Усовершенствования для аналоговых соединений трифосфата 6-тиогуанозина, их применение в областях медицины и способы их получения

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ДЛЯ АНАЛОГОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ ТРИФОСФАТА 6 ТИОГУАНОЗИНА, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ОБЛАСТЯХ МЕДИЦИНЫ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Настоящее изобретение относится к аналоговым соединениям трифосфата 6-тиогуанозина общей формулы (I). Соединение общей формулы (I), где пунктирная связь в сахарном фрагменте может быть либо одинарной, либо двойной и где R1, R2, R3, R4 или R5, одинаковые или различные между собой, имеют общую формулу -(Int)m-Ter-, где m составляет от 0 до 12 и Int и Ter являются внутренней и конечной функциональными группами, где Int выбирают из группы, состоящей из формулы (II); Ter выбирают из группы, состоящей из формулы (III), и где X обозначает либо атом углерода, либо атом азота в ароматическом кольце, Y обозначает либо атом кислорода, либо атом серы, и дополнительную группу Q, группу Qi или группы Qi (Qi показывает, что группа или несколько групп могут быть связаны с любым ненасыщенным участком кольца) выбирают из группы, состоящей из -ОН, -СООН, -N(CH3)2, -N(CH2-CH3)2, -СО-СН 3, -СО-О-СН 3, -О-СН 3, -SCH3, -SO2-СН 3, -CN, -NO2 или галогеновых элементов, и где R5 может быть формулой (IV) и металлом и солями аммония вышеуказанного, где n составляет от 0 до 5, или кислород или фосфор частично или полностью замещаются азотом, серой, метиленовыми группами или их производными. Изобретение также имеет отношение к применениям вышеупомянутых соединений в области медицины и способу их получения. 014186 Настоящее изобретение относится к аналоговым соединениям трифосфата 6-тиогуанозина, их использованию в области медицины и способу их получения. В частности, изобретение относится к терапевтическому использованию аналоговых препаратов трифосфата 6-тиогуанозина, например, в качестве иммуносупрессанта для профилактики отторжения органных трансплантатов и посттрансплантационной нефропатии и в лечении патологий, в которые вовлекается иммунная система, таких как, например, воспалительные хронические кишечные заболевания,такие как болезнь Крона, язвенный ректоколит, недифференцированный колит или аутоиммунная энтеропатия, активный хронический гепатит, ревматоидный артрит, болезнь Стилла, системная красная волчанка, приобретенная гемолитическая анемия, идиопатическая тромбоцитопения, нодозный полиартрит,васкулит, полиангиит, полимиозит, миастения gravis, саркоидоз, липоидный нефрит, рассеянный склероз,дерматомиозит, обыкновенная пузырчатка, первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, рецидивирующая полиморфная эритема, хронический актинический дерматит, гангренозная гиподерма (gangrenous hypoderm), лишай красный (ptyriasis rubra), гранулематоз Вегенера, кожный васкулит, атопический дерматит, псориаз, пемфигоид (pimply pemphigoid) и, в целом, в иммуносупрессивном лечении, в дополнение к радиотерапии, кортикостероидам и другим цитотоксическим агентам. Последнее также включает в себя иммуносупрессивную терапию после трансплантации органа (например,трансплантации почки, сердца, легкого, поджелудочной железы и печени). Клетки, вовлеченные в воспалительный иммунный ответ, способны выживать в месте воспаления,однако, после завершения данного ответа большинство клеток должны "умереть", чтобы поддержать гомеостаз организма (Boise, 1995). Поскольку неконтролируемая пролиферация лимфоцитов может вызвать развитие воспалительных хронических патологий, иммунная система контролирует элиминацию активированных лимфоцитов с помощью процесса, называемого апоптозом (программируемая клеточная гибель). Это представляет особую важность для иммунной системы слизистой оболочки, поскольку устойчивость к апоптозу клеток собственной пластинки слизистой оболочки может привести к хроническому воспалительному ответу на уровне кишечника (Tiede, 2003). Активация иммунной системы слизистой играет ключевую роль в патогенезе болезни Крона. В частности, провоспалительные цитокины, произведенные Т-клетками и макрофагами, в особенности интерлейкин-6 (IL-6) и интерлейкин-12 (IL-12), могут вызвать устойчивость Т-лимфоцитов к апоптозу, которая в свою очередь вызывает кишечное скопление лимфоцитов и вызывает длительное заболевание(Tiede, 2003). Активация лимфоцитов начинается с двух сигналов: специфического связывания антигенов с TCR(Т-клеточный рецептор) и второго, костимулирующего сигнала, представляемого трансмембранными белками, такими как CD28 (Maltzman, 2003). Показано, что костимуляция CD28 усиливает in vitro выживаемость активированных Т-лимфоцитов: фактически CD28 вызывает усиленную продукцию интерлейкина-2 (IL-2), действующего как внешний фактор для выживания Т-лимфоцитов и как внутренняя способность Т-лимфоцитов быть устойчивыми к апоптозу (Boise, 1995 bis). Это происходит, потому что действие CD28 связано с экспрессией антиапоптотического гена, называемого bcl-xL ген (Khoshnan, 2000;Noel, 1996). Стадии, через которые проходит ингибирование апоптоза, могут быть соединены следующим образом, как указано на фиг. 1:CD28 действует через свою цитоплазматическую часть с комплексом "адаптерных" белков и молекулой, называемой Vav (Frauwirth, 2002);Vav действует как гуанозиннуклеотид обменный фактор (GEF) на другую молекулу, называемуюRacl, малая GTPаза, таким образом, переключается между неактивным состоянием, связанным с ГДФ, и активным состоянием, связанным с ГТФ (Frauwirth, 2002); активированный Racl, в свою очередь, приводит к активации киназ (IKK), которые фосфорилируютNF-В ингибиторные белки (как 1-В альфа) (Marinari, 2002) через MEK фосфорилирование; таким образом, NF-В не содержится более в активной форме в цитозоле, но способен перемещаться в ядро, где вызывает экспрессию bcl-xL (Khoshnan, 2000); далее активированный Racl стимулирует активацию белка, принадлежащего к семейству STAT(Signal Transducers and Activators of Transcription), который является STAT-3, индуцируя, таким образом,его транслокацию в ядро и соответствующую экспрессию STAT-3 зависимых генов (Faruqi, 2001). В частности, STAT-3 вызывает экспрессию bcl-xL, таким образом участвуя в устойчивости против апоптоза и в аккумуляции Т-лимфоцитов в воспаленной слизистой во время болезни Крона (Mudter, 2003). С другой стороны, изучение Т-лимфоцитов кишечника указывает, что STAT-3 неизменно активирован у пациентов с болезнью Крона, но не у здоровых добровольцев (Lovato, 2003).Rac1 вместе с RhoA и Cdc42 принадлежат к Rho семейству, которое является суперсемейством малого белка G, и характеризуются тем, что они способны связывать нуклеотиды гуанозина и регулировать многие клеточные ответы. Они делают оборот между неактивным состоянием, когда они связаны с GDP,к активному состоянию, когда они связаны с GTP вместо GDP. Данная реакция поддерживается факто-1 014186 рами обмена гуанозиннуклеотида, называемыми GEFs (как Vav). Связывание с GTP вызывает конформационное изменение, которое позволяет Rac1 и другим GDPазам связываться с их эффекторами. Действие других белков, называемых GDPаза-активирующие белки (GAPs), стимулирует природную GDPазную активность данных малых G белков и заставляет их вернуться назад к их GDP-связанному неактивному состоянию. Racl, как в целом все GDPазы, принадлежащие к Rho семейству, играет важную роль в процессах митогенеза, пролиферации и инвазии, поскольку он стимулирует изменения экспрессии генов, в настоящем случае гена bcl-xL, модулируя активность факторов транскрипции, таких как в настоящем случае NF-В И STAT-3 (Van Aelst, 1997). Азатиоприн считают "золотым стандартом" иммуносупрессивной терапии болезни Крона, хотя механизм действия данного активного компонента еще неизвестен. При этом основным терапевтическим механизмом действия азатиоприна считается ингибирование биосинтеза пуринового нуклеотида супрессией синтеза ДНК и РНК и отрицательной регуляцией функции Т- и В-лимфоцитов (Tiede, 2003). Недавно был показан новый механизм действия азатиоприна, действующего на уровне Тлимфоцитов. После доказательства, что азатиоприн вызывает in vitro апоптоз активированных Тлимфоцитов и что лечение азатиоприном вызывает апоптоз циркулирующих Т-лимфоцитов и Тлимфоцитов собственной пластинки слизистой оболочки у пациентов с IBD, были показаны специфические молекулярные механизмы (Tiede, 2003). Ключевой пункт представлен метаболитом 6-тиогуанозинтрифосфатом (6-тиоГТФ), который представляет собой реальный функциональный метаболит лекарства. Подробно, 6-тиоГТФ связывается прямо с Racl вместо ГТФ, блокируя, таким образом, его активацию. Данный блок является высокоспецифичным для Racl, поскольку другие ГТФазы, принадлежащие к этому же семейству, не ингибируются 6-тиоГТФ,и указанная специфичность предполагает, что блок, вероятно, связан со структурой белка Racl. Тот факт,что наблюдали накопление фактора обмена Racl гуанозиннуклеотид, vav, согласуется с компенсаторным механизмом достижения активации Racl. Блок активации Racl, вероятно, имеет своим следствием блок NF-В И STAT-3, обычно активируемых самим Racl, и, таким образом, блок экспрессии гена bcl-xL, обнаруживаемый на уровне мРНК и на уровне белка. Таким образом, азатиоприн путем модулирования активности Racl переводит антиапоптотический костимуляторный сигнал, опосредованный CD28, в проапоптотический сигнал. Новый механизм активации способен объяснить хорошо известное "запаздывание" терапевтического эффекта азатиоприна, который вызывает клинический ответ с благоприятным воздействием только после длительного введения лекарственного средства, а именно, не ранее чем через 4 месяца. Это связано с тем фактом, что 6-тиоГТФ имеет в 20 раз меньшую аффинность к Racl, по сравнению с ГТФ, который обычно связывается с Racl. Поэтому при лечении азатиоприном нужно одновременно и длительно вводить высокие дозы стероидов, имеющих заметные побочные эффекты, такие как остеопороз, диабет,катаракта. В свете сказанного выше, было бы желательно иметь в распоряжении новые иммуносупрессивные лекарства, вызывающие более быстрый и более эффективный терапевтический ответ по сравнению с уже известными соединениями. Согласно настоящему изобретению получен новый класс 6-тиоГТФ аналоговых соединений, способных ингибировать Racl и отличающихся большей аффиностью к Racl и более высокой супрессией активности Racl и, таким образом, имеющих большую иммуносупрессивную силу и действие по сравнению с отложенным эффектом лечения азатиоприном и наилучший терапевтический эффект. Поэтому целью настоящего изобретения является предоставление класса аналоговых соединений 6 тиогуанозинтрифосфата общей формулы (I) где пунктирная связь в сахарном фрагменте может быть либо одинарной, либо двойной и где R1, R2, R3,R4 или R5 одинаковые или различные между собой имеют общую формулу -(Int)m-Ter, где m составляет от 0 до 12 и Int и Ter являются внутренней и конечной функциональными группами, где Int выбирают из группы, состоящей из где X обозначает либо атом углерода, либо атом азота в ароматическом кольце, Y обозначает либо атом кислорода, либо атом серы и дополнительную группу Q, группу Qi или группы Qi (Qi показывает, что группа или несколько групп могут быть связаны с любым ненасыщенным участком кольца) выбирают из группы, состоящей из -ОН, -СООН, -N(CH3)2, -N (СН 2-СН 3)2, -СО-СН 3, -СО-О-СН 3, -О-СН 3, -S-СН 3, -SO2CH3, -СН 3, -С(-СН 3)3, -CN, -NO2 или галогеновых элементов. Альтернативно R5 может быть и его металлическими и аммониевыми солями, где n составляет от 0 до 5, или кислород или фосфор частично или полностью замещаются азотом, серой, метиленовыми группами или их производными. В некоторых воплощениях (в частности, но не ограниченных теми, где R5 представляет собой НО-[РО 3]n, и металл и соли аммония вышеуказанного, где n составляет от 0 до 5, или кислород или фосфор частично или полностью замещаются азотом, серой, метиленовыми группами или их производными)Ter может быть выбран из группы, состоящей из где Q выбирают из -OH(FAM) или -N(СН 3)2 (TAMRA). Кроме того, сахарная часть соединений формулы (I) может быть выбрана из группы, состоящей из следующих сахарных частей или сахароподобных частей Соединения изобретения могут быть общей формулой (II), происходящей из общей формулы (Ia) и/или (I), где R1 представляет собой [-SH] (следует понимать, что гуанозиновая часть может подвергаться кето-енольным таутомерным изменениям и тем самым приводить к [=S]), R2 является [-Н], R5 является[-(PO3)n-OH] и один из R3 и R4 является [-ОН], и другой из R3 и R4 является [-О-CO-NH-Intm-Ter] (обе версии предоставляются в одинаковой смеси, т.е. [-О-CO-NH-Intm-Ter] будет такой же, но часть молекул будет иметь [-О-CO-NH-Intm-Ter], присоединенную в R3 с R4, являющейся ОН, и другая часть молекул будет иметь [-O-CO-NH-Intm-Ter], присоединенную в R4 с R3, являющейся ОН) где X обозначает либо атом углерода, либо атом азота в ароматическом кольце, Y обозначает либо атом кислорода, либо атом серы и дополнительную группу Q или группы Qi (i показывающая позицию любого ненасыщенного участка кольца, с которым может быть связана группа Q) выбирают из группы, состоящей из -СН 3, -С(СН 3)3, -ОН, -СООН, -СО-СН 3, -СО-О-СН 3, -O-СН 3, -S-СН 3, -SO2-CH3, -N(CH3)2,-N(CH2-CH3)2, -CN, -NO2 или галогеновых элементов. В некоторых воплощениях изобретения формулы (I), (Ia) и (II) Ter выбирают из группы, состоящей из Согласно некоторым воплощениям настоящего изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, описанные ниже где R1, R2, R3, R4 или R5 одинаковые или различные между собой имеют общую формулу -(Int)m-Ter-, где где дополнительную группу Q, группу Qi или группы Qi (Qi показывает, что группа или несколько групп могут быть связаны с любым ненасыщенным участком кольца) выбирают из группы, состоящей из -ОН,-СООН, -N(CH3)2, -N(CH2-CH3)2 или галогеновых элементов.-6 014186 Кроме того, сахарная часть соединений формулы (I) может быть выбрана из группы, состоящей из следующих сахарных частей или сахароподобных частей: где Q выбирают из -OH(FAM) или -N(СН 3)2(TAMRA). Согласно некоторым воплощениям настоящего изобретения соединения формулы (I), (Ia) и (II) представляют собой соединения, описанные ниже 2',3'-EDA-6-тиоГТФ, ID: 05B-0 Далее раскрывают соединения изобретения со ссылкой на указанные названия.