Новые оксабиспидиновые соединения, полезные при лечении сердечных аритмий

005319 Область изобретения Данное изобретение относится к новым фармацевтически пригодным соединениям, в частности к соединениям, которые полезны при лечении сердечных аритмий. Предшествующий уровень техники Сердечные аритмии можно определить как отклонения от нормы в скорости, регулярности или источнике возникновения сердечного импульса либо как нарушения проводимости, которые вызывают патологическую последовательность активации. С точки зрения клиники аритмии можно классифицировать по предположительному месту их возникновения (то есть наджелудочковые, включая предсердные и предсердножелудочковые, аритмии и желудочковые аритмии) и/или по скорости (то есть брадиаритмии (медленные) и тахиаритмии (быстрые. Отрицательный результат некоторых клинических испытаний (см., например результат испытания по подавлению сердечной аритмии (Cardiac Arrhythmia Suppression Trial (CAST, изложенный в NewEngland Journal of Medicine, 321, 406 (1989 при лечении сердечных аритмий традиционными противоаритмическими лекарствами, действующими главным образом путем снижения скорости проведения(противоаритмические лекарства класса I), побуждает направить разработку лекарств на соединения,которые селективно замедляют сердечную реполяризацию, тем самым увеличивая интервал QT. Противоаритмические лекарства класса III могут быть определены как лекарства, увеличивающие продолжительность транс-мембранного потенциала действия (что может быть вызвано блоком направленных наружу потоков K+ или увеличением направленных внутрь ионных потоков) и рефрактерности без эффекта на сердечную проводимость. Известно, что одним из ключевых недостатков известных до настоящего времени лекарств, которые действуют, замедляя реполяризацию (класс III или другие) является то, что все они проявляют уникальную форму проаритмии, известную как torsades de pointes (трепетание-мерцание), которая иногда может заканчиваться смертельным исходом. С точки зрения безопасности сведение к минимуму этого явления(для которого также было показано, что оно проявляется в результате введения несердечных лекарств,таких как фенотиазины, трициклические антидепрессанты, антигистаминные средства и антибиотики) представляет собой ключевую проблему, которую нужно решить при обеспечении эффективными противоаритмическими лекарствами. Противоаритмические лекарства на основе биспидинов (3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанов) известныinter alia из международных заявок на патент WO 91/07405 и WO 99/31100, заявок на европейский патент 306871, 308843 и 665228 и патентов США 3962449, 4556662, 4550112, 4459301 и 5468858, равно как и из статей в журналах, включая inter alia J. Med. Chem. 39, 2559 (1996), Pharmacol. Res., 24, 149 (1991), Circulation, 90, 2032 (1994) и Anal. Sci. 9, 429 (1993). Ни в одном из этих документов оксабиспидиновые соединения не описываются и не предполагаются. В Chem. Ber., 96, 2827 (1963) описаны некоторые оксабиспидиновые соединения как редкость. О том, что эти соединения могут быть использованы при лечении аритмий, не упоминается и не предполагается этого. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что новая группа соединений на основе оксабиспидина проявляет электрофизиологическую активность, предпочтительно электрофизиологическую активность класса III, и вследствие этого ожидается, что они могут быть полезными при лечении сердечных аритмий. Описание изобретения Согласно данному изобретению предложены соединения формулы I где R1 представляет собой С 1-12 алкил (причем алкильная группа возможно замещена и/или оканчивается одной или более чем одной группой, выбранной из галогено, циано, нитро, С 6-С 10-арила, Het1,-C(O)R5a, -OR5b, -N(R6)R5c, -C(O)XR7, -C(O)N(R8)R5d и -S(O)2R9), либо R1 представляет собой -C(O)XR7,-C(O)N(R8)R5d или -S(O)2R9; радикалы от R5a до R5d независимо представляют собой в каждом случае Н, C1-6 алкил (причем последняя группа возможно замещена и/или оканчивается одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано, нитро, С 6-С 10-арила и Het2), С 6-С 10-арил или Het3, либо R5d вместе с R8 представляет собой С 3-6 алкилен (причем алкиленовая группа возможно прервана атомом О и/или возможно замещена одной или более чем одной C1-3 алкильной группой);R6 представляет собой Н, С 1-6 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано, нитро и С 6-С 10-арила), С 6-С 10-арил,-C(O)R10a, -C(O)OR10b или -C(O)N(H)R10c;R10a, R10b и R10c независимо представляют собой C1-6 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано, нитро и С 6 С 10-арила), С 6-С 10-арил, либо R10a представляет собой Н;R7 представляет собой С 1-12 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано, нитро, С 6-С 10-арила, С 1-6 алкокси и Het4);R8 представляет собой Н, С 1-12 алкил, С 1-6 алкокси (причем две последние группы возможно замещены и/или оканчиваются одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано,нитро, С 1-4 алкила и C1-4 алкокси), -D-С 6-С 10-арил, -D-С 6-С 10-арилокси, -D-Het5, -D-N(H)C(O)R11a,-D-S(O)2R12a, -D-C(O)R11b, -D-C(O)OR12b, -D-C(O)N(R11c)R11d, либо R8 вместе с R5d представляет собой С 3-6 алкилен (причем алкиленовая группа возможно прервана атомом О и/или возможно замещена одной или более чем одной С 1-3 алкильной группой); радикалы от R11a до R11d независимо представляют собой Н, С 1-6 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано, нитро и С 6-С 10-арила), С 6-С 10-арил, либо R11c и R11d вместе представляют собой С 3-6 алкилен;R9, R12a и R12b независимо представляют собой С 1-6 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено, циано, нитро и С 6-С 10 арила) или С 6-С 10-арил;D представляет собой прямую связь или С 1-6 алкилен;R3 представляет собой Н, С 1-6 алкил или вместе с R2 представляет собой =O;R15 представляет собой Н, С 1-6 алкил, -Е-С 6-С 10-арил или -C(O)R16d; радикалы от R16a до R16d независимо представляют собой, в каждом случае когда используются здесь, С 1-6 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, С 6-С 10-арила и Het7), С 6-С 10-арил, Het8, либо R16a и R16d независимо представляют собой Н;R17a и R17b независимо представляют собой, в каждом случае когда используются здесь, Н или С 1-6 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, С 6-С 10-арила и Het9), С 6-С 10-арил, Het10, либо вместе представляют собой С 3-6 алкилен, возможно прерванный атомом О; Е представляет собой, в каждом случае когда используется здесь, прямую связь или С 1-4 алкилен; р представляет собой 1 или 2; радикалы от Het1 до Het10 независимо представляют собой пяти-двенадцатичленные гетероциклические группы, содержащие один или более чем один гетероатом, выбранный из кислорода, азота и/или серы, причем эти группы возможно замещены одним или более чем одним заместителем, выбранным из-ОН, оксо, галогено, циано, нитро, С 1-6 алкила, С 1-6 алкокси, С 6-С 10-арила, С 6-С 10-арилокси, -N(R18a)R18b,-C(O)R18c, -C(O)OR18d, -C(O)N(R18e)R18f, -N(R18g)C(O)R18h и -N(R18i)S(O)2R18j; радикалы от R18a до R18j независимо представляют собой С 1-6 алкил, С 6-С 10-арил, либо радикалы от 18aR до R18i независимо представляют собой Н; А представляет собой прямую связь, -J-, -J-N(R19)- или -J-O- (причем в последних двух группах 19J представляет собой С 1-6 алкилен, возможно замещенный одним или более чем одним заместителем, выбранным из -ОН, галогено и амино;Z представляет собой прямую связь или С 1-4 алкилен;R19 и R20 независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил;G представляет собой СН или N;R4 представляет собой один или более чем один возможный заместитель, выбранный из -ОН, циано,галогено, нитро, С 1-6 алкила (возможно оканчивающегося -N(H)C(O)OR21a), С 1-6 алкокси, -N(R22a)R22b,-2 005319-C(O)R22c, -C(O)OR22d, -C(O)N(R22e)R22f, -N(R22g)C(O)R22h, -N(R22i)C(O)N(R22j)R22k, -N(R22m)S(O)2R21b,-S(O)2R21c и/или -OS(O)2R21d; радикалы от R21a до R21d независимо представляют собой С 1-6 алкил;R22a и R22b независимо представляют собой Н, С 1-6 алкил или вместе представляют собой С 3-6 алкилен, давая в результате четырех-семичленное азотсодержащее кольцо; радикалы от R22c до R22m независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил и радикалы от R41 до R46 независимо представляют собой Н или С 1-3 алкил; причем каждая С 6-С 10-арильная или С 6-С 10-арилоксигруппа, если не указано иное, возможно замещена заместителями в количестве от одного до трех, выбранными из -ОН, галогено, циано, нитро,С 1-6 алкила, С 1-6 алкокси, -N(R22a)R22b, -C(O)R22c, -C(O)OR22d, -C(O)N(R22e)R22f, -N(R22g)C(O)R22h,-N(R22m)S(O)2R21b, -S(O)2R21c и/или -OS(O)2R21d, при условии, что(а) данное соединение не является: 3,7-дибензоил-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонаном;(1) J не представляет собой С 1 алкилен; и(2) В не представляет собой -N(R20)-, -N(R20)-Z- (причем в последней группе N(R20) присоединен к углеродному атому, несущему R2 и R3), -S(O)n-, -О- или -N(R20)C(O)O-Z-, когда R2 и R3 не представляют собой вместе =O; и(в) когда R2 представляет собой -OR13 или -N(R14)(R15), тогда: (1) А не представляет собой -J-N(R19)или -J-O-; и(2) В не представляет собой -N(R20)-, -N(R20)-Z- (причем в последней группе N(R20) присоединен к углеродному атому, несущему R2 и R3), -S(O)n-, -О- или -N(R20)C(O)O-Z-; или его фармацевтически приемлемое производное. Предпочтительные соединения по изобретению включают в себя соединения формулы I, где радикалы от R41 до R46 независимо представляют собой Н. Предпочтительными соединениями по изобретению также являются описанные выше соедиинения,где R1 представляет собой С 1-8 алкил (причем алкильная группа возможно замещена и/или оканчивается одной или более чем одной группой, выбранной из галогено, возможно замещенного С 6-С 10-арила, возможно замещенного Het1, -C(O)R5a, -OR5b, -N(R6)R5c, -C(O)N(R8)R5d и -S(O)2R9), или R1 представляет собой -C(O)OR7, -C(O)N(R8)R5d или -S(O)2R9. Согласно еще одному аспекту изобретения, предпочтительными являются те соединения по изобретению, где радикалы от R5a до R5d независимо представляют собой, в каждом случае, Н, С 1-6 алкил (причем последняя группа возможно замещена и/или оканчивается одним или более чем одним заместителем,выбранным из галогено, циано, нитро и С 6-С 10 арила), С 6-С 10 арил (причем последняя группа возможно замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, гидрокси, циано, нитро,N(R22a)R22b (причем в последней группе R22a и R22b вместе представляют собой С 3-6 алкилен), C1-4 алкила и С 1-4 алкокси (причем последние две группы возможно замещены одним или более чем одним атомом галогена, Het3, либо R5d вместе с R8 представляет собой С 4-5 алкилен (причем алкиленовая группа возможно прервана атомом О). Также предпочтительны охарактеризованные выше соединения по изобретению, где R6 представляет собой Н, С 1-6 алкил, С 6-С 10-арил (причем последняя группа возможно замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, циано, нитро, С 1-4 алкила иС 1-4 алкокси), -C(O)R10a,-C(O)OR10b или -C(O)N(H)R10c (где R10c представляет собой С 1-4 алкил). Предпочтительными также являются соединения по изобретению, где R8 представляет собой Н, С 1-6 алкил (причем последняя группа возможно замещена и/или оканчивается одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, циано и нитро), -D-С 6-С 10-арил, -D-С 6-С 10-арилокси, -D-Het5, -DN(H)C(O)R11a, -D-C(O)R11b, либо R8 вместе с R5d представляет собой С 4-5 алкилен (причем алкиленовая группа возможно прервана атомом О). Еще одной группой предпочтительных соединений по изобретению являются соединения формул I,где R7 представляет собой С 1-6 алкил, возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, С 6-С 10-арила, С 1-4 алкокси и Het4. Предпочтительны также соединения по изобретению, где R9 представляет собой С 1-6 алкил (возможно замещенный одной или более чем одной галогеногруппой) или С 6-С 10-арил (причем последняя группа возможно замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из С 1-4 алкила, С 1-4 алкокси, галогено, нитро и циано). Еще одной группой предпочтительных воплощений являются соединения по изобретению, где D представляет собой прямую связь или С 1-3 алкилен. Также предпочтительными являются соединения по изобретению, где R10a и R10b представляют собой С 1-4 алкил (возможно замещенный одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено и С 6-С 10-арила) или С 6-С 10-арил (причем последняя группа возможно замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, циано, нитро, С 1-4 алкила и С 1-4 алкокси).-3 005319 Предпочтительными также являются соединения по изобретению, где R11a и R11b независимо представляют собой С 1-4 алкил (возможно замещенный и/или оканчивающийся одним или более чем одним заместителем, выбранным из галогено, циано, нитро и С 6-С 10-арила) или С 6-С 10-арил. Также предпочтительны соединения, где R2 представляет собой Н, галогено, C1-3 алкил, -OR13,-N(H)R14 или вместе с R3 представляет собой =O. Другой группой препочтительных воплощений являются соединения формулы I, где R3 представляет собой Н, C1-3 алкил или вместе с R2 представляет собой =O. Предпочтительны также соединения формулы I, где R13 представляет собой Н, С 1-4 алкил, -Е-С 6-С 10 арил (возможно замещенный одним или более чем одним заместителем, выбранным из циано, галогено,нитро, С 1-4 алкила и С 1-4 алкокси) или -E-Het6. Также предпочтительными соединениями являются соединения формулы I, где R14 представляет собой Н, С 1-6 алкил, -Е-С 6-С 10-арил (причем С 6-С 10-арильная группа возможно замещена одним или более чем одним заместителем, выбранным из циано, галогено, нитро, С 1-4 алкила и С 1-4 алкокси), -C(O)R16a,-C(O)OR16b, -S(O)2R16c, -C(O)N(R17a)R17bили -C(NH)NH2. В еще одних предпочтительных соединениях по изобретению радикалы от R16a до R16c независимо представляют собой С 1-6 алкил, либо R16a представляет собой Н. Другой группой предпочтительных соединений являются соединения формулы I, где R17a и R17b независимо представляют собой Н или С 1-4 алкил. Также предпочтительны соединения формулы I, где Е представляет собой прямую связь или С 1-2 алкилен. Также предпочтительны соединения формулы I, где радикалы от Het1 до Het6 возможно замещены одним или более чем одним заместителем, выбранным из оксо, галогено, циано, нитро, С 1-4 алкила, С 1-4 алкокси, -N(R18a)R18b, -C(O)R18c или -C(O)OR18d. Также предпочтительны соединения формулы I, где радикалы от R18a до R18d независимо представляют собой Н, С 1-4 алкил или С 6-С 10-арил. Также предпочтительны соединения формулы I, где А представляет собой -J-, -J-N(R19)- или -J-O-. Также предпочтительны соединения формулы I, где В представляет собой -Z-, -Z-N(R20)-,20-N(R )-Z-, -Z-S(O)n-, -Z-O- или -N(R20)C(O)O-Z-. Согласно еще одному аспекту, препочтительным является, если в соединениях по изобретению J представляет собой С 1-4 алкилен. Согласно следующему аспекту, препочтительным является, если в соединениях по изобретению Z представляет собой прямую связь или С 1-3 алкилен. Согласно еще одному аспекту, препочтительным является, если в соединениях по изобретению n представляет собой 0 или 2. Согласно следующему аспекту, препочтительным является, если в соединениях по изобретению R19 20 и R (как подходит) представляют собой Н или С 1-4 алкил. Также предпочтительны соединения по изобретению, в которых, когда G представляет собой N, G находится в орто- или пара-положении относительно точки присоединения В. Также предпочтительны соединения по изобретению, в которых, когда G представляет собой N, R4 отсутствует или представляет собой единичную цианогруппу. Согласно еще одному аспекту изобретения предпочтительны соединения формулы I, где R4 выбран из -ОН, циано, галогено, нитро, С 1-6 алкила, С 1-6 алкокси, -C(O)N(R22e)R22f, -N(R22g)C(O)R22h и/или-N(R22m)S(O)2-С 1-4 алкил. Из этих соединений предпочтительны те, где R4 представляет собой одну или две цианогруппы в орто- и/или пара-положении относительно В. Предпочтительными соединения по изобретению также являются соединения формулы I, где радикалы от R22e до R22m независимо представляют собой Н или С 1-4 алкил. Также предпочтительны соединения, где G представляет собой СН. Согласно еще одному аспекту предложено конкретно соединение, выбранное из группы, включающей 4-2-[7-(3,3-диметил-2-оксобутил)-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-ил]этилбензонитрил; 7-[4-(4-цианофенил)-4-(3,4-диметоксифенокси)бутил]-N-этил-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонан 3-карбоксамид; 4-(3-[7-(3,3-диметил-2-оксобутил)-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-ил]пропиламино)бензонитрил; 4-3-[7-(4-фторбензил)-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-ил]-2-гидроксипропоксибензонитрил; 4-(2-7-[2-(4-метоксифенил)-2-оксоэтил]-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-илэтокси)бензонитрил; 4-[2S)-2-амино-3-7-[2-(1 Н-пиррол-1-ил)этил]-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-илпропил) окси]бензонитрил; трет-бутил 2-7-[3-(4-цианоанилино)пропил]-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-илэтилкарбамат; трет-бутил 2-7-[4-(4-цианофенил)бутил]-9-окса-3,7-диазабицикпо[3.3.1]нон-3-илэтилкарбамат;(m/z = 437); трет-бутил 2-[7-(2-4-[(метилсульфонил)амино]феноксиэтил)-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон 3-ил]этил карбамат; трет-бутил 2-7-[2-(4-аминофенокси)этил]-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-илэтилкарбамат; 4-(3-[7-(фенилсульфонил)-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-ил]пропиламино)бензонитрил и 4-(3-[7-(3,3-диметил-2-оксобутил)-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нон-3-ил]пропиламино)бензамид. Согласно изобретению предложен также фармацевтический препарат, включающий в себя соединение по изобретению, охарактеризованное выше, в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом,разбавителем или носителем. Согласно следующему аспекту предложен фармацевтический препарат, содержащий соединение по изобретению, как оно охарактеризовано выше, для применения в профилактике или лечении аритмии. Далее предложено применение соединения по изобретению, как оно охарактеризовано выше, в качестве фармацевтического средства. Также предложено применение соединения по изобретению, как оно охарактеризовано выше, в профилактике или лечении аритмии. Согласно следующему аспекту изобретения предложено применение соединения по изобретению,как оно охарактеризовано выше, в качестве активного ингредиента для производства лекарственного средства для применения в профилактике или лечении аритмии. Одним из воплощений является указанное применение, где аритмия представляет собой предсердную или желудочковую аритмию. Согласно еще одному аспекту изобретения предложен способ профилактики или лечения аритмии,при котором субъекту, страдающему от такого состояния или подверженного ему, вводят терапевтически эффективное количество соединения по изобретению, как оно охарактеризовано выше. Согласно следующему аспекту, предложены соединения формулы I, гдеR1 представляет собой -S(O)2R9, где R9 представляет собой возможно замещенный фенил; все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н; G представляет собой СН; А представляет собой прямую связь; В представляет собой прямую связь; R2 представляет собой Н или С 1-6 алкил; R3 представляет собой Н или С 1-6 алкил; и/или R4 отсутствует или представляет собой галогено-, метильные, метокси- или нитрогруппы в количестве от одной до трех. Из этих соединений, согласно следующему аспекту, предпочтительны те, где R9 представляет собой 2- или 4-фторфенил, 2- или 4-хлорфенил, 4-бромфенил, 4 метилфенил, 4-метоксифенил, 2- или 4-нитрофенил, 2,4,6-триметилфенил или незамещенный фенил,наиболее предпочтительны те, где R2 и R3 оба представляют собой Н, R4 отсутствует, a R9 представляет собой незамещенный фенил. Согласно еще одному аспекту изобретения предложено соединение формулы II или его защищенное производное, где R2, R3, R4, радикалы от R41 до R46, А, В и G такие, как определено выше для соединений формулы I; возможно в форме соли и/или сольвата. Предпочтительным со-8 005319 единением является такое соединение формулы II, где все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н;G представляет собой СН; А представляет собой прямую связь; В представляет собой прямую связь; R2 представляет собой Н или С 1-6 алкил; R3 представляет собой Н или С 1-6 алкил; и/или R4 отсутствует или представляет собой галогено-, метильные, метокси- или нитрогруппы в количестве от одной до трех. Более предпочтительно такое соединение, где R2 и R3 оба представляют собой Н, a R4 отсутствует. Для указанных соединений формулы II предпочтительно, если соль является солью гидрохлоридом, сульфатом или гемисульфатом. Также предпочтительно, если соль ялвяется является дигидрохлоридом, гидратом дигидрохлорида или полугидратом. Согласно еще одному аспекту предложено соединение формулы IV или его защищенное производное, где R2, R3, R4, радикалы от R41 до R46, А, В и G такие, как определено выше для соединений формулы I, a L1 представляет собой уходящую группу. Также согласно изобретению предложено соединение формулы VII или его защищенное производное, где R1 и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше для соединений формулы I; при условии, что R1 не представляет собой -S(O)2R9, где R9 представляет собой незамещенный фенил. Предложено также соединение формулы X или его защищенное производное, где R1, R2, R3, радикалы от R41 до R46, А и Z такие, как определено выше для соединения формулы I. Предложено также соединение формулы XIV или его защищенное производное, где R1, R3, R4, радикалы от R41 до R46, А, В и G такие, как определено выше для соединения формулы I, a L2 представляет собой уходящую группу. Также предложено соединение формулы XV-9 005319 или его защищенное производное, где R1, R3, R4, радикалы от R41 до R46, А, В, Е и G такие, как определено выше для соединения формулы I. Также предложено соединение формулы XX или его защищенное производное, где R1, R2, R3, R20, радикалы от R41 до R46 и J такие, как определено выше для соединения формулы I. Согласно еще одному аспекту предложено соединение формулы XXIII или его защищенное производное, где R1a представляет собой -C(O)XR7, -C(O)N(R8)R5d или-S(O)2R9, a R5d, R7, R8, R9 и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше для соединения формулыI, и L2 представляет собой уходящую группу; при условии, что L2 не представляет собой иодо. Также предложено соединение формулы XXXIX или его защищенное производное, где R1a представляет собой -C(O)XR7, -C(C)N(R8)R5d или-S(O)2R9, a R5d, R7, R8, R9 и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше для соединения формулы I. Согласно следующему аспекту изобретения предложено соединение формулы XLII или его защищенное производное, причем данное соединение является энантиомерно (или диастереомерно) обогащенным по углеродным атомам, к которым присоединены заместители R43 и R44, R1a представляет собой -C(O)XR7, -C(O)N(R8)R5d или -S(O)2R9, a R5d, R7, R8, R9 и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше для соединения формулы I. Далее, согласно изобретению предложен способ получения соединения формулы XXIII, как оно определено выше, где L2 представляет собой галогено, при котором соединение формулы XXXIX, как оно определено выше, подвергают взаимодействию с галогенирующим агентом. Предпочтительно, когда в данном способе галогенирующий агент является трифенилфосфином или бис(дифенилфосфино)этаном,объединенным с галогеном, при этом предпочтительно, если указанный галоген является иодом. Согласно изобретению предложен способ получения соединения формулы XXXIX, при котором соединение формулы XLII подвергают взаимодействию с водой. В предпочтительном аспекте в соединениях формул XXXIX и XLII R1a представляет собой -S(O)2R9. Также предпочтительно, если R9 представляет собой возможно замещенный фенил. В описанном способе предпочтительно, если взаимодействие осуществляют в присутствии кислотного катализатора, при этом предпочтительно, если кислотный катализатор является серной кислотой. Согласно еще одному аспекту изобретения предложен способ получения соединения формулыXLII, как оно определено выше, при котором соединение формулы XLIII где волнистая связь показывает возможную R-, S- или смешанную R- и S-стереохимическую конфигурацию у асимметрического углеродного атома, a R41, R43, R45 такие, как определено выше для соединений формулы I, и L2 представляет собой уходящую группу, подвергают взаимодействию с соединением формулы XLIV- 10005319 причем данное соединение формулы XLIII является энантиомерно обогащенным по углеродному атому, к которому присоединен заместитель R43, а R1a представляет собой -C(O)XR7, -C(O)N(R8)R5d или-S(O)2R9, и R5d, R7, R8 и R9 такие, как определено выше для соединений формулы I. В данном способе взаимодействие предпочтительно осуществляют в присутствии основания, при этом основание предпочтительно является гидроксидом натрия. Также в предпочтительно аспекте способ осуществляют в присутствии воды в качестве растворителя. Если не указано иное, алкильные группы и алкоксигруппы, как они определены здесь, могут быть с прямой цепью или, когда имеется достаточное количество (то есть как минимум три) углеродных атомов,быть с разветвленной цепью и/или быть циклическими. Кроме того, когда имеется достаточное количество (то есть как минимум четыре) углеродных атомов, такие алкильные или алкоксигруппы также могут быть частично циклическими/ациклическими. Такие алкильные или алкоксигруппы могут также быть насыщенными или, когда имеется достаточное количество (то есть как минимум два) углеродных атомов, быть ненасыщенными и/или прерванными одним или более чем одним атомом кислорода и/или серы. Если не указано иное, алкильные и алкоксигруппы также могут быть замещены одним или более чем одним атомом галогена и, в особенности, фтора. Если не указано иначе, алкиленовые группы, как они определены здесь, могут быть с прямой цепью или, когда имеется достаточное количество (то есть как минимум два) углеродных атомов, могут быть с разветвленной цепью. Такие алкиленовые цепи также могут быть насыщенными или, когда имеется достаточное количество (то есть как минимум два) углеродных атомов, быть ненасыщенными и/или прерванными одним или более чем одним атомом кислорода и/или серы. Если не указано иное, алкиленовые группы также могут быть замещены одним или более чем одним атомом галогена. Во избежание неопределенности, упомянутые здесь арилоксигруппы присоединены к остальной части молекулы через атом О оксигруппы. Арильные и арилоксигруппы, когда они замещены, предпочтительно замещены заместителями в количестве от одного до трех. Термин галогено, когда он используется здесь, включает фторо, хлоро, бромо и иодо. Группы Het (Het1, Het2, Het3, Het4, Het5, Het6, Het7, Het8, Het9 и Het10), которые могут быть упомянуты, включают группы, содержащие от 1 до 4 гетероатомов (выбранных из группы кислорода, азота и/или серы), и в которых общее количество атомов в кольцевой системе составляет от пяти до двенадцати. По характеру группы Het (Het1, Het2, Het3, Het4, Het5, Het6, Het7, Het8, Het9 и Het10) могут быть полностью насыщенными, целиком ароматическими, частично ароматическими и/или бициклическими. Гетероциклические группы, которые могут быть упомянуты, включают бенздиоксанил, бенздиоксепанил, бенздиоксолил, бензофуранил, бензимидазолил, бензморфолинил, бензоксазинонил, бензотиофенил, хроманил,циннолинил, диоксанил, фуранил, имидазолил, имидазо[1,2-а]пиридинил, индолил, изохинолинил, изоксазолил, морфолинил, оксазолил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолил, пиридинил, пиримидинил, пироллидинонил, пирролидинил, пирролинил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, тиазолил, тиенил, тиохроманил, триазолил и тому подобное. Значения Het1, которые могут быть упомянуты, включают пиридинил, бенздиоксанил, имидазолил, имидазо[1,2-а]пиридинил, пиперазинил, пиразолил, пирролил, пирролидинил, тетрагидропиранил и тиазолил. Значения Het3, которые могут быть упомянуты, включают в себя бенздиоксанил и бензморфолинил. Значения Het4, которые могут быть упомянуты, включают в себя пиперазинил. Заместители на группах Het (Het1, Het2, Het3, Het4, Het5, Het6, Het7, Het8, Het9 и Het10) могут, когда подходит, располагаться на любом атоме в такой кольцевой системе, включая гетероатом. Место присоединения групп Het (Het1, Het2, Het3, Het4, Het5, Het6, Het7, Het8, Het9 и Het10) может быть любым атомом в такой кольцевой системе, включая гетероатом (когда подходит), или атомом на любом конденсированном карбоциклическом кольце, который может представлять собой часть кольцевой системы. Кроме того, группы Het (Het1, Het2, Het3, Het4, Het5, Het6, Het7, Het8, Het9 и Het10) могут находиться в N- или S-окисленной форме. Фармацевтически приемлемые производные включают в себя соли и сольваты. Соли, которые могут быть упомянуты, включают в себя соли присоединения кислот. Конкретные соли, которые могут быть упомянуты, включают соли арилсульфонаты, как, например, соли толуолсульфонат и, особенно,бензолсульфонат. Сольваты, которые могут быть упомянуты, включают гидраты, такие как моногидраты соединений по изобретению. Кроме того, фармацевтически приемлемые производные включают, по атомам азота оксабиспидина или пиридила (когда G представляет собой N), C1-4 алкильные четвертичные аммониевые соли и Nоксиды, при условии, что когда имеет место N-оксид, то:(а) никакие из групп Het (Het1, Het2, Het3, Het4, Het5, Het6, Het7, Het8, Het9 и Het10) не содержат неокисленный атом S; и/или(б) n не представляет собой 0, когда В представляет собой -Z-S(O)n-. Соединения по изобретению могут проявлять таутомерию. Все таутомерные формы и их смеси включены в объем данного изобретения.- 11005319 Кроме того, соединения по изобретению могут содержать один или более чем один асимметрический атом углерода и, следовательно, могут проявлять оптическую и/или диастереоизомерию. Диастереоизомеры могут быть разделены с использованием традиционных методик, например хроматографии или фракционной кристаллизации. Разные стереоизомеры могут быть выделены путем разделения рацемической или иной смеси соединений с использованием традиционных методик, например фракционной кристаллизации или высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Альтернативно, желаемые оптические изомеры могут быть получены путем взаимодействия соответствующих оптически активных исходных материалов в условиях, которые не будут приводить к рацемизации или эпимеризации,либо путем образования производных, например, с гомохиральной кислотой, с последующим разделением диастереомерных сложных эфиров традиционными способами (например ВЭЖХ, хроматографией на диоксиде кремния). Все стереоизомеры включены в объем данного изобретения. Список сокращения приводится в конце данного описания изобретения. Получение Согласно данному изобретению соединения формулы I можно получить способом, при котором:III 1 где L представляет собой уходящую группу, такую как галогено, алкансульфонат, перфторалкансульфонат, аренсульфонат, -OC(O)XR7, имидазол или R23O- (где R23 представляет собой, например, С 1-10 алкил или арил, причем эти группы возможно замещены одной или более чем одной галогено- либо нитрогруппой), а X, R1 и R7 такие, как определено выше, например, при температуре между комнатной и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например триэтиламина, карбоната калия или бикарбоната, такого как бикарбонат натрия) и соответствующего растворителя (например дихлорметана, хлороформа, ацетонитрила, N,N-диметилформамида, тетрагидрофурана (ТГФ), толуола, воды, низшего алкилового спирта (например этанола) или их смесей);(б) для соединений формулы I, где R1 представляет собой -C(O)XR7 или -C(O)N(R8)R5d, соединение формулы IVV 24 7 где R представляет собой -XR или -N(R8)R5d, a R5d, R7, R8 и X такие, как определено выше, например, в условиях, аналогичных описанным выше (стадия (а) способа);(в) для соединений, где R1 представляет собой -C(O)N(H)R8, соединение формулы II, как оно определено выше, подвергают взаимодействию с соединением формулы VIVI 8 где R такой, как определено выше, например, при температуре от 0 С до температуры дефлегмации в присутствии соответствующего органического растворителя (например дихлорметана) или посредством твердофазного синтеза в условиях, известных специалистам в данной области техники; где L2 представляет собой уходящую группу, такую как галогено, алкансульфонат (например мезилат), перфторалкансульфонат или аренсульфонат (например 2-или 4-нитробензолсульфонат, толуолсульфонат или бензолсульфонат), a R2, R3, R4, А, В и G такие, как определено выше, например, при повышенной температуре (например между 35 С и температурой дефлегмации) в присутствии подходящего основания (например триэтиламина или карбоната калия) и соответствующего органического растворителя (например ацетонитрила, дихлорметана, хлороформа, диметилсульфоксида, N,N-диметилформамида, низшего алкилового спирта (например этанола), изопропилацетата или их смесей);(д) для соединений формулы I, где А представляет собой СН 2, a R2 представляет собой -ОН или-N(H)R14, соединение формулы VII, как оно определено выше, подвергают взаимодействию с соединением формулы IX где Y представляет собой О или N(R14), a R3, R4, R14, В и G такие, как определено выше, например при повышенной температуре (например от 60 С до температуры дефлегмации) в присутствии подходящего растворителя (например низшего алкилового спирта (например ИПС), ацетонитрила или смеси низшего алкилового спирта и воды); е) для соединений формулы I, где В представляет собой -Z-O-, соединение формулы X где R4 и G такие, как определено выше, например, в условиях Мицунобу, например, при температуре между температурой окружающей среды (например 25 С) и температурой дефлегмации в присутствии третичного фосфина (например трибутилфосфина или трифенилфосфина), азодикарбоксилатного производного (например диэтилазодикарбоксилата или 1,1'-(азодикарбонил)дипиперидина) и соответствующего органического растворителя (например дихлорметана или толуола); ж) для соединений формулы I, где G представляет собой N, а В представляет собой -Z-O-, соединение формулы X, как оно определено выше, подвергают взаимодействию с соединением формулы XII,- 13005319 где R4 и L2 такие, как определено выше, например, между 10 С и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например гидрида натрия) и соответствующего растворителя (например N,N-диметилформамида); з) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -OR13, где R13 представляет собой С 1-6 алкил, -Е-арил или -E-Het6, соединение формулы I, где R2 представляет собой ОН, подвергают взаимодействию с соединением формулы XIIIXIII 13a где R представляет собой С 1-6 алкил, -Е-арил или -E-Het6, a E и Het6 такие, как определено выше,например, в условиях Мицунобу (например как описано выше в стадии (е) способа); и) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -OR13, где R13 представляет собой С 1-6 алкил, -Е-арил или -E-Het6, соединение формулы XIV где R1, R3, R4, радикалы от R41 до R46, А, В, G и L2 такие, как определено выше, подвергают взаимодействию с соединением формулы XIII, как оно определено выше, например, при температуре между температурой окружающей среды (например 25 С) и температурой дефлегмации в условиях Вильямсона(то есть в присутствии соответствующего основания (например KОН или NaH) и подходящего органического растворителя (например диметилсульфоксида или N,N-диметилформамида (специалисту понятно, что определенные соединения формулы XIV (например те, в которых L2 представляет собой галогено) также могут рассматриваться как соединения формулы I, как они определены выше); к) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -E-NH2, восстанавливают соединение формулы XV где R1, R3, R4, радикалы от R41 до R46, А, В, Е и G такие, как определено выше, например, путем гидрирования при подходящем давлении в присутствии подходящего катализатора (например палладия на углероде) и соответствующего органического растворителя (например водно-этанольной смеси); л) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -E-N(R14)R15, где R14 представляет собой С 1-6 алкил, -Е-арил, -E-Het6, -C(O)R16a, -C(O)OR16b, -S(O)2R16c или -C(O)N(R17a)R17b, соединение формулы I,где R2 представляет собой -E-N(H)R15, подвергают взаимодействию с соединением формулы XVI-C(O)N(R17a)R17b, a R16a, R16b, R16c, R17a, R17b, Het6, E и L1 такие, как определено выше, например, в условиях, описанных выше (стадия (а) способа); м) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -Е-N(R15)C(O)N(H)R17a, соединение формулы I, где R2 представляет собой -E-N(H)R15, подвергают взаимодействию с соединением формулыXVII 17a где R такой, как определено выше, например, в условиях, описанных выше (стадия (в) способа); н) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -E-N(H)[C(O)]2NH2, соединение формулыI, где R2 представляет собой -E-NH2, подвергают взаимодействию с диамидом щавелевой кислоты, например, при температуре между -10 и 25 С в присутствии подходящего агента сочетания (например 1-(3 диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида), соответствующего активирующего агента (например 1 гидроксибензотриазола), подходящего основания (например триэтиламина) и реакционно-инертного растворителя (например N,N-диметилформамида); о) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -E-N(H)C(NH)NH2, соединение формулы I,где R2 представляет собой -E-NH2, подвергают взаимодействию с соединением формулы XVIIIXVIII или его N-защищенным производным, где R23 такой, как определено выше, например, при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации, возможно в присутствии подходящего растворителя (например толуола) и/или соответствующего кислотного катализатора (например уксусной кислоты в концентрации, например, 10 мол. %); п) для соединений формулы I, где R2 представляет собой -OR13, где R13 представляет собойXIX 13b где R представляет собой -C(O)R16a, -C(O)OR16b или -C(O)N(R17a)R17b, L3 представляет собой уходящую группу, такую как галогено, п-нитрофенокси, -OC(O)R16a, -OC(O)OR16b, -ОН или имидазол, a R16a,R16b, R17a и R17b такие, как определено выше, например, при температуре между -10 С и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например триэтиламина, пиридина или карбоната калия), соответствующего органического растворителя (например ТГФ, дихлорметана или ацетонитрила) и (когда подходит) подходящего агента сочетания (например 1-(3-диметиламинопропил)-3 этилкарбодиимида);(р) для соединений формулы I, где R2 представляет собой Н или -ОН, a R3 представляет собой Н,восстанавливают соединение формулы I, где R2 и R3 вместе представляют собой =O, в присутствии подходящего восстановителя и в соответствующих условиях реакции; например, для образования соединений формулы I, где R2 представляет собой ОН, восстановление может быть осуществлено в мягких реакционных условиях в присутствии, например, богидрида натрия и соответствующего органического растворителя (например ТГФ); для образования соединений формулы I, где R2 представляет собой ОН, причем данное соединение является энантиомерно обогащенным (или является единственным энантиомером) по хиральному центру, к которому присоединен R2, восстановление может быть осуществлено ферментативным методом (например, в условиях, известных специалистам в данной области, как например в присутствии алкогольдегидрогеназы из печени лошади и НАДФН) или путем гидрирования в присутствии находящегося в растворенной фазе (гомогенного) катализатора в условиях, известных специалистам в данной области; и для образования соединений формулы I, где R2 представляет собой Н, восстановление может быть осуществлено либо в условиях Вольфа-Кижнера, известных специалистам в данной области, либо путем активации нужной группы С=О с использованием соответствующего агента (такого как тозилгидразин) в присутствии подходящего восстановителя (например борогидрида натрия или цианборогидрида натрия) и соответствующего органического растворителя (например низшего (например(с) для соединений формулы I, где R2 представляет собой галогено, осуществляют замещение соответствующего соединения формулы I, в котором R2 представляет собой -ОН, с помощью соответствующего галогенирующего агента (например, для соединений, где R2 представляет собой фторо, осуществляют взаимодействие с трифторидом (диэтиламино)серы);(т) для соединений формулы I, где R2 и R3 представляют собой Н, А представляет собой -J-, и В представляет собой -N(R20)-Z- (где -N(R20) присоединен к углеродному атому, несущему R2 и R3), соединение формулы XX где R4, G, Z и L2 такие, как определено выше, например, при повышенной температуре (например от 40 С до температуры дефлегмации) в присутствии подходящего органического растворителя (например ацетонитрила);(у) для соединений формулы I, где А представляет собой С 2 алкилен, a R2 и R3 вместе представляют собой =O, соединение формулы VII, как определено выше, подвергают взаимодействию с соединением формулы XXII где В, G и R4 такие, как определено выше, например, при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например триэтиламина, карбоната калия или гидроксида тетрабутиламмония) и соответствующего органического растворителя (например низшего алкилового (например С 1-6) спирта);(ф) для соединений формулы I, где R1 представляет собой -C(O)XR7, -C(O)N(R8)R5d или -S(O)2R9,соединение формулы XXIII где R2, R3, R4, А, В и G такие, как определено выше, например, при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например гидрокарбоната натрия или карбоната калия) и соответствующего органического растворителя (например ацетонитрила);(х) для соединений формулы I, которые являются N-оксидными производными по азоту оксабиспидина, окисляют соответствующее соединение формулы I по соответствующему азоту оксабиспидина в присутствии подходящего окисляющего агента (например m-СРВА), например, при 0 С в присутствии подходящего органического растворителя (например дихлорметана);(ц) для соединений формулы I, которые являются производными C1-4 алкильными четвертичными аммониевыми солями, в которых алкильная группа присоединена к азоту оксабиспидина, осуществляют взаимодействие соответствующего соединения формулы I по этому азоту оксабиспидина с соединением формулы XXVXXV,25 где R представляет собой С 1-4 алкил, a L4 является уходящей группой, такой как галогено, алкансульфонат или аренсульфонат, например, при комнатной температуре в присутствии соответствующего органического растворителя (например N,N-диметилформамида) с последующей очисткой (с использованием, например, ВЭЖХ) в присутствии подходящего поставщика противоиона (например NH4OAc);(ч) осуществляют превращение одного заместителя R4 в другой с использованием методик, хорошо известных специалистам в данной области техники; или(ш) осуществляют введение одного или более чем одного (дополнительно) заместителя R4 в ароматическое кольцо с использованием методик, хорошо известных специалистам в данной области техники(например, хлорированием). Соединения формулы II могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы где радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, с соединением формулы VIII, как оно определено выше, например как описано выше для синтеза соединений формулы I (стадия (г) способа), либо,в случае соединений формулы II, где А представляет собой СН 2, a R2 представляет собой -ОН илиN(H)R14, где R14 такой, как определено выше, с соединением формулы IX, как оно определено выше, например как описано выше для синтеза соединений формулы I (стадия (д) способа). Соединения формулы IV могут быть получены при взаимодействии соединения формулы II, как оно определено выше, с соединением формулы XXVIIXXVII,1 где L такой, как определено выше, и где указанные две группы L1 могут быть одинаковыми или разными, например, при температуре между 0 С и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например триэтиламина или карбоната калия) и соответствующего органического растворителя (например толуола или дихлорметана). Соединения формулы VII могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулыXXVI, как оно определено выше, с соединением формулы III, как оно определено выше, например, как описано выше для синтеза соединений формулы I (стадия (а) способа), или, в случае соединений формулы VII, где R1 представляет собой -C(O)N(H)R8, с соединением формулы VI, как оно определено выше,например, как описано выше для синтеза соединений формулы I (стадия (в) способа). Соединения формулы VII, где R1 представляет собой -C(O)XR7 или -C(O)N(R8)R5d, альтернативно могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XXVI, как оно определено выше, с соединением формулы XXVII, как оно определено выше, например, как описано выше для синтеза соединений формулы IV с последующим взаимодействием полученного промежуточного соединения с соединением формулы V, как оно определено выше, например, как описано выше для синтеза соединений формулы I (стадия (б) способа). Соединения формулы VIII могут быть получены с помощью стандартных методик. Например, соединения формулы VIII, где:(1) В представляет собой -Z-O-, могут быть получены путем сочетания соединения формулы XI, как оно определено выше, с соединением формулы XXVIIIXXVIII,2 3 2 где R , R , A, Z и L такие, как определено выше, а две группы L2 могут быть одинаковыми или разными; или(2) В представляет собой -C(O)N(R20)-, могут быть получены путем сочетания соединения формулыXXX,5 где L представляет собой подходящую уходящую группу (например -ОН или галогено), a R2, R3, А и L2 такие, как определено выше; в обоих случаях в условиях, хорошо известных специалистам в данной области. Соединения формулы VIII, где А представляет собой -(СН 2)2-, R2 и R3 оба представляют собой Н, В представляет собой -СН 2-, и G представляет собой СН, могут быть получены при взаимодействии соединения формулы ХХХА где R4 такой, как определено выше, но предпочтительно содержит единственную орто- или параориентированную замещаемую группу, такую как галогено, с янтарным ангидридом в стандартных условиях ацилирования Фриделя-Крафтса с последующим:(1) восстановлением полученного промежуточного соединения (этот процесс может быть двухстадийным);(2) превращением концевой гидроксильной группы в соответствующую группу L2; и, при необходимости,(3) превращением одной группы R4 в другую; причем все эти стадии могут быть осуществлены в условиях, хорошо известных специалистам в данной области. Соединения формулы VIII, в которых А представляет собой С 1-6 алкилен, В представляет собой прямую связь или С 1-4 алкилен, R2 и R3 независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил, при условии, что когда А представляет собой С 1 алкилен, и В представляет собой прямую связь, R2 и R3 oбa представляют собой Н, и G представляет собой СН, могут быть получены путем сочетания соединения формулы ХХХВ где R2a и R3a представляют собой Н или С 1-6 алкил, как подходит, Аа представляет собой прямую связь или С 1-4 алкилен, Вb представляет собой прямую связь или C1-4 алкилен, a Hal, R2 и R3 такие, как определено выше, или с винилмагнийгалогенидом, например, при температуре между -25 С и комнатной температурой в присутствии подходящей соли цинка (II) (например безводного ZnBr2), соответствующего катализатора (например Рd(РРh3)4 или Ni(PPh3)4) и реакционно-инертного органического растворителя(например ТГФ, толуола или диэтилового эфира) с последующим:(1) восстановлением получающегося промежуточного соединения в присутствии подходящего борана или комплекса боран-основание Льюиса (например боран-диметилсульфид), соответствующего растворителя (например диэтилового эфира, ТГФ или их смеси);(2) окислением получающегося продукта присоединения борана подходящим окислителем (например перборатом натрия) и(3) превращением полученной ОН-группы в группу L2 в условиях, известных специалистам в данной области. Соединения формулы VIII, где А представляет собой прямую связь или С 1-6 алкилен, В представляет собой С 2-4 алкилен, R2 и R3 независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил, a G представляет собой СН, могут быть получены путем сочетания соединения формулы XXXD где Аb представляет собой прямую связь или С 1-6 алкилен, Вс представляет собой прямую связь или С 1-2 алкилен, a R2a и R3a такие, как определено выше, или его концевого алкинового эквивалента с соединением формулы ХХХВ, как оно определено выше, например, в стандартных условиях катализируемого металлом винилирования, таких как условия Хека (например в присутствии подходящей папладиевой каталитической системы (например Pd(OAc)2 и о-толилфосфина), например, при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего растворителя (например ТГФ, ДМФ, диметилового эфира, толуола, воды, этанола или их смесей) и возможно в присутствии соответствующего основания (например триэтиламина, или же, когда реакцию осуществляют с использованием концевого алкина - в условиях сочетания, которые известны специалистам в данной области (например при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего растворителя (например ТГФ, ДМФ, диметилового эфира, толуола, воды, этанола или их смесей), соответствующего основания (например диэтиламина) и возможно в присутствии подходящего катализатора (например соли меди, такой как иодид меди (I, с последующим:(1) гидрированием получающегося алкенового (или алкинового) промежуточного соединения, например в присутствии подходящего палладиевого катализатора на носителе (например Pd на СаСО 3 илиPd/C), например, при комнатной температуре в присутствии подходящего растворителя (например низшего алкилового спирта, такого как метанол); и(2) превращением ОН-группы в группу L2 в условиях, известных специалистам в данной области. Соединения формулы VIII, где группа -A-C(R2)(R3)-B- представляет собой -(СН 2)3-11-, могут быть получены при взаимодействии соответствующего соединения формулы VIII, где группа -A-C(R2)(R3)-Bпредставляет собой -(СН 2)1-9-, с диэтилмалонатом, используя стандартный синтез малоновых эфиров, с последующим(1) восстановлением получающегося промежуточного соединения и(2) превращением концевой гидроксигруппы в соответствующую группу L2, причем обе эти стадии могут быть проведены в условиях, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Соединения формулы VIII, где А представляет собой С 1-6 алкилен, В представляет собой -Z-N(R20)(причем в последнем случае Z присоединен к углеродному атому, несущему R2 и R3), G представляет собой СН, a Z и R20 такие, как определено выше, могут быть получены путем сочетания соединения формулы ХХХВ, как оно определено выше, с соединением формулы ХХХЕ где Ас представляет собой С 1-6 алкилен, a Z, R20, R2 и R3 такие, как определено выше, например, при повышенной температуре в условиях, хорошо известных специалистам в данной области техники, с последующим превращением гидроксигруппы в группу L2 в условиях, хорошо известных специалистам в данной области (например, когда группа L2 представляет собой п-толуолсульфонато, превращение может- 18005319 быть осуществлено при взаимодействии между промежуточным гидроксисоединением и п-толуолсульфонилхлоридом в присутствии подходящего основания (например триэтиламина), и соответствующего растворителя (например дихлорметана), и, возможно, в присутствии подходящего катализатора (например DMAP, например между 0,1 и 10% (мас./мас.) (например 1% (мас./мас. по отношению к массе промежуточного гидроксисоединения). Соединения формулы VIII, где А представляет собой прямую связь или C1-6 алкилен, В представляет собой С 1-4 алкилен, a G представляет собой N, могут быть получены путем сочетания соединения формулы XXXF где Вс представляет собой прямую связь или С 1-3 алкилен, а Ас, L2, L5, R2 и R3 такие, как определено выше, например при взаимодействии соединения формулы XXXF с сильным основанием, таким как бутиллитий или фениллитий (например, при -60 С в присутствии полярного растворителя, такого как ТГФ), с последующим добавлением депротонированного промежуточного соединения к соединению формулы XXXG (например при -65 С) в присутствии подходящего растворителя (такого как ТГФ). Соединения формулы VIII, где А представляет собой С 2 алкилен, a R2 представляет собой -OR13, где 13R представляет собой С 1-6 алкил, -Е-арил или -Е-Het6, могут быть альтернативно получены при взаимодействии соединения формулы XIII, как оно определено выше, с соединением формулы XXXI где R3, R4, R25, В и G такие, как определено выше, например, при температуре между температурой окружающей среды (например 25 С) и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например карбоната калия) и соответствующего органического растворителя (например ацетонитрила) с последующим превращением данной эфирной функциональности в группу L2 (причем L2 такая,как определено выше) в условиях, которые хорошо известны специалистам в данной области. Соединения формулы IX могут быть получены в соответствии с методиками, которые хорошо известны специалистам в данной области. Например, соединения формулы IX, где(1) В представляет собой -СН 2 О-, a Y представляет собой О, могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XI, как оно определено выше, с соединением формулы XXXII где R3 и L2 такие, как определено выше, например, при повышенной температуре (например между 60 С и температурой дефлегмации) в присутствии подходящего основания (например карбоната калия или NaOH) и соответствующего органического растворителя (например ацетонитрила или смеси толуол/вода) либо каким-либо иным образом, описанным в уровне техники;(2) где R3 представляет собой Н, В представляет собой прямую связь, С 1-4 алкилен, -Z-N(R20)-, -ZS(O)n- или -Z-O- (причем в каждом случае группа Z представляет собой С 1-4 алкилен, присоединенный к углеродному атому, несущему R3), a Y представляет собой О, могут быть получены путем восстановления соединения формулы XXXIIIA или XXXIIIB где Ва представляет собой -Za-N(R20), -Za-S(O)n- или -Za-O- (причем группы Za представляют собой прямую связь или С 1-3 алкилен, присоединенный к углеродному атому, несущему R3), a Bb, R4, R20, G и n такие, как определено выше, например, при температуре между -15 С и комнатной температурой в присутствии подходящего восстановителя (например NaBH4) и соответствующего органического раствори- 19005319 теля (например ТГФ) с осуществлением последующей реакции внутреннего замещения в получающемся промежуточном соединении, например, при комнатной температуре в присутствии подходящего основания (например карбоната калия) и соответствующего органического растворителя (например ацетонитрила);(3) где В представляет собой прямую связь, С 1-4 алкилен, -Z-N(R20)-, -Z-S(O)2- или -Z-O- (причем в каждом случае группа Z представляет собой С 1-4 алкилен, присоединенный к углеродному атому, несущему R3), a Y представляет собой О, могут быть получены путем окисления соединения формулы где R3, R4, Ba, Bb и G такие, как определено выше, в присутствии подходящего окислителя (например mСРВА), например, путем кипячения с обратным холодильником в присутствии подходящего органического растворителя (например дихлорметана); или-C(O)OR16b или -S(O)2R16c, могут быть получены путем циклизации соединения формулы XXXV где R14b представляет собой -C(O)OR16b или -S(O)2R16c, Zb представляет собой С 1-4 алкилен, присоединенный к углеродному атому, несущему R3, a R3, R4, R16b, R16c, G и L2 такие, как определено выше, например, при температуре между 0 С и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например гидроксида натрия), соответствующего растворителя (например дихлорметана, воды или их смеси) и, при необходимости, межфазного катализатора (такого как тетрабутиламмонийгидросульфат). Соединения формулы X могут быть получены аналогично соединениям формулы I (см., например стадии способа от (а) до (д. Соединения формулы XIV могут быть получены в результате замены группы -ОН соединения формулы I, где R2 представляет собой -ОН, на группу L2 в условиях, которые хорошо известны специалистам в данной области. Соединения формулы XV, где Е представляет собой прямую связь, могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы I, где R2 представляет собой -ОН, с соединением формулыXXXVI,26 где R представляет собой С 1-4 алкил или арил (причем данные две группы возможно замещены одним или более чем одним заместителем, выбранным из C1-4 алкила, галогено и нитро), например, при температуре между -10 С и 25 С в присутствии подходящего растворителя (например дихлорметана) с последующим взаимодействием с подходящим источником азид-иона (например с азидом натрия), например, при температуре между температурой окружающей среды и температурой дефлегмации в присутствии соответствующего растворителя (например N,N-диметилформамида) и подходящего основания(например гидрокарбоната натрия). Соединения формулы XV могут быть альтернативно получены в результате взаимодействия соединения формулы VII, как оно определено выше, с соединением формулы XXXVII где R3, R4, А, В, E, G и L2 такие, как определено выше, например в условиях, аналогичных тем, что описаны выше для синтеза соединений формулы I (стадия (г) способа).- 20005319 Соединения формулы XX могут быть получены в результате удаления возможно замещенной бензилоксикарбонильной единицы (то есть путем снятия защиты) с соответствующего соединения формулыI, где В представляет собой -N(R20)C(O)OCH2-, а А представляет собой J, где R20 и J такие, как определено выше, например, в условиях, которые известны специалистам в данной области. Соединения формулы XXIII могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XXXVIII где волнистые связи обозначают возможную Е-, Z- или смешанную Е- и Z-геометрию около двойных связей, a R1a и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, с водой и подходящим источником иона ртути (II) (например, ацетатом ртути(II, например, при температуре между 0 и 30 С, возможно, в присутствии соответствующего органического растворителя (например ТГФ) с последующим превращением двух образующихся ртутьалкильных функций в группы L2, где L2 такие, как определено выше, в условиях, известных специалистам в данной области (например, в случае, когда L2 представляет собой иодо - взаимодействием с иодом при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего растворителя (например хлороформа, воды или их смеси). Соединения формулы XXIII могут быть альтернативно получены в результате взаимодействия соединения формулы XXXIX где R1a и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, с реагентом, который превратит две функциональности -ОН в группы L2 в условиях, известных специалистам в данной области. Например, в случае соединений формулы XXIII, где L2 представляет собой хлоро, бромо или иодо, это превращение можно осуществить путем приведения во взаимодействие соединения формулы XXXIX с подходящим галогенирующим агентом (например: трифенилфосфином или бис(дифенилфосфино)этаном в сочетании с галогеном (например бромом или иодом в присутствии подходящего основания (например имидазола) и подходящего растворителя (например дихлорметана, эфира и/или ацетонитрила), например как описано в Synth. Commun. 1990, 20(10), 1473. Подходящие галогенирующие агенты также включают: трифенилфосфин в сочетании с тетрахлоридом углерода, тетрабромидом углерода, гексахлорэтаном или гексахлорацетоном; трифенилфосфиндибромид; или трифенилфосфин в сочетании с диэтилазодикарбоксилатом и метилиодидом. В случае соединений формулы XXIII, где L2 представляет собой аренсульфонат или алкансульфонат (например п-толуолсульфонат, 2- или 4-нитробензолсульфонат, метансульфонат или трифторметансульфонат), превращение может быть альтернативно осуществлено приведением во взаимодействие соединения формулы XXXIX с подходящим аренсульфонильным или алкансульфонильным производным (например п-толуолсульфонилхлоридом, 4-нитробензолсульфонилхлоридом или ангидридом трифторметансульфоновой кислоты) в присутствии подходящего основания (например триэтиламина, пиридина или N,N-диизопропилэтиламина) и соответствующего органического растворителя(например дихлорметана или ацетонитрила). Соединения формулы XXVI (или их N-защищенное производное) могут быть получены из соответствующего соединения формулы XL или его N-защищенного производного (например когда защитная группа является группой R1a, причем R1a такая, как определено выше), где радикалы от R41 до R46 и L2 такие, как определено выше, в результате взаимодействия с аммиаком (или его защищенным производным (например бензиламином,например, в условиях, описанных выше для синтеза соединений формулы I (стадия (ф) способа). Соединения формулы XXXVII могут быть получены аналогично соединениям формулы XV, способом (то есть из соответствующего спирта). Соединения формулы XXXVIII могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XLI где волнистые связи обозначают возможную Е-, Z- или смешанную Е- и Z-геометрию около двойных связей, и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, с соединением формулы III, где R1 представляет собой -C(O)XR7, -C(O)N(R8)R5d или -S(O)2R9, где R5d, R7, R8 и R9 такие, как определено выше, например, при температуре между -10 и 25 С в присутствии подходящего основания (напримерNaOH, триэтиламина, пиридина или карбоната калия) и соответствующего растворителя (например эфира, воды, дихлорметана, ТГФ или их смесей). Соединения формулы XXXIX могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XLII где волнистые связи обозначают возможную R-, S- или смешанную R- и S-стереохимию у асимметрических атомов углерода, a R1a и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, с водой, например,при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего катализатора (например, протонной кислоты, такой как серная, метансульфоновая или трифторуксусная кислота, кислотной ионообменной смолы, такой как Amberlyst 15 или Nafion, кислоты Льюиса,такой как ZnSO4 или трифторметансульфонат Yb(III), либо основания, такого как гидроксид натрия или гидроксид тетрабутиламмония), соответствующего растворителя (например ТГФ, воды, 1,4-диоксана или 1-метил-2-пирролидинона либо их смесей (например ТГФ/вода и, возможно (когда используется основный катализатор), в присутствии подходящего межфазного катализатора (например Triton В). Это взаимодействие преимущественно можно осуществлять с использованием соединений формулы XLII, энантиомерно (или диастереомерно) обогащенных по вышеуказанным хиральным центрам. Применение таких энантиомерно (или диастереомерно) обогащенных соединений формулы XLII при образовании соединений формулы XXXIX может иметь то преимущество, что большая доля продукта диола получается в виде цис-изомера (то есть в конформации соединений формулы XXXIX, изображенной выше). Специалистам в данной области понятно, что такая увеличенная доля цис-изомера может быть сохранена при превращении соединений формулы XXXIX в соединения формулы XXIII и может,таким образом, в конечном счете приводить к большему выходу соединений формулы I (посредством стадии (ф) способа). Кроме этого, взаимодействие преимущественно можно осуществлять с использованием соединений формулы XLII, где R1a представляет собой -S(O)2R9 (например, где R9 представляет собой возможно замещенный фенил, такой как 2- или 4-фторфенил, 2- или 4-хлорфенил, 4-бромфенил, 4-метилфенил, 4 метоксифенил, 2- или 4-нитрофенил, 2,4,6-триметилфенил). Применение таких замещенных по кольцу бензолсульфонильных производных может иметь то преимущество, что очистка получающегося соединения формулы XXXIX может быть проведена более просто (например, когда необходима только стадия простой перекристаллизации), и/или что в соединении формулы I (синтезированном через соединения формул XXXIX и XXIII) удаление группы -S(O)2R9 (позволяющее заменить ее на другую группу R1) может быть осуществлено более просто (например с возможностью использования более мягких условий реакции). Соединения формулы XL могут быть получены аналогично соединениям формулы XXIII, как они определены выше (то есть, например, из соответствующего диаллиламина). Соединения формулы XLII, где заместитель R42 идентичен R41, R44 идентичен R43, a R46 идентичен 45R , могут быть получены в результате взаимодействия двух или более чем двух эквивалентов соединения формулы XLIII где волнистая связь обозначает возможную R-, S- или смешанную R- и S-стереохимию у асимметрического атома углерода, a R41, R43, R45 и L2 такие, как определено выше, с одним эквивалентом соединения формулы XLIVXLIV,- 22005319 где R1a такой, как определено выше, например, при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основания (например карбоната щелочного металла, такого как карбонат цезия, гидроксида натрия, гидрида натрия или диизопропиламида лития), соответствующего растворителя (например ацетонитрила, N,N-диметилформамида, ТГФ, толуола, воды или их смесей) и, возможно, в присутствии межфазного катализатора (например хлорида трикаприлоилметиламмония). Предпочтительные основания включают гидроксид натрия, а предпочтительные растворители включают воду. Это взаимодействие выгодно осуществляют с соединениями формулы XLIV, гдеR1a представляет собой -S(O)2R9 (например, где R9 представляет собой возможно замещенный фенил,такой как 2- или 4-фторфенил, 2- или 4-хлорфенил, 4-бромфенил, 4-метилфенил, 4-метоксифенил, 2- или 4-нитрофенил, 2,4,6-триметилфенил). Применение таких замещенных по кольцу бензолсульфонильных производных может иметь то преимущество, что очистка получающегося соединения формулы XLII может быть осуществлена более просто (например, когда требуется только стадия простой перекристаллизации). Кроме того, соединения формул XLIII и XLIV могут быть приведены во взаимодействие друг с другом таким же образом в присутствии воды, для того чтобы обеспечить прямой, проводимый в одном резервуаре способ получения соединения формулы XXXIX. Такие проводимые в одном резервуаре взаимодействия могут быть осуществлены, например, с использованием двухфазной реакционной смеси,содержащей раствор XLIII и XLIV в органическом растворителе (например толуоле) и водный раствор основания (например гидроксида натрия). Альтернативно, после завершения образования промежуточного соединения формулы XLII водный раствор основания может быть заменен на водный раствор кислоты (например либо протонной кислоты, либо кислоты Льюиса). Любая из реакционных стадий в таких двухфазных смесях может быть проведена в присутствии подходящего межфазного катализатора. Соединения формулы XLII, энантиомерно (или диастереомерно) обогащеные по вышеуказанным хиральным центрам могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XLIV, как оно определено выше, с соединением формулы XLIII, как определено выше, которое энантиомерно обогащено по атому углерода, к которому присоединен R43. Специалисты в данной области должны понимать, что это будет приводить преимущественно к изомеру(ам), требуемому для дальнейших преобразований, ведущих к получению соединений формулы I. Соединения формулы XLII могут быть альтернативно получены в результате взаимодействия соединения формулы XXXVIII, как оно определено выше, с подходящим окислителем. Подходящие условия для такого окисления включают, например, взаимодействие при температуре между -25 С и температурой дефлегмации с подходящим пероксидом или гидропероксидом (например с перекисью водорода,трет-бутилгидропероксидом или mСРВА), возможно в присутствии соответствующего растворителя (например дихлорметана, трет-бутанола, нитрометана, толуола, воды или их смесей), подходящего катализатора (например протонной кислоты, кислоты Льюиса или комплекса металла, способного к образованию продукта присоединения пероксида, такого как метилтриоксорений(VII) либо комбинация вольфрамата натрия и (аминометил)фосфоновой кислоты) и/или других соответствующих добавок (например, в случае окисления, осуществляемого с помощью метилтриоксорения(VII) и перекиси водорода, - основной добавки, такой как пиридин или пиразол; а в случае окисления, осуществляемого с помощью вольфрамата натрия и перекиси водорода, - межфазного катализатора, такого как метилтри-н-октиламмония гидросульфат). Частные воплощения этих процессов окисления описаны в заявках на патент ЕР А 1 0380085 и WO 98/33786 А 1, описания которых включены в настоящую заявку путем ссылки. Когда окисление осуществляют в присутствии катализатора и воды одновременно, одно из воплощений данной реакции включает проводимое в одном резервуаре превращение соединения формулы XXXVIII в соединение формулы XXXIX, как оно определено выше. Это взаимодействие протекает при катализируемом гидролизе промежуточного соединения формулы XLII. Соединения формулы XLII, где две эпоксидные цепи не являются идентичными (например, где R41 42 и R неидентичны), могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XLIII, как оно определено выше, с соединением формулы XLV где волнистая связь обозначает возможную R-, S- или смешанную R- и S-стереохимию у асимметричного атома углерода, a R1a, R42, R44 и R46 такие, как определено выше, например, в условиях, описанных выше для синтеза симметричных соединений формулы XLII. Соединения формулы XLV могут быть получены в результате взаимодействия одного или более чем одного эквивалента соединения формулы XLIV, как оно определено выше, с одним эквивалентом соединения формулы XLIII, например, в условиях, описанных выше для взаимодействия между этими двумя соединениями.- 23005319 Соединения формулы XLV могут быть альтернативно получены путем окисления соответствующего соединения формулы XLVI где волнистая связь обозначает возможную Е-, Z- или смешанную Е- и Z-геометрию около двойной связи, a R1a, R42, R44 и R46 такие, как определено выше, например, в условиях, описанных выше для синтеза соединений формулы XLII. Кроме того, соединения формулы I могут быть получены удобным способом путем циклодегидратации соединения формулы XLVII где А, В, G, R1, R2, R3, R4 и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, например, в присутствии подходящего дегидратирующего агента (такого как: сильная кислота (например серная кислота(например концентрированная серная кислота, метансульфоновая кислота (например безводная метансульфоновая кислота, и т.п.); ангидрид кислоты, такой как уксусный ангидрид или ангидрид трифторметансульфоновой кислоты; Р 2 О 5 в метансульфоновой кислоте; галогенирующий агент на основе фосфора,такой как Р(О)Сl3, РСl3 или PCl5; и тионилхлорид). Этот процесс циклизации может быть осуществлен в присутствии подходящей системы органических растворителей, причем эта система растворителей не должна существенно химически взаимодействовать с реагентами или уже образовавшимися продуктами либо вызывать их существенные стереохимические изменения или вызывать другие существенные побочные реакции. Предпочтительные системы растворителей включают ароматические углеводороды (например толуол или ксилол). Этот процесс циклизации может быть осуществлен при повышенной температуре (например вплоть до температуры дефлегмации соответствующей системы растворителей или при более высокой температуре, если используется система под давлением). Понятно, что подходящая длительность взаимодействия и температуры взаимодействия зависят от применяемой системы растворителей, а также от используемых реагентов и соединений, которые должны быть образованы, но они могут быть определены специалистом рутинным образом. Соединения формулы XLVII преимущественно могут быть получены в результате взаимодействия соединения формулы XLVIII где волнистые связи обозначают возможную R-, S- или смешанную R- и S-стереохимию у асимметрических атомов углерода, a R1 и радикалы от R41 до R46 такие, как определено выше, с соединением формулы XXIV, как оно определено выше. Это взаимодействие может быть осуществлено при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации любой используемой системы растворителей. Подходящие системы растворителей, которые могут быть использованы, включают системы органических растворителей, которые не должны существенно химически взаимодействовать с реагентами или уже образовавшимися продуктами либо вызывать их существенные стереохимические изменения или вызывать другие существенные побочные реакции. Предпочтительные системы растворителей включают низшие алкиловые спирты (в частности первичные спирты (например этанол возможно в присутствии воды, IMS, ароматических углеводородов (например толуола) и их смесей. Соединения формулы XXIV могут быть получены, как описано здесь. Соединения формулы XLVIII могут быть получены в соответствии или по аналогии с методиками, описанными здесь для получения соединений формулы XLII. Образование соединений формулы XLVII также можно осуществить с использованием соединений формулы XLVIII, энантиомерно (или диастереомерно) обогащенных по вышеуказанным хиральным центрам. Применение таких энантиомерно (или диастереомерно) обогащенных соединений формулы XLVIII при получении соединений формулы XLVII может иметь то преимущество, что большую долю продукта- 24005319 диола получают в форме, которая облегчает последующую циклизацию (например в транс-форме), приводя к большему выходу соединений формулы I. Образование соединений формулы XLVII предпочтительно осуществляют с использованием соединений формулы XLVIII, где R1 представляет собой R1a, причем R1a такой, как определено выше. Образование соединений формулы XLVII более предпочтительно осуществляют с использованием соединений формулы XLVIII, где R1 представляет собой -S(O)2R9 (например, где R9 представляет собой возможно замещенный фенил, такой как 2- или 4-фторфенил, 2- или 4-хлорфенил, 4-бромфенил, 4-метилфенил, 4 метоксифенил, 2- или 4-нитрофенил, 2,4,6-триметилфенил и, в особенности, незамещенный фенил). Предпочтительные соединения формулы XXIV включают те, в которых:G представляет собой СН; А представляет собой прямую связь; В представляет собой прямую связь;R4 отсутствует или представляет собой галогено, метильные, метокси или нитрогруппы в количестве от одной до трех, в особенности 2- или 4-фторо, 2- или 4-хлоро, 4-бромо-, 4-метил, 2,4,6-триметил, 4 метокси либо 2- или 4-нитро. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что когда соединения формулы I получают с использованием этого способа (то есть через соединения формулы XLVII), применение производных формулыXLVIII, где R1 представляет собой R1a (например, где R1a представляет собой возможно замещенный бензолсульфонил, такой как описано выше), и производных бензиламинового типа формулы XXIV (таких как описанные выше) может иметь преимущество ввиду того, что в получающемся соединении формулыI присутствие группы R1a (например -S(O)2R9) и/или группы бензиламинового типа дает возможность прямого и легкого замещения этой/этих группы (групп) другими группами R1 и/или фрагментами как подходит, например путем применения реакций, сходных с реакциями снятия защиты (см. ниже),и, затем, проведения реакций сочетания (смотри например стадии (а), (в), (г) и (д) способа). Авторы изобретения обнаружили, что если применяются такие бензолсульфонильные производные формулы XLVIII и производные бензиламинового типа формулы XXIV, то последующие стадии замещения можно провести более простым путем (например, появляется возможность использования более мягких реакционных условий). В этом отношении, определенные соединения по данному изобретению могут быть далее использованы в качестве промежуточных соединений, полезных в производстве других соединений по данному изобретению. Такие соединения включают, но не ограничиваются этим, соединения формулы I, гдеR1 представляет собой -S(O)2R9, где R9 представляет собой возможно замещенный фенил, такой как 2- или 4-фторфенил, 2- или 4-хлорфенил, 4-бромфенил, 4-метилфенил, 4-метоксифенил, 2- или 4 нитрофенил, 2,4,6-триметилфенил и, в особенности, незамещенный фенил; все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н;G представляет собой СН; А представляет собой прямую связь; В представляет собой прямую связь;R4 отсутствует или представляет собой галогено, метильные, метокси или нитрогруппы в количестве от одной до трех, в особенности 2- или 4-фторо, 2- или 4-хлоро, 4-бромо-, 4-метил, 2,4,6-триметил, 4 метокси либо 2- или 4-нитро. Соединения формулы I, которые, в частности, могут быть использованы в качестве промежуточных соединений, включают, но не ограничиваются ими, те, гдеR2 и R3 оба представляют собой Н;R9 представляет собой незамещенный фенил. Кроме того, соединения формулы I, где все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н;R1 представляет собой С 1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 1-3-алкил, такой как метил), оканчивающийся группой C(O)R5a или -N(H)C(O)OR10b;R5a и R10b независимо представляют собой С 2-6 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 3-5 алкил, такой как бутил (например, трет-бутил;R3 представляет собой Н; А представляет собой С 1 алкилен или линейный С 2 алкилен; В представляет собой -Z-, -Z-N(H)- или -Z-O- (причем в последних двух группах Z присоединен к углеродному атому, несущему R2 и R3, и представляет собой С 1 алкилен или линейный С 2 алкилен);R4 является единичной цианогруппой в пара-положении относительно В, могут быть получены способом, содержащим стадии, на которых(1) удаляют группу -S(O)2R9 из соединения формулы I, где R1 представляет собой -S(O)2R9, где R9 представляет собой возможно замещенный фенил, все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н, G представляет собой СН, А и В оба представляют собой прямые связи, R2 и R3 независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил, a R4 отсутствует или представляет собой галогено-, метильные, метокси- или нитрогруппы в количестве от одной до трех, в особенности 2- или 4-фторо, 2- или 4-хлоро, 4-бромо-, 4 метил, 2,4,6-триметил, 4-метокси либо 2- или 4-нитро, с получением соединения формулы II, как оно определено выше, где все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н, G представляет собой СН, А и В оба представляют собой прямые связи, R2 и R3 независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил, a R4 отсутствует или представляет собой галогено-, метильные, метокси- или нитрогруппы в количестве от одной до трех, в особенности 2- или 4-фторо, 2- или 4-хлоро, 4-бромо-, 4-метил, 2,4,6-триметил, 4-метокси либо 2- или 4-нитро, например, используя стандартные условия снятия защиты (например в присутствии стандартного агента снятия защиты (такого как галогено-водородная кислота (например НВr, особенно концентрированная водная НВr или восстановителя, такой как LiAlH4) при комнатной температуре или выше (например при температуре дефлегмации) в присутствии растворителя или без него;(2) полученное соединение формулы II подвергают взаимодействию с соединением формулы III,как оно определено выше, где R1 представляет собой С 1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 1-3 алкил, такой как метил), оканчивающийся C(O)R5a или -N(H)C(O)OR10b, где R5a и R10b независимо представляют собой С 1-6 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 3-5 алкил, такой как бутил (например трет-бутил, с образованием соединения формулы I, где R1 представляет собой С 1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 1-3 алкил, такой как метил), оканчивающийся C(O)R5a или -N(H)C(O)OR10b, R5a и R10b независимо представляют собой С 2-6 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 3-5 алкил, такой как бутил (например трет-бутил, все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н, G представляет собой СН, А и В оба представляют собой прямую связь, R2 и R3 независимо представляют собой Н или С 1-6 алкил, a R4 отсутствует или представляет собой галогено-, метильные, метокси- или нитрогруппы в количестве от одной до трех, в особенности 2- или 4-фторо, 2- или 4-хлоро, 4-бромо, 4-метил, 2,4,6-триметил, 4-метокси либо 2- или 4-нитро, например, в условиях, описанных выше (см. например стадию (а) способа), например в присутствии подходящего растворителя(например воды, низшего алкилового спирта, ацетонитрила или их смесей) и соответствующего основания (например бикарбоната натрия или карбоната калия);(3) из полученного соединения формулы I удаляют фрагмент с получением соединения формулы VII, где R1 представляет собой C1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 1-3 алкил, такой как метил), оканчивающийся C(O)R5a или -N(H)C(O)OR10b, R5a и R10b независимо представляют собой С 2-6 алкил с прямой или разветвленной цепью (например С 3-5 алкил,такой как бутил (например трет-бутил, а все радикалы от R41 до R46 представляют собой Н, например, в соответствующих условиях снятия защиты, как, например, гидрирования в присутствии палладиевого катализатора на носителе (например Pd/C), например при комнатной температуре в присутствии подходящего растворителя (например низшего алкилового спирта, такого как этанол; и(4) полученное соединение формулы VII подвергают взаимодействию с соединением формулы VIII,как определено выше, где R2 представляет собой Н или ОН, R3 представляет собой Н, А представляет собой С 1 алкилен или линейный С 2 алкилен, В представляет собой -Z-, -Z-N(H)- или -Z-O- (причем в последних двух группах Z присоединен к углеродному атому, несущему R2 и R3, и представляет собой С 1 алкилен или линейный С 2 алкилен), G представляет собой СН, и R4 является единичной цианогруппой в пара-положении относительно В, a L2 представляет собой, например, аренсульфонат (например, толуолсульфонат), например, в условиях, описанных выше (см., например, способ (г, например при температуре между комнатной температурой и температурой дефлегмации в присутствии подходящего основа- 26005319 ния (например, карбоната калия) и соответствующего органического растворителя (например, низшего алкилового спирта, такого как этанол). Специалисту понятно, что при желании вышеуказанные стадии можно осуществлять в порядке, отличающемся от приведенного выше порядка, с получением относящихся к делу соединений формулы I. Например, стадии (3) и (4) можно осуществлять до стадий (1) и (2). Альтернативно, стадии (1) и (3) (в любом порядке) могут быть завершены до осуществления стадий (2) и (4) (в любом порядке). Однако предпочтительно, чтобы стадии осуществлялись в приведенном выше порядке. Способ получения соединений формулы I из соединений формул XLVIII и XXIV (то есть через соединения формулы XLVII) может иметь то преимущество, что оксабиспидиновые кольцевые системы могут быть образованы с использованием небольшого количества стадий по сравнению со способами,описанными в уровне техники, и, в частности, избегает использования ртутьсодержащих соединений(тем самым исключая получение токсичных, ртутьсодержащих отходов). Этот способ дает удобный путь синтеза ключевых оксабиспидиновых соединений и дает возможность различной защиты по атомам азота. Кроме того, этот способ может иметь то преимущество, что соединения, содержащие оксабиспидиновое кольцо, могут быть получены за меньшее время, более удобным образом и/или с меньшими затратами, чем когда для их получения используются способы, описанные в уровне техники. Соединения формул III, V, VI, XI, XII, XIII, XVI, XVII, XVIII, XIX, XXI, XXII, XXIV, XXV, XXVII,XXVIII, XXIX, XXX, ХХХА, ХХХВ, ХХХС, XXXD, ХХХЕ, XXXF, XXXG, XXXI, XXXII, XXXIIIA,XXXIIIB, XXXIVA, XXXIVB, XXXV, XXXVI, XLI, XLIII, XLIV и XLVI и их производные либо имеются в продаже, либо известны по литературным данным, либо могут быть получены или по аналогии с описанными здесь способами, или с помощью общепринятых технологий синтеза в соответствии со стандартными методиками из легкодоступных исходных материалов с использованием соответствующих реагентов и реакционных условий. Заместители на арильной (например фенильной) и (если подходит) на гетероциклической группе(ах) в соединениях, охарактеризованных здесь, могут быть превращены в другие заместители, соответствующие формуле изобретения, с использованием методик, хорошо известных специалистам в данной области. Например, гидрокси может быть превращен в алкокси, фенил можно галогенировать с получением галогенфенила, нитро может быть восстановлен с получением амино, галогено может быть заменен на циано и т.д. Специалист также должен понимать, что получение других соединений формулы I обеспечат различные стандартные взаимопревращения и трансформации заместителей и функциональных групп некоторых соединений формулы I. Например, карбонил может быть восстановлен до гидрокси или алкилена,а гидрокси может быть превращен в галогено. Соединения по данному изобретению могут быть выделены из их реакционных смесей с использованием традиционных методик. Специалистам в данной области техники понятно, что в способах, описанных выше, функциональные группы промежуточных соединений могут быть защищены, или могут нуждаться в защите, защитными группами. Функциональные группы, которые желательно защищать, включают гидрокси, амино и карбоновую кислоту. Подходящие защитные группы для гидрокси включают триалкилсилильные и диарилалкилсилильные группы (например трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил или триметилсилил), тетрагидропиранильные и алкилкарбонильные группы (например метил- и этилкарбонильные группы). Подходящие защитные группы для амино включают бензил, сульфонамидо (например бензолсульфонамидо), трет-бутилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил или бензилоксикарбонил. Подходящие защитные группы для амидино и гуанидино включают бензилоксикарбонил. Подходящие защитные группы для карбоновой кислоты включают С 1-6 алкиловые или бензиловые эфиры. Защита и снятие защиты с функциональных групп могут иметь место до или после любой из реакционных стадий, описанных выше. Защитные группы могут быть удалены в соответствии с методиками, которые хорошо известны специалистам в данной области и которые описаны ниже. Например, авторы изобретения обнаружили,что удаление группы -SO2R9 из оксабиспидинового кольца может удобно протекать при использовании соответствующей сильной кислоты, такой как галогеноводородная кислота (особенно НВг), например,как описано выше. Использование защитных групп со всей полнотой описано в Protective Groups in Organic Chemistry, edited by J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973) и Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition,T.W. GreeneP.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1999). Специалистам в данной области будет ясно, что для того, чтобы получить соединения по данному изобретению альтернативным и, в некоторых случаях, более удобным способом, упомянутые здесь отдельные стадии способа можно осуществлять в другом порядке, и/или отдельные реакции можно осуществлять на другой стадии общего пути (то есть заместители могут быть добавлены и/или химические трансформации проведены на иных промежуточных соединениях чем те, что выше были связаны с кон- 27005319 кретной реакцией). Это будет зависеть inter alia от таких факторов, как природа других функциональных групп, присутствующих в конкретном субстрате, пригодность ключевых промежуточных соединений и стратегия (если есть) защитных групп, которую нужно выбрать. Очевидно, что тип предполагаемого химизма будет оказывать влияние на выбор реагента, который используется на указанных стадиях синтеза,на необходимость и тип применяемых защитных групп и на последовательность осуществления синтеза. Кроме того, специалистам в данной области следует понимать, что несмотря на то, что определенные защищенные производные соединений формулы I, которые могут быть получены до конечной стадии снятия защиты, могут не обладать фармакологической активностью как таковой, их можно вводить парентерально или перорально, и после этого они могут подвергаться метаболизму в организме с образованием соединений по данному изобретению, которые являются фармакологически активными. Поэтому такие производные могут быть описаны как пролекарства. Кроме того, определенные соединения формулы I могут действовать как пролекарства других соединений формулы I. Все пролекарства соединений формулы I включены в объем данного изобретения. Некоторые промежуточные соединения, упомянутые выше, являются новыми. Таким образом, согласно еще одному аспекту данного изобретения предложены: (а) соединение формулы II, как оно определено выше, или его защищенное производное, возможно в форме соли и/или сольвата; (б) соединение формулы IV, как оно определено выше, или его защищенное производное; (в) соединение формулы VII,как оно определено выше, или его защищенное производное (при условии, что R1 не представляет собой-S(O)2R9, где R9 представляет собой незамещенный фенил). Предпочтительные соединения формулы VII включают те, где R1 не представляет собой C(O)OR7, где R7 является трет-бутилом; (г) соединение формулы X, как оно определено выше, или его защищенное производное; (д) соединение формулы XIV, как оно определено выше, или его защищенное производное; (е) соединение формулы XV, как оно определено выше, или его защищенное производное; (ж) соединение формулы XX, как оно определено выше, или его защищенное производное; (з) соединение формулы XXIII, как оно определено выше, или его защищенное производное, при условии что L2 не представляет собой иодо; (и) соединение формулы XXXIX или его защищенное производное; и (к) соединение формулы XLII или его защищенное производное. Предпочтительные соединения формулы II описаны выше. Предпочтительные соединения формулы VII включают соединения, которые не являются трет-бутил-9-окса-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонан-3-карбоксилатом. Предпочтительные соединения формулы XLVII включают соединения, где группа R1 и группа являются разными, и как таковые включают соединения формулы XLVII, гдеR2 и R3 вместе не представляют собой =O, когда А представляет собой прямую связь. Особенно предпочтительные соединения формулы XLVII включают соединения, гдеR1 представляет собой -S(O)2R9, где R9 представляет собой арил (такой как фенил, в частности, незамещенный фенил);G представляет собой СН; А представляет собой прямую связь; В представляет собой прямую связь;R4 отсутствует или представляет собой галогено-, метильные, метокси- или нитрогруппы в количестве от одной до трех, в особенности, 2- или 4-фторо, 2- или 4-хлоро, 4-бромо, 4-метил, 2,4,6-триметил,4-метокси либо 2- или 4-нитро. Медицинское и фармацевтическое применение Соединения по данному изобретению полезны, так как они обладают фармакологической активностью. Поэтому они показаны в качестве фармацевтических средств. В частности, соединения по изобретению проявляют миокардиальную электрофизиологическую активность, например, как продемонстрировано в тесте, описанном ниже. Таким образом, ожидается, что соединения по изобретению будут полезны как при профилактике,так и при лечении аритмий, в частности предсердной и желудочковой аритмий. Таким образом, соединения по изобретению показаны при лечении или профилактике сердечных заболеваний либо при показаниях, относящихся к сердечным заболеваниям, про которые полагают, что аритмии играют в них важную роль, включащих ишемическую болезнь сердца, внезапный сердечный приступ, инфаркт миокарда, сердечную недостаточность, операцию на сердце и тромбоэмболические события.- 28005319 Было обнаружено, что при лечении аритмий соединения по изобретению селективно замедляют сердечную реполяризацию, таким образом увеличивая интервал QT, и, в частности, проявляют активность класса III. Несмотря на то, что было показано, что соединения по изобретению проявляют активность класса III, в частности, при лечении аритмий, вид(ы) их активности необязательно ограничен(ы) этим классом. Фармацевтические препараты Соединения по данному изобретению обыкновенно будут вводиться перорально, подкожно, внутривенно, внутриартериально, трансдермально, интраназально, путем ингаляции или любым другим парентеральным путем в форме фармацевтических препаратов, содержащих активный ингредиент в виде либо свободного основания, либо нетоксичной соли присоединения органической или неорганической кислоты в фармацевтически приемлемой лекарственной форме. В зависимости от расстройства и пациента, которого нужно лечить, равно как и от пути введения, композиции могут быть введены в различных дозах. Кроме того, соединения по изобретению можно комбинировать с любыми другими лекарствами,полезными при лечении аритмий и/или других сердечно-сосудистых заболеваний. Подходящие суточные дозы соединений по изобретению при терапевтическом лечении людей составляют приблизительно от 0,005 до 25,0 мг/кг массы тела при пероральном введении и приблизительно от 0,005 до 10,0 мг/кг массы тела при парентеральном введении. Предпочтительные интервалы суточных доз соединений по изобретению при терапевтическом лечении людей составляют приблизительно от 0,005 до 10,0 мг/кг массы тела при пероральном введении и приблизительно от 0,005 до 5,0 мг/кг массы тела при парентеральном введении. Соединения по изобретению имеют то преимущество, что они эффективны против сердечных аритмий. Кроме того, соединения по изобретению могут иметь преимущество в том, что по сравнению с соединениями, известными из уровня техники, они могут быть более эффективными, менее токсичными,иметь более широкий спектр активности (включая проявление любой комбинации активностей класса I,класса II, класса III и/или класса IV (особенно активности класса I и/или класса IV в дополнение к активности класса III, быть более сильными, оказывать более длительное действие, вызывать меньше побочных эффектов (включая меньшую частоту проаритмий, таких как torsades dе pointes), быть более легко всасываемыми, или они могут обладать другими полезными фармакологическими свойствами. Биологические тесты Тест А. Первичные электрофизиологические эффекты у анестезированных морских свинок. Используют морских свинок с массой между 660 и 1100 г. Животных содержат по меньшей мере в течение одной недели перед экспериментом со свободным доступом к еде и водопроводной воде в этот период. Анестезию осуществляют путем внутрибрюшинной инъекции пентобарбитала (от 40 до 50 мг/кг), и вводят катетеры в одну сонную артерию (для регистрации кровяного давления и взятия образцов крови) и в одну яремную вену (для инфузий лекарств). Игольчатые электроды помещают на конечности для записи ЭКГ (отведение II). Термистор помещают в прямую кишку, и животное помещают на электрогрелку, устанавливая ректальную температуру между 37,5 и 38,5 С. Проводят трахеотомию и животное подвергают искусственной вентиляции легких комнатным воздухом, используя небольшой аппарат для вентиляции легких у животных, установленный так, чтобы поддерживать газы крови в нормальных пределах для данных видов. Для того чтобы снизить автономные влияния, за 15 мин до начала эксперимента в шее перерезают оба блуждающих нерва и внутривенно вводят 0,5 мг/кг пропранолола. Эпикард левого желудочка делают доступным посредством левосторонней торакотомии и к свободной стенке левого желудочка прикладывают изготовленный на заказ присасывающийся электрод для регистрации монофазного потенциала действия (МПД). Электрод сохраняют в таком положении, пока не будет зарегистрирован приемлемый сигнал, в противном случае его перемещают в новое положение. Биполярный электрод для кардиостимуляции зажимают на левом предсердии. Кардиостимуляцию (длительность 2 мс, двойной диастолический порог) выполняют с помощью изготовленного на заказ стимулятора постоянного тока. Сердце стимулируют с частотой несколько выше нормального синусного ритма в течение 1 мин каждые пять минут на всем протяжении исследования. Кровяное давление, МПД-сигнал и отведение II ЭКГ регистрируют на струйном самописце Mingograph (Siemens-Elema, Швеция). Все сигналы собирают (частота отбора 1000 Гц) на ПК в течение последних 10 скаждой последовательности стимуляции и последних 10 с следующей минуты синусного ритма. Сигналы обрабатывают с использованием изготовленной на заказ программы, разработанной для сбора и анализа физиологических сигналов, измеряемых у подопытных животных (см. Axenborg and Hirsch,Comput. Methods Programs Biomed. 41, 55 (1993. Процедура тестирования состоит из снятия двух базисных контрольных записей, с интервалом 5 мин, в ходе как кардиостимуляции, так и синусного ритма. После второй контрольной записи в катетер шейной вены делают инфузию первой дозы тестируемого вещества в объеме 0,2 мл в течение 30 с. Тремя- 29005319 минутами позже начинают кардиостимуляцию и делают новую запись. Через пять минут после предыдущей дозы вводят следующую дозу тестируемого вещества. В ходе каждого эксперимента дают от шести до десяти последовательных доз. Анализ данных Из многочисленных переменных, измеряемых в этом анализе, как наиболее важные выбирают три для сравнения и отбора активных соединений. Этими тремя выбранными переменными являются: продолжительность МПД при 75-процентной реполяризации в ходе стимуляции, предсердножелудочковое(AV) время проведения (определяемое как интервал между предсердным стимулирующим импульсом и началом желудочкового МПД) в ходе кардиостимуляции и частота сердечных сокращений (определяемая как интервал RR в ходе синусного ритма). Систолическое и диастолическое кровяное давление измеряют для того, чтобы оценивать гемодинамический статус анестезированного животного. Далее проверяют ЭКГ на аритмии и/или морфологические изменения. Среднюю величину по двум контрольным записям принимают за нуль и эффекты, зарегистрированные после последовательных доз тестируемого вещества, выражают как процентные отклонения от этой величины. Строя график процентных значения этих величин против совокупной дозы, введенной до каждой записи, можно получить кривые доза-ответ. Таким образом, каждый эксперимент дает три кривые доза-ответ, одну для продолжительности МПД, одну для AV-времени проведения и одну для синусной частоты (интервал RR). Получают среднюю кривую по всем экспериментам с тестируемым веществом и на основании средней кривой получают величины эффективности. Все кривые доза-ответ в этих экспериментах строят путем линейного соединения полученных точечных данных. Совокупную дозу,увеличивающую продолжительность МПД на 10 % по сравнению с базовой линией, используют в качестве показателя для оценки электрофизиологической эффективности класса III исследуемого агента (D10) в исследовании. Тест Б. Фибробласты мышей, обработанные глюкокортикоидами, в качестве модели для детекции блокаторов калиевого тока задержанного выпрямления.IC50 для блокирования каналов К определяют методом скрининга с применением титрационных микропланшетов, основанным на изменении мембранного потенциала фибробластов мышей, обработанных глюкокортикоидами. Мембранный потенциал фибробластов мышей, обработанных глюкокортикоидами, измеряют, используя флуоресценцию бисоксонольного красителя DiBac4(3), который можно надежно детектировать с помощью флуоресцентного аппарата для прочтения планшетов с лазерным изображением (FLIPR). Экспрессию калиевых каналов задержанного выпрямления индуцируют в фибробластах мышей, подвергая действию глюкокортикоида дексаметазона (5 мкМ) в течение 24 ч. Блокирование этих калиевых каналов деполяризует фибробласты, что приводит к усилению флуоресценции DiBac4(3). Мышиные ltk фибробласты (L-клетки) закупают в Американской коллекции типовых культур(АТСС, Manassa, VA) и культивируют в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла с добавлением фетальной телячьей сывороткой (5% об./об.), пенициллином (500 ЕД/мл), стрептомицином (500 мкг/мл) и L-аланин-L-глутамином (0,862 мг/мл). Клетки пассируют каждые 3-4 дня с использованием трипсина (0,5 мг/мл в свободном от кальция забуференном фосфатом физиологическом растворе, GibcoBRL). За три дня до проведения экспериментов клеточную суспензию раскапывают в 96-луночные черные пластиковые планшеты с прозрачным дном (Costar) по 25000 клеток/лунку. Для измерения мембранного потенциала используют флуоресцентный зонд DiBac4(3) (DiBac Molecular probes). Максимум поглощения DiBac4(3) соответствует 488 нм, а излучения - 513 нм. DiBac4(3) является бисоксонолом и поэтому отрицательно заряжен при рН 7. Благодаря его отрицательному заряду распределение DiBac4(3) от края до края мембраны зависит от трансмембранного потенциала: если клетка деполяризована (то есть внутри клетки менее отрицательный заряд, чем снаружи), концентрацияDiBac4(3) внутри клетки увеличивается за счет электростатических сил. Попав внутрь клетки, клетки молекулы DiBac4(3) могут связываться с липидами и белками, что вызывает усиление флуоресцентного излучения. Таким образом, деполяризация будет отражаться в виде усиления флуоресценции DiBac4(3). Изменение флуоресценции DiBac4(3) детектируют с помощью FLIPR. Перед каждым экспериментом с целью полного удаления культуральной среды клетки 4 раза промывают фосфатным буферным раствором (PBS). Затем клетки обрабатывают 5 мкМ DiBac4(3) (в 180 мклPBS) при 35 С. По достижении стабильной флуоресценции (обычно через 10 мин) добавляют 20 мкл тестируемого соединения, применяя внешнюю 96-луночную раскапывающую систему FLIPR. Затем в течение следующих 10 мин каждые 20 с проводят измерения флуоресценции. Ввиду высокой температурной чувствительности как проводимости калиевых каналов задержанного выпрямления, так и флуоресценцииDiBac4(3), все эксперименты проводят при 35 С. Тестируемые вещества готовят во втором 96-луночном планшете в PBS, содержащем DiBac4(3). Концентрация приготовленного вещества в 10 раз больше желаемой в эксперименте концентрации ввиду дополнительного разведения 1:10, имеющего место во время добавления вещества в ходе эксперимента. В качестве позитивного контроля, то есть для определения максимального увеличения флуоресценции, используют дофетилид (dofetilide) (10 мкМ). Подбор кривой для определения величин IC50 осуществляют с помощью программы Graphpad Prism