Агенты, связывающиеся с мишенью в легочной ткани, для лечения респираторных заболеваний

АГЕНТЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С МИШЕНЬЮ В ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Описано применение агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью в легочной ткани, для изготовления композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локальной доставки в легочную ткань и способы введения агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани, субъекту с целью получения длительного терапевтического окна в легочной ткани. Композиция и способ предназначены для введения локально в легочную ткань. Кроме того, описано применение антагонистов TNFR1 для изготовления композиции или лекарственного средства для лечения, предупреждения или подавления воспаления легких или респираторного заболевания и способы лечения таких заболеваний. Кроме того, описано применение агентов для изготовления устройства доставки (например, ингалятора, интраназального устройства доставки) для лечения или предупреждения воспаления легких или респираторного заболевания и устройство доставки для лечения или предупреждения воспаления легких или респираторного заболевания, содержащее агент, изложенный в данном описании. Де Вильдт Рудольф М.Т., Холмс Стив,Томлинсон Айан М., Уинтер Грегори П.,Фитцджеральд Мэри Ф., Фокс Джастин Крейг, Сепп Армин, Ли Дженнифер, Вулвен Бенджамин П. (GB)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ДОМАНТИС ЛИМИТЕД; АРДЖЕНТА ДИСКАВЕРИ ЛИМИТЕД (GB) 014106 Родственная заявка Данная заявка соотносится согласно 35 U.S.С.119 или 365 с заявкой Соединенного КоролевстваGB 0521621.3, поданной 24 октября 2005 г. Полное содержание вышеупомянутой заявки включено в данное описание посредством ссылки. Предшествующий уровень техники Многие агенты с терапевтическим или диагностическим потенциалом невозможно применить invivo. Большие по размерам агенты с полупериодами существования in vivo в сыворотке достаточно длительными, чтобы проявилась их терапевтическая или диагностическая эффективность, часто не способны проникать в ткани или органы для того, чтобы создать желаемый терапевтический или диагностический эффект в желаемом месте. Агенты меньших размеров способны проникать в ткани и органы, но зачастую имеют короткие полупериоды существования in vivo в сыворотке и легко выводятся из большого круга кровообращения. Например, полупериод существования in vivo в сыворотке dAb мономеров(мономеров доменного антитела) составляет приблизительно 30 мин (см. примеры 9 и 33 из WO 2004/081026 А 2). Аналогично, полупериод существования in vivo в сыворотке антигенсвязывающих фрагментов антител, в частности Fv-фрагментов, также небольшой, и это делает их непригодными для многих терапевтических и диагностических применений in vivo (Peters et al., Science 286(5439): 434(1999. Кроме того, изменение или модификация таких агентов с целью увеличения полупериода существования in vivo в сыворотке может уменьшать активность данного агента. Существует необходимость в способах введения агентов (например, в легочную ткань) с целью получения длительного терапевтического окна для данного агента. Доказано, что агенты, которые связываются с TNF (фактор некроза опухоли) и нейтрализуют его активность, являются эффективными терапевтическими агентами для некоторых воспалительных состояний, таких как артрит. Однако не было продемонстрировано, что агенты, связывающиеся с TNF, эффективны в лечении воспаления легких или респираторных заболеваний, таких как хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) (см., например., van der Vaart et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 172(4): 465-9 (2005), Rennard et al., Proc. Amer. Thorac. Soc, 2 (Abstract Issue): A133, A541 (2005), Abdeihady et al.,Proc. Amer. Thorac. Soc, 2 (Abstract Issue): A133 (2005. Более того, терапевтические агенты, мишенью для которых является TNF-, такие как ENBREL (этанерсепт; Immunex Corporation), антагонизируютTNFR1 (рецептор 1 TNF) и TNFR2, и введение таких агентов может приводить к иммуносупрессии и сопутствующим побочным эффектам (например, серьезным инфекциям). Эти побочные эффекты могут ограничивать применение таких агентов, в частности, в случае хронических заболеваний, когда агент вводят в течение длительного периода (Kollias G. and Kontoyiannis D., Cytokine Growth Factor Rev., 13(45): 315-321 (2002. Напротив, агенты, специфически антагонизирующие TNFR1, могли бы иметь сниженные побочные эффекты. Однако обеспечить целенаправленное воздействие на TNFR1 трудно, поскольку агенты, которые вызывают кластеризацию данного рецептора, могут активировать передачу сигнала посредством этого рецептора, что может приводить к выработке медиаторов воспаления, таких как TNF. Фактически, мультивалентные агенты, связывающиеся с TNFR1, такие как анти-TNFR1 антитела, могут индуцировать кластеризацию TNFR1 и передачу сигнала в отсутствие TNF, и их обычно используют в качестве агонистов TNFR1 (см., например, Belka et al., EMBO, 14(6): 1156-1165 (1995);Mandik-Nayak et al., J. Immunol., 167: 1920-1928 (2001. Соответственно, мультивалентные агенты, связывающиеся с TNFR1, обычно не являются эффективными антагонистами TNFR1, даже если они блокируют связывание TNF с TNFR1. Существует необходимость в улучшенных агентах, которые антагонизируют TNF, и в способе введения таких агентов для лечения воспаления легких и болезни легких. Сущность изобретения Данное изобретение относится к применению агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани(например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера) для изготовления композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань или для изготовления лекарственного средства для локального введения в легочную ткань эффективного в низкой дозе количества указанного агента, при этом по меньшей мере 50% уровня агента в легочной ткани сохраняется в течение периода времени по меньшей мере приблизительно 4 ч. Предпочтительно, когда композиция или лекарственное средство предназначены для локального введения в легкое. Предпочтительно, когда уровень в легком, равный по меньшей мере приблизительно 1% от количества агента в композиции или лекарственном средстве, сохраняется в течение по меньшей мере 4 ч после локального введения. Более предпочтительно, когда агент, по существу, не поступает в большой круг кровообращения. В некоторых воплощениях агент имеет полупериод существования in vivo в сыворотке от приблизительно 1 с до приблизительно 12 ч. В других воплощениях композиция или лекарственное средство предназначены для введения дозы не более чем приблизительно 10 мг/кг/сутки. Данное изобретение относится к применению доменного антитела (dAb), связывающегося с мишенью в легочной ткани, для изготовления композиции суточной дозы для локального введения в легочную ткань, при этом по меньшей мере 50% уровня агента в легком сохраняется в течение периода времени по-1 014106 меньшей мере приблизительно 4 ч. Данное изобретение относится к применению доменного антитела (dAb), связывающегося с мишенью в легочной ткани, для изготовления композиции для лечения или предупреждения респираторного заболевания, где композиция предназначена для локального введения в легочную ткань и, по существу,не поступает в большой круг кровообращения. В одном воплощении применяют включительно приблизительно до 10 мг dAb, связывающегося с мишенью в легочной ткани. Предпочтительно мишень в легочной ткани опосредует воспаление легких или болезнь легких. Данное изобретение относится к ингалятору или интраназальному устройству доставки для предоставления отмеренной дозы композиции доменного антитела (dAb) субъекту для лечения или предупреждения респираторного заболевания или состояния, где этот ингалятор или интраназальное устройство доставки содержит композицию dAb и предоставляет отмеренную суточную дозу, содержащую до 10 мг включительно dAb. Кроме того, изобретение относится к применению композиции доменного антитела(dAb) в изготовлении ингалятора или интраназального устройства доставки с целью предоставления ингалируемой композиции dAb с длительным действием для локальной доставки в легкое. Кроме того, изобретение относится к способу введения агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани, субъекту для получения длительного терапевтического окна в легочной ткани, включающему введение локально в легочную ткань указанного субъекта эффективного количества указанного агента. Кроме того, изобретение относится к способу введения агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани, субъекту для получения длительного терапевтического окна в легочной ткани, включающему выбор агента, который имеет полупериод существования in vivo в сыворотке от приблизительно 1 с до приблизительно 12 ч и связывается с мишенью в легочной ткани, и введение локально в легочную ткань указанного субъекта эффективного количества указанного агента. Подходящие агенты для применения в данном изобретении могут связываться с мишенью в легочной ткани, выбранной из группы, состоящей из TNFR1, IL-1 (интерлейкин-1), IL-1R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL6, IL-6R, IL-8, IL-8R, IL-9, IL-9R, IL-10, IL-12, IL-12R, IL-13, IL-13Ra1, IL-13Ra2, IL-15, IL-15R, IL-16, IL17R, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-23, IL-23R, IL-25, CD2, CD4, CD11a, CD23, CD25, CD27, CD28, CD30,CD40, CD40L, CD56, CD138, ALK5 (активин-рецепторо-подобная киназа 5), EGFR (рецептор эпидермального фактора роста), FcER1 (высокоаффинный рецептор для IgE), TGFb (трансформирующий фактор роста b), CCL2, CCL18, СЕА (карциноэмбриональный антиген), CR8, CTGF (фактор роста соединительной ткани), CXCL12 (SDF-1; фактор-1 стромальных клеток, химазы, FGF (фактор роста фибробластов), фурина, эндотелина-1, эотаксинов (например, эотаксина, эотаксина-2, эотаксина-3), GM-CSF (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор), ICAM-1 (фактор межклеточной адгезии 1), ICOS (индуцибельный костимулирующий рецептор), IgE (иммуноглобулин Е), IFNa (интерферональфа), I-309, интегринов, L-селектина, MIF (фактор, ингибирующий миграцию макрофагов), MIP4 (макрофагальный воспалительный протеин 4), MDC (макрофагальные хемокины), МСР-1 (моноцитарный хемоаттрактантный протеин-1), ММР (матриксные металлопротеазы), эластазы нейтрофилов, остеопонтина, ОХ-40, PARC (хемокин, регулируемый легкими и активацией), PD-1 (белок программируемой смерти 1), RANTES (белок, экспрессируемый и синтезируемый Т-клетками при их активации), SCF (фактор роста стволовых клеток), SDF-1 (фактор клеток стромы-1), siglec:8 (связывающий сиаловую кислоту иммуноглобулиноподобный лектин 8), TARC (хемокин, регулируемый тимусом и активацией), TGFb,тромбина, Tim-1 (член 1 семейства Ig и муциновых доменов), TNF, TNFR1, TRANCE (остеобластактивирующий цитокин), триптазы, VEGF (сосудистый эндотелиальный фактор роста), VLA-4 (очень поздний антиген-4), VCAM (молекула адгезии сосудистых клеток), а 4 р 7, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR7,CCR8, альфаубета 6, альфаубета 8, сМЕТ и CD8. В одном из воплощений агент для применения в данном изобретении может связываться с мишенью, выбранной из группы, состоящей из белка в TNF-ассоциированном сигнальном каскаде. Предпочтительно этот белок-мишень выбран из группы, содержащей TNF-, TNF-, TNFR2, TRADD (ассоциированный с TNFR1 домен смерти), FADD (белок, связывающий Fas-рецептор с доменом смерти), каспазу-8, TNF-рецептор-ассоциированный фактор (TRAF), TRAF2, взаимодействующий с рецептором белок(RIP), Hsp90 (белок теплового шока 90), Cdc37 (гомолог 37 цикла клеточного деления), IKK(ингибитор В-киназы)- , IKK-, NEMO (эссенциальный модулятор NF-В), ингибитор В (1 В), NF-В (ядерный фактор-В), эссенциальный модулятор NF-В, регулируемую сигналом апоптоза киназу-1 (ASK1), кислую сфингомиелиназу (aSMase), нейтральную сфингомиелиназу (nSMase), катепсин-В, киназу зародышевого центра (GSK), GSK-3, фактор-ассоциированный домен смерти (FADD), фактор, ассоциированный с активацией нейтральной сфингомиелиназы (FAN), FLIP (FLICE-ингибирующий белок), JunD, ингибитор NF-В-киназы (IKK), MKK3 (киназа-3 митоген-активируемой протеинкиназы), MKK4, MKK7,IKK-, киназу митоген-активируемой протеинкиназы/Erk(регулируемой внеклеточным сигналом)-киназы(MEKK), MEKK1, MEKK3, NIK (NF-В-индуцирующая киназа), поли(АДФ-рибоза)-полимеразу (PARP),PKC-zeta (протеинкиназа С-зета), RelA, T2K, TRAF1, TRAF5, домен эффектора смерти (DED), домен смерти (DD), приводящий к гибели сигнальный комплекс (DISC), ингибитор апоптоза (IAP), с-Jun-N-2 014106 концевую киназу (JNK), митоген-активируемую протеинкиназу (MAPK), фосфоинозитид-3 ОН-киназу(PI3K), протеинкиназу А (PKA), PKB, PKC, PLAD, PTEN, домен Rel-гомологии (RHD), реально интересный новый ген (RING), стресс-активируемую протеинкиназу (SAPK), TNFконвертирующий фермент(ТАСЕ), приводящий к умолканию домена смерти белок (SODD) и TRAF-ассоциированный активаторNF-В (TANK). Относительно этих предпочтительных мишеней дана ссылка в WO 04046189, WO 04046186 и WO 04046185 (включены в данное описание посредством ссылки), в которых представлено руководство по выбору единичных вариабельных доменов антител для целенаправленной доставки к внутриклеточным мишеням. Данное изобретение относится к применению антагониста TNFR1 (например, лиганда, dAb мономера) в изготовлении лекарственного средства для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и/или респираторного заболевания. Кроме того, изобретение относится к способам лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и/или респираторного заболевания, включающим выбор антагониста рецептора 1 фактора некроза опухоли (TNFR1), обладающего эффективностью в подходящей животной модели респираторного заболевания при введении в количестве, не превышающем приблизительно 10 мг/кг/сутки, при этом эффективность в указанной животной модели имеет место тогда, когда клеточная инфильтрация легких,оцениваемая по общему количеству клеток в бронхоальвеолярном лаваже, ингибируется относительно не подвергнутого лечению контроля с р не более 0,05; и введение (например, введение локально в легочную ткань) эффективного количества указанного антагониста TNFR1 нуждающемуся в этом субъекту. Респираторные заболевания, которые могут быть подвергнуты лечению, подавлению или предупреждению с использованием лекарственных средств, композиций и способов по изобретению, включают воспаление легких, хроническую обструктивную болезнь легких, астму, пневмонию, аллергический пневмонит, легочный инфильтрат с эозинофилией, болезнь легких, вызываемую загрязнением окружающей среды, пневмонию, бронхоэктаз, муковисцидоз, интерстициальное заболевание легких, первичную легочную гипертензию, легочную тромбоэмболию, расстройства плевры, расстройства средостения, расстройства диафрагмы, гиповентиляцию, гипервентиляцию, приступы апноэ во сне, острый респираторный дистресс-синдром, мезотелиому, саркому, отторжение трансплантата, реакцию трансплантат против хозяина, рак легкого, аллергический ринит, аллергию, асбестоз, аспергиллому, аспергиллез, бронхоэктаз, хронический бронхит, эмфизему, эозинофильную пневмонию, идиопатический пневмофиброз,инвазивное пневмококковое заболевание, грипп, нетуберкулезные микобактерии, плевральный выпот,пневмокониоз, пневмоцистоз, пневмонию, актиномикоз легких, легочно-альвеолярный протеиноз, легочную форму сибирской язвы, отек легких, легочный эмбол, легочное воспаление, гистиоцитоз X легких,легочную гипертензию, нокардиоз легких, туберкулез легких, облитерирующий эндофлебит легочных вен, ревматоидную болезнь легких, саркоидоз, гранулематоз Вегенера и немелкоклеточный рак легкого. Кроме того, изобретение относится к лигандам и dAb, приведенным в данном описании. Кроме того, изобретение относится к лиганду, содержащему белковую группировку, которая имеет сайт связывания со специфичностью связывания с TNFR1 и при этом содержит аминокислотную последовательность, которая является такой же, как аминокислотная последовательность CDR3 в анти-TNFR1dAb, приведенном в данном описании. В некоторых воплощениях лиганд содержит белковую группировку, которая имеет сайт связывания со специфичностью связывания с TNFR1 и при этом имеет аминокислотную последовательность, является такой же, как аминокислотная последовательность CDR3 в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании, и также содержит аминокислотную последовательность, которая является такой же, как аминокислотная последовательность CDR1 и/или CDR2 в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным положениям и имеет последовательность CDR1,по меньшей мере на 50% идентичную последовательности CDR1 в анти-TNFR1 dAb, приведенных в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNFR1, где аминокислотная последовательность иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, связывающегося с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным положениям и имеет последовательность CDR2, по меньшей мере на 50% идентичную последовательности CDR2 в анти-TNFR1 dAb, приведенных в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNFR1, при этом аминокислотная последовательность этого иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, связывающегося с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным по-3 014106 ложениям и имеет последовательность CDR3, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностиCDR3 в анти-TNFR1 dAb, приведенных в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNFR1, где аминокислотная последовательность этого иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, связывающегося с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным положениям и имеет последовательность CDR1 и последовательность CDR2, по меньшей мере на 50% идентичные последовательностям CDR1 или CDR2, соответственно, в анти-TNFR1 dAb, приведенных в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNFR1, где аминокислотная последовательность этого иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, связывающегося с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным положениям и имеет последовательность CDR2 и последовательность CDR3, по меньшей мере на 50% идентичные последовательностям CDR2 или CDR3, соответственно, в анти-TNFR1 dAb, приведенных в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNIFR1, где аминокислотная последовательность иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, связывающегося с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным положениям и имеет последовательность CDR1 и последовательность CDR3, по меньшей мере на 50% идентичные последовательностям CDR1 или CDR3, соответсгвенно, в анти-TNFR1 dAb, приведенных в данном описании. В других воплощениях лиганд содержит иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен,связывающийся с TNFR1, где аминокислотная последовательность иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, связывающегося с TNFR1, отличается от аминокислотной последовательности анти-TNFR1 dAb, приведенного в данном описании, не более чем по 25 аминокислотным положениям и имеет последовательность CDR1, последовательность CDR2 и последовательность CDR3, по меньшей мере на 50% идентичные последовательностям CDR1, CDR2 или CDR3, соответственно, в анти-TNFR1dAb, приведенных в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR1, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR1 в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR2, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR2 в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR3, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR3 в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR1 и CDR2, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR1 и CDR2, соответственно, в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR2 и CDR3, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR2 и CDR3, соответственно, в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR1 и CDR3, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR1 и CDR3, соответственно, в анти-TNFR1 dAb, приведенном в данном описании. В другом воплощении изобретение относится к лиганду, содержащему иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, где этот иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, связывающийся с TNFR1, имеет последовательность CDR1, CDR2 и CDR3, по меньшей мере на 50% идентичную последовательностям CDR1, CDR2 и CDR3, соответственно, в антиTNFR1 dAb, приведенном в данном описании.-4 014106 Кроме того, изобретение относится к выделенной или рекомбинантной нуклеиновой кислоте, кодирующей любой из лигандов по изобретению. В других воплощениях изобретение относится к вектору,содержащему рекомбинантную нуклеиновую кислоту по изобретению. Кроме того, изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей рекомбинантную нуклеиновую кислоту по изобретению или вектор по изобретению. Кроме того, изобретение относится к способу продуцирования лиганда, включающему поддержание клетки-хозяина по изобретению в условиях, подходящих для экспрессии нуклеиновой кислоты или вектора по изобретению, посредством которых продуцируется лиганд. В других воплощениях способ продуцирования лиганда далее включает выделение лиганда. Краткое описание графических материалов Фиг. 1 представляет собой график, показывающий, что антагонист TNFR1 имеет выдающуюся эффективность по сравнению с другими терапевтическими агентами при введении локально в легочную ткань в подострой модели индуцированной табачным дымом (TS) хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) на мышах C57BL/6. На графике показано количество клеток, присутствующих в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) мышей по завершении исследования, описанного в примере 1. Показаны индивидуальные данные для каждой мыши в этом исследовании и средние по группам (средние величины; горизонтальные линии). Результаты показывают, что анти-TNFR1 dAb мономер (Dom1), введенный локально в легкое посредством интраназального введения, вызывал уменьшение количества клеток вBAL на 72% по сравнению с не подвергнутой обработке группой. Результаты также показывают, что локальное введение в легкое терапевтического агента, мишенью для которого является TNF (ENBREL(этанерсепт; Immunex Corporation, не оказывает статистически значимого воздействия на количество клеток в BAL. Кроме того, результаты показывают, что анти-TNFR1 dAb мономер (Dom1), введенный локально в легкое посредством интраназального введения, был более эффективен в снижении количества клеток в BAL, чем ингибитор фосфодиэстеразы 4 (PDE4I; BAY 19-8004), который вводили в высокой дозе 10 мг/кг перорально дважды в сутки (b.i.d.) - TS, индуцировано табачным дымом; Veh, разбавитель;ns, статистически незначимый результат. Фиг. 2 представляет собой график, показывающий, что антагонист TNFR1 имеет выдающуюся эффективность по сравнению с терапевтическим агентом, мишенью для которого является TNF, при введении системно в подострой модели индуцированной табачным дымом (TS) хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) на мышах C57BL/6. На графике показано количество клеток, присутствующих вBAL мышей по завершении исследования, описанного в примере 2. Показаны индивидуальные данные для каждой мыши в этом исследовании и средние по группам (горизонтальные линии). Результаты показывают, что ПЭГ(полиэтиленгликоль)-илированный анти-TNFR1 dAb мономер (TNFR1), введенный системно посредством внутрибрюшинного введения, вызывал уменьшение количества клеток в BAL на 60% по сравнению с не подвергнутой обработке группой. Результаты также показывают, что системное введение терапевтического агента, мишенью для которого является TNF (ENBREL (этанерсепт; ImmunexCorporation, приводило к 12%-му увеличению количества клеток в BAL, хотя это увеличение было статистически незначимо. TS, индуцировано табачным дымом; Veh, разбавитель; ns, статистически незначимый результат; i.p. внутрибрюшинно. Фиг. 3 представляет собой гистограмму, на которой данные для некоторых групп, показанные на фиг. 1 и 2, представлены вместе с результатами исследования, в котором в этой модели вводили пероральный стероид (дексаметазон). Гистограмма показывает, что локальное введение анти-TNFR1 dAb мономера (DOM/ADS101-нативный (Dom1 на фиг. 1 в легкое посредством интраназального введения (1 мг/кг; введенный один раз в каждые сутки (q.d. и системное введение ПЭГилированного анти-TNFR1dAb мономера (DOM/ADS101-ПЭГилированный (TNFR1 на фиг. 2 посредством внутрибрюшинного введения (10 мг/кг; введенный один раз каждые двое суток (q.a.d. были более эффективными в данной модели по сравнению с ингибитором фосфодиэстеразы 4 (PDE4I), который вводили в высокой дозе (10 мг/кг; введенный перорально дважды в сутки (b.i.d Гистограмма также показывает, что перорально вводимый стероид (0,3 мг/кг; введенный перорально дважды в сутки) увеличивал количество клеток вBAL и таким образом был не эффективен в данной модели. Фиг. 4 А и 4 В представляют собой гистограммы, показывающие дифференциальные подсчеты клеток для макрофагов (4 А) или нейтрофилов (4 В) в BAL для некоторых групп в исследовании, которые представлены на фиг. 1 и 2. фиг. 4 А показывает, что локальное введение анти-TNFR1 dAb мономера(DOM/ADS101-нативный (Dom1 на фиг. 1 в легкое посредством интраназального введения (1 мг/кг; вводимый один раз в каждые сутки (q.d. и системное введение ПЭГилированного анти-TNFR1 dAb мономера (DOM/ADS101-ПЭГилированный (TNFR1 на фиг. 2 посредством внутрибрюшинного введения(10 мг/кг; вводимый один раз каждые двое суток (q.a.d. были более эффективными в уменьшении количества макрофагов в BAL по сравнению с ингибитором фосфодиэстеразы 4 (PDE4I), который вводили в высокой дозе (10 мг/кг; вводимый перорально дважды в сутки (b.i.d Аналогично, на фиг. 4 В показано,что локальное введение анти-TNFR1 dAb мономера (DOM/ADS101-нативный (Dom1 на фиг. 1 в легкое посредством интраназального введения (1 мг/кг; вводимый один раз каждые сутки (q.d. и системное-5 014106 введение ПЭГилированного анти-TNFR1 dAb мономера (DOM/ADS101-ПЭГилированный (TNFR1 на фиг. 2 посредством внутрибрюшинного введения (10 мг/кг; вводимый один раз каждые двое суток(q.a.d. были более эффективными в уменьшении количества нейтрофилов в BAL по сравнению с ингибитором фосфодиэстеразы 4 (PDE4I), который вводили в высокой дозе (10 мг/кг; введенный перорально дважды в сутки (b.i.d Фиг. 5 представляет собой график, показывающий результаты фармакокинетического исследования агента, связывающегося с TNFR1 (DOM1m (TAR2m21-23 после локального введения в легочную ткань посредством интраназального введения (см. пример 3). График показывает, что уровни DOM1m в ткани легкого оставались относительно постоянными в течение по меньшей мере 8 ч после введения, в то время как уровни в BAL уменьшались постепенно, а уровни в сыворотке уменьшались быстро и не детектировались через 5 ч. Максимальные уровни DOM1m в BAL и сыворотке детектировали через 1 ч после введения (приблизительно 14 мкг/мл в BAL, приблизительно 150 нг/мл в сыворотке). Уровни в BAL оставались высокими в течение длительного периода времени и постепенно уменьшались в течение 24 ч(более чем 10-кратное уменьшение через 24 ч). Уровни в сыворотке быстро уменьшались, и DOM1m не детектировался в сыворотке через 5 ч. Уровни DOM1 в ткани легкого были относительно постоянными в течение по меньшей мере 8 ч после введения и не детектировались через 24 ч после введения. На фиг. 6A-6V показаны аминокислотные последовательности (SEQ ID NOS:1-198) нескольких человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов со специфичностью связывания с человеческим TNFR1. Представленные аминокислотные последовательности непрерывны без каких-либо разрывов; символвключен в последовательности с целью указания мест расположения областей, определяющих комплементарность (CDR). CDR1 фланкирована , CDR2 фланкирована , a CDR3 фланкирована. На фиг. 7 А-7 В показаны аминокислотные последовательности (SEQ ID NOS.199-211) нескольких человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов со специфичностью связывания с мышинымTNFR1. Представленные аминокислотные последовательности непрерывны без каких-либо разрывов; символвключен в последовательности с целью указания мест расположения областей, определяющих комплементарность (CDR). CDR1 фланкирована , CDR2 фланкирована , a CDR3 фланкирована. На фиг. 8 А показана нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:212), кодирующая внеклеточный домен человеческого (homo sapiens) TNFR1. На фиг. 8 В показана аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:213) внеклеточного домена человеческого (homo sapiens) TNFR1. На фиг. 9 А показана нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:214), кодирующая внеклеточный домен мышиного (Mus musculus) TNFR1. На фиг. 9 В показана аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:215) внеклеточного домена мышиного (Mus musculus) TNFR1. На фиг 10A-10Q показаны аминокислотные последовательности (SEQ ID NOS:216-221) нескольких человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов со специфичностью связывания с мышинымTNFR1 и аминокислотная последовательность (SEQ ID NOS:222-433) нескольких человеческих иммуноглобулиновых вариабельных доменов со специфичностью связывания с человеческим TNFR1. Представленные аминокислотные последовательности непрерывны без каких-либо разрывов; символвключен в последовательности с целью указания мест расположения областей, определяющих комплементарность (CDR). CDR1 фланкирована , CDR2 фланкирована , и CDR3 фланкирована . Фиг. 11 А и 11 В представляют собой графики, показывающие времязависимые увеличения концентрации TNF в бронхоальвеолярном лаваже (BAL) (фиг. 11 А) или ткани легкого (фиг. 11 В) после интраназального (i.n.) введения мышиного TNF (1 мг/мышь) через 1 ч после введения (i.n.) разбавителя или анти-TNFR1 dAb (1 мг/кг). Фиг. 12 представляет собой график, показывающий времязависимые увеличения нейтрофилов вBAL после i.n. введения мышиного TNF (1 мкг/мышь) через 1 ч после предварительного введения (i.n.) разбавителя или анти-TNFR1 dAb (1. мг/кг). Предварительное введение анти-TNFR1 dAb частично ингибировало увеличение количества нейтрофилов, индуцированное TNF. Фиг. 13A-13D представляют собой графики, показывающие времязависимые эффекты мышиногоTNF на уровни КС (кератин хемокиноцитов) в BAL (13A), уровни MIP-2 в BAL (13B), уровни МСР-1 вBAL (13C) или уровни Е-селектина в ткани легкого (13D). Введение анти-TNFR1 dAb значительно ингибировало увеличения, индуцированные TNF. На фиг. 14A-14Z и 14A2-14J2 показаны нуклеотидные последовательности нескольких нуклеиновых кислот, кодирующих человеческие иммуноглобулиновые вариабельные домены со специфичностью связывания с человеческим TNFR1 (SEQ ID NOS:434-644), и нуклеотидные последовательности нескольких нуклеиновых кислот, кодирующие человеческие иммуноглобулиновые вариабельные домены со специфичностью связывания с мышиным TNFR1 (SEQ ID NOS:645-650). Представленные последовательности непрерывны без каких-либо разрывов; символвключен в последовательности с целью указания мест расположения, кодирующих гипервариабельные участки (CDR). CDR1 фланкирована , CDR2-6 014106 фланкирована , a CDR3 фланкирована . Подробное описание изобретения Как он использован в данном описании, термин антагонист относится к агенту (например, молекуле, соединению), который связывается с мишенью (например, рецепторным белком) и может ингибировать (то есть одну или более чем одну) функцию мишени. Например, антагонист рецепторного белка может связываться с этим рецепторным белком и ингибировать связывание природного или родственного лиганда с рецепторным белком и/или ингибировать передачу сигнала, опосредованную через рецепторный белок. Например, антагонисты рецептора 1 фактора некроза опухоли TNFR1 могут связываться с TNFR1 и ингибировать связывание TNF с TNFR1 и/или ингибировать передачу сигнала, опосредованную через TNFR1. Антагонисты могут быть идентифицированы, например, путем скрининга библиотек или коллекций молекул, как например, из Банка химических соединений (Chemical Repository) Национального онкологического института (National Cancer Institute), или с использованием других подходящих способов. Предпочтительными антагонистами являются лиганды, которые приведены в данном описании. Как он использован в данном описании, термин антагонист рецептора 1 фактора некроза опухоли(TNFR1) относится к агенту (например, молекуле, соединению), который связывается с TNFR1 и может ингибировать (то есть одну или более чем одну) функцию TNFR1. Например, антагонист TNFR1 может ингибировать связывание TNF с TNFR1 и/или ингибировать передачу сигнала, опосредованную черезTNFR1. Соответственно TNFR1-опосредованные процессы и клеточные ответы (например, TNFиндуцированная гибель клеток в стандартном анализе цитотоксичности с использованием L929) могут быть ингибированы антагонистом TNFR1. Антагонист TNFR1 может представлять собой, например, небольшую органическую молекулу, природный продукт, белок, пептид или пептидомиметик. Антагонисты TNFR1 могут быть идентифицированы, например, путем скрининга библиотек или коллекций молекул, как например, из Банка химических соединений Национального онкологического института, как изложено в данном описании, или с использованием других подходящих способов. Предпочтительными антагонистами TNFR1 являются антитела, антигенсвязывающие фрагменты антител, лиганды и dAb мономеры, приведенные в данном описании. Как он использован в данном описании, термин лиганд относится к полипептиду, который содержит домен со специфичностью связывания с желаемой мишенью. Предпочтительно, когда связывающим доменом является иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен (например, VH, VL, VHH) со специфичностью связывания с желаемым антигеном-мишенью (например, рецепторным белком). Связывающий домен также может содержать одну или более областей, определяющих комплементарность(CDR), иммуноглобулинового единичного вариабельного домена со специфичностью связывания с желаемым антигеном-мишенью в подходящем формате, так чтобы связывающий домен имел специфичность связывания с антигеном-мишенью. Например, CDR может быть посажен на подходящий белковый каркас или остов, такой как аффитело, каркас SpA (белок A Staphylococcus aureus), домен рецепторов LDL (липопротеины низкой плотности), содержащий повторы класса А, или домен EGF (эпидермального фактора роста). Кроме того, лиганд может быть моновалентным (например, dAb мономер), бивалентным (гомобивалентным, гетеробивалентным) или мультивалентным (гомомультивалентным, гетеромультивалентным), как изложено в данном описании. Таким образом, лиганды включают полипептиды, состоящие из dAb, включают полипептиды, состоящие, по существу, только из dAb, полипептиды,содержащие dAb (или CDR от dAb) в подходящем формате, таком как формат антитела (например, IgGподобный формат, scFv (одноцепочечный Fv), Fab, Fab', F(ab')2) или подходящий белковый каркас или остов, такой как аффитело, каркас SpA, домен рецепторов LDL класса А или домен EGF, лиганды с двойной специфичностью, содержащие dAb, которое связывается с первой мишенью - белком, антигеном или эпитопом (например, TNFR1), и второе dAb, которое связывается с другой мишенью - белком, антигеном или эпитопом (например, сывороточным альбумином), и лиганды с множественной специфичностью, которые приведены в данном описании. Кроме того, связывающий домен может представлять собой белковый домен, содержащий сайт связывания с желаемой мишенью, например, белковый домен выбран из аффитела, домена SpA, домена рецепторов LDL класса А, домена EGF, авимера (см., например, публикацию заявок на патент США 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301). Фраза иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен относится к вариабельной области антитела (VH, VHH, VL), специфически связывающейся с антигеном или эпитопом независимо от другихV-областей или доменов; тем не менее, как этот термин используется в данном описании, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен может быть представлен в формате (например, гомо- или гетеро-мультимера) с другими вариабельными областями или вариабельными доменами, где не требуются другие области или домены для связывания антигена с единичным иммуноглобулиновым вариабельным доменом (то есть когда иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен связывается с антигеном независимо от дополнительных вариабельных доменов). Термин иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен охватывает не только выделенный полипептид единичного вариабельного домена антитела, но также и большие по размеру полипептиды, содержащие один или более мономеров поли-7 014106 пептидной последовательности единичного вариабельного домена антитела. Доменовое антитело илиdAb представляет собой то же, что и полипептид иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, как этот термин используется в данном описании. Полипептид иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, как он использован в данном описании, относится к полипептиду иммуноглобулинового единичного вариабельного домена млекопитающих, предпочтительно человека, но также включает VHH dAb грызунов (например, как описано в WO 00/29004, содержание которой включено в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки) или верблюжий VHH dAb. Верблюжьи dAb представляют собой полипептиды иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, которые происходят из видов, включающих верблюда, ламу, альпаку, дромадера и гуанако, и содержат состоящие из тяжелых цепей антитела, по своей природе лишенные легкой цепи: VHH. Молекулы VHH приблизительно в десять раз меньше молекул IgG, и как единичные полипептиды, они очень стабильны, оставаясь устойчивыми в условиях экстремальных рН и температур. Как он использован в данном описании, термин доза относится к количеству агента (например,антагониста TNFR1), введенного субъекту полностью в один момент времени (стандартная доза), или за два или более введений в течение определенного временного интервала. Например, доза может относиться к количеству агента (например, антагониста TNFR1), введенного субъекту в течение курса продолжительностью одни сутки (24 ч) (суточная доза), двое суток, одна неделя, две недели, три недели или один или более месяцев (например, путем однократного введения или путем двух или более введений). Интервал между дозами может составлять любое желаемое количество времени. Как он использован в данном описании, термин терапевтическое окно относится к диапазону концентраций лекарственного средства (например, антагониста, лиганда, dAb мономера) в плазме или в ткани либо органе (например, легочной ткани, легком), куда лекарственное средство вводят локально,которое приводит к высокой вероятности терапевтической эффективности. Комплементарный. Два иммуноглобулиновых домена являются комплементарными, если они принадлежат семействам структур, которые образуют родственные пары или группы, или происходят из таких семейств и сохраняют этот признак. Например, VH-домен и VL-домен антитела комплементарны; два VH-домена не комплементарны и два VL-домена не комплементарны. Комплементарные домены можно обнаружить у других членов иммуноглобулинового суперсемейства, таких как домены V и V(илии ) Т-клеточного рецептора. Домены искусственные, как, например, домены на основе белковых каркасов, которые не связываются с эпитопами за исключением случаев, когда они сконструированы с этой целью, не являются комплементарными. Также не комплементарны два домена на основе, например, иммуноглобулинового домена и фибронектинового домена. Иммуноглобулин. Он относится к семейству полипептидов, сохраняющих характерную для иммуноглобулинов укладку молекул антитела, которая содержит две -складчатые структуры и, обычно,консервативную дисульфидную связь. Члены иммуноглобулинового суперсемейства вовлечены во многие аспекты клеточных и неклеточных взаимодействий in vivo, включая разнообразные роли в иммунной системе (например, антитела, молекулы Т-клеточных рецепторов и тому подобное), вовлечение в клеточную адгезию (например, молекулы ICAM) и внутриклеточную передачу сигнала (например, рецепторные молекулы, такие как рецептор PDGF (фактора роста тромбоцитов. Настоящее изобретение применимо ко всем молекулам иммуноглобулинового суперсемейства, имеющим связывающие домены. Предпочтительно настоящее изобретение относится к антителам. Домен. Домен представляет собой свернутую белковую структуру, сохраняющую свою третичную структуру независимо от остальной части белка. Как правило, домены ответственны за отдельные функциональные свойства белков и во многих случаях могут быть добавлены, удалены или перенесены в другие белки без потери функции оставшейся части белка и/или домена. Под единичным вариабельным доменом антитела понимают свернутый полипептидный домен, содержащий последовательности, характерные для вариабельных доменов антител. Следовательно, он включает полные вариабельные домены антител и модифицированные вариабельные домены, например, в которых одна или более петель заменены на последовательности, не характерные вариабельным доменам антител, или вариабельные домены антител, которые укорочены или содержат N- или С-концевые удлиняющие сегменты, а также свернутые фрагменты вариабельных доменов, которые сохраняют, по меньшей мере частично, связывающую активность и специфичность полноразмерного домена. Репертуар. Коллекция разнообразных вариантов, например полипептидных вариантов, отличающихся по своей первичной последовательности. Библиотека, использованная в настоящем изобретении,будет охватывать набор полипептидов, содержащий по меньшей мере 1000 членов. Библиотека. Термин библиотека относится к смеси гетерогенных полипептидов или нуклеиновых кислот. Библиотека состоит из членов, каждый из которых имеет единичную полипептидную или нуклеиновокислотную последовательность. До некоторой степени библиотека является синонимом репертуару. Различия в последовательностях среди членов библиотеки ответственны за разнообразие, представленное в этой библиотеке. Библиотека может принимать форму простой смеси полипептидов или нуклеиновых кислот или может быть в форме микроорганизмов или клеток, например бактерий, вирусов,-8 014106 клеток животных и растений и тому подобного, трансформированных с использованием библиотеки нуклеиновых кислот. Предпочтительно, когда каждый индивидуальный микроорганизм или клетка содержит только один член библиотеки или ограниченное их количество. Предпочтительно, когда нуклеиновые кислоты инкорпорированы в экспрессирующие векторы для того, чтобы способствовать экспрессии полипептидов, кодируемых нуклеиновыми кислотами. В предпочтительном аспекте, следовательно,библиотека может принимать форму популяции микроорганизмов хозяина, при этом каждый микроорганизм содержит одну или более копий экспрессирующего вектора, содержащего единичный член библиотеки в форме нуклеиновой кислоты, которая может быть экспрессирована с целью получения соответствующего ей полипептидного члена. Таким образом, популяция микроорганизмов хозяина имеет возможность кодировать большой набор генетически различающихся полипептидных вариантов. Антитело. Антитело (например, IgG, IgM, IgA, IgD или IgE) или фрагмент (такой как Fab, F(ab')2,Fv, связанный дисульфидной связью Fv, scFv, мультиспецифическое антитело с близкой конформацией,связанный дисульфидной связью scFv, димер), как происходящее из любого существующего в природе вида, продуцирующего антитела, так и созданное методом рекомбинантных ДНК; а также выделенное из сыворотки, В-клеток, гибридом, трансфектом, дрожжей или бактерий. Лиганд с двойной специфичностью. Лиганд, содержащий первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, как определено в данном описании, где вариабельные области способны к связыванию с двумя различными антигенами или двумя эпитопами на том же антигене, который в норме не связывается с моноспецифическим иммуноглобулином. Например, два эпитопа могут находиться на одном и том же гаптене, но не являться одним и тем же эпитопом или не быть достаточно близко расположенными для того, чтобы связываться с моноспецифическим лигандом. Лиганды с двойной специфичностью по изобретению состоят из вариабельных доменов с различной специфичностью и не содержат взаимно комплементарные пары вариабельных доменов с той же специфичностью. Лиганды с двойной специфичностью и подходящие способы получения лигандов с двойной специфичностью описаны в WO 2004/058821, WO 2004/003019 и WO 03/002609, при этом полные изложения каждой из этих опубликованных международных заявок включены в данное описание посредством ссылки. Антиген. Молекула, связывающаяся с лигандом по настоящему изобретению. Обычно антигены связываются с лигандами антител и способны усилить антительный ответ in vivo. Ими могут быть полипептид, белок, нуклеиновая кислота или другая молекула. Как правило, лиганды с двойной специфичностью по изобретению выбирают для получения целевой специфичности в отношении конкретного антигена. В случае традиционных антител и их фрагментов сайт связывания антитела, определяемый вариабельными петлями (L1, L2, L3 и Н 1, Н 2, Н 3), обладает способностью связываться с антигеном. Эпитоп. Единица структуры, традиционно связываемая иммуноглобулиновой VH/VL-парой. Эпитопы определяют минимальный сайт связывания для антитела и таким образом представляют собой мишень специфичности антитела. В случае антитела с единичным доменом эпитоп представляет собой единицу структуры, связываемую отдельно вариабельным доменом. Универсальный каркас. Каркасная последовательность единичного антитела, соответствующая участкам антитела с консервативной последовательностью, как определено Kabat ("Sequences of Proteinsand Human Services, или соответствующая репертуару или структуре иммуноглобулинов эмбриональной линии человека, как определено в Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol., 196: 910-917. Согласно изобретению предложено применение единичного каркаса или набора таких каркасов, для которых обнаружено, что они допускают возможность получения фактически любой специфичности связывания посредством изменения только в гипервариабельных участках. Полупериод существования. Время, принятое для снижения концентрации лиганда in vivo в сыворотке на 50%, например, вследствие деградации лиганда и/или выведения или разрушения лиганда под действием природных механизмов. Лиганды по изобретению стабилизированы in vivo, и их полупериод существования увеличен посредством связывания с молекулами, устойчивыми к деградации и/или выведению или разрушению. Обычно такими молекулами являются существующие в природе белки, которые сами имеют длительный полупериод существования in vivo. Полупериод существования лиганда увеличивается, если его функциональная активность продолжает сохраняться, in vivo, в течение более длительного периода по сравнению с подобным лигандом, который не является специфичным к увеличивающей полупериод существования молекуле. Таким образом, лиганд, специфичный к HSA (сывороточному альбумину человека) и молекуле-мишени, отличается от такого же лиганда, где специфичность кHSA не присутствует, который не связывается с HSA, а связывается с другой молекулой. Например, он может связываться со вторым эпитопом на молекуле-мишени. Обычно полупериод существования увеличивается на 10, 20, 30, 40, 50% или более. Возможны увеличения полупериода существования в диапазоне 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50 или более. Альтернативно, или в дополнение к этому, возможны увеличения полупериода существования в диапазоне до 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 включительно.-9 014106 По существу идентичный (или по существу гомологичный). Первая аминокислотная или нуклеотидная последовательность, содержащая достаточное количество идентичных или эквивалентных(например, с аналогичной боковой цепью, например, с замещениями консервативных аминокислот) аминокислотных остатков или нуклеотидов относительно второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, так что первая и вторая аминокислотные или нуклеотидные последовательности обладают похожими активностями. В случае антител второе антитело имеет ту же самую специфичность связывания и имеет по меньшей мере 50% аффинности по связыванию, как и первое. Как они использованы в данном описании, термины условия низкой строгости, средней строгости, высокой строгости или очень высокой строгости описывают условия гибридизации и отмывки нуклеиновых кислот. Руководство по проведению реакций гибридизации можно найти в Current Protocols in Molecular Biology, John WileySons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6, что включено в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки. В этой ссылке описаны водный и неводный способы, и оба они могут быть использованы. Конкретными условиями гибридизации, на которые дается ссылка в данном описании, являются следующие: (1) условия гибридизации низкой строгости в 6 растворе хлорида натрия/цитрата натрия(SSC) при приблизительно 45 С с последующими двумя отмывками в 0,2 SSC, 0,1% SDS (додецилсульфата натрия), по меньшей мере при 50 С (температура отмывок может быть увеличена до 55 С для условий низкой строгости); (2) условия гибридизации средней строгости в 6 SSC при приблизительно 45 С с последующими одной или более отмывками в 0,2 SSC, 0,1% SDS, при 60 С; (3) условия гибридизации высокой строгости в 6 SSC при приблизительно 45 С с последующими одной или более отмывками в 0,2SSC, 0,1% SDS, при 65 С; и предпочтительно (4) условиями гибридизации очень высокой строгости являются 0,5 М фосфат натрия, 7% SDS, при 65 С с последующими одной или более отмывками в 0,2SSC, 1% SDS, при 65 С. Условия очень высокой строгости (4) являются предпочтительными условиями, и следует использовать их, если не установлено иное. Со ссылкой на данное описание термин конкурирует означает, что связывание первого эпитопа с родственным ему эпитопсвязывающим доменом ингибируется, когда с родственным ему эпитопсвязывающим доменом связывается второй эпитоп. Например, связывание может ингибироваться стерически,например путем физического блокирования связывающего домена или путем изменения структуры или окружения связывающего домена, так что его аффинность или авидность в отношении эпитопа снижается. Последовательности, аналогичные или гомологичные (например, идентичность последовательностей составляет по меньшей мере приблизительно 70%) последовательностям, приведенным в данном описании, также составляют часть изобретения. В некоторых воплощениях идентичность последовательностей на аминокислотном уровне может равняться приблизительно 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96,97, 98, 99% или больше. На уровне нуклеиновых кислот идентичность последовательностей может равняться приблизительно 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или больше. Альтернативно,значительная идентичность имеет место тогда, когда нуклеиновокислотные сегменты будут гибридизоваться в выбранных условиях гибридизации (например, условиях гибридизации очень высокой строгости) с комплементарной нитью. Нуклеиновые кислоты могут находиться в интактных клетках, в клеточном лизате или в частично очищенной или, по существу, чистой форме. Расчеты гомологии или идентичности последовательностей либо сходства между двумя последовательностями (эти термины используются в данном описании взаимозаменяемо) выполняют следующим образом. Последовательности выравнивают в целях оптимального сравнения (например, могут быть введены разрывы в одну или обе первую и вторую аминокислотную или нуклеиновокислотную последовательности для оптимального выравнивания, а для сравнительных целей негомологичными последовательностями можно пренебречь). В предпочтительном воплощении длина сравниваемой последовательности, выравненной для сравнительных целей, равна по меньшей мере 30%, предпочтительно по меньшей мере 40%, более предпочтительно по меньшей мере 50%, еще более предпочтительно по меньшей мере 60% и еще более предпочтительно по меньшей мере 70, 80, 90, 100% длины последовательности сравнения. Затем сравнивают аминокислотные остатки или нуклеотиды в соответствующих аминокислотных положениях или нуклеотидных положениях. Если положение в первой последовательности занято тем же аминокислотным остатком или нуклеотидом, что и соответствующее положение во второй последовательности, тогда молекулы идентичны по этому положению (как использовано в данном описании, аминокислотная или нуклеиновокислотная гомология эквивалентна аминокислотной или нуклеиновокислотной идентичности). Процент идентичности между двумя последовательностями есть функция количества идентичных положений, общих для этих последовательностей, с учетом количества разрывов и длины каждого разрыва, которые необходимы для введения с целью оптимального выравнивания двух последовательностей. Выравнивания аминокислотной и нуклеотидной последовательности и их гомология, сходство или идентичность, как определено в данном описании, предпочтительно проводят и определяют с использованием алгоритма для 2 последовательностей BLAST 2 Sequences, используя параметры по умолчанию(Tatusova, Т.A. et al., FEMS Microbiol. Lett, 174: 187-188 (1999. Альтернативно, предпочтительно, когда алгоритм BLAST (версия 2.0) применяется для выравнивания последовательностей с параметрами, устанавливаемыми для величин по умолчанию. Алгоритм BLAST подробно описан на world wide web-сайте("www") Национального центра по биотехнологической информации (National Center for BiotechnologyInformation) (".ncbi") Национального института здравоохранения ("nih") правительства США (".gov"), в директории "/Blast/", в файле "blasthelp.html". Параметры поиска определяют, как показано далее, и предпочтительно устанавливают на определенные параметры по умолчанию.BLAST (Basic Local Aligment Search Tool) представляет собой эвристический алгоритм поиска, используемый программами blastp, blastn, blastx, tblastn и tblastx; эти программы приписывают значимость полученным с их использованием результатам, применяя статистические способы, приведенные в работеKarlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87(6): 2264-8 (см. файл "blasthelp.html", как описано выше) с некоторым количеством усовершенствований. Программы BLAST идут в череде программ для поиска сходства последовательностей, например с целью идентификации гомологов для запрашиваемой последовательности. Как правило, эти программы не полезны для поиска по типу мотива. Для обсуждения основных результатов поиска сходства с использованием баз данных по последовательностям см.Altschul et al. (1994). Пять программ BLAST, доступных на web-сайте Национального центра по биотехнологической информации, решают следующие задачи:"blastp" сравнивает запрашиваемую аминокислотную последовательность с базой данных по белковым последовательностям,"blastn" сравнивает запрашиваемую нуклеотидную последовательность с базой данных по нуклеотидным последовательностям;"blastx" сравнивает шестирамочные концептуальные продукты трансляции запрашиваемой нуклеотидной последовательности (обе нити) с базой данных по белковым последовательностям;"tblastn" сравнивает запрашиваемую белковую последовательность с базой данных по нуклеотидным последовательностям, динамически транслируемым во всех шести рамках считывания (обе нити)."tblastx" сравнивает имеющиеся в шести рамках трансляции запрашиваемой нуклеотидной последовательности с имеющимися в шести рамках трансляциями базы данных по нуклеотидным последовательностям.BLAST использует следующие параметры поиска.HISTOGRAM. Дает изображение гистограммы оценок для каждого поиска; по умолчанию да (см. параметр Н в BLAST Manual).DESCRPTIONS. Ограничивает количество коротких описаний (descriptions) совпадающих последовательностей путем предоставления отчета об их конкретизированном количестве; ограничение по умолчанию - 100 описаний (см. параметр V на странице Manual). См также EXPECT и CUTOFF.ALIGMENTS. Ограничивает последовательности из базы данных до конкретизированного количества, для чего сообщает о парах сегментов с совпадением наибольшего веса (HSP); ограничение по умолчанию - 50. Если имеется большее количество последовательностей из базы данных, чем это нужно для сообщения о соответствии порогу статистической значимости (см. EXPECT и CUTOFF, ниже), сообщается только о совпадениях, которым приписывается наибольшая статистическая значимость (см. параметр В в BLAST Manual).EXPECT. Порог статистической значимости для сообщения о совпадениях с последовательностями из базы данных; величина по умолчанию - 10, то есть ожидается обнаружение случайным образом только 10 совпадений, согласно стохастической модели Karlin и Altschul (1990). Если статистическая значимость, приписываемая совпадению, превышает ЕХРЕСТ-порог, сообщения о совпадении не поступит. Более низкие ЕХРЕСТ-пороги являются более строгими, что дает чуть большую вероятность сообщения о совпадениях. Дробные значения приемлемы (см. параметр Е в BLAST Manual).CUTOFF. Оценка отсечки (cutoff) для сообщения о парах сегментов с совпадением наибольшего веса. Значение по умолчанию рассчитывают из величины EXPECT (см. выше). Сообщается о HSP для последовательности из базы данных, только если статистическая значимость, приписываемая им, по меньшей мере достаточно высока, чтобы приписать одиночной HSP оценку, равную значению CUTOFF. Более высокие значения CUTOFF являются более строгими, что дает чуть большую вероятность сообщения о совпадениях (см. параметр S в BLAST Manual). Обычно, порогами значимости можно более интуитивно управлять, используя EXPECT.MATRIX. Конкретизирует альтернативную оценочную матрицу для BLASTP, BLASTX, TBLASTN и TBLASTX. Матрицей по умолчанию является BLOSUM62 (HenikoffHenikoff, 1992, Proc. Natl. Acad.Sci. USA 89(22): 10915-9). Обоснованные альтернативные выборы включают РАМ 40, РАМ 120, РАМ 250 и IDENTITY. Никакие другие оценочные матрицы не доступны для BLASTN; установка директивы MATRIX в BLASTN требует возвратов ошибочного ответа.STRAND. Ограничивает поиск TBLASTN только верхней или нижней нитью последовательностей из базы данных; или ограничивает поиск BLASTN, BLASTX или TBLASTX только рамками считывания на верхней или нижней нити запрашиваемой последовательности.FILTER. Демаскирует сегменты запрашиваемой последовательности с низкой композиционной вариабельностью, что определяется с помощью программы SEG в WoottonFederhen (1993) Computersand Chemistry 17: 149-163, или сегменты, состоящие из внутренних повторов с короткой периодичностью, что определяется с помощью программы XNU в ClaverieStates, 1993, Computers and Chemistry 17: 191-201, или, для BLASTN, с помощью программы DUST от Tatusov и Lipman (см. world wide webсайт от NCBI). С помощью программы фильтрации можно исключить статистически значимые, но не представляющие биологического интереса сообщения из результатов вычисления blast (например, хиты в сравнении с общими участками, обогащенными кислыми, основными аминокислотами или пролином), что позволяет представляющие больший биологический интерес участки запрашиваемой последовательности сделать доступными для специфического совпадения с последовательностями из базы данных. Последовательность с низкой вариабельностью, обнаруженная фильтрующей программой, заменяют, используя букву N в нуклеотидной последовательности (например, N, повторенная 13 раз) и букву X в белковых последовательностях (например, X, повторенная 9 раз). Фильтрация применима только к запрашиваемой последовательности (или ее продуктам трансляции), не к последовательностям из базы данных. Фильтрацией по умолчанию является DUST дляBLASTN, SEG для других программ. Нет ничего необычного в том, что маскирование с использованием SEG, XNU или обеих программ,когда их применяют к последовательностям в SWISS-PROT, окажется совсем бесполезным, поэтому ожидается, что фильтрация не всегда должна давать эффект. Кроме того, в некоторых случаях последовательности маскированы полностью, что указывает на то, что статистическая значимость любых совпадений, сообщенная относительно нефильтрованной запрашиваемой последовательности, должна вызвать подозрение. В результатах вычислений следует показывать идентификаторы NCBI-gi Causes NCBI gi, в дополнение к наименованию доступа (accession name) и/или наименованию локуса. Наиболее предпочтительно, когда сравнения последовательностей выполняют с использованием простого алгоритма поискаBLAST, доступного на NCBI world wide web-сайте, описанном выше, в директории "/BLAST". Если не оговорено иное, то все технические и научные термины, используемые в данном описании,имеют те же значения, которые обычно позразумеваются специалистом обычной квалификации в данной области техники (например, в клеточном культивировании, молекулярной генетике, химии нуклеиновых кислот, методиках гибридизации и биохимии). Для молекулярных, генетических и биохимических способов (см., в общем случае, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed. (1989) ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. и Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4th Ed, John WileySons, Inc., которые включены в данное описание посредством ссылки) и химических способов использованы стандартные методики. Как изложено в данном описании, проводили исследование, в котором антагонист TNFR1, состоящий, по существу, из dAb мономера, связывающегося с TNFR1, вводили в мышиной подострой модели индуцированной табачным дымом хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) Результаты исследования показали, что антагонисты TNFR1 (например, содержащие доменовое антитело (dAb), связывающееся с TNFR1) являются эффективными терапевтическими агентами для лечения респираторных заболеваний (например, воспаления в легком, острой болезни легких, хронической болезни легких (например, ХОБЛ. Фактически, антагонисты, протестированные в данном исследовании, были более эффективны, чем ингибитор фосфодиэстеразы 4 в высокой дозе или растворимый TNFR1 (ENBREL (этанерсепт; Immunex Corporation, который связывается с TNF и нейтрализует его. Исследованные антагонисты TNFR1 были эффективны в данной модели при введении системно (внутрибрюшинной инъекцией) или локально в легочную ткань посредством интраназального введения. Результаты исследования неожиданно показывают, что локальное введение антагонистов, связывающихся с мишенью в легочной ткани (например, TNFR1), было более эффективным в ингибировании клеточной инфильтрации легких в данной модели, чем системное введение антагониста с удлиненным полупериодом существования (ПЭГилированного dAb мономера, ПЭГилированного с целью увеличения гидродинамического размера и полупериода существования in vivo в сыворотке dAb мономера), даже несмотря на то, что системно было введено в пять раз больше антагониста. По сравнению с введенным локально dAb мономером системно вводили антагонист с удлиненным в 2,5 раза, по молям, полупериодом существования (ПЭГилированный dAb мономер, ПЭГилированный для увеличения гидродинамического размера и полупериода существования in vivo в сыворотке dAb мономер). Как изложено в данном описании, проводили следующее исследование, в котором изучали фармакокинетику dAb мономера, связывающегося с TNFR1, после локального введения в легочную ткань посредством интраназального введения. Результаты этого исследования показали, что после локального введения в легочную ткань dAb мономер имел продолжительный срок пребывания в легком и что количество dAb мономера в легком, по существу, было постоянным в течение восьмичасового периода времени. К тому же, локальная доставка dAb мономера в легкое приводила к кратковременному присутствию только низкой концентрации dAb мономера в сыворотке.- 12014106 Конкретно, максимальный уровень приблизительно 150 нг/мл детектировали в сыворотке через 1 ч после введения, а через 5 ч в сыворотке не было задетектировано никакого dAb мономера. Такие результаты фармакокинетического исследования являются неожиданными и демонстрируют,что агент, связывающийся с мишенью в легочной ткани, как, например, антитело или фрагмент антитела,связывающиеся с мишенью в легочной ткани (например, Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, Fv-фрагмент (например, scFv, связанный дисульфидной связью Fv), F(ab')2-фрагмент, dAb), или антагонист мишени в легочной ткани (например, лиганд, dAb мономер) может быть введен локально в легочную ткань с целью обеспечения длительного терапевтического окна (для лечения, подавления, предупреждения или диагностики респираторных состояний) в легочной ткани благодаря продолжительному сроку пребывания таких агентов в легочной ткани. Результаты фармакокинетического исследования и длительное терапевтическое окно, полученное благодаря локальному введению в легочную ткань, также объясняют наблюдаемую выдающуюся эффективность введенного локально антагониста TNFR1 в мышиной модели ХОБЛ. К тому же, наблюдаемая выдающаяся эффективность dAb мономера при введении локально в более низкой дозе, низкая концентрация dAb мономера, поступающего в сыворотку, и быстрое выведение dAb мономера из сыворотки показывают, что агенты, связывающиеся с мишенью в легочной ткани(например, фрагмент антитела, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например, Fab-фрагмент,Fab'-фрагмент, Fv-фрагмент (например, scFv, связанный дисульфидной связью Fv), F(ab')2-фрагмент,dAb, имеют значительно меньшую вероятность проявления побочных эффектов (например, иммуносупрессии, токсичности), чем другие типы терапевтических агентов. В следующих далее исследованиях индуцировали воспаление легких посредством стимулятора воспаления TNF. Результаты этих исследований демонстрируют, что антагонисты TNFR1 (анти-TNFR1dAb, которые ингибируют связывание TNF с данным рецептором или которые не ингибируют связывание TNF с данным рецептором) значительно ингибируют TNF-индуцированные увеличения других медиаторов воспаления, таких как хемоаттрактанты нейтрофилов с ранним действием KC и MIP-1, и хемокин с поздним действием МСР-1, и молекула адгезии Е-селектин, и ингибировали клеточную инфильтрацию легких Исследования, изложенные в данном описании, демонстрируют, что агенты, связывающиеся с мишенями в легочной ткани (например, фрагменты антител (например, Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, Fvфрагмент (например, scFv, связанный дисульфидной связью Fv), F(ab')2-фрагмент, dAb), антагонисты,лиганды, dAb мономеры), являются выдающимися терапевтическим средствами для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и/или респираторного заболевания, или для диагностических целей, таких как томография. Результаты также демонстрируют, что даже несмотря на то, что dAb мономеры имеют короткий полупериод существования in vivo в сыворотке, dAb, которые связываются с мишенью в легочной ткани, и антагонисты, которые содержат такие dAb, могут быть введены локально в легочную ткань с целью обеспечения длительного терапевтического окна в легочной ткани благодаря продолжительному сроку пребывания таких dAb в легочной ткани. Соответственно, другие агенты, которые связываются с мишенью в легочной ткани и имеют короткие полупериоды существования in vivo(например, фрагменты антител, такие как Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, Fv-фрагменты (например,scFv, связанные дисульфидной связью Fv), F(ab')2-фрагменты), могут быть введены локально в легочную ткань с целью обеспечения длительного терапевтического окна (например, для лечения, подавления,предупреждения или диагностики респираторных состояний) в легочной ткани. Обычно агенты, связывающиеся с мишенями в легочной ткани (например, фрагменты антител (например, Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, Fv-фрагмент (например, scFv, связанный дисульфидной связьюFv), F(ab')2-фрагмент, dAb), антагонисты, лиганды, dAb мономеры), могут быть введены локально в легочную ткань с целью обеспечения терапевтического окна в легочной ткани по меньшей мере приблизительно в течение 4 ч, по меньшей мере приблизительно 5 ч, по меньшей мере приблизительно 6 ч, по меньшей мере приблизительно 7 ч, по меньшей мере приблизительно 8 ч, по меньшей мере приблизительно 9 ч, по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 11 ч или по меньшей мере приблизительно 12 ч. Локальное введение агентов, связывающихся с мишенями в легочной ткани, в легочную ткань. В первом аспекте изобретение относится к способам введения агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью в легочной ткани, субъекту для получения длительного терапевтического окна (например, для лечения, подавления, предупреждения или диагностики респираторных состояний) в легочной ткани. Например, терапевтическое окно в легочной ткани составляет по меньшей мере приблизительно 4 ч, по меньшей мере приблизительно 5 ч, по меньшей мере приблизительно 6 ч, по меньшей мере приблизительно 7 ч, по меньшей мере приблизительно 8 ч, по меньшей мере приблизительно 9 ч, по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 11 ч или по меньшей мере приблизительно 12 ч. Согласно первому аспекту изобретения агент вводят локально в легочную ткань субъекту (например, человеку). Агент, связывающийся с мишенью в легочной ткани (например, фрагменты антител (например,Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, Fv-фрагмент (например, scFv, связанный дисульфидной связью Fv), F(ab')2- 13014106 фрагмент, dAb), антагонисты, лиганды, dAb мономеры), может быть введен локально в легочную ткань(например, легкое) субъекту с использованием любого подходящего способа. Например, агент может быть введен локально в легочную ткань посредством ингаляции или интраназального введения. В случае ингаляции или интраназального введения агент (антагонист TNFR1, лиганд, dAb мономер) может быть введен с использованием небулайзера, ингалятора, атомайзера, устройства для образования аэрозоля,разбрызгивателя, сухого порошкового ингалятора, дозирующего ингалятора, дозирующего распылителя,дозирующего разбрызгивателя, дозирующего атомайзера или другого подходящего устройства доставки. В некоторых воплощениях способ включает локальное введение в легочную ткань субъекту эффективного количества агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), который имеет короткий полупериод существования in vivo в сыворотке и связывается с мишенью в легочной ткани. Согласно изобретению такие агенты (например, фрагмент антитела, антагонист, лиганд, dAb мономер) могут быть введены локально в легочную ткань с целью получения длительного терапевтического окна в легочной ткани, но, по существу, они не будут накапливаться в сыворотке. Вследствие короткого полупериода существования in vivo таких агентов (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера) агенты, проходящие через легочный эпителий и поступающие в сыворотку, будут быстро выведены из сыворотки и таким образом не будут накапливаться до уровней, которые могли бы дать нежелательные эффекты (например, системные побочные эффекты). Например, агенты (например,фрагмент антитела, антагонист, лиганд, dAb мономер), которые связываются с мишенью в легочной ткани, подходящие для применения в первом аспекте изобретения, могут иметь полупериод существованияin vivo в сыворотке приблизительно от 1 с до приблизительно 12 ч, приблизительно 12 ч или меньше,приблизительно 11 ч или меньше, приблизительно 10 ч или меньше, приблизительно 9 ч или меньше,приблизительно 8 ч или меньше, приблизительно 7 ч или меньше, приблизительно 6 ч или меньше, приблизительно 5 ч или меньше, приблизительно 4 ч или меньше, приблизительно 3 ч или меньше, приблизительно 2 ч или меньше, приблизительно 1 ч или меньше или приблизительно 30 мин или меньше. Предпочтительные антагонисты для введения согласно первому аспекту изобретения содержат dAb, который связывается с мишенью в легочной ткани. Особенно предпочтительными агентами (например, антагонистами) для применения в первом аспекте изобретения являются dAb мономеры или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые связываются с мишенью в легочной ткани (например, Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, Fv-фрагменты (например, scFv, связанные дисульфидной связью Fv), F(ab')2-фрагменты). Полупериод существования invivo в сыворотке dAb мономеров составляет приблизительно 30 мин (см. примеры 9 и 13 из WO 2004/081026 А 2). Однако, как изложено в данном описании, локальная доставка dAb мономера, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например, TNFR1), приводила к терапевтическому окну в легочной ткани, равному по меньшей мере 8 ч. Аналогично, полупериод существования in vivo в сыворотке антигенсвязывающих фрагментов антител, в частности Fv-фрагментов, также непродолжителен и делает их неподходящими для многих терапевтических и диагностических применений in vivo (Peters et al., Science 286(5439): 434 (1999. Однако, как показано результатами исследования, изложенными в данном описании, антигенсвязывающие фрагменты антител, которые связываются с мишенью в легочной ткани,могут быть введены локально в легочную ткань с целью обеспечения длительного терапевтического окна(например, для лечения, подавления, предупреждения или диагностики респираторных состояний) в легочной ткани, например терапевтического окна, составляющего по меньшей мере 8 ч. Как изложено в данном описании, локальное введение агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), в легочную ткань дает длительное терапевтическое окно в легочной ткани (легком). В некоторых воплощениях локальное введение агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), в легочную ткань дает длительное терапевтическое окно в легочной ткани(легком), которое характеризуется наличием в легком по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 1,25%, по меньшей мере приблизительно 1,5%, по меньшей мере приблизительно 1,75%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 2,25%, по меньшей мере приблизительно 2,5%, по меньшей мере приблизительно 2,75% или по меньшей мере приблизительно 3% от общего количества введенного агента через 4, 5 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 ч после введения. В некоторых воплощениях локальное введение агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например,фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), в легочную ткань дает длительное терапевтическое окно в легком, которое характеризуется наличием в легком как в целом (в BAL и ткани легкого) по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 10% или по меньшей мере приблизительно 5% от общего количества введенного агента через 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 ч после введения. В других воплощениях локальное введение агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани,дает длительное терапевтическое окно в легочной ткани (легком), где по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%,- 14014106 по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или более уровня агента в легком (например, уровня, достигнутого после введения (например, уровня в легком, достигнутого через 1 ч после локального введения в легкое сохраняется в течение периода времени по меньшей мере приблизительно 4, по меньшей мере приблизительно 5, по меньшей мере приблизительно 6, по меньшей мере приблизительно 7, по меньшей мере приблизительно 8, по меньшей мере приблизительно 9, по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 11 ч или по меньшей мере приблизительно 12 ч. Как изложено в данном описании, локальное введение агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), в легочную ткань дает длительное терапевтическое окно в легочной ткани (легком), но агент, по существу, не поступает в большой круг кровообращения. Агент, по существу, не поступает в кровоток, когда не более чем приблизительно 2, не более чем приблизительно 1,75, не более чем приблизительно 1,5, не более чем приблизительно 1,25, не более чем приблизительно 1, не более чем приблизительно 0,75, не более чем приблизительно 0,5 или не более чем приблизительно 0,25% от общего количества введенного агента присутствует или, по существу, агент отсутствует в сыворотке через 5 ч после того, как агент введен. В некоторых случаях агент, введенный как изложено в данном описании, может поступать в большой круг кровообращения, но он не накапливается до значительного уровня, поскольку, например, агент быстро выводится из большого круга кровообращения. Соответственно, согласно изобретению предложен способ локального введения агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани, в легочную ткань, при этом никакого значительного уровня агента в большом круге кровообращения не накапливается. Уровень агента в большом круге кровообращения не является значительным, когда не более чем приблизительно 2, не более чем приблизительно 1,75, не более чем приблизительно 1,5, не более чем приблизительно 1,25, не более чем приблизительно 1, не более чем приблизительно 0,75, не более чем приблизительно 0,5 или не более чем приблизительно 0,25 от общего количества введенного агента присутствует или, по существу, агент отсутствует в сыворотке через 5 ч после того, как агент введен. Обычно для введения локально в легочную ткань субъекта необходимо только эффективное в низкой дозе количество агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью в легочной ткани. Эффективное в низкой дозе количество представляет собой количество агента, которое меньше количества того же самого агента, которое должно быть введено системно (то есть эффективная системная доза) для достижения того же эффекта. В некоторых воплощениях эффективное в низкой дозе количество составляет приблизительно 80% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 70% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 60% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 50% или меньше эффективной системной дозы,приблизительно 40% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 30% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 20% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 10% или меньше эффективной системной дозы либо приблизительно 5% или меньше эффективной системной дозы. Подходящие агенты, которые могут быть введены локально в легочную ткань согласно первому аспекту изобретения, включают такие агенты, как антитело или антигенсвязывающие фрагменты антителCD8. В воплощении мишень выбрана из белка в TNF-ассоциированном сигнальном каскаде. Предпочтительно этот белок-мишень выбран из группы, содержащей TNF-, TNF-, TNFR2, TRAIDD, FADD, каспазу-8, TNF-рецептор-ассоциированный фактор (TRAF), TRAF2, взаимодействующий с рецептором белок (RIP), Hsp90, Cdc37, IKK-, IKK-, NEMO, ингибитор В (IkB), NF-В, эссенциальный модуляторNF-В, регулируемую сигналом апоптоза киназу-1 (ASK1), кислую сфингомиелиназу (aSMase), нейтральную сфингомиелиназу (nSMase), катепсин-В, киназу зародышевого центра (GSK), GSK-3, факторассоциированный домен смерти (FADD), фактор, ассоциированный с активацией нейтральной сфингомиелиназы (FAN), FLIP, JunD, ингибитор NF-В-киназы (IKK), MKK3, MKK4, MKK7, IKK-, киназу митоген-активируемой протеинкиназы/Erk-киназы (MEKK), MEKK1, MEKK3, NIK, поли(АДФ-рибоза)полимеразу (PARP), PKC-zeta, RelA, T2K, TRAF1, TRAF5, домен эффектора смерти (DED), домен смерти(DD), приводящий к гибели сигнальный комплекс (DISC), ингибитор апоптоза (IAP), c-Jun-N-концевую- 15014106 киназу (JNK), митоген-активируемую протеинкиназу (MAPK), фосфоинозитид-3 ОН-киназу (PI3K), протеинкиназу А (PKA), PKB, PKC, PLAD, PTEN, домен ReI-гомологии (RHD), реально интересный новый ген (RING), стресс-активируемую протеинкиназу (SAPK), TNFконвертирующий фермент (ТАСЕ),приводящий к умолканию домена смерти белок (SODD) и TRAF-ассоциированный активатор NF-В(TANK). Относительно этих предпочтительных мишеней дана ссылка в WO 04046189, WO 04046186 иWO 04046185 (включены в данное описание посредством ссылки), в которых представлено руководство по выбору единичных вариабельных доменов антител для целенаправленной доставки к внутриклеточным мишеням. Агенты, связывающиеся с мишенями в легочной ткани (например, фрагменты антител (например,Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент, Fv-фрагмент (например, scFv, связанный дисульфидной связью Fv), F(ab')2 фрагмент, dAb), антагонисты, лиганды, dAb мономеры), могут быть получены с использованием любого подходящего способа, например способов, изложенных подробно в данном описании в отношении антагонистов (например, лигандов, dAb мономеров), связывающихся с TNFR1. В некоторых воплощениях изобретение относится к способу получения длительного терапевтического окна в легочной ткани субъекта (например, человека) для агента (например, фрагмента антитела,антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани,включающему выбор агента, который имеет короткий полупериод существования in vivo в сыворотке(например, меньше приблизительно 12 ч) и связывается с мишенью в легочной ткани, и локальное введение в легочную ткань субъекта эффективного количества или эффективного в низкой дозе количества агента, который был выбран. В конкретных воплощениях первый аспект изобретения относится к способу получения длительного терапевтического окна в легочной ткани субъекта (например, человека) для агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани, включающему локальное введение в легочную ткань субъекта эффективного количества или эффективного в низкой дозе количества указанного агента. Предпочтительно, когда агент вводят в количестве не более чем приблизительно 10 мг/кг/сутки. Например, агент вводят в количестве от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/кг/сутки, например приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9 или приблизительно 10 мг/кг/сутки. В других предпочтительных воплощениях, как, например, когда агент вводят локально в легочную ткань (легкое) человека, вводят не более чем приблизительно 10 мг/сутки. Например, в таких воплощениях агент может быть введен локально в легочную ткань в дозе от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/сутки (например, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3,2 или 1 мг/сутки). Соответственно, агент может быть введен локально в легочную ткань в дозе от приблизительно 1 до приблизительно 200 мкг/кг/сутки (например, приблизительно 10, приблизительно 20,приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50, приблизительно 60, приблизительно 70,приблизительно 80, приблизительно 90, приблизительно 100, приблизительно 110, приблизительно 120,приблизительно 130, приблизительно 140, приблизительно 150, приблизительно 160, приблизительно 170, приблизительно 180 или приблизительно 190 мкг/кг/сутки). В конкретных воплощениях вводят от приблизительно 5 мкг/кг/сутки до приблизительно 3 мг/кг/сутки или предпочтительно от приблизительно 50 до приблизительно 500 мкг/кг/сутки. Применение агентов, связывающихся с мишенями в легочной ткани, в легочной ткани для изготовления композиций и лекарственных средств. Первый аспект изобретения также относится к применению агента (например, фрагмента антитела,антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани,как изложено в данном описании, в изготовлении композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань. Длительное терапевтическое окно или длительный период действия в легочной ткани может представлять собой промежуток времени по меньшей мере приблизительно 4 ч, по меньшей мере приблизительно 5 ч, по меньшей мере приблизительно 6 ч, по меньшей мере приблизительно 7 ч, по меньшей мере приблизительно 8 ч, по меньшей мере приблизительно 9 ч, по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 11 ч или по меньшей мере приблизительно 12 ч. В некоторых воплощениях используемый агент (например, фрагмент антитела, антагонист, лиганд,dAb мономер) имеет короткий полупериод существования in vivo в сыворотке и связывается с мишенью в легочной ткани. Согласно изобретению такие агенты (например, фрагмент антитела, антагонист, лиганд, dAb мономер) могут быть введены локально в легочную ткань с целью получения длительного терапевтического окна в легочной ткани, но, по существу, не накапливаться в сыворотке. Например, подходящие агенты (например, фрагмент антитела, антагонист, лиганд, dAb мономер), связывающиеся с мишенью в легочной ткани, для применения в первом аспекте изобретения могут иметь полупериод существования in vivo в сыворотке от приблизительно 1 с до приблизительно 12 ч, приблизительно 12 ч или меньше, приблизительно 11 ч или меньше, приблизительно 10 ч или меньше, приблизительно 9 ч или меньше, приблизительно 8 ч или меньше, приблизительно 7 ч или меньше, приблизительно 6 ч или- 16014106 меньше, приблизительно 5 часов или меньше, приблизительно 4 часов или меньше, приблизительно 3 часов или меньше, приблизительно 2 ч или меньше, приблизительно 1 ч или меньше или приблизительно 30 мин или меньше. Особенно предпочтительными агентами (например, антагонистами) для применения в первом аспекте изобретения являются dAb мономеры или антигенсвязывающие фрагменты антитела, которые связываются с мишенью в легочной ткани (например, Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, Fv-фрагменты (например, scFv, связанные дисульфидной связью Fv), F(ab')2-фрагменты). В некоторых воплощениях изобретение относится к применению агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани, как изложено в данном описании, в изготовлении композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань (легкое), где по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%,по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или более уровня агента в легком (например,уровня, достигаемого после введения (например, уровня в легком, достигаемого через 1 ч после локального введения в легкое сохраняется в течение периода времени по меньшей мере приблизительно 4 ч,по меньшей мере приблизительно 5 ч, по меньшей мере приблизительно 6 ч, по меньшей мере приблизительно 7 ч, по меньшей мере приблизительно 8 ч, по меньшей мере приблизительно 9 ч, по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 11 ч или по меньшей мере приблизительно 12 ч. В некоторых воплощениях изобретение относится к применению агента (например, фрагмента антитела,антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани,как изложено в данном описании, в изготовлении композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань (легкое), при этом длительный период действия или длительное терапевтическое окно в легком характеризуется наличием в легком как в целом (BAL и ткани легкого) по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 10% или по меньшей мере приблизительно 5% от общего количества введенного агента через 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч,9 ч, 10 ч, 11 ч или 12 ч после введения. В некоторых воплощениях изобретение относится к применению агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани, как изложено в данном описании, в изготовлении композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань (легкое), при этом уровень в легком, равный по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 1,25%, по меньшей мере приблизительно 1,5%, по меньшей мере приблизительно 1,75%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 2,25%, по меньшей мере приблизительно 2,5%, по меньшей мере приблизительно 2,75% или по меньшей мере приблизительно 3% от количества агента в композиции (например, введенного в дозе композиции), присутствует в легочной ткани в течение по меньшей мере 4 ч, по меньшей мере 5 ч, по меньшей мере 6 ч, по меньшей мере 7 ч, по меньшей мере 8 ч, по меньшей мере 9 ч, по меньшей мере 10 ч, по меньшей мере 11 ч или по меньшей мере 12 ч (например,после того как композиция введена). Предпочтительно, когда агент для применения в изобретении, по существу, не поступает в большой круг кровообращения (например, когда присутствует в композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном). Как изложено в данном описании, агент, по существу, не поступает в кровоток, когда не более чем приблизительно 2%, не более чем приблизительно 1,75%, не более чем приблизительно 1,5%, не более чем приблизительно 1,25%, не более чем приблизительно 1%, не более чем приблизительно 0,75%, не более чем приблизительно 0,5% или не более чем приблизительно 0,25% от общего количества введенного агента присутствует (например, в дозе композиции), или, по существу,агент отсутствует, в сыворотке через 5 ч после того, как агент (например, в дозе композиции) введен. В некоторых случаях агент, введенный как изложено в данном описании, может поступать в большой круг кровообращения, но не накапливаться до значительного уровня, поскольку, например, агент быстро выводится из большого круга кровообращения. Соответственно, согласно изобретению предложено применение агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани, в легочной ткани, при этом никакого значительного уровня агента в большом круге кровообращения не накапливается. Уровень агента в большом круге кровообращения не является значительным, когда не более чем приблизительно 2%, не более чем приблизительно 1,75%, не более чем приблизительно 1,5%, не более чем приблизительно 1,25%, не более чем приблизительно 1%, не более чем приблизительно 0,75%, не более чем приблизительно 0,5% или не более чем приблизительно 0,25% от общего количества введенного агента (например, в дозе композиции) присутствует, или, по существу, агент отсутствует в сыворотке через 5 ч после того, как агент (например, в дозе композиции) введен. Кроме того, изобретение относится к применению агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью (например, TNFR1) в легочной ткани, как из- 17014106 ложено в данном описании, в изготовлении лекарственного средства для локального введения в легочную ткань эффективного в низкой дозе количества агента. Как изложено в данном описании, эффективное в низкой дозе количество обычно равно приблизительно 80% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 70% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 60% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 50% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 40% или меньше эффекгивной системной дозы, приблизительно 30% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 20% или меньше эффективной системной дозы, приблизительно 10% или меньше эффективной системной дозы либо приблизительно 5% или меньше эффективной системной дозы. В некоторых воплощениях изобретение относится к способу изготовления композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань, содержащей агент (например, фрагмент антитела, антагонист, лиганд, dAb мономер), связывающийся с мишенью в легочной ткани, или способу изготовления лекарственного средства для локального введения в легочную ткань эффективного в низкой дозе количества агента (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), связывающегося с мишенью в легочной ткани. Способы включают (1) выбор агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани и имеющего короткий полупериод существования in vivo в сыворотке (например, меньше приблизительно 12 ч), и (2) применение выбранного агента для изготовления композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань либо для изготовления лекарственного средства для локального введения в легочную ткань эффективного в низкой дозе количества агента. Кроме того, изобретение относится к применению агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани (например, фрагмента антитела, антагониста, лиганда, dAb мономера), как изложено в данном описании, для применения в изготовлении композиции с длительным действием или длительным терапевтическим окном для локального введения в легочную ткань (легкое), как изложено в данном описании, или в изготовлении лекарственного средства для локального введения в легочную ткань эффективного в низкой дозе количества агента, как изложено в данном описании, при этом композиция или лекарственное средство предназначены для введения агента в количестве не более чем приблизительно 10 мг/кг/сутки. Например, композиция или лекарственное средство могут быть предназначены для введения от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/кг/сутки, например приблизительно 1 приблизительно 2,приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9 или приблизительно 10 мг/кг/сутки. В некоторых воплощениях композиция или лекарственное средство предназначены для локального введения в легочную ткань (легкое) человека, и композиция или лекарственное средство предназначены для введения не более чем приблизительно 10 мг/сутки. Например, композиция или лекарственное средство могут быть предназначены для введения агента в дозе от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/сутки (например, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 мг/сутки). Соответственно, композиция или лекарственное средство могут быть предназначены для введения агента в дозе от приблизительно 1 до приблизительно 200 мкг/кг/сутки (например, приблизительно 10, приблизительно 20, приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50, приблизительно 60,приблизительно 70, приблизительно 80, приблизительно 90, приблизительно 100, приблизительно 110,приблизительно 120, приблизительно 130, приблизительно 140, приблизительно 150, приблизительно 160, приблизительно 170, приблизительно 180 или приблизительно 190 мкг/кг/сутки). В конкретных воплощениях вводят от приблизительно 5 мкг/кг/сутки до приблизительно 3 мг/кг/сутки или предпочтительно от приблизительно 50 до приблизительно 500 мкг/кг/сутки. Композиции и лекарственные средства, изготовленные с использованием агента, связывающегося с мишенью в легочной ткани, как изложено в данном описании, могут быть введены локально в легочную ткань (например, легкое) субъекту с использованием любого подходящего способа. Например, агент может быть введен локально в легочную ткань посредством ингаляции или интраназального введения. В случае ингаляции или интраназального введения агент (антагонист TNFR1, лиганд, dAb мономер) может быть введен с использованием небулайзера, ингалятора, атомайзера, устройства для образования аэрозоля, разбрызгивателя, сухого порошкового ингалятора, дозирующего ингалятора, дозирующего распылителя, дозирующего разбрызгивателя, дозирующего атомайзера или другого подходящего устройства доставки. При желании, например для диагностических целей (например, томографии), агент, связывающийся с мишенью в легочной ткани (например, фрагмент антитела, антагонист, лиганд, dAb мономер), может содержать детектируемую метку. Подходящие детектируемые метки и способы мечения агента хорошо известны в данной области техники. Подходящие детектируемые метки включают, например, радиоактивный изотоп (например, как индий-111, технеций-99 т или йод-131), позитрон-излучающие метки (например, фтор-19), парамагнитные ионы (например, гадолиний(III), марганец(II, эпитопную метку (tag),аффинную метку (например, биотин, авидин), спиновую метку, фермент, флуоресцентную группу или хемилюминесцентную группу. Если метки не используются, образование комплекса может быть определено поверхностным плазмонным резонансом или другими подходящими способами.- 18014106 Антагонисты TNFR1 для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и респираторных заболеваний. Во втором аспекте изобретение относится к способам лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и/или респираторного заболевания, включающим введение субъекту (например, млекопитающему, человеку), нуждающемуся в этом, эффективного количества антагониста TNFR1 (например, лиганда, dAb мономера). Кроме того, изобретение относится к применению антагониста TNFR1(например, лиганда, dAb мономера) для изготовления лекарственного средства для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и/или респираторного заболевания и к фармацевтической композиции для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких и/или респираторного заболевания, содержащей антагонист TNFR1 (например, лиганд, dAb мономер) в качестве активного ингредиента. Антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, подробно изложены в данном описании и включают небольшие молекулы, новые химические структуры, лиганды, dAb мономеры и тому подобное. Согласно изобретению предложены композиции, содержащие антагонист TNFR1 (например лиганд,лиганд с двойной специфичностью, лиганд с множественной специфичностью, dAb мономер) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, и терапевтические и диагностические способы, в которых используются лиганды или композиции по изобретению. Антагонисты и лиганды(например, лиганды с двойной специфичностью, лиганды с множественной специфичностью, dAb мономеры) согласно способу по настоящему изобретению можно использовать в терапевтических и профилактических применениях in vivo, диагностических применениях in vivo и тому подобном. Терапевтические и профилактические применения антагонистов TNFR1 (например, лигандов, лигандов с множественной специфичностью, лигандов с двойной специфичностью, dAb мономеров) включают введение эффективного количества антагонистов TNFR1 (например, лигандов, лигандов с множественной специфичностью, лигандов с двойной специфичностью, dAb мономеров) реципиентному млекопитающему или субъекту, как например, человеку. Например, антагонисты TNFR1 (например, лиганды, лиганды с множественной специфичностью,лиганды с двойной специфичностью, dAb мономеры) обычно будут находить применение в предупреждении, подавлении или лечении воспаления легких и/или респираторных заболеваний, таких как состояние, при котором воспаление легких представляет собой симптом или часть патологии, острые респираторные заболевания, хронические респираторные заболевания, острые воспалительные респираторные заболевания и хронические воспалительные респираторные заболевания. Например, антагонисты TNFR1(например, лиганды, лиганды с множественной специфичностью, лиганды с двойной специфичностью,dAb мономеры) могут быть введены для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких,хронической обструктивной болезни легких (например, хронического бронхита, хронического обструктивного бронхита, эмфиземы), астмы (например, стероид-устойчивой астмы), пневмонии (например, бактериальной пневмонии, такой как стафилококковая пневмония), аллергического пневмонита, легочного инфильтрата с эозинофилией, болезни легких, вызываемой загрязнением окружающей среды, пневмонии, бронхоэктаза, муковисцидоза, интерстициального заболевания легких, первичной легочной гипертензии, легочной тромбоэмболии, расстройств плевры, расстройств средостения, расстройств диафрагмы, гиповентиляции, гипервентиляции, приступов апноэ во сне, острого респираторного дистресссиндрома, мезотелиомы, саркомы, отторжения трансплантата, реакции трансплантат против хозяина,рака легкого, аллергического ринита, аллергии, асбестоза, аспергилломы, аспергиллеза, бронхоэктаза,хронического бронхита, эмфиземы, эозинофильной пневмонии, идиопатического пневмофиброза, инвазивного пневмококкового заболевания (IPD), гриппа, нетуберкулезных микобактерий, плеврального выпота, пневмокониоза, пневмоцистоза, пневмонии, актиномикоза легких, легочно-альвеолярного протеиноза, легочной формы сибирской язвы, отека легких, легочного эмбола, воспаления легких, гистиоцитозаX легких (эозинофильной гранулемы), легочной гипертензии, нокардиоза легких, туберкулеза легких,облитерирующего эндофлебита легочных вен, ревматоидной болезни легких, саркоидоза, гранулематоза Вегенера и немелкоклеточного рака легкого. В настоящей заявке термин предупреждение охватывает введение протективной композиции перед индуцированием заболевания. Подавление относится к введению композиции после индуцирующего события, но до клинического проявления заболевания. Лечение охватывает введение протективных композиций после проявления симптомов заболевания. Предпочтительно, когда лиганды с двойной или множественной специфичностью могут быть применены для целенаправленного воздействия на цитокины и другие молекулы, которые объединяются для совместного действия в терапевтических ситуациях в организме. Таким образом, согласно изобретению предложен способ синергизации активности двух или более связывающих доменов (например, dAb), где один домен связывается с TNFR1 или другой мишенью в легочной ткани, а другой домен связывается с цитокином или другой молекулой, включающий введение лиганда с двойной или множественной специфичностью, способного к связыванию с указанными двумя или более молекулами (например, TNFR1 и цитокином). Например, этот аспект изобретения относится к комбинациям VH-доменов и VL-доменов,- 19014106 только VH-доменов и только VL-доменов. Синергизм в терапевтическом контексте может быть достигнут рядом способов. Например, комбинации для мишеней могут быть терапевтически активными, только если лиганд целенаправленно воздействует на обе мишени, в то время как целенаправленное воздействие только на одну мишень терапевтически не эффективно. В другом воплощении воздействие только на одну мишень может давать некоторый слабый или минимальный терапевтический эффект, но вместе со второй мишенью комбинация дает синергическое увеличение в терапевтическом эффекте. Системы животных моделей, которые можно использовать для скрининга эффективности антагонистов TNFR1 (например, лигандов, антител или связывающихся с ними белков, dAb мономера) в предупреждении, подавлении или лечении респираторного заболевания, доступны. Например, подходящие животные модели респираторного заболевания включают модели хронической обструктивной болезни легких (см. Groneberg, D.A. et al., Respiratory Research 5: 18 (2004 и модели астмы (см. Coffman et al., J.Exp. Med. 201 (12):1875-1879 (2001. Предпочтительно, антагонист TNFR1 (например, лиганд или dAb мономер) эффективен в мышиной индуцированной табачным дымом модели хронической обструктивной болезни легких (например, подострой модели, приведенной в данном описании) или подходящей модели астмы или хронической обструктивной болезни легких с использованием приматов. Более предпочтительно, когда антагонист TNFR1 (например, лиганд или dAb мономер) эффективен в мышиной индуцированной табачным дымом модели хронической обструктивной болезни легких (например, подострой модели, приведенной в данном описании) (см. также Wright and Churg, Chest, 122: 301-306 (2002. Например, введение эффективного количества лиганда может облегчить, замедлить или предотвратить начало развития симптомов ХОБЛ в данной модели по сравнению с подходящим контролем. Предшествующий уровень техники не предполагает применения антагонистов TNFR1 (например, лигандов илиdAb мономеров) в этих моделях или того, что они могли бы быть эффективными. В общем случае настоящие антагонисты (например, лиганды) будут применены в очищенной форме вместе с фармакологически приемлемыми носителями. Обычно, эти носители включают водные или спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, любые включающие физиологический раствор среды и/или буферные среды. Парентеральные разбавители включают раствор хлорида натрия, декстрозный раствор Рингера, декстрозу и хлорид натрия и раствор Рингера с лактатом. Подходящие физиологически приемлемые адъюванты, при необходимости хранения полипептидного комплекса в суспензии,могут быть выбраны из таких загустителей, как карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, желатин и альгинаты. Внутривенные разбавители включают жидкость и питательные наполнители и электролитные наполнители, как, например, разбавители на основе декстрозного раствора Рингера. Также могут присутствовать консерванты и другие добавки, такие как антимикробные средства, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition). Можно использовать ряд подходящих композиций, включая композиции с продолжительным высвобождением. Антагонисты (например, лиганды) по настоящему изобретению могут быть использованы в виде вводимых по отдельности композиций или вместе с другими агентами. Они могут включать различные лекарственные средства, такие как ингибиторы фосфодиэстеразы (например, ингибиторы фосфодиэстеразы 4), бронходилататоры (например, 2-агонисты, антихолинергические средства, теофиллин), агонисты с коротким действием (например, албутерол, салбутамол, бамбутерол, фенотерол, изоэтерин,изопротеренол, левалбутерол, метапротеренол, пирбутерол, тербуталин и торнлат), -агонисты с длительным действием (например, формотерол и салметерол), антихолинергические средства с коротким действием (например, ипратропия бромид и окситропия бромид), антихолинергические средства с длительным действием (например, тиотропий), теофиллин (например, композицию с коротким действием,композицию с длительным действием), ингалируемые стероиды (например, беклометазон, беклометазон,будесонид, флунизолид, флутиказона пропионат и триамцинолон), пероральные стероиды (например,метилпреднизолон, преднизолон, преднизолон и преднизон), комбинированные -агонисты с коротким действием и антихолинергические средства (например, албутерол/салбутамол/ипратропий и фенотерол/ипратропий), комбинированные -агонисты с длительным действием и ингалируемые стероиды (например, салметерол/флутиказон и формотерол/будесонид) и муколитические агенты (например, эрдостеин, ацетилцистеин, бромгексин, карбоцистеин, гуафенезин и йодинированный глицерин), циклоспорин,антибиотики, противовирусные средства, метотрексат, адриамицин, цисплатин и иммунотоксины. Фармацевтические композиции могут включать коктейли различных цитотоксических или иных агентов вместе с антагонистами (например, лигандами) по настоящему изобретению или даже комбинациями лигандов по настоящему изобретению с различными специфичностями, таких как лиганды, выбранные с использованием различных мишеней-антигенов или эпитопов, вне зависимости от того, объединены они или нет перед введением. Антагонисты TNFR1 (например, лиганды, dAb мономеры) могут быть введены и/или изготовлены вместе с одним или более чем одним дополнительным терапевтическим или активным агентом. Если антагонист TNFR1 (например, лиганд, dAb мономер) вводят с дополнительным терапевтическим аген- 20014106 том, то антагонист TNFR1 может быть введен до введения, одновременно с введением или после введения дополнительного агента. Обычно антагонист TNFR1 (например, лиганд, dAb мономер) и дополнительный агент вводят способом, обеспечивающим перекрывание терапевтического эффекта. Композиции, содержащие настоящие антагонисты (например, лиганды) или их коктейль, могут быть введены для профилактического и/или терапевтического лечения. В некоторых терапевтических применениях адекватное количество, необходимое для достижения, по меньшей мере, частичного ингибирования, подавления, изменения, гибели или некоторого другого оцениваемого параметра, популяции выбранных клеток, определяют как терапевтически эффективная доза. Например, что касается лечения воспаления легких и/или респираторного заболевания, это есть количество, ингибирующее выделение мокроты, количество, ингибирующее ассоциированное с бронхиальной биопсией воспаление, ингибирующее одышку количество, количество, увеличивающее односекундный объем воздуха при форсированном выдохе (FEV(1, количество, повышающее улучшение в состоянии здоровья, как количественно определено в соответствии с подходящей анкетой, как, например, St. Georges Respiratory Questionnaire(например, оценка улучшения равна 4 баллам). Количества, необходимые для достижения этих эффектов, будут зависеть от тяжести заболевания и общего состояния собственной иммунной системы пациента, но обычно изменяются в диапазоне от 0,005 до 10,0 мг агента, антагониста (например, лиганда, dAb мономера) или связывающегося с ним белка на килограмм массы тела, причем в более обычном случае используют дозы от 0,05 до 2,0 мг/кг/дозу. В конкретных воплощениях введенное количество будет составлять от приблизительно 5 мкг/кг/дозу до приблизительно 3 мг/кг/дозу или предпочтительно от приблизительно 50 до приблизительно 500 мкг/кг/дозу. В случае профилактических применений композиции, содержащие настоящие лиганды или их коктейли, также можно вводить в сходных или немного пониженных дозировках для предупреждения, ингибирования или задержки начала заболевания (например, для поддержания ремиссии или бессимптомного состояния либо для предупреждения острой фазы). Практикующий врач будет способен определить приемлемый интервал дозирования для лечения, подавления или предупреждения заболевания. Если антагонист TNFR1 (например, лиганд) вводят для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких или респираторного заболевания, его можно вводить до четырех раз в сутки включительно, дважды в неделю, один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз в месяц или один раз каждые два месяца в дозе, например, от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 80 мг/кг, от приблизительно 100 мкг/кг до приблизительно 80 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 80 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 70 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 60 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 50 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг,приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг. В конкретных воплощениях антагонист TNFR1 (например, лиганд) вводят для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких или респираторного заболевания каждые сутки, каждые двое суток, один раз в неделю, один раз каждые две недели или один раз в месяц в дозе от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг (например, приблизительно 10 мкг/кг, приблизительно 100 мкг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг). В конкретных воплощениях вводят от приблизительно 5 мкг/кг до приблизительно 3 мг/кг или предпочтительно от приблизительно 50 до приблизительно 500 мкг/кг. Антагонист TNFR1 (например, лиганд) также можно вводить для лечения, подавления или предупреждения воспаления легких или респираторного заболевания в суточной дозе или стандартной дозе,равной приблизительно 10 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 2 мг или приблизительно 1 мг. Лечение или терапия, проведенные с использованием композиций, изложенных в данном описании,считаются эффективными, если ослабляется один или более чем один симптом (например, по меньшей мере на 10% или по меньшей мере на один балл по клинической оценочной шкале) из числа таковых симптомов, присутствующих до лечения, или из числа таковых симптомов у индивидуума (человека или модельного животного), не подвергнутого лечению такой композицией, или по отношению к другому подходящему контролю. Симптомы будут варьировать в зависимости от целевого заболевания или расстройства, но могут быть оценены практикующим врачом или специалистом обычной квалификации. Такие симптомы могут быть оценены путем, например, мониторинга одного или более чем одного из физических индикаторов заболевания или расстройства (например, клеточного инфильтрата в ткани лег- 21014106 кого, образования мокроты, клеточного инфильтрата в мокроте, одышки, переносимости физической нагрузки), спирометрии (например, форсированной жизненной емкости легких (FVC), односекундного объема воздуха при форсированном выдохе (FEV(1), FEV(1)/FVC), по степени или тяжести обострения заболевания или по приемлемой клинической оценочной шкале, например, St. George's Respiratory Questionnaire. Подходящие клинические оценочные шкалы включают, например, шкалу тяжести в нарушении дыхания по FEV(1) (Clinical Guideline 12, Chronic Obstructive Pulmonary Disease, Management of ChronicObstructive Pulmonary Disease in Adults in Primary and Secondary Care, National Institute for Clinical Excellence, London (2004, максимальную скорость выдоха (PEF) (British Guideline on the Management ofAsthma, British Thoracic Society, Scottish Intercollegiate Guidelines Network, Revised Edition (2004, стадию ХОБЛ согласно стандарту Американского торакального общества (American Thoracic Society (ATS(Am. J. Respir. Crit. Care Med., 152: S77-S120 (1995), класс астматической недостаточности согласно стандарту ATS (Am. Rev. Respir. Dis., 147: 1056-1061 (1993) или другую приемлемую клиническую оценочную шкалу, известную в данной области. Непрерывное (например, в течение одних суток или более,предпочтительно, более продолжительное время) ослабление симптомов заболевания или расстройства по меньшей мере на 10% или на один или более баллов по приведенной клинической шкале является показателем эффективного лечения. Аналогично, профилактика, осуществленная с использованием композиции, как изложено в данном описании, является эффективной, если начало или тяжесть одного или более чем одного симптома задерживается, ослабляется или устраняется по сравнению с такими симптомами у аналогичного индивидуума (человека или животной модели), не подвергнутого лечению данной композицией. Композиция, содержащая антагонист (например, лиганд) по настоящему изобретению, может быть применена в профилактических и терапевтических целях для способствования изменению, инактивации,уничтожению или удалению выбранной популяции клеток-мишеней у млекопитающего. Например, такие композиции могут быть использованы для понижения уровней воспалительных клеток в легком и/или ингибирования клеточной инфильтрации легкого. Композиция, содержащая антагонист (например, лиганд) по настоящему изобретению, также может быть применена для уменьшения уровней медиаторов воспаления, таких как цитокины, хемокины, молекулы клеточной адгезии, которые индуцируются воспалительными стимулами в легком. Например, dAb мономерные антагонисты TNFR1 могут ингибировать (1) индуцированные воспалительным стимулом(например, TNF-индуцированные) увеличения уровней медиаторов с ранним действием, таких как хемоаттрактанты нейтрофилов KC и MIP-1, и/или (2) ингибировать индуцированные воспалительным стимулом (например, TNF-индуцированные) увеличения уровней медиаторов с поздним действием, таких как хемокин МСР-1 и молекула адгезии Е-селектин. Могут быть задействованы другие медиаторы, такие как LTB4 (лейкотриен В 4), GRO- (регулируемый ростом онкоген-), IP-10 (интерферониндуцибельный белок 10), GM-CSF, активные формы кислорода (ROS), NO и тому подобное. Лиганды по данному изобретению могут быть лиофильно высушены для хранения и воссоздания в подходящем носителе перед использованием. Показано, что эта методика эффективна для традиционных иммуноглобулинов и что можно использовать известные в данной области методики лиофилизации и воссоздания. Специалистам в данной области техники очевидно, что лиофилизация и воссоздание могут приводить к потере антителами активности в различной степени (например, что касается традиционных иммуноглобулинов, то антитела IgM имеют тенденцию к большей потере активности нежели антителаIgG) и что применяемые уровни возможно следует увеличить с целью компенсации. Лиганды по данному изобретению можно лиофилизовать для образования сухого порошка для ингаляции и вводить в этой форме. Путь введения фармацевтических композиций по изобретению может быть любым из обычно известных специалистам обычной квалификации в данной области техники. Введение может быть осуществлено любым приемлемым способом, в том числе парентерально, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно, трансдермально, через легочный путь или посредством прямой инфузии с использованием катетера. Дозировка и частота введения будут зависеть от возраста, пола и состояния пациента, совместного введения с другими лекарственными средствами, противопоказаний и других параметров, которые должны быть приняты в рассмотрение практикующим врачом. Введение может быть локальным (например, локальная доставка в легкое путем легочного введения, например, интраназального введения) или системным, по показаниям. В конкретных воплощениях антагонист TNFR1 вводят посредством легочной доставки, например путем ингаляции (например, внутрибронхиальной, интраназальной или пероральной ингаляции, интраназальных капель) или путем системной доставки (например, парентеральной, внутривенной, внутримышечной, внутрибрюшинной, подкожной). В предпочтительных воплощениях антагонист TNFR1 (например, лиганд, dAb мономер) вводят субъекту посредством легочного введения, например ингаляцией или интраназальным введением (например, внутрибронхиальной, интраназальной или пероральной ингаляцией, с использованием интраназальных капель). В случае ингаляции антагонист TNFR1 (например,лиганд, dAb мономер) может быть введен с применением небулайзера, ингалятора, атомайзера, устрой- 22014106 ства для образования аэрозоля, разбрызгивателя, сухого порошкового ингалятора, дозирующего ингалятора, дозирующего распылителя, дозирующего разбрызгивателя, дозирующего атомайзера или другого подходящего устройства доставки. Данное изобретение относится к способу лечения, подавления или предупреждения воспаления легких или респираторного заболевания, включающему введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества антагониста TNFR1, где указанное эффективное количество не превышает приблизительно 10 мг/кг/сутки и где предпочтительно уровень воспалительных клеток в легком снижен относительно уровней до лечения с р меньше или равной 0,05, или рекрутмент воспалительных клеток в легком ингибируется относительно уровней до лечения с р меньше или равной 0,05. Уровень воспалительных клеток в легком или рекрутмент воспалительных клеток в легком может быть снижен или ингибирован относительно уровней до лечения по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% или по меньшей мере приблизительно на 95%. Статистический анализ предпочтительно проводят с использованием способов, изложенных в данном описании в примерах. Уровень воспалительных клеток в легком или рекрутмент воспалительных клеток в легком может быть снижен или ингибирован относительно уровней до лечения с р меньше 0,001 в некоторых воплощениях. Уровни клеток (например, воспалительных клеток) в легком можно оценить с использованием любого подходящего способа, как например, подсчеты общего числа клеток или дифференциальный подсчет клеток (например, подсчет макрофагальных клеток, подсчет нейтрофильных клеток, подсчет эозинофильных клеток, подсчет лимфоцитарных клеток, подсчет эпителиальных клеток) в BAL, мокроте или биоптате (например, бронхиальном биоптате, биоптате легкого). Кроме того, изобретение относится к способу лечения респираторного заболевания, включающему(1) выбор антагониста рецептора 1 фактора некроза опухоли (TNFR1), обладающего эффективностью в подходящей животной модели респираторного заболевания при введении в количестве, не превышающем приблизительно 10 мг/кг, один раз в сутки, при этом эффективность в указанной животной модели имеет место тогда, когда клеточная инфильтрация легких, оцениваемая согласно подсчету общего числа клеток в бронхоальвеолярном лаваже, ингибирована относительно не подвергнутого лечению контроля с р меньше или равной 0,05; и (2) введение (например, локально в легочную ткань) эффективного количества указанного антагониста TNFR1 нуждающемуся в этом субъекту. В некоторых воплощениях способы, изложенные в данном описании, применяют для лечения, подавления или предупреждения хронической обструктивной болезни легких (например, хронического бронхита, хронического обструктивного бронхита, эмфиземы), астмы (например, стероид-устойчивой астмы), пневмонии (например, бактериальной пневмонии, такой как стафилококковая пневмония) или воспаления легких. Кроме того, изобретение относится к применению антагониста TNFR1, как описано в данном описании, для изготовления лекарственного средства или композиции для лечения воспаления легких или респираторного заболевания, раскрытых в данном описании. Лекарственное средство может быть для системного введения и/или локального введения в легочную ткань. Антагонисты TNFR1.TNFR1 представляет собой трансмембранный рецептор, содержащий внеклеточный участок, который связывается с лигандом, и внутриклеточный домен, лишенный собственной активности по передаче сигнала, но который может образовывать ассоциаты с передающими сигнал молекулами. КомплексTNFR1 со связанным TNF содержит три цепи TNFR1 и три цепи TNF (Banner et al., Cell, 73(3): 431-445(1993. Лиганд TNF присутствует в виде тримера, который связывается с тремя цепями TNFR1. (Id.) Три цепи TNFR1 кластеризуются близко друг от друга в таком рецептор-лигандном комплексе, и эта кластеризация является предпосылкой для TNFR1-опосредованной передачи сигнала. Фактически, мультивалентные агенты, связывающиеся с TNFR1, такие как анти-TNFR1 антитела, могут индуцировать кластеризацию TNFR1 и передачу сигнала в отсутствие TNF и обычно используются в качестве агонистовTNFR1 (см., например, Belka et al., EMBO, 14(6): 1156-1165 (1995); Mandik-Nayak et al., J. Immunol, 167: 1920-1928 (2001. Соответственно, мультивалентные агенты, связывающиеся с TNFR1, обычно не являются эффективными антагонистами TNFR1, даже если они блокируют связывание TNF с TNFR1. Внеклеточный участок TNFR1 содержит аминоконцевой сегмент из тринадцати аминокислот (аминокислоты 1-13 в SEQ ID NO:213 (человек); аминокислоты 1-13 в SEQ ID NO:215 (мышь, домен 1NO:215 (мышь, за которым следует проксимальный к мембране участок (аминокислоты 168-182 в SEQID NO:213 (человек); аминокислоты 168-183 в SEQ ID NO:215 (мышь (см. Banner et al., Cell 73(3): 431445 (1993) и Loetscher et al., Cell 61(2): 351-359 (1990. Домены 2 и 3 контактируют со связанным лиган- 23014106 дом (TNF, TNF) (Banner et al., Cell, 73(3): 431-445 (1993. Кроме того, внеклеточный участок TNFR1 содержит участок, обозначаемый как предваряющий связывание лиганда домен сборки или PLAD-доменNO:213; аминокислоты 168-183 в SEQ ID NO:215) с получением растворимой формы TNFR1. Растворимый TNFR1 сохраняет способность связываться с TNF и тем самым функционировать в качестве эндогенного ингибитора активности TNF. Антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении (например, лиганды, приведенные в данном описании), обладают специфичностью связывания с рецептором 1 фактора некроза опухоли (TNFR1; р 55; CD120a). Предпочтительно, когда антагонисты TNFR1 не обладают специфичностью связывания с рецептором 2 фактора некроза опухоли (TNFR2) или, по существу, не антагонизируютTNFR2. Антагонист TNFR1, по существу, не антагонизирует TNFR2, если антагонист (1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1 мкМ, 10 мкМ или 100 мкМ) вызывает не более чем приблизительно 5% ингибирования TNFR2 опосредованной активности, индуцированной TNF (100 пг/мл), в стандартном клеточном анализе. Антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, являются эффективными терапевтическими средствами (являются эффективными, обладают терапевтической эффективностью) для лечения респираторного заболевания (например, острого респираторного заболевания, хронического респираторного заболевания, острого воспалительного респираторного заболевания, хронического воспалительного респираторного заболевания). Например, антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, эффективны в моделях респираторных заболеваний, если введено эффективное количество. Обычно эффективное количество составляет от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 1 до приблизительно 10 мг/кг (например, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг). В данной области техники известны несколько подходящих животных моделей респираторного заболевания, и они знакомы специалистам в данной области техники в качестве прогнозирующих терапевтическую эффективность у людей. Например, подходящие животные модели респираторного заболевания включают модели хронической обструктивной болезни легких (см. Groneberg, D.A.et al., Respiratory Research 5: 18 (2004, модели астмы (см. Coffman R.L. et al., J. Exp. Med. 201(12): 18751879 (2001); Van Scott, M.R. et al., J. App. Physiol. 96: 1433-1444 (2004 и модели пневмофиброза (например, Venkatesan, N. et al., Lung 287: 1342-1347 (2004. Предпочтительно, когда антагонист TNFR1 (например, лиганд или dAb мономер) эффективен в мышиной индуцированной табачным дымом модели хронической обструктивной болезни легких (например, подострой модели, приведенной в данном описании) или подходящей модели астмы или хронической обструктивной болезни легких с использованием приматов (см., например, Coffman R.L. et al., J. Exp. Med. 201(12): 1875-1879 (2001); Van Scott, M.R. et al.,J. App. Physiol. 96: 1433-1444 (2004. Более предпочтительно, когда антагонист TNFR1 (например, лиганд или dAb мономер) эффективен в мышиной индуцированной табачным дымом модели хронической обструктивной болезни легких (например, подострой модели, приведенной в данном описании) (см. также Wright and Churg, Chest, 122: 301-306 (2002. Например, введение эффективного количества лиганда может облегчить, замедлить или предотвратить начало развития симптомов ХОБЛ в данной модели по сравнению с подходящим контролем. Предшествующий уровень техники не предполагает применения антагонистов TNFR1 (например, лигандов или dAb мономеров) в этих моделях или того, что они могли бы быть эффективными. Подходящие антагонисты TNFR1 могут быть моновалентными или мультивалентными, в некоторых воплощениях антагонист является моновалентным и содержит один сайт связывания, который взаимодействует с TNFR1. Моновалентные антагонисты связываются с одним TNFR1 и не индуцируют перекрестное связывание или кластеризацию TNFR1 на поверхности клеток, которая может приводить к активации этого рецептора и передаче сигнала. В конкретных воплощениях моновалентный антагонистTNFR1 конкурирует с TAR2m-21-23 за связывание с мышиным TNFR1 или конкурирует с TAR2h-205 за связывание с человеческим TNFR1. Мультивалентные антагонисты TNFR1 могут содержать две или более копий отдельного сайта связывания с TNFR1 или содержать два или более различных сайта связывания, которые связываются сTNFR1. Например, антагонист TNFR1 может представлять собой димер, тример или мультимер, содержащий две или более копий отдельного dAb, которое связывается с TNFR1, или два или более различныхdAb, которые связываются с TNFR1. Предпочтительно, мультивалентный антагонист TNFR1 не агонизирует, по существу, TNFR1 (не действует как агонист TNFR1) в стандартном клеточном анализе (то есть когда представлен в концентрации 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1 мкМ, 10 мкМ, 100 мкМ, 1000 мкМ или 5000 мкМ, вызывает не более чем приблизительно 5% TNFR1-опосредованной активности, индуцированнойTNF (100 пг/мл), в этом анализе). Подходящие мультивалентные антагонисты TNFR1 могут содержать два или более сайта связывания с желаемым эпитопом или доменом TNFR1. Например, мультивалентный антагонист TNFR1 может содержать два или более сайта связывания, которые связываются с одним и тем же эпитопом TNFR1, или два или более сайта связывания, которые связываются с различными эпитопами или доменами TNFR1. В одном примере мультивалентный антагонист TNFR1 содержит первый сайт связывания, который связывается с первым эпитопом TNFR1, и второй сайт связывания, который связывается со вторым другим эпитопом TNFR1. Предпочтительно такие мультивалентные антагонисты не агонизируют TNFR1, когда представлены в концентрации приблизительно 1 нМ, или приблизительно 10 нМ, или приблизительно 100 нМ, или приблизительно 1 мкМ, или приблизительно 10 мкМ, в стандартном анализе цитотоксичности с использованием L929 или в стандартном анализе с использованием IL-8 HeLa, которые приведены в данном описании. Некоторые антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, связываются с TNFR1 и ингибируют связывание TNF с TNFR1. В конкретных воплощениях такой антагонист TNFR1 конкурирует с TAR2h-10-27, TAR2h-131-8, TAR2h-15-8, TAR2h-35-4, TAR2h-154-7, TAR2h-154-10 или TAR2h185-25 за связывание с TNFR1. Некоторые антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, не ингибируют связывание TNF с TNFR1, но ингибируют передачу сигнала, опосредованную TNFR1. Например, антагонистTNFR1 может ингибировать TNF-индуцированную кластеризацию TNFR1, которая предшествует передаче сигнала через TNFR1. Такие антагонисты дают несколько преимуществ. Например, в присутствии такого антагониста TNF может связываться с TNFR1, экспрессированным на поверхности клеток, и быть удален из клеточного окружения, однако TNFR1-опосредованная передача сигнала активирована не будет. Таким образом, индуцированное TNFR1-опосредованной передачей сигнала образование дополнительных TNF и других медиаторов воспаления будет ингибироваться. Аналогично, антагонистыTNFR1, которые связываются с TNFR1 и ингибируют передачу сигнала, опосредованную TNFR1, но не ингибируют связывание TNF с TNFR1, не будут ингибировать TNF-связывание и ингибирующую активность эндогенно продуцируемого растворимого TNFR1. Соответственно, введение такого антагониста млекопитающему, нуждающемуся в этом, может дополнять эндогенные регуляторные пути, которые ингибируют активность TNF и активность TNFR1 in vivo. В конкретном воплощении антагонист TNFR1, подходящий для применения в изобретении (например, dAb мономер или лиганд), связывается с TNFR1 и ингибирует передачу сигнала, опосредованнуюTNFR1, после связывания с TNF. Такой антагонист может ингибировать передачу сигнала черезTNFR1, но не ингибировать связывание TNF с TNFR1 и/или шеддинг TNFR1 с целью получения растворимого TNFR1. Соответственно, введение такого антагониста млекопитающему, нуждающемуся в этом, может дополнять эндогенные регуляторные пути, которые ингибируют активность TNF и активность TNFR1 in vivo. Некоторые антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении (например, химическое соединение, новая химическая структура, dAb мономер, лиганд), связываются с TNFR1 и конкурируют с TAR2m-21-23 за связывание с мышиным TNFR1 или конкурирует с TAR2h-205 за связывание с человеческим TNFR1. Другие антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении (например, химическое соединение, новая химическая структура, dAb мономер, лиганд), связываются с TNFR1 и конкурируют с TAR2h-131-8, TAR2h-15-8, TAR2h-35-4, TAR2h-154-7, TAR2h-154-10, TAR2h-185-25 или TAR2h-27-10 за связывание с TNFR1 (например, человеческим и/или мышиным TNFR1). Некоторые антагонисты (например, лиганды, dAb мономеры) являются перекрестно реактивными и связываются с человеческим TNFR1 и TNFR1 из другого вида, например животного, пригодного для применения в медицинском изучении. Например, dAb мономер, который связывается с человеческимTNFR1 и мышиным TNFR1. Такие антагонисты (например, лиганды, dAb мономеры) дают преимущество для осуществления доклинических и клинических исследований с использованием одного и того же антагониста (например, dAb мономера) и устраняют необходимость проведения доклинических исследований с подходящим заменителем-антагонистом. Предпочтительные примеры перекрестно реактивных антагонистов связываются с человеческим TNFR1 и TNFR1 от грызунов, таких как мышь, крыса или морская свинка, от кролика, собаки, овцы, свиньи или примата-нечеловека, такого как макак-крабоед или макак-резус. Как правило, перекрестно реактивный антагонист по изобретению связывается с человеческимTNFR1 и TNFR1 из другого вида с похожими аффинностями (Kd). Предпочтительно перекрестно реактивные антагонисты, такие как dAb мономер, связываются с человеческим TNFR1 и TNFR1 из другого вида с аффинностями, отличающимися не более чем приблизительно с коэффициентом 100, коэффициентом 10 или коэффициентом 5. Например, перекрестно реактивный dAb мономер может связываться с человеческим TNFR1 с аффинностью 1 нМ и также связывается с TNFR1 мыши, макак-крабоеда или макак-резуса с аффинностью от приблизительно 10 пМ до приблизительно 100 нМ, от приблизительно 100 пМ до приблизительно 10 нМ или от приблизительно 200 пМ до приблизительно 5 нМ.TNFR1 и TNFR1 из другого вида (например, одним из нечеловеческих видов, упомянутых в предыдущих двух абзацах) с константами ассоциации (Kon), отличающимися не более чем приблизительно в 100, 10 или 5 раз, и/или с константами диссоциации (Koff), отличающимися не более чем приблизительно в 100,10 или 5 раз. Например, антагонисты могут представлять собой dAb мономер, связывающийся как с человеческим TNFR1, так и с TNFR1 из другого вида с Kon от приблизительно 104 М/с до приблизительно 105 М/с и/или Koff от приблизительно 10-3 с-1 до приблизительно 10-5 с-1. Антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, также включают антитело со специфичностью связывания с TNFR1 или его антигенсвязывающий фрагмент, такой как Fab-фрагмент,Fab'-фрагмент, F(ab')2-фрагмент или Fv-фрагмент (например, scFV). В некоторых воплощениях антагонист является моновалентным, как, например, dAb, или моновалентным антигенсвязывающим фрагментом антитела, таким как Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент или Fv-фрагмент. Предпочтительно антагонист TNFR1 представляет собой лиганд (например, dAb мономер), приведенный в данном описании. Как изложено в данном описании, предпочтительные антагонисты TNFR1,подходящие для применения в изобретении, содержат dAb, которое связывается с TNFR1 и ингибирует функционирование TNFR1. Однако вместо того, чтобы содержать dAb, антагонист TNFR1 (например,лиганд), подходящий для применения в изобретении, может содержать домен, который содержит CDR отdAb, связывающегося с TNFR1 (например, CDR, посаженные на подходящий белковый каркас или остов, например аффитело, каркас SpA, домен рецепторов LDL класса А или домен EGF), или белковый домен, содержащий сайт связывания с TNFR1, например, когда домен выбран из аффитела, домена SpA,домена рецепторов LDL класса А, домена EGF, авимера. В целом, описание следует истолковывать соответственно для предоставления описания антагонистов, лигандов и способов, использующих такие домены вместо dAb. Антагонисты TNFR1, в том числе лиганды согласно любому аспекту настоящего изобретения, а также dAb мономеры, полезные в конструировании таких лигандов, предпочтительно связываются со своей(ими) мишенью(ями) с Kd от 300 нМ до 5 пМ (то есть от 310-7 до 510-12 М), предпочтительно от 50 нМ до 20 пМ, или от 5 нМ до 200 пМ, или от 1 нМ до 100 пМ, 110-7 М или меньше, 110-8 М или меньше, 110-9 М или меньше, 110-10 М или меньше, 110-11 М или меньше; и/или с константой скорости Koff от 510-1 с-1 до 110-7 с-1, предпочтительно от 110-2 с-1 до 110-6 с-1, или от 510-3 с-1 до 110-5 с-1,или 510-1 с-1 или меньше, или 110-2 с-1 или меньше, или 110-3 с-1 или меньше, или 110-4 с-1 или меньше, или 110-5 с-1 или меньше, или 110-6 с-1 или меньше, как определено посредством поверхностного плазмонного резонанса. Константу скорости Kd определяют как Koff/Kon. Дополнительно или альтернативно, лиганд (например, dAb мономер) связывается с TNFR1 с умеренной или быстрой Kon и медленнойKoff. Предпочтительно Kon составляет от приблизительно 104 М/с до приблизительно 105 М/с и/или Koff составляет от приблизительно 10-3 с-1 до приблизительно 10-5 с-1. Лиганды и dAb мономеры, связывающиеся с TNFR1. Предпочтительные антагонисты TNFR1, подходящие для применения в изобретении, представляют собой лиганды или dAb мономеры, которые эффективны в моделях респираторных заболеваний, если введено эффективное количество. Обычно эффективное количество составляет от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг (например, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно б мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг). В конкретных воплощениях вводят от приблизительно 5 мкг/кг до приблизительно 3 мг/кг или предпочтительно от приблизительно 50 мкг/кг до приблизительно 500 мкг/кг. В данной области техники известны несколько подходящих животных моделей респираторного заболевания, и они знакомы специалистам в данной области техники в качестве прогнозирующих терапевтическую эффективность у людей. Например, подходящие животные модели респираторного заболевания включают модели хронической обструктивной болезни легких (см. Groneberg, D.A. et al., RespiratoryResearch 5: 18 (2004 и модели астмы (см. Coffman et al., J. Exp. Med. 201(12): 1875-1879 (2001. Предпочтительно, когда лиганд или dAb мономер эффективен в мышиной подострой модели индуцированной табачным дымом хронической обструктивной болезни легких, приведенной в данном описании (см. также Wright and Churg, Chest, 122: 301-306 (2002. Например, введение эффективного количества лиганда может облегчить, замедлить или предотвратить начало развития симптомов ХОБЛ в данной модели по сравнению с подходящим контролем. Предшествующий уровень техники не предполагает применения антагонистов TNFR1 (например, лигандов или dAb мономеров) в этих моделях или того, что они могли бы быть эффективными. Как правило, подходящие лиганды (например, dAb мономер) содержат анти-TNFR1 dAb мономер(например, лиганд с двойной специфичностью, содержащий такое dAb), связывающийся с TNFR1 с Kd от 300 нМ до 5 пМ (то есть от 310-7 до 510-12 М), предпочтительно от 50 нМ до 20 пМ, более предпочтительно от 5 нМ до 200 пМ и наиболее предпочтительно от 1 нМ до 100 пМ, например 110-7 М или меньше, предпочтительно 110-8 М или меньше, более предпочтительно 110-9 М или меньше, преиму- 26014106 щественно 110-10 М или меньше и наиболее предпочтительно 110-11 М или меньше; и/или с константой скорости Koff от 510-1 с-1 до 110-7 с-1, предпочтительно от 110-2 с-1 до 110-6 с-1, более предпочтительно от 510-3 с-1 до 110-5 с-1, например 510-1 с-1 или меньше, предпочтительно 110-2 с-1 или меньше, преимущественно 110-3 с-1 или меньше, более предпочтительно 110-4 с-1 или меньше, еще более предпочтительно 110-5 с-1 или меньше и наиболее предпочтительно 110-6 с-1 или меньше, как определено посредством поверхностного плазмонного резонанса (Kd равна Koff/Kon). Некоторые лиганды или dAb мономеры, подходящие для применения в изобретении, связываются специфически с человеческим TNFR1 с Kd от 50 нМ до 20 пМ и константой скорости Koff от 510-1 с-1 до 110-7 с-1, как определено поверхностным плазмонным резонансом. Некоторые лиганды или dAb мономеры ингибируют связывание TNF с TNFR1. Например, некоторые лиганды или dAb мономеры ингибируют связывание TNF с TNFR1 в концентрации, вызывающей 50 % ингибирования, (IC50), составляющей от 500 нМ до 50 пМ, предпочтительно от 100 нМ до 50 пМ, более предпочтительно от 10 нМ до 100 пМ, преимущественно от 1 нМ до 100 пМ; например 50 нМ или меньше, предпочтительно 5 нМ или меньше, более предпочтительно 500 пМ или меньше, преимущественно 200 пМ или меньше и наиболее предпочтительно 100 пМ или меньше. Предпочтительно, когдаTNFR1 является человеческим TNFR1. Другие лиганды и dAb мономеры не ингибируют связывание TNF с TNFR1, но тем не менее являются антагонистами, поскольку они ингибируют передачу сигнала, опосредованную TNFR1. Например, лиганд или dAb мономер может ингибировать TNF-индуцированную кластеризацию TNFR1, которая предшествует передаче сигнала через TNFR1. Например, в некоторых воплощениях лиганд или dAb мономер может связываться с TNFR1 и ингибировать TNFR1-опосредованную передачу сигнала, но, по существу, не ингибирует связывание TNF с TNFR1. В некоторых воплощениях лиганд или dAb мономер ингибирует TNF-индуцированное перекрестное связывание или кластеризацию TNFR1 на поверхности клетки. Такие лиганды или dAb (например, TAR2m-21-23, приведенные в данном описании) предпочтительны, поскольку они могут антагонизировать TNFR1 клеточной поверхности, но, по существу, не уменьшают ингибиторной активности эндогенного растворимого TNFR1. Например, лиганд или dAb может связываться с TNFR1, но ингибировать связывание TNF с TNFR1 в анализе по связыванию рецептора не более чем приблизительно на 10%, не более чем приблизительно на 5%, не более чем приблизительно на 4%, не более чем приблизительно на 3%, не более чем приблизительно на 2% или не более чем приблизительно на 1%. Кроме того, в этих воплощениях лиганд или dAb ингибирует TNFиндуцированное перекрестное связывание TNFR1 и/или TNFR1-опосредованную передачу сигнала в стандартном клеточном анализе по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или по меньшей мере приблизительно на 99%. Такие лиганды или dAb мономеры дают некоторые преимущества, которые рассмотрены в данном описании, по сравнению с антагонистами, имеющими эти же свойства. Соответственно, введение такого лиганда илиdAb мономера млекопитающему, нуждающемуся в этом, может дополнять эндогенные регуляторные пути, которые ингибируют активность TNF и активность TNFR1 in vivo. Лиганд может быть моновалентным (например, dAb мономер) или мультивалентным (например, с двойной специфичностью, с множественной специфичностью), как изложено в данном описании. В конкретных воплощениях лиганд представляет собой dAb мономер, связывающийся с TNFR1. Мономеры доменовых антител, связывающиеся с TNFR1, обладают небольшой зоной охвата (footprint) относительно других форматов связывания, таких как моноклональное антитело, например. Таким образом,такой dAb мономер может избирательно блокировать функционирование TNFR1, но не оказывать влияния на другие функции TNFR1. Например, dAb мономер, связывающийся с TNFR1, может антагонизировать TNFR1 (например, ингибировать TNFR1-опосредованную передачу сигнала), но не ингибировать связывание TNF с TNFR1 или шеддинг TNFR1. В более конкретных воплощениях лиганд представляет собой dAb мономер, связывающийся сTAR2h-205 за связывание с человеческим TNFR1. В других воплощениях лиганд является мультивалентным и содержит два или более dAb мономеров, связывающихся с TNFR1. Мультивалентные лиганды могут содержать две или более копий конкретного dAb, связывающегося с TNFR1, или содержать два или более dAb, связывающихся с TNFR1. Например, лиганд может быть димером, тримером или мультимером, содержащим две или более копий конкретного dAb, связывающегося с TNFR1, или два или более различных dAb, связывающихся сTNFR1. В некоторых примерах лиганд является гомодимером или гомотримером, содержащим две или три копии конкретного dAb, связывающегося с TNFR1 соответственно. Предпочтительно, когда мультивалентный лиганд, по существу, не агонизирует TNFR1 (действует как агонист TNFR1) в стандартном клеточном анализе (то есть когда присутствует в концентрации 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1 мкМ, 10 мкМ,- 27014106 100 мкМ, 1000 мкМ или 5000 мкМ, приводит не более чем приблизительно к 5% TNFR1-опосредованной активности, индуцированной посредством TNF (100 пг/мл) в этом анализе). В некоторых воплощениях мультивалентный лиганд содержит два или более dAb, связывающихся с желаемыми эпитопами или доменами TNFR1, или две или более копий dAb, связывающегося с желаемым эпитопом TNFR1. Лиганды этого типа могут связываться с TNFR1 с высокой авидностью и быть более селективными в отношении связывания с клетками, сверхэкспрессирующими TNFR1 или экспрессирующими TNFR1 на своей поверхности с высокой плотностью по сравнению с другими форматами лигандов, такими как dAb мономеры. В других конкретных воплощениях мультивалентный лиганд содержит два или более dAb или две или более копий конкретного dAb, связывающегося с TNFR1. Мультивалентные лиганды этого типа могут связываться с TNFR1-мономерами с низкой аффинностью, но связываются с рецепторными мультимерами (например, тримеры см. в рецептор-лигандном комплексе) с высокой авидностью. Таким образом, лиганды этого формата могут быть введены для того, чтобы эффективно целенаправленно воздействовать на рецепторы, которые кластеризованы или ассоциированы другом с другом и/или лигандом (например, TNF), что требуется для TNFR1-опосредованной передачи сигнала. Предпочтительно, когда лиганд или dAb мономер нейтрализует (ингибирует активность) TNFR1 в стандартном анализе (например, стандартных изложенных в данном описании анализах с использованием L929 или IL-8 HeLa) в нейтрализующей на 50% дозе (ND50), составляющей от 500 нМ до 50 пМ, предпочтительно от 100 нМ до 50 пМ, более предпочтительно от 10 нМ до 100 пМ, преимущественно от 1 нМ до 100 пМ; например 50 нМ или меньше, предпочтительно 5 нМ или меньше, более предпочтительно 500 пМ или меньше, преимущественно 200 пМ или меньше и наиболее предпочтительно 100 пМ или меньше. В других воплощениях лиганд или dAb мономер связывается с TNFR1 и антагонизирует активностьTNFR1 в стандартном клеточном анализе (например, стандартных изложенных в данном описании анализах с использованием L929 или IL-8 HeLa) с ND50 не более 100 нМ, а в концентрации не более 10 мкМdAb агонизирует активность TNFR1 не более чем на 5% в этом анализе. В других воплощениях лиганд или dAb мономер специфически связывается с TNFR1 с Kd, приведенной в данном описании, и ингибирует летальность в стандартной мышиной моделиLPS(липополисахарид)/D-галактозамин-индуцированного септического шока (то есть предотвращает летальность или снижает летальность по меньшей мере приблизительно на 10% по сравнению с подходящим контролем). Предпочтительно, когда dAb мономер ингибирует летальность по меньшей мере приблизительно на 25%, или по меньшей мере приблизительно на 50%, по сравнению с подходящим контролем в стандартной мышиной модели LPS/D-галактозамин-индуцированного септического шока при введении в количестве приблизительно 5 мг/кг или более предпочтительно приблизительно 1 мг/кг. В конкретных воплощениях лиганд или dAb мономер, по существу, не агонизирует TNFR1 (действует как агонист TNFR1) в стандартном клеточном анализе, таком как изложенные в данном описании стандартные анализы с использованием L929 или IL-8 HeLa (то есть когда присутствует в концентрации 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 1 мкМ, 10 мкМ, 100 мкМ, 1000 мкМ или 5000 мкМ, приводит не более чем приблизительно к 5% TNFR1-опосредованной активности, индуцированной посредством TNF (100 пг/мл) в этом анализе). В других воплощениях лиганд содержит мономер доменного антитела (dAb), специфически связывающийся с рецептором 1 фактора некроза опухоли (TNFR1, р 55, CD120a) с Kd от 300 нМ до 5 пМ, и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 91%, по меньшей мере приблизительно на 92%, по меньшей мере приблизительно на 93%, по меньшей мере приблизительно на 94%, по меньшей мере приблизительно на 95%, по меньшей мере приблизительно на 96%, по меньшей мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или по меньшей мере приблизительно на 99% гомологичную аминокислотной последовательностиNO:191), TAR2h-5d7 (SEQ ID NO:192), TAR2h-5d8 (SEQ ID NO:193), TAR2h-5d9 (SEQ ID NO:194),TAR2h-5d10 (SEQ ID NO:195), TAR2h-5d11 (SEQ ID NO:196), TAR2h-5d12 (SEQ ID NO:197) и TAR2h5d13 (SEQ ID NO:198). В других воплощениях лиганд содержит мономер доменного антитела (dAb), специфически связывающийся с рецептором 1 фактора некроза опухоли (TNFR1, р 55, CD120a) с Kd от 300 нМ до 5 пМ, и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 91%, по меньшей мере приблизительно на 92%, по меньшей мере приблизительно на 93%, по меньшей мере приблизительно на 94%, по меньшей мере приблизительно на 95%, по меньшей мере приблизительно на 96%, по меньшей мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или по меньшей мере приблизительно на 99% гомологичную аминокислотной последовательностиdAb, имеющего любую аминокислотную последовательность из последовательностей от SEQ ID NO:216 до SEQ ID NO:433. В других воплощениях лиганд содержит мономер доменного антитела (dAb), специфически связывающийся с рецептором 1 фактора некроза опухоли (TNFR1, р 55, CD120a) с Kd от 300 нМ до 5 пМ, и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 91%, по меньшей мере приблизительно на 92%, по меньшей мере приблизительно на 93%, по меньшей мере приблизительно на 94%, по меньшей мере приблизительно на 95%, по меньшей мере приблизительно на 96%, по меньшей мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на