспалительного воздействия (Clissold,S.P., "Drugs", 32 (suppl. 4), 46-59, 1986). Болезнь Альцгеймера является патологией,характеризуемой прогрессирующей нейродегенерацией, ведущей к слабоумию. Вскрытие неизменно выявляет определенные типичные гистологические маркеры, такие как бляшки, вызванные избыточным отложением -амилоида и потерей нейронов и/или синапсов (Selkoe D.J. etal., "Neuron", 6, 487-493, 1991). В последние годы присутствие воспалительных маркеров в мозговых пробах пациентов, страдающих от болезни Альцгеймера, обнаруживалось с увеличивающейся частотой. Типичные для воспалительных процессов протеины, такие как антигены тканевой совместимости, некоторые цитокины и их рецепторы, Fc рецепторы, некоторые протеины острой фазы и протеины классического пути активации комплемента вместе с их рецепторами были в действительности обнаружены в амилоидных бляшках или в области таких бляшек (DicksonD.M. et al., "Glia", 7, 75-83, 1993). Было также показано, что такие воспалительные протеины вырабатываются in loco глиальными клетками и микроглиальными клетками (Hugh Perry V. etal., "Trends Neurol. Sci.", 7, 268-273, 1993). Было достаточно убедительно показано незначительное распространение этой патологии у пациентов, страдающих ревматоидным артритом, которые в течение длительных периодов времени принимали противовоспалительные препараты(McGeer P.L. et al., "Neurology", 42, 447-449,1992; Breitner J.S. et al., "Neurology", 44, 227-232,1994; Rogers J. et al., "Neurology", 43, 1609-1611,1993). В частности, обследование при двойном слепом контроле 44 пациентов, страдавших от болезни Альцгеймера и подвергавшихся лечению индометацином в течение 6 месяцев, показало заметное замедление прогрессирующего слабоумия по сравнению с контрольной группой, принимавшей плацебо (Schnabel J., "Science", 260, 1719-1720, 1993). Эти наблюдения показали, что типичные для болезни Альцгеймера явления "мозгового" воспаления не являются просто реакцией на уже идущий патологический процесс, а что указанные мозговые вос 3 палительные явления сами по себе становятся патогенным фактором первостепенной важности.J.C.S. Breitner et al. (Neurobiology of aging,Vol. 16(4), 1995, стр. 523-530) сообщают о ретроспективном обследовании пациентов, которые принимали парацетамол для лечения болей и лихорадки. Хотя вводимые пациентам фармацевтические препараты не предназначались изначально для лечения болезни Aльцгеймера, эти исследования имели целью установить, является ли лечение парацетамолом причиной статистически значимого замедления в развитии болезни Альцгеймера. Результат оказался отрицательным. В патенте WO-A-9528153 описана группа из 11 конкретных производных бензамида для лечения нейродегенеративных заболеваний. Указано, что активность этих соединений является неожиданной и непредсказуемой, исходя из того факта, что другие близкие по структуре вещества не обладают активностью. Сообщается, что небольшие изменения структуры приводят к большим различиям в эффективности и токсичности. Было неожиданно обнаружено, что соединения формулы (I) и их пролекарства могут использоваться при лечении нейродегенеративных заболеваний, в которых присутствует воспалительный компонент с продуцированием in loco протеинов комплемента и цитокинов, несмотря на то, что такие соединения не обладают противовоспалительным действием. В частности, указанные соединения замедляют продуцирование протеинов комплемента и цитокинов глиальными клетками мозга и позволяют значительно ослабить воспалительные явления, обычно имеющиеся в мозге пациентов,страдающих от болезни Aльцгеймера. Целью настоящего изобретения поэтому является применение соединения, имеющего формулу где R1 представляет собой водород или -СОСН 3,иR2 представляет собой водород или С 1-2 алкил, и его пролекарства для приготовления фармацевтической композиции, используемой при лечении нейродегенеративных заболеваний,в которых присутствует воспалительный компонент с продуцированием in loco воспалительных маркеров (меток), таких как протеины комплемента и цитокины. Типичным примером таких заболеваний является болезнь Альцгеймера. В настоящем описании и в формуле изобретения, которые следуют ниже, выражение 4 приблизительно 20 протеинов, которые образуют комплементную систему и которые обладают воспалительным действием типа каскадного катализа. Активирование этой системы, которое может происходить двумя путями, известными как пути прямого или альтернативного активирования, ведет в итоге к клеточному лизису. Некоторые из факторов (протеинов) обозначены буквой "С", после которой следует номер, и наиболее важным и распространенным компонентом является фактор, известный как СЗ (I.M. Roitt, в: Immunologia; fisiologia, pat ologia o clinica; Italian ed. by C.E. Grossi and D. Zarcone, Edi-Ermes, Milano, 1990, стр. 7). [Immunology; physiology, pathology or clinic; Italian editionby C.E. Grossi and D. Zarcone, page 7, Edi-Ermes,Milan, 1990]. Поэтому в экспериментах с целью оценки возможного продуцирования протеинов комплемента определяли только СЗ и считали его показателем всего комплекса протеинов комплемента. Цитокины представляют семейство протеинов, функцией которых является создание возможности коммуникации между различными типами клеток, образующими часть иммунной системы, и, следовательно, регуляции различных сторон иммунной реакции, включая воспалительные явления. Среди цитокинов, преимущественно вовлеченных в воспалительную реакцию, интерлейкин-6 (ИЛ-6) играет роль первостепенной важности: этот цитокин в действительности продуцируется клетками разного типа(макрофаги, лимфоциты В и Т, эндотелиальные клетки) и регулирует иммунную реакцию, реакции острой фазы и кроветворение. Повышенные уровни ИЛ-6 рассматривались как показатель происходящей воспалительной реакции и были обнаружены при различных патологиях, включающих воспалительный компонент, таких как ревматоидный артрит и системная красная волчанка. Ежедневная доза соединения формулы (I) может меняться в широком интервале в зависимости от известных факторов, таких как тип и тяжесть заболевания, вес тела пациента, используемая фармацевтическая композиция, способ введения, число вводимых ежедневных дозированных форм и эффективность используемого соединения. Оптимальная доза может быть тем не менее легко определена специалистом с помощью обычной процедуры. Вообще, ежедневная доза должна быть между 0,01 и 200 мг/кг. В конкретном случае парацетамола ежедневная доза должна быть предпочтительно от 10 до 100 мкг/кг или еще более предпочтительно от 15 до 75 мг/кг. Примерами подходящих способов введения являются пероральный, ректальный и инъекционный. 5 В зависимости от выбранного способа введения фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть в твердом виде, например, таблетки с покрытием, капсулы и композиции с регулируемым высвобождением, и полутвердом виде, например, свечи, или в жидком виде, например, стерильные растворы. Примерами композиций с регулируемым высвобождением являются те, которые включают липосомы или пузырьки (способные высвобождать фармакологически активное соединение регулируемым способом) и многослойные таблетки, состоящие из слоев с различной скоростью дезинтеграции. Помимо обычных наполнителей композиции могут содержать добавки, подходящие для фармацевтического применения, такие как консерванты,стабилизаторы,поверхностноактивные вещества, эмульгаторы, соли для регулирования осмотического давления, буферы,ароматизаторы, подсластители, красители и т.п. Композиции по настоящему изобретению могут содержать другие совместимые активные вещества, которые могут быть терапевтически полезными при одновременном применении. Такие соединения включают антиоксиданты,такие как ацетилцистеин, витамин Е, глютатион и метионин, антагонисты кальция, глютаматовые антагонисты рецепторов NMDA, такие как декстрометорфан, агонисты рецептора ацетилхолина, в частности, агонисты мускарина или никотина, и лекарства, способные воздействовать на нервную систему путем увеличения содержания ацетилхолина на уровне синапсов(ингибиторы ацетилхолинэстеразы). Примерами подходящих соединений, которые воздействуют на холинергическую систему, являются такрин,физостигмин, неостигмин, гептастигмин, донепезил (Е-2020), метрифонат и SDZ-ENA-713. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены обычными химико-фармацевтическими методами, включающими смешение, гранулирование и прессование, если необходимо, различных смесей и растворение ингредиентов в зависимости от того, какие методы наиболее подходят для приготовления требуемого продукта. Следующие примеры служат для пояснения настоящего изобретения, но не являются ограничивающими. Пример 1. Действие парацетамола и индометацина на продуцирование комплемента в клетках линииT98G. Влияние парацетамола на продуцирование факторов комплемента изучали, используя клетки глиобластомы человека линии T98G. Указанная линия в действительности способна по своему строению продуцировать фактор 3 комплемента (СЗ), и этот синтез в дальнейшем усиливается в присутствии различных стимулов, таких как интерлейкин-1-бета (ИЛ-1). В 6 качестве препарата для сравнения использовали индометацин. Клетки (2x106/мл) инкубировали в течение 48 ч в присутствии возрастающих концентраций парацетамола (10-100-500-1000 мкМ) или индометацина (0,1-1-10 мкМ), как в присутствии, так и в отсутствие ИЛ-1 (50 ед/мл). По завершении инкубации клетки из культуральной среды собирали и измеряли количество СЗ, выделенное клетками в различных условиях. СЗ определяли иммуноферментным анализом сэндвич-типа, в котором использовали два анти-СЗ антитела различного вида, а также антисыворотку, помеченную щелочной фосфатазой специфично для одного из двух анти-СЗ антител. Выделенный СЗ определяли количественно, используя стандартную кривую, полученную на основе очищенного СЗ. Результаты (табл. 1) показывают, что парацетамол ингибирует выделение СЗ при Cl50 примерно 1 мМ как при стимулировании клеток интерлейкином-1 бета, так и в отсутствие указанного цитокина. Было найдено, что индометацин является активным при снижении секреции комплемента в этом тесте, но из-за его токсичности по отношению к использованной клеточной системе невозможно увеличить его концентрацию выше 10 мкМ, при каковой дозе он проявляет активность 35%. Эти результаты показывают, что как парацетамол, так и индометацин способны понижать секрецию факторов комплемента, которые появляются в мозге при патологических расстройствах. Эти наблюдения свидетельствуют в пользу применения парацетамола при патологиях, в которых имеет место значительное продуцирование факторов комплемента в центральной нервной системе, таких как, например, болезнь Альцгеймера. Таблица 1 Действие парацетамола и индометацина на продуцирование комплемента в клетках линии T98G Клетки, стимулированные ИЛ-1 Парацетамол Пример 2. Действие парацетамола и индометацина на продуцирование интерлейкина-6 (ИЛ-6) в клет 7 ках линии T98G, стимулированных амилоидом. Влияние парацетамола на продуцирование ИЛ-6 изучали, используя клетки глиобластомы человека линии T98G. Указанная линия в действительности способна по своему строению продуцировать ИЛ-6, и этот синтез усиливается в присутствии агрегированного -амилоида. В качестве препарата для сравнения использовали индометацин. Клетки (2x106/мл) инкубировали в течение 48 ч в присутствии возрастающих концентраций парацетамола (10-1000 мкМ) или индометацина(0,1-10 мкМ) в присутствии -амилоида (50 мкМ), агрегированного инкубацией при 37 С в течение 6 суток. В конце опыта клетки из культуральной среды собирали и количество ИЛ-6,выделенное клетками в различных условиях,измеряли с помощью имеющегося в продаже иммуноферментного набора (Biotrak IL-6, Amersham, UK). Результаты (табл. 2) показывают, что парацетамол способен ингибировать выделение ИЛ-6 при Cl50 немного выше 1 мМ. Ингибирующая активность индометацина по отношению к ИЛ-6 составляет от 10 до 20%. Эти результаты показывают, что парацетамол способен понижать выделение ИЛ-6, появляющегося в мозгу в присутствии амилоида, в условии, типичном для болезни Альцгеймера, ввиду чего эти наблюдения свидетельствуют в пользу применения парацетамола при этой патологии. Таблица 2 Действие парацетамола и индометацина на продуцирование ИЛ-6 в клетках линии T98G Клетки, стимулиро% Доза замедления ванные -амилоидом 1000 мкМ 41,2 500 мкМ 20,5 Парацетамол 100 мкМ 6,7 10 мкМ 11,4 10 мкМ 11,5 Индометацин 1 мкМ 17,6 0,1 мкМ 21,1 Пример 3. Действие парацетамола и индометацина на продуцирование простагландина в клетках линий T98G J774.2. Полезность парацетамола при мозговых воспалительных патологиях была подтверждена другими экспериментами, предназначенными для того, чтобы продемонстрировать, что парацетамол обладает селективным действием на клетки мозга, которое не обнаружено у других противовоспалительных лекарств, таких как индометацин. Проводили параллельные опыты, в которых определяли способность парацетамола и индометацина ингибировать продуцирование 8 простагландинов, вырабатываемых клетками глиобластомы линии T98G или клеточными макрофаговыми клетками линии J774.2. Опыт с клетками T98G, стимулированными ИЛ-1, проводили так, как описано в предшествующем примере 1. В конце инкубации отбирали клетки из культуральной среды и измеряли количество присутствующих простагландинов Е 2. Простагландины анализировали с помощью имеющейся в продаже иммуноферментной тест-системы (Amersham). Результаты, приведенные в табл. 3, показывают, что и парацетамол, и индометацин, оба способны существенно ингибировать продуцирование простагландинов в глиальных клетках центральной нервной системы. Таблица 3 Действие парацетамола и индометацина на продуцирование простагландинов в клетках линии T98G Клетки, стимулиро% Доза замедления ванные ИЛ-1 1000 мкМ 99 500 мкМ 96,9 Парацетамол 100 мкМ 88,5 10 мкМ 26,7 10 мкМ 99,1 Индометацин 1 мкМ 98,4 0,1 мкМ 99,3 Параллельно с вышеописанным опытом макрофаговые клетки J774.2 (2 х 106 ед/мл) стимулировали липополисахаридом (ЛПС) (1 мкг/мл) в течение 12 ч. После трех промывок физиологическим раствором клетки инкубировали в течение 45 мин с увеличивающимися концентрациями парацетамола (0,1-100 мкМ) или индометацина (0,01-1 мкМ). В конце инкубации собирали клетки из супернатанта и измеряли содержание простагландина Е 2, используя вышеописанный анализ. Результаты, приведенные в табл. 4, показывают, что парацетамол, в отличие от индометацина, имеет малую ингибирующую активность по отношению к продуцированию простагландинов в макрофагах и, следовательно, в клетках, расположенных вне центральной нервной системы. Таблица 4 Действие парацетамола и индометацина на продуцирование простагландинов в клетках линии J744.2% Клетки, стимулироДоза, мкМ замедления ванные ЛПС 100 11,4 10 12,5 Парацетамол 1 6,4 0,1 5,3 1 87,4 Индометацин 0,1 61,1 0,01 35,8 Данные в табл. 1, 2, 3 и 4 в целом показывают, что парацетамол, в отличие от индометацина, обладает особой селективностью действия на нервную систему, которое делает это лекарство особенно полезным для лечения болезни Альцгеймера. 10 ем, подвергается лечению терапевтически полезным количеством соединения, имеющего формулу где R1 представляет собой водород или -СОСН 3 иR2 представляет собой водород или С 1-2 алкил,или его пролекарства для приготовления фармацевтических композиций, используемых при лечении нейродегенеративных заболеваний. 2. Применение по п.1, отличающееся тем,что соединением, имеющим формулу (I), является парацетамол. 3. Применение по п.1, отличающееся тем,что пролекарством парацетамола является пропацетамол, ацетаминосалол или глициновый эфир ацетаминосалола. 4. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что заболеванием является болезнь Альцгеймера. 5. Способ лечения, по которому пациент,страдающий нейродегенеративным заболевани где R1 представляет собой водород или -СОСН 3 иR2 представляет собой водород или СН 1-2 алкил,или его пролекарства. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что нейродегенеративным заболеванием является болезнь Альцгеймера. 7. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем,что соединением, имеющим формулу (I), является парацетамол. 8. Способ по п.5, отличающийся тем, что лечение включает ежедневное введение 0,01-200 мг/кг соединения, имеющего формулу (I), или эквивалентного количества пролекарства парацетамола. 9. Способ по любому из пп.5-8, отличающийся тем, что лечение включает ежедневное введение 10-100 мг/кг парацетамола или эквивалентного количества его пролекарства. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что лечение включает ежедневное введение 15-75 мг/кг парацетамола или эквивалентного количества его пролекарства.