Микро (mi-рнк)-рнк и мишени сигнального пути для диагностических и терапевтических целей

МИКРО-РНК (mi-РНК) И МИШЕНИ СИГНАЛЬНОГО ПУТИ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙmiR-21, и родственных элементов в диагностике и производстве лекарственного средства для лечения и/или профилактики фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Кроме того,данное изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам против мишеней miR-21. Изобретение охватывает также клетки, дефицитные в отношении miR-21, дефицитные в отношении промоторной области и мишеней miR-21, а также организмы, нокаутные в отношении miR-21. Наконец, данное изобретение относится к способу диагностики фиброза и/или родственных фиброзу или связанных с фиброзом заболеваний и к способу скрининга фармацевтически активного соединения для лечения фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Кроме того, данное изобретение относится к композициям для лечения, улучшения состояния при фиброзе и/или профилактики фиброза. В некоторых вариантах осуществления указанные композиции направлены на модуляцию активности miR-21 с целью лечения, улучшения состояния при фиброзе и/или профилактики фиброза. В некоторых вариантах осуществления указанные композиции направлены на ингибирование активности miR-21 с целью лечения, улучшения состояния при фиброзе и/или профилактики фиброза.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЮЛИУС МАКСИМИЛИАНСУНИВЕРЗИТЕТ ВЮРЦБУРГ (DE) Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к области микро-РНК (mi-РНК), в частности miR-21, и ее мишеням сигнального пути для диагностики, профилактики и/или терапии фиброза и других заболеваний. Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, способам и применениям для лечения фиброза. Такие способы включают модуляцию и ингибирование активности mi-РНК у индивида, страдающего фиброзом. Уровень техники Микро-РНК представляют собой широкий класс низкомолеклярных некодирующих РНК, которые контролируют различные биологические процессы, в том числе основные пути передачи сигналов, за счет регуляции экспрессии комплементарных мРНК-мишеней (Ambros, 2004). Нарушение регуляции микро-РНК при различных нозологических формах вызвано изменениями в геноме (Mi et al., 2007), дифференциальной экспрессией или вирусными инфекциями, в некоторых случаях изменяющими функцию микро-РНК опухолевых супрессоров или онкогенов. В настоящее время в целой серии несложных генетических исследований было показано, что микро-РНК вовлечены в регуляцию разнообразных сердечных функций (Care et al., 2007; Yang et al., 2007). Несмотря на то что указанные исследования помогают обрисовать роль микро-РНК в сердечной физиологии, росте и морфогенезе, подробные молекулярные механизмы микро-РНК путей развития заболеваний in vivo не до конца понятны. Было показано, что одноцепочечные олигонуклеотидные микро-РНК-антагонисты могут "выключить" эндогенные микро-РНКin vitro и in vivo, вызывая эффекты в отношении мРНК-мишени, а также в отношении уровней и метаболизма белков (Kruetzfeldt et al., 2005; Esau et al., 2006). Указанные обнаружения наводят на мысль о возможности использования антагонистов микро-РНК для подтверждения функции микро-РНК in vivo и,возможно, еще более важно, в качестве новой терапевтической тактики лечения. Краткое содержание изобретения Настоящее изобретение относится к промоторной области микро-РНК, к применению микро-РНК, в частности miR-21, и соответствующих элементов для диагностики и производства лекарственного средства для лечения и/или профилактики фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Кроме того,настоящее изобретение относится к различным антисмысловым олигонуклеотидам против мишеней miR21. Изобретение также касается клеточного дефицита miR-21, дефицита промоторной области и мишенейmiR-21, а также организмов с нокаутом miR-21. Наконец, настоящее изобретение относится к способам диагностики фиброза и/или связанных с фиброзом или имеющих отношение к фиброзу заболеваний и к способам скрининга фармацевтически активного соединения для лечения фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Настоящее изобретение относится к способам лечения фиброза, включающим введение индивиду с диагнозом фиброз или у которого подозревают фиброз соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК. Настоящее изобретение относится к способам, включающим идентификацию больного с фиброзом или индивида с подозрением на наличие фиброза и введение указанному индивиду соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, при этом последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. Настоящее изобретение относится к способам, включающим введение индивиду, подверженному риску развития фиброза, соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований,комплементарную mi-РНК или ее предшественнику, таким образом, предотвращая развитие фиброза. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз печени. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз легких. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз кожи. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз у пожилых людей. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз сердца. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз почек. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз селезенки. Настоящее изобретение относится к способам, включающим введение индивиду, страдающему фиброзом, или индивиду с подозрением на наличие фиброза, соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно нарушение или заболевание сердца. Настоящее изобретение относится к способам, включающим идентификацию больного с фиброзом или индивида с подозрением на фиброз, где у указанного индивида имеется по меньшей мере одно нарушение или заболевание сердца; и введение указанному индивиду соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, при этом последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна miРНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления нарушение или заболевание сердца выбрано из группы, состоящей из гипертрофии сердца, гипертензивной сердечной недостаточности, диастолической сердечной недостаточности, систолической сердечной недостаточности, сердечных болезней накопления, кардиомиопатии, констриктивного перикардита, болезни коронарных артерий, острого инфаркта миокарда,хронического инфаркта миокарда, недостаточности правых отделов сердца, сердечной аритмии, связанного с миокардитом фиброза и нарушения сердечного клапана. В некоторых вариантах осуществления кардиомиопатия выбрана из группы, состоящей из дилятационной кардиомиопатии, гипертрофической кардиомиопатии с обструкцией, гипертрофической кардиомиопатии без обструкции, рестриктивной кардиомиопатии, кардиомиопатии правого желудочка с нарушением ритма и диабетической кардиомиопатии. В некоторых вариантах осуществления нарушения сердечного клапана выбраны из группы, состоящей из стеноза митрального клапана, стеноза аортального клапана, стеноза трехстворчатого клапана и стеноза легочного клапана. В некоторых вариантах осуществления нарушения сердечного клапана выбраны из группы, состоящей из недостаточности митрального клапана, недостаточности аортального клапана, недостаточности трехстворчатого клапана и недостаточности легочного клапана. В некоторых вариантах осуществления представленные в настоящем описании способы дополнительно включают введение одного или нескольких дополнительных фармацевтических средств. В некоторых вариантах осуществления указанное введение уменьшает увеличение веса сердца,расширение левого желудочка или расстройство фракции укорочения. В некоторых вариантах осуществления указанное введение предотвращает увеличение веса сердца,расширение левого желудочка или расстройство фракции укорочения. В некоторых вариантах осуществления указанное введение улучшает сердечную функцию. В некоторых вариантах осуществления указанное введение включает внутривенное введение, подкожное введение, внутриартериальное введение или внутрисердечное введение. Настоящее изобретении относится к способам лечения фиброза, включающим введение индивиду,страдающему фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени. Настоящее изобретение относится к способам, включающим идентификацию больного с фиброзом или индивидуума с подозрением на фиброз, причем у указанного индивида имеется по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени; и введение указанному индивиду соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, при этом последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени представляет собой хроническое повреждение печени. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени представляет собой вирусный инфекционный гепатит. В некоторых вариантах осуществления инфекционный гепатит представляет собой вирусный инфекционный гепатит С. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит. В некоторых вариантах осуществления указанное введение включает внутривенное введение или подкожное введение. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени представляет собой цирроз. В некоторых вариантах осуществления указанное введение улучшает функцию печени. Настоящее изобретение относится к способам лечения фиброза, включающим введение индивиду,страдающему фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние легких. Настоящее изобретение относится к способам, включающим идентификацию больного с фиброзом или индивида с подозрением на фиброз, причем у указанного индивида имеется по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние легких; и введение указанному индивиду соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов,причем последовательность модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанное по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние легких представляет собой хроническую обструктивную болезнь легких. В некоторых вариантах осуществления указанное введение включает пульмональное введение. Настоящее изобретение относится к способам лечения фиброза, включающим введение индивиду,страдающему фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов и имеющий после-2 020335 довательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние. Настоящее изобретение относится к способам, включающим идентификацию больного с фиброзом или индивида с подозрением на фиброз, где указанный индивид имеет по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние легких; и введение указанному индивиду соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов,причем последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанное по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние представляет собой легочную гипертензию. В некоторых вариантах осуществления указанное по меньшей мере одно другое заболевание или состояние представляет собой заболевание, связанное с кровеносными сосудами. В некоторых вариантах осуществления указанное заболевание, связанное с кровеносными сосудами, выбрано из группы, состоящей из артериальной ригидности, медиасклероза и артериосклероза. В некоторых вариантах осуществления указанное по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние представляет собой склероз пищеварительного канала. В некоторых вариантах осуществления указанное по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние представляет собой склеродермию. В некоторых вариантах осуществления указанное по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние выбрано из группы, состоящей из ретроперитонеального фиброза, пролиферативного фиброза, неопластического фиброза, нефрогенного системного фиброза, инъекционного фиброза, медиастинального фиброза, миелофиброза, пост-вазэктомического болевого синдрома, ревматоидного артрита. В некоторых вариантах осуществления указанное введение улучшает состояние при фиброзе. В некоторых вариантах осуществления указанное введение замедляет дальнейшее прогрессирование фиброза. В некоторых вариантах осуществления указанное введение останавливает дальнейшее прогрессирование фиброза. В некоторых вариантах осуществления указанное введение ослабляет фиброз. В некоторых вариантах осуществления указанное введение уменьшает содержание коллагена. Настоящее изобретение относится к способам лечения фибропролиферативного расстройства,включающим введение индивиду, страдающему фибропролиферативным расстройством или с подозрением на наличие фибропролиферативного расстройства, соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, причем последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, таким образом, осуществляя лечение фибропролиферативного расстройства. В некоторых вариантах осуществления введение включает внутривенное введение, подкожное введение, пульмональное введение, внутриартериальное введение или внутрисердечное введение. Настоящее изобретение относится к способам ингибирования пролиферации фибробластов, включающим приведение фибробластов в контакт с соединением, содержащим модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, где последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, таким образом, осуществляя ингибирование пролиферации фибробластов. Настоящее изобретение относится к способам стимуляции апоптоза фибробластов, включающим приведение фибробластов в контакт с соединением, содержащим модифицированный олигонуклеотид,состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, где последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, таким образом, осуществляя стимуляцию апоптоза фибробластов. Настоящее изобретение относится к способам повышения уровня белка Sprouty-1 в фибробластах,включающим приведение фибробластов в контакт с соединением, содержащим модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов, где последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, таким образом, осуществляя стимуляцию экспрессии белка Sprouty-1. Настоящее изобретение относится к композициям для ингибирования микро-РНК. В некоторых вариантах осуществления указанная mi-РНК представляет собой miR-21. В некоторых вариантах осуществления указанный модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную последовательности нуклеиновых оснований, которая по меньшей мере на 80% идентична miR-21 или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления miR-21 имеет последовательность нуклеиновых оснований, представленную в виде SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления предшественник miR-21 имеет последовательность нуклеиновых оснований, представленную в виде SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления указанный модифицированный олигонуклеотид состоит из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 12 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 13 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 14 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олиго-3 020335 нуклеотид состоит из 15-24 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 15 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 19 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 21 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 22 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 23 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 24 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет не более чем два несовпадения с последовательностью нуклеиновых оснований miR-21 или ее предшественником. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет не более чем одно несовпадение с последовательностью нуклеиновых оснований miR-21 или ее предшественником. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида не имеет несовпадений с последовательностью нуклеиновых оснований miR-21 или ее предшественником. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 16 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 17 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 19 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 20 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 21 смежное нуклеиновое основание последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 22 смежных нуклеиновых основания последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида состоит из последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, конъюгированный с лигандом. В некоторых вариантах осуществления оно имеет структуру в которой каждое Q независимо представляет собой 2'-O-метил-модифицированный нуклеозид; х представляет собой одно из А и В является S, тогда как другое представляет собой О; у представляет собой-4 020335 каждый из z1, z2, z3 и z4 независимо представляет собой х или у; в которой X представляет собой N(CO)R7 или NR7; каждый из R1, R3 и R9 независимо представляет собой Н, ОН или -CH2ORb, при условии, что по меньшей мере один из R1, R3 и R9 представляет собой ОН и по меньшей мере один из R1, R3 и R9 представляет собой -CH2ORb;Rd представляет собой углеводный радикал или стероидный радикал, который необязательно привязан по меньшей мере к одному углеводному радикалу; одно из А и В является S, тогда как другое представляет собой О. В некоторых вариантах осуществления Rd представляет собой холестерин. В некоторых вариантах осуществления каждый из z1, z2, z3 и z4 представляет собой где одно из А и В является S, тогда как другое представляет собой О. В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой -CH2ORb. В некоторых вариантах осуществления R9 представляет собой ОН. В некоторых вариантах осуществления R1 и R9 представлены в транс-конфигурациях. В некоторых вариантах осуществления R1 и R3 представлены в трансконфигурациях. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой -CH2ORb. В некоторых вариантах осуществления R1 является ОН. В некоторых вариантах осуществления R1 и R3 представлены в транс-конфигурациях. В некоторых вариантах осуществления R3 и R9 представлены в трансконфигурациях. В некоторых вариантах осуществления R9 представляет собой -CH2ORb. В некоторых вариантах осуществления X представляет собой NC(O)R7. В некоторых вариантах осуществления R7 представляет собой -CH2(CH2)3CH2NHC(O)Rd. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна межнуклеозидная связь является модифицированной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь является модифицированной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна межнуклеозидная связь является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах осуществления множество нуклеозидов содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеозид содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеозид содержит 2'-Ометоксиэтил-сахар. В некоторых вариантах осуществления каждый из множества нуклеозидов содержит 2'-О-метоксиэтил-сахар, и каждый из множества нуклеозидов содержит 2'-фтор-сахар. В некоторых вариантах осуществления каждый модифицированный сахар независимо выбран из 2'-О-метоксиэтил-сахара,2'-фтор-сахара, 2'-О-метил-сахара или бициклического фрагмента сахара. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированное нуклеиновое основание. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5 метилцитозин. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один нуклеозид содержит цитозин, где указанный цитозин является 5-метилцитозином. В некоторых вариантах осуществления каждый цитозин является 5-метилцитозином. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида является по меньшей мере на 90% комплементарной последовательности нук-5 020335 леиновых оснований SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида является по меньшей мере на 95% комплементарной последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида является на 100% комплементарной последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет полноразмерную комплементарность последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 95% комплементарна последовательности нуклеиновых основанийSEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований miR-21 состоит из последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления предшественник последовательности нуклеиновых оснований состоит из последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, получено в виде фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид получен в виде фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение состоит из модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид представляет собой одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид представляет собой антисмысловой олигонуклеотид. Настоящее изобретение относится к композициям для применения при лечении, профилактике и/или улучшении состояния при фиброзе. Кроме того, настоящее изобретение относится к соединениям,содержащим модифицированные олигонуклеотиды, имеющие последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК, для применения при лечении, профилактике и/или улучшении состояния при фиброзе. Настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, комплементарным miR-21,для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения фиброза. Настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, комплементарным miR-21,для применения при лечении и/или профилактике фиброза. Настоящее изобретение относится к применению miR-21 и/или антисмыслового олигонуклеотида против miR-21 для лечения фиброза. Настоящее изобретение относится к применению miR-21 и/или антисмыслового олигонуклеотида против miR-21 для диагностики фиброза. Краткое описание чертежей Фиг. 1. Дизрегуляция miR-21 при кардиологическом заболевании и предоминантная экспрессия в сердечных фибробластах.(a) Анализ экспрессии микро-РНК с помощью микрочипов. РНК выделяли из левого желудочка миокарда мышиной модели сердечной недостаточности (мыши 1AR-TG) на ранней (трехмесячный возраст), умеренной (шестимесячный возраст) и поздней стадиях (двенадцатимесячный возраст) сердечной недостаточности. Экспрессия представлена в виде кратной регуляции по сравнению с таковой у контрольных животных дикого типа. miR-21 отмечена красным цветом. Данные представлены на основе 3-4 независимых гибридизаций на группу.(b) Слева назерн-блот-анализ экспрессии miR-21 на различных стадиях сердечной недостаточности у мышей 1AR-TG. Справа количественный анализ данных из расположенной выше панели.(c) Слева назерн-блот-анализ экспрессии miR-21 у человека с отсутствием недостаточности и с недостаточностью левого желудочка миокарда. Справа количественный анализ зрелой формы miR-21 у человека с отсутствием недостаточности и с недостаточностью левого желудочка миокарда.(d) Вверху неонатальные кардиомиоциты, окрашенные 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) и антителом против -актинина, после трансфекции скремблированной miR (контроль - пре-miR, 50 нМ,72 ч), синтетической miR-21 (пре-miR-21, 50 нМ, 72 ч) и ингибитором miR-21 (анти-miR-21, 50 нМ, 72 ч). Кардиомиоциты культивировали в контролируемых условиях (см. вспомогательные методы) или стимулировали FCS (5%) в течение 48 ч. Внизу количественный анализ размеров индивидуальных кардиомиоцитов (анализ гистограммы). N200 кардиомиоцитов было проанализировано на группу.(e) Вверху получение трансгенных мышей, экспрессирующих miR-21 под контролем альфа-МНСпромотора. Посередине назерн-блоттинг зрелой miR-21 у мышей дикого типа (WT) и у трансгенных (TG) животных. Внизу поперечные срезы участков сердца мышей дикого типа и miR-21-трансгенных мышей,окрашенные с целью определения общей морфологии (окрашивание гематоксилин-эозином) и отложе-6 020335(вверху) и количественной ПЦР в масштабе реального времени (внизу). Все отрезки, характеризующие значение погрешности, означают SEM (стандартная ошибка среднего). n=3-6 для a-f. Фиг. 2. Ингибирование Sprouty-1 через miR-21 приводит к дерепрессии передачи сигнала ERK и повышает выживаемость фибробластов.(а) Сердца, полученные из организма мышей Spry1LacZ +/-, окрашивали, используя X-gal. Макроскопический (вверху) и микроскопический (внизу) анализы обнаруживают детектирование LacZ в сердечных фибробластах. Короткий черный отрезок соответствует 100 мкм. Большой черный отрезок соответствует 10 мкм.(b, с) Вверху детектирование SPRY1, ERK1/2 и фосфо-ERK1/2 у человека с недостаточностью левого желудочка (b) и после трансфекции совместно культивируемых кардиомиоцитов и фибробластов со скремблированной микро-РНК (отрицательный контроль 2 пре-miR, 50 нМ, 72 ч), синтетической miR21 (пре-miR-21, 50 нМ, 72 ч) или с ингибитором miR-21 (анти-miR-21, 50 нМ, 72 ч). Внизу результаты количественного анализа вестерн-блоттинга.(d) Вверху детектирование SPRY1, ERK1/2 и фосфо-ERK1/2 после siPHK-опосредованного нокдауна SPRY1 (150 нМ, 72 ч) или обработки скремблированной siPHK (150 нМ, 72 ч) совместно культивируемых кардиальных клеток. Внизу результаты количественного анализа вестерн-блоттинга.(e) Вверху FACS-анализ аннексин V-положительных кардиальных фибробластов после обработки скремблированной микро-РНК (контроль пре-miR, 100 нМ, 72 ч), синтетической miR-21 (пре-miR-21, 100 нМ, 72 ч), обработки антагонистами miR-21 (анти-miR-21, 100 нМ, 72 ч) или соответствующими контролями (100 нМ, 72 ч). Внизу количественный анализ аннексин V-положительных клеток после соответствующих обработок.(f) Вверху концентрация ФРФ-2 в супернатантах культивируемых кардиальных фибробластах после обработки скремблированной микро-РНК (контроль пре-miR, 100 нМ, 72 ч), синтетической miR-21 (преmiR-21, 100 нМ, 72 ч) или обработки антагонистами miR-21 (анти-miR-21, 100 нМ, 72 ч) или (внизу) после siPHK-опосредованного нокдауна SPRY1 (150 нМ, 72 ч) или обработки скремблированной si-РНК(150 нМ, 72 ч). Все отрезки, характеризующие значение погрешности, означают SEM. n=3-6 для a-f. Фиг. 3. Терапевтический сайленсинг miR-21 in vivo предотвращает фиброз сердца и сердечную недостаточность.(а) Вверху детектирование методом флуоресцентной микроскопии Су 3 и DAPI, окрашенных в ткани левого желудочка сердца после инъекции Су 3-меченного модифицированного олигонуклеотида через яремную вену. Контроли получены путем инъекций PBS. Внизу мышам, подвергнутым трансаортальной констрикции (ТАС) или ложной операции, делали контрольные инъекции (PBS, 200 мкл) или инъекции антагониста mi-РНК, antagomir-21 (200 мкл; 80 мг/кг/день), через 24 ч после операции и в последующие три дня.(b) Вверху назерн-блот-анализ экспрессии miR-21 у необработанных мышей (контроль) и мышей,обработанных antagomir-21, после ТАС. Внизу количественный анализ экспрессии кардиального miR-21.(c) Вверху вестерн-блот-анализ SPRY1, ERK1/2 и фосфо-ERK1/2 у мышей после ложной операции или после ТАС, обработанных либо как в контроле, либо обработанных antagomir-21. Экспрессия G-бета была приведена в качестве контроля [генов] домашнего хозяйства. Внизу количественный анализ результатов Вестерн-блоттинга.(d) Кардиальные срезы после окрашивания сириусом красным, предназначенные для детектирования миокардиального фиброза у мышей, обработанных как в контроле, и у мышей, обработанных antagomir-21.(e) Количественный анализ миокардиального фиброза (слева) и отношения веса сердца к весу тела(f) Вверху глобальный анализ транскриптома мышиного генома в сердечной ткани мышей после операции или ложной операции или после ТАС, обработанных либо как в контроле, либо обработанных антагонистом antagomir-21. Красными (зелеными) блоками показана статистическая значимость (р 0,05) индуцированных (репрессированных) генов. Внизу нормализация повышенной регуляции генов, кодирующих белки, участвующие в образовании фиброза миокарда после ТАС под действием обработки антагонистом antagomir-21.(g) Эхокардиографический анализ. LVD, диаметр левого желудочка (left ventricular diameter); FS,фракция укорочения (fractional shortening).(h) Предложенный механизм, лежащий в основе депрессии передачи сигнала сердечной ERK (внеклеточная сигнал-регулируемая киназа) через miR-21-опосредованное ингибирование SPRY1. Все отрезки, характеризующие значение погрешности, означают SEM. n=3-6 для a-g. Фиг. 4. Регуляция транскрипции miR-21.(a) Консервативность последовательности внутри областей промотора miR-21 у различных видов по сравнению с человеческим промотором miR-21. Столбики соответствуют степени консервативности.(b) Люциферазная активность конструктов человеческого промотора miR-21. Прогрессивное укоро-7 020335 чение нативного промотора приводит к идентификации области в 117 п.н., которая ответственна за экспрессию miR-21. n=3.(c) Данные по люциферазной активности конструктов человеческого промотора miR-21 после делеции/мутации сайтов связывания индивидуальных факторов транскрипции. n=3. Фиг. 5. Нокдаун повсеместно экспрессируемой miR-21 индуцирует сердечный фенотип у полосатой(a) Слева латеральный вид МО-контрольных эмбрионов и miR-21 морфантов при 80 hpf (hours past(ventricle); темные стрелки указывают на перикардиальный отек. Справа вверху контроль - инъецированные морфолино сердца (МО-контроль) имеют нормальную морфологию сердца на сроке 80 часов после оплодотворения (hpf). Сердца перекручены (запетлены), эндокардиальный и миокардиальный слои хорошо развиты, и желудочек (V) и предсердие (А) разделены атриовентрикулярным (AV)-кольцом. Внизу у miR-21-морфантов (инъецированных МО-1) развивается перикардиальный отек за счет потери сократимости желудочка и проявляются укороченные хвосты, тогда как развитие других органных систем протекает нормально.(b) Ингибирование функции miR-21 двумя различными морфолино-модифицированными антисмысловыми олигонуклеотидами (МО-1, n=496 и МО-2, n=460) приводит к образованию идентичного фенотипачем у 90% инъецированных эмбрионов. Данные представлены на основании 3 независимых инъекций на группу.(c) Функция миокарда проявляется в виде фракции укорочения (FS) вентрального отдела МОконтроля (n=6) и miR-21-морфантов, инъецированных двумя различными морфолинами (МО-1, n=8 и МО-2, n=8) на сроках 48, 72, 96 и 120 hpf. Вентрикулярная фракция укорочения FS желудочков miR-21 морфантов значительно уменьшается со временем. Фиг. 6. Эффективность трансфекции в культивируемых кардиомиоцитах.(a) Культивируемые неонатальные кардиомиоциты трансфицировали Су-3-меченной miR-21 (50 нМ, 72 ч, Ambion, USA) и окрашивали DAPI (справа). Для сравнения культивируемые кардиомиоциты окрашивали только DAPI (слева).(b) Назерн-блот-анализ экспрессии miR-21 в культивируемых кардиомиоцитах после трансфекции скремблированной микро-РНК (контроль пре-miR, 50 нМ, 72 ч), трансфекции ингибитором miR-21 (анти-miR-21, 50 нМ, 72 ч) или синтетической miR-21 (пре-miR-21, 50 нМ, 72 ч). Все отрезки, характеризующие значение погрешности, означают SEM. n=3-6 для а) и b). Фиг. 7. Сайты связывания микро-РНК внутри 3'UTR гена Spry1.(а) Изменение в экспрессии различных микро-РНК с сайтами связывания внутри области 3'UTR гена Spry1. Внизу микро-РНК с сайтами связывания внутри 3'UTR, изучаемые с помощью микро-РНКмикрочипа, представлены в сером цвете. Cds=кодирующая последовательность. Фиг. 8. Данные по экспрессии miR-21, полученные методом ПЦР в масштабе реального времени. Помимо определения путем Назерн-блоттинга, изучали экспрессию miR-21 методом ПЦР в масштабе реального времени в ткани левого желудочка мышей после ложной операции; ложной операции + обработки антагонистом antagomir-21, ТАС; и ТАС + обработки антагонистом antagomir-21 (слева), а также в сердцах, полученных из мышей дикого типа и miR-21-трансгенных мышей (справа). n=4-6 на группу. Не представленные данные. Путем скрининга теоретических miR-21-мишеней было выявлено 22 известных потенциальных гена-мишени, из которых 8 генов, как было показано, экспрессировались внутри сердечной ткани. Путем комбинации трех различных подходов для предсказания мишеней идентифицировали Spry1 (sprouty1) как весьма вероятного кандидата. Регуляция транскрипции miR-21. Имеется консервативность последовательности внутри областей промотора miR-21 у различных видов по сравнению с областями человеческого промотора miR-21. Была продемонстрирована люциферазная активность конструктов человеческого промотора miR-21 после делеции/мутации сайтов связывания индивидуальных факторов транскрипции. Прогрессивное укорочение нативного промотора приводит к идентификации области в 117 п.н., которая ответственна за экспрессию miR-21. n=3. Эффективность трансфекции в культивируемых кардиомиоцитах. Культивируемые неонатальные кардиомиоциты трансфицировали Су-3-меченной miR-21 (50 нМ,72 ч, Ambion, USA) и окрашивали DAPI. Для сравнения культивируемые кардиомиоциты окрашивали только DAPI. Анализировали результаты назерн-блоттинга по экспрессии miR-21 в культивируемых кардиомиоцитах после трансфекции скремблированной микро-РНК (контроль пре-miR, 50 нМ, 72 ч), ингибитором miR-21 (анти-miR-21, 50 нМ, 72 ч) или синтетической miR-21 (пре-miR-21, 50 нМ, 72 ч). Сайты связывания микро-РНК внутри 3'UTR гена Spry1. Имеет место изменение в экспрессии различных микро-РНК с сайтами связывания внутри области 3'UTR гена Spry1. Микро-РНК с сайтами связывания внутри 3'UTR изучали с помощью микро-РНКмикрочипа. Данные по экспрессии miR-21, полученные методом ПЦР в масштабе реального времени. Помимо определения путем назерн-блоттинга, изучали экспрессию miR-21 методом ПЦР в масштабе реального времени в ткани левого желудочка мышей после ложной операции, ложной операции + обработки антагонистом antagomir-21, после ТАС и ТАС + обработки антагонистом antagomir-21, а также в сердцах, полученных из организма мышей дикого типа и miR-21-трансгенных мышей. Подробное описание изобретения Определения."Фиброзом" называется образование или развитие избыточной фиброзной соединительной ткани в органе или ткани. В некоторых вариантах осуществления фиброз возникает в качестве репаративного или реактивного процесса. В некоторых вариантах осуществления фиброз возникает в ответ на повреждение или травму. Термин "фиброз" следует понимать как образование или развитие избыточной фиброзной соединительной ткани в органе или ткани в результате репаративного или реактивного процесса,в отличие от образования фиброзной ткани в качестве нормальной составляющей органа или ткани. Под антисмысловым олигонуклеотидом следует понимать олигонуклеотид, который имеет определенную последовательность, комплементарную другой последовательности, в частности последовательности, комплементарной miR-21. Мишень miR-21 можно расценивать также как понятие, охватывающее низлежащую мишень miR-21. Важно отметить, что ингибирование miR-21, например, с помощью олигонуклеотида с последовательностью, по меньшей мере, комплементарной miR-21, будет приводить к дерепрессии или даже к повышенной экспрессии мишеней miR-21, таких как Sprouty и т.п."Индивид" означает человека или отличного от человека животного, выбранного для лечения или терапии."Индивид с подозрением на наличие" означает индивида, у которого проявляется одно или несколько клинических показателей заболевания или состояния."Индивид с подозрением на наличие фиброза" означает индивида, у которого проявляется одно или несколько клинических показателей фиброза."Предотвращать" или "предотвращение" относится к задержке или предупреждению запуска, развития или прогрессии болезненного состояния или заболевания на некоторый период, включая недели,месяцы или годы."Лечение" или "лечить" означает применение одной или нескольких специфических процедур, используемых для лечения или облегчения болезненного состояния при заболевании. В некоторых вариантах осуществления под специфической процедурой подразумевается введение одного или нескольких фармацевтических средств."Облегчение" означает уменьшение тяжести по меньшей мере одного из признаков болезненного состояния или заболевания. В некоторых вариантах осуществления облегчение включает отсрочивание или замедление прогрессии одного или нескольких признаков состояния или заболевания. Степень тяжести признаков может быть определена путем индивидивных или объективных оценок, которые известны специалистам в данной области."Введение" означает снабжение индивида фармацевтическим средством или композицией и включает, но не ограничивается указанным, введение с помощью медицинского персонала и самостоятельное введение."Парентеральное введение" означает введение путем инъекции или инфузии. Парентеральное введение включает, но не ограничивается перечисленным, подкожное введение,внутривенное введение, внутримышечное введение, внутриартериальное введение и внутричерепное введение."Подкожное введение" означает введение непосредственно под кожу."Внутрисердечное введение" означает введение в сердце. В некоторых вариантах осуществления внутрисердечное введение осуществляют с помощью катетера. В некоторых вариантах осуществления внутрисердечное введение осуществляют путем открытой операции на сердце."Улучшает функцию печени" означает изменения в сторону нормализации ее параметров. В некоторых вариантах осуществления функцию печени определяют путем измерения молекул, находящихся в крови у индивида. Например, в некоторых вариантах осуществления улучшение функции печени определяют по снижению уровней трансаминазы в крови."Фармацевтическая композиция" означает смесь веществ, подходящих для введения индивиду, которая включает фармацевтическое средство. Например, фармацевтическая композиция может включать модифицированный олигонуклеотид и стерильный водный раствор."Фармацевтическое средство" означает вещество, которое при введении индивиду обеспечивает терапевтический эффект."Активный фармацевтический ингредиент" означает вещество в составе фармацевтической композиции, которое обеспечивает требуемый эффект."Нуклеиновая кислота-мишень", "РНК-мишень" "РНК-транскрипт-мишень" и "нуклеиновокислотная мишень " - все эти термины относятся к любой нуклеиновой кислоте, на которую могут быть нацелены антисмысловые соединения."Нацеливание" относится к процессу создания и селекции последовательности нуклеиновых оснований, которая будет гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью и вызывать требуемый эффект."Нацеленный на" означает имеющий последовательность нуклеиновых оснований, которая позволит осуществить гибридизацию с нуклеиновой кислотой-мишенью для индукции требуемого эффекта. В некоторых вариантах осуществления требуемым эффектом является сокращение количества нуклеиновой кислоты-мишени."Модуляция" относится к нарушению (изменению) функции или активности. В некоторых вариантах осуществления модуляция означает повышение экспрессии гена. В некоторых вариантах осуществления под модуляцией подразумевают уменьшение экспрессии гена."Экспрессия" означает любые функции и стадии, посредством которых кодируемая геном информация превращается в структуры, присутствующие и функционирующие в клетке."5'-сайт-мишень" относится к нуклеиновому основанию нуклеиновой кислоты-мишени, которое комплементарно самому крайнему 5'-нуклеиновому основанию конкретного олигонуклеотида."3'-сайт-мишень" относится к нуклеиновому основанию нуклеиновой кислоты-мишени, которое комплементарно самому крайнему 3'-нуклеиновому основанию конкретного олигонуклеотида."Область" означает часть соединенных друг с другом нуклеозидов внутри нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна области нуклеиновой кислоты-мишени. Например, в некоторых таких вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид комплементарен области последовательности структуры типа "стебель-петля" mi-РНК. В некоторых таких вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид на 100% комплементарен области последовательности структуры типа "стебель-петля" mi-РНК."Сегмент" означает меньшую область или часть области."Последовательность нуклеиновых оснований" означает порядок следования смежных нуклеиновых оснований в ориентации от 5' к 3', независимо от какого бы то ни было сахара, связи и/или модификации нуклеиновых оснований."Смежные нуклеиновые основания" означает нуклеиновые основания, непосредственно прилегающие друг к другу в нуклеиновой кислоте."Комплементарность нуклеиновых оснований" означает способность двух нуклеиновых оснований нековалентно спариваться посредством водородной связи."Комплементарный" означает, что первая последовательность нуклеиновых оснований является по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичной или же является на 100% идентичной комплементу второй последовательности нуклеиновых оснований в пределах области из 8, 9, 10,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или более нуклеиновых оснований, или что две указанные последовательности гибридизуются в жестких условиях гибридизации. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид,который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая на 100% комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, может не быть на 100% комплементарна mi-РНК или ее предшественнику на всем протяжении полной длины модифицированного олигонуклеотида."Комплементарность" означает способность нуклеиновых оснований к спариванию первой нуклеиновой кислоты со второй нуклеиновой кислотой."Полноразмерная комплементарность" означает, что каждое нуклеиновое основание первой нуклеиновой кислоты способно спариваться с каждым нуклеиновым основанием в соответствующем положении второй нуклеиновой кислоты. Например, в некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид, в котором каждое нуклеиновое основание комплементарно нуклеиновому основанию в mi-РНК, обладает полноразмерной комплементарностью в отношении mi-РНК."Процент комплементарности" означает число комплементарных нуклеиновых оснований в нуклеиновой кислоте, деленное на длину нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления процент комплементарности модифицированного олигонуклеотида означает число нуклеиновых оснований,которые комплементарны нуклеиновой кислоте-мишени, деленное на число нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления процент комплементарности модифицированного олигонуклеотида означает число нуклеиновых оснований, которые комплементарны mi-РНК, деленное на число нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида."Процент связанной области" означает процент, который составляет область, комплементарную области олигонуклеотида. Процент связанной области вычисляют путем деления числа нуклеиновых оснований области-мишени, которые комплементарны олигонуклеотиду, на длину области-мишени. В некоторых вариантах осуществления процент связанной области составляет по меньшей мере 80%, по мень- 10020335 шей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99 или 100%."Процент идентичности" означает число нуклеиновых оснований в первой нуклеиновой кислоте,которые идентичны нуклеиновым основаниям в соответствующих положениях второй нуклеиновой кислоты, деленное на общее число нуклеиновых оснований в первой нуклеиновой кислоте. Используемое в настоящем описании выражение "по существу, идентичный" означает, что первая и вторая последовательности нуклеиновых оснований являются по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85,90, 95, 97, 98 или 99% идентичными либо же на 100% идентичными на всем протяжении участка из 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100 или более нуклеиновых оснований."Гибридизация" означает выравнивание комплементарных нуклеиновых кислот, которое происходит на всем протяжении, где имеется комплементарность нуклеиновых оснований."Несовпадение" означает, что нуклеиновое основание первой нуклеиновой кислоты не способно спариваться с нуклеиновым основанием в соответствующем положении второй нуклеиновой кислоты."Некомплементарное нуклеиновое основание" означает, что два нуклеиновых основания не способны спариваться путем образования водородной связи."Идентичный" означает имеющий ту же самую последовательность нуклеиновых оснований."mi-РНК" или "miR" означает некодирующую РНК длиной от 18 до 25 нуклеиновых оснований, которая гибридизуется с кодирующей РНК и регулирует ее экспрессию. В некоторых вариантах осуществления mi-РНК является продуктом расщепления пре-mi-РНК под действием фермента Dicer. Примеры"Пре-mi-РНК" или "пре-miR" означает некодирующую РНК, имеющую структуру шпильки, которая содержит mi-РНК. В некоторых вариантах осуществления пре-mi-РНК представляет собой продукт расщепления при-miR под действием рибонуклеазы, специфичной в отношении двухцепочечной РНК и известной как Drosha."Последовательность "стебель-петля" означает РНК, имеющую структуру типа "стебель-петля" и содержащую последовательность mi-РНК. Последовательности пре-mi-РНК и последовательности типа"стебель-петля" могут перекрываться. Примеры последовательностей типа "стебель-петля" можно обнаружить в базе данных mi-РНК, известной как miRBase (http://microrna.sanqer.ac.uk/)."При-mi-РНК" или "при-miR" означает некодирующую РНК, имеющую структуру шпильки, которая является субстратом для рибонуклеазы Drosha, специфичной в отношении двухцепочечной РНК."Предшественник mi-РНК" означает транскрипт, который происходит из геномной ДНК и который содержит некодирующую структурированную РНК, содержащую одну или несколько последовательностей mi-РНК. Например, в некоторых вариантах осуществления предшественник mi-РНК представляет собой пре-mi-РНК. В некоторых вариантах осуществления предшественник mi-РНК представляет собой при-mi-РНК. Под "моноцистронным транскриптом" подразумевается предшественник mi-РНК, содержащий единственную последовательность mi-РНК. Под "полицистронным транскриптом" подразумевается предшественник mi-РНК, содержащий две или более последовательностей mi-РНК."Олигомерное соединение" означает соединение, содержащее полимер из связанных мономерных единиц."Олигонуклеотид" означает полимер из соединенных друг с другом нуклеозидов, каждый из которых, независимо друг от друга, может быть модифицирован или не модифицирован."Природным образом возникающая межнуклеозидная связь" означает 3'-5'-фосфодиэфирную связь между нуклеозидами."Природное нуклеиновое основание" относится к нуклеиновому основанию, которое является немодифицированным по сравнению с его формой, возникающей естественным образом."Межнуклеозидная связь" означает ковалентную связь между соседними нуклеозидами."Антагонист miR" означает модифицированный олигонуклеотид, комплементарный mi-РНК или ее предшественнику. Например, "антагонист miR-X" означает модифицированный олигонуклеотид, содержащий нуклеиновое основание, комплементарное miR-X. В некоторых вариантах осуществления антагонист представляет собой антагонист miR-21."Модифицированный олигонуклеотид" означает олигонуклеотид, содержащий одну или несколько модификаций по сравнению с возникающими природным образом концевым участком, сахаром, нуклеиновым основанием и/или межнуклеозидной связью."Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид" означает модифицированный олигонуклеотид, который не гибридизован с комплементарной цепью."Модифицированная межнуклеозидная связь" относится к любому изменению по сравнению с возникающей естественным образом межнуклеозидной связью."Фосфоротиоатная межнуклеозидная связь" означает связь между нуклеозидами, в которой один из не образующих мостик атомов является атомом серы."Модифицированный сахар" означает замену и/или любое изменение по сравнению с природным сахаром."Модифицированное нуклеиновое основание" означает любую замену и/или изменение по сравнению с природным нуклеиновым основанием."Бициклический фрагмент сахара" относится к сахару, модифицированному образованием мостика между двумя атомами кольца, не присоединенными к одному и тому же атому."Бициклический нуклеозид" означает 2'-модифицированный нуклеозид, имеющий бициклический фрагмент сахара."Мотив" означает вид модифицированных и/или не модифицированных нуклеиновых оснований,сахаров и/или межнуклеотидных связей в олигонуклеотиде."Полностью модифицированный олигонуклеотид" означает, что каждое нуклеиновое основание,каждый сахар и/или каждая межнуклеотидная связь модифицированы."Одинаково модифицированный олигонуклеотид" означает, что каждое нуклеиновое основание,каждый сахар и/или каждая межнуклеотидная связь имеют одну и ту же модификацию по всей длине модифицированного олигонуклеотида."Стабилизирующая модификация" означает модификацию нуклеозида, которая обеспечивает модифицированному олигонуклеотиду повышенную стабильность в присутствии нуклеаз по сравнению со стабильностью, обеспечиваемой 2'-дезоксинуклеозидами, связанными фосфодиэфирными межнуклеозидными связями. Например, в некоторых вариантах осуществления стабилизирующая модификация является стабилизирующей модификацией нуклеозида. В некоторых вариантах осуществления стабилизирующая модификация является стабилизирующей модификацией межнуклеозидной связи."Стабилизирующий нуклеозид" означает нуклеозид, модифицированный с целью обеспечения олигонуклеотиду повышенной стабильности в отношении нуклеаз по сравнению со стабильностью, обеспечиваемой 2'-дезоксинуклеозидом. В одном из вариантов осуществления стабилизирующим нуклеозидом является 2'-модифицированный нуклеозид."Стабилизирующая межнуклеозидная связь" означает межнуклеозидную связь, которая обеспечивает олигонуклеотиду повышенную стабильность в отношении нуклеаз по сравнению со стабильностью,обеспечиваемой фосфодиэфирной межнуклеозидной связью. В одном из вариантов осуществления стабилизирующей межнуклеозидной связью является фосфоротиоатная межнуклеозидная связь. Общее представление. В настоящем изобретении описано, что модифицированные олигонуклеотиды, комплементарныеmiR-21, являются фармацевтическими средствами для ингибирования miR-21. В некоторых вариантах осуществления модифицированные олигонуклеотиды вводят индивиду, имеющему заболевание, характеризующееся повышенной регуляцией miR-21. В некоторых вариантах осуществления указанным заболеванием является злокачественная опухоль. В некоторых вариантах осуществления указанным заболеванием является сердечная недостаточность. В некоторых вариантах осуществления указанным заболеванием является фиброз. Фиброз образуется в результате развития избыточной фиброзной соединительной ткани в органе или ткани в ответ на повреждение или травму. Оставшись нелеченым, фиброз может привести к различным болезненным состояниям, помимо прочих тканей, со стороны сердца, легких, по- 12020335 чек, печени и кожи. В настоящем изобретении выяснено, что полученный из фибробластов miR-21 играет критическую роль в фиброзе. Повышение уровней miR-21 способствовало выживанию фибробластов, тогда как супрессия эндогенной miR-21 индуцировала апоптотическую гибель клеток. Таким образом, в настоящем описании идентифицирован механизм, посредством которого miR-21 регулирует выживаемость фибробластов. Аберрантные пролиферация и выживаемость фибробластов могут приводить к фиброзу. Соответственно, модифицированные олигонуклеотиды, комплементарные miR-21, являются фармацевтическими средствами для лечения фиброза. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид, комплементарный miR-21, является антисмысловым олигонуклеотидом, комплементарным miR21. Авторы изобретения продемонстрировали критическую роль полученных из фибробластов miR-21 и SPRY1 в ткани сердца (фиг. 3h). Полученные данные свидетельствуют о том, что индуцированная стрессом и опосредованная mi-РНК активация ERK-МАР-киназной активности может играть существенную роль в регуляции сердечного фиброза. Настоящее исследование представляет собой первый пример терапевтического применения микро-РНК в модели заболевания. Специфическим образом противодействуя miR-21, можно на мышиной модели предотвратить структурное и функциональное расстройство. Указанные открытия свидетельствуют о новом подходе к сердечной недостаточности и указывают на обширный терапевтический потенциал антагонистов микро-РНК. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к применению miR-21, антисмыслового олигонуклеотида против miR-21 и/или мишени miR-21 для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Настоящее изобретение относится, в частности, к специфическим болезням сердца, включая фиброз(=связанные с фиброзом заболевания), таким как сердечная гипертрофия, гипертоническая болезнь сердца, диастолическая и систолическая сердечная недостаточность, связанным с сердцем застойным заболеваниям, таким как болезнь Фабри, к кардиомиопатиям, например, дилятационной кардиомиопатии, гипертрофической кардиомиопатии с обструкцией и без обструкции, рестриктивной кардиомиопатии, кардиомиопатии правого желудочка с нарушением ритма и другим формам кардиомиопатии, таким, например, как диабетическая кардиомиопатия, констриктивный перикардит, коронарная болезнь артерий, инфаркт миокарда, острая и хроническая правосторонняя сердечная недостаточность, сердечная аритмия за счет фиброза, связанный с миокардитом фиброз, нарушения сердечных клапанов, приводящие к стенозу или недостаточности клапанов (например, склероз), например стеноз и/или недостаточность митрального клапана, стеноз и/или недостаточность аортального клапана, стеноз и/или недостаточность трехстворчатого клапана, стеноз и/или недостаточность легочного клапана. В дальнейшем аспекте настоящее изобретение относится к другим включающим фиброз заболеваниям (=связанным с фиброзом заболеваниям), не связанным с сердечной системой. Неограничивающими примерами являются фиброз легких, хроническое обструктивное заболевание легких, пульмональная гипертензия, вызванный отравлением фиброз печени, гепатит и/или вторичная правосторонняя сердечная недостаточность, фиброз кожи, например, развитие келоидов после повреждения, заболевания, связанные с кровеносными сосудами, такие как связанная с возрастом или с гипертонией артериальная жесткость (ригидность), медиасклероз, артериосклероз, фиброз различных органов у пожилых людей, склероз пищеварительного канала, например, во время болезни Крона, системного склероза и CRESTсиндрома и т.д., фиброз почек, неопластический фиброз и/или ревматоидный артрит. Дальнейшими хорошо известными заболеваниями и расстройствами, связанными с фиброзом, являются, например, эндомиокардиальный фиброз и идиопатическая миокардиопатия, цирроз, который может развиться в результате фиброза печени, идиопатический пульмональный фиброз легкого, диффузное паренхиматозное заболевание легких, медиастинальный фиброз, миелофиброз, поствазэктомический болевой синдром, ретроперитонеальный фиброз и нефрогенный системный фиброз. Все аспекты данного изобретения, в частности аспекты, упоминаемые в прилагаемой формуле изобретения, могут быть использованы для диагностики, лечения и/или профилактики указанных выше заболеваний, расстройств и состояний, которые приведены в виде возможных примеров. Указанный список не является ограничивающим. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к стратегиям модуляции miR-21. В другом аспекте изобретение относится к стратегиям модуляции, например, повышенной экспрессии и/или повышенной регуляции мишеней miR-21. Возможными путями модуляции являются имплантируемые средства, такие как векторы и липосомные композиции и т.д., системы переноса генов, тампоны и т.п. Белок Sprouty (SPRY1) идентифицирован в настоящем описании как мишень miR-21. Как miR-21,так и SPRY1 экспрессируются, помимо других типов клеток, в фибробластах сердца. Повышение экспрессии miR-21 в фибробластах сердца индуцируется сильным торможением экспрессии белка SPRY и,кроме того, повышенной активацией ERK-MAP-киназы. В предпочтительном варианте осуществления указанная мишень выбрана из группы, состоящей из Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ ID NO: 7 илиSEQ ID NO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и Rtn4. В одном из аспектов настоящее изобретение касается антисмысловых олигонуклеотидов против(или комплементарным) SEQ ID NO: 2-4, Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и/или Rtn4 для диагностики, лечения и/или профилактики фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. В определенных аспектах антисмысловой олигонуклеотид,комплементарный мишени, выбранной из группы, состоящей из Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ IDNO: 7 или SEQ ID NO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и/или Rtn4, препятствует способности микро-РНК, такой как miR-21, связываться с участком-мишенью и ингибировать экспрессию выбранной мишени. В определенных аспектах такой антисмысловой олигонуклеотид содержит одну или несколько нуклеозидных модификаций. В одном из аспектов настоящее изобретение касается клетки, дефицитной в отношении miR-21,SEQ ID NO: 2-4, Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl,Nfib, Lnx1 и/или Rtn4. В одном из аспектов настоящее изобретение касается нокаутного организма млекопитающего, не являющегося человеком, дефицитного в отношении miR-21, SEQ ID NO: 2-4, Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и/или Rtn4, в качестве модели заболевания фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Сюда входят также трансгенные животные, в частности млекопитающие, не являющиеся человеком, которые в повышенном количестве экспрессируют miR-21. В настоящем изобретении было обнаружено, что полученная из фибробластов miR-21 участвует в развитии сердечной недостаточности. Анализ образцов ткани левого желудочка сердца, полученных из организма индивидов с терминальной стадией сердечной недостаточности в результате идиопатической дилятационной кардиомиопатии, выявил наличие повышенной экспрессии miR-21 и подавление экспрессии белка SPRY1. Кроме того, ERK-MAP-киназа была активирована в образцах, полученных от указанных индивидов, что следовало из повышенного отношения фосфор-ERK/ERK. В настоящем изобретении было обнаружено, что у животной модели сердечной недостаточности введение модифицированного олигонуклеотида, комплементарного miR-21, приводит к значительному ослаблению фиброза сердца. Сердечная недостаточность, помимо прочих признаков, характеризуется фиброзом сердца. Соответственно, модифицированные олигонуклеотиды, комплементарные miR-21, являются фармацевтическими средствами для лечения фиброза сердца. В изобретении обнаружено также, что у животной модели сердечной недостаточности ослабление фиброза сердца сопровождается уменьшением увеличения веса сердца. Кроме того, оценивая сердечную функцию методом эхокардиографии, выявили, что введение модифицированного олигонуклеотида, вдобавок к miR-21, предотвращает расширение левого желудочка и нормализует параметры фракции укорочения. Сердечная недостаточность может быть охарактеризована, помимо прочих признаков, увеличением веса сердца, расширением левого желудочка и расстройством фракции укорочения. Соответственно,модифицированные олигонуклеотиды, комплементарные miR-21, являются терапевтическими средствами для лечения, ослабления и предотвращения сердечной недостаточности, ассоциированной с фиброзом сердца. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к области промотора микро-РНК (mi-РНК),содержащей модификацию сайта связывания белка кальций/цАМФ-ответного элемента (CREB) и/или белка сывороточного ответа (SRF), для диагностики, профилактики и/или терапии фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. В одном из вариантов осуществления область промотора, ген mirR-21 как таковой и/или 3'UTR различных мРНК могут содержать полиморфизмы, мутации, в частности, точковые мутации, делеции, усечения и/или инверсию. Все указанные изменения последовательности дикого типа приводят к de novo образованию нового сайта связывания miR-21 или к делеции сайта связывания miR-21. В другом осуществлении модификация области промотора выбрана из группы, состоящей из точковой мутации, усечения, делеции и инверсии. Кроме того, область промотора может быть выбрана из группы, состоящей изSEQ ID NO: 2-4. Применения в диагностике. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к применению miR-21, антисмыслового олигонуклеотида против miR-21 и/или мишени miR-21 для диагностики фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний. Антисмысловой олигонуклеотид следует понимать как олигонуклеотид, который имеет определенную последовательность, комплементарную другой последовательности, в частности последовательности, комплементарной miR-21. Мишень miR-21 можно расценивать также как понятие, охватывающее низлежащую мишень miR-21. Важно отметить, что ингибирование miR-21, например, с помощью олигонуклеотида с последовательностью, по меньшей мере комплементарной miR-21, будет приводить к дерепрессии или даже к повышенной экспрессии мишеней miR-21, таких как Sprouty и т.п. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способу диагностики фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний, включающему следующие стадии:(a) приготовление образца из организма пациента, у которого предполагается наличие фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний;(b) оценка уровня экспрессии miR-21, Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ ID NO: 7 или SEQ IDNO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и/или Rtn4; при этом повышенный уровень miR-21 и/или пониженный уровень Sprouty1 (SPRY1), в частности,SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, Tgfbi, Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и/или Rtn4, по сравнению с контрольным образцом указывает на наличие фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний или предрасположенности к ним. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к способу скрининга фармацевтически активного соединения для лечения или предотвращения фиброза и/или связанных с фиброзом заболеваний или предрасположенности к ним, включающему следующие стадии:(c) определение влияния вещества-кандидата на указанный образец; при этом изменение miR-21, Sprouty1 (SPRY1), в частности, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8, Tgfbi,Krit1, Pitx2, Fasl, Nfib, Lnx1 и/или Rtn4, указывает на то, что соединение является фармацевтически активным. Некоторые заболевания и болезненные состояния. Настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, страдающего фиброзом или с подозрением на наличие фиброза. Предложены также способы лечения индивида, идентифицируемого как индивид, страдающий фиброзом или с подозрением на фиброз. В некоторых вариантах осуществления такие способы предусматривают введение индивиду модифицированного олигонуклеотида, содержащего последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанная mi-РНК представляет собой miR-21. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам профилактики фиброза у индивида, у которого есть риск развития фиброза. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают введение индивиду, у которого есть риск развития фиброза, модифицированного олигонуклеотида, имеющего последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанная mi-РНК представляет собой miR-21. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз печени. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз легких. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз кожи. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз сердца. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз почек. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз у пожилых людей. В некоторых вариантах осуществления указанным фиброзом является фиброз селезенки. В некоторых вариантах осуществления указанный индивид, страдающий фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, имеет по меньшей мере одно нарушение или заболевание сердца. В некоторых вариантах осуществления индивид, идентифицируемый как индивид, страдающий фиброзом или с подозрением на фиброза, имеет по меньшей мере одно нарушение или заболевание сердца. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают введение индивиду модифицированного олигонуклеотида, имеющего последовательность нуклеиновых оснований, комплементарных mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления mi-РНК представляет собой miR-21. В некоторых вариантах осуществления нарушением или заболеванием сердца является гипертрофия сердца. В некоторых вариантах осуществления нарушением или заболеванием сердца является кардиомиопатия. В некоторых вариантах осуществления кардиомиопатия представляет собой дилятационную кардиомиопатию, гипертрофическую кардиомиопатию с обструкцией, гипертрофическую кардиомиопатию без обструкции, рестриктивную кардиомиопатию, кардиомиопатию правого желудочка с нарушением ритма или диабетическую кардиомиопатию. В некоторых вариантах осуществления нарушением или заболеванием сердца является коронарная болезнь артерий. В некоторых вариантах осуществления нарушением или заболеванием сердца является связанная с сердцем болезнь накопления, констриктивный перикардит, острый инфаркт миокарда, хронический инфаркт миокарда, сердечная аритмия или связанный с миокардитом фиброз. В некоторых вариантах осуществления нарушением или заболеванием сердца является сердечная недостаточность. В некоторых вариантах осуществления сердечная недостаточность является гипертензивной сердечной недостаточностью, диастолической сердечной недостаточностью, систолической сердечной недостаточностью или правосторонней сердечной недостаточностью. В некоторых вариантах осуществления нарушением или заболеванием сердца является нарушение сердечного клапана. В некоторых вариантах осуществления нарушением сердечного клапана является стеноз митрального клапана, стеноз аортального клапана, стеноз трехстворчатого клапана или стеноз легочного клапана. В некоторых вариантах осуществления нарушением сердечного клапана является недостаточность митрального клапана, недостаточность аортального клапана, недостаточность трехстворчатого клапана или недостаточность легочного клапана. Настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, страдающего фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, при этом у указанного индивида имеется заболевание или болезненное состояние печени. В некоторых вариантах осуществления индивид, идентифицируемый как индивид,страдающий фиброзом или с подозрением на фиброз, имеет по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние печени. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают введение индивиду модифицированного олигонуклеотида, имеющего последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления mi-РНК представляет собой miR-21. В некоторых вариантах осуществления заболеванием или болезненным состоянием печени является хроническое повреждение печени. В некоторых вариантах осуществления заболеванием или болезненным состоянием печени является вирусный инфекционный гепатит. В некоторых вариантах осуществления инфекционным гепатитом является вирусный инфекционный гепатит С. В некоторых вариантах осуществления заболеванием или болезненным состоянием печени является неалкогольный стеатогепатит. В некоторых вариантах осуществления заболеванием или болезненным состоянием печени является цирроз. Настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, страдающего фиброзом или с подозрением на фиброз, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние легких. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, идентифицируемого как индивид, страдающий фиброзом или с подозрением на фиброз, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно заболевание или болезненное состояние легких. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают введение индивиду модифицированного олигонуклеотида, имеющего последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна miРНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления mi-РНК представляет собой miR21. В некоторых вариантах осуществления заболевание или болезненное состояние легких представляет собой хроническую обструктивную болезнь легких. Настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, страдающего фиброзом или с подозрением на фиброз, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, идентифицируемого как индивид, страдающий фиброзом или с подозрением на фиброз, при этом у указанного индивида имеется по меньшей мере одно другое заболевание или болезненное состояние. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают введение индивиду модифицированного олигонуклеотида, имеющего последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна miРНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления mi-РНК представляет собой miR21. В некоторых вариантах осуществления одним другим заболеванием или болезненным состоянием легких является легочная гипертензия. В некоторых вариантах осуществления одним другим заболеванием или болезненным состоянием является заболевание, связанное с кровеносными сосудами. В некоторых вариантах осуществления указанным заболеванием, связанным с кровеносными сосудами, является артериальная ригидность (жесткость), медиасклероз или артериосклероз. В некоторых вариантах осуществления одним другим заболеванием или болезненным состоянием является склероз пищеварительного канала. В некоторых вариантах осуществления другим заболеванием или болезненным состоянием является системная склеродермия. В некоторых вариантах осуществления одним другим заболеванием или болезненным состоянием является ретроперитонеальный фиброз, пролиферативный фиброз, неопластический фиброз, нефрогенный системный фиброз, инъекционный фиброз, медиастинальный фиброз,миелофиброз, пост-вазэктомический болевой синдром или ревматоидный артрит. Настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, страдающего фибропролиферативным расстройством. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают введение индивиду, страдающему фибропролиферативным расстройством или с подозрением на наличие фибропролиферативного расстройства, модифицированного олигонуклеотида, содержащего последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанная mi-РНК представляет собой miR-21. Кроме того, настоящее изобретение относится к лечению злокачественных опухолей на основе miРНК-21, при этом указанное лечение включает нацеливание на специфические злокачественные опухоли путем модуляции SPRY1-опосредованной передачи сигнала ERK в злокачественных клетках. Известно,что miR-21 экспрессируется в повышенных количествах во многих типах злокачественных клеток, включая клетки аденокарциномы пищевода, толстой кишки, рака молочной железы, глиомы, глиобластомы,рака яичника, гепатоцеллюлярного рака, рака головы и шеи, хронической лимфоцитарной лейкемии, рака поджелудочной железы, но не ограничиваясь перечисленным. Таким образом, настоящее изобретение также относится к диагностике, профилактике и/или лечению указанных выше типов злокачественных опухолей. Все признаки, указанные в формуле изобретения, могут быть объединены с описанием указанных типов злокачественных опухолей. Некоторые пути введения. В некоторых вариантах осуществления введение индивиду включает парентеральное введение. В некоторых вариантах осуществления введение индивиду включает внутривенное введение. В некоторых вариантах осуществления введение индивиду включает подкожное введение. В некоторых вариантах осуществления введение индивиду включает внутриартериальное введение. В некоторых вариантах осуществления введение индивиду включает внутрисердечное введение. Подходящие способы внутрисердечного введения включают применение катетера или введение в процессе открытой операции на сердце. В некоторых вариантах осуществления введение включает пульмональное введение. В некоторых вариантах осуществления пульмональное введение включает доставку олигонуклеотида, переведенного в состояние аэрозоля, в легкие индивида путем ингаляции. После ингаляции олигонуклеотида, переведенного в состояние аэрозоля, олигонуклеотид распределяется как между нормальными, так и между воспаленными клетками легочной ткани, включая альвеолярные макрофаги, эозинофилы, эпителиальные клетки, клетки эндотелия кровеносных сосудов и эпителиальные клетки бронхиолы. Подходящие устройства для доставки фармацевтической композиции, содержащей модифицированный олигонуклеотид,включают, но не ограничены перечисленным, устройство в виде стандартного небулайзера. Композиции и способы модуляции размера капелек, используемых в небулайзерный устройствах для доставки специфических порций в дыхательные пути и легкие, хорошо известны специалистам в данной области. Дополнительные подходящие устройства включают ингаляторы сухого порошка или ингаляторы с дозатором. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят с целью достижения скорее локальных, чем системных эффектов. Например, пульмональное введение доставляет фармацевтическую композицию в легкое с минимальным системным эффектом. Дополнительные подходящие пути введения включают, но не ограничены перечисленным, пероральное, ректальное, чресслизистое, интестинальное, энтеральное, местное введение, введение посредством суппозитория, интратекальное, интравентрикулярное, внутрибрюшинное, интраназальное, внутриглазное, внутримышечное, интрамедуллярное и внутриопухолевое введение. Некоторые клинические исходы. В некоторых вариантах осуществления описанные в настоящем описании способы обеспечивают индивиду, страдающему фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, клинически желательный исход. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является улучшение состояния при увеличении веса сердца. В некоторых вариантах таких осуществлений клинически желательным исходом является улучшение состояния при расширении левого желудочка. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является улучшение состояния при расстройстве фракции укорочения. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является профилактика увеличения веса сердца. В некоторых вариантах таких осуществлений клинически желательным исходом является профилактика расширения левого желудочка. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является профилактика расстройства фракции укорочения. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является улучшение функции сердца. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является улучшение фиброза. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является замедление дальнейшего прогрессирования фиброза. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является остановка дальнейшего прогрессирования фиброза. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является ослабление фиброза. В некоторых вариантах осуществления клинически желательным исходом является уменьшение содержания коллагена. В некоторых вариантах осуществления терапевтически желательным исходом является улучшение функции печени. Функцию печени можно оценить по функциональным печеночным тестам, которые,помимо прочего, позволяют измерить уровни печеночной трансаминазы в крови. В некоторых вариантах осуществления индивид с аномальной функцией печени имеет повышенные уровни печеночной трансаминазы в крови. Печеночные трансаминазы крови включают аланиновую аминотрансаминазу (ALT) и аспартат-аминотрансаминазу (AST). В некоторых вариантах осуществления индивид с аномальной функцией печени имеет повышенные уровни билирубина в крови. В некоторых вариантах осуществления индивид имеет аномальные уровни альбумина в крови. В некоторых вариантах осуществления описанные в настоящем описании способы способствуют изменению уровней ALT, AST, билирубина и/или альбумина в крови таким образом, чтобы один или более из указанных уровней оказался ближе к границам нормы. В некоторых вариантах осуществления функцию печени индивида устанавливают по системе классификации Чайльда-Пью (Child-Pugh), которая дает возможность определить три класса функций печени. В указанной классификационной системе точкам соответствуют измерения одной из пяти категорий: уровней билирубина, уровней альбумина, протромбинового времени, асцита и энцефалопатии. По одной точке определяют на каждую из следующих характеристик: билирубин крови менее чем 2,0 мг/дл; альбумин крови более чем 3,5 мг/дл; протромбиновое время менее чем международное нормализованное отношение (INR) 1,7; асцит отсутствует; или энцефалопатия отсутствует. По двум точкам определяют каждую из следующих характеристик: билирубин крови от 2 до 3 мг/дл; альбумин крови от 3,5 до 2,8 мг/дл; протромбиновое время от 1,7 до 2,3 INR; асцит от слабого до умеренного; или энцефалопатия сла- 17020335 бая. По трем точкам определяют каждую из следующих характеристик: билирубин крови более чем 3,0 мг/дл; альбумин крови менее чем 2,8 мг/дл; протромбиновое время более чем 2,3 INR; асцит от тяжелого до рефракторного; или энцефалопатия тяжелая. Добавляется количество точек, и за классом А закрепляется шкала из 5-6 точек, за классом В закрепляется шкала из 7-9 точек, а за классом С закрепляется шкала из 10-15 точек. В некоторых вариантах осуществления указанные в настоящем описании способы обеспечивают улучшение функции печени, определяемой согласно классификационной системе Чайльда-Пью. Некоторые клеточные фенотипы. Настоящее изобретение относится к способам ингибирования клеточной пролиферации фибробластов. Настоящее изобретение также относится к способам стимуляции апоптоза в фибробластах. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам повышения белка Sprouty1 в фибробластах. В некоторых вариантах осуществления такие способы включают приведение фибробласта в контакт с соединением, содержащим модифицированный олигонуклеотид и имеющим последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления mi-РНК представляет собой miR-21. В некоторых вариантах осуществления фибробластная клетка находится in vitro. В некоторых вариантах осуществления фибробластная клетка находится in vivo. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляется in vitro. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляется in vivo. В некоторых вариантах осуществления приведение в контакт осуществляется ex vivo. Некоторая дополнительная терапия. Лечение фиброза может включать более чем одно терапевтическое лечение. Так, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения индивида, страдающего фиброзом или с подозрением на наличие фиброза, включающим по меньшей мере одно терапевтическое лечение вдобавок к введению модифицированного олигонуклеотида, содержащего последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанные в настоящем описании способы включают введение одного или нескольких добавочных фармацевтических средств. В некоторых вариантах осуществления добавочные фармацевтические средства включают, но не ограничены перечисленным, диуретики(например, спиронолактон, эплеренон, фуросемид), инотропы (например, добутамин, милринон), дигоксин, вазодилятаторы, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента II (АСЕ) (например, каптоприл,эналаприл, лизиноприл, беназеприл, хинаприл, фозиноприл и рамиприл), блокаторы рецептора ангиотензина II (ARB) (например, кандезартан, ирбезартан, олмезартан, лозартан, валзартан, телмизартан, эпрозартан), блокаторы кальциевых каналов, изосорбид-динитрат, гидралазин, нитраты (например, изосорбид-мононитрат, изосорбид-динитрат), гидралазин, бета-блокаторы (например, карведилол, метопролол) и натрийуретические пептиды (например, незиритид). В некоторых вариантах осуществления добавочной терапией может служить фармацевтическое средство, которое усиливает иммунную систему организма, включая низкие дозы циклофосфамида, тимостимулин, витамины и пищевые добавки (например, антиоксиданты, включая витамины А, С, Е, бетакаротен, цинк, селен, глутатион, коэнзим Q-10 и эхинацею), а также вакцины, например, иммуностимулирующий комплекс (ISCOM), которые содержат вакцинную композицию, в которой сочетается мультимерное представление антигена и адъюванта. В некоторых вариантах осуществления добавочную терапию выбирают для лечения или облегчения побочных эффектов одной или нескольких фармацевтических композиций согласно изобретению. Такие побочные эффекты включают, без ограничения, реакции на месте инъекции, аномалии функционального теста печени, аномалии функции почек, печеночную токсичность, почечную токсичность, аномалии центральной нервной системы и миопатии. Например, повышенные уровни аминотрансферазы в сыворотке могут указывать на печеночную токсичность или аномальную функцию печени. Например, повышенные уровни билирубина могут служить указателем печеночной токсичности или аномальной функции печени. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько фармацевтических композиций согласно изобретению и одно или несколько других фармацевтических средств вводят в одно и то же время. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько фармацевтических композиций согласно изобретению и одно или несколько других фармацевтических средств вводят в разное время. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько фармацевтических композиций согласно изобретению и одно или несколько других фармацевтических средств составляют вместе в единую композицию. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько фармацевтических композиций согласно изобретению и одно или несколько других фармацевтических средств составляют раздельно. Некоторые фармацевтические композиции. В некоторых вариантах осуществления описанный в настоящем описании модифицированный олигонуклеотид, комплементарный mi-РНК или ее предшественнику, получают в виде фармацевтической композиции для лечения фиброза. В некоторых вариантах осуществления соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, имеющий последовательность нуклеиновых оснований, комплементарную mi-РНК или ее предшественнику, получают в виде фармацевтической композиции для лечения фиброза. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию согласно изобретению вводят в виде лекарственной формы (например, таблетки, капсулы, болюса и т.д.). В некоторых вариантах осуществления такие фармацевтические композиции включают модифицированный олигонуклеотид в дозе, выбранной из 25 мг, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125,130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235,240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 270, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345,350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455,460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 505, 510, 515, 520, 525, 530, 535, 540, 545, 550, 555, 560, 565,570, 575, 580, 585, 590, 595, 600, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675,680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785,790, 795 и 800 мг. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит дозу модифицированного олигонуклеотида, выбранную из 25, 50, 75, 100, 150, 200,250, 300, 350, 400, 500, 600, 700 и 800 мг. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическое средство представляет собой стерильный лиофилизированный модифицированный олигонуклеотид, который восстановлен соответствующим разбавителем, например стерильной водой для инъекций или стерильным физиологическим раствором для инъекций. Восстановленный продукт после растворения в физиологическом растворе вводят в виде подкожной инъекции или в виде внутривенной инфузии. Лиофилизированный лекарственный продукт состоит из модифицированного олигонуклеотида, который получен в воде для инъекций или в физиологическом растворе для инъекций, доведенном в процессе получения до рН 7,0-9,0 кислотой или основанием, а затем лиофилизирован. Лиофилизированный модифицированный олигонуклеотид может составлять 25-800 мг модифицированного олигонуклеотида. Разумеется, что в указанный интервал входят 25,50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625,650, 675, 700, 725, 750, 775 и 800 мг модифицированного олигонуклеотида. Лиофилизированный лекарственный продукт может быть упакован в 2-миллилитровый флакон из чистого стекла типа II (обработанного сульфатом аммония), закрыт бромбутилкаучуковой пробкой и дополнительно укупорен алюминиевым съемным колпачком FLIP-OFF(R). В некоторых вариантах осуществления композиции согласно изобретению могут дополнительно содержать другие добавочные компоненты, обычно обнаруживаемые в фармацевтических композициях. Таким образом, композиции могут, например, содержать дополнительные совместимые фармацевтически активные материалы, такие, например, как противозудные средства, вяжущее вещество, локальные анестетики или противовоспалительные средства, или же они могут содержать дополнительные материалы, применимые в различных физически составляемых лекарственных формах композиций согласно изобретению, такие как красители, ароматизирующие средства, консерванты, антиоксиданты, замутнители, загустители и стабилизаторы. Однако такие материалы при их добавлении не должны излишне влиять на биологические активности компонентов композиций согласно изобретению. Композиции могут быть стерилизованы и, если это требуется, смешаны с добавочными средствами, например скользящими веществами, консервантами, стабилизаторами, увлажняющими средствами, эмульгаторами, солями для воздействия на осмотическое давление, буферами, подкрашивающими веществами, вкусовыми добавками и/или ароматизаторами и прочим, которые не оказывают вредного воздействия на олигонуклеотид(ы), входящий в состав композиции. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции согласно изобретению включают один или несколько модифицированных олигонуклеотидов и один или несколько наполнителей. В некоторых вариантах осуществления наполнители выбраны из воды, солевых растворов, спирта,полиэтиленгликолей, желатина, лактозы, амилазы, стеарата магния, талька, кремниевой кислоты, вязкого парафина, гидроксиметилцеллюлозы и поливинилпирролидона. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию согласно изобретению получают с использованием известных технологий, включая, но не ограничиваясь перечисленным, процессы смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, включения или таблетирования. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции согласно изобретению представляют собой жидкость (например, суспензию, эликсир и/или раствор). В некоторых вариантах осуществления жидкую фармацевтическую композицию получают с использованием ингредиентов, известных в данной области, включая, но не ограничиваясь перечисленным, воду, гликоли, масла, спирты, вкусовые добавки, консерванты и окрашивающие средства. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению представлены в твердой форме (например, порошок, таблетка и/или капсула). В некоторых вариантах осуществления жидкую фармацевтическую композицию, содержащую один или несколько олигонуклеотидов, получают с использованием ингредиентов, известных в данной области, включая, но не ограничиваясь перечисленным, крахмалы, сахара, разбавители, гранулирующие средства, скользящие вещества, связующие вещества и дезинтеграторы. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию согласно изобретению составляют в виде препарата пролонгированного действия. Некоторые такие препараты пролонгированного действия обычно действуют дольше, чем препараты непролонгированного действия. В некоторых вариантах осуществления такие препараты вводят путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. В некоторых вариантах осуществления препараты получают с использованием подходящих полимерных или гидрофобных материалов (например, эмульсия в приемлемом масле) или ионообменных смол, или в виде умеренно растворимых производных, например,в виде умеренно растворимой соли. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит систему доставки. Примеры систем доставки включают, не ограничиваясь перечисленным, липосомы и эмульсии. Некоторые системы доставки используют для получения определенных фармацевтических композиций, включая композиции, содержащие гидрофобные соединения. В некоторых вариантах осуществления используются определенные органические растворители, такие как диметилсульфоксид. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит одну или несколько молекул тканеспецифической доставки, созданных для доставки одного или нескольких фармацевтических средств согласно изобретению к специфическим тканям или типам клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции включают липосомы, покрытые тканеспецифическим антителом. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит систему вспомогательного растворителя. Некоторые из таких систем вспомогательных растворителей включают, например, бензиловый спирт, неполярное поверхностно-активное вещество, водорастворимый органический полимер и водную фазу. В некоторых вариантах осуществления такие системы вспомогательных растворителей используются для гидрофобных соединений. Неограничивающим примером такой системы вспомогательных растворителей является система сорастворителей VPD, которая является раствором абсолютного этанола, содержащим 3% вес./об. бензилового спирта, 8% вес./об. неполярного поверхностно-активного вещества полисорбата-80 и 65% вес./об. полиэтиленгликоля-300. Соотношения таких систем вспомогательных растворителей могут существенно варьироваться без значительного изменения их свойств, связанных с растворимостью и токсичностью. Кроме того, может меняться состав компонентов систем вспомогательных растворителей: например, вместо полисорбата-80 могут быть использованы другие поверхностно-активные вещества; может варьироваться относительное содержание полиэтиленгликоля; полиэтиленгликоль могут заменить другие биосовместимые полимеры,например поливинилпирролидон; а другие сахара или полисахариды могут заменить декстрозу. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит систему непрерывного высвобождения. Неограничивающим примером такой системы непрерывного высвобождения является полупроницаемый матрикс из твердых гидрофобных полимеров. В некоторых вариантах осуществления системы непрерывного высвобождения могут, в зависимости от их химической природы, высвобождать фармацевтические средства в течение периода, измеряемого часами,днями, неделями или месяцами. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции согласно изобретению составляют для перорального применения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция составлена путем комбинирования одного или нескольких соединений, содержащих модифицированный олигонуклеотид, с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Некоторые из таких носителей позволяют составить фармацевтические композиции в виде таблеток, пилюль,драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, пастообразных смесей, суспензий и пр. для перорального приема индивидом. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции для перорального приема получают путем смешивания олигонуклеотида и одного или нескольких твердых инертных наполнителей. Подходящие наполнители включают, но не ограничены перечисленным, такие наполнители,как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; целлюлозные добавки, такие, например, как кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовую камедь, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу и/или поливинилпирролидон (PVP). В некоторых вариантах осуществления такую смесь необязательно измельчают до порошкообразного состояния, и необязательно добавляют вспомогательные средства. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции составляют для получения сердцевины таблеток или драже. В некоторых вариантах осуществления добавляют дезинтеграторы (например,поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновую кислоту или ее соль, такую как альги- 20020335 нат). В некоторых вариантах осуществления сердцевину драже покрывают дополнительными оболочками. В некоторых вариантах осуществления могут быть использованы концентрированные растворы сахаров, которые могут необязательно содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, карбополовый гель, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, лакирующие растворы и подходящие органические растворители или смеси растворителей. К покрывающим слоям таблеток или драже могут быть добавлены подкрашивающие вещества или пигменты. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции для перорального применения набивают в капсулы, изготовленные из желатина. Некоторые из таким образом заполненных капсул содержат одно или несколько фармацевтических средств согласно изобретению в смеси с одним или несколькими наполнителями, такими как лактоза, связующими веществами, такими как крахмалы, и/или скользящими веществами, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, стабилизаторами. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции для перорального применения представляют собой мягкие закупоренные капсулы, изготовленные из желатина и смягчителя, такого как глицерин или сорбит. В некоторых случаях в мягких капсулах растворено или суспендировано одно или несколько фармацевтических средств согласно изобретению в соответствующих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Помимо этого, могут быть использованы стабилизаторы. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции изготавливают для буккального введения. Некоторые из таких фармацевтических композиций представляют собой изготовленные соответствующим образом таблетки или пастилки. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции изготавливают для введения путем инъекции (например, внутривенной, подкожной, внутримышечной и т.д.). В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит носитель и составлена в водном растворе, таком как вода или физиологически совместимые буферы, такие как раствор Хенкса, раствор Рингера или забуференный физиологический раствор. В некоторых вариантах осуществления включены также и другие ингредиенты (например, такие, которые добавляют для повышения растворимости или которые служат в качестве консервантов). В некоторых вариантах осуществления инъецируемые суспензии получают с использованием соответствующих жидких носителей, суспендирующих средств и т.п. Некоторые фармацевтические композиции для инъекций представлены в единичной дозированной лекарственной форме, например в ампулах или в содержащих многократные дозы контейнерах. Некоторые фармацевтические композиции для инъекций представлены в виде суспензий, растворов или эмульсий в масле или водных носителях и могут содержать композиционные вещества, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. Некоторые растворители, подходящие для применения в фармацевтических композициях для инъекций, включают, но не ограничены перечисленным, липофильные растворители и жирные масла, такие как кунжутное масло, искусственные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, а также липосомы. Водные инъецируемые суспензии могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Такие суспензии могут, но необязательно, содержать соответствующие стабилизаторы или вещества, которые повышают растворимость фармацевтических средств, позволяя продуцировать высококонцентрированные растворы. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию получают в форме, пригодной для введения через слизистую. В некоторых вариантах осуществления в композиции используются проникающие вещества (пенетранты), подходящие для конкретного барьера, который предстоит преодолеть. Такие проникающие вещества общеизвестны в данной области. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию получают в форме, пригодной для введения путем ингаляции. Некоторые из таких фармацевтических композиций для ингаляций изготавливают в виде аэрозольного спрея в герметичной упаковке или небулайзере. Некоторые из таких фармацевтических композиций содержат пропеллент, например дихлордифторметан, трихлорфторметан,дихлортетрафторметан, диоксид углерода или другие подходящие газы. В некоторых вариантах осуществления, связанных с использованием аэрозоля в герметичной упаковке, единичная доза может определяться пневмораспределителем (клапаном), который обеспечивает высвобождение дозированного количества. В некоторых вариантах осуществления могут быть использованы капсулы и картриджи для применения в ингаляторе или в инсуффляторе. Некоторые из таких композиций содержат порошковую смесь фармацевтического вещества согласно изобретению и соответствующей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию получают в форме, пригодной для ректального введения, например, в виде суппозиториев или удерживающей клизмы. Некоторые из таких фармацевтических композиций содержат известные ингредиенты, такие как масло какао и/или другие глицериды. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию изготавливают для местного введения. Некоторые из таких фармацевтических композиций содержат успокаивающие увлажняю- 21020335 щие основы, такие как мази или крема. Примеры соответствующих основ для мазей включают, но не ограничены перечисленным, вазелиновое масло, вазелиновое масло плюс летучие силиконы, а также ланолин и воду, в составе масляных эмульсий. Примеры подходящих основ для крема включают, но не ограничены перечисленным, кольдкрем и мазь-эмульсию. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит модифицированный олигонуклеотид в терапевтически эффективном количестве. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективным количеством является количество, достаточное для предотвращения, облегчения симптомов заболевания или улучшения состояния при заболевании,или же для продления жизни индивида, подвергающегося лечению. Определение терапевтически эффективного количества полностью находится в рамках компетентности специалистов в данной области. В некоторых вариантах осуществления один или несколько модифицированных олигонуклеотидов согласно изобретению составлены в виде пролекарства. В некоторых вариантах осуществления при введении in vivo пролекарство химически превращается в биологически, фармацевтически или терапевтически более активную форму модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления пролекарства являются полезными в силу того, что их легче вводить, чем соответствующую активную форму. Например, в некоторых случаях пролекарство может быть формой, отличающейся большей биологической доступностью (например, при пероральном введении), чем соответствующая активная форма. В некоторых случаях пролекарство может иметь лучшую растворимость по сравнению с соответствующей активной формой. В некоторых вариантах осуществления пролекарства являются менее водорастворимыми, чем соответствующая активная форма. В некоторых случаях, когда водорастворимость ухудшает мобильность, такие пролекарства могут обладать исключительным проникновением через клеточные мембраны. В некоторых вариантах осуществления пролекарством является сложный эфир. В некоторых вариантах осуществления сложный эфир при введении метаболически гидролизуется до карбоновой кислоты. В некоторых случаях соединение, содержащее карбоновую кислоту, представляет собой соответствующую активную форму. В некоторых вариантах осуществления пролекарство содержит короткий пептид (полиаминокислоту), связанный с кислотной группой. В некоторых вариантах осуществления указанный пептид при введении расщепляется до формы, соответствующей активной форме. В некоторых вариантах осуществления пролекарство продуцируется под действием модифицирующего фармацевтически активного соединения, с тем, чтобы активное соединение могло быть восстановлено при введении in vivo. Пролекарство может быть создано таким образом, чтобы оно могло изменять метаболическую стабильность или транспортные характеристики лекарственного средства, с тем,чтобы обеспечить защиту от побочных эффектов или токсичности, улучшить вкусовые свойства лекарственного средства или изменить другие характеристики или свойства лекарственного средства. На основании познаний, связанных с фармакодинамическими процессами и метаболизмом лекарственного средства in vivo, специалисты в данной области, знакомые с фармацевтически активным соединениям,могут создать пролекарственные формы этого соединения (см., например, Nogrady (1985), MedicinalChemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, p. 388-392). Некоторые соединения. В некоторых вариантах осуществления представленные в настоящем описании способы включают введение соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение состоит из модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, гибридизованный с комплементарной цепью, т.е. соединение включает двухцепочечное олигомерное соединение. В некоторых вариантах осуществления гибридизация модифицированного олигонуклеотида с комплементарной цепью приводит к образованию форм по меньшей мере с одним затупленным концом. В некоторых вариантах осуществления гибридизация модифицированного олигонуклеотида с комплементарной цепью приводит к образованию форм с затупленным концом на каждом конце двухцепочечного олигомерного соединения. В некоторых вариантах осуществления конец модифицированного олигонуклеотида содержит один или несколько дополнительных соединенных друг с другом нуклеозидов по сравнению с числом соединенных друг с другом нуклеозидов комплементарной цепи. В некоторых вариантах осуществления указанные один или несколько дополнительных нуклеозидов расположены на 5'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления указанные один или несколько дополнительных нуклеозидов расположены на 3'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно нуклеиновое основание нуклеозида из указанных одного или нескольких дополнительных нуклеозидов комплементарно РНК-мишени. В некоторых вариантах осуществления каждое нуклеиновое основание каждого из указанных одного или нескольких дополнительных нуклеозидов комплементарно РНК-мишени. В некоторых вариантах осуществления конец комплементарной цепи содержит указанные один или несколько дополнительных соединенных друг с другом нуклеозидов по сравнению с числом соединенных друг с другом нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления указанные один или несколько дополнительных соединенных друг с другом нуклеозидов расположены на 3'-конце комплементарной цепи. В некоторых вариантах осуществления указанные один или несколько дополни- 22020335 тельных соединенных друг с другом нуклеозидов находятся на 5'-конце комплементарной цепи. В некоторых вариантах осуществления два дополнительных соединенных друг с другом нуклеозида связаны с концом цепи. В некоторых вариантах осуществления один дополнительный нуклеозид связан с концом цепи. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, конъюгированный с одним или несколькими фрагментами, которые повышают активность,доставку к клеткам или поглощение клетками результирующих антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления указанным фрагментом является холестериновый фрагмент или липидный фрагмент. Дополнительные фрагменты для конъюгации включают углеводы, фосфолипиды,биотин, феназин, фолат, фенантридин, антрахинон, акридин, флуоресцеины, родамины, кумарины и красители. В некоторых вариантах осуществления группа конъюгата напрямую присоединена к модифицированному олигонуклеотиду. В некоторых вариантах осуществления группа конъюгата присоединена к модифицированному олигонуклеотиду посредством сшивающего фрагмента, выбранного из амино, гидроксила, карбоновой кислоты, тиола, ненасыщенных связей (например, двойных или тройных связей), 8 амино-3,6-диоксаоктановой кислоты (ADO), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1 карбоксилата (SMCC), 6-аминогексановой кислоты (АНЕХ или AHA), замещенного C1-С 10-алкила, замещенного или незамещенного С 2-С 10-алкенила и замещенного или незамещенного С 2-С 10-алкинила. В некоторых вариантах осуществления замещенная группа выбрана из гидроксила, амино, алкокси, карбокси, бензила, фенила, нитро, тиола, тиоалкокси, галогена, алкила, арила, алкенила и алкинила. В некоторых вариантах осуществления указанное соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, содержащий одну или несколько стабилизирующих групп, которые присоединены к одному или обоим концам модифицированного олигонуклеотида для усиления свойств, таких, например, как стабильность к действию нуклеаз. В состав стабилизирующих групп входят блокирующие кэпструктуры. Такие концевые модификации защищают модифицированный олигонуклеотид от деградации под действием экзонуклеаз, и "кэп" помогает в доставке и/или локализации внутри клетки. "Кэп" может присутствовать на 5'-конце (5'-кэп), или на 3'-конце (3'-кэп), или же он может присутствовать на обоих концах. Кэп-структуры включают, например, инвертированные "кэпы", лишенные азотистого основания. Подходящие кэп-структуры включают 4',5'-метиленнуклеотид,1-(бета-Dэритрофуранозил)нуклеотид, 4'-тионуклеотид, карбоциклический нуклеотид, 1,5-ангидрогекситолнуклеотид, L-нуклеотид, альфа-нуклеотид, нуклеотид с модифицированным основанием, фосфородитиоатную связь, трео-пентофуранозильный нуклеотид, ациклический 3',4'-секо-нуклеотид, ациклический 3,4-дигидроксибутилнуклеотид, ациклический 3,5-дигидроксипентилнуклеотид, 3'-3'-инвертированный нуклеотидный фрагмент, 3'-3'-инвертированный лишенный азотистого основания фрагмент, 3'-2'инвертированный нуклеотидный фрагмент, 3'-2'-инвертированный лишенный азотистого основания фрагмент, 1,4-бутандиолфосфат, 3'-фосфорамидат, гексилфосфат, аминогексилфосфат, 3'-фосфат, 3'фосфоротиоат, фосфородитиоат, образующий мостик метилфосфонатный фрагмент и не образующий мостик метилфосфонатный фрагмент 5'-аминоалкилфосфат, 1,3-диамино-2-пропилфосфат, 3 аминопропилфосфат, 6-аминогексилфосфат, 1,2-аминододецилфосфат, гидроксипропилфосфат, 5'-5'инвертированный нуклеотидный фрагмент, 5'-5'-инвертированный лишенный азотистого основания фрагмент, 5'-фосфорамидат, 5'-фосфоротиоат, 5'-амино, образующий мостик и/или не образующий мостик 5'-фосфорамидат, фосфоротиоат и 5'-меркапто-фрагмент. Некоторые последовательности нуклеиновых оснований. Настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики фиброза. В некоторых вариантах осуществления указанные способы включают введение фармацевтической композиции, содержащей модифицированный олигонуклеотид. В некоторых вариантах осуществления указанные способы включают введение соединения, содержащего модифицированный олигонуклеотид. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность, которая комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления указанная mi-РНК представляет собой miR-21. Описанные в настоящем описании последовательности нуклеиновых оснований зрелых mi-РНК и соответствующие им последовательности "стебель-петля" являются последовательностями, обнаруживаемыми в miRBase, базе данных для поиска в диалоговом режиме последовательностей mi-РНК и аннотаций, находящихся по адресу: http://microrna.sanger.ас.uk/. Вводимые в базу данных miRBase последовательности представляют собой предсказанную часть шпильки mi-РНК-транскрипта ("стебель-петля") с информацией по локализации и последовательности зрелой последовательности mi-РНК. Последовательности "стебель-петля" mi-РНК в базе данных не являются точными предшественниками последовательностей mi-РНК (пре-mi-РНК) и в некоторых случаях могут включать пре-mi-РНК и некую фланкирующую последовательность из предполагаемого первичного транскрипта. Описанные в настоящем описании последовательности нуклеиновых оснований mi-РНК охватывают любую версию mi-РНК, включая последовательности, описанные в выпуске 10.0 базы данных последовательностей miRBase, и последовательности, описанные в любом из более ранних выпусков базы данных последовательностей miRBase. Серия выпусков базы данных может привести к тому, что будут изменены названия некоторых mi- 23020335 РНК. Серия выпусков базы данных может привести к тому, что [между ними] будут иметь место вариации последовательности зрелой mi-РНК. Соединения согласно изобретению охватывают модифицированные олигонуклеотиды, которые комплементарны любой версии последовательности нуклеиновых оснований описанных в настоящем описании mi-РНК. Понятно, что любая отраженная в настоящем описании последовательность нуклеиновых оснований не зависима от какой бы то ни было модификации фрагмента сахара, межнуклеотидной связи или нуклеинового основания. Кроме того, понятно и то, что последовательность нуклеиновых оснований,содержащая "U" (урацилы), охватывает также и такую же самую последовательность нуклеиновых оснований, в которой "U" заменено на "Т" (тимин) в одном или нескольких положениях, в которых стоит "U". И наоборот, следует понимать, что последовательность нуклеиновых оснований, содержащая "T" (тимины), охватывает также и такую же самую последовательность нуклеиновых оснований, в которой "Т" заменено на "U" в одном или нескольких положениях, в которых стоит "Т". В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна mi-РНК или ее предшественнику, что означает,что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида является по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичной комплементу mi-РНК или ее предшественнику на участке из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40,45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 или более нуклеиновых оснований, или что указанные две последовательности гибридизуются в жестких условиях гибридизации. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида может иметь одно или несколько не совпадающих пар оснований по сравнению с ее mi-РНК-мишенью или с последовательностью-предшественником mi-РНК-мишени и способна к гибридизации с ее последовательностью-мишенью. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая на 100% комплементарна mi-РНК или ее предшественнику. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет полноразмерную комплементарность mi-РНК. В некоторых вариантах осуществления miR-21 имеет последовательность нуклеиновых оснований 5'-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3' (SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах осуществления последовательность "стебель-петля" miR-21 имеет последовательность нуклеиновых оснований 5'UGUCGGGUAGCUUAUCAGACUGAUGUUGACUGUUGAAUCUCAUGGCAACACCAGUCGAUGGGCUGUCUGACA-3' (SEQ ID NO: 11). В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований miR-21, представленной как SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований "стебель-петля" mi-РНК,представленной как SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна области нуклеиновых оснований 8-29 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность, которая комплементарна области нуклеиновых оснований 46-66 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, содержащую последовательность нуклеиновых оснований 5'UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3' (SEQ ID NO: 12). В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, состоящую из последовательности нуклеиновых оснований, представленной как SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований при-miR, содержащей miR-21. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований, по меньшей мере на 80% идентичной последовательности нуклеиновых оснований, представленной в последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%,по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 96% или по меньшей мере на 98% идентичной последовательности нуклеиновых оснований, представленной в последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований, по меньшей мере на 80% идентичной последовательности нуклеиновых оснований "стебель-петля" в miR21, представленной как SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления модифицированный оли- 24020335 гонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая комплементарна последовательности нуклеиновых оснований, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 96% или по меньшей мере на 98% идентичной последовательности нуклеиновых оснований "стебель-петля" в miR-21, представленной в последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет полноразмерную комплементарность указанной в настоящем описании последовательности нуклеиновых оснований mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований,имеющую одно несовпадение по сравнению с последовательностью нуклеиновых оснований зрелой miРНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, имеющую два несовпадения по сравнению с последовательностью нуклеиновых оснований зрелой mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, имеющую не больше двух несовпадений по сравнению с последовательностью нуклеиновых оснований зрелой mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления не совпадающие (несопряженные) нуклеиновые основания являются смежными основаниями. В некоторых вариантах осуществления не совпадающие (несопряженные) нуклеиновые основания не являются смежными основаниями. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из такого числа соединенных друг с другом нуклеозидов, которое равно длине зрелой mi-РНК, которой он комплементарен. В некоторых вариантах осуществления число соединенных друг с другом нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида составляет менее длины зрелой mi-РНК, которой он комплементарен. В некоторых вариантах осуществления число соединенных друг с другом нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида составляет на один нуклеозид меньше, чем длина зрелой mi-РНК, которой он комплементарен. В некоторых вариантах такого рода осуществлений модифицированный олигонуклеотид содержит одним нуклеозидом меньше на своем 5'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит одним нуклеозидом меньше на своем 3'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит двумя нуклеозидами меньше на своем 5'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит двумя нуклеозидами меньше на своем 3'-конце. Модифицированный олигонуклеотид, имеющий число соединенных друг с другом нуклеозидов, которое меньше, чем длина mi-РНК, где каждое нуклеиновое основание модифицированного олигонуклеотида комплементарно каждому нуклеиновому основанию в соответствующем положении mi-РНК, считается модифицированным олигонуклеотидом, имеющим последовательность нуклеиновых оснований, на 100% комплементарную части последовательности miРНК. В некоторых вариантах осуществления число соединенных друг с другом нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида больше, чем длина mi-РНК, которой он комплементарен. В некоторых вариантах таких осуществлений нуклеиновое основание добавочного нуклеозида комплементарно нуклеиновому основанию последовательности "стебель-петля" в mi-РНК. В некоторых вариантах осуществления число соединенных друг с другом нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида составляет на один нуклеозид больше, чем длина mi-РНК, которой он комплементарен. В некоторых вариантах таких осуществлений добавочный нуклеозид находится на 5'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах таких осуществлений добавочный нуклеозид находится на 3'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления число соединенных друг с другом нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида составляет на два нуклеозида больше, чем длина mi-РНК, которой он комплементарен. В некоторых вариантах осуществления два нуклеозида расположены на 5'конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления два нуклеозида расположены на 5'-конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления один добавочный нуклеозид расположен на 5'-конце и один добавочный нуклеозид расположен на 3'конце модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах осуществления часть последовательности нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна последовательности нуклеиновых основанийmi-РНК, тогда как по всей своей длине модифицированный олигонуклеотид не на 100% комплементарен. В некоторых вариантах осуществления число нуклеозидов модифицированного олигонуклеотида, имеющего на 100% комплементарную часть, больше, чем длина указанной mi-РНК. Например, модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 24 соединенных друг с другом нуклеозидов, в котором каждое нуклеиновое основание нуклеозидов от 1 до 23 комплементарно соответствующему положению mi-РНК,которая состоит из 23 нуклеиновых оснований в длину, имеет часть, состоящую из 23 нуклеозидов, которая на 100% комплементарна последовательности нуклеиновых оснований mi-РНК, что приблизительно составляет 96% его общей комплементарности последовательности нуклеиновых оснований mi-РНК. В некоторых вариантах осуществления последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна части последовательности нуклеиновых основанийmi-РНК. Например, модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 22 соединенных друг с другом нуклеозидов, в котором каждое нуклеиновое основание нуклеозидов, от 1 до 22, комплементарно соответствующему положению mi-РНК, которая состоит из 23 нуклеиновых оснований в длину, имеет 100% комплементарность части из 22 нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых основанийmi-РНК. Такой модифицированный олигонуклеотид приблизительно на 96% комплементарен полной последовательности нуклеиновых оснований mi-РНК и на 100% комплементарен части mi-РНК, составляющей 22 нуклеиновых основания. В некоторых вариантах осуществления часть последовательности нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна последовательности нуклеиновых основанийmi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 15 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 15 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 16 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 16 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 17 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 17 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 18 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 18 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 19 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 19 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 20 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 20 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 22 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 22 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 23 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 23 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. В некоторых вариантах осуществления каждое из 24 смежных нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида комплементарно 24 смежным нуклеиновым основаниям mi-РНК или ее предшественника. Некоторые модифицированные олигонуклеотиды. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 12-30 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 15-25 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 19-24 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 21-24 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 12 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 13 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 14 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 15 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 19 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 21 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 22 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 23 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 24 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 25 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 26 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 27 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 28 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состоит из 29 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид состо- 26020335 ит из 30 соединенных друг с другом нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит соединенные друг с другом нуклеозиды, выбранные из смежных нуклеиновых оснований последовательности SEQ ID NO: 12. Некоторые модификации. Модифицированные олигонуклеотиды согласно изобретению содержат одну или несколько модификаций нуклеинового основания, сахара и/или межнуклеозидной связи. Модифицированное нуклеиновое основание, сахар и/или межнуклеозидная связь могут быть выбраны из различных немодифицированных форм, в силу требуемых свойств, таких, например, как повышенное поглощение клетками, повышенная аффинность в отношении других олигонуклеотидов или нуклеиновых кислот-мишеней и повышенная стабильность в присутствии нуклеаз. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид согласно изобретению содержит один или несколько модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеозид является стабилизирующим нуклеозидом. Примером стабилизирующего нуклеозида является модифицированный сахаром нуклеозид. В некоторых вариантах осуществления модифицированный нуклеозид является модифицированным сахаром нуклеозидом. В некоторых вариантах осуществления модифицированный сахаром нуклеозид может дополнительно содержать природный или модифицированный фрагмент гетероциклического основания и/или природную или модифицированную межнуклеозидную связь и может дополнительно содержать модификации, независимо от модификаций сахара. В некоторых вариантах осуществления модифицированный сахаром нуклеозид представляет собой 2'-модифицированный нуклеозид, в котором сахарное кольцо модифицировано в положении 2'-углерода из природной рибозы или 2'-дезоксирибозы. В некоторых вариантах осуществления 2'-модифицированный нуклеозид имеет бициклический фрагмент сахара. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара представляет собой D-caxap в альфа-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара представляет собой D-caxap в бета-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара представляет собой L-caxap в альфаконфигурации. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара представляет собой L-caxap в бета-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара содержит мостиковую группу между 2'- и 4'-углеродными атомами. В некоторых вариантах осуществления указанная мостиковая группа содержит от 1 до 8 сопряженных бирадикальных групп. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара содержит от 1 до 4 сопряженных бирадикальных групп. В некоторых вариантах осуществления бициклический фрагмент сахара содержит 2 или 3 сопряженные бирадикальные группы. В некоторых вариантах осуществления бициклический фрагмент сахара содержит 2 сопряженные бирадикальные группы. В некоторых вариантах осуществления указанная сопряженная бирадикальная группа выбрана из -O-, -S-, -N(R1)-, -C(R1)(R2)-, -С(R1)=C(R1)-, -C(R1)=N-,-C(=NR1)-, -Si(R1)(R2)-, -S(=O)2-, -S(=O)-, -C(=O)- и -C(=S)-; каждый из R1 и R2 независимо представляет собой Н, гидроксил, С 1-С 12-алкил, замещенный C1-C12-алкил, С 2-С 12-алкенил, замещенный С 2-С 12 алкенил, С 2-С 12-алкинил, замещенный C2-C12-алкинил, С 5-С 20-арил, замещенный С 5-С 20-арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, С 5-С 7 алициклический радикал, замещенный С 5-С 7-алициклический радикал, галоген, замещенный окси(-О-),амино, замещенный амино, азидо, карбоксил, замещенный карбоксил, ацил, замещенный ацил, CN, тиол,замещенный тиол, сульфонил (S(=O)2-Н), замещенный сульфонил, сульфонил(S(=O)-Н) или замещенный сульфонил; и каждая замещенная группа независимо представляет собой галоген, C1-C12-алкил, замещенный C1-C12-алкил, С 2-С 12-алкенил, замещенный С 2-С 12-алкенил, С 2-С 12-алкинил, замещенный С 2-С 12 алкинил, амино, замещенный амино, ацил, замещенный ацил, С 1-С 12-аминоалкил, С 1-С 12-аминоалкокси,замещенный С 1-С 12-аминоалкил, замещенный С 1-С 12-аминоалкокси или защитную группу. В некоторых вариантах осуществления указанный бициклический фрагмент сахара образует мостиковую связь между 2'- и 4'-углеродными атомами с бирадикальной группой, выбранной из -О-(СН 2)p-, -ОСН 2-, -О-СН 2 СН 2-, -О-СН(алкил)-, -NH-(CH2)p-, -N(алкил)-(СН 2)p-, -О-СН(алкил)-, -(СН(алкил-(СН 2)p-,-NH-O-(СН 2)p-, -N(алкил)-О-(СН 2)p- или -O-N(алкил)-(СН 2)p-, где р представляет собой 1, 2, 3, 4 или 5, и каждая алкильная группа может быть дополнительно замещена. В некоторых вариантах осуществления р является 1, 2 или 3. В некоторых вариантах осуществления 2'-модифицированный нуклеозид содержит 2'-замещающую группу, выбранную из галогена, аллила, амино, азидо, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-, S- или N(Rm)-алкила;O-, S- или N(Rm)-алкенила; O-, S- или N(Rm)-алкинила; O-алкиленил-О-алкила, алкинила, алкарила, аралкила, О-алкарила, О-аралкила, O(CH2)2SCH3, О-(СН 2)2-O-N(Rm)(Rn) или О-СН 2-С(=O)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н, амино-защитную группу, либо замещенную, либо незамещенную C1-С 10-алкилом. Указанные 2'-замещающие группы могут быть дополнительно замещены одной или несколькими защитными группами, независимо выбранными из гидроксила, амино, алкокси,карбокси, бензила, фенила, нитро (NO2), тиола, тиоалкокси (S-алкил), галогена, алкила, арила, алкенила и алкинила. В некоторых вариантах осуществления 2'-модифицированный нуклеозид содержит 2'-замещающую группу, выбранную из F, NH2, N3, OCF3, О-СН 3, O(CH2)3NH2, СН 2-СН=СН 2, О-СН 2-СН=СН 2,ОСН 2 СН 2 ОСН 3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), -О(СН 2)2O(СН 2)2N(CH3)2 и N-замещенного ацетамида (О-СН 2-C(=O)-N(Rm)(Rn, где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н, амино-защитную группу, либо замещенную, либо незамещенную C1-С 10-алкилом. В некоторых вариантах осуществления 2'-модифицированный нуклеозид содержит 2'-замещающую группу, выбранную из F, OCF3, О-СН 3, ОСН 2 СН 2 ОСН 3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(CH3)2,O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2 и O-CH2-C(=O)-N(H)CH3. В некоторых вариантах осуществления 2'-модифицированный нуклеозид содержит 2'-замещающую группу, выбранную из F, О-СН 3 и ОСН 2 СН 2 ОСН 3. В некоторых вариантах осуществления модифицированный по сахару нуклеозид представляет собой 4'-тио-модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах осуществления модифицированный по сахару нуклеозид представляет собой 4'-тио-2'-модифицированный нуклеозид. 4'-тиомодифицированный нуклеозид содержит -D-рибонуклеозид, в котором 4'-О заменено на 4'-S. 4'-тио-2'модифицированный нуклеозид представляет собой 4'-тио-модифицированный нуклеозид, в котором 2'ОН заменено 2'-замещенной группой. Подходящие 2'-замещенные группы включают 2'-ОСН 3, 2'-О(СН 2)2-ОСН 3 и 2'-F. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид согласно настоящему изобретению содержит одну или несколько межнуклеозидных модификаций. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная модификация модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления модифицированная межнуклеозидная связь содержит атом фосфора. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления модифицированная межнуклеозидная связь не содержит атома фосфора. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь образована межнуклеозидной связью из алкила с короткой цепью. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь образована циклоалкильными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь образована смешанной межнуклеозидной связью гетероатома и алкила. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь образована смешанными межнуклеозидными связями гетероатома и циклоалкила. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь образована одной или несколькими межнуклеозидными связями гетероатома с короткой цепью. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь образована одной или несколькими гетероциклическими межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах осуществления межнуклеозидная связь имеет амидный остов. В некоторых вариантах осуществления в межнуклеозидной связи смешаны компоненты N, О, S и СН 2. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит одно или несколько модифицированных нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит один или несколько 5-метилцитозинов. В некоторых вариантах осуществления каждый цитозин модифицированного олигонуклеотида содержит 5-метилцитозин. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание выбрано из 5 гидроксиметилцитозина, 7-деазагуанина и 7-деазааденина. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание выбрано из 7-деазааденина, 7-деазагуанозина, 2-аминопиридина и 2-пиридона. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание выбрано из 5-замещенных пиримидинов, 6-азапиримидинов и N-2, N-6 и О-6-замещенных пуринов, включая 2 аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание содержит полициклический гетероцикл. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание содержит трициклический гетероцикл. В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеиновое основание содержит производное феноксазина. В некоторых вариантах осуществления феноксазин может быть дополнительно модифицирован, с образованием нуклеинового основания, известного в данной области как G-кламп. Некоторые олигонуклеотидные мотивы. Подходящие мотивы для модифицированных олигонуклеотидов согласно настоящему изобретению включают, но не ограничены перечисленным, полностью модифицированные, одинаково модифицированные, позиционно модифицированные мотивы и олигомер с пропусками. Модифицированные олигонуклеотиды, имеющие полностью модифицированный мотив, включая одинаково модифицированный мотив, могут быть сконструированы таким образом, чтобы они были нацелены на зрелые mi-РНК. Альтернативно, модифицированные олигонуклеотиды, имеющие полностью модифицированный мотив,включая одинаково модифицированный мотив, могут быть сконструированы таким образом, чтобы они были нацелены на определенные участки при-mi-РНК или пре-mi-РНК, с целью блокирования процессинга предшественников mi-РНК в зрелые mi-РНК. Модифицированные олигонуклеотиды, имеющие полностью модифицированный мотив или одинаково модифицированный мотив, являются эффективными ингибиторами активности mi-РНК. В некоторых вариантах осуществления полностью модифицированный олигонуклеотид содержит модификацию сахара на уровне каждого нуклеозида. В некоторых вариантах осуществления большинство нуклеозидов являются 2'-О-метоксиэтилнуклеозидами, а остальные нуклеозиды являются 2'фторнуклеозидами. В некоторых вариантах осуществления каждый из большинства нуклеозидов является 2'-O-метоксиэтилнуклеозидом, и каждый из большинства нуклеозидов является бициклическим нуклеозидом. В некоторых вариантах осуществления полностью модифицированный олигонуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида, модифицированного полностью по сахару, является модифицированной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления полностью модифицированный по сахару олигонуклеотид, модифицированный полностью по сахару, дополнительно содержит по меньшей мере одну фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь модифицированного полностью по сахару олигонуклеотида является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления полностью модифицированный олигонуклеотид является модифицированным на уровне каждой межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь полностью модифицированного олигонуклеотида является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления одинаково модифицированный олигонуклеотид содержит одну и ту же модификацию сахара на уровне каждого нуклеозида. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит модификацию 2'-О-метоксиэтилсахар. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит модификацию 2'-O-метил-сахар. В некоторых вариантах осуществления каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит модификацию 2'-фтор-сахар. В некоторых вариантах осуществления одинаковым образом модифицированный олигонуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь одинаковым образом модифицированного по сахару олигонуклеотида является модифицированной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления одинаковым образом модифицированный по сахару олигонуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну фосфоротиоатную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь одинаковым образом модифицированного по сахару олигонуклеотида является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления одниково модифицированный олигонуклеотид по всей длине содержит одну и ту же модификацию межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах осуществления каждая межнуклеозидная связь одинаково модифицированного олигонуклеотида является фосфоротиоатной межнуклеозидной связью. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит одну и ту же модификацию сахара на уровне каждого нуклеозида и дополнительно содержит одну или несколько модификаций межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит одну модифицированную межнуклеозидную связь на 5'-конце и одну модифицированную межнуклеозидную связь на 3'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит две модифицированные межнуклеозидные связи на 5'-конце и две модифицированные межнуклеозидные связи на 3'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит две модифицированные межнуклеозидные связи на 5'-конце и три модифицированные межнуклеозидные связи на 3'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид содержит две модифицированные межнуклеозидные связи на 5'-конце и четыре модифицированные межнуклеозидные связи на 3'-конце. В некоторых вариантах осуществления модифицированной межнуклеозидной связью является фосфоротиоатная межнуклеозидная связь. В некоторых вариантах осуществления модифицированный олигонуклеотид представлен следующей формулой (III): В некоторых вариантах осуществления соединение представлено формулой (III). В некоторых вариантах осуществления Q является 2'-О-метил-модифицированным нуклеозидом. В некоторых вариантах осуществления х является фосфоротиоатом. В некоторых вариантах осуществления у является фосфодиоэфиром. В некоторых вариантах осуществления каждый из z1, z2, z3 и z4 независимо является фосфоротиоатом или фосфодиоэфиром. В некоторых вариантах осуществления n принимает значения от 6 до 17. В некоторых вариантах осуществления L является холестерином. В некоторых вариантах осуществления n принимает значения от 12 до 17.