Пиразоло [3,4 - d] пиримидины с противоконвульсивным, противоаллергическим / противоастматическим действием

1 Изобретение относится к пиразоло[3,4d]пиримидин-4(5 Н)-онам и пиразоло[3,4d]пиримидин-4(5 Н)-тионам и их таутомерам,которые в положении 2 содержат бензильный остаток, способу их получения и их применению в качестве лекарственного средства, в особенности, для лечения как различных форм эпилепсии, так и аллергических заболеваний, таких как бронхиальная астма, аллергический риноконъюнктивит или атопический дерматит. Рецептор аденозина имеет значение в качестве мишени для индукции нарушений регуляции в различных системах органов (например,центральной нервной системе, дыхательных путях и т.д.). Пиразоло[3,4-d]пиримидины являются соединениями, представляющими интерес с фармакологической точки зрения, благодаря их структурному сходству с аденином. 2-бензилзамещенные пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тионы и таутомеры являются неизвестными. Неизвестны также пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-оны и таутомеры, которые имеют замещенный бензильный остаток в положении 2. До сих пор был описан только 2 бензилпиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он [R.Pech, R. Bhm, Pharmazie 1991, 46, 747]. Это соединение было получено циклизацией этилового эфира 3-амино-1-бензилпиразол-4 карбоновой кислоты формамидом. 2 Бензилзамещенные эфиры 3-аминопиразол-4 карбоновой кислоты могут быть получены бензилированием эфиров 3-аминопиразол-4 карбоновой кислоты [S. Senda, К. Hirota, G.-N.Yang, Chem. Pharm. Bull. 1972, 20(2) 391]. Для 2-бензилпиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-она не упоминалась и не предполагалась конкретная фармакологическая активность. Известные противоконвульсивные средства имеют недостаток, заключающийся в том,что они, во-первых, обнаруживают нежелательные побочные действия, такие как нейротоксичность и идиосинкразии, и, во-вторых,являются неэффективными при некоторых формах эпилепсии. Различные формы аллергических/астматических заболеваний, такие как бронхиальная астма, также обычно недостаточно поддаются лечению существующими лекарственными средствами. Поэтому задачей данного изобретения является получение соединений с благоприятными фармакологическими свойствами, которые применимы в качестве лекарственных средств для лечения эпилепсии и различных аллергических/астматических заболеваний. Согласно настоящему изобретению этими новыми соединениями являются 2-ар(алкил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-оны и 2 002768 или их таутомеры, причем Х обозначает кислород и серу,Y обозначает галоген, С 1-С 4-алкил, C1-C4 алкокси, трифторметил или трифторметокси,m равно 1 или 2, за исключением 2-бензил 4,5-дигидро-4-оксо-пиразоло[3,4d]пиримидина как известного промежуточного продукта. В качестве примеров соединений общей формулы 1 могут быть названы 2-(2-фторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-хлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-бромбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-иодбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-трифторметилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-метилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(3-трифторметилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2,6-дифторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-хлор-6-фторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2,6-дихлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2,4-дихлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(4-метоксибензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-хлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тион 2-(2-бромбензил)-пиразоло(3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тион 2-(2-иодбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тион 2-(2-трифторметилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тион 2-(2,6-дифторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тион Способ получения соединений формулы 1 и их таутомеров, в которых Х является кислородом, основан на циклизации эфиров 3 аминопиразол-4-карбоновой кислоты или амидов 3-аминопиразол-4-карбоновой кислоты общей формулы 2 в формамиде при температурах между 100 и 180 СZ обозначает гидрокси, алкокси или амино,Y обозначает галоген, С 1-С 4-алкил, С 1-С 4 алкокси, трифторметил, трифторметокси,m равно 1 или 2. Способ получения соединений формулы 1 и их таутомеров, в которых Х является серой,основан на замещении соединений формулы 1 и их таутомеров, в которых Х обозначает кислород, серой посредством пентасульфида фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4 дифосфетан-2,4-дисульфида. Способ получения соединений формулы 2 основывается на производных 3-аминопиразол 4-карбоновой кислоты. Алкилированием в условиях фазового переноса посредством подходящим образом замещенного бензилгалогенида получают соединения формулы 2. Соединения согласно изобретению или их фармацевтически приемлемые соли пригодны для приготовления фармацевтических композиций. Фармацевтические композиции или медикаменты могут содержать одно или несколько соединений согласно изобретению. Для приготовления фармацевтических препаратов могут использоваться обычные фармацевтические носители и вспомогательные вещества. Лекарственные средства могут применяться, например, парентерально (например,внутривенно, внутримышечно, подкожно), локально (интраназально, ингаляцией) или перорально. Готовые формы для применения могут быть изготовлены в соответствии с общеизвестными в фармацевтической практике способами. Соединения по данному изобретению проявляют сильную противоконвульсивную, противоаллергическую,противоастматическую активность. 1. Противоконвульсивная активность. Соединения по данному изобретению испытывали in vivo при введении i.p. на мышах и крысах (введение р.о.) в соответствии с международным общепринятым стандартом (Pharmac.Drugs, Third Ed., Raven Press, New York 1989) на их противоконвульсивное действие (табл. 1). Аналогичные результаты получены при оральном введении. Например, для соединения 2 (2-(2 хлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)он) на крысах определили при максимальном электрошоке значение ED50 (р.о.), равное 32 мг/кг, и величину нейротоксичности NT50250 мг/кг. Соединение 14(2-(2-хлорбензил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-тион) также обладает сильной противоконвульсивной актив Таблица 1. Противоконвульсивное действие выбранных пиразоло[3,4-d]пиримидинов 2. Противоаллергическая/противоастматическая активность. Соединения согласно изобретению испытывали in vivo при пероральном введении на самцах морских свинок на противоастматическое действие, причем определяли ингибирование притока эозинофильных гранулоцитов в легкое. Самцов морских свинок (Dunkin HartleyShoe) весом 200-250 г активно сенсибилизировали подкожно одной инъекцией овальбумина(100 мкг + 1 мг гидроксида алюминия) и спустя две недели проводили вторичную инъекцию. 5 Спустя неделю после повторной иммунизации(бустер-иммунизации) овальбумином животных провоцировали (стимулировали) аэрозолем из 0,5%-ного раствора овальбумина в течение 2030 с. Через 24 ч у животных под наркозом проводили бронхоальвеолярный лаваж (BAL) с 2 х 5 мл раствора хлорида натрия. Жидкость лаважа собирали и центрифугировали при 400 х g в течение 10 мин и остатки клеток суспендировали в 1 мл раствора хлорида натрия. Эозинофильные гранулоциты считали микроскопически в камере Нойбауера. Для окрашивания использовали набор для теста Becton Dickinson test( 5877) для эозинофилов. В этом тест-наборе используется Флоксин В в качестве избирательного красителя для эозинофилов. Для каждого животного считали эозинофилы в BAL и рассчитывали эозинофилы в Mio/животное. Тестируемые вещества вводили перорально за 2 ч перед стимуляцией аллергеном. Процент ингибирования эозинофилов группы животных, обработанных веществом,рассчитывают согласно следующей формуле(А - С) - (В - С)/(А - С) х 100 = % ингибирования А - эозинофилы в необработанной сенсибилизированной (аллергеном) контрольной группе В - эозинофилы в обработанной веществом сенсибилизированной (аллергеном) группе С - эозинофилы в несенсибилизированной контрольной группе. Например, соединение 3 ингибирует при дозе 100 мг/кг характерный для бронхиальной астмы приток эозинофильных гранулоцитов в легкое на 74%. Соединения согласно данному изобретению пригодны, например, для лечения бронхиальной астмы, риноконъюнктивита и атопического дерматита. Соединения согласно изобретению связываются подтип-специфически (А 3) с рецептором аденозина. Антагонисты аденозин-А 3-рецептора могут путем блокады их рецепторов препятствовать выходу медиаторов. Недавно было показано,что антагонисты аденозин-А 3-рецептора препятствуют снижению внутриклеточной сАМФконцентрации, а также в эозинофильных гранулоцитах и тем самым подавляют высвобождение цитокинов и других медиаторов из этих клеток (Jacobson et al., 1995). В результате этого могут, с одной стороны, облегчаться неприятные, острые симптомы и, с другой стороны, подавляться также воспалительные процессы, вызывающие заболевания. Таблица 2. K1-значения [мкМ] на рецепторе аденозина (А 3) и селективность А 3/A1 А 3/А 2 Соединение 1) Ki-значения [мкМ] 1 3,2 0,7 0,01 2 2 0,02 0,06 3 0,43 0,008 0,005 4 0,49 0,008 0,0005 5 0,79 0,002 0,007 Представленные в табл. 2 Ki-значения показывают, что соединения согласно изобретению связываются рецепторами, значения селективности (столбцы 2 и 3) показывают, что при этом эти соединения связываются селективно. Возможно, что этим новым механизмом связывания может быть опосредована биологическая активность. Следующие примеры служат для дополнительного объяснения изобретения, при этом его не ограничивают. Описание получения соединений формулы 1 и их таутомеров, в которых Х представляет собой кислород, в соответствии с табл. 3, примерами 1-12: К 40 мл формамида добавляют 30 ммолей соединения формулы 2 и нагревают между 100 и 200 С в течение 8-16 ч. После охлаждения выпавший в осадок неочищенный продукт отсасывают и проводят перекристаллизацию с подходящим растворителем, например этанолом или ДМФ. Таблица 3. Пиразоло[3,4-d] пиримидины, Х = 0 (примеры 1-12) Перекристаллизация Соединение Описание получения соединений формулы 1 и их таутомеров, в которых Х представляет собой серу, в соответствии с табл. 4, примерами 1319. Способ А. К 100 мл пиридина добавляют 20 ммолей соединения формулы 1, в котором Х представляет собой кислород, и 80 ммоль пентасульфида фосфора и нагревают между 80 и 115 С в течение 4-8 ч. После охлаждения выпавший в осадок неочищенный продукт очищают перекристаллизацией из подходящего растворителя, предпочтительно этанола. Способ В. К 100 мл ксилола добавляют 10 ммолей соединения формулы 1, в котором Х представляет собой кислород, и 20 ммолей 2,4-бис-(4 метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4 дисульфида и нагревают в течение 8-24 ч. Неочищенный продукт отфильтровывают и очищают, как в способе А. Таблица 4. Пиразоло[3,4-d] пиримидины, Х = S (примеры 13-19) Соединение ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединения общей формулы 1 или их таутомеры, где Х обозначает кислород или серу иY обозначает галоген, С 1-С 4-алкил, С 1-С 4 алкокси, трифторметил или трифторметокси,m равно 1 или 2, за исключением 2-бензил-4,5 дигидро-4-оксо-пиразоло[3,4d]пиримидина. 2. Соединения общей формулы 1, представляющие собой 2-(2-фторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-он 2-(2-хлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-он 2-(2-бромбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-он 2-(2-иодбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-он 2-(2-трифторметилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-метилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-он 2-(3-трифторметилбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2,6-дифторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-хлор-6-фторбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2,6-дихлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2,4-дихлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(4-метоксибензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5 Н)-он 2-(2-хлорбензил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин 4(5 Н)-тионY обозначает галоген, С 1-С 4-алкил, С 1-С 4 алкокси, трифторметил или трифторметокси иm равно 1 или 2. 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что для циклизации амидов 3-аминопиразол-4-карбоновой кислоты формулы 2 используют алкиловый эфир ортомуравьиной кислоты или смеси муравьиная кислота/уксусный ангидрид. 5. Способ получения пиразоло[3,4d]пиримидинов общей формулы 1, в которых Х представляет собой серу, отличающийся тем, что соединение формулы 1, в котором Х представляет собой кислород, подвергают реакции с пентасульфидом фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3 дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфидом. 6. Фармацевтические композиции, отличающиеся тем, что они содержат один или несколько пиразоло[3,4-d]пиримидинов формулы 1 по п.1 или их фармацевтически приемлемые соли в качестве активного вещества, наряду с одним или несколькими физиологически переносимыми вспомогательными веществами и/или носителями и при необходимости разбавителем. 7. Фармацевтические композиции, отличающиеся тем, что они содержат один или несколько пиразоло[3,4-d]пиримидинов по п.2 или их фармацевтически приемлемые соли в качестве активных ингредиентов, наряду с одним или несколькими физиологически переносимыми вспомогательными веществами и/или носителями и при необходимости разбавителем. 8. Применение пиразоло[3,4-d]пиримидинов формулы 1 для получения лекарственных средств для лечения различных форм эпилепсии. 9. Применение пиразоло[3,4-d]пиримидинов формулы 1 для получения лекарственных средств для лечения аллергических/астматических заболеваний.