Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток

007203 Эта заявка истребует приоритет предварительной патентной заявки с регистрационным номером 60/331447, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток, поданной 16 ноября 2001 г. и полностью включенной сюда в виде ссылки. Предпосылки изобретения 1. Область изобретения. Данное изобретение касается способов лечения заболеваний, требующих удаления или разрушения клеточных элементов, таких как доброкачественные и злокачественные опухоли людей, используя соединения, основанные на пептидах, содержащих аминокислотные последовательности, которые являются соответствующими, аналогичными или гомологичными определенной части аминокислотной последовательности белков нервных нитей. Способ включает, без ограничения, введение веществ внутримышечно, орально, внутривенно, спинально, внутрь опухоли, через носовую полость, локально, через кожу и т.д. отдельно или совместно с носителем. 2. Описание прототипов. Многие способы лечения и процедуры включают удаление или разрушение вредной или нежелательной ткани. Примеры таких способов лечения включают хирургическое удаление злокачественных тканей, разрушение метастатических опухолей путем химиотерапии и уменьшения железистой гиперплазии (например, простаты). Другие примеры включают удаление с лица нежелательных волос, удаление бородавок и удаление нежелательной жировой ткани. Необходим эффективный агент, который будет разрушать и, следовательно, способствовать удалению вредных или нежелательных клеток и тканей или будет подавлять их дальнейший рост и который,обладая минимальной системной токсичностью или не обладая ею вовсе, будет оказывать только местное влияние. Класс таких агентов составляют белки нервных нитей и родственные им молекулы. Это показано в патентной заявке с регистрационным номером 10092934, озаглавленной Способы лечения опухолей и родственных заболеваний, с использованием белков нервных нитей, полностью включнной сюда в виде ссылки. В патентных заявках США 10153334, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток;10198334, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток и 10198070, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток; которые полностью включены сюда в виде ссылок, показано, что некоторые фрагменты белков нервных нитей и связанных белков эффективны в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток. Здесь описаны некоторые другие фрагменты белков нервных нитей, которые также оказались эффективными в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток. Рак является аномалией внутренних регуляторных механизмов клеток, которая приводит к нерегулируемому росту и размножению клетки. Нормальные клетки образуют ткани, и когда эти клетки теряют способность функционировать в виде специфических регулируемых и координированных единиц (утрата способности к дифференциации), то такой дефект ведет к беспорядку в клеточной популяции. В этом случае образуется опухоль. Доброкачественные гипертрофии ткани являются такими аномалиями, когда из организма желательно удалить клетки. Доброкачественные опухоли являются пролиферациями, которые не образуют в организме метастазы, однако, вызывают симптомы болезни. Такие опухоли могут быть летальными, если они локализованы в недоступных областях органов, например в мозге. Существуют доброкачественные опухоли таких органов, как легкое, мозг, кожа, гипофиз, щитовидная железа, кора надпочечника и костный мозг, яичник, матка, яичко, соединительная ткань, мышца, кишки, ухо, нос, горло, миндалины, рот,печень, желчный пузырь, поджелудочная железа, предстательная железа, сердце и другие органы. Хирургическое вмешательство часто является первым шагом при лечении рака. Задачи хирургического вмешательства различны. Иногда оно применяется для удаления по возможности большей части видимой опухоли, или, по крайней мере, уменьшения е размеров (для удаления основной части опухоли таким образом, чтобы отпала необходимость лечения другими способами). В зависимости от типа рака и его местонахождения хирургическое вмешательство также может обеспечивать некоторое симптоматическое облегчение пациенту. Например, если хирург может удалить большую часть растущей опухолимозга и уменьшить вследствие этого давление внутри черепа, то состояния больного улучшится. Однако не все опухоли поддаются хирургическому лечению. Некоторые из них могут быть расположены в тех частях тела, откуда полностью удалить их невозможно. В качестве таких примеров могут служить опухоли ствола мозга (часть мозга, которая регулирует дыхание), или же опухоль, которая растет вокруг главного кровеносного сосуда. В таких случаях хирургическое вмешательство ограничено изза большого риска, связанного с удалением опухоли. В некоторых случаях хирургическое вмешательство с целью уменьшения размера опухоли не применяют, так как в этом нет необходимости. Примером является лимфома Ходжкина, рак лимфатических узлов, который очень хорошо поддатся комбинированному лечению химиотерапией и радиационной-1 007203 терапией. В случае лимфомы Ходжкина хирургическое вмешательство редко применяется для лечения,но почти всегда используется с целью установления диагноза. Химиотерапия - обычный способ лечения рака. По существу, она включает применение медикаментов (обычно их принимают через рот или путем инъекций), которые специфически атакуют быстро делящиеся клетки (типа тех, которые находятся в опухоли) повсюду в организме. Это делает химиотерапию необходимой для лечения опухолей, которые уже образовали метастазы, а также опухолей, которые способны распространяться через кровь и лимфатические системы, но не выражены вне первичной опухоли. Химиотерапия может также использоваться, чтобы усилить ответную реакцию локализованных опухолей к хирургическому вмешательству и лучевой терапии. Так обстоит дело в случае некоторых раковых образований головы и шеи. К сожалению, другие клетки человеческого организма, которые обычно тоже быстро делятся (такие как выстилка желудка и волосы) также подвергаются воздействию химиотерапевтических средств. По этой причине многие химиотерапевтические агенты вызывают нежелательные побочные эффекты, такие как тошнота, рвота, анемия, потеря волос и другие признаки. Эти побочные эффекты являются временными, и существуют лекарства, которые ослабляют многие из них. По мере развития наших познаний,исследователи изобрели новые химиотерапевтические агенты, которые не только более успешно уничтожают раковые клетки, но и оказывают меньше побочного влияния на пациента. Химиотерапевтические средства пациентам дают разными путями. Некоторые из них - пилюли, а некоторые вводят внутривенно или другой инъекцией. При инъекционной химиотерапии пациент посещает кабинет врача или больницу. Другие химиотерапевтические средства требуют непрерывного вливания в кровоток в течение 24 ч в сутки. В таких случаях химиотерапии требуется незначительное хирургическое вмешательство для имплантации маленького насоса, носимого пациентом. После имплантации насос медленно вводит медикамент. Во многих случаях такой постоянный порт помещен в вену пациента, чтобы устранить необходимость повторных уколов. Лучевая терапия - другое традиционно используемое оружие в борьбе против рака. Радиация уничтожает рак путем разрушения ДНК внутри раковых клеток. Радиация осуществляется различными способами. Наиболее популярный из них предусматривает очень точное направление на пациента луча радиации и его фокусировку на опухоли. При выполнении этой процедуры пациент лежит на столе и луч перемещается вокруг него/не. Процедура длится в течение нескольких минут, однако, она может быть проделана ежедневно в течение нескольких недель (в зависимости от типа опухоли) с целью достижения общего количества предписанной дозы. Иногда используется другой радиационный метод, названный брахитерапией, который включает отбор радиоактивных пилюль (зерен) или проволок, и имплантацию их в теле пациента в области опухоли. Имплантанты могут быть временными или постоянными. В случае постоянного имплантанта радиация зерен угасает в течение нескольких дней или недель таким образом, чтобы пациент не был бы радиоактивен. В случае временных имплантантов полную дозу радиации обычно поставляют в течение нескольких дней, и в течение этого времени пациент должен находиться в больнице. В обоих случаях брахитерапии радиация в облучаемой области обычно поставляется очень целенаправленно, чтобы осуществить локальный контроль над раком (в отличие от химиотерапии, когда воздействию препарата подвергается организм в целом). Некоторые специально отобранные пациенты могут подвергаться трансплантации костного мозга. Эта процедура обычно выполняется в случаях, когда пациент болен раком, который является особенно агрессивным, или вследствие того, что у пациента, подвергнутого обычной терапии, снова наблюдается рецидив рака. Трансплантация костного мозга - сложная процедура. Существуют много типов трансплантации, которые отличаются по способности вызывать побочные эффекты и достигать исцеления. Большинство трансплантаций костного мозга выполнено в специальных центрах, и во многих случаях их осуществление рассматривают как научное достижение. Существует множество других видов терапии, хотя большинство из них все ещ исследуется в клинических условиях и пока не разрешено в качестве стандартного способа лечения. Такие примеры включают использование иммунотерапии, моноклональных антител, антиангиогенезисных факторов и генную терапию. Иммунотерапия. Существуют различные методы, которые предназначены помочь иммунной системе пациента бороться с раком и которые весьма отличаются от радиационной терапии или химиотерапии. Часто для достижения цели исследователи вводят пациенту специально разработанную вакцину. Моноклональные антитела. Эти антитела предназначены для того, чтобы связываться с канцерогенными (но не с нормальными) клетками, используя для этого различия в антигенных и/или других характеристиках между злокачественньми и доброкачественными клетками. Антитела могут быть введены пациенту отдельно или в виде конъюгата с различными цитостатическим соединениями, или в радиоактивной форме, таким образом, чтобы антитело было бы нацелено предпочтительно на злокачественные клетки, поставляя при этом последним токсический агент или радиоактивность. Антиангиогенезисные факторы. Поскольку раковые клетки быстро делятся и опухоли растут, возможно скорое прекращение их кровоснабжения. Чтобы компенсировать такой процесс, некоторые опу-2 007203 холи выделяют вещество, которое, как считают, способствует индуцированию роста кровеносных сосудов в их близости, обеспечивая, таким образом, раковые клетки сосудистым аппаратом для подачи питательных веществ. Поэтому были разработаны методы экспериментальной терапии для прекращения роста таких, питающих опухоли, кровеносных сосудов. Генная терапия. Рак - результат ряда мутаций, которые в конечном счете ведут к образованию раковой клетки и его чрезмерно быстрой пролиферации. Раковые образования можно лечить, подводя к раковым клеткам гены, которые будут регулировать или прекращать процесс пролиферации рака, включать запрограммированные механизмы клетки для уничтожения раковой клетки, улучшать иммунное распознавание клетки или вызывать экспрессию пролекарства, которое превращается в токсический метаболит или цитокин, подавляющий рост опухоли. Доброкачественные опухоли и деформации также можно лечить разнообразными методами, включая хирургическое вмешательство, радиотерапию, лекарственную терапию, тепловую или электрическую абляцию, криотерапию и другие. Хотя доброкачественные опухоли не образуют метастазы, они могут стать большими и могут рецидивировать. Хирургическое удаление доброкачественных опухолей связано со всеми трудностями и побочными явлениями, которые вообще характерны для операционного вмешательства и зачастую неоднократно применяется в случае некоторых доброкачественных опухолей, таких как аденомы гипофиза, менингеомы мозга, гиперплазии простаты и других. Существуют и другие условия, касающиеся нежелательных клеточных элементов, когда желательно селективное удаление клеток. Например, сердечная болезнь и инсульты обычно вызываются атеросклерозом, являющимся пролиферативным повреждением фиброжирных и модифицированных гладких элементов мышцы, которое искажает стенку кровеносного сосуда, сужает просвет, уменьшает поток крови, предрасполагает к образованию фокальных сгустков крови и, в конечном счете, ведт к блокаде и инфаркту. Различные методы лечения атеросклероза включают шунтирование трансплантатов; искусственные трансплантаты; ангиопластику с реканализацией, кюретаж, радиацию, лазер или другие способы удаления; медикаментозное лечение с целью подавления атеросклероза путем уменьшения липида; различные виды антикоагулянтной терапии; общие критерии диеты, упражнений и образа жизни. Необходим метод для удаления атеросклеротических бляшек без риска и побочных эффектов, характерных для хирургических процедур. Другие примеры нежелательных клеточных элементов, где желательно селективное удаление клеток, включают рост, индуцируемый вирусами типа бородавок. Ещ одним примером являются гипертрофические воспалительные образования, найденные в воспалнных тканях, а также гипертрофические рубцы или келоиды. Другие примеры можно найти в косметической сфере, в частности при удалении нежелательных волос, например волос на лице, или рубцовом сморщивании нежелательных областей ткани, например кожи лица, соединительных тканей или кожи и соединительной ткани конечностей. Другие примеры нежелательных клеточных элементов, где желательно селективное удаление клеток или подавление клеточной пролиферации, включают стеноз и рестеноз любой артерии, клапана или канала в циркулирующей системе, включая, без ограничения, клапаны (например, аортальный стеноз,который включает сужение аортального отверстия клапана), коронарные артерии (например, коронарный остиальный склероз, который включает сужение устьев коронарных артерий), сонные артерии и почечные артерии. Другие примеры включают подавление или прекращение нежелательного клеточного роста или накопления нежелательных клеток, обуславливающего частичную или полную закупорку медицинских устройств типа эндопротеза сосудов, помещенного или внедренного в пределах кровеносного сосуда с целью лечения стеноза, структур или аневризм в области или в пределах мочевого тракта и в протоках желчи. Для специалистов будут очевидны и другие примеры. Во всех или в большинстве этих примеров подчеркнута необходимость в таком лечении, при котором можно удалять или уничтожать нежелательные клеточные элементы без риска и побочных эффектов, которые характерны для обычных методов терапии, а также удалять нежелательные клеточные элементы с большой точностью. Белки нервных нитей (NTP) - семейство недавно описанных белков мозга. Один член этого семейства - AD7c-NTP - является ассоциированным с мембраной фосфопротеином с молекулярной массой 41 кД, с функциями, связанными с основным отростком нейрона (Де Лa Монте и другие, J. Clin. Invest,100:3093-3104 (1997); Де Лa Монте и другие, Alz. Rep., 2:327-332 (1999); Де Лa Монте C.M. и Уандс Дж.Р., Journal of Alzheimer's Disease, 3:345-353 (2001. Ген, который кодирует AD7c-NTP и предсказанную последовательность белка для AD7c-NTP, был идентифицирован и описан (Де Лa Монте и другие, J.Clin. Invest, 100:3093-3104 (1997. Кроме разновидности 41 kД были идентифицированы другие разновидности белка нервной нити (26 kД, 21 kД, 17 kД, и 15 kД) и связаны с нейроэктодермальными опухолями, астроцитомами и глиобластомами, а также с нарушениями, обусловленными гипоксией,ишемией или мозговым инфарктом (Kcy и другие, Cancer Research, 53:3823-3829 (1993); Де Ла Монте и другие, J. Neuropathol. Exp. Neurol, 55(10):1038-50 (1996), Де Лa Монте и другие, J. Neurol. Sci, 138(12):26-35 (1996); Де Лa Монте и другие, J. Neurol. Sci, 135(2): 118-25 (1996); Де Ла Монте и другие, J. Clin.Invest., 100:3093-3104 (1997); и Де Ла Монте и другие, Alz Rep., 2:327-332 (1999.-3 007203 Разновидности белка нервной нити были описаны и зарегистрированы в патентах США 5948634; 5948888 и 5830670, все под заглавием Экспрессия гена белка нервной нити и обнаружение заболевания Альзгеймера и в патенте США 6071705 под заглавием Метод обнаружения неврологической болезни или дисфункции. Содержание этих патентов специально включено сюда в полном масштабе в виде ссылок. Согласно их описанию NTP - регламентирован и образуется в процессе смерти клетки. Таким образом показано, что мертвые и умирающие нервные клетки перепроизводят NTP и, соответственно, присутствие последнего указывает на смерть нервных клеток и начала болезни Альзгеймера (AD). Другие разновидности белка нервной нити были идентифицированы в виде других продуктов генаEntrez-Protein. ДоступХР 032307 PID gl5928971) или в виде продуктов, схожих с белками нервной нити (например, белок, состоящий из 106 белковых аминокислот, описанный в базе данных NCBI EntrezProtein. ДоступААН 14951 PID gl5928971, и белок, состоящий из 61 белковой аминокислоты, описанный в базе данных NCBI Entrez-Protein. ДоступААН 02534 PID gl2803421). Белок нервной нити связан с AD, a NTP регламентирован гибелью клетки в процессе AD. По сравнению с контролем AD7c-NTP mRNA регламентирована в мозге с AD; уровни белка AD7c-NTP в мозге и в CSF выше в AD, чем в контроле; и иммунореактивность AD7c-NTP найдена в старческих бляшках,нейрофибриллярных клубках (NFT), вырождающихся нейронах, нейропильных нитях и дистрофических невротических отростках при болезни мозга AD и Синдроме Дауна (Озтурк и другие, Рrос. Natl. Acad.Sci. USA, 86:419 423 (1989); Де Ла Монте и другие, J. Clin. Invest., 86(3):1004-13 (1990); Де Лa Монте и другие, J. Neural. Sci., 113(2):152-64 (1992); Де Лa Монте и другие, Ann. Neurol, 32(6):733-42 (1992); Де Лa Монте и другие, J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55(10): 1038-50 (1996), Де Ла Монте и другие, J. NeurolSci., 138(1-2):26-35 (1996); Де Ла Монте и другие, J. Neurol Sci., 135(2):118-25 (1996); Де Ла Монте и другие, J. Clin. Invest., 100:3093-3104 (1997); и Де Ла Монте и другие, Alz. Rep., 2:327-332 (1999. NTP локализован внутри клеток, внутри мелких образований в нейропиле или находится во внеклеточном пространстве больного мозга как при AD, так и при Синдроме Дауна (Де Ла Монте и другие, Ann. Neurol,32(6):733-42 (1992. Высокие уровни белка AD7c-NTP были найдены в CSF и в моче больных AD (Де Ла Монте и Уандс, Front Biosci 7: 989-96 (2002); Де Ла Монте и Уандс, Journal of Alzheimer's Disease 3: 345-353(2000); Мунзар и другие, Alzheimer Reports 3: 155-159 (2000); Де Лa Монте и другие, Alzheimer's Reports 2: 327-332 (1999); и Де Лa Монте и другие, J. Clin. Invest. 100:3093-3104(1997). Было также показано, что сверх-экспрессия NTP связана с процессом гибели клетки при болезни Альзгеймера (Де Лa Монте и Уандс, J. Neuropathol. Exp. Neurol, 60:195-207 (2001); Де Ла Монте и Уандс,Cell. Mol. Life Sci. 58: 844-49 (2001). AD7c-NTP был также идентифицирован в ткани мозга при Синдроме Дауна (Уандс и другие, международная патентная публикацияWO 90/06993; Де Лa Монте и другие, J Neurol Sci., 135: 118-25 (1996); Де Ла Монте и другие, Alz Rep., 2:327-332 (1999. Существуют данные, что сверх-экспрессия NTP может быть также связана с глаукомой нормального напряжения (Голубничая-Лабудова и другие, Curr Eye Res 21: 867-76 (2000.NTP оказался эффективным агентом для уничтожения клеток в культурах клеток глиомы и нейробластомы in vitro, в нормальной ткани мышцы грызуна, подкожной соединительной ткани, дермисе и различных исходных опухолях человека и животных, включая карциному молочной железы, карциному и папиллому кожи, карциному ободочной кишки, глиому мозга и других, в модельных экспериментах с грызунами. См. заявку на патент США 10/092934 под заглавием Методы лечения опухолей и родственных заболеваний с использованием белков нервных клеток. Оказывается, что некоторые пептидные последовательности, а также фрагменты AD7c-NTP и другие разновидности NTP также являются эффективными агентами для уничтожения клеток in vitro в глиоме и клеточных культурах нейробластомы и/или in vivo в нормальной ткани мышцы грызуна, подкожной соединительной ткани, коже и другой ткани. См. патентную заявку США 10/153334 под заглавием Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток;10/198069 под заглавием Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток и 10/198070 под заглавием Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток,каждая из которых полностью включена сюда в виде ссылки. Все описанные здесь публично доступные документы, включая предшествующее описание прототипов, в том числе и все американские патенты, специально полностью включены в виде ссылок в описание данного изобретения. Предшествующее описание данного изобретения ни в коем случае не предназначено для признания того факта, что ни один из описанных там документов, включая рассматриваемую патентную заявку США, не является прототипом данного изобретения. Кроме того, указание здесь любых недостатков,связанных с описанными продуктами, способами и/или аппаратурой, не предназначено для ограничения данного изобретение. Действительно, аспекты данного изобретения могут включать некоторые особен-4 007203 ности описанных изделий, способов и/или аппаратуры, без ущерба от их недостатков. Однако все еще существует потребность в разработке новых, менее токсичных способов лечения нежелательных клеточных образований. Данное изобретение удовлетворяет эту потребность. Резюме изобретения Это изобретение частично основано на открытии, что пептиды, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотных последовательностей других разновидностей белков нервных нитей, отличных от AD7c-NTP, эффективны для лечения и/или уничтожения нежелательных клеточных пролифераций. Эти нежелательные клеточные пролиферации включают, среди прочего, доброкачественные и злокачественные опухоли, железистую (например, простаты) гиперплазию, нежелательную волосистость лица, бородавки и нежелательную жировую ткань. Данное изобретение посвящено методам лечения нежелательных клеточных пролифераций (доброкачественные и злокачественные опухоли, железистая (например, простаты) гиперплазия, нежелательная волосистость лица, бородавки и нежелательная жировая ткань) и включает введение млекопитающему,которому требуется такая терапия, терапевтически эффективного количества пептида, содержащего аминокислотную последовательность (или более чем одну последовательность), соответствующую части аминокислотной последовательности разновидности белка нервной нити (NTP), отличной от AD7c-NTP. Такой пептид ("пептид NTP") может быть введен в организм отдельно или в виде конъюгата с носителем или антителом. Пептид NTP может быть введен в организм внутримышечно, перорально, внутривенно, интраперитонеально, интрацеребрально (интрапаренхимально), интрацереброваскулярно, внутрь опухоли, через пораженный участок, интрадермально, интратекально, через нос, внутриглазно, внутриартериально, локально, трансдермально, через аэрозоль, вливанием, инъекцией болюса, посредством имплантированного устройства, посредством лекарственной формы с замедленным высвобождением медикамента, и т.д.; препараты могут вводиться отдельно или в виде конъюгата с носителем. Альтернативно,экспрессия пептида NTP возможна in vivo путем управления геном, который обусловливает экспрессию пептида, путем введения в организм вакцины, которая индуцирует образование такого пептида, или путем введения в организм клеток, бактерий или вирусов, которые обусловливают экспрессию пептида invivo, или путем генетической модификации или как-либо иначе. Кроме того, пептид NTP может быть использован совместно с другими методами лечения, для лечения доброкачественных и злокачественных опухолей и других видов нежелательного или вредного роста клеток. Предшествующее общее описание и последующее детальное описание являются иллюстративными и разъяснительными и предназначены для обеспечения более детального объяснения данного изобретения. Другие цели, преимущества и новые особенности будут легко доступны специалистам из последующего детального описания этого изобретения. Краткое описание фигур Фиг. 1 показывает полную аминокислотную последовательность белка нервной нити, состоящего из 122 аминокислот (последовательность 40, из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888; NCBIEntrez-Protein ДоступААС 25447 РID g10048540) [SEQ ID NO. 1]. Фиг. 2 показывает полную аминокислотную последовательность белка нервной нити, состоящего из 112 аминокислот (NCBI Entrez-Protein ДоступХР 032307 PID g15928971) [SEQ ID NO. 2]. Фиг. 3 показывает полную аминокислотную последовательность белка, аналогичного белку нервной нити и состоящего из 106 аминокислот (NCBI Entrez-Protein ДоступААН 14951 PID g15928971)[SEQ ID NO. 3]. Фиг. 4 показывает полную аминокислотную последовательность белка нервной нити, состоящего из 98 аминокислот (последовательность 30, из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888; NCBIEntrez-Protein доступААЕ 25445, PID g10048538) [SEQ ID NO. 4]. Фиг. 5 показывает полную аминокислотную последовательность белка нервной нити, состоящего из 75 аминокислот (последовательность 48, из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888; NCBIEntrez-Protein доступААЕ 25448, PID g10048541) [SEQ ID NO. 5]. Фиг. 6 показывает полную аминокислотную последовательность белка нервной нити, состоящего из 68 аминокислот (последовательность 36, из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888; NCBIEntrez-Protein доступААЕ 25446, PID g10048539) [SEQ ID NO. 6]. Фиг. 7 показывает полную аминокислотную последовательность белка, аналогичного белку нервной нити и состоящего из 61 аминокислот (NCBI Entrez-Protein доступ ААН 02534, PID g12803421)[SEQ ID NO. 7]. Детальное описание предпочтительных осуществлений изобретения Перед тем как описать указанные белки, нуклеотидные последовательности, пептиды, и т.д., а также методы, необходимо принять во внимание, что это изобретение не ограничено конкретной методологией, протоколами, линиями клеток, векторами и описанными реактивами, поскольку они могут измениться. Следует также иметь в виду, что используемая здесь терминология применяется только для описания конкретных осуществлений и не предназначена для ограничения возможностей данного изобретения, которое будет ограничено только в соответствие с прилагаемой формулой изобретения.-5 007203 Если не указано иначе, то все используемые здесь термины и фразы даны в соответствии со сформулированным ниже определениями. Если контекст ясно не диктует иначе, то повсюду в этом описании сингулярные формы включают множественную ссылку. Таким образом, например, ссылка на клетку-хозяина включает множество таких клеток-хозяев, и ссылка на антитело является ссылкой на одно или более антител и их эквиваленты, известные специалистам, и т.д. Выражение AD7c-NTP относится к белку 41 kД, гену и последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующих последовательности, описанные в работе Де Лa Монте и других, J. Clin. Invest,100:3093-104 (1997), Последовательности 120 и 121 из патентов США 5948634, 5948888 и 5830670. Термин NTP относится к белкам нервной нити и родственным молекулам (включая панкреатический белок нити), отличающимся от AD7c-NTP, как это описано в патентах США 5948634, 5948888,5830670 и 6071705, а также в Де Ла Монте и другие, J. Neuropathol. Exp. Neurol, 55 (10): 1038-50 (1996),Де Лa Монте и другие, J. Neurol. Sci., 138(1-2): 26-35 (1996); Де Ла Монте и другие, J. Neurol. Sci.,135(2):118-25 (1996), Де Ла Монте и другие, J. Clin. Invest, 100:3093-3104 (1997), и Де Ла Монте и другие,Alz. Rep., 2:327-332 (1999). Термин "NTP" без ограничения включает:(a) 42, 26, 21, 17, 14, и 8 kД разновидности белка нервной нити, как описано в патентах США 5948634, 5948888, 5830670 и 6071705 и в работах Де Ла Монте и другие, J. Neuropathol. Exp.Neurol, 55(10):1038-50 (1996), Де Ла Монте и другие, J. Neurol. Sci, 138(l-2):26-35 (1996); Де Ла Монте и другие, J. Neurol. Sci, 135(2): 118-25 (1996), Де Ла Монте и другие, J. Clin. Invest, 100:3093-3104 (1997) и Де Ла Монте и другие, Alz Rep., 2:327-332 (1999);(b) белки, определенно узнаваемые моноклональным антителом 2, на депозите Американской Коллекции Типов Культур, Manassas, Va., под номером доступа HB-12546 или моноклональным антителом 5 на депозите Американской Коллекции Типов Культур, Manassas, Va., под номером доступа HB12545;(d) белок нервной нити, состоящий из 122 аминокислот и описанный последовательностью 40 из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888, каталогизированный в NCBI Entrez-Protein доступ ААЕ 25447, PID g10048540, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 1(e) белок нервной нити, состоящий из 112 аминокислот, каталогизированный в NCBI Entrez-Protein доступ ХР 032307, РID g14725132, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 2(f) белок, аналогичный белку нервной нити, состоящий из 106 аминокислот, каталогизированный вNCBI Entrez-Protein доступ ААН 14951 РID g15928971, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 3 (NTP[106]);(g) белок нервной нити, состоящий из 98 аминокислот, описанный последовательностью 30, из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888 и каталогизированный в NCBI Entrez-Protein доступААЕ 25445, PID g10048538, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 4(h) белок нервной нити, состоящий из 75 аминокислот и описанный последовательностью 48 из патентов США 5830670, 5948634 и 5948888 и каталогизированный в NCBI Entrez-Protein доступ ААЕ 25448, РID g10048541, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 5(i) белок нервной нити, состоящий из 68 аминокислот и описанный последовательностью 36 из патентов США 5830670, 5948634, и 5948888 и каталогизированный в NCBI Entrez-Protein доступ ААЕ 25446, РID g10048539, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 6(j) белок, аналогичный белку нервной нити, состоящий из 61 аминокислоты, каталогизированный вNCBI Entrez-Protein доступ ААН 02534, РID g12803421, аминокислотная последовательность которого показана на фиг. 7 (NTP[61]);(l) белок нервной нити (nРТР), описанный в патенте США 6071705; и(m) белки, определенно узнаваемые антителами, образуемыми гибридомой из группы, состоящей изHB 9934, HB 9935 и HB 9936, которые депонированы Американской Коллекцией Типов Культур. Если в контексте не указано иначе, то выражение пептид NTP относится к гомологам, фрагментам, производным, вариантам, конъюгированным белкам, и пептидным имитаторам белков NTP. Выражение пептид NTP относится к пептидам, включающим аминокислотные последовательности, соответствующие по крайней мере части аминокислотной последовательности NTP, разновидностейNTP или фрагментов разновидностей NTP и включает гомологи, фрагменты, производные, варианты,конъюгированные белки и пептидные имитаторы таких пептидов, если из контекста не следует другое. Термин фрагмент относится к белку или полипептиду, который состоит из непрерывной подпос-6 007203 ледовательности аминокислотной последовательности NTP белка или NTP пептида и включает распространенные в природе фрагменты, такие как сплетенные варианты и фрагменты, образовавшиеся в результате деятельности, встречающейся в природе in vivo протеазы. Такой фрагмент может быть отрезан с аминного конца, с карбоксильного конца и/или от средней части (как, например, при природном сращивании). Такие фрагменты можно получить из метионина в качестве терминальной аминогруппы, или же без него. Термин фрагмент включает фрагменты, которые идентичны или отличаются от того же самого белка NTP или пептида NTP с обычной или необычной соприкасающейся аминокислотной последовательностью и соединены друг с другом непосредственно или через линкер. Термин вариант относится к белку или полипептиду, который, в отличие от аминокислотной последовательности белка NTP или пептида NTP, содержит один или более аминокислотных заместителей,делеций и/или инсерций и включает встречающиеся в природе аллельные варианты или альтернативные сплетенные варианты белка NTP или пептида NTP. Термин вариант включает замещение одной или более аминокислот в последовательности пептида подобной или гомологичной аминокислотой (аминокислотами) или неподобной аминокислотой (аминокислотами). Существует много параметров, по которым аминокислоты могут оцениваться как подобные или гомологичные. (Гуннар фон Хейджен, Анализ последовательности в молекулярной биологии, стр. 123-39 (Academic Press, Нью-Йорк, NY 1987). Предпочтительные варианты включают аланиновые замещения в одной или более аминокислотных позиций. Другие предпочтительные замены включают консервативные замещения, в результате которых незначительно меняется или не меняется общий результирующий заряд, полярность или гидрофобность белка. Консервативные замещения приведены ниже в табл. 2. Таблица 2 В табл. 3 представлена другая схема аминокислотного замещения. Другие варианты могут состоять из менее консервативных аминокислотных замещений типа селекции остатков, которые существенно отличаются по их эффекту сохранять: (а) структуру основной цепи полипептида в области замещения, например, в виде плоской или спиральной конформации, (b) заряд или гидрофобность молекулы на целевом участке или (с) большую часть боковой цепи. Предполагают,что замены, в основном оказывающие наиболее существенное влияние на функцию - это такие замещения, в которых: (а) глицин и/или пролин замещается другой аминокислотой, или удаляется, или включается; (b) гидрофильный остаток, например, серил или треонил, заменяется (или замещается) гидрофобным остатком, например, лейцилом, изолейцилом, фенилаланилом, валилом или аланилом; (с) остаток цистеина заменяется (или замещается) любым другим остатком; (d) остаток, имеющий электроположительную боковую цепь, например, лизил, аргинил или гистидил заменяется (или замещается) остатком,имеющим электроотрицательный заряд, например, глутамилом или аспартилом; или (е) остаток, имеющий большую боковую цепь, например, фенилаланин, заменяется (или замещается) не обладающим такой боковой цепью остатком, например, глицином. Другие варианты включают те, которые разработаны для образования нового участка (новых участков) гликозилирования и/или фосфорилирования, или те,которые разработаны для удаления существующего участка (существующих участков) гликозилирования и/или фосфорилирования. Варианты включают по крайней мере одно аминокислотное замещение на участке гликозилирования, на участке протеолитического расщепления и/или в остатке цистеина. Варианты также включают белки NTP и пептиды NTP, которые имеют дополнительные аминокислотные остатки в начале или в конце белка NTP или аминокислотной последовательности пептида NTP на пептидах линкера. Например, остаток цистеина можно добавить как к аминному концу, так и к карбоксильному концу пептида NTP, чтобы осуществить циклизацию этого пептида путем образования дисульфидной связи. Термин вариант также охватывает полипептиды, которые имеют аминокислотную последовательность пептида NTP по крайней мере с 1-25 или более дополнительными аминокислотами, фланкирующими с 3' или 5' концами пептида NTP. Термин производная относится к химически модифицированному белку или полипептиду, который был модифицирован химически или в результате естественных процессов, таких как процессинг и другие пост-трансляционные модификации, а также и химическими методами модификации, как, например, присоединением одной или более молекул полиэтиленгликоля, сахаров, фосфатов, и/или других таких молекул, где молекула или молекулы присоединены к белкам NTP или пептидам NTP дикого типа не естественным образом. Производные включают соли. Такие химические модификации описаны в традиционной литературе, в более детальных монографиях, а также в обширной исследовательской литературе и хорошо известны специалистам. Следует учитывать, что тот же самый тип модификации в той или иной степени может присутствовать на нескольких участках данного белка или полипептида. Данный белок или полипептид может также содержать много типов модификаций. В белке или полипептиде модификации могут произойти везде, включая основную цепь пептида, боковые аминокислотные цепи, а также аминные и карбоксильные концы. Модификации включают, например, ацетилирование, ацилиро-8 007203 вание, ADP-рибозилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение группы гема, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липида или липидного производного, ковалентное присоединение фосфатидилинозитола, сшивание, циклизацию, образование дисульфидной связи, деметилирование, образование ковалентных сшивок, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, гаммакарбоксилирование, гликозилирование, образование GPI анкера, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристилирование, окисление, протеолитическое превращение, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, гликозилирование, присоединение липида, сульфирование, гаммакарбоксилирование остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование и ADP-рибозилирование, селенирование, сульфирование, катализируемое транспортной РНК присоединение аминокислот к белкам,например аргинилирование и непредсказуемое присоединение аминокислот. См., например, Белки,структура и молекулярные свойства, 2-е изд., ред. Т.Е. Крейтон, В.Г. Фримэн и компания, Нью-Йорк(1993), и Уолд, Ф., Модификации пост-трансплантационных Белков: достижения и перспективы, стр. 1-12 в сб. Пост-трансплантационные ковалентные модификации белков ред. Б.К. Джонсон, AcademicPress, Нью-Йорк (1983); Сейфтер и другие., Meth. Enzymol. 182:626-646 (1990), и Раттан и другие, Синтез белка: пост-трансплантационные модификации и старение, Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48-62 (1992). Термин производные включает химические модификации, в результате которых образуется разветвленный, или циклический неразветвленный или разветвленный белок или полипептид. Циклические,разветвленные или разветвленно-циклические белки или полипептиды могут образоваться в результате естественных пост-трансляционных процессов и могут быть получены также исключительно синтетическими методами. Термин гомолог относится к белку, который является по крайней мере на 60% идентичным по его аминокислотной последовательности белку NTP или пептиду NTP, в зависимости от обстоятельств, обусловленных стандартными методами, которые обычно используются для установления идентичности расположения аминокислот в двух полипептидах. Степень подобия или идентичности между двумя белками может быть легко рассчитана известными методами, включая, без ограничения, описанные в следующих трудах: Вычислительная молекулярная биология, ред. Леcк A.M., Oxford University Press, НьюЙорк, 1988; Биовычисление: информатика и проекты генома, ред. Смит Д.У., Academic Press, Нью-Йорк,1993; Компьютерный анализ данных последовательности, часть I, ред. Гриффин A.M. и Гриффин Г.Дж.Stockton Press, Нью-Йорк, 1991; и Карилло Г. и Липман Д., SIAM, J. Applied Math., 48:1073 (1988). Разработаны предпочтительные методы для определения идентичности, с целью выявления максимального сходства между исследуемыми последовательностями. Эти методы определения идентичности и подобия запрограммированы в общественно доступных компьютерных программах. Предпочтительные компьютерные программные методы, пригодные для определения идентичности и подобия между двумя последовательностями, включают, без ограничения, пакет программы GCG (Деверо Дж. и другие, Nuclein Acids Research, 12 (1): 387 (1984, BLASTP, BLASTN, и FASTA, Алтшуль С.Ф. и другие, J. Molec. Biol. 215: 403-410 (1990). Программа BLAST X публично доступна из NCBI и других источников (руководство по BLAST, Алтшуль С. и другие, NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894; Алтшуль С. и другие, J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). Посредством примера, используя компьютерный алгоритм типа GAP (Компьютерная группа по генетике, Висконсинский университет, Мэдисон, Висконсин), два белка или полипептида, для которых должен быть определн процент идентичности последовательности, были выровнены для оптимального соответствия их соответствующих аминокислот (для выявления согласованного промежутка, как это определяется алгоритмом). Пенальти промежутка интервала (который рассчитывают как 3 умноженное на среднюю диагональ; средняя диагональ является средним значением диагонали используемой матрицы сравнения; диагональ - это показатель или число, заданное для каждой истинной аминокислоты специфической матрицей сравнения) и пенальти расширения промежутка (который обычно является 1/10 частью пенальти промежутка интервала), так же как и матрица сравнения типа РАМ 250 или BLOSUM 62, используются вместе с алгоритмом. С алгоритмом может использоваться также и стандартная матрица сравнения (для матрицы сравнения РАМ 250 см. Дейхоф и др., в сб.: Атлас последовательности и структуры белка, т. 5,supp.3 [1978]; для матрицы сравнения BLOSUM 62 см. Хеникофф и другие., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,89:10915-10919 [1992]). В этом случае процент идентичности рассчитывают по алгоритму. По сравнению с белком NTP или пептидом NTP гомологи в зависимости от обстоятельств обычно будут иметь одно или более аминокислотных замещений, удалений и/или включений. Термин "слившийся белок" относится к белку, где один или более пептидов NTP рекомбинантно соединены или химически конъюгированы (ковалентно и нековалентно) с белком типа (но без ограничения) антитела, или фрагмента антитела типа Fab фрагмента, или короткой цепи Fv. Термин "слившийся белок" относится также к мультимерам (т.е. димерам, тримерам, тетрамерам и высшим мультимерам) пептидов NTP. Такие мультимеры включают гомомерные мультимеры, содержащие один пептид NTP,гетеромерные мультимеры, содержащие больше чем один пептид NTP, и гетеромерные мультимеры,-9 007203 содержащие по крайней мере один пептид NTP и по крайней мере один другой белок. Такие мультимеры могут образоваться в результате формирования гидрофобных, гидрофильных, ионных и/или ковалентных ассоциаций, звеньев или связей, они также могут образовываться межмолекулярными связями, с использованием молекулы линкера, или могут быть связаны косвенно, например, через формирование липосомы. Термин имитатор пептида или имитатор относится к биологически активным соединениям, которые подражают биологической деятельности пептида или белка, но по химический природе они больше не являются пептидами, то есть они больше не содержат никакие пептидные связи (т.е. амидные связи между аминокислотами). Здесь термин имитатор пептида используется в более широком смысле и включает молекулы, которые по своей химической природе больше не являются типичными пептидами,такие как псевдопептиды, полупептиды и пептоиды. Примеры имитаторов пептидов в таком более широком смысле (где часть пептида замещена структурой, не содержащей пептидные связи) описаны ниже. Молекулы, полностью или частично лишнные химической природы пептида, имитаторы пептида согласно этому изобретению обеспечивают пространственную расстановку реагирующих химических компонентов, которая очень походит на пространственную расстановку активных групп в пептиде NTP, которые являются основой для имитатора пептида. В результате этой геометрии с подобным активным участком имитатор пептида проявляет относительно биологических систем такие эффекты, которые являются подобными биологической деятельности пептида NTP. Имитаторы пептида, описанные в данном изобретении, существенно подобны как по своей пространственной форме, так и по биологической активности описанным здесь пептидам NTP. Примеры методов структурной модификации известного в науке пептида с целью создания имитатора пептида включают инверсию хиральных центров основной цепи, ведущих к структурам D-аминокислотных остатков, которые могут, в особенности на N-конце, привести к увеличению стабильности относительно протеолитической деградации, не оказывая при этом отрицательного влияния на активность. Пример этого дается в статье Т-связывание тритилированного D-ала 1 - пептида, Смита К.С, и др., DrugDevelopment Res., 15, стр. 371-379 (1988). Вторым методом является изменение циклической структуры для увеличения стабильности, например, образование межмолекулярной N-C связи в имидах и лактамах(Эде и др. в сб. Пептиды: химия и биология, ред. Смит и Ривиер. Escom, Лейден (1991), стр 268-270). Пример этого дается в конформационно-ограниченных соединениях, подобных тимопентину, таких, которые описаны в патенте США 4457489 (1985), выданном на имя Гольдшейна Дж. и др. и включнном сюда в виде ссылки. Третий метод заключается в замещении пептидных связей псевдопептидными связями в пептиде NTP, что ведет к повышению протеолитической стабильности. Было описано множество псевдопептидных связей, которые вообще не влияют на структуру пептида и его биологическую активность. Одним из таких примеров является замещение ретроинверсо-псевдопептидных связей (Биологически активные ретроинверсо-аналоги тимопентина, Систо А. и др. в сб. Пептиды, химия, структура и биология, ред. Ривиер Дж.Е. и Маршалл Г.Р. Escom, Лейден (1990), стр. 722-773), и Дальпоззо и др.(1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:561-566, которые включены сюда в виде ссылок). Согласно этой модификации, аминокислотные последовательности пептидов могут быть идентичны последовательности описанного выше пептида NTP, за исключением того, что один или более пептидных связей замещены ретроинверсо-псевдопептидной связью. Предпочтительно большинство N-терминальных пептидных связей замещены, так как в результате такого замещения увеличивается устойчивость к протеолизу, который катализируется экзопептидазами, влияющими на N-терминал. Дальнейшие модификации также могут быть получены путем замещения химических групп аминокислот другими химическими группами аналогичной структуры. Другая подходящая псевдопептидная связь, которая увеличивает стабильность к ферментному расщеплению, не влияя на биологическую активность или незначительно уменьшая ее, это - восстановленная изостерическая псевдопептидная связь (Коудер и др. (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:181-184,полностью включенный здесь в виде ссылки). Таким образом, аминокислотные последовательности этих пептидов могут быть идентичны последовательности пептида NTP, за исключением того, что одна или более пептидных связей замещены изостерической псевдопептидной связью. Предпочтительно большинство N-концевых пептидных связей замещено, так как в результате такого замещения увеличивается устойчивость к протеолизу, который катализируется экзопептидазами, влияющими на N-терминал. Синтез пептидов с одной или более восстановленной изостерической псевдопептидной связью известен в науке (Коудер и др. (1993), процитированный выше). Другие примеры включают использование кетометиленовой или метилсульфидной связей для замещения пептидных связей. Пептоидные производные пептидов NTP представляют другой класс имитаторов пептидов, которые сохраняют важные структурные детерминанты для биологической активности, хотя и не содержат пептидных связей, что придает им устойчивость к протеолизу (Саймон и др., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 89:9367-9371, полностью включенный здесь в виде ссылки). Пептоиды - это олигомеры Nзамещенных глицинов. Описано множество N-алкильных групп, каждая из которых соответствует боковой цепи природной аминокислоты (Саймон и др. (1992), процитировано выше). Некоторые или все ами- 10007203 нокислоты пептидов NTP могут быть замещены N-замещенным глицином, соответствующим замещенной аминокислоте. Термин имитатор пептида или имитатор включает также реверсные-D пептиды и энантиомеры,как это определено ниже. Термин реверсный-D пептид относится к биологически активному белку или пептиду, состоящему из D-аминокислот, расположенных в обратном порядке по сравнению с последовательностью Lаминокислотного пептида NTP. Таким образом, карбокси-терминальный остаток L-аминокислоты пептида NTP для D-аминокислотного пептида становится амино-терминалом и т.д. Например, пептид NTP,ETESH, становится HdSdEdTdEd, где Ed, Hd, Sd и Td являются D-аминокислотами, соответствующими Lаминокислотам, E, H, S и T соответственно. Термин энантиомер относится к биологически активному белку или пептиду, в котором один или больше L-аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности пептида NTP заменены соответствующим(и) D-аминокислотным(и) остатком (остатками). Используемый здесь термин композиция определенно относится к любой композиции, содержащей указанный пептид или аминокислотную последовательность. Композиция может состоять из сухой смеси, водного раствора, или стерильной смеси. Композиции, включающие пептиды NTP могут использоваться в качестве зондов для гибридизации. Зонды могут храниться в высушенной замораживанием форме и могут быть связаны со стабилизирующим агентом типа углевода. При гибридизации зонды можно использовать в виде водного раствора, содержащего соли, например NaCl, детергенты, например додецилсульфат натрия (SDS), и другие компоненты, например раствор Денхардта, сухое молоко, ДНК спермы лосося и т.д. Аминокислоты и аминокислотные остатки, описанные здесь, могут быть перечислены согласно принятому коду одной или тремя буквами, приведенными в таблице ниже. Если не определено иначе, эти аминокислоты или остатки имеют естественно распространенную L стереоизомерную форму. Таблица 1 Как определено в этом описании выше, объектом данного изобретения является композиция, включающая пептиды NTP. Предпочтительный пептид NTP получен из аминокислотной последовательности, состоящей из последовательности 122 аминокислот NTP, показанной на фиг. 1 (NTP [122]), или состоящей из последовательности 112 аминокислот NTP, показанной на фиг. 2 (NTP [112]). Однако использование других пептидов NTP, основанных на частях или фрагментах других молекул того же самого семейства, как NTP[122] или NTP [112] типа других белков нервных нитей или типа любого из показанных на фиг. 3-7 и типа белков панкреатических нитей, также затронуто в данном изобретении. Кроме того, изобретение включает другие белки, которые содержат пептид NTP целиком или только его часть, посредством чего- 11007203 белки предпочтительно обладают той же самой, аналогичной или более высокой биологической активностью, что и пептид NTP. В широком разнообразии человеческих и нечеловеческих белков (родственные белки) тоже найдены пептидные последовательности и фрагменты AD7c-NTP и других видов NTP, а также подобные варианты и гомологи. В частности, ген AD7c-NTP содержит последовательности Alu-типа, которые являются весьма подобными последовательностям, найденным в других генах человека и других геномах приматов. Поэтому разумно ожидать, что некоторые, если не все, из пептидов NTP, также окажутся эффективными агентами для уничтожения клеток, так как они содержат последовательности пептида, которые являются гомологами или подобными пептидным последовательностям AD7c-NTP и других видов NTP. Следовательно, квалифицированный специалист может синтезировать специфические белки, основываясь на аминокислотной последовательности для любого пептида NTP, способного быть эффективным агентом для уничтожения клеток и соответствующим образом проверить их эффективность. Из пептида NTP, являющегося эффективным агентом для уничтожения клеток, можно получить другие пептидные последовательности, обладающие аналогичной физиологической активностью. Специалист в данной области без излишнего экспериментирования сможет синтезировать фрагменты эффективного пептида NTP, охватывающие полную аминокислотную последовательность этого белка для идентификации других эффективных пептидных последовательностей. Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности для NTP [122], без ограничения, включают следующее:- 12007203 Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности для NTP [112], без ограничения, включают следующее: Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности, состоящей из 106 аминокислот NTP, описанной на фиг. 3 (NTP[106]), без ограничения, включают следующее: Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности, состоящей из 98 аминокислот NTP, описанной в фиг. 4 (NTP[98]), без ограничения, включают следующее: Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности, состоящей из 75 аминокислот NTP, описанной на фиг. 5 (NTP[75]), без ограничения, включают следующее:- 15007203 Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности, состоящей из 68 аминокислот NTP, описанной в фиг. 6 (NTP[68]), без ограничения, включают следующее: Пептиды NTP этого изобретения, содержащие аминокислотные последовательности, соответствующие части аминокислотной последовательности, состоящей из 61 аминокислоты NTP, описанной в фиг. 7 (NTP[61]), без ограничения, включают следующее: Специалисту будет очевидно, что могут быть отобраны также и другие меньшие фрагменты вышеупомянутых пептидов NTP, которые будут обладать той же самой или подобной биологической активностью. Специалистом могут быть отобраны и другие фрагменты NTP, обладающие той же самой или подобной биологической активностью. Описанные в данном изобретении пептиды NTP охватывают эти другие фрагменты. Вообще, описанные в данном изобретении пептиды содержат по крайней мере 6 аминокислот, предпочтительно по крайней мере 5 аминокислот и более предпочтительно по крайней мере 4 аминокислоты. Изобретение также охватывает пептиды, включающие два или больше пептида NTP, которые со- 16007203 единены друг с другом даже в том случае, если последовательности двух пептидов NTP не являются смежными в последовательности (или последовательностях) разновидностей NTP, из которых пептидыNTP были получены. Что касается того, что пептид NTP имеет желательную биологическую активность,из этого следует, что два таких пептида NTP также обладали бы желательной биологической активностью, даже если эти сегменты не были бы смежными в пределах аминокислотной последовательности(или последовательностях) этих видов NTP, из которых пептиды NTP были получены. Пептиды NTP, их фрагменты, варианты, производные, гомологи, слившиеся белки и имитаторы,которые охватывает данное изобретение, могут быть получены, используя известные специалистам методы, такие как рекомбинантная технология ДНК, синтез белка и выделение встречающихся в природе пептидов NTP, белков NTP, белков AD7c-NTP и их фрагментов, вариантов, производных и гомологов. Пептиды NTP и фрагменты, варианты, производные, гомологи, слившиеся белки и их имитаторы могут быть получены из других пептидов NTP, белков NTP, белков AD7c-NTP и их фрагментов, вариантов, производных и гомологов, используя методы, известные специалистам. Такие методы включают (без ограничения) использование протеаз, для расщепления пептида NTP, белка NTP или белка AD7c-NTP, с образованием желаемого пептида NTP. Пептид NTP, или белок NTP также могут быть получены, используя известные рекомбинантные методы технологии ДНК, типа сформулированных у Самбрука и др, (Молекулярное Клонирование: Лабораторное Руководство, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Нью-Йорк [1989]),и/или у Аусубеля и др., ред., Текущие протоколы по молекулярной биологии, Green Publishers Inc. иWiley and Sons, Нью-Йорк [1994]. Ген или кДНК, кодирующие пептид NTP или белок NTP, могут быть получены, например, путем скрининга геномной или кДНК библиотеки или путем PCR амплификации. Зонды и праймеры, необходимые для скрининга библиотеки, могут быть произведены на основе информации о последовательности для других известных генов или фрагментов гена от того же самого или связанного семейства генов типа, например, сохраненных мотивов, обнаруженных в других пептидах NTP или белках NTP. Кроме того,если ген, кодирующий пептид NTP или белок NTP, был идентифицирован от одной разновидности, то весь ген или часть его могут использоваться в качестве зонда, чтобы идентифицировать соответственные гены у других разновидностей. Зонды и праймеры могут быть использованы для скрининга библиотекcDNA из различных источников ткани, намереваясь осуществить экспрессию гена пептида NTP или белка NTP. Как правило, необходимо использовать особенно строгие условия для скрининга, чтобы довести до минимума число полученных при этом ложных положительных данных. Другой способ получить ген, кодирующий пептид NTP или белок NTP, состоит в том, чтобы использовать химический синтез, применяя известные специалисту методы, типа описанных Энгельсом и соавторами Angew. Chem. Intl. Ed., 28:716-734 [1989]. Эти способы включают, среди прочего, фосфотриэфирный, фосфорамидитный и H-фосфонатный методы синтеза нуклеиновых кислот. Предпочтительным методом для такого химического синтеза является синтез на полимерной основе с использованием стандартных методов химии фосфорамидитов. Обычно ДНК, кодирующая пептид NTP или белок NTP, будет состоять из нескольких сотен нуклеотидов в длине. Используя эти методы, нуклеиновые кислоты, более крупные, чем приблизительно из 100 нуклеотидов, могут синтезироваться в виде нескольких фрагментов. После этого фрагменты могут быть лигированы вместе, чтобы формировать полную длину пептидаNTP или белка NTP. Обычно фрагмент ДНК, кодирующий терминальную аминогруппу белка, будет иметь ATG, который кодирует остаток метионина. Этот метионин может или не может присутствовать в развитой форме белка NTP или пептида NTP, в зависимости от того, предназначен ли синтезированный в клетке-хозяине белок для секреции из этой клетки. Путем использования стандартных методов лигации, ген, кДНК, или их фрагмент, кодирующий белок NTP или пептид NTP, может быть включен в соответствующую экспрессию или вектор амплификации. Обычно вектор выбирается, чтобы быть функциональным в конкретно используемой клетке хозяина(т.е. вектор совместим с механизмом клетки хозяина, таким образом, что может произойти амплификация гена и/или экспрессия гена. Амплификацию/экспрессию гена, кДНК, или их фрагмента, кодирующего белок NTP или пептид NTP, можно осуществить в клетках прокариотов, дрожжей, насекомых (системы бакуловируса) и/или эукариотов. Выбор клетки-хозяина будет зависеть частично от того, должен ли белок NTP или пептид NTP быть гликозилирован и/или фосфорилирован. Если это так, то в качестве клетки-хозяина предпочтительны клетки дрожжей, насекомых или млекопитающих. Как правило, векторы, используемые в любой из клеток хозяина, будут содержать по крайней мере 5' фланкирующую последовательность (называемую также промотором), а также другие регулирующие элементы, такие, как усиливающий агент (усиливающие агенты), начало репликационного элемента,транскрипционный элемент завершения, полную последовательность интрона, содержащую сайты соединения донора и акцептора, последовательность сигнального пептида, элемент сайта связывания рибосомы, полиаденилирующую последовательность, область полилинкера для включения нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, который будет выражен, и выбираемый элемент маркера. Каждый из этих элементов обсужден ниже. Произвольно вектор может содержать последовательность метки, т.е. олигонуклеотидную молекулу, расположенную в 5' или 3' концах белка NTP или пептида NTP, коди- 17007203 рующего последовательность; олигонуклеотидная молекула кодирует polyHis (типа hexaHis), или другую метку типа FLAG, HA (гемагглютинин вируса Гриппа), или mуc, для которого существуют коммерчески доступные антитела. Эта метка типично соединяется к полипептиду путем экспрессии полипептида, и может служить средством для аффинной очистки белка NTP или пептида NTP от клетки-хозяина. Аффинная очистка может быть достигнута, например, колоночной хроматографией, путем использования в качестве аффинной матрицы антител против метки. Произвольно метка может впоследствии быть удалена от очищенного белка NTP или пептида NTP различными путями, типа использования определенных пептидаз. Основную цепь и Fc регион иммуноглобулина человека специалист может соединить у N-конца или у С-конца белка NTP или пептида NTP. Полученный слившийся Fc-белок может быть очищен при помощи аффинной колонки Белка А. Как известно, Fc проявляет большой фармакокинетический период полураспада in vivo, и оказалось, что фармакокинетический период полураспада in vivo у слившихся с Fc белков значительно больше, чем у их неслившихся копий. Кроме того, слияние в регион Fc позволяет димеризировать/мультимеризировать молекулу, что может быть полезна с точки зрения биологической активности некоторых молекул. 5' Фланкирующая последовательность может быть гомологичной (т.е. от тех же самых видов и/или штамма, что и клетка-хозяин), гетерологичной (т.е. от другой (отличной от клетки-хозяина) разновидности видов или штамма), гибридной (т.е. комбинацией 5' фланкирующих последовательностей из больше чем одного источника), синтетической или она может быть 5' фланкирующей последовательностью нативного белка NTP или гена пептида NTP. По существу, источником 5' фланкирующей последовательности может быть любой одноклеточный прокариотический или эукариотический организм, любой позвоночный или беспозвоночный организм или любое растение при условии, что 5' фланкирующая последовательность функциональна и может быть активизирована в процессе обмена клетки-хозяина. 5' Фланкирующие последовательности, которые пригодны в векторах, описанных в данном изобретении, могут быть получены любым из нескольких методов, известных в науке. Как правило, пригодные здесь 5' фланкирующие последовательности, отличающиеся от фланкирующей последовательности белка NTP или гена пептида NTP, должны быть предварительно идентифицированы путем составления генетической карты и/или путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой, и, таким образом, могут быть изолированы из надлежащего источника ткани с использованием соответствующих рестрикционных эндонуклеаз. В некоторых случаях полная нуклеотидная последовательность 5' фланкирующей последовательности может быть известна. Здесь 5' фланкирующая последовательность может быть синтезирована, используя вышеописанные методы для синтеза нуклеиновых кислот или клонирования. Если известна вся 5' фланкирующая последовательность или только ее часть, то она может быть получена, используя PCR и/или скрининг геномной библиотеки с подходящим олигонуклеотидом и/или фрагментом 5' фланкирующей последовательности от тех же самых или других разновидностей. Если 5' фланкирующая последовательность не известна, то фрагмент ДНК, содержащий 5' фланкирующую последовательность, можно выделить из более крупной части ДНК, которая может содержать,например, последовательность кодирования или даже другой ген или гены. Выделение может быть достигнуто путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой, используя один или более тщательно отобранные ферменты, чтобы выделить надлежащий фрагмент ДНК. После расщепления желательный фрагмент может быть выделен путем очистки на геле агарозы, на колонке Qiagen, или другими известными специалисту методами. Принцип выбора подходящих ферментов для достижения этой цели должен быть очевиден специалисту. Возникновение репликационного элемента является характерной частью для коммерчески приобретенных векторов экспрессии прокариотов и оно способствует амплификации вектора в клетке хозяина. Амплификация вектора в определенном числе копий, в некоторых случаях, может быть важна для оптимальной экспрессии белка NTP или пептида NTP. Если вектор выбора не содержит возникновение репликационного сайта, то его можно химически синтезировать на основе известной последовательности и лигировать в вектор. Элемент завершения транскрипции обычно расположен у 3' конца белка NTP или пептида NTP, кодирующего последовательность и предназначен для того, чтобы закончить транскрипцию белка NTP или пептида NTP. Обычно, элемент завершения транскрипции в прокариотических клетках представляет фрагмент, богатый G-C, сопровождаемый poly T последовательностью. Хотя элемент может быть клонирован от библиотеки или куплен коммерчески, как часть вектора, он может быть также легко синтезирован, используя описанные выше методы синтеза нуклеиновых кислот. Выбираемый элемент гена маркeра кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки хозяина, выращенной в отборной культуральной среде. Типичные гены маркера выбора кодируют белки,которые (а) придают прокариотическим клеткам хозяина резистентность к антибиотикам или другим токсинам, например к ампициллину, тетрациклину или канамицину, (б) дополняют ауксотрофные дефициты клетки или (в) снабжают важнейшие питательные вещества, не доступные от комплексных питательных сред. Предпочтительными выбираемыми маркерами являются ген сопротивления к канамицину,ген сопротивления к ампициллину и ген сопротивления к тетрациклину. Связывающий рибосому элемент, обычно называемый последовательностью Шайна-Дельгарно (у- 18007203 прокариотов) или последовательностью Козака (у эукариотов), является обычно необходимым для инициирования трансляции мРНК. Элемент типично расположен у 3' промотора и у 5' последовательности кодирования синтезируемого белка NTP или пептида NTP. Последовательность Шайна-Дельгарно различна, но она является типичным полипурином (т.е. имеет высокое содержание A-G). Множество последовательностей Шайна-Дельгарно были идентифицированы, и каждую из них можно легко синтезировать, применяя описанные выше методы, и использовать в прокариотическом векторе. В тех случаях, когда желательно, чтобы белок NTP или пептид NTP были выделены из клетки хозяина, можно воспользоваться сигнальной последовательностью, чтобы направить белок NTP или пептидNTP из клетки хозяина, где он синтезируется, и удалить карбоксильную концевую часть белка, чтобы предотвратить мембранную анкеровку. Как правило, последовательность сигнала расположена в регионе кодирования белка NTP/гена пептида NTP или кДНК, или непосредственно у 5' конца кодирующего региона белка NTP/гена пептида NTP. Множество последовательностей сигнала были идентифицированы,и любой из них, который является функциональным в отобранной клетке хозяина, может использоваться в сочетании с белком NTP/геном пептида NTP или кДНК. Поэтому, последовательность сигнала может быть гомологичной или гетерологичной белку NTP/гену пептида NTP или кДНК, и может быть гомологичной или гетерологичной белку NTP/гену пептида NTP или кДНК. Кроме того, последовательность сигнала можно химически синтезировать, используя сформулированные выше методы. В большинстве случаев секреция полипептида из клетки хозяина через присутствие сигнального пептида приводит к удалению из полипептида терминальной аминогруппы метионина. Во многих случаях транскрипция белка NТР/гена пептида NTP или кДНК усилена присутствием одного или более интронов в векторе; это тем более справедливо, если белок NTP или пептид NTP произведены в клетках хозяев эукариотов, особенно в клетках хозяев млекопитающих. Используемые интроны могут естественно встречаться в белке NTP/гене пептида NTP, особенно где используемый ген содержит полную длину геномной последовательности или ее фрагмента. Если интрон естественно не встречается в пределах гена (что наблюдается у большинства представителей кДНК), то интрон(ы) может быть получен из другого источника. Вообще, позиция интрона относительно фланкирующей последовательности и белка NTP/гена пептида NTP, является важным фактором, поскольку интрон должен быть транскрибирован таким образом, чтобы он был эффективным. По существу, если белок NTP/ген пептида NTP, включенный в вектор экспрессии, является молекулой кДНК, то предпочтительная позиция для интрона - 3' у сайта начала транскрипции, и 5' у поли-А-последовательности завершения транскрипции. Предпочтительно в случае белка NTP/кДНК пептида NTP, интрон или интроны будут расположены на одной или другой стороне (т.е. 5' или 3') молекулы кДНК, таким образом, что это не прерывает данную кодирующую последовательность. Для практической реализации данного изобретения можно использовать любой интрон из любого источника, включая любой вирусный, прокариотический и эукариотический организм (растение или животное), при условии, что он совместим с клеткой (клетками) хозяина, в которую он вводится. Здесь включены также и синтетические интроны. В векторе можно произвольно использовать больше чем один интрон. Когда один или больше сформулированных выше элементов отсутствуют в используемом векторе,они могут быть индивидуально получены и лигированы в вектор. Методы, используемые для получения каждого из элементов, известны специалистам и сопоставимы с методами, сформулированными выше(т.е. синтез ДНК, скрининг библиотеки и т.п.). Заключительные векторы, используемые для практической реализации данного изобретения, обычно сконструированы из исходных векторов типа коммерчески доступного вектора. Такие векторы могут содержать или не содержать некоторые из элементов, которые будут включены в законченный вектор. Если ни один из желательных элементов не присутствует в стартовом векторе, то каждый элемент может быть индивидуально лигирован в вектор путем сокращения вектора соответствующей эндонуклеазой(эндонуклеазами), ограничивая его таким образом, чтобы концы элемента были лигированы и концы вектора были совместимы для лигирования. В некоторых случаях необходимо притуплять предназначенные для совместного лигирования концы, чтобы получить удовлетворительную лигатуру. Притупление достигается первым наполнителем, заполняющим "липкие концы", используя ДНК полимеразу Кленова или Т 4 ДНК полимеразу в присутствии всех четырех нуклеотидов. Эта процедура хорошо известна в науке и описана выше, например в работе Самбрука и других. Альтернативно, два или больше из элементов, которые будут введены в вектор, сперва могут быть лигированы вместе (если они должны быть расположены смежными друг с другом), а затем лигированы в вектор. Дополнительный метод для конструирования вектора состоит в том, чтобы провести все лигации различных элементов одновременно в одну реакционную смесь. В таких условиях из-за неправильной лигации или вставки элементов будет произведено много бессмысленных или нефункциональных векторов. Функциональный вектор может быть идентифицирован и отобран только путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой. Предпочтительные векторы для реализации данного изобретения - это те, которые совместимы с клетками-хозяевами организмов бактерий, насекомых и млекопитающих. Такие векторы включают, среди прочего, pCRII, pCR3, и pcDNA3.1 (Invitrogen Company, San Diego, Calif.), pBSII (Stratagene Company,- 19007203(Clontech, Palo Alto, Calif), pETL (BlueBacII; Invitrogen), и pFastBacDual (Gibco/BRL, Grand Island, N.Y.). После того как вектор был построен и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полную длину или усеченную структуру белка NTP или пептида NTP, была вставлена в надлежащий сайт вектора, законченный вектор может быть вставлен в подходящую клетку хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Клетки хозяина могут быть прокариотическими клетками-хозяевами (типа E. Coli), или эукариотическими клетками-хозяевами (типа клеток дрожжей, клеток насекомых или клеток позвоночных). Клетка хозяина, культивируемая в соответствующих условиях, может синтезировать белок NTP или пептид NTP, которые впоследствии могут быть выделены из среды культивирования (если клетка хозяина выделяет их в среду) или непосредственно из производящей их клетки хозяина (если клетка хозяина не выделяет их в среду). После выделения белок NTP или пептид NTP может быть очищен, используя такие методы, как хроматография на молекулярных ситах, аффинная хроматография и т.п. Выбор клетки хозяина для получения белка NTP или пептида NTP будет частично зависеть от того, должны ли гликозилироваться или фосфорилироваться белок NTP или пептид NTP (в таком случае, в качестве клетки-хозяина предпочтительны эукариотические клетки), а также от способности клетки хозяина свернуть белок в виде его нативной третичной структуры (например, надлежащая ориентация дисульфидных мостиков, и т.д.), таким образом, чтобы из белка NTP или пептида NTP получить биологически активный белок или из пептидаNTP получить пептид, обладающий биологической активностью. Белок NTP или пептид NTP могут быть свернуты после синтеза, используя соответствующие химические условия, как это обсуждено ниже. Подходящие клетки или линии клеток включают клетки млекопитающих, такие как клетки яичника Китайского хомяка (CHO), клетки 293 или 293 Т почки человеческого эмбриона (HEK) или клетки 3 Т 3. Принципы выбора подходящих клеток-хозяев млекопитающих и методов для трансформации, культивирования, амплификации, скрининга, а также выделения и очистки продукта, известны в технике. Другие подходящие линии клеток млекопитающих включают линии клеток COS-1 и CОS-7 обезьяны и линию клеток CV-1. Следующие образцовые клетки-хозяева млекопитающих включают линии клеток приматов и линии клеток грызунов, включая трансформированные линии клеток. Пригодны также нормальные диплоидные клетки, штаммы клеток, полученные из первичной ткани в виде культур in vitro, а также первичные животные ткани, культивируемые в искусственной среде. В гене выбора клетки-кандидаты могут быть генотипично несовершенные, или могут содержать доминантно действующий ген выбора. Другие подходящие линии клеток млекопитающих включают, без ограничения, клетки нейробластомы мыши N2A, HeLa, клетки L-929 мыши, линии 3 Т 3, полученные от Швейцарца, Balb-c или NIH мышей,линии клеток BHK или HaK хомяка. Для данного изобретения в качестве клетки-хозяина аналогично пригодны также и бактериальные клетки. Например, в области биотехнологии хорошо известны как клетки-хозяева различные штаммы E.coli (например, HB101, DH5.alpha., DH10, и МС 1061). Различные штаммы В. subtilis, Pseudomonas spp.,другие Bacillus spp., Streptomyces spp. и т.п. можно также использовать в этом методе. Для экспрессии полипептидов, описанных в данном изобретении, в качестве клетки-хозяина можно использовать также клетки многих дрожжевых штаммов, известных специалистам. Кроме того, где желательно, в методах данного изобретения могут использоваться также системы клеток насекомых. Такие системы описаны, например, у Киттса и др. (Biotechniques, 14:810-817 [1993]), у Луклоу (Curr. Opin. Biotechnol, 4:564-572 [1993]) и Луклоу и др. (J. Virol, 67:4566-4579 [1993]). Предпочтительными клетками насекомых являются Sf-9 и Hi5 (Invitrogen, Carlsbad, Calif.). Инсерция (также обозначаемая как трансформация или трансфекция) вектора в отобранную клетку хозяина может быть достигнута методами хлорида кальция, электропорации, микроинъекции, липофекции или DEAE-декстрана. Отобранный метод частично будет зависеть от типа используемой клетки хозяина. Эти и другие подходящие методы хорошо известны специалистам и сформулированы, например, у Самбрука и других (см. выше). Клетки хозяина, содержащие вектор (т.е. трансформированные или трансфектированные клетки),могут быть культивированы, применяя хорошо известные специалисту стандартные среды. Эти среды обычно должны содержать все питательные вещества, необходимые для роста и выживания клеток. Подходящими средами для культивирования клеток E. coli являются, например, Бульон Лурия (LB) и/или Отменный Бульон (Terrific Broth). Подходящими средами для культивирования эукариотических клеток являются RPMI 1640, MEM, DMEM, которые могут быть дополнены сывороткой и/или факторами роста,как этого требует специфика культивируемой клетки. Подходящая среда для клеток насекомых - эта среда Грейса, к которой, по мере необходимости, добавлен дрожжевой гидролизат, гидролизат лактальбумина и/или сыворотка эмбриона теленка. Как правило, к среде культивирования добавляется только антибиотик или другой компонент, способствующий селективному росту трансформированных клеток. Применяемый компонент будет определяться выбираемым маркерным элементом, присутствующим на плазмиде, при помощи которой клетка хозяина была преобразована. Например, если выбираемый маркерный элемент устойчив к канамицину, то в таком случае компонентом, который добавляют к среде культивирования, будет канамицин.- 20007203 Количество белка NTP или пептида NTP, вырабатываемого в клетке хозяина, можно определить используя стандартные методы, известные в науке. Такие методы включают, без ограничения, анализWestern blot, электрофорез в SDS-полиакриламидном геле, неденатурирующий гель-электрофорез, HPLC разделение, масс-спектроскопию, иммунное осаждение и/или определение активности, как например,определение сдвига гели связывающей ДНК. Если было предусмотрено, что белок NTP или пептид NTP должны выделяться из клеток хозяина,то большая часть белка NTP или пептида NTP может быть найдена в среде культивирования клетки. Белки, полученные этим способом, как правило, не содержат амино-терминальный метионин, поскольку в процессе секреции он удаляется из клетки. Если белок NTP или пептид NTP не выделяются клетками хозяина, но содержатся в цитоплазме и/или ядре (для клеток-хозяев эукариотов), или в цитозоли, (для клеток-хозяев грам-отрицательных бактерий), то они могут содержать амино-терминальный метионон. Для выделения белка NTP или пептида NTP, содержащихся в цитоплазме и/или ядре клетки хозяина, обычно клетки хозяина сначала разрушают механически или при помощи детергента, чтобы содержание клетки перешло в буферный раствор. После этого белок NTP или пептид NTP могут быть выделены из этого раствора. Выделение белка NTP или пептида NTP из раствора может быть достигнута различными методами. Если синтезируется такой белок, который в обоих его концах, карбоксильном и аминном, содержит метку типа гексаГистидина (например, NTP пептид/гексаГис), или другой маленький пептид типа FLAG(Sigma-Aldrich, St. Louis, MI), или кальмодулин-связывающий пептид (Stratagene, La Jolla, CA), то его можно существенно очистить одностадийным процессом, путем пропускания раствора через аффинную колонку, где матрица колонки имеет высокий аффинитет к метке или непосредственно к белку (т.е. моноклональное антитело, специфически опознающий пептид NTP). Например, полигистидин обладает высоким аффинитетом и специфичностью к никелю, цинку и кобальту; таким образом, используя метод иммобилизированной ионами металлов аффинной хроматографии, в частности, аффинные полимеры,содержащие никель (например, их используют в системах Qiagen's QIAexpress system или Invitrogen'sBiosciences-CLONTECH's Talon), можно добиться очистки пептида NTP/полиГис. (см., например, Текущие протоколы в молекулярной биологии. Ред. Аусубель и другие, раздел 10.11.8, John WileySons,Нью-Йорк [1993]). Если белок NTP или пептид NTP получены без присоединенной метки, и не доступны никакие антитела, то используют другие известные методы очистки. Такие методы включают, без ограничения, ионообменную хроматографию, хроматографию на гидроксиапатите, хроматографию гидрофобного взаимодействия, хроматографию на молекулярных ситах, HPLC, электрофорез нативной гели в комбинации с элюцией геля, и препаративное изоэлектрическое фокусирование (Isoprime machine/technique, HoeferScientific). B некоторых случаях для достижения высокой степени очистки два или более из этих методов могут быть объединены. Если ожидается, что белок NTP или пептид NTP прежде всего содержатся внутри клетки, то внутриклеточный материал (включая тела включения для грамотрицательных бактерий) может быть извлечен из клетки хозяина, используя любую стандартную технику, известную специалисту. Например, с целью извлечения периплазмы/цитоплазмы, клетки хозяина могут подвергаться лизису Французским прессом,гомогенизацией и/или ультразвуком с последующим центрифугированием. Если белок NTP или пептидNTP образуют тела включения в цитозоли, то такие тела включения часто связываются с внутренними и/или внешними клеточными мембранами и, таким образом, после центрифугирования они прежде всего концентрируются в осадочном материале. В таком случае тела включения расщепляют, извлекают их содержимое и растворяют, обрабатывая осадочный материал при экстремальных значениях рН или же агентом, вызывающим диссоциацию комплексов, таким как детергент, гуанидин, производные гуанидина, мочевина или производные мочевины в присутствии восстанавливающего агента, такого как дитиотрейтол при щелочных значениях рН, или как трис-карбоксиэтилфосфин при кислых значениях рН. В такой растворимой форме белок NTP или пептид NTP могут быть проанализированы, используя гельэлектрофорез, иммунное осаждение и т.д Если нужно выделить белок NTP или пептид NTP, то выделение может быть достигнуто, используя стандартные методы типа сформулированных ниже и описанных Марстоном и другими, Meth. Enz., 182:264-275 [1990]. В некоторых случаях после выделения белок NTP или пептид NTP могут быть биологически неактивны. Существуют различные методы для повторного свертывания или превращения полипептида в его третичную структуру и образования дисульфидных связей, которые могут использоваться для восстановления биологической активности. Такие методы включают обработку растворенного полипептида при рН обычно более чем 7 и присутствие специфической концентрации агента, вызывающего диссоциацию комплексов. Методика выбора агента, вызывающего диссоциацию комплексов, очень подобна методике, которую используют при выборе метода растворения тела включения, но обычно при более низкой концентрации. При этом не обязательно, чтобы тот же самый агент, вызывающий диссоциацию комплексов и используемый для растворения, использовался и для диссоциации. В большинстве случаев,свертывающий/окисляющий раствор содержит также и восстанавливающий агент или же восстанавли- 21007203 вающий агент совместно с его окисленной формой в определенном соотношении для создания специфического окислительно-восстановительного потенциала, позволяющего осуществить перестановку дисульфидных связей и образование цистеинового мостика (цистеиновых мостиков) белка. Некоторые из обычно используемых окислительно-восстановительных пар включают цистеин/цистамин, глутатион(bМЕ)/дитио-b(МЕ). Во многих случаях для увеличения эффективности свертывания необходим сорастворитель и другие обычные реактивы, в том числе глицерин, полиэтиленгликоль различных молекулярных весов и аргинин. Если белок NTP или тела включения пептида NTP в значительной степени не сформированы в клетке хозяина, то после центрифугирования гомогената, белок NTP или пептид NTP следует искать прежде всего в надосадочной жидкости, и белок NTP или пептид NTP могут быть выделены из надосадочной жидкости методами, типа сформулированных ниже. В тех ситуациях, где это предпочтительно для частичного или полного выделения белка NTP или пептида NTP, очистка может быть достигнута использованием известных специалисту стандартных методов. Такие методы включают, без ограничения, электрофоретическое разделение, сопровождаемое электроэлюцией, различные типы хроматографии (иммуноаффинные, молекулярных сит и/или ионного обмена), и/или жидкостную хроматографию высокого разрешения. В некоторых случаях для полной очистки целесообразно использование нескольких методов. В дополнение к подготовке и очистке белков NTP или пептидов NTP и используемых рекомбинантных методов ДНК белки NTP или пептиды NTP и их фрагменты, варианты, гомологи и производные получают химическими методами синтеза (типа твердофазного синтеза пептидов) с использованием методов, известных в технике, таких как сформулированные Меррифильдом и др., J. Chem. Soc., 85:2149[1963], Хаутеном и др., Proc Natl Acad. Sci. USA , 82:5132 [1985], а также Стюартом и Янгом, Твердофазный синтез пептидов, Pierce Chemical Co., Rockford, 111 [1984]. Такие полипептиды могут синтезироваться с метионином или без метионина в виде аминного терминала. Химически синтезируемые белкиNTP или пептиды NTP могут быть окислены, используя методы образования дисульфидных мостиков,сформулированные в этих трудах. Предполагают, что белки NTP или пептиды NTP будут обладать биологической активностью, сопоставимой с активностью белков NTP или пептидов NTP, полученных путем рекомбинации или путем выделения из природных источников, и, таким образом, могут использоваться попеременно с рекомбинантным или природным белком NTP или пептидом NTP. Химически измененные композиции пептида NTP, в которых пептид NTP связан с полимером, рассмотрены в данном изобретении. Отобранный полимер обычно является водорастворимым, так чтобы связанный с ним белок в водной среде, типа физиологической среды, не выпадал в осадок. Отобранный полимер обычно модифицируют, чтобы он имел единственную реакционную группу, такую как активная сложноэфирная группа для ацилирования, или альдегидная группа для алкилирования, чтобы можно было регулировать степень полимеризации, как это предусмотрено в указанных методах. Полимер может иметь любой молекулярный вес и может быть разветвленным или линейным. В указанные полимеры пептидов NTP включены также и смеси полимеров. В некоторых случаях желательно получить нуклеиновую кислоту и/или аминокислотные варианты встречающихся в природе белков NTP или пептидов NTP. Варианты нуклеиновых кислот могут быть получены, используя сайт, направляющий мутагенез, PCR амплификацию или другие соответствующие методы, где праймер(ы) имеют желательные точечные мутации (описание методов мутагенеза см. Самбрук и др. (выше) и Аусубель и др. (выше. Для получения вариантов таких кислот может использоваться также и химический синтез с применением методов, описанных Энгельсом и др. (см. выше). Можно использовать также и другие известные специалисту методы. Предпочтительными вариантами нуклеиновых кислот являются те, которые содержат нуклеотидные замещения, ответственные за предпочтительный кодон в клетке хозяина, используемой для получения белка NTP или пептида NTP. Такая оптимизация кодона может быть определена через компьютерные алгоритмы, которые включают таблицы частот кодона, типа Ecohigh. Cod, показывающие предпочтение кодона высоко выраженных бактериальных генов, как это предусмотрено версией 9.0 пакета компьютерной группы генетики Висконсинского университета, Madison, Wis. Другие полезные таблицы частот кодона включают Celeganshigh.cod, Celeganslow.cod, Drosophilahigh.cod, Humanhigh.cod,Maizehigh.cod, и Yeasthigh.cod. Другие предпочтительные варианты по сравнению с диким типом - это те, которые кодируют консервативные замещения аминокислот, как описано выше (например, когда заряд или полярность боковой цепи природной аминокислоты существенно не изменяется при его замещении различными аминокислотами), и/или те, которые предназначены для создания нового(ых) сайта(ов) гликозилирования и/или фосфорилирования или те, которые предназначены для удаления существующего(их) сайта(ов) гликозилирования и/или фосфорилирования. Белки NTP, пептиды NTP, их фрагменты, гомологи, варианты, производные и соли могут быть получены, используя обычные методы синтеза пептида, известные специалистам. Эти методы включают химические методы сочетания (ср. Вунш E. Методы органической химии, т. 15, ч. 1+2, Синтез пептидов, Thieme Verlag, Stuttgart (1974), и Баррани Г., Маррифилд P.Б.: Пептиды, ред. E. Гросс, Дж. Майен- 22007203 хофер, т. 2, глава 1, стр. 1-284, Academic Press (1980, ферментативные методы сочетания (ср. Уидмер Ф., Иохансен Дж. Т., Carlsberg Res. Commun., т. 44, стр. 37-46 (1979), Куллманн У.: Ферментативный синтез пептида, CRC Press Inc Boca Raton, Fla. (1987), и Уидмер Ф., Иохансен Дж.Т., в Синтетические пептиды в биологии и медицине:, ред. Алитало К., Партанен П., Ватиери А., стр. 79-86, Elsevier, Амстердам (1985, или комбинацию химических и ферментативных методов, если это экономично и выгодно для проекта. Используя приведенные здесь руководящие принципы, специалисты могут изменить пептидные последовательности пептида NTP с целью получения гомолога, имеющего ту же самую или подобную биологическую активность (биоактивность), как исходный или нативный белок NTP или пептид NTP. Использование непосредственно не самого пептида, а миметических структур данного пептидаNTP, предоставляет определенные преимущества. Вообще, имитаторы пептидов биологически более аккумулируемы, имеют более длинную продолжительность действия и являются более дешвыми, чем белки и пептиды. Таким образом, описанные выше пептиды NTP пригодны для получения таких малых химических соединений с подобной биологической активностью и, следовательно, с подобным терапевтическим применением. Пептидные имитаторы пептидов NTP могут быть получены путем применения методов комбинаторной химии и других методов, известных в науке (см., например, труды 20-го Европейского Симпозиума по пептидам, ред. Г. Юнг, E. Байер, стр. 289-336 и приведенные там ссылки). В науке известны примеры методов структурной модификации пептидов с целью создания имитаторов пептидов; эти методы включают инверсию хиральных центров основной цепи, которая ведет к структурам остатков D-аминокислот, способных, особенно в N-терминали, увеличить стабильность к протеолитической деградации, не влияя при этом на активность. Пример этого описан в статье Смита К.С. и др. Т-связывание тритилированного D-ала 1 - пептида, Drug Development Res., 15, стр. 371379(1988). Другой метод заключается в изменении циклической структуры с целью увеличения стабильности и приводит к структурам типа N-C связанных имидов и лактамов (Эде и др. в сб. Пептиды: химия и биология, ред. Смит и Ривиер, Escom, Лейден (1991), стр 268-270). Примером этого служат конформационно ограниченные тимопентин-подобные соединения, например, описанные Гольдшейном Г. и др. в патенте США 4457489 (1985), который включен сюда в виде ссылки. Третий метод состоит в замещении пептидных связей в пептиде NTP псевдопептидными связями,что придат устойчивость к протеолизу. Было описано множество псевдопептидных связей, которые вообще не затрагивают структуру пептида и его биологическую активность. Одним из примеров этого подхода является замещение ретроинверсо-псевдопептидных связей (Биологически активные ретроинверсо-аналоги тимопентина, Систо А. и др. в сб. Пептиды, химия, структура и биология, ред. Ривиер Дж.E. и Маршалл Г.P. Escom, Leiden (1990), стр 722-773) и Дальпоззо и другие (1993), Int. J. PeptideProtein Res., 41:561-566, включенные здесь в виде ссылок). Согласно этой модификации, аминокислотные последовательности пептидов могут быть идентичны последовательностям пептидов NTP, описанным выше, за исключением того, что один или больше пептидных связей замещены ретроинверсопсевдопептидными связями. Предпочтительно большинство N-терминальных пептидных связей замещены, так как такое замещение придает устойчивость к протеолизу экзопептидазами, действующими на Nтерминал. Синтез пептидов с одной или более восстановленными ретроинверсо-псевдопептидными связями известен в науке (Систо (1990) и Дальпоззо и др. (1993), процитированные выше). Таким образом, пептидные связи могут быть замещены непептидными связями, которые позволяют имитатору пептида принимать подобную исходному пептиду структуру и, соответственно, биологическую активность. Можно сделать также и дальнейшие модификации, заменяя химические группы аминокислот на другие химические группы подобной структуры. Другая подходящая псевдопептидная связь, которая, как известно,увеличивает стабильность к ферментативному расщеплению без или с небольшой потерей биологической активности - эта восстановленная изостерическая псевдопептидная связь (Коудер и другие, (1993),Int. J. Peptide Protein Res., 41:181-184, включенный здесь в виде ссылки). Таким образом, аминокислотные последовательности этих пептидов могут быть идентичны последовательности пептида NTP за исключением того, что одна или больше пептидных связей замещены изостерическими псевдопептидными связями. Предпочтительно, большинство N-терминальных пептидных связей замещены, так как такое замещение придает сопротивляемость к протеолизу экзопептидазами, действующими на N-терминал. Синтез пептидов с одной или более восстановленными изостерическими псевдопептидными связями известен в технике (Коудер и другие (1993), процитирован выше). Другие примеры включают введение кетометиленовых или метилсульфидных групп для замещения пептидных групп. Пептоидные производные пептидов NTP представляют собой другой класс пептидных имитаторов,которые сохраняют важные структурные детерминанты для биологической деятельности и при этом не содержат пептидную связь, придавая таким образом сопротивляемость к протеолизу (Саймон и др., 1992,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:9367-9371 и включенный здесь в виде ссылки). Пептоиды - это олигомерыN-замещенных глицинов. Было описано множество N-алкильных групп, каждая из которых соответству- 23007203 ет боковой цепи природной аминокислоты (Саймон и др. (1992), процитированный выше и включенный сюда в виде ссылки). Некоторые или все аминокислоты пептида NTP заменены N-замещенным глицином, соответствующим замещенной аминокислоте. Усовершенствованию пептидных имитаторов можно способствовать путем определения третичной структуры исходного пептида NTP спектроскопией ЯМР, кристаллографией и/или автоматизированным молекулярным моделированием. Эти методы помогают в развитии новых композиций более высокой потенции и/или большей биоаккумуляции и/или большей стабильности, чем исходный пептид (Деан(1993), Med. Res. Rev., 13: 327-384; Мур (1994), Trends Pharmacol. Sci., 15: 124-129; Хруби (1993),Biopolymers, 33: 1073-1082; Багг и другие (1993), Sci. Am., 269:92-98, все включены сюда в виде ссылок). После идентификации потенциального пептидного имитатора его можно синтезировать и анализировать, используя методы оценки его активности, описанные в нижеследующих примерах. Данное изобретение включает соединения - пептидные имитаторы, полученные вышеупомянутыми методами,имеющие биологическую активность Пептидов NTP и подобную трехмерную структуру. Для специалиста очевидно, что имитатор пептида, имеющий одну или более описанных выше модификаций, может быть получен из любого из пептидов NTP. Кроме того, будет очевидно, что имитаторы пептидов, описанные в данном изобретении, в дополнение к их применению в терапевтических композициях, могут далее использоваться для получения еще более активных непептидных соединений. Сегодня существует множество организаций, которые способны синтезировать описанные здесь пептиды NTP. Например, учитывая последовательность пептида NTP, организация может синтезировать пептид и переслать синтезируемый пептид с сопровождающей документацией и доказательством идентичности пептида. Это изобретение охватывает также использование пептидов NTP и соответствующих им молекул нуклеиновых кислот для испытательных тестов, для качественного или количественного определения пептидов NTP, белков NTP, AD7c-NTP, ДНК пептида NTP, ДНК белка NTP, ДНК AD7c-NTP-a или соответствующих РНК, присутствующих в тканях млекопитающих или жидких образцах тела. Пептиды NTP и соответствующие им молекулы нуклеиновых кислот можно использовать в качестве препаратов в испытаниях биологической активности пептида NTP или ДНК кодированного пептида NTP. Последовательности нуклеиновой кислоты пептида NTP могут быть полезным источником для гибридных зондов,предназначенных для качественного или количественного определения содержания ДНК пептида NTP,ДНК белка NTP, ДНК AD7c-NTP-a или соответствующей РНК, в тканях млекопитающих или жидких образцах тела. Пептид NTP, который сам по себе биологически неактивен, может быть применен для получения антител, которые распознают и/или связываются с пептидами NTP, белками NTP или белкамиAD7c-NTP. Такие антитела можно получить, используя стандартные методы. Таким образом, в пределах данного изобретения рассмотрены также антитела, которые реагируют или связываются с пептидамиNTP так же как и с короткоцепными фрагментами антител и с другими реагирующими фрагментами таких антител. Антитела могут быть поликлональными, моноклональными, рекомбинантными, химерными, однонитевыми и/или биспецифическими. Как правило, антитело или его фрагмент имеет человеческое происхождение или гуманизирован, т.е. при введении в организм пациента, предотвращает или минимизирует иммунную реакцию на антитело. Предпочтительные антитела - это антитела человека, как поликлональные так и моноклональные. Фрагментом антитела может быть любой фрагмент, который реагирует с пептидами NTP данного изобретения, такие как Fab, Fab', и т.д. Данное изобретение включает также гибридомы, вырабатываемые в присутствии любого пептида NTP, как антигена к отобранному млекопитающему, например, к клеткам млекопитающего (например, к клеткам селезенки), слившимся с некоторыми раковыми клетками, для создания известными методами линий увековеченных клеток. Данное изобретение охватывает также методы, используемые для создания линий таких клеток и антител,направленных против целыой молекулы или отдельных частей пептида NTP. Антитела могут далее использоваться in vivo и in vitro для диагностических и исследовательских целей в меченном виде, для обнаружения присутствия пептида NTP, белка NTP или AD7c-NTP в образцах жидкостей или клеток тела. Это изобретение охватывает также использование одного или более пептидов NTP, как калибровочных стандартов в анализах, которых проводят для качественного или количественного определения пептидов NTP, белков NTP, AD7c-NTP, ДНК пептида NTP, ДНК белка NTP, ДНК AD7c-NTP-a или соответствующих РНК, присутствующих в тканях млекопитающих или жидких образцах тела. Данное изобретение описывает новые методы лечения тех заболеваний, которые требуют удаления клеток, таких, как клетки доброкачественных и злокачественных опухолей, железистой гиперплазии (например простаты), нежелательных волос на лице, бородавок и нежелательных жировых тканей или ингибирования или предотвращения нежелательной клеточной пролиферации, напр. стеноза стента. Такой метод включает введение больному организму млекопитающего терапевтически эффективных количеств пептида NTP, или покрытие устройства, напр. стента, терапевтически эффективным количестом пептидаNTP. Болезнь может быть, например, опухолью легкого, груди, живота, поджелудочной железы, проста- 24007203 ты, пузыря, кости, яичника, кожи, почки, пазухи, толстой кишки, кишечника, живота, прямой кишки,пищевода, крови, мозга и его покрытий, спинного мозга и его покрытий, мышцы, соединительной ткани,надпочечника, паращитовидной железы, щитовидной железы, матки, яичка, гипофиза, репродуктивных органов, печени, желчного пузыря, глаза, уха, носа, горла, миндалин, рта, лимфатического узла и лимфатической системы и других органов. Используемый здесь термин злокачественная опухоль охватывает все формы карцином, сарком и меланом человека, которые встречаются в плохо дифференцированной, умеренно дифференцированной и хорошо дифференцированной формах. Это изобретение удовлетворяет потребность в способе лечения, при помощи которого можно удалить доброкачественные опухоли с меньшим риском и меньшими нежелательными побочными эффектами, характерными для хирургии. Особенно необходим метод удаления хирургическим путем доброкачественных опухолей из опасных областей, таких как места, расположенные глубоко в теле (например,мозг, сердце, легкие и другие). Способ лечения заболеваний, требующих удаления клеток, может использоваться в сочетании с обычными методами лечения заболеваний, типа хирургического вмешательства, химиотерапии и радиации. Пептиды NTP могут быть введены пациенту до, во время или после таких обычных лечебных процедур. Заболеваниями, которые можно лечить подобным образом, являются также гиперплазия, гипертрофия или чрезмерно быстрый рост ткани, отобранной из группы, состоящей из легкого, груди, живота,поджелудочной железы, простаты, пузыря, кости, яичника, кожи, почки, пазухи, толстой кишки, кишечника, живота, прямой кишки, пищевода, крови, мозга и его покрытий, спинного мозга и его покрытий,мышцы, соединительной ткани, надпочечника, паращитовидной железы, щитовидной железы, матки,яичка, гипофиза, репродуктивных органов, печени, желчного пузыря, глаза, уха, носа, горла, миндалин,рта, а также лимфатических узлов и лимфатической системы. Другие заболевания, которые можно лечить, используя метод данного изобретения - это вирусные,бактериальные или паразитические изменения ткани, отобранной из группы, состоящей из легкого, груди, живота, поджелудочной железы, простаты, пузыря, кости, яичников, кожи, почки, пазухи, толстой кишки, кишечника, живота, прямой кишки, пищевода, крови, мозга и его покрытий, спинного мозга и его покрытий, мышцы, соединительной ткани, надпочечника, паращитовидной железы, щитовидной железы,матки, яичка, гипофиза, репродуктивных органов, печени, желчного пузыря, глаза, уха, носа, горла, миндалин, рта, а также узлов лимфы и лимфатической системы. Заболевание, которое можно лечить, может также быть уродством или нарушением ткани, отобранной из группы, состоящей из легкого, груди, живота, поджелудочной железы, простаты, пузыря, кости,ovary, кожи, почки, пазухи, толстой кишки, кишечника, живота, прямой кишки, пищевода, крови, мозга и его покрытий, спинного мозга и его покрытий, мышцы, соединительной ткани, надпочечника, паращитовидной железы, щитовидной железы, матки, яичка, гипофиза, репродуктивных органов, печени, желчного пузыря, глаза, уха, носа, горла, миндалин, рта, а также узлов лимфы и лимфатической системы. В частности, заболевание, которое можно лечить, может быть гипертрофией миндалевидной железы, гиперплазией простаты, псориазом, экземой, дерматозами или геморроем. Заболевание, которое можно лечить, может быть сосудистой болезнью, типа атеросклероза или артериосклероза, или сосудистой болезни, типа варикозных вен, стеноза или рестеноза артерии или стента. Заболевание, которое можно лечить, также может быть косметической модификацией ткани, типа кожи, глаза, уха, носа, горла,рта, мышцы, соединительной ткани, волос или грудной ткани. В сферу данного изобретения включены терапевтические композиции пептидов NTP. Такие композиции могут содержать терапевтически эффективное количество пептида NTP с добавленным к нему фармацевтически приемлемым носителем. Материалом носителя может быть вода для инъекции, предпочтительно содержащая добавленные к ней другие материалы, обычно используемые для введения в организм млекопитающих. Как правило, для терапевтического применения пептид NTP вводятся в виде композиции, включающей очищенный пептид NTP в сочетании с одним или большим количеством физиологически приемлемых носителей, наполнителей или разбавителей. Исключительно подходящими носителями являются нейтральный буферированный солевой раствор или солевой раствор, смешанный с сывороточным альбумином. Предпочтительно продукт сформулирован в виде лиофилизированной массы с использованием соответствующих наполнителей (например, сахарозы). При желании могут быть включены также и другие стандартные носители, разбавители и наполнители. Композиции, содержащие известные специалистам буферные системы с соответствующим диапазоном значения рН, в том числе буфер Триса, имеющий рН приблизительно 7.0-8.5 или ацетатный буфер, имеющий рН приблизительно 4.0-5.5, могут дополнительно содержать сорбитол или подходящую замену. Использование пептидов NTP, конъюгированных, взаимосвязанных, сцепленных с антителом,фрагментом антитела, подобной антителу молекулой или молекулой с высоким аффинитетом к определенному маркеру опухоли, такой как клеточный рецептор, сигнальный пептид или сверх-выраженный фермент для прицеливания на нежелательные клеточные элементы, также затронуто данным изобретением. Антитело, фрагмент антитела, подобная антителу молекула или молекула с высоким аффинитетом- 25007203 к определенному маркеру опухоли используются для прицеливания на пептид NTP, сопряженного с определенной целевой клеткой или тканью. Например, опухоль с отличительным поверхностным антигеном или выраженным антигеном может преследоваться антителом, фрагментом антитела или подобной антителу связывающей молекулой, в результате чего клетки опухоли могут быть убиты пептидом NTP. Такой подход с прицеливанием антитела имеет ожидаемые преимущества, выражающиеся в уменьшении дозировки, увеличении вероятности их связывания или поглощения целевыми клетками и увеличении их полезности для прицеливания и обработки метастатических опухолей и опухолей микроскопических величин. Это изобретение также охватывает использование пептидов NTP, конъюгированных или взаимосвязанных или сцепленных к белку или другой молекуле, для образования композиции, которая расщепляет участок(и) опухоли, или смежный участок(и), или опухолевые и другие нежелательные клетки ферментом, специфическим для данной опухоли, или протеазой, или конъюгированным антителом, которые нацелены на опухоль или другие нежелательные клетки; при этом композиция выделяет пептид NTP около участка(ков) опухоли или других нежелательных клеток. Это изобретение охватывает также использование пептидов NTP, конъюгированных, или взаимосвязанных, или сцепленных с белком или другой молекулой для образования композиции, которая выделяет пептид NTP, или некоторые биологически активные фрагменты пептида NTP при освещении обрабатываемой ткани видимым светом (как в случае лазерной терапии или другой фотодинамической или фотоиндуцированной терапии) и другими формами электромагнитной радиации, такими как инфракрасная и ультрафиолетовая радиация, рентгеновские или гамма лучи, локальная термообработка, - или радиация, ультразвуковая эмиссия или другие источники ограниченной энергии. В соответствие с лечебными показаниями, пептиды NTP могут использоваться отдельно, вместе или в комбинации с другими фармацевтическими композициями, такими как цитокины, факторы роста,антибиотики, агенты индуцирующие апоптоз, противовоспалительные и/или химиотерапевтические агенты. Это изобретение охватывает также терапевтические композиции пептидов NTP, использующие дендримеры, фуллерены и другие синтетические молекулы, полимеры и макромолекулы, где пептид NTP и/или соответствующая ему ДНК конъюгированы или соединены с молекулой, полимером или макромолекулой, или включены в них самостоятельно или совместно с другими разновидностями молекул, такими, как специфические маркера опухоли. Например, в патенте США 5714166 Биологически активные и/или целеуказанные дендримерные конъюгаты, среди прочего описаны способы получения и применения конъюгатов дендритового полимера, состоящего по крайней мере из одного дендримера с целевой директорией(ами) и конъюгированного с ним по крайней мере одного биологически активного агента. Содержание патента США 5714166 включено сюда полностью в виде ссылки. Это изобретение также охватывает терапевтические композиции пептидов NTP и/или генов и носителей для лекарств, таких как липидные эмульсии, мицеллярные полимеры, полимерные микросферы,электрически активные полимеры, гидрогели и липосомы. Использование пептидов NTP или родственных генов или эквивалентов гена, переданных нежелательным клеткам, также затронуто в данном изобретении. Сверхэкспрессия пептида NTP в пределах опухоли может использоваться, чтобы индуцировать смерть клеток опухоли и тем самым уменьшать в ней популяцию клеток. Полагают, что передача гена или эквивалента гена пептида NTP с целью обработки нежелательных клеточных элементов, имеет преимущества, так как требует малых доз и проникает в потомственные образования целевых клеточных элементов, обусловливая тем самым потребность менее частой терапии и меньшей общей терапии. Это изобретение также охватывает передачу генов, которые кодируют слившийся белок, содержащий пептид NTP и нежелательные клетки или соседние им клетки, где после экспрессии гена и образования и/или выделения слившегося белка, последний расщепляется при воздействии на них нативных ферментов или протеаз, а также под влиянием предшественников лекарств, которые выделяют пептид NTP в нежелательные клетки или около них. Использование клонированных рекомбинантных конъюгатов типа NTP пептид-антитело; клонированных рекомбинантных конъюгатов типа NTP пептид-фрагмент антитела; и клонированных рекомбинантных конъюгатов типа NTP пептид-белок подобный антителу также затронуто в данном изобретении. Преимущества клонированного пептида NTP, объединенного с нацеленным конъюгатом (типа антитела,фрагмента антитела, подобной антителу молекулы или молекулы с высоким аффинитетом к рецептору,специфическому к раку или другому маркеру опухоли), состоят в том, что такая молекула объединяет описанные выше преимущества нацеливания в дополнение к преимуществам производства и стандартизации клонированной конъюгированной молекулы. Это изобретение охватывает также использование терапевтических композиций пептидов NTP или генов NTP или эквивалентов гена, как компонентов покрытия медицинского устройства типа стент, чтобы устранить, ингибировать, или предотвратить нежелательную клеточную пролиферацию или аккумуляцию. Твердые формы дозировки для орального приема включают, без ограничения, капсулы, таблетки,пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых формах дозировки, активное соединение предпочтительно- 26007203 смешивают по крайней мере с одним из следующих: (а) с одним или более инертным наполнителем (или носителем), таким как цитрат натрия или двузамещенный фосфат кальция; (б) с наполнителями или расширителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннитол и кремневая кислота; (в) со связующими веществами, такими как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и гуммиарабик; (г) с гигроскопическими веществами типа глицерина; (д) с распадающимися агентами типа агар-агара, карбоната кальция, крахмала картофеля или тапиоки, альгиновой кислоты, некоторых комплексных силикатов и карбоната натрия; (е) с замедлителями растворения типа парафина; (ж) с ускорителями абсорбции типа четвертичных аммонийных соединений; (з) со смачивающими агентами типа ацетилового спирта и моностеарата глицерина; (и) с адсорбентами типа каолина и бентонита; и (к) со смазками типа талька, стеарата кальция, стеарата магния, твердых полиэтиленгликолей,лаурилсульфата натрия или их смесей. Для капсул, таблеток и пилюль формы дозировки могут также включать вещества буферного действия. Жидкие формы дозировки для орального приема включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активным соединениям, жидкие формы дозировки могут включать инертные разбавители типа воды или других растворителей, обычно используемых в технике, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы. К образцовым эмульгаторам можно отнести этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил-бензоат,пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла, такие как хлопковое масло, арахисовое масло, кукурузное масло, оливковое масло, касторовое масло и кунжутное масло, глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли, жирнокислые сложные эфиры сорбитана или смеси этих веществ и т.п. Помимо таких инертных разбавителей, композиция также может включать вспомогательные вещества, такие как смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, а также подслащивающие, ароматизирующие и благовонные агенты. Фактические уровни дозировки активных компонентов и методы их введения в композициях данного изобретения с целью получения таких количеств пептида NTP, которые являются эффективными для достижения желательной терапевтической ответной реакции на конкретную композицию, могут быть различны. Поэтому отобранный уровень дозировки зависит от желательного терапевтического эффекта, пути введения, желательной продолжительности лечения и других факторов. Млекопитающим, включая людей, эффективные количества могут быть введены, основываясь на площади поверхности тела. Взаимосвязь дозировок для животных различных видов и размеров, а также для людей (основанная на mg/M2 поверхности тела) описана у E.Дж. Фрайрайх и др. Cancer Chemother.Rep., 50 (4):219 (1966). Область поверхности тела может быть приблизительно определена по высоте и весу индивидуума (см., например, Научные таблицы, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y., стр. 5 537-538(1970. Полная ежедневная доза пептида NTP может вводиться в организм хозяина одной или несколькими порциями. Дозировки могут содержать такие количества его дольных единиц, которые в сумме составляют ежедневную дозу. Следует, однако, учитывать, что определенный уровень дозы для любого специфического пациента будет зависеть от разнообразия факторов, включая вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время и путь введения, потенциал введенного препарата, степень поглощения и выделения, комбинацию с другими лекарствами и серьезность конкретной болезни. Метод введения композиции пептида NTP согласно данному изобретению включает, без ограничения, введение соединений внутримышечно, орально, внутривенно, интраперитонеально, интрацеребрально (интрапаренхимально), интрацеребровентрикулярно, внутрь опухоли, через пораженный участок,через кожу, интратекально, через нос, интраокулярно, внутриартериально, локально, трансдермально,через аэрозоль, путем инфузии, инъекцией шарика, через имплантированное устройство, системой медленного выделения и т.д. Другой метод введения пептида NTP, описанного в данном изобретении, - это трансдермальный или кожный путь. Пример такого осуществления - использование заплаты. В частности, заплата может быть приготовлена из тонкой суспензии пептида NTP, например, в диметилсульфоксиде (ДМСО) или в смеси ДМСО с хлопковым маслом и наложена на поверхность опухоли млекопитающего путем помещения заплаты в углубление кожи. Другие среды или их смеси с другими растворителями и твердыми носителями также функционируют одинаково хорошо. Заплата может содержать соединение пептида NTP в виде раствора или суспензии. Такая заплата может быть наложена на кожу пациента, например, посредством ее помещения в углубление кожи пациента, сформированное путем сгибания кожи и ее закрепления посредством стежков, клипс или других зажимных приспособлений. Этот мешочек должен использоваться таким образом, чтобы был обеспечен непрерывный контакт с кожей без вмешательства млекопитающего. Помимо использования такого мешочка из кожи может использоваться любое приспособление, которое гарантирует устойчивый контакт заплаты с кожей. Например, для закрепления заплаты на кожу можно использовать клейкий бандаж. Пептид NTP может быть введен в виде лекарственной формы или препарата с замедленным высвобождением медикамента. Подходящие примеры лекарственных форм с замедленным высвобождением- 27007203 медикамента включают полупроницаемые полимерные матриксы в виде форменных изделий, например,пленки или микрокапсулы. Матриксы с замедленным высвобождением медикамента включают полиэстеры, гидрогели, полилактиды (США 3773919, EP 58481), сополимеры L-глутаминовой-кислоты и гаммаэтил-L-глутамата (Сидмэн и др., Biopolymers, 22: 547-556 [1983]), поли-(2-гидроксиэтил-метакрилат)(Лэнгер и др., J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 [1981] и Лэнгер, Chem. Tech., 12: 98-105 [1982]), этиленвинилацетат (Лэнгер и др., см. выше), или поли-D(-)-3-гидроксимасляную кислоту (EP 133988). Лекарственные составы с замедленным высвобождением медикамента также могут включать липосомы, которые можно приготовить любым из методов, известных в технике (например, Эппштейн и др., Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 82: 3688-3692 [1985]; EP 36,676; EP 88,046; и EP 143,949). Другой метод введения пептида NTP, описанного в данном изобретении, основан на прямой или косвенной инфузии пептида NTP в опухоль или другую ткань, подвергаемую лечению. Пример такого осуществления - прямая инъекция пептида NTP в опухоль или другую ткань. Лечение может состоять из одной инъекции, многократных инъекций в один прим или ряда инъекций в течение часов, дней или месяцев, что приводит к регрессии или разрушению опухоли или другой ткани. Лечение контролируется посредством биопсии, визуализации или других методов контроля тканевого роста. Инъекцию в опухоль или другую ткань, подвергаемую лечению можно осуществить устройством, вставленным в полость,типа носа, рта, уха, влагалища, прямой кишки или уретры или через разрез, чтобы проникнуть в опухоль или ткань in vivo, и можно выполнить с применением метода визуализации или оптической системы,типа ультразвукового индикатора или волоконной оптики для идентификации соответствующего участка для инъекции(й). Другой пример такого осуществления - использование устройства, которое может обеспечить постоянную инфузию пептида NTP в ткань в течение некоторого времени. Другой метод введения пептида NTP, описанного в данном изобретении, заключается в комбинации с хирургической или подобной процедурой, используемой для физического удаления, ампутации или разрушения опухолевых или других тканей или клеточных элементов, удаления или разрушения которых желают достичь путем введения пептида NTP, описанного в данном изобретении, непосредственно в область (областях) удаляемой опухоли или другой ткани или в соседнюю область (областях), чтобы уничтожить клетки опухоли или воспрепятствовать росту любых клеток, не удаленных или разрушенных в соответствии с вышеописанной процедурой. Другим методом введения пептида NTP, описанного в данном изобретении, является имплантация устройства в пределах опухоли или другой ткани, подлежащей лечению. Примером такого осуществления является внедрение пластины, содержащей пептид NTP, в опухоль или другую ткань подвергаемую лечению. Через какое-то время, пластина выделяет в ткань терапевтическую дозу пептида NTP. Альтернативно или дополнительно композиция может быть введена локально, путем имплантации в обрабатываемую область мембраны, губки или другого соответствующего материала, на котором был абсорбирован пептид NTP. Если используется имплантационное устройство, то оно может быть внедрено в любую подходящую ткань или орган, и поставку пептида NTP можно осуществить устройством непосредственно через таблетку, или путем непрерывного введения, или через катетер, используя непрерывную инфузию. Альтернативный метод введения состоит в том, чтобы ввести одну или более копий гена, кодирующего пептид NTP, в целевую клетку и, если необходимо, индуцировать копией(ями) гена внутриклеточное образование пептида NTP. Один из способов, при котором генная терапия может быть применена, состоит в том, чтобы использовать ген, кодирующий пептид NTP, (или геномную ДНК, кДНК и/или синтетическую ДНК, кодирующую пептид NTP (или их фрагмент, вариант, гомолог или производное),которые могут быть действенно связанными с конститутивным или индуцируемым промотором для образования ДНК-конструкта генной терапии. Промотор может быть гомологичным или гетерологичным эндогенному гену, кодирующему пептид NTP, при условии, что он активен в клетке или ткани такого типа, в которую будет помещен конструкт. Другие компоненты ДНК-конструкта генной терапии произвольно включают, по мере необходимости, молекулы ДНК, предназначенные для сайт-специфической интеграции (например, эндогенные фланкирующие последовательности, необходимые для гомологичной рекомбинации), тканеспецифичный промотор, ускоритель(и) или замедлитель(и), молекулы ДНК, способные к обеспечению отборного преимущества перед родительской клеткой, молекулы ДНК, необходимые в качестве меток для идентификации трансформированных клеток, отрицательные системы выбора, агенты для специфического связывания клетки (например, агенты для нацеливания на клетки), специфические факторы интернализации клетки и факторы транскрипции для усиления экспрессии вектора,а также факторы, позволяющие изготовлять вектор. Средства поставки гена к клетке или ткани in vivo или ex vivo включают (без ограничения) прямую инъекция простой ДНК, баллистические методы, опосредованную липосомой передачу, опосредованную рецептором передачу (комплекса ДНК-лиганд), электропорацию и осаждение фосфатом кальция, как описано, например, в пат. США 4970154, WO 96/40958, пат. США 5679559, пат. США 5676954,и пат. США 5593875, описания которых включены сюда в виде ссылок. Они также включают использование вирусного вектора типа ретровируса, аденовируса, адено-связанного вируса, вируса сифилиса,лентивируса, вируса папилломы или вируса герпеса простого, использование конъюгата ДНК-белок и- 28007203 использование липосомы. Использование векторов генной терапии описано, например, пат. США 5672344, пат. США 5399346, пат. США 5631236 и пат. США 5635399, содержания которых включены сюда в виде ссылок. Ген, кодирующий пептид NTP, можно вводит пациентам, путем внедрения некоторых клеток, которые проектировались генетически ex vivo для экспрессии и секреции пептида NTP или их фрагментов,вариантов, гомологов или производных, используя для этого методы типа описанных здесь. Такие клетки могут быть животными или человеческими клетками и могут быть получены из собственной ткани пациента или из другого источника, человеческого или нечеловеческого. При желании, клетки могут быть иммобилизованы или они могут быть стволовыми клетками. Однако чтобы уменьшить шанс на иммунологическую ответную реакцию, предпочитают инкапсулировать клетки, уменьшая инфильтрацию в окружающие ткани. В качестве материала для инкапсуляции обычно используют биологически совместимые, полупроницаемые полимерные оболочки или мембраны, которые позволяют выделить белковый продукт(ы), но предотвращают разрушение клеток посредством иммунной системы пациента или другими вредными факторами окружающих тканей. Методы, используемые для мембранной инкапсуляции клеток, знакомы специалистам, а подготовка инкапсулированных клеток и их имплантация в организм пациентов может быть достигнута без неуместного экспериментирования. См., например, патенты США 4892538; 5011472 и 5106627, содержания которых включены сюда в виде ссылок. Система инкапсуляции живых клеток описана в заявке PCT, WO 91/10425, описание которой включено сюда в виде ссылки. Методы формулирования разнообразных других форм с замедленным или регулируемым высвобождением медикамента, типа носителей липосом, биоэродируемых частиц или бусинок также известны специалистам и описаны, например, в патенте США 5653975, который включен сюда в виде ссылки. Клетки, инкапсулированные или без герметизации, могут быть внедрены в подходящие ткани тела или органы пациента. Следующие примеры приведены для иллюстрации данного изобретения. Следует, однако, отметить, что изобретение не должно быть ограничено определенными условиями или деталями, описанными в этих примерах. На протяжении всего описания данного изобретения, все ссылки на публично доступные документы, включая патенты США, специально включены в описание посредством ссылок. В частности, это изобретение определенно включает в виде ссылки примеры, содержавшиеся в патентной заявке США 10/092934, Методы лечения опухолей и родственных заболеваний, предусматривающие использование белков нервных нитей, которые показывают, что целевой белок AD7c-NTP - эффективный агент для уничтожения клеток, как in vitro в глиоме и клеточных культурах нейробластомы,так и in vivo в нормальной ткани мышцы грызуна, подкожной соединительной ткани и дермисе, а также в разнообразии различных опухолей человеческого и нечеловеческого происхождения, включая грудную карциному, карциному кожи и папиллому, карциному толстой кишки, глиому мозга и другие опухоли в модельных экспериментах с грызунами. Это изобретение также определенно включает в виде ссылок примеры, содержащиеся в патентных заявках США:10/153334, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток;10/198069, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток; и 10/198070, озаглавленной Пептиды, эффективные в лечении опухолей и других заболеваний, требующих удаления или разрушения клеток, которые показывают, что фрагменты AD7c-NTP, гомологичные AD7c-NTP белки, пептиды NTP и белки NTP - эффективные агенты для уничтожения клеток in vivo в нормальной ткани мышцы грызуна, подкожной соединительной ткани, дермисе и другой ткани. Пример 1. Цель этого примера состояла в том, чтобы определить влияние пептида NTP [122]1 на ткани, на участках инъекции. Крысы самцы Спрагу-Долея (весом в пределах 300 г), были анестезированы эфиром и им был введен пептид NTP[122]1 путем инъекции в простату после открытой хирургической визуализации простаты. Инъекции состояли из 300 мкл пептида NTP[122]1, 1 мг/мл в PBS рН 7.4. (1,0 мг/кг) (n = 8),контрольные инъекции только PBS (n = 6) и контроля без инъекции (n = 2). После 72 ч крыс безболезненно умерщвляли. Предстательные железы были нарезаны, фиксированы в 10% буферированном формалине в течение 24 ч, залиты в парафин, приготовлены срезы и окрашены реагентом HE. Для каждого животного целая железа простаты была залита и нарезана. Все окрашенные срезы были исследованы гистологически и измерены. Для каждой простаты были исследованы по крайней мере 4 гистологических среза, и для каждого гистологического среза были измерены два диаметра (D) поперечного сечения, в 90 друг от друга (общее количество 8 измерений на каждую простату). Средний диаметр этих измерений для каждой простаты использовался для оценки объема, согласно формуле Результаты: сокращение объема простаты у крыс, инъецированных пептидом NTP[122]1, согласно проведенным измерениям, составляло в среднем 45% по сравнению с контролем (там не было никаких заметных различий между контролем, инъецированными только PBS и контролем без инъекций). В простате подвергшихся лечению крыс наблюдались обширная потеря железистого эпителия,- 29007203 сглаживания и атрофии. Открытые инфузии в простату крысы пептида NTP[122]1 в PBS рН 7.4, 1,0 мг/кг вызвали сокращение объема простаты 40% по сравнению с простатой не подвергшихся лечению животных или и инъецированных только PBS в течение 72 ч. Пример 2. Цель этого примера состояла в том, чтобы определить влияние пептида NTP[112]1 на ткани в участках инъекции. Крысы самцы Спрагу-Долея (весом в пределах 300 г) были анестезированы эфиром и им был введен пептид NTP[112]1 путем инъекции в простату после открытой хирургической визуализации простаты. Инъекции состояли из 300 мкл пептида NTP[112]1, 1 мг/мл в PBS рН 7.4 (1,0 мг/кг) (n = 4),контрольные инъекции только PBS (n = 3) и контроля без инъекции (n = 1). После 72 ч крыс безболезненно умерщвляли. Предстательные железы были нарезаны, фиксированы в 10% буферированном формалине в течение 24 ч, залиты в парафин, приготовлены срезы и окрашены реагентом HE. Для каждого животного целая железа простаты была залита и нарезана. Все окрашенные срезы были исследованы гистологически и измерены. Для каждой простаты были исследованы по крайней мере 4 гистологических среза и для каждого гистологического среза были измерены два диаметра (D) поперечного сечения, в 90 друг от друга (общее количество 8 измерений на каждую простату). Средний диаметр этих измерений для каждой простаты использовался для оценки объема, согласно формуле Контролем служили те же, что и в примере 1. Результаты: как в вышеупомянутом примере 1, инъекция NTP [112] пептида 1 вызвала существенное уменьшение клетки и атрофию в простате за 72 ч. Контрольные образцы показали отсутствие изменений или минимальные изменения, состоящие из слабых фокальных микро-воспалений, вызванных иглами. Пример 3. Цель этого примера состояла в том, чтобы определить влияние описанных выше пептидов NTP на ткани на участках инъекции. Восьми нормальным крысам были введены через кожу и подкожно описанные выше NTP [122] пептиды 1-8, NTP [112] пептиды 1-7, NTP [106] пептиды 1-7, NTP [98] пептиды 1-6, NTP [75] пептиды 15, NTP [68] пептиды 1-4 и NTP [61] пептиды 1-4, каждый в четырех различных центрах и в оконечности скелетной мышцы, каждый в двух различных центрах, в виде солевого раствора в количествах 100-400 мл при концентрациях 0,1-1 мг/мл путем иньекции из пластмассовых шприцов, снабженных иглами калибра 26 из нержавеющей стали. Животных наблюдали в течение 24 ч и затем безболезненно умерщвляли. Индивидуальные центры инфильтрации были нарезаны, фиксированы в 10%-м формалине, залиты в парафин, окрашены и исследованы стандартными гистопатологическими методами. Аналогичным группам контрольных крыс были введены: (1) 0,1% солевой раствор бычего сывороточного альбумина, (2) нормальная сыворотка человека, (3) физиологический раствор, (4) неинфекционные бактериальные белки и (5) очищенные контрольные пептиды. Затем крыс исследовали и умершвляли, центры инфильтрации были нарезаны и обработаны, как это указано выше. Результаты: инъекция NTP [122] пептидов 1-8, NTP [112] пептидов 1-7, NTP [106] пептидов 1-7,NTP [98] пептидов 1-6, NTP [75] пептидов 1-5, NTP [68] пептидов 1-4 и NTP [61] пептидов 1-4 во всех примерах вызывала обширный острый некроз ткани на участках инъекции. Некроз очевиден в ткани мышцы, подкожной соединительной ткани и дермисе на участках, где был введен пептид NTP. За 24 ч клетки кажутся бледными, сморщенными и некротическими и наблюдается инфильтрация в воспаленных клетках. Некроз коррелирует с областями инъекции, и кажется, не распространяется далеко вне участка инъекции. Кроме областей умеренного воспаления, контроль не показал никаких свидетельств некроза или потери клетки. В отличие от инъекций пептида NTP, где целые области слоев ткани мышцы были некротические, контроль показал отсутствие изменений или минимальные изменения мышцы. У контрольных инъекций в местах иньекции наблюдались минимальные или умеренные острые воспаления и изменения,состоящие из фокальных микро-кровоизлияний, вызванных иглами. Специалисту будет очевидно, что могут быть предложены различные модификации и изменения по методам и составам данного изобретения, не отступая от сущности и границ изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Пептид NTP, выбранный из группы, включающей:a) пептид, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO.8 (Ile-Asp-Gln-GlnVal-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu);b) пептид, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO.9 (Met-Met-Val-CysTrp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile);c) пептид, представленный аминокислотной последовательностью SEQ ID NO.10 (Ser-Ala-Ile-Phe- 30