Полимерные производные гуанидина как цитостатические лекарственные средства

011127 Изобретение относится к лекарственному средству, в частности цитостатику. В западной цивилизации треть населения заболевает раком с уровнем смертности не менее 75%. Злокачественные опухоли в настоящее время подвергают цитостатической терапии. В химиотерапии этих заболеваний основная проблема состоит в том, что только определенная часть раковых клеток реагирует на применяемый цитостатик. Кроме того, даже при наличии реакции опухоли на лечение часто нельзя ожидать полной ремиссии. Актуальным направлением повышения эффективности химиотерапии является полихимиотерапия,т.е. применение нескольких цитостатиков. Все чаще для улучшения лечения рака комбинируются различные цитостатики с разными направлениями действия. Этим, с одной стороны, достигают лучшего эффекта, а с другой стороны, противодействуют проблеме усиливающегося развития резистентности. Следующая возможность состоит в том, чтобы путем совместного приема цитопротекторов избирательно защищать здоровые клетки от цитостатика, благодаря чему может использоваться более высокая доза при одновременно незначительных побочных эффектах (например, таксан). Несмотря на эти меры, частота побочных явлений при химиотерапии все еще очень высока. Именно по этой причине большое значение имеет разработка активных веществ, которые проявляют как хорошую эффективность, так и хорошую переносимость, т.е. обладают по возможности широким терапевтическим окном. Целью изобретения является создание цитостатика, который имеет более широкое терапевтическое окно по сравнению с традиционными цитостатиками, такими как 5-фторурацил, цисплатин, эпирубицин и митомицин С. Лекарственное средство согласно изобретению в качестве активного вещества содержит полимерное производное гуанидина на основе диамина, который между двумя аминогруппами содержит оксиалкиленовые цепи, причем производное гуанидина представляет собой продукт поликонденсации гуанидиновой кислотно-аддитивной соли с диамином, содержащим полиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами, а также его фармацевтически приемлемые соли. Один предпочтительный вариант лекарственного средства согласно изобретению отличается тем,что представителями ряда полиоксиалкилен-гуанидиновых солей являются соли со звеньями триэтиленгликольдиамина (относительная молекулярная масса 148), полиоксипропилендиамина (относительная молекулярная масса 230), а также полиоксиэтилендиамина (относительная молекулярная масса 600). В качестве активного вещества особенно предпочтителен поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] с по меньшей мере 3 гуанидиновыми остатками, причем средняя молекулярная масса лежит, в частности, в диапазоне от 500 до 3000 д. Изобретение относится, кроме того, к применению полимерного производного гуанидина на основе диамина, который содержит оксиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами, причем производное гуанидина представляет собой продукт поликонденсации гуанидиновой кислотно-аддитивной соли с диамином, а также его фармацевтически приемлемые соли, для получения цитостатически действующего лекарственного средства. Кроме того, изобретение относится к применению полиоксиалкилен-гуанидиновой соли, полученной с применением триэтиленгликольдиамина (относительная молекулярная масса 148), полиоксипропилендиамина (относительная молекулярная масса 230), а также полиоксиэтилендиамина (относительная молекулярная масса 600). Полимерное производное гуанидина, используемое согласно изобретению, известно из документа РСТ/АТ 01/00134. Содержание этого литературного источника введено в настоящее описание путем ссылки. В частности, полиоксиалкиленгуанидины и их соли, описанные в РСТ/АТ 01/00134, представляют собой продукты поликонденсации солей гуанидина с диаминами, содержащими полиоксиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами. Эти соединения обладают высокой бактерицидной активностью, относительно низкой токсичностью и высокой гидрофильностью. Заявитель неожиданно обнаружил, что эти соединения могут быть использованы в качестве лекарственного средства, в частности цитостатика. Получение предпочтительного представителя соединения, используемого согласно изобретению, а также доказательство цитостатической эффективности описаны далее. Для представления класса соединений, используемых согласно изобретению, далее будет описана цитостатическая эффективность поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорида] со средней молекулярной массой 1000 д (CAS374572-91-5). Для получения этого соединения 4,43 моль гуанидингидрохлорида растворяют в 4,03 моль триэтиленгликольдиамина при 50 С. Затем нагревают до 120 С и перемешивают при этой температуре 2 ч. Затем температуру удерживают 2 ч, после чего создают вакуум (0,1 бар) и еще 2 ч перемешивают в вакууме при 170 С. Затем вводят воздух до нормального давления, оставляют остывать до 120 С и разбавляют деминерализованной водой до примерно 50%. Фосфорной кислотой нейтрализуют до pH примерно 6, оставляют остывать и разбавляют до желаемой концентрации. Определено, что молекулярный вес равен 1000 д.-1 011127 Доказательство цитостатической эффективности Были исследованы клеточные линии карциномы толстой кишки и карциномы поджелудочной железы, такие как Capan-1, DLD-1, НТ 29, НСТ-8, MIA-PA-CA2, PANC1, ВХРС-3, ASPC-1 и НТ-29. Тестируемые клеточные линии карциномы выдерживали в жидком азоте. После размораживания клетки карциномы культивировали при 37 С/5%-ная атмосфера CO2 в склянках для выращивания культур, содержащих RPMI-1640 + среду глутамина (Gibco Nr. 5240025) в течение до 14 дней, так, чтобы мог образоваться монослой клеток. После этого клетки собирали смесью трипсин + ЭДТУ (Gibco Nr. 15400-054) и дважды промывали средой RPMI. Помимо этого, исследовали лимфоциты здоровых испытуемых. Для этого в пробирки с ЭДТУ отбирали общее количество 100 мл крови. Лимфоциты получали из цельной крови с помощью монополиразрешающей среды/градиента Ficol-Hypaque, трижды промывали HBSS-буфером и после приготовления таким образом вводили в испытываемую смесь. Кроме поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорида] для сравнения испытывали химиотерапевтические средства цисплатин, эпирубицин, митомицин-С и 5-фторурацил. Для этого эти соединения сначала растворяли по соответствующему предписанию производителя и выдерживали как концентрированный раствор до 1 мл (концентрация активного вещества 1000 мг/мл) при 180 С в жидком азоте. Растворенные вещества применяли только на седьмой день. Для определения цитотоксической активности субстанций клетки карциномы из склянок для выращивания культуры с суспензией, промытой RPMI, в концентрации 20000 клеток в 200 мкл, переводили в микротитровальные планшеты. Затем в присутствии меняющихся концентраций испытуемых субстанций клетки карциномы инкубировали при температуре 37 С и 5%-ной атмосфере CO2 в течение трех дней. Для поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорида] во всех схемах опыта применяли концентрации от 0,12 до 500 мкг/мл (коэффициент разбавления 2). После трехдневной инкубации проводили оценку посредством нерадиоактивных тестов на пролиферацию клеток и на цитотоксичность по EZ4U (Biomedica Nr. BI-5000 1096 анализов). Через три часа инкубации с EZ4U проводили фотометрическую оценку при длине волны 49/630 нм в Dias-фотометре (экстинкция тестируемого образца, деленная на экстинкцию контрольного образца, не содержащего определяемое вещество) в процентах. Жизнеспособность лимфоцитов определяли в суспензии 1,2107/мл при переменных концентрациях тестируемых веществ. Клеточные суспензии инкубировали 24 ч в присутствии тестируемых веществ при 37 С и 5%-ной атмосфере CO2 и затем окрашивали трипановым синим. После окрашивания лимфоциты вводили в счетную камеру и оценивали их жизнеспособность в процентах. Активное вещество поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] обладает при незначительной токсичности и хорошей, с фармакологической точки зрения, переносимости хорошими фармакологическими свойствами и поэтому может использоваться в онкологической терапии как лечебное средство. В частности, это вещество обнаруживает отличную цитостатическую эффективность, что можно показать исследованиями с применением нескольких клеточных линий карцином, как, например, карцинома толстой кишки (НТ-29, НСТ-8, DLD-1) или карцинома поджелудочной железы (ASPC-1, ВХРС-3,CAPAN-1, PANC-1). Кроме того, активное вещество, используемое согласно изобретению, имеет широкое терапевтическое окно, так как если для клеток карциномы цитостатическое действие начинается уже с концентраций от 2 до 16 мкг/мл (табл. 1 и 2), то для здоровых аутогенных клеток, таких как лимфоциты, это действие наблюдается только при концентрациях, начиная с 100 мкг/мл (табл. 4). В табл. 3 для сравнения показана цитостатическая эффективность 5-фторурацила, цисплатина, эпирубицина и митомицина С. После системного введения в кровь крысам (внутривенно или внутрибрюшинно) поли[2-(2 этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорида] в количестве до 15 мг/кг веса тела измеренные через два часа концентрации в сыворотке составили до 100 мг/мл при одновременно хорошей переносимости. Поэтому поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] может использоваться в качестве цитостатика. Активные вещества, используемые согласно изобретению, могут по известному способу быть переработаны в фармацевтические препараты как самостоятельно, так и вместе с неорганическими или органическими, фармакологически индифферентными вспомогательными веществами.-2 011127 Таблица 1 Цитостатическая активность относительно различных клеточных линий карциномы толстой кишки поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] Таблица 2 Цитостатическая активность относительно различных клеточных линий карциномы предстательной железы (жизнеспособность в %) поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] Таблица 3 Цитостатическая активность стандартных химиотерапевтических средств относительно различных клеточных линий карциномы предстательной железы (жизнеспособность в %) поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Лекарственное средство, содержащее в качестве активного вещества полимерное производное гуанидина на основе диамина, который содержит оксиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами,причем производное гуанидина представляет собой продукт поликонденсации гуанидиновой кислотноаддитивной соли с диамином, который содержит полиоксиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами, а также его фармацевтически приемлемые соли. 2. Лекарственное средство по п.1, отличающееся тем, что представителями ряда полиоксиалкиленгуанидиновых солей являются соли со звеньями триэтиленгликольдиамина (относительная молекулярная масса 148), полиоксипропилендиамина (относительная молекулярная масса 230), полиоксиэтилендиамина (относительная молекулярная масса 600). 3. Лекарственное средство по одному из пп.1 или 2, отличающееся тем, что в качестве активного вещества оно содержит поли[2-(2-этоксиэтоксиэтил)гуанидингидрохлорид] по меньшей мере с 3 гуанидиновыми остатками. 4. Лекарственное средство по п.3, отличающееся тем, что средняя молекулярная масса активного вещества лежит в диапазоне от 500 до 3000. 5. Применение полимерного производного гуанидина на основе диамина, которое содержит оксиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами, причем производное гуанидина является продуктом поликонденсации гуанидиновой кислотно-аддитивной соли с диамином, который содержит полиоксиалкиленовые цепи между двумя аминогруппами, а также его фармацевтически приемлемых солей для получения действующего цитостатически лекарственного средства. 6. Применение по п.5, отличающееся тем, что представителями ряда полиоксиалкиленгуанидиновых солей являются соли со звеньями триэтиленгликольдиамина (относительная молекулярная масса 148), полиоксипропилендиамина (относительная молекулярная масса 230), а также полиоксиэтилендиамина (относительная молекулярная масса 600).