Комбинация пилокарпина и метимазола для лечения заболевания шарко-мари-тута и связанных с ним нарушений

КОМБИНАЦИЯ ПИЛОКАРПИНА И МЕТИМАЗОЛА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ ШАРКО-МАРИ-ТУТА И СВЯЗАННЫХ С НИМ НАРУШЕНИЙ Изобретение относится к комбинации и композиции для лечения заболевания Шарко-Мари-Тута(CMT) или связанного с CMT нарушения, где комбинация и композиция содержат пилокарпин и метимазол или пилокарпин и карбимазол или их соли и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Изобретение также включает способ лечения заболевания ШаркоМари-Тута (CMT) или связанного с CMT нарушения посредством совместного, раздельного или последовательного введения субъекту, по меньшей мере, пилокарпина и метимазола или пилокарпина и карбимазола или их солей. Изобретение относится к композициям и способам лечения заболевания Шарко-Мари-Тута и связанных с ним нарушений. Заболевание Шарко-Мари-Тута (CMT) представляет собой орфанную генетическую периферическую полинейропатию. Встречаясь приблизительно у 1 из 2500 индивидуумов, данное заболевание является наиболее распространенным наследуемым нарушением периферической нервной системы. Его проявление обычно происходит в течение первого или второго десятилетия жизни, хотя оно может быть обнаружено в раннем детском возрасте. Течение заболевания является хроническим с постепенной нейромышечной дегенерацией. Заболевание приводит к инвалидизации со случаями сопровождения неврологической боли и выраженной мышечной дисфункции. CMT является одной из наиболее изученной наследственной патологией с числом случаев, равным приблизительно 30000 во Франции. Хотя у большинства пациентов с CMT содержится дупликация фрагмента 17 хромосомы, содержащего ген миелина:PMP22 (форма CMT1A), две дюжины генов вовлечены в различные разновидности CMT. Таким образом,будучи моногенной по природе, данная патология характеризуется клинической гетерогенностью, обусловленной возможными генами-модуляторами. Гены, мутированные у пациентов с CMT, кластеризуются вокруг тесно связанных молекулярных метаболических путей, воздействуя на дифференцировку шванновских клеток или нейронов или изменяя взаимосвязь этих клеток в периферических нервах.PMP22 является главным компонентом миелина, экспрессирующимся в компактной части практически всех миелиновых волокон периферической нервной системы, и синтезируется предпочтительно шванновскими клетками. Более того, предполагается, что ген PMP22 вовлечен в развитие неоплазии у пациентов с нейрофиброматозом, аутосомно-доминантным заболеванием, характеризующимся наличием пятен цвета кофе с молоком и фиброматозных опухолей кожи. Незначительное, 1,5-кратное превышение экспрессии нормального белка PMP22 обнаруживают в шванновских клетках, гетерозиготных по дупликации у пациентов с CMT (в некоторых редких случаях, CMT1A-подобный фенотип может быть также связан со структурными мутациями белка PMP22) (Lupski et al., 1992; Suter et al., 1992; Roa et al., 1993;Thomas et al., 1997; SuterScherer, 2003; NaveSereda, 2007). Прямое доказательство того, что аномальная доза гена PMP22 вызывает CMT1A-подобный фенотип, было получено в трансгенных экспериментах на моделях грызунов с повышенной экспрессией белка PMP22 (Niemann et al., 1999; Perea et al.,2001; Robaglia-Schlupp et al., 2002; Meyer et al., 2006; SeredaNave, 2006). Более того, терапевтические мероприятия с ингибитором рецептора прогестерона и аскорбиновой кислотой снижали данную экспрессию в трансгенных животных, улучшая или замедляя прогрессирование фенотипа заболевания (Sereda et al., 2003; Passage et al., 2004; Meyer zu Hrste et al., 2007).Bassi et al., 1978, рассматривают использование метимазола для лечения тиреотоксикоза, связанного с нейропатией и энцефаломиелитом.WO 00/20024 Celtrix рассматривает использование метимазола для частичного снятия симптомовIGF-зависимого нарушения, коим является нарушение работы щитовидной железы.WO 2004/019938 имеет отношение к использованию пилокарпина в лечении синдромов нейропатической боли. Использование пилокарпина, в отдельности, для лечения миотонических папиллярных нарушений было предложено Keltner et al., 1975. Однако использование пилокарпина для лечения CMT не было описано. Более того, использование пилокарпина в комбинации с любым другим соединением также не было предложено. В заключение необходимо отметить, что существует необходимость в эффективной и разрешенной к применению терапии для лечения заболевания CMT. Сущность изобретения Задачей настоящего изобретения является предоставление новых терапевтических подходов к лечению CMT и связанных с ним нарушений. В частности, авторы изобретения разработали новые комбинированные способы лечения, которые эффективно воздействуют на метаболические пути, приводящие кCMT и связанным с ним нарушениям, и представляют новые подходы к лечению этих нарушений. В связи с этим, авторы изобретения представляют новые комбинированные продукты и композиции, а также их использование для лечения заболевания CMT и связанных с ним нарушений. Объект настоящего изобретения, в частности, относится к использованию комбинирования соединений для (производства лекарственного средства для) лечения CMT или связанного с ним нарушения,где указанное комбинирование соединений выбрано из агониста мускаринового рецептора или его пролекарства и ингибитора синтеза тиреоидного гормона или его пролекарства. Другой объект настоящего изобретения представляет собой комбинированный продукт, включающий агонист мускаринового рецептора и ингибитор синтеза тиреоидного гормона, или их пролекарства,для совместного или раздельного применения субъектом, одновременно или последовательно. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей агонист мускаринового рецептора и ингибитор синтеза тиреоидного гормона, или их пролекарства, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения агонист мускаринового рецептора представляет собой (3S,4R)-3-этил-4-[(3-метилимидазол-4-ил)метил]оксолан-2-он (CAS 92-13-7, кото-1 023380 рый является активным веществом фармацевтического препарата пилокарпина) или его пролекарство. Более того, в наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения ингибитор синтеза тиреоидного гормона дополнительно проявляет активность в сигнальном пути простагландина. Предпочтительные примеры таких соединений включают 1-метил-3H-имидазол-2-тион (CAS 60-56-0, который является активным веществом фармацевтического препарата метимазола) или его пролекарство,такое как карбимазол. В другом варианте осуществления изобретение имеет отношение к композиции, включающей агонист мускаринового рецептора и ингибитор синтеза тиреоидного гормона, для лечения CMT у субъекта,где в лечебную схему дополнительно включен этап определения, имеет ли пациент CMT1 А. В этой связи, определенный объект по данному изобретению относится к композиции, включающей пилокарпин или его пролекарство, и метимазол или его пролекарство и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Как показано в примерах, такое комбинирование позволяет эффективно лечить CMT в общепризнанных животных моделях. Продукты или композиции по изобретению могут дополнительно включать по меньшей мере одно дополнительное активное соединение, предпочтительно выбранное из группы, состоящей из рапамицина, баклофена, сорбитола, мифепристона, налтрексона, флурбипрофена и кетопрофена. В предпочтительном варианте осуществления изобретения композиция по изобретению включает,по меньшей мере,пилокарпин, метимазол и мифепристон; пилокарпин, метимазол и баклофен; или пилокарпин, метимазол и сорбитол. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения композиция по изобретению включает, по меньшей мере,пилокарпин, метимазол, мифепристон, баклофен и сорбитол; или пилокарпин, метимазол, мифепристон, баклофен, сорбитол и налтрексон. В других вариантах осуществления настоящее изобретение имеет отношение к продукту или композиции, включающим метимазол, пилокарпин и два дополнительных активных соединения, предпочтительно мифепристон и сорбитол. В других вариантах осуществления настоящее изобретение имеет отношение к продукту или композиции, включающим метимазол, пилокарпин и три дополнительных активных соединения, предпочтительно мифепристон, баклофен и сорбитол; или мифепристон, сорбитол и рапамицин; или мифепристон, сорбитол и кетопрофен; или мифепристон, сорбитол и флурбипрофен. В других вариантах осуществления настоящее изобретение имеет отношение к продукту или композиции, включающим метимазол, пилокарпин и четыре дополнительных активных соединения, предпочтительно мифепристон, сорбитол, баклофен и налтрексон; мифепристон, сорбитол, баклофен и рапамицин; мифепристон, сорбитол, налтрексон и рапамицин. В других вариантах осуществления изобретение имеет отношение к продукту или композиции, которые включают любое комбинирование лекарственных средств, как указано в таблице. В других частных вариантах осуществления настоящее изобретение имеет отношение к продукту или композиции, включающим метимазол и баклофен; или метимазол и цевимелин. В другом варианте осуществления изобретение также имеет отношение к продукту или композиции, включающим пилокарпин и пропилтиоурацил. Другой объект изобретения относится к применению комбинации пилокарпина с метимазолом или этих двух соединений по отдельности или в комбинации(ях) с другими соединениями, усиливающими их действие, для (производства лекарственного средства для) лечения CMT или связанного с ним нарушения. Другой объект по изобретению относится к применению комбинации пилокарпина с метимазолом или этих двух соединений по отдельности или в комбинации(ях) с другими соединениями, усиливающими их действие, для (производства лекарственного средства для) лечения токсической нейропатии. Другой объект по изобретению относится к применению комбинации пилокарпина с метимазолом или этих двух соединений по отдельности или в комбинации(ях) с другими соединениями, усиливающими их действие, для (производства лекарственного средства для) лечения ALS .(амиотрофического латерального склероза). Предпочтительно, соединения, усиливающие эффект комбинирования пилокарпина и метимазола при лечении CMT, выбраны из группы, состоящей из мифепристона, баклофена, сорбитола, налтрексона,флурбипрофена и кетопрофена. В одном варианте используется смесь пилокарпина и метимазола для лечения CMT или связанного с ним нарушения в комбинации с одним дополнительным активным соединением, предпочтительно мифепристоном или баклофеном. В другом варианте используется смесь пилокарпина и метимазола в комбинации с двумя дополнительными активными соединениями, предпочтительно мифепристоном и сорбитолом. В другом варианте используется смесь пилокарпина и метимазола в комбинации с тремя дополнительными активными соединениями, предпочтительно состоящими из мифепристона и сорбитола в комбинации с третьим соединением, выбранным из баклофена, рапамицина, кетопрофена или флурбипрофена. В другом варианте используется смесь пилокарпина и метимазола в комбинации с четырьмя дополнительными активными соединениями, предпочтительно мифепристоном, сорбитолом, баклофеном и налтрексоном или рапамицином; или мифепристоном, сорбитолом, налтрексоном и рапамицином. Изобретение дополнительно представляет способ лечения CMT или связанного с ним нарушения, в частности CMT, включающий введение нуждающемуся в нем субъекту эффективного количества комбинации агониста мускаринового рецептора, или его пролекарства, и ингибитора синтеза тиреоидного гормона, или его пролекарства. Изобретение дополнительно относится к способу лечения CMT у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества комбинации пилокарпина, или его пролекарства, и метимазола, или его пролекарства. Изобретение также относится к способу лечения CMT у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества комбинации пилокарпина и метимазола с по меньшей мере одним дополнительным активным соединением, предпочтительно выбранным из группы рапамицина, баклофена, сорбитола, мифепристона, налтрексона, флурбипрофена и кетопрофена. В вариантах настоящее изобретение также относится к способу лечения CMT у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества комбинации пилокарпина, метимазола и по меньшей мере одного дополнительного активного соединения, которое выбрано из баклофена, мифепристона, сорбитола и налтрексона; пилокарпина, метимазола и баклофена; пилокарпина, метимазола и мифепристона; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола и баклофена; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола и рапамицина; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола и кетопрофена; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола и флурбипрофена; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола, баклофена и налтрексона; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола, баклофена и рапамицина; пилокарпина, метимазола, мифепристона, сорбитола, налтрексона и рапамицина; метимазола и баклофена; метимазола и цевимелина; или пилокарпина и пропилтиоурацила. Изобретение может быть использовано для лечения CMT или связанного с ним нарушения у любого млекопитающего, в частности у людей. Оно особенно подходит для лечения CMT1a. В связи с этим специфическим объектом данного изобретения является способ лечения CMT1a у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества комбинации пилокарпина или его пролекарства и метимазола или его пролекарства. Дополнительным объектом данного изобретения является способ лечения CMT1a, включающий (1) оценку, есть ли у субъекта CMT1a, и (2) лечение субъекта, имеющего CMT1a, эффективным количеством комбинации пилокарпина или его пролекарства и метимазола или его пролекарства. Выявление возможного наличия у субъекта CMT1a может быть выполнено различными способами, известными, по существу, в данной области техники, такими как анализы ДНК. Подписи к фигурам Фиг. 1 - относительные уровни представлены в виде % от экспрессии мРНК PMP22 в первичных шванновских клетках крыс, обработанных в течение 24 ч соединениями А и В. Слева представлен % от уровня мРНК PMP22 спустя 24 ч после добавления 1 мМ или 1 мкМ соединения А (метимазола). Обнаружено, что уровень мРНК PMP22 значимо снижается в первичных шванновских клетках, и что более низкая доза соединения А вызывает наиболее существенную супрессию PMP22. : p0,05; : p0,001; значимо отличается от контроля (парный t-критерий Стьюдента). Справа под действием соединения В(пилокарпина) в течение 24 ч уровень экспрессии мРНК PMP22 значимо снижается в первичных шванновских клетках даже при очень низких дозах (10 и 50 нМ). Подобным образом, мы обнаружили, что соединение В (1 мкМ) значимо подавляет уровень экспрессии белка PMP22 после 24 ч инкубации, на 38% в первичных шванновских клетках. Этот эффект остается значимым после 48 ч инкубации (-18%,p0,001). Фиг. 2 - действие выбранных лекарственных средств на уровень экспрессии мРНК PMP22, количественно измеренный методом ОТ-К-ПЦР в клетках шванномы RT4-D6P2T. : p0,0001: значимо отли-3 023380 чается от контроля (= без лекарственного средства). Двусторонний t-критерий Стьюдента для значенийCt. Фиг. 3 - результаты оценки моторики самок крыс в тесте на брусьях на протяжении всего исследуемого лечения, представленного в виде основных направлений. WT-плацебо: нормальные крысы, леченные плацебо; TG-плацебо: контрольные трансгенные крысы, леченные плацебо, TGptx25: трансгенные крысы, леченные веществом отрицательного контроля, TGA: трансгенные крысы, принудительно кормленные суточной дозой 0,2 мг/кг метимазола; TGB: трансгенные крысы, леченные суточной дозой 0,35 мг/кг пилокарпина. Фиг. 4 - электрофизиологическая оценка амплитуды потенциалов чувствительного нерва у крыс сCMT, леченных лекарственными средствами на протяжении 20 недель. TG-плацебо: контрольные трансгенные крысы, леченные плацебо, TGptx25: трансгенные крысы, леченные веществом отрицательного контроля, TGA: трансгенные крысы, леченные суточной дозой 0,2 мг/кг метимазола; TGB: трансгенные крысы, леченные суточной дозой 0,35 мг/кг пилокарпина. Фиг. 5 - анализ аутопсийных образцов, полученных от животных, леченных лекарственными средствами, как описано в подписи к фиг. 3. Крысы, леченные лекарственными средствами и плацебо на протяжении 20 недель, были введены в глубокий наркоз и целые седалищные нервы и камбаловидные мышцы были аккуратно изъяты и взвешены. Графики представляют 30 средних значений этих измерений. Фиг. 6 - положительный эффект Mix1 в способе оценки походки (самок крыс); черная линия отображает контрольных крыс, леченных плацебо; черная жирная линия отображает трансгенных крыс, леченных плацебо; пунктирная линия отображает трансгенных крыс, леченных Mix1.p0,05; черный :wt плацебо в сравнении с tg плацебо; серый : tg плацебо в сравнении с tg mix1. Статистический анализ выполнен с использованием двустороннего критерия Стьюдента; представлено среднее значение s.e.m. Фиг. 7 - положительное действие Mix2 на порог возбудимости хвостового нерва (белый столбец отображает контрольных самцов крыс, леченных плацебо; черный столбец отображает трансгенных самцов крыс, леченных плацебо; серый столбец отображает трансгенных самцов крыс, леченных Mix2). Статистический анализ выполнен с использованием двустороннего критерия Стьюдента; представлена средняя величина s.e.m. Фиг. 8 - положительный эффект Mix2 после 4 недель лечения в тесте на брусьях (белые столбцы отображают контрольных самцов крыс, леченных плацебо; черные столбцы отображают трансгенных самцов крыс, леченных плацебо; серые столбцы отображают трансгенных самцов крыс, леченных Mix2). Статистический анализ выполнен с использованием двустороннего критерия Стьюдента; представлена средняя величина s.e.m. Фиг. 9 - положительное действие Mix2 на походку после 3 недель лечения (белые столбцы отображают процент самцов крыс в каждой группе, передвигающихся плавной походкой; серые столбцы отображают шаткую походку; черные столбцы отображают неспособность передвигаться). Статистический анализ выполнен с использованием двустороннего критерия Стьюдента. Фиг. 10 - антиаллодинический эффект в модели продолжительного действия OXALPN. Синим цветом отображено время реакции ацетоновой пробы у контрольных животных, красным - у леченных оксалиплатином животных, зеленым цветом - у животных, леченных оксалиплатином и mix2. Подробное описание изобретения Изобретение представляет новые терапевтические подходы к лечению CMT или связанных с ним нарушений. Изобретение рассматривает новые композиции, созданные из комбинаций известных лекарственных средств, и их новое применение для эффективной коррекции таких заболеваний и может быть использовано в отношении любого млекопитающего. В рамках настоящего изобретения термин "связанное с CMT нарушение" означает другие периферические нейропатии, как наследственные, так и приобретенные. Основная форма CMT, CMT1 А, обусловлена дупликацией гена PMP22. PMP22 является основным компонентом миелина, экспрессирующимся в компактной части практически всех миелиновых волокон в периферической нервной системе. Белок PMP22 взаимодействует с другим структурным белком миелина Р 0 и, в связи с этим, измененное соотношение PMP22/Р 0 может повлиять на плотность миелиновых оболочек (Vallat et al., 1996; D'Urso et al., 1999). В исследованиях in vitro показано, что белок PMP22 также вовлечен в регуляцию распластывания клеток Rho-зависимым способом и, таким образом, может влиять на капсулирование аксонов (Brancolini et al., 1999). Более того, PMP22 образует комплексы с интегринами 64 и может опосредовать взаимодействие шванновских клеток с внеклеточным матриксом(Amici et al., 2006; Amici et al., 2007). Более того, увеличенный уровень белка PMP22 может изменятьArf6-регулируемый эндосомальный метаболический цикл с участием плазматической мембраны и приводить к накоплению PMP22 в поздних эндосомах (Chies et al., 2003). Также было продемонстрировано,что сверхэкспрессированный белок PMP22 нарушает внутриклеточную сортировку белков и усиливает работу аппарата распада белка в шванновских клетках (Notterpek et al., 1997; Tobler et al., 2002; Fortun etal., 2003; Fortun et al., 2006; Fortun et al., 2007; Khajavi et al., 2007). Наконец, PMP22 непосредственно вовлечен в контроль клеточной пролиферации и программируемой клеточной гибели (Sancho et al., 2001;Atanasoski et al., 2002), и было показано, что мутантный белок PMP22 вызывает полную реорганизацию и аберрантную экспрессию аксональных ионных каналов (Ulzheimer et al., 2004; DevauxScherer, 2005). Соответственно, термин "связанное с CMT нарушение" включает периферические нарушения, такие как ALS, токсические нейропатии, идиопатические нейропатии, диабетические нейропатии, индуцированные раком и ВИЧ нейропатии, синдром Гийена-Барре. В предпочтительном варианте осуществления изобретения связанное с CMT нарушение означает нейропатию, такую как демиелинизирующая нейропатия, включая HNPP (наследственная компрессионная нейропатия), CMT1 В, CMT1 С, CMT1D, CMT1 Х, CMT2 А, CMT2 В, CMT2D, CMT2 Е, CMT2-Р 0, тяжелая демиелинизирующая нейропатия DSS (синдром Дежерина-Сотта), CHN (врожденная гипомиелинизирующая нейропатия), CMT4 А, CMT4 В 1, CMT4 В 2, CMT4D, CMT4F, CMT4, AR-CMT2A, HSN1. Изобретение, в частности, подходит для лечения CMT1 А. Термин "лечение" нарушения в том смысле, в котором он здесь используется, включает терапию,предупреждение, профилактику, препятствие или уменьшение боли, вызванной нарушением. Термин лечение включает, в частности, контроль прогрессирования заболевания и связанных с ним симптомов. Термин "соединение" также означает химические соединения, которые определенным образом названы в заявке, а также фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сложный эфир, простой эфир, изомеры, рацематы, конъюгаты, пролекарства вышеперечисленного. При этом термин "комбинирование" означает лечение, где по меньшей мере два лекарственных средства совместно вводят субъекту, чтобы вызвать биологический эффект. В комбинированной терапии по меньшей мере два лекарственных средства могут быть введены вместе или раздельно в одно и то же время или последовательно. Кроме того, по меньшей мере два лекарственных средства могут быть введены разными способами применения и по разным протоколам. Изобретение демонстрирует, что CMT или связанное с CMT нарушение могут быть подвергнуты лечению с помощью определенной комбинации лекарственных средств. В частности, изобретение демонстрирует, что соединения метимазола и пилокарпина, в комбинации(ях), могут быть использованы для лечения CMT или связанных с ним нарушений. В этом отношении экспериментальные результаты показывают, что комбинация метимазола и пилокарпина значительно снижает уровень экспрессии РНК гена PMP22 в шванновских клетках крысы. Более того, трансгенные по PMP22 крысы, моделирующие заболевание CMT у человека, были лечены ежедневно комбинациями, содержащими метимазол и пилокарпин. Наблюдали значительное улучшение поведенческих характеристик к концу лечения. Пилокарпин: (3S,4R)-3-этил-4-[(3-метилимидазол-4-ил)метил]оксолан-2-он. Данное лекарственное средство, C11H16N2O2, было разрешено к применению для лечения i) симптомов сухости во рту при гипофункции слюнных желез, вызванной лучевой терапией рака головы и шеи; иii) симптомов сухости во рту у пациентов с синдромом Шегрена. Агонист мускариновых рецепторов вызывает сокращение гладкомышечных волокон (желудочнокишечный тракт, глаз, бронх), стимулирует потовую, слюнную, бронхиальную и желудочную секрецию. Более того, он оказывает комплексное сердечно-сосудистое воздействие, стимулируя как парасимпатический (вазодилатационный), так и двигательный ганглионарный проводящий путь. Авторы изобретения обнаружили, что пилокарпин, агонист мускариновых рецепторов, снижает экспрессию белка PMP22 в шванновских клетках in vitro. Мы предполагаем, что стимуляция мускариновых рецепторов пилокарпином приводит, по-видимому, посредством действия комплексного набора молекулярных механизмов, к сдвигу внутриклеточного баланса активностей Erk/Akt, регулирующих экспрессию связанных с миелином белковых маркеров противоположными способами, с более выраженной передачей сигнала Erk (Ogata et al., 2004). В отсутствие связи с теорией постулируется, что стимуляция мускариновых рецепторов может изменять активность киназ Akt и Erk посредством сопутствующих механизмов (Ma et al., 2004; Anger et al.,2007). Например, мускариновые рецепторы, но не рецепторы PDGF, могут селективно блокировать проведение сигнала под действием IGF-1 путем активации ингибиторного дефосфорилирования тирозина или ингибиторного фосфорилирования серина IRS-1 с помощью РКС. Кроме того, мускариновые рецепторы могут опосредовать внутриклеточную трансактивацию проведения сигнала ERK с помощью Srcподобной киназы Fyn; в такой же мере, путем уменьшения активности аденилатциклазы мускариновые рецеторы могут быть также вовлечены в функциональную регуляцию киназ Akt/Gsk-3 и Erk путем РКА-опосредованного механизма. Наконец, было продемонстрировано, что стимуляция мускариновых рецепторов может - посредством активации АМРК - временно вызвать дефосфорилирование Akt и, таким образом, уменьшить внутриклеточный пул -катенина (Batty et al., 2004; King et al., 2006). Таким образом, также могут быть использованы другие агонисты мускариновых рецепторов, такие как: цевимелин (CAS-номер 107233-08-9), карбахол (CAS-номер 51-83-2), метахолин (CAS-номер 55-925) и бетанехол (CAS-номер 674-38-4). Метимазол: 1-метил-3H-имидазол-2-тион. Метимазол ингибирует образование новых тиреоидных гормонов путем блокирования активности тиреоидной пероксидазы, превращая иодид в иод и катализируя включение образующейся молекулы иодида в фенольные кольца тирозинов. Таким образом, метимазол может эффективно уменьшать транскрипционную активность рецепторов тиреоидных гормонов. Кроме того, метимазол, как сообщается,подавляет образование простагландинов путем ослабления активности простагландин-H-синтазы (Zelman et al., 1984). Простагландины - посредством рецепторов их узнавания GPCR - могут дополнительно увеличивать активность сигнального метаболического пути Akt, который активирует экспрессию имеющих отношение к миелину белков (Ogata et al., 2004; Castellone et al., 2006). Соответственно, соединения,которые как ингибируют синтез тиреоидных гормонов, так и воздействуют на образование простагландинов или передачу сигнала с их участием, особенно предпочтительны для использования в настоящем изобретении. Другими соединениями, родственными метимазолу по способу действия, являются карбимазол(пролекарство метимазола - CAS-номер 22232-54-8) и пропилтиоурацил (CAS-номер 51-52-5) и амиодарон (CAS-номер 1951-25-3). Как описано в примерах, соединения метимазола и пилокарпина оказывают совместное действие,ведущее к улучшению терапевтического воздействия на CMT, позволяя снизить эффективные терапевтические дозы с уменьшением числа побочных эффектов. Частный вариант осуществления изобретения заключается в комбинированной терапии по лечениюCMT или связанного с ним нарушения, в частности, CMT1 А, где указанная комбинированная терапия включает соединения метимазола и пилокарпина и, по меньшей мере, третье соединение, способное увеличить активность данной комбинации. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в комбинированной терапии по лечению ALS, где указанная комбинированная терапия включает соединения метимазола и пилокарпина и, по меньшей мере, третье соединение, способное увеличить активность данной комбинации. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в комбинированной терапии по лечению токсической нейропатии, где указанная комбинированная терапия включает соединения метимазола и пилокарпина и, по меньшей мере, третье соединение, способное увеличить активность данной комбинации. Частный вариант осуществления изобретения заключается в терапии по лечению CMT или связанного с ним нарушения, где соединения метимазола и пилокарпина используются по отдельности. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в терапии по лечению CMT или связанного с ним нарушения, где метимазол и/или пилокарпин используются в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным активным соединением. В предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере одно дополнительное соединение выбрано из группы соединений, перечисленных в таблице. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в продукте или композиции, которые включают любую комбинацию лекарственных средств, как описано в таблице. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в комбинированной терапии по лечению CMT или связанного с ним нарушения, включающей любую комбинацию лекарственных средств, как описано в таблице. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в комбинированной терапии по лечению ALS, включающей любую комбинацию лекарственных средств, как описано в таблице. Другой частный вариант осуществления изобретения заключается в комбинированной терапии по лечению токсической нейропатии, включающей любую комбинацию лекарственных средств, как описано в таблице. Терапия по изобретению проводится в виде комбинации лекарственных средств, дополнительно в сочетании с другой терапией. Она может быть предоставлена на дому, во врачебном кабинете, клинике,амбулаторном отделении при больнице или больнице с тем, чтобы врач мог всесторонне наблюдать за терапевтическим эффектом и внести любые необходимые изменения. Продолжительность терапии зависит от стадии заболевания, возраста и состояния пациента и от того, как пациент отвечает на лечение. Кроме того, человек, имеющий больший риск развития дополнительного нейропатического нарушения (например, человек, генетически к нему предрасположенный или имеющий, например, диабет или находящийся на лечении онкологического заболевания и др.), может получать профилактическое лечение, чтобы уменьшить или отсрочить возможную нейропатическую реакцию. Дозирование, частота и способ введения каждого компонента комбинации может контролироваться независимым образом. Например, одно лекарственное средство может быть введено перорально, в то время как второе лекарственное средство может быть введено внутримышечно. Комбинированная терапия может быть проведена периодическими циклами, включающими периоды отдыха таким образом,чтобы организм пациента имел возможность восстановиться от любых пока еще непредвиденных побочных эффектов. Лекарственные средства могут быть также составлены вместе таким образом, чтобы за одно применение осуществлялась доставка сразу двух лекарственных средств. Создание фармацевтических композиций Применение каждого лекарственного средства комбинации может осуществляться любым подходящим способом, приводящим к накоплению лекарственного средства, которое при комбинировании с другим компонентом способно корректировать действие повышенной экспрессии PMP22 при достижении периферических нервов. Хотя представляется возможным для активных ингредиентов комбинации быть введенными в виде беспримесных химических веществ, предпочтительно представлять их в виде фармацевтических композиций, также упоминаемых в данном контексте как фармацевтическая лекарственная форма. Возможные композиции включают таковые, подходящие для перорального, ректального, местного (включая трансдермальное, буккальное и сублингвальное) или парентерального (включая подкожное, внутримышечное,внутривенное и внутрикожное) применения. Зачастую эти фармацевтические лекарственные формы назначают пациенту в виде "упаковок для пациента", содержащих некоторое число дозаторов или других способов применения отмеренных разовых доз для использования в течение различных периодов лечения из одной упаковки, обычно блистерной упаковки. Упаковки для пациента имеют преимущества перед стандартными типами назначений, где фармацевт ограждает пациента от снабжения фармацевтическим препаратом в неупакованном виде в том, что пациент всегда имеет доступ к инструкции по применению препарата, содержащейся в упаковке для пациента, как правило, отсутствующей при стандартных назначениях. Было показано, что вложение инструкции по применению препарата улучшает соблюдение пациентом инструкций врача. Таким образом, изобретение дополнительно включает фармацевтическую лекарственную форму, как было описано выше, в сочетании с упаковочным материалом, подходящим для указанных лекарственных форм. В такой упаковке для пациента можно судить о предполагаемом применении лекарственной формы для комбинированного лечения по инструкциям, оснащениям, устройствам, приспособлениям и/или другим вспомогательным средствам по использованию лекарственной формы наиболее подходящим для лечения образом. Такие меры делают упаковку для пациента особенно подходящей и приспособленной для использования в лечении комбинацией по настоящему изобретению. Лекарственное средство может содержаться в любом подходящем количестве в любом пригодном носителе и может присутствовать в количестве 1-99 вес.% от общей массы композиции. Композиция может быть представлена в лекарственной форме, пригодной для перорального, парентерального (например, внутривенного, внутримышечного), ректального, кожного, назального, вагинального, ингаляционного, кожного (в виде пластыря) или глазного способа применения. Таким образом, композиция может быть в форме, например, таблеток, капсул, пилюлей, порошков, гранул, суспензий, эмульсий, растворов,гелей, включая гидрогели, паст, мазей, кремов, пластырей, киселей, осмотических средств доставки, суппозиторий, клизм, инъекционных форм, имплантатов, спреев или аэрозолей. Фармацевтические композиции могут быть составлены в соответствии с общепринятыми фармацевтическими способами (см., например, Remington: The Science and Practice of pharmacy (20th ed.), ed. A.Swarbrick and J.С. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York). Фармацевтические композиции по изобретению могут быть составлены для высвобождения активного лекарственного средства практически сразу же после приема или в любое заданное время или временной период после приема. Лекарственные формы с контролируемым высвобождением включают: (i) лекарственные формы,создающие практически постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение длительного периода времени; (ii) лекарственные формы, которые после заданного лаг-периода времени создают практически постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение длительного периода времени; (iii) лекарственные формы, которые поддерживают действие лекарственного средства в течение заданного периода времени путем поддержания относительно постоянного эффективного уровня лекарственного средства в организме с одновременной минимизацией нежелательных побочных эффектов, связанных с колебаниями уровня активного лекарственного вещества в плазме; (iv) лекарственные формы, которые локализуют действие лекарственного средства, например, путем пространственного размещения композиции с контролируемым высвобождением рядом с пораженной тканью или органом или непосредственно в них; и (v) лекарственные формы, которые контролируют действие лекарственного средства путем использования носителей или производных химических веществ с целью доставки лекарственного средства к определенному типу клетки-мишени. Введение лекарственных средств в виде лекарственной формы с контролируемым высвобождением особенно предпочтительно в случаях, в которых лекарственное средство, либо в отдельности, либо в комбинации, имеет (i) малый терапевтический индекс (т.е. разница между концентрацией в плазме, приводящей к опасным побочным эффектам или токсическим реакциям, и концентрацией в плазме, приводящей к терапевтическому эффекту, мала; как правило, терапевтический индекс, TI, определяется как отношение срединного значения летальной дозы (LD50) к срединному значению эффективной дозы(ED50; (ii) узкое абсорбционное окно в желудочно-кишечном тракте; или (iii) очень короткое биологическое время полураспада, такое, что требуется частое дозирование в течение дня для поддержания уровня в плазме на терапевтическом уровне. Можно следовать любой из многих стратегий для получения контролируемого высвобождения, в котором скорость высвобождения превосходит скорость метаболизма рассматриваемого лекарственного средства. Контролируемое высвобождение может быть получено путем подходящего выбора различных параметров и ингредиентов лекарственной формы, включая, например, различные типы композиций и покрытий с контролируемым высвобождением. Таким образом, лекарственное средство может быть составлено с подходящими эксципиентами в виде фармацевтической композиции, которая при применении высвобождает лекарственное средство контролируемым способом (таблетированные или капсулированные композиции, масляные растворы, суспензии, эмульсии, микрокапсулы, микросферы, наночастицы,пластыри и липосомы для однократного или многократного введения). Твердые дозированные формы для перорального применения. Лекарственные формы для перорального использования включают таблетки, содержащие активный ингредиент(ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Этими эксципиентами могут быть, например, инертные разбавители или наполнители (например, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмалы, включая картофельный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия,фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия); гранулирующие и дезинтегрирующие вещества(например, производные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, кроскармеллоза натрия, альгинаты или альгиновая кислота); связующие вещества (например, камедь, альгиновая кислота, альгинат натрия, желатин, крахмал, прежелатинизированный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, натриевая карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль); и смазки,глиданты и антиадгезивы (например, стеариновая кислота, кремнеземы или тальк). Другими фармацевтически приемлемыми эксципиентами могут быть красители, ароматизаторы, пластификаторы, увлажнители, буферные вещества и т.п. Таблетки могут быть без покрытия или они могут быть заключены в оболочку известными технологиями для дополнительной задержки распада и абсорбции в желудочно-кишечном тракте и, тем самым,обеспечивая пролонгированное действие в течение более длительного периода времени. Покрытие может быть адаптировано к высвобождению активного лекарственного вещества по заданной схеме (например, для получения лекарственной формы с контролируемым высвобождением), или оно может быть адаптировано не высвобождать активное лекарственное вещество, пока не будет пройден желудок (кишечнорастворимая оболочка). Покрытием может быть сахарная глазурь, пленочная оболочка (например,основанная на гидроксипропилметилцеллюлозе, метилцеллюлозе, метилгидроксиэтилцеллюлозе, гидроксипропилцеллюлозе, карбоксиметилцеллюлозе, акрилатные сополимеры, полиэтиленгликоли и/или поливинилпирролидон) или кишечнорастворимая оболочка (например, основанная на сополимере метакриловой кислоты, ацетатфталате целлюлозы, фталате гидроксипропилметилцеллюлозе, ацетатсукцинате гидроксипропилметилцеллюлозе, поливинила ацетатфталате, шеллаке и/или этилцеллюлозе). Могут быть использованы замедлители, такие как, например, глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Твердые таблетированные композиции могут включать покрытие, адаптированное к защите композиции от нежелательных химических изменений, (например, химического распада до высвобождения активного лекарственного вещества). Твердая дозированная форма может быть заключена в оболочку аналогично тому, как описано в Энциклопедии Фармацевтической Технологии. Два лекарственных средства могут быть смешаны друг с другом в таблетке или могут быть отделены друг от друга. Например, первое лекарственное средство содержится во внутренней части таблетки, а второе лекарственное средство находится снаружи таким образом, что значительная часть второго лекарственного вещества высвобождается до высвобождения первого лекарственного вещества. Лекарственные формы для перорального применения могут быть также представлены в виде жевательных таблеток или в виде твердых желатиновых капсул, где активные ингредиенты смешаны с инертным твердым разбавителем (например, картофельным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой,карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином), или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водой или масляным веществом, например жидким парафином или оливковым маслом. Порошки и грануляты могут быть приготовлены, используя ингредиенты, упомянутые выше, для таблеток и капсул, общепринятым способом. Композиции с контролируемым высвобождением для перорального применения могут, например,быть созданы для высвобождения активного лекарственного вещества путем контролирования растворения и/или диффузии активного лекарственного вещества. Контролируемое высвобождение с растворением или диффузией может быть достигнуто с помощью подходящего покрытия таблетированной, капсулированной, пеллетированной или гранулированной лекарственной формы лекарственных препаратов или с помощью включения лекарственного препарата в подходящую матрицу. Покрытие с контролируемым высвобождением может включать одно или несколько веществ для покрытия, упомянутых выше, и/или, например, шеллак, пчелиный воск, гликовоск,касторовый воск, карнаубский воск, стеариловый спирт, глицерилмоностеарат, глицерилдистеарат, глицерил пальмитостеарат, этилцеллюлозу, акриловые смолы, dl-полимолочную кислоту, ацетобутират цел-8 023380 люлозы, поливинилхлорид, поливинилацетат, винилпирролидон, полиэтилен, полиметакрилат, метилметакрилат, 2-гидроксиметакрилат, метакрилатные гидрогели, 1,3-бутиленгликоль, метакрилат этиленгликоля и/или полиэтиленгликоли. В матричной лекарственнойформе с контролируемым высвобождением,материал матрицы может также включать, например, гидратированную метилцеллюлозу, карнаубский и стеариловый спирт, карбопол 934, силикон, глицерилтристеарат, метилакрилат-метилметакрилат, поливинилхлорид, полиэтилен и/или галоидированный фтороуглеводород. Композиция с контролируемым высвобождением, содержащая одно или несколько лекарственных средств заявленных комбинаций, может также быть в форме плавучих таблеток или капсул (т.е. таблеток или капсул, которые при пероральном введении держатся на поверхности желудочного содержимого определенный период времени). Плавучая таблетированная лекарственная форма лекарственных(ого) средств (а) может быть приготовлена путем измельчения смеси лекарственных(ого) средств(а) с эксципиентами и 20-75 вес.% гидроколлоидами, такими как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Полученные гранулы затем могут быть спрессованы в таблетки. При контакте с желудочным соком таблетка образует практически водонепроницаемый гелевый барьер вокруг своей поверхности. Этот гелевый барьер участвует в поддержании плотности менее одного,таким образом, позволяя таблетке оставаться плавучей в желудочном соке. Жидкости для перорального применения. Порошки, диспергируемые порошки или гранулы, пригодные для приготовления водных суспензий путем добавления воды, представляют собой подходящие для перорального применения дозированные формы. Лекарственная форма в виде суспензии обеспечивает наличие активного ингредиента в смеси с диспергирующим или увлажняющим веществом, суспендирующим веществом и одним или несколькими консервантами. Пригодными суспендирующими веществами являются, например, натриевая карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, альгинат натрия и т.п. Парентеральные композиции. Фармацевтическая композиция может быть также введена парентерально путем инъекции, инфузии или имплантации (внутривенной, внутримышечной, подкожной или что-либо подобное) в дозированных формах, лекарственных формах или с помощью подходящего средства доставки или имплантатов, содержащих общепринятые, нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и адъюванты. Составление рецептуры и приготовление таких композиций хорошо известны специалистам в данной области техники приготовления лекарственного средства. Композиции для парентерального применения могут быть представлены в единичных дозированных формах (например, в ампулах для однократного применения) или во флаконах, содержащих несколько доз и в которые может быть добавлен подходящий консервант (см. ниже). Композиция может быть в форме раствора, суспензии, эмульсии, инфузионного устройства или средства доставки для имплантации или она может быть представлена в виде сухого порошка, подлежащего растворению в воде или другом подходящем наполнителе перед использованием. Помимо активных(ого) лекарственных(ого) веществ(а) композиция может включать подходящие парентерально приемлемые носители и/или эксципиенты. Активное(ые) лекарственное(ые) вещество(а) может быть заключено в микросферы, микрокапсулы, наночастицы, липосомы или что-либо подобное для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, солюбилизирующие, стабилизирующие, регулирующие рН вещества и/или диспергирующие вещества. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть в форме, пригодной для стерильной инъекции. Для приготовления такой композиции пригодное(ые) активное(ые) лекарственное(ые) вещество(а) может быть растворено или суспендировано в парентерально приемлемом жидком наполнителе. К числу приемлемых наполнителей и растворителей, которые могут быть использованы, относятся вода,вода, доведенная до подходящего значения pH путем добавления соответствующего количества хлористоводородной кислоты, гидроокиси натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиола, раствора Рингера и изотонического раствора хлорида натрия. Водная лекарственная форма может также содержать один или несколько консервантов (например, метил, этил или н-пропил-п-гидроксибензоат). В случаях, когда одно из лекарственных средств является исключительно труднорастворимым или малорастворимым в воде, может быть добавлено повышающее растворимость или солюбилизирующее вещество или растворитель может включать 10-60 вес.% пропиленгликоля или что-нибудь подобное. Парентеральные композиции с контролируемым высвобождением могут быть в форме водных суспензий, микросфер, микрокапсул, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий или эмульсий. Альтернативно, активное(ые) лекарственное(ые) вещество(а) может быть заключено в биосовместимые носители, липосомы, наночастицы, имплантаты или инфузионные устройства. Материалами для использования при приготовлении микросфер и/или микрокапсул являются, например, биоразлагаемые/биоразрушаемые полимеры, такие как полигалактин, поли-(изобутилцианоакрилат), поли(2 гидроксиэтил-L-глутамин). Биосовместимыми носителями, которые могут быть использованы при составлении парентеральной лекарственной формы с контролируемым высвобождением, являются карбогидраты (например, декстраны), белки (например, альбумин), липопротеины или антитела. Материалы для использования в имплантатах могут быть небиоразлагаемыми (например, полидиметилсилоксан) или биоразлагаемыми (например, поли(капролактон), поли(гликолевая кислота) или поли(ортоэфиры. Композиции для ректального применения. Для ректального применения пригодные дозированные формы для композиции включают суппозитории (эмульсионного или суспензионного типа) и ректальные желатиновые капсулы (растворы или суспензии). В стандартной суппозиторной лекарственной форме активное(ые) лекарственное (ые) вещество(а) комбинируют с соответствующей фармацевтически приемлемой суппозиторной основой, такой как масло какао, этерифицированные жирные кислоты, желатин с глицерином и различные водорастворимые или диспергируемые основы подобно полиэтиленгликолям. Могут быть включены различные вспомогательные вещества, энхансеры или сурфактанты. Композиции для чрескожного или местного применения. Фармацевтические композиции могут также быть применены местно на кожу для чрескожной абсорбции в дозированных формах или лекарственных формах, содержащих стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, включая микросферы и липосомы. Лекарственные формы включают кремы, мази, лосьоны, линименты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, полоски, спреи,пасты, пластыри и другие виды трансдермальных систем доставки лекарственных средств. Фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты могут включать эмульгаторы, антиоксиданты, буферные вещества, консерванты, увлажнители, интенсификатор проникновения вещества внутрь, хелатирующие агенты,гель-образующие вещества, мазевые основы, ароматизаторы и защитное средство для кожи. Эмульгаторами могут быть природные камеди (например, сенегальская камедь или трагакантовая камедь). Консервантами, увлажнителями, интенсификаторами проникновения веществ внутрь могут быть парабены, такие как метил или пропил-п-гидроксибензоат, и бензалкония хлорид, глицерин, пропиленгликоль, мочевина и т.п. Фармацевтические композиции, описанные выше для местного применения на коже, могут также быть использованы применительно к местному введению на участок тела, подлежащий лечению, или вблизи с ним. Композиции могут быть адаптированы для непосредственного применения или для применения посредством специальных приспособлений доставки лекарственных средств, таких как повязки или альтернативные пластыри, подушечки, тампоны, стрипы или другие виды пластичного материала. Дозирование и продолжительность лечения. Следует иметь в виду, что лекарственные средства комбинации могут быть применены одновременно, либо в одной, либо в разных фармацевтических лекарственных формах, или последовательно. В предпочтительном варианте осуществления изобретения лекарственные вещества составляют вместе в одном и том же эксципиенте или носителе. В случае последовательного применения задержка в применении второго (или дополнительного) активного ингредиента не должна быть такой, чтобы была потеряна польза от эффективного воздействия комбинации активных ингредиентов. Минимальным требованием для комбинации по данному описанию изобретения является то, что комбинация должна быть предназначена для комбинированного применения с пользой эффективного воздействия комбинации активных ингредиентов. Можно судить о предусмотренном применении комбинации по техническим оснащениям, устройствам, приспособлениям и/или другим вспомогательным средствам по использованию комбинации по изобретению. Терапевтически эффективные количества двух или более лекарственных средств, являющихся субъектами данного изобретения, могут быть использованы вместе для приготовления лекарственного препарата, пригодного для снижения воздействия увеличенной экспрессии гена PMP22, предотвращая или снижая риск развития заболевания CMT1 А, препятствуя или уменьшая риск возникновения раннего или последующего нейропатического события. Хотя активные лекарственные вещества настоящего изобретения могут быть назначены во фракционированных дозах, например, два или три раза в день, однократная суточная доза каждого лекарственного вещества в комбинации предпочтительна, где наиболее предпочтительна однократная суточная доза всех лекарственных веществ в одной фармацевтической композиции (единичная дозированная форма). Применение лекарственного средства может быть от одного до нескольких раз в день в течение нескольких дней до нескольких лет и может даже быть в течение жизни пациента. Постоянное или, по меньшей мере, периодически повторяемое продолжительное применение лекарственного средства показано в большинстве случаев. Термин "единичная дозированная форма" относится к физически дискретным единицам (таким как капсулы, таблетки или наполненные цилиндры шприцов), пригодных в качестве однократных доз для людей, где каждая единица содержит заданное количество активного вещества или веществ, вычисленное для достижения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Количество каждого лекарственного средства в комбинации, предпочтительное для однократной дозы, зависит от нескольких факторов, включая способ применения, массу тела и возраст пациента, тяжесть нейропатического поражения, вызванного заболеванием CMT1 А, или риск возможных побочных эффектов, рассматривая общее состояние здоровья человека, подлежащего лечению. Кроме того, фармакогеномная (влияние генотипа на фармакокинетический, фармакодинамический профиль или профиль эффективности терапевтического средства) информация об определенном пациенте может оказывать влияние на используемое дозирование. За исключением случаев заболевания CMT, чрезвычайным образом наносящих вред здоровью, когда могут потребоваться более высокие дозы лекарственного препарата, или лечения детей, когда следует использовать более низкие дозы, предпочтительная дозировка каждого лекарственного средства в комбинации, как правило, находится в диапазоне доз, не превышающих таковых, обычно предусмотренных для длительного поддерживающего лечения или доказанных быть безопасными в большой фазе 3 клинических испытаний. Например, для метимазола приблизительно от 0,5 до приблизительно 15 мг в день при приеме перорально. Особые дозы следует выбирать при местном применении. Для пилокарпина приблизительно от 0,1 до приблизительно 20 мг в день при приеме перорально. Наиболее предпочтительное дозирование соответствует количествам от 1 до 10% таковых, какие,как правило, предусмотрены для длительного поддерживающего лечения. Следует понимать, что фактически применяемое количество лекарственного средства определяется врачом в свете имеющих к этому отношение обстоятельств, включая патологическое состояние или состояния, подлежащие лечению, конкретной применяемой композиции, возраста, веса и реакции каждого конкретного пациента, тяжести симптомов у пациента и выбранного способа применения лекарственного препарата. Таким образом, вышеупомянутые диапазоны дозирования предназначены для обеспечения в настоящем документе общего руководства и основ идеи изобретения, но не предназначены для ограничения объема изобретения. Схема лечения, дозировки и способы применения лекарственного препарата Ниже описаны дозы лекарственных комбинаций (которые различаются по способам применения) для человека. Метимазол и пилокарпин. 1 - Применяются перорально в виде единой фармацевтической композиции: метимазол приблизительно от 0,5 до приблизительно 15 мг и пилокарпин приблизительно от 0,1 до приблизительно 20 мг каждый день перорально в течение нескольких месяцев, с наиболее предпочтительными дозами для обоих лекарственных средств в композиции, находящимися в диапазоне от 0,6 до 35 мг в расчете на единицу (в день). 2 - Применяются одновременно перорально в течение нескольких месяцев: метимазол приблизительно от 0,1 до приблизительно 15 мг и пилокарпин приблизительно от 0,02 до приблизительно 20 мг каждый день перорально в течение нескольких месяцев, с наиболее предпочтительными дозами для обоих лекарственных средств в композиции, находящимися в диапазоне от 1,02 до 35 мг в расчете на единицу (в день). 3 - Применяются одновременно в течение нескольких месяцев: метимазол приблизительно от 0,05 до приблизительно 15 мг и пилокарпин приблизительно от 0,01 до приблизительно 20 мг каждый день перорально в течение нескольких месяцев, с наиболее предпочтительными дозами для обоих лекарственных средств в композиции, находящимися в диапазоне от 0,06 до 35 мг в расчете на единицу (в день). Дозирование данного лекарственного средства в любой комбинации среди тех, что рассмотрены в настоящем изобретении, могут отличаться по лекарственным формам, предлагаемым для лечения мужчин или женщин. Дополнительные аспекты и преимущества настоящего изобретения рассмотрены в следующих экспериментальных разделах, которые следует рассматривать в качестве исключительно иллюстративных. ПримерыI. Эксперименты in vitro. Первичные шванновские клетки крыс коммерческого производства. Пробирки с первичной культурой шванновских клеток (SC) крыс размораживают (ScienceR1700) и высевают плотностью 10000 клеток/см 2 в "Sciencell Schwann cell medium" (основная среда из SciencellR1701) во флаконы объемом 75 см 2, предварительно покрытые поли-L-лизином. Культуральная среда состоит из основной среды, 5% фетальной бычьей сыворотки (3H-Biomedical AB 1701-0025), 1% добавки для роста шванновских клеток (3H-Biomedical АВ 1701-1752), 1% гентамицина (Sigma G1397) и 10 мкМ форсколина (SigmaF6886) для активации их пролиферации. После достижения конфлюентности (от 4 до 10 дней в зависимости от партии клеток) шванновские клетки очищают легким перемешиванием или иммунопэннингом thy1.1, позволяющим осуществить отделение SC от прилегающих фибробластов, с целью получения культур, которые по меньшей мере на 95% очищены. Затем подсчитывают число SC (способ с использованием трипанового синего) и засевают в предварительно покрытый поли-L-лизином флакон объемом 75 см 2 в такую же среду для SC. При достижении конфлюентности клетки промывают, трипсинизируют (разведенный 1 трипсин-EDTA, Invitrogen 1540054, разведенный в PBS без кальция и магния), подсчитывают их количество и высевают в 12 луночные чашки (140000 клеток/лунка) в среде для шванновских клеток Sciencell с 5% FBS, 1% добавкой для клеточного роста (CGS), 40 мкг/мл гентамицина и 4 мкМ форсколина. Выращенные на заказ первичные шванновские клетки крысы. Первичные культуры шванновских клеток (SC) получают из седалищных нервов новорожденных крыс Sprague-Dawley (между Р 0 и Р 2). Всех новорожденных крыс умерщвляют и помещают в чашки Петри. Препарирование выполняют в стерильных условиях. Дорсальную часть кожи удаляют с задней лапы и нижней части туловища. Седалищный нерв выделяют и переносят в чашку для культивирования, содержащую ледяную культуральную среду Leibovitz(L15, Invitrogen 11415), дополненную 1% раствором пенициллина/стрептомицина (50 UI/мл и 50 мкг/мл соответственно; Invitrogen 15070) и 1% бычьим сывороточным альбумином (BSA, Sigma A6003). Оба нерва из каждой крысы переносят в 15 мл пробирку, содержащую ледяную L15. Среду L15 затем удаляют и заменяют на 2,4 мл DMEM (Invitrogen 21969035) с 10 мг/мл коллагеназы (Sigma А 6003). Нервы инкубируют в этой среде в течение 30 мин при 37C. Среду затем удаляют, и происходит диссоциация обоих нервов под действием трипсина (10% трипсин EDTA 10, Invitrogen 15400054), разбавленного вPBS без кальция и магния (Invitrogen2007-03), в течение 20 мин при 37C. Реакцию останавливают добавлением DMEM, содержащего ДНКазу I класса II (0,1 мг/мл Roche diagnostic 104159) и эмбриональную телячью сыворотку (FSC 10%, Invitrogen 10270). Клеточная суспензия была измельчена с помощью 10 мл пипетки и пропущена сквозь фильтр в 50 мл пробирку (13 мм фильтрующие элементыSwinnex, миллипор, с 20 мкм нейлоновыми сетчатыми фильтрами, Fisher). Клеточную суспензию центрифугируют при 350 g в течение 10 мин при комнатной температуре (RT) и осадки суспендируют вDMEM с 10% FSC и 1% пенициллином/стрептомицином. Подсчитывают число клеток (способ с использованием трипанового синего) и засевают в планшеты для тканевых культур Falcon 100 мм Primaria плотностью, равной 5,105-10 б клеток/чашка. После одного дня культивирования среду заменяют на DMEM, 10% FCS, 1% пенициллин/стрептомицин и 10 мкМ цитозин-b-D-арабинофуранозид (Sigma С 1768). Через 48 ч среду удаляют и клетки промывают три раза DMEM. Затем добавляют среду для роста SC, состоящую из DMEM, 10%FCS, 1% пенициллина/стрептомицина, 2 мкМ форсколина (Sigma F6886), 10 мкг/мл экстракта гипофиза быка (РЕХ, Invitrogen 13028). Среду меняют каждые 2-3 дня. После 8 дней культивирования (от 4 до 10 дней в зависимости от партии клеток) шванновские клетки достигают конфлюэнтности, и культура, содержащая большое количество примесных фибробластов,очищается с помощью способа иммунопэннинга thy1.1. После данной очистки клетки суспендируют в среде для выращивания при 10000 клеток/см 2 во флаконах объемом 75 см 2, предварительно покрытых поли-L-лизином. Как только они достигают конфлюэнтности, клетки ополаскивают, трипсинизируют(трипсин-EDTA), подсчитывают их количество и высевают на 12-луночные чашки (100000 клеток/лунка). Инкубация с лекарственным средством. После того как клетки были высеяны в 12-луночные чашки, среду заменяют на среду определенного состава, содержащую смесь DMEM-F12 (Invitrogen21331020), дополненную 1% добавкой N2 (Invitrogen17502), 1% L-глутамином (Invitrogen25030024), 2,5% FBS (Sciencell 0025), 0,02 мкг/мл кортикостероном (Sigma С 2505), 4 мкМ форсколином и 50 мкг/мл гентамицином. Ростовые факторы не добавляют в данную среду для активации дифференцировки SC. Через 24 ч среду заменяют на среду определенного состава (DMEM-F12), дополненную 1% инсулином-трансферрином-селеном-Х (ITS, Invitrogen 51300), 16 мкг/мл путресцином (SigmaP5780), 0,02 мкг/мл кортикостероном и 50 мкг/мл гентамицином. На данном этапе ни прогестерон, ни форсколин не содержатся в среде. Через день первичные шванновские клетки стимулируют лекарственными средствами в течение 24 ч (3 лунки/условие). Приготовление каждого соединения выполняется непосредственно перед его добавлением в среду для культивирования клеток. Пилокарпин (SIGMA) был протестирован в первичных шванновских клетках в диапазоне концентраций от 10 мкМ до 10 нМ, в то время как метимазол (SIGMA) был протестирован в концентрациях 10, 1 мкМ, 100 и 10 нМ. Лекарственные средства добавляют в среду определенного состава, состоящую из DMEM-F12 с 1% инсулином-трансферрином-селеном-X (ITS, Invitrogen 51300), 16 мкг/мл путресцином, 0,02 мкг/мл кортикостероном, 10 нМ прогестероном и 50 мкг/мл гентамицином. Отсутствие форсколина перед стимуляцией лекарственным средством и во время стимуляции предотвращает насыщение аденилатциклазы. Культивируемые клетки шванномы. Клеточную линию (АТСС CRL-2468) шванномы крысы RT4-D6-Р 2 Т размораживают в DMEM(АТСС 30-2002) и 10% FCS (Invitrogen 10106). Клетки выращивают при 37C в увлажненном инкубаторе в атмосферном воздухе (95%)-CO2 (5%). При пассаже 4 клетки подвергают диссоциации путем трипсинизации (+1 мл Трипсин-EDTA, 0,25%-0,53 мМ; Invitrogen) в течение 5-15 мин при 37C. Реакцию останавливают добавлением DMEM, содержащей 10% эмбриональную бычью сыворотку (FBS). Подсчитывают число клеток в цитометре Neubauer, используя способ исключения трипанового синего (Sigma). Суспензию измельчают с помощью 10 мл пипетки, и клетки затем центрифугируют при 350g в течение 10 мин при комнатной температуре. Осадок диссоциированных клеток ресуспендируют и высевают из расчета 30000 клеток/мл в 12-луночные плашки. Через 48 ч среду заменяют бессывороточной средой(DMEM). Через 15 ч клетки RT4-D6P2T стимулируют лекарственными средствами, добавляемыми в среду для культивирования клеток в выбранных концентрациях. Приготовление каждого индивидуального лекарственного средства или комбинации лекарственных средств выполняют непосредственно перед их добавлением в среду для культивирования клеток. Количественная обратная транскрипция, совмещенная с полимераэной цепной реакцией (К-ОТПЦР). Количественная ОТ-ПЦР используется для сравнения уровней мРНК PMP22 после лекарственной стимуляции относительно мРНК RPS9 домашнего хозяйства в клеточной линии RT4-D6P2T. После 8 ч лекарственной инкубации клетки ополаскивают холодным, стерилизованным PBS, суммарную РНК из каждого образца клеток выделяют и очищают из SC, используя микронабор реактивовQiagen RNeasy (Qiagen 74004). Проводят количественную оценку нуклеиновых кислот с помощью спектрофотометра Nanodrop, используя 1 мкл образца РНК. Целостность РНК определяют посредством приспособления BioAnalyzer (Agilent). Проводят обратную транскрипцию РНК с образованием кДНК согласно стандартному протоколу. Матрицы кДНК для ПЦР-амплификации синтезируют на 100 нг суммарной РНК, используя обратную транскриптазу Superscript (Invitrogen18064-014), в течение 60 мин при 42C в присутствии олиго(дТ) в конечном объеме, равном 20 мкл. кДНК подвергают ПЦР-амплификации, используя систему "LightCycler 480" (Roche Molecular Systems Inc.). Каждую кДНК разбавляют в пять раз перед использованием в ПЦР-амплификации. 2 мкл данных кДНК вводят в реакцию ПЦР вместе с 5 мкл смеси Master mix kit (Roche 04-887301001) в конечном объеме, равном 10 мкл. Предварительные эксперименты проводят, чтобы удостовериться, что количественные измерения были выполнены в экспоненциальную фазу процесса амплификации для обеих последовательностей и что эффективность реакции целевого гена аналогична таковой гена домашнего хозяйства. Химические наборы Taqman были использованы для проведения анализа ОТ-К-ПЦР. Реакцию ПЦР выполняют путем амплификации PMP22 крысы (NM017037) с использованием 500 нМ каждого праймера (F и R) и 200 нМ зонда Taq1 фирмы Sigma-Aldrich. Используются следующие условия ПЦР: денатурация 5 мин при 95C с последующими 10 с при 95C, 40 с при 60C и 10 с при 72C и 1 мин при 40C (сорок циклов амплификации). Относительные уровни экспрессии гена PMP22 измеряют, следуя способу Ct, сравнивающему количество продуктов,синтезируемых на целевом гене PMP22, и анализу экспрессии PMP22 способом проточной цитометрии(FACS) после 8, 24 и 48 ч инкубации с лекарственными средствами, супернатанты первичных шванновских клеток крысы извлекают, центрифугируют и замораживают. SC разъединяют трипсином-EDTA. Как только большинство клеток образует суспензию, трипсин нейтрализуют, используя DMEM с 10% FCS. Супернатанты с клетками извлекают и центрифугируют. Клеточные осадки переносят в микропробирки, промывают однократно в PBS и фиксируют специальным раствором (AbCys Reagent A BUF09B). Через 10 мин клетки однократно ополаскивают PBS и хранят при 4C. Через пять дней после фиксации клеток все клеточные препараты с различным временем инкубации метят, используя следующий протокол. Клетки центрифугируют при 7000 об/мин в течении 5 мин и осадки суспендируют в пермеабилизующем растворе (AbCys Reagent В BUF09B) и метят первичным антителом PMP22 (Abeam ab61220,1/50) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем клетки центрифугируют при 7000 об/мин в течение 5 мин и клеточные осадки ополаскивают однократно в PBS. Добавляют вторичное антитело, соединенное с Alexa Fluor 488 (антикроличьи IgG козы, Molecular Probes A11008, 1/100), инкубируют в течение одного часа при комнатной температуре. Затем клетки центрифугируют при 7000 об/мин в течение 5 мин и клеточные осадки ополаскивают однократно в PBS. Мечение увеличивается при добавлении третичного антитела, соединенного с Alexa Fluor 488 (антикозьи IgG курицы, Molecular Probes A21467,1/100), инкубации в течение одного часа при комнатной температуре. Затем клетки ополаскивают однократно в PBS. Контроль без какого-либо антитела (немеченые клетки) выполняют для определения уровня аутофлуоресценции и настройки чувствительности фотоумножителей. Контроль как с вторичным, так и с третичным антителами, но без первичного антитела, выполняют для оценки неспецифического связывания антител. Сбор и анализ данных выполняют с помощью цитометра FACS Array и программного обеспеченияFACS Array (Becton Dickinson) на 5000 клетках. Анализируют прямое рассеяние (FSC), коррелирующее с клеточным объемом (размером), и боковое рассеяние (SSC), зависящее от уровня сложности внутренней организации клетки (зернистости). Для оценки экспрессии PMP22 анализ выполняют на всех клетках и вычисляют процент положительных клеток. Положительными клетками являются клетки с интенсивностью флуоресценции выше, чем в контроле с вторичным антителом. Для количественной оценки числа SC клетки в контрольной среде анализируют, используя антитела анти-белок-S100. Клетки обрабатывают в соответствии со следующим протоколом: шванновские клетки окрашивают антителом анти-белок-S100 (Dako S0311, 1/100) в течение 1 ч при комнатной температуре. Данное антитело метят в соответствии с протоколом, описанным выше для иммунного окрашивания PMP22, но без инкубации с третичным антителом. Результаты. Авторы изобретения обнаружили, что уровни мРНК PMP22 (фиг. 1) значительно снижены в первичных шванновских клетках и что 1 мкМ доза пилокарпина вызывает важнейшую отрицательную регуляциюPMP22. : p0,05; ; p0,001; значимо отличается от контроля (парный t-критерий Стьюдента). Справа,при 24 ч воздействии пилокарпина, уровень экспрессии мРНК PMP22 значительно снижался в первичных шванновских клетках даже при низких дозах (10 и 50 нМ). Подобным образом мы обнаружили, что пилокарпин (1 мкМ) значимо снижает уровень экспрессии белка PMP22 после 24 ч инкубации, на 38% в первичных шванновских клетках. Этот эффект остается значимым после 48 ч инкубации (-18%, p0,001). В другом эксперименте лекарственные средства (перечисленные в таблице) инкубируют с клеточной линией шванномы крысы в течение 8 ч, и уровень экспрессии мРНК PMP22 был количественно определен ОТ-К-ПЦР. Авторы изобретения обнаружили (фиг. 2), что хотя метимазол (0,1 нМ) и пилокарпин (0,001 нМ),используемые в виде отдельных лекарственных средств, не оказывают значительного воздействия на уровень экспрессии мРНК PMP22, данный уровень значительно снижался при их комбинировании. Синергичная активность этих двух лекарственных средств проиллюстрирована на фиг. 2. Эти данные демонстрируют, что при выбранных концентрациях комбинация пилокарпина и метимазола способна в значительной степени снижать экспрессию гена PMP22 в культивируемых клетках шванномы, в то время как пилокарпин и метимазол, которые активны в высоких концентрациях в первичных шванновских клетках, не снижают уровень экспрессии данного гена в этой системе.II. Эксперименты in vivo в животной модели CMT. Авторы изобретения исследовали терапевтический эффект соединений и комбинаций в трансгенной крысиной модели CMT, гемизиготных трансгенных по PMP22 крысах, имеющих три дополнительные копии гена PMP22 мыши, у которых выявляются признаки демиелинизации в периферических и черепно-мозговых нервах (Sereda et al., 1996; Grandis et al., 2004). На уровне мРНК, в среднем 1,6-кратное увеличение экспрессии PMP22 в CMT-крысах коррелирует с клиническим фенотипом. Предполагаемый пороговый уровень сверхэкспрессии PMP22, при котором ген дикого типа превращается в ген заболевания,представляет очевидную "мишень" для направленного терапевтического воздействия с целью снижения экспрессии гена PMP22. Данная крысиная модель CMT является хорошей аппроксимацией заболевания CMT1 А у человека с клинической точки зрения. У взрослых особей крыс с CMT выявляют замедление скорости проведения нервного импульса по двигательным нервам, имеющей значения, близкие к таковым у пациентов сCMT1 А, т.е. менее 50%. После стимуляции седалищного нерва суммарные потенциалы действия мышц демонстрируют сниженные амплитуды и десинхронизацию. Гистологические и электрофизиологические изменения предшествуют выраженным клиническим симптомам двигательной недостаточности (Seredaet al., 1996, 2003). Аксональная дегенерация, подтвержденная гистологической выраженной мышечной атрофией, сопряжена с симптомами CMT1 А у человека. Крысы с CMT уже были использованы в качестве модели для экспериментальной терапии CMT1 А(Meyer zu Hrste et al. 2007). В этой модели заболевания CMT1 А выраженные и скрытые признаки патологии (недостаточность опорно-двигательного аппарата, определенные изменения в электрофизиологических и тканевых характеристиках и, наконец, уровень повышенной экспрессии PMP22), по-видимому,наиболее приближены к таковым, обнаруженным у пациентов с CMT1 А. Авторы изобретения исследовали терапевтический эффект соединений и комбинаций в крысиной модели. Формируют экспериментальные группы с молодыми крысами обоих полов раздельно. Крыс включают в состав групп, следуя способу случайного отбора, основанного на массе тела. В некоторых экспериментах случайный отбор основан на выполнении заданий крысами в тесте на брусьях. Оба пола представлены отдельными контрольными группами однопометных животных, которые численно равны или больше групп, подвергнутых лечению. Крыс подвергали лечению постоянно с помощью лекарственных средств - принудительным питанием или инъекциями с помощью осмотического подкожного насоса Alzet (DURECT Corporation Cupertino, CA) в зависимости от биодоступности каждого лекарственного средства в течение 3 или 6 недель. Животных взвешивают дважды в неделю, чтобы корректировать дозы в соответствии с растущей массой тела. Если осмотический насос выбран для обеспечения лечения, дозы лекарственного средства вычисляют, исходя из вычисленной средней массы тела животных, ожидаемой для их возраста за период продолжительности работы насоса (6 недель). Насосы повторно имплантируют при необходимости с соответствующим протоколом анестезии. Поведенческие тесты. Каждые три или четыре недели животные проходят поведенческий тест. Каждый тест проводится одним и тем же исследователем в той же самой комнате в то же самое время суток; эта гомогенность сохраняется на протяжении всего эксперимента. Все способы лечения и определение генотипа осуществляются вслепую исследователем. "Тест на брусьях" и "сила сжатия" в основном используется для оценки выполнения задач на протяжении исследования. Схема проведения теста на брусьях может меняться по мере роста животного (чтобы предотвратить систематическую ошибку вследствие появления навыков, например). Анализ силы сжатия позволяет определить едва уловимые различия в осуществлении сжатия, которое, по-видимому, состоит из мышечной силы, состояния чувствительности (например, болевая тактильная чувствительность может изменять измеренные значения силы), поведенческой составляющей ("мотивации"). Значения различаются для передних и задних конечностей и, в значительной степени, зависят от возраста животных. Анализ силы сжатия измеряет силу, с которой животное держится за стержень своими передними лапами или задними лапами по отдельности. Динамометр размещают на стержне для измерения силы(Force Gauge FG-5000A). Экспериментатор удерживает крысу таким образом, чтобы она ухватилась за стержень либо своими передними лапами, либо задними лапами, и мягко тянет крысу назад, пока она не отпустит стержень. Регистрируют силу, измеренную в момент, когда животное отпускает стержень. Два удачных испытания, измеряющих силу передних лап, и два удачных испытания, измеряющих силу задних лап, для каждого животного подвергают анализу; указывают (в виде N) только максимальный показатель (один для передних лап и один для задних лап). Тест на брусьях. Тест на брусьях оценивает способность крыс удерживаться на фиксированной перекладине. Рмр 22 крысы, у которых выявлена мышечная слабость, демонстрируют недостаточное выполнение данного теста (Sereda et al, 1996). Крысу ставят на ее четыре лапы на середине перекладины (диаметр: 2,5 см; длина; 50 см; на 30 см выше стола). Испытания проводят последовательно; количество (5 или 10) и продолжительность (30 или 60 с) испытаний в наших экспериментах зависели от партии животных. Эта вариабельность в тестировании была введена с целью определения плана проведения испытания, подходящего для лучшего выявления двигательной недостаточности у крыс с CMT в ходе экспериментов. Показатели выполнения теста регистрируются при каждой сессии число испытаний, необходимое для удерживания в течение 60 с или 30 с на перекладине; среднее значение времени, проведенного на брусьях (т.е. латентный период падения), в каждом испытании и среднее значение за сессию. В методике эксперимента сессия заканчивается после того, как крыса оставалась дважды на брусьях в течение заданного времени, т.е. 30 или 60 с. Истечение заданного времени (30 или 60 с) относят к незавершенным испытаниям; число падений. Оценка общего состояния здоровья. Осуществляют мониторинг на протяжении эксперимента за массой тела, выраженными признаками(появлением шерстного покрова, осанкой, тремором) у животных. Для регистрации используется оценочная шкала: 0=норма, 1=отклонение от нормы. Походка. За каждой крысой вели наблюдение в новой крысиной клетке (размеры 553318 см) без подстилки в течение 5 мин. Походку крыс оценивали по 4-балльным показателям 0 баллов: нормальная походка (плавная); 1 балл: аномальная походка (шаткая или у крысы имеется незначительная хромота); 2 балла: умеренная недееспособность (крыса тащит свою лапу и способна ставить ее правильно и идти); 3 балла: выраженная недееспособность (крыса тащит свою одну лапу или обе задние лапы, но не способна ставить ее/их правильно). Тестирование на наклонной плоскости. Двигающееся устройство имело площадку из органического стекла размером 3050 см, которая могла наклоняться под углом от 0 (горизонтальное положение) до 60. Каждую крысу сначала помещали на площадку, наклоненную под углом 25 головой вверх (положение с поднятой головой); выполняются два испытания с интервалом в 1 мин. Через 30 мин тот же самый эксперимент проводится на площадке,наклоненной под углом 35, затем на площадке, наклоненной под углом 40. В течение этого времени крысу возвращали в ее клетку. Площадку чистили после каждого испытания. Выполнение теста крысами оценивали по 4-балльной системе 0 баллов: соскальзывание отсутствует; 1 балл: незначительное соскальзывание (одной или двумя лапами); 2 балла: умеренное соскальзывание (4 лапами), но не до конца площадки; 3 балла: крыса соскальзывает до самого низа площадки. Электрофизиология. При необходимости крысам проводят электрофизиологическую оценку: измеряют скорость проводимости чувствительного нерва, а также латентный период и амплитуду потенциалов. Измерение скорости проводимости нерва (NCV) и потенциальная восприимчивость (подкожная) были выполнены с использованием цепи, состоящей из амплификатора (AM System 1700 и/или EMG-UTC), стимулятора (Ha- 15023380vard apparatus 223) и компьютера, оборудованного картой сбора данных и программного обеспечения для сбора данных (SPATOL) и для обработки сигнала (CALVISE). Животным проводили анестезию, используя кетамин/ксилазин и содержали на термостатированной площадке при 37C на протяжении всего теста (анестетики были добавлены по мере необходимости). Стимулирующие серебряные игольчатые электроды были вставлены в проксимальную часть хвоста. Измерительный электрод был вставлен подкожно на глубину приблизительно в 1 мм в дистальной части хвоста (на расстоянии 4 и 6 см от стимулирующего электрода). Прямоугольные стимулы постоянного тока продолжительностью 0,2 с были применены с частотой 0,3 в секунду. Ответы, усиленные в 500020000 раз, были визуализированы и собраны в компьютерную систему сбора данных. Латентные периоды были измерены при каждом возникновении волны (определяется как значительное четко идентифицируемое отклонение от базовой линии). Размах амплитуды наибольших отклонений был вычислен для определения максимальной амплитуды. Для каждого снятия показаний были выполнены измерения усредненных ответов по меньшей мере на десять идентичных стимулов. Связанная с чувствительностью скорость проводимости (SNCV) была вычислена путем деления расстояния между стимулирующими катодами на расстояние между соответствующими латентными периодами, полученными из двух участков стимуляции. Гистологические измерения. На заключительных испытаниях (терапию проводили до последнего дня) крыс подвергали эвтаназии. Задние лапы крыс дикого типа и трансгенных крыс были вырезаны и фиксированы иммерсией в 4%ном растворе формалина в течение 48 ч и перенесены в 10% раствор формалина на 2 дополнительных дня. После ополаскивания в течение 15 мин в воде они были затем подвергнуты декальцификации в течение 26 ч (Labonord Decalcifiant rapide n3 DC309128300). Затем лапы были рассечены в поперечном направлении на две части, которые были окрашены осмием. Ткани выдерживали в растворе, содержащем свыше 1% тетраоксида осмия (VWR, Osmium VIII oxide 0.5g 20551.076), в течение 24 ч и затем их ополаскивали деионизованной водой в течение 4-6 ч. Затем ткани обезвоживали в автомате для заливки гистологического препарата (VIP2000 Vertical, BayerDiagnostics) и классическим способом заключали в парафин. Тканевые срезы толщиной 4 мкм обезвоживали поочередным промыванием ксилолом и спиртом и приготавливали препараты для микроскопического исследования (Pertex glue, T/00811MICROM) с целью дальнейшего анализа. Анализ изображения. Срезы от 6 животных были тщательно отобраны для иллюстрации схожести на анатомическом уровне (место соединения пальцев лапы) и проанализированы в микроскопе Olympus, совмещенного с программным обеспечением микровидения Saisam (Archimed Pro 1997-2000 by Microvision Instruments). Периферический нерв локализуют и анализируют следующим образом: подсчитывают число цилиндрических миелиновых волокон (в тяже нерва по меньшей мере 150 волокон на одно животное). Определяют диаметры цилиндрической оси, соответствующие внутренним периметрам миелиновых волокон, и внешние периметры тех же волокон. Затем сравнивали распределение толщины миелина и диаметра аксонов у животных дикого типа и трансгенных животных. Более того, измеряли оптическую плотность одинакового среза нерва с целью определения, выше ли число немиелинизированных волокон (не видимых на осмиевых срезах и, таким образом, не анализированных) у трансгенных животных (отображается по общему внешнему виду границ участка нерва). Наконец, все мышцы стопы, присутствующие на одинаковом срезе, нежели использовался для анализа нерва, вручную очерчивали для определения общей мышечной поверхности. Затем вычисляли коэффициент "мышечное содержание/поверхность участка". Седалищные нервы вырезали и использовали для взвешивания, а также для молекулярнобиологических и/или биохимических исследований (ОТ-К-ПЦР для мРНК PMP22 и Вестерн-блоты для количественных оценок миелиновых белков; Cayman's EIA kits -для биохимических маркеров, таких как метаболиты арахидоновой кислоты, количественное определение методом ВЭЖХ для стероидов и аминов, ELISA для CNTF, IL-6 и т.д.), выполненных в соответствии с обычно используемыми протоколами,и для аналитических методик (измерений концентраций лекарственного средства). Мышцы задних конечностей (камбаловидная мышца) препарировали, взвешивали, быстро замораживали и хранили при -80C до проведения анализа (так же как для седалищных нервов). Результаты. Метимазол (0,35 мг/кг суточной дозы) и пилокарпин (0,2 мг/кг суточной дозы), применявшиеся путем принудительного кормления, улучшали выполнение теста на брусьях на протяжении процедуры лечения (фиг. 3), в то время как соединение РХТ 25 (которое представлено здесь только ради сравнения) едва демонстрировало какое-либо улучшение. Двигательная активность была в среднем в 3 раза менее результативной у различных TG крыс сCMT, леченных плацебо, при сравнении с группой дикого типа (WT). Лечение метимазолом и пилокарпином обеспечивало улучшение активности TG-животных в этом эксперименте, при этом эффект стано- 16023380 вится статистически значимым уже после 8 недель принудительного кормления. Данные демонстрируют, что крысы с CMT, леченные метимазолом и пилокарпином в этих относительно высоких дозах, становились значительно более исполнительными по сравнению с группой, применявших плацебо. Группа, леченная лекарственным препаратом пилокарпином, хотя и восстанавливала уровень двигательной активности, значимо не отличается от группы WT, леченной плацебо.SNAP, измеренный в дистальной части хвоста, как оказалось значительно снижен в TG-группе, леченной плацебо, что может отражать существенную аксональную потерю, которая, в свою очередь, происходит в результате демиелинизации. Этот электрофизиологический параметр, как оказалось, значительно улучшался при лечении соединением А (фиг. 4), в то время как SNAP у трансгенных крыс, леченных соединением В, приближается к номинальному 5% пороговому уровню значимости. Это наблюдение позволяет предположить, что действие метимазола может предотвращать ахональную потерю, даже если состояние миелинизации периферических нервов заметно не улучшается. Действие пилокарпина, по-видимому, фактически, то же самое, даже если из-за внутригрупповой вариабельности различие по параметру с группой, леченной плацебо, не достигает статистической значимости. ПриCMT1 А амплитуда потенциала действия чувствительного нерва (SNAP) была более снижена и продолжительность SNAP более длительная нежели при CMT2. Уменьшение амплитуд составного мышечного потенциала действия (СМАР) и SNAP при CMT1 А является, вероятно, комбинированным влиянием демиелинизации и аксональной дисфункции (Bienfait et al., 2006). В конце исследования был проведен морфометрический анализ. Количественная оценка тканей задних конечностей выявила, что значительно сокращено количество седалищных нервов и камбаловидных мышц у самок крыс с CMT, леченных плацебо, при сравнении с контрольными WT-крысами (фиг. 5). Эти недостатки, как оказалось, полностью корректируются лечением соединением А: абсолютная масса мышц и нервов еще выше, чем у контрольных WT-крыс, хотя общая масса тела достаточно уменьшилась в группе, леченной соединением А, по сравнению с группой, леченной плацебо (данные не показаны). Воздействие лечения пилокарпином на мышцы и нервы задних конечностей, как оказалось,меньше, нежели таковое метимазолом.Mix1 (таблица) из сниженных в 50 раз доз метимазола (4 мкг/кг) и пилокарпина (7 мкг/кг) улучшает балльные показатели походки самок крыс после 10 недель лечения принудительным кормлением, как показано на фиг. 6. Наблюдалась положительная тенденция после 6 недель лечения. Следующие фигуры иллюстрируют положительное воздействие mix 2 (таблица), состоящей из пилокарпина (7 мкг/кг), метимазола (4 мкг/кг), миферпристона (40 мкг/кг), налтрексона (4 мкг/кг), баклофена (60 мкг/кг) и сорбитола (2 мг/кг), на самцов крыс в 3 различных поведенческих и электрофизиологических тестах. Фиг. 7 показывает, что Mix2 в этих дозах снижает подъем порогового уровня возбудимости, обнаруженный у крыс с CMT, леченных плацебо, после электрической стимуляции хвостового нерва. Фиг. 8 демонстрирует положительное воздействие Mix2 на выполнение теста на брусьях самцами; после 4 недель лечения число падений уменьшалось, и время, проведенное на перекладине, увеличивалось. Фигура иллюстрирует факт того, что Mix2 также улучшает характеристики походки самцов крыс после 3 недель лечения; процент крыс, передвигающихся плавной походкой, увеличивается на 35% для леченных крыс по сравнению с крысами с CMT, леченных плацебо. Подобные результаты получаются для других комбинаций, и сводная информация по результатам показана в таблице. Таблица 1. POS: положительная динамика симптомов заболевания in vivo Эти данные демонстрируют, что in vivo комбинации и схемы приема лекарств по данному изобретению могут обеспечивать эффективное терапевтическое лечение CMT. Лечение или схема приема лекарственного препарата назначается перорально за день до первой интраперитонеальной инъекции 3 мг/кг оксалиплатина (D-1) до предпоследнего дня тестирования (D16). Животным, входящим в состав леченной оксалиплатином группы, вводили ежедневную дозу дистиллированной воды (10 мл/кг). Животным вводили дозы исследуемого лекарственного препарата и дистиллированной воды ежедневно утром, в то время как оксалиплатин вводили во второй половине дня. В течение дней испытаний (т.е. D1, D4, D10) лечение и дистиллированную воду применяли после испытания. Что касается дня испытания (D4), включающего применение соединений и наполнителя и инъекции оксалиплатина, лечение и дистиллированную воду применяли до инъекции оксалиплатина после испытания. Животным из группы, леченной контрольным препаратом, вводили дозы веществ только во время дней испытания (т.е., D1, D4, D10 и D17). Холодовую аллодинию оценивают путем измерения ответов на термальную неноцицептивную стимуляцию (ацетоновая проба) на D1 (около 24 ч после первой инъекции 3 мг/кг оксалиплатина (острый эффект оксалиплатина), на D4, D10 (длительный эффект оксалиплатина) и на D17 (остаточный эффект оксалиплатина спустя одну неделю после завершения лечения). Испытание проводили, используя ацетоновую пробу через 2 часа после применения контрольного вещества. Контрольное вещество представляет собой габапентин, 100 мг/кг, перорально (один раз в день 4 дня испытания). Ацетоновая проба. Холодовую аллодинию оценивают, используя ацетоновую пробу. В этом тесте, латентный период отдергивания задней лапы измеряется после нанесения капли ацетона на подошвенную поверхность обеих задних лап (время реакции), и интенсивность ответа оценивалась в баллах (холодовая оценка в баллах). Время реакции на охлаждающее действие ацетона измеряется в течение 20 с (прекращение действия) после нанесения ацетона. Реакции на ацетон также классифицируют по 4-балльной шкале: 0 (нет ответа); 1 (быстрое отдергивание, резкое движение лапы); 2 (пролонгированное отдергивание или выраженное резкое движение лапы); 3 (повторяющиеся отдергивания лапы с лизанием или кусанием). Крыс подвергают шести испытаниям. Для каждой экспериментальной группы результаты выражаются в виде суммарной холодовой оценки в баллах, определенной как сумма вместе взятых 6 оценок в баллах для каждой крысы SEM. Минимальная оценка в баллах, равная 0 (никакой реакции на любое из 6 испытаний), и максимально возможная оценка в баллах, равная 18 (повторяющиеся отдергивания и лизание или кусание лап в каждом из шести испытаний). Габапентин: источник - Zhejiang Chiral Medicine Chemicals, Китай. Оксалиплатин: источник - Sigma, Франция. Результаты. Результаты испытания mix2 в опытах с оксалиплатином показаны на фиг. 10. Очевидно, что mix2 защищает животных от нейропатии, вызванной лечением токсическим лекарственным средством.IV. Эффект in vivo в модели ALS. Животная модель. Была выбрана крысиная модель SOD1G93A (созданная Howland D.S. et al., 2002) для имитации амиотрофического латерального склероза. В данной модели повышена экспрессия мутантного гена SOD1 в спинном мозге, многих областях головного мозга, а также периферических тканях (Howland D.S. et al.,2002). Начало болезни двигательного нейрона в данной модели происходит приблизительно на 115 день(Howland D.S. et al., 2002); она возникает в виде аномальных передвижений задними лапами. За несколько дней возникает паралич задних лап. Методики экспериментов. Были получены колонии путем скрещивания крыс-производителей SOD1G93A с самками крыс Sprague Dawley. Гетерозиготных крыс SOD1G93A идентифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) ДНК хвоста с праймерами, специфичными для hSOD1 (Howland D.S. et al., 2002). Животных содержали в комнате с контролируемой иллюминацией (освещение на 0500-1900 ч) и температурой(231C) и предоставленным свободным доступом к еде и воде. Все методики с участием животных в настоящем исследовании были выполнены в соответствии со стандартами основополагающих принципов ухода за животными. Измерение массы тела выполнялось каждую неделю, и поведенческие тесты начинали проводить в возрасте 60 дней и продолжали до ожидаемого результата. Способы лечения проводили каждый день пероральным или подхожным способом в возрасте 5 недель. Визуальный анализ: характеристика общего внешнего вида. За каждой крысой проводили наблюдение в новой крысиной клетке (размеры 553318 см) без подстилки в течение пяти минут. Фиксировали 5 различных параметров. Походка. 0 баллов: нормальная походка (плавная); 1 балл: аномальная походка (шаткая или у крысы имеется незначительная хромота); 2 балла: умеренная недееспособность (крыса тащит свою лапу и способна ставить ее правильно и идти); 3 балла: выраженная недееспособность (крыса тащит свою одну лапу или обе задние лапы, но не способна ставить ее/их правильно); Внешний вид шерстного покрова. 0 баллов: чистый и шелковистый шерстный покров; 1 балл: пилоэрекция или грязный шерстный покров. Тремор. 0 баллов: отсутствие тремора; 1 балл: тремор; Положение тела. 0 баллов: нормальное; 1 балл: аномальное (уплощенное или с выгнутой спиной). Положение задних лап. 0 баллов: нормальное; 1 балл: раздвинутые задние лапы. Тестовая оценка двигательной активности: характеристика недостаточности двигательной активности. Этот тест оценивает способность крыс переворачиваться самостоятельно в течение 30 с, будучи перевернутым на любую сторону (рефлекс переворачивания) (Gale К. et al., 1985). Непараметрическая система балльной оценки была использована, следуя данным критериям (Matsumoto A. et al., 2006; Thonhoff J.R. et al., 2007). 0 баллов: крыса не способна переворачиваться самостоятельно с любой стороны в течение 30 с; 1 балл: крыса не способна переворачиваться самостоятельно только с одной стороны в течение 30 с; 2 балла: крыса способна переворачиваться самостоятельно с двух сторон в течение 30 с, но не способна стоять в клетке; она постоянно перемещает определенные части тела; 3 балла: крыса способна переворачиваться самостоятельно с двух сторон в течение 30 с, не способна стоять в клетке, но не перемещает определенные части тела; 4 балла: крыса способна переворачиваться самостоятельно с двух сторон в течение 30 с, способна стоять в клетке, но имеет очевидные функциональные нарушения; 5 баллов: крыса способна переворачиваться самостоятельно с двух сторон в течение 30 с, способна стоять в клетке и не имеет очевидных функциональных нарушений. Терминальной стадией заболевания считается состояние с 0 баллов; крысу затем подвергают эвтаназии. Тест на наклонной плоскости: характеристика недостаточности двигательной активности. Двигающееся устройство имело площадку из органического стекла размером 3050 см, которая могла наклоняться под углом от 0 (горизонтальное положение) до 60. Каждую крысу сначала помещали на площадку, наклоненную под углом 25 головой вверх (положение с поднятой головой); выполняются два испытания с интервалом в 1 мин. Через 30 мин тот же самый эксперимент проводится на площадке, наклоненной под углом 35, затем на площадке, наклоненной под углом 40. В течение этого времени крысу возвращали в ее клетку. Площадку чистили после каждого испытания. Выполнение теста крысами оценивали по 4-балльной системе 0 баллов: соскальзывание отсутствует; 1 балл: незначительное соскальзывание (одной или двумя лапами); 2 балла: умеренное соскальзывание (4 лапами), но не до конца площадки; 3 балла: крыса соскальзывает до самого низа площадки. Тест на проволочной сетке: характеристика двигательной способности в затруднительной ситуации. Проволочная сетка была размещена в контакте с коробкой наверху (под углом 70) и краем стола внизу (Thonhoff J.R. et al., 2007). Каждую крысу помещали внизу проволочной сетки и стимулировали подниматься размещением их детенышей в коробке вверху. Каждую крысы тренировали один раз в неделю (3 испытания). Регистрируемым параметром был латентный период для достижения верхней части проволочной сетки. Тест открытого поля: характеристика локомоторной активности. Локомоторная активность была измерена в коробке из органического стекла (454530 см, ActiTrack by BIOSEB, Лион, Франция) с 16 лучами фотоэлемента, следующими в двух направлениях, 1 и 5 см выше дна. Спонтанную и исследовательскую активность каждой крысы оценивали в течение 3 ч. Регистрируется 4 параметра (суммарное пройденное расстояние, число подъемов на задние лапы,процент пройденного расстояния и проведенного времени в центре открытого поля). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Комбинация для лечения заболевания Шарко-Мари-Тута (CMT) или связанного с CMT нарушения, содержащая пилокарпин и метимазол или пилокарпин и карбимазол или их соли и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. 2. Комбинация по п.1, где заболевание Шарко-Мари-Тута представляет собой CMT1 А. 3. Комбинация по любому из предыдущих пунктов, дополнительно содержащая по меньшей мере одно дополнительное активное соединение, выбранное из группы, состоящей из мифепристона, баклофена, сорбитола, налтрексона, флурбипрофена и кетопрофена или их солей. 4. Комбинация по п.3, которая содержит любую из следующих комбинаций соединений: пилокарпин, метимазол, мифепристон, сорбитол, налтрексон и баклофен; пилокарпин, метимазол, мифепристон и сорбитол; пилокарпин, метимазол, мифепристон, сорбитол и баклофен; пилокарпин, метимазол, мифепристон, сорбитол и кетопрофен; пилокарпин, метимазол, мифепристон, сорбитол и флурбипрофен; пилокарпин, метимазол и баклофен; пилокарпин, метимазол и мифепристон; пилокарпин, метимазол и сорбитол; пилокарпин, метимазол и налтрексон; пилокарпин, метимазол и кетопрофен; пилокарпин, метимазол и флурбипрофен или их соли. 5. Комбинация по любому из пп.1-4, где соединения в указанной комбинации предназначены для совместного или раздельного применения, одновременно или последовательно. 6. Композиция в качестве лекарственного средства, содержащая пилокарпин и метимазол или пилокарпин и карбимазол или их соли и необязательно фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. 7. Применение композиции, содержащей пилокарпин и метимазол или пилокарпин и карбимазол для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания Шарко-Мари-Тута (CMT) или связанного с CMT нарушения. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая пилокарпин и метимазол или пилокарпин и карбимазол или их соли и необязательно фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. 9. Способ лечения заболевания Шарко-Мари-Тута (CMT) или связанного с CMT нарушения, причм указанный способ включает совместное, раздельное или последовательное введение субъекту, по меньшей мере, пилокарпина и метимазола или пилокарпина и карбимазола или их солей.