Соединения (тиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ила в качестве соединений, обладающих двойной активностью обратных агонистов h1/антагонистов 5-ht2a

СОЕДИНЕНИЯ (ТИЕНО[2,3-b][1,5]БЕНЗОКСАЗЕПИН-4-ИЛ)ПИПЕРАЗИН-1-ИЛА В КАЧЕСТВЕ СОЕДИНЕНИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ДВОЙНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ОБРАТНЫХ АГОНИСТОВ H1/АНТАГОНИСТОВ 5-HT2A Приведены описания двойного антагониста рецептора H1/5-HT2A формулы Ледгард Эндрю Джеймс (US) Лыу Т.Н., Угрюмов В.М. (RU) применения указанного соединения и способы получения указанного соединения.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US) Гистамин играет важную роль в ряде физиологических процессов благодаря его взаимодействию по меньшей мере с четырьмя различными рецепторами, сопряженными с G-белком, - рецепторами Н 1-Н 4. В ЦНС рецепторы H1 играют ключевую роль в регуляции цикла сна, и известно, что антагонисты/обратные агонисты H1 вызывают сонливость. Аналогично, серотонин играет важную роль в ряде физиологических процессов благодаря его взаимодействию по меньшей мере с 14 различными рецепторами, сопряженными с G-белком. Модулирование рецепторов 5-HT2A в ЦНС играет ключевую роль в регуляции цикла сна, и было показано, что антагонисты 5-HT2A улучшают медленноволновой сон и поддержание сна у пациентов с бессонницей. Соединения, обладающие активностью обратных агонистов или антагонистов H1 или 5-HT2A, применялись при лечении бессонницы (например, доксепин и тразодон соответственно) и показали значительные фармакологические эффекты в исследованиях сна на животных. Тем не менее, в настоящее время не существует коммерчески доступных соединений, обладающих селективной двойной активностью обратных агонистов/антагонистов H1/5-HT2A. В WO 2007/022068 описаны некоторые замещенные соединения (тиено[2,3-b][1,5]бензодиазепин-4 ил)пиперазин-1-ила и (тиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ила для лечения нарушений сна. Согласно настоящему изобретению предложены 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ил]-2,2-диметилпропановая кислота и фармацевтически приемлемые соли указанной кислоты, имеющие высокую активность обратных агонистов по отношению к рецептору HI, высокую активность антагонистов по отношению к рецептору 5-НТ 2 А и хорошую селективность к указанным рецепторам, в частности по отношению к другим рецепторам гистамина, рецепторам серотонина и другим физиологически значимым рецепторам, в частности по отношению к рецептору 5-HT2C, рецептору GABAA, мускариновым рецепторам, допаминергическим рецепторам, адренергическим рецепторам и каналу hERG. В моделях на животных также было показано, что указанные соединения можно применять для лечения нарушений сна, характеризующихся неудовлетворительным поддержанием сна. По этой причине полагают, что указанные соединения подходят для лечения нарушений сна,характеризующихся неудовлетворительным латентным периодом сна или неудовлетворительным поддержанием сна, или обеими указанными особенностями, таких как лечение бессонницы, как, например,хроническая или транзиторная первичная бессонница, или хроническая или транзиторная вторичная бессонница, или оба указанных нарушения. Примеры вторичной бессонницы включают, без ограничения,бессонницу, связанную с депрессивными расстройствами (например, большим депрессивным расстройством, дистимией и/или циклотимией), бессонницу, связанную с тревожными расстройствами (например,общим тревожным расстройством и/или социальной фобией), бессонницу, связанную с болью (например, фибромиалгией, хроническими болями в костях или суставах, такими как боли, связанные с воспалительным артритом или остеоартритом, или болью при диабетической нейропатии), бессонницу, связанную с аллергическими реакциями (например, аллергической астмой, зудом, ринитом, заложенностью и т.д.), бессонницу, связанную с заболеваниями легких или дыхательных путей (например, синдромом обструктивного апноэ во сне, реактивным заболеванием дыхательных путей, и т.д.), бессонницу, связанную с психиатрическими нарушениями, деменцией и/или нейродегенеративными заболеваниями, и/или бессонницу, связанную с нарушениями циркадного ритма сна (например, нарушением сна при сменной работе, синдромом смены часовых поясов, синдромом отсроченного наступления фазы сна, синдромом опережения фазы сна и нарушенного цикла сна-бодрствования, не равного 24 ч). Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению демонстрируют усиление действия указанных соединений на фазу сна без быстрых движений глаз (ББДГ-сон) при совместном введении с селективными ингибиторами обратного захвата серотонина Согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы I или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения. Другими словами, 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ил]-2,2 диметилпропановая кислота или фармацевтически приемлемая соль указанной кислоты. Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или фармацевтически приемлемую соль указанного соединенияв комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем. Кроме того, согласно указанному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для лечения бессонницы, как, например, бессонницы, характеризующейся продленным латентным периодом сна или неудовлетворительным поддержанием сна, или обеими указанными особенностями, например, первичной бессонницы, синдрома смены часовых поясов, нарушения сна при сменной работе, синдрома отсроченного наступления фазы сна, синдрома опережения фазы сна и/или нарушенного цикла сна-бодрствования, не равного 24 ч, содержащая соединение формулы I или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями. Согласно другому варианту реализации указанного аспекта настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или разбавителем и,необязательно, другие терапевтические ингредиенты. Согласно другому варианту реализации указанного аспекта настоящего изобретения фармацевтическая композиция дополнительно содержит второй терапевтический агент, представляющий собой ингибитор обратного захвата серотонина, как, например, циталопрам, пароксетин, флуоксетин и/или флувоксетин. Также согласно настоящему изобретению предложен способ лечения бессонницы, как, например,бессонницы, характеризующейся продленным латентным периодом сна, или неудовлетворительным поддержанием сна, или обеими указанными особенностями, как, например, первичной бессонницы, синдрома смены часовых поясов, нарушения сна при сменной работе, синдрома отсроченного наступления фазы сна, синдрома опережения фазы сна и/или нарушенного цикла сна-бодрствования, не равного 24 ч,у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения. Согласно другому варианту реализации указанного аспекта настоящего изобретения указанный способ дополнительно включает введение в одновременной, раздельной или последовательной комбинации,второго терапевтического агента, представляющего собой ингибитор обратного захвата серотонина, как,например, циталопрам, пароксетин, флуоксетин и/или флувоксетин. В одном конкретном варианте реализации указанных способов лечения указанное млекопитающее представляет собой человека. Согласно настоящему изобретению также предложено соединение формулы I или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения для применения в терапии. Согласно указанному аспекту настоящего изобретения предложено соединение формулы I или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения для применения для лечения бессонницы. В других вариантах реализации бессонница характеризуется продленным латентным периодом сна, или неудовлетворительным поддержанием сна,или обеими указанными особенностями, как, например, первичная бессонница, синдром смены часовых поясов, нарушение сна при сменной работе, синдром отсроченного наступления фазы сна, синдром опережения фазы сна и/или нарушения цикла сна-бодрствования, не равного 24 ч. В другом варианте реализации указанного аспекта настоящего изобретения предложено соединение Формулы I или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения для применения в одновременной, раздельной или последовательной комбинации с ингибитором обратного захвата серотонина, таким как, например,циталопрам, пароксетин, флуоксетин и/или флувоксетин, для лечения бессонницы. В одном конкретном варианте реализации указанного аспекта настоящего изобретения, описанное применение осуществляют у млекопитающих, в частности, у людей. Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения для производства лекарственного средства для лечения бессонницы, как, например, бессонницы,характеризующейся продленным латентным периодом сна, или неудовлетворительным поддержанием сна, или обеими указанными особенностями, как, например, первичной бессонницы, синдрома смены часовых поясов, нарушения сна при сменной работе, синдрома отсроченного наступления фазы сна,синдрома опережения фазы сна и/или нарушенного цикла сна-бодрствования, не равного 24 ч. Согласно другому варианту реализации указанного аспекта настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения и второго терапевтического агента, представляющего собой ингибитор обратного захвата серотонина, как,например, циталопрам, пароксетин, флуоксетин и/или флувоксетин, для производства лекарственного средства для лечения бессонницы, как, например, бессонницы, характеризующейся продленным латентным периодом сна, или неудовлетворительным поддержанием сна, или обеими указанными особенностями, как например, первичной бессонницы, синдрома смены часовых поясов, нарушения сна при сменной работе, синдрома отсроченного наступления фазы сна, синдрома опережения фазы сна и/или нарушенного цикла сна-бодрствования, не равного 24 ч. Для ясности, в настоящем описании будет применяться следующая нумерация трициклической кольцевой структуры: Соединение согласно настоящему изобретению содержит основные и кислотные фрагменты и, соответственно, взаимодействует с рядом органических и неорганических кислот и оснований с образованием фармацевтически приемлемых солей. Фармацевтически приемлемые соли соединения согласно настоящему изобретению включены в объем настоящего документа. Термин "фармацевтически приемлемая соль" в настоящем описании относится к любой соли соединения согласно настоящему изобретению, которая, по существу, не токсична для живых организмов. Указанные соли включают соли, перечисленные в Journal of Pharmaceutical Science. 66, 2-19 (1977), которые известны специалисту в данной области техники. В настоящем описании применяют сокращения, имеющие следующие определения:"DMEM" обозначает минимальную среду Игла, модифицированную по способу Дульбекко."ФБС" обозначает фетальную бычью сыворотку."ВЭЖХ" обозначает высокоэффективную жидкостную хроматографию."IC50" обозначает концентрацию, при которой достигается ингибирование 50% от максимального."ЯМР" обозначает ядерный магнитный резонанс."ТГФ" обозначает тетрагидрофуран. Общая химия. Соединение согласно настоящему изобретению можно получить согласно следующим примерам синтеза. Синтез 1. 2,5-Дихлортиофен-3-карбонилхлорид К суспензии 2,5-дихлортиофен-3-карбоновой кислоты (49,7 г; 252,23 ммоль; 1,00 экв.) в дихлорметане (500 мл) добавляли диметилформамид (0,5 мл; 6,47 ммоль), а вслед за ним раствор 2 М оксалилхлорида в дихлорметане (138,73 мл; 277,45 ммоль; 1,1 экв.) в течение 1,5 ч (пропуская выделяющийся газ через щелочной раствор). Полученный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч до прекращения выделения газа и завершения реакции по данным ЖХ-МС (нейтрализовали пробу 7 М NH3/MeOH для контроля протекания реакции) МС (m/z): 195,9, 197,9 (М+Н)+ для соответствующего первичного амида. Выпаривали досуха, получая целевое промежуточное соединение в виде коричневого масла (55 г, 252 ммоль, количественно). Синтез 2. 2,5-Дихлор-N-(2-гидрокси-4-метилфенил)тиофен-3-карбоксамид(40,76 мл; 504,00 ммоль; 2 экв.), а вслед за этим раствор 2,5-дихлортиофен-3-карбонилхлорида (54,30 г,-3 023460 252 ммоль, 1,00 экв.) в ТГФ (250 мл) в течение 30 мин с использованием ледяной бани для поддержания температуры 15-20 С. Перемешивали полученную густую смесь при комнатной температуре в течение 1 ч до полного израсходования аминофенола по данным ЖХ-МС. Выливали полученную смесь в смесь 2 М водного раствора HCl (500 мл) и льда (250 мл) при перемешивании. Выделяли фильтрованием полученное бежевое твердое вещество, хорошо промывали водой и высушивали на воздухе. МС (m/z): 301,84, 303,94 (М+Н)+. Высушивали в вакуумном шкафу при 40 С над Р 2 О 5 в течение ночи, получая целевое промежуточное соединение (84,5 г, считали количественным). Синтез 3. 2-Хлор-8-метил-5 Н-тиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-он К хорошо перемешиваемой суспензии 2,5-дихлор-N-гидрокси-4-метилфенил)тиофен-3 карбоксамида (76,15 г; 252 ммоль; 1,00 экв.) в диметилсульфоксиде (450 мл) добавляли карбонат калия(38,31 г; 277,20 ммоль; 1,1 экв.) и обрабатывали полученную смесь при 100-110 С в течение 4,5 ч, получая практически полную конверсию по данным ЖХ-МС. Оставляли остыть до комнатной температуры и медленно разливали по двум отдельным стаканам, содержащим 1 М водный раствор соляной кислоты(500 мл), наблюдая выделение газа. Перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч и собирали полученное темно-серое твердое вещество путем фильтрования. Последовательно промывали водой,потом небольшим количеством этанола, потом небольшим количеством диэтилового эфира. Высушивали в вакуумном шкафу при 45 С в течение ночи, получая целевое промежуточное соединение (58,5 г, 87%). МС (m/z): 265,99 (М+Н)+. Синтез 4. 2,4-Дихлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин В круглодонную колбу объемом 1 л помещали метоксибензол (225 мл, 5 об.), 2-хлор-8-метил-5 Нтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-он (45 г; 169,4 ммоль; 1 экв.) и N,N-диметиланилин (47,2 г; 389,5 ммоль; 2,3 экв.). Нагревали до 60 С и добавляли фосфорилхлорид (85,7 г; 558,9 ммоль; 3,3 экв.) по каплям в течение 0,5 ч. Нагревали до 100 С и перемешивали в течение 2 ч до полного завершения по данным ТСХ. Охлаждали до 40-60 С и выпаривали, получая целевое промежуточное соединение в виде темно-коричневого твердого вещества (123,1 г, 433,2 ммоль, неисправленный выход по данным анализа 256%). МС (m/z): 283,8 (М+Н). Синтез 5. Метиловый эфир 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1 ил]-2,2-дииетилпропановой кислоты В круглодонную колбу объемом 1 л помещали 2,4-дихлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин(121,1 г; 169,4 ммоль; 1,0 экв.), потом ацетонитрил (600 мл, 12,5 об.), затем карбонат калия (119,4 г; 863,9 ммоль) за один прием. Перемешивали в течение 10-20 мин, затем добавляли дигидрохлорид метилового эфира 2,2-диметил-3-(пиперазин-1-ил)пропановой кислоты (55,54 г; 203,3 ммоль; 1,2 экв.) за один прием. Нагревали до 80 С и перемешивали в течение 30 ч. Полученную смесь концентрировали досуха в вакууме, затем добавляли в указанную смесь этилацетат (1920 мл, 40 об.) и воду (1920 мл, 40 об.). Перемешивали, фильтровали, затем отделяли водную фазу и экстрагировали этилацетатом (960 мл, 20 об.). Органические фазы объединяли и промывали водой (2960 мл) и раствором соли (200 мл, 4 об.), концентрировали и очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат (от 0 до 10%, получая целевое промежуточное соединение в виде желтого твердого вещества (55,4 г, 123,7 ммоль, чистота 95,8%, неисправленный выход по данным анализа 73,0%). МС (m/z): 448,2 (М+Н). 1 Н ЯМР (400 МГц, CDCl3):7,03 (м, 1H), 6,91 (м, 1 Н), 6,85 (с, 1H), 6,50 (с, 1 Н), 3,67 (с, 3 Н), 3,47 (м,4 Н), 2,58-2,54 (м, 6 Н), 2,28 (с, 3 Н), 1,19 (с, 6 Н). В круглодонную колбу объемом 2 л помещали метиловый эфир 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ил]-2,2-диметилпропановой кис-лоты (70,3 г; 156,9 ммоль; 1,0 экв.), изопропиловый спирт (469 мл; 6,67 об.) и воду (469 мл; 6,67 об.). Затем добавляли гидроксид натрия (18,83 г; 470,8 ммоль; 3,0 экв.) и нагревали полученную смесь до 80 С при перемешивании в течение 3 ч. Охлаждали до 20 С и нейтрализовали до рН 75 М водным раствором HCl. Выпаривали большую часть изопропилового спирта, затем доводили рН до 6-7 при помощи 5 М водного раствора HCl и концентрировали для удаления растворителей. Добавляли этилацетат (2800 мл, 40 об.) и воду (2800 мл,40 об.), затем перемешивали в течение 30 мин перед фильтрованием для получения сырого продукта Отделяли водную фазу и экстрагировали этилацетатом (700 мл, 10 об.). Этилацетатные слои объединяли и выпаривали, получая сырой продукт. Сырой продукт и изопропиловый спирт (500 мл, 7 об.) помещали в круглодонную колбу объемом 1 л. Нагревали до 80 С и перемешивали в течение 1 ч, затем медленно охлаждали до 20 С. Фильтровали и промывали осадок на фильтре изопропиловым спиртом (70 мл, 1 об.),получая целевое соединение в виде желтого твердого вещества (60,4 г; 138,6 ммоль; чистота 99,3%, выход 88,3%, исправленный по результатам анализа). МС (m/z): 434,0 (М+Н). 1 Н ЯМР (400 МГц, CDCl3):7,01 (м, 1H), 6,94 (м, 1 Н), 6,82 (с, 1H), 6,50 (с, 1 Н), 3,64 (уш. с, 4 Н), 2,86 К суспензии метилового эфира 3-[4-(2-хлор-8-метил-тиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4 ил)пиперазин-1-ил]-2,2-диметилпропановой кислоты (22,5 г; 50,23 ммоль; 1,00 экв.) в смеси изопропилового спирта (150 мл; 1,96 моль) и воды (150 мл) добавляли гидроксид натрия (6,03 г; 150,68 ммоль; 3 экв.) и нагревали полученную смесь при 80 С (масляная баня) в течение 2,5 ч до получения полной конверсии по данным ЖХ-МС. Оставляли остыть и нейтрализовали до рН 7 при помощи 5 М водного раствора HCl. Выпаривали большую часть изопропилового спирта, получая мелкий осадок. Вновь доводили рН при помощи 5 М водного раствора HCl до рН 7. Помещали колбу в холодильник на 0,5 ч, затем собирали фильтрованием бледно-желтое твердое вещество, промывали водой. Высушивали в вакуумном шкафу при 45 С над Р 2 О 5 в течение ночи, получая целевое соединение (20,6 г, 95%). МС (m/z): 434,1 (М+Н)+. Пример 3. Дигидрохлорид 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1 ил]-2,2-диметилпропановой кислоты Суспендировали 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ил]-2,2 диметилпропановую кислоту (5,8 г; 13,3 ммоль) в малом количестве ацетонитрила, затем добавляли 4 М раствор хлористого водорода в диоксане (14,06 г; 53,57 ммоль; 4 экв.) и выпаривали полученный раствор досуха. Растирали с малым количеством диэтилового эфира, собирали фильтрованием и высушивали в вакуумном шкафу, получая целевое соединение (4,74 г, 70%). МС (m/z): 434,1 (М+Н)+. Дополнительная очистка дигидрохлоридной соли. Брали дигидрохлорид 3-[4-(2-хлор-8-метилтиено[2,3-b][1,5]бензоксазепин-4-ил)пиперазин-1-ил]2,2-диметилпропановой кислоты (7,5 г; 14,80 ммоль, 1,00 экв.) и нагревали в этаноле (150 мл) при обработке ультразвуком до получения однородной смеси. Выпаривали досуха. Растирали с малым количеством диэтилового эфира и собирали фильтрованием бежевое твердое вещество. Измельчали в мелкий порошок и высушивали в вакуумном шкафу при 50 С в течение 2 ночей, получая целевое соединение (7,14 г, 95%). МС (m/z): 434,1 (М+Н)+. Литературные данные (Morairty S.R., Hedley L., Flores J., Martin R., Kilduff T.S. (2008), Selective 5-HT2A and 5-HT6 receptor antagonists promote sleep in rats. Sleep 31, 34-44 и Barbier, A.J., andWake Disorders, CNSNeurological Disorders - Drug Targets, vol. 6, p. 31-43 (2007 и данные, полученные в неклинических исследованиях на животных, подтверждают роль соединений с двойной активностью обратных агонистов H1/антагонистов 5-HT2A в лечении бессонницы и в симптоматическом лечении бессонницы, связанной с другими нарушениями, такими как депрессивные расстройства, тревожные расстройства, боль, аллергии, заболевания легких или дыхательных путей, психиатрические расстройства,деменция и/или нейродегенеративные заболевания, и/или нарушения циркадного ритма сна. Точнее говоря, было обнаружено, что некоторые агенты с двойной активностью обратных агонистовH1/антагонистов 5-HT2A эффективны для увеличения общей продолжительности сна у грызунов с использованием мониторинга ЭЭГ без несоразмерной или клинически значимой гипоактивности, сокращения БДГ-сна или повышенной сонливости. Для дальнейшей демонстрации особенностей соединений согласно настоящему изобретению, указанные соединения можно исучить в следующих анализах in vitro и in vivo: Анализ связывания и активности in vitro. Анализ конкурентного связывания с рецептором H1. Эксперименты по связыванию с [3 Н]пириламином проводили в сцинтилляционном анализе сближения (САС) в формате 96 лунок. Мембраны, применяемые в указанном анализе, готовили из клетокHEK-293, стабильно экспрессирующих рекомбинантный рецептор H1 (человека). Инкубацию начинали путем добавления смеси гранул WGA PVT SPA (1 мг/лунку, Perkin Elmer (MA, USA) RPNQ0001) и 3 мкг мембран в буферный раствор для анализа (67 мМ Трис; рН 7,6), содержащий 3,5 нМ [3 Н]пириламина и различные концентрации исследуемого соединения (10 точек на кривых концентрация-отклик). Неспецифическое связывание определяли в присутствии 10 мкМ трипролидина. Образцы инкубировали в течение 4 ч при комнатной температуре (22 С), а затем считывали на приборе Microbeta Trilux. Анализ конкурентного связывания с рецептором 5-НТ 2 А. Эксперименты по связыванию с [3 Н]кетансерином проводили в САС в формате 96 лунок. Мембраны, применяемые в указанном анализе, готовили из клеток AV-12, стабильно экспрессирующих рекомбинантный рецептор 5-HT2A (человека). Инкубацию начинали путем добавления смеси гранул WGAYSi SPA (1 мг/лунку, Perkin Elmer (MA, USA), RPNQ0011) и 2 мкг мембран в буферный раствор для анализа (67 мМ Трис, 0,5 мМ ЭДТА; рН 7,6), содержащий 3,1 нМ [3 Н]кетансерина и различные концентрации исследуемого соединения (10 точек на кривых концентрация-отклик). Неспецифическое связывание определяли в присутствии 20 мкМ 1-(1-нафтил)пиперазина. Образцы инкубировали в течение 4 ч при комнатной температуре (22 С), а затем считывали на приборе Microbeta Trilux. Анализ конкурентного связывания с рецептором 5-HT2C. Эксперименты по связыванию с [125I]-DOI проводили в САС в формате 96 лунок. Мембраны,применяемые в указанном анализе, готовили из клеток AV-12, стабильно экспрессирующих рекомбинантный рецептор 5-НТ 2 С (человека). Инкубацию начинали путем добавления смеси гранул WGA PVTSPA (0,5 мг/лунку, Perkin Elmer (MA, USA), RPNQ0001) и 2,5 мкг мембран в буферный раствор для анализа (50 мМ Трис-HCl, 10 мМ MgCl2, 0,5 мМ ЭДГА, 10 мкМ паргилина, 0,1% аскорбиновой кислоты, рН 7,4), содержащий 0,2 нМ 125I]-DOI и различные концентрации исследуемого соединения (10 точек на кривых концентрация-отклик). Неспецифическое связывание определяли в присутствии 20 мкМ 1-(1-нафтил)пиперазина Образцы инкубировали в течение 4 ч при комнатной температуре (22 С), а затем считывали на приборе Microbeta Trilux. Анализ данных по связыванию. Кривые анализировали с использованием 4-параметрического логистического нелинейного уравнения, получая концентрацию конкурирующего соединения, вызывающую 50% ингибирование связывания радиолиганда (IC50). Равновесные константы диссоциации (Ki) рассчитывали согласно уравнениюKi=IC50/(1+L/Kd), где L равно концентрации радиолиганда, применяемой в эксперименте, a Kd равняется равновесной константе диссоциации радиолиганда по отношению к рецептору, определенной из стандартного анализа методом насыщения или экспериментов по гомологической конкуренции. Приведенные величины Ki, где указаны значения n, показаны в виде: среднее геометрическоестандартная ошиб-6 023460 ка среднего (СОС), где число повторных определений указано значением n. Средние геометрические вычисляли по уравнению GeoMean = 10(Среднее (log Ki 1 + log Ki 2 +log Ki n)/sqrt n). Антагонизм к GABAA с использованием нативных рецепторов в первичных нейронных культурах. Активность соединений к нативным рецепторам GABAA оценивали путем наблюдения за переносами кальция с использованием системы FLIPR (спектрофотометр для чтения планшетов для визуализации флуоресценции (FLIPR, Molecular Devices) в формате на 96 лунок. Вкратце, кортикальные эмбриональные нейроны выделяли из эмбрионов крыс Е 18 и высевали с оптимальной плотностью на планшеты FLIPR на 96 ячеек с черными стенками и прозрачным дном, с покрытием поли-D-лизина После нагрузки клеток чувствительным к кальцию красителем (Fluo4-AM, Molecular Devices), клетки погружали в раствор, содержащий низкую концентрацию хлорида (хлорид заменен глюконатом). В указанных условиях активация рецепторов GABAA вызывала выход ионов хлорида (в направлении химического градиента), что приводило к деполяризации мембраны и последующей активации потенциалзависимых кальциевых каналов (ПЗКК). Вход кальция через ПЗКК регистрировали и анализировали в автономном режиме с использованием системы FLIPR. Для фармакологического подтверждения указанного анализа регистрировали кривые концентрация-отклик (ККО) для стандартного агониста (GABA) и стандартного антагониста (габазин). Любые эффекты определяли в режиме ККО относительно фиксированной концентрации агониста GABA 10 мкМ (эквивалент отклика GABA EC90). Способы. Антагонистические эффекты соединений оценивали количественно с использованием 10-точечных кривых доза-отклик путем сравнения пиковых флуоресцентных откликов на агонист GABA в присутствии и в отсутствие соединения. Диапазон анализа определяли как максимальный отклик, полученный при помощи GABA в заранее определенной концентрации ЕС 90 минус отклик, полученный при помощи полностью ингибирующей концентрации габазина (50 мкМ). Эффекты антагонистов рассчитывали в процентах от диапазона анализа. Все данные рассчитывали как относительные величины IC50 с использованием программы четырехпараметрического логистического подбора кривых (Prism Graphpad 3.01). Эффективность антагонистов для всех соединений сравнивали с габазином, в трех повторениях для каждой серии анализов. Дополнительно, соединения согласно настоящему изобретению можно испытать в анализах связывания и в анализах функциональной активности при помощи хорошо известных способов по отношению к другим физиологически важным рецепторам, таким как, без ограничения, канал hERG, другие рецепторы серотонина (особенно рецепторы 5-HT1B, 5-HT1D, отсутствие активности агонистов к рецепторам 5-HT2B, рецепторы 5-HT2C, 5-HT5, 5-HT6 и 5-НТ 7), допаминергические рецепторы (особенно D1, D2 и D3),рецепторы GABAA, адренергические рецепторы и моноаминные переносчики. Соединения из примеров 1 и 3 испытывали, по существу, как описано выше, и обнаружили, что они имеют профили активности, показанные в табл. 1. Следовательно, полагают, что физиологически значимые дозы соединений согласно настоящему изобретению обеспечивают существенное ингибирование рецепторов H1 и 5-HT2A in vivo, в то же время не взаимодействуя существенно с другими физиологически значимыми рецепторами, и, следовательно,ожидают, что они обеспечивают желаемую фармакологию, при этом избегая нежелательных эффектов,связанных с нецелевой активностью. Такие нежелательные эффекты включают, без ограничения, следующие: активность антагониста к 5-HT2C, ассоциированная с возникающим при применении препарата набором массы, активность агониста к 5-HT2B, ассоциированная с вальвулопатией, модулирование канала hERG, ассоциированное с удлинением интервала QT, и активность антагониста к GABAA, ассоциированная с судорожной активностью. Кроме того, избегают воздействия на физиологию сна/бодрствования благодаря селективности по отношению к другим рецепторам допамина, другим рецепторам серотонина,адренергическим рецепторам и моноаминным переносчикам. Заполнение рецепторов 5-HT2A. Изучали заполнение рецепторов, чтобы продемонстрировать активность антагониста/обратного агониста к рецептору 5-HT2A in vivo. Вкратце, самцы крыс Спрага-Доули (Harlan Sprague-Dawley,Indianapolis, IN) массой приблизительно 230-280 г имели свободный доступ к пище и воде до начала 3-часового протокола эксперимента. В качестве положительного контроля применяли 1 мг/кг кетансерина (неселективный антагонист 5-HT2A) для подтверждения действительности эксперимента. Исследуемые соединения или контроль вводили перорально через зонд в среде, содержащей 20% гидроксипропил-бета-циклодекстрина. В качестве маркера применяли MDL 100907 R)-(+)(2,3-диметоксифенил)1-[2-(4-фторфенил)этил]-4-пиперидинметанол), селективный антагонист 5-HT2A. MDL 100907 суспендировали в воде с 5 мкл разбавленной молочной кислоты (1 мг/мл), разбавляли до 6 мкг/мл солевым раствором и вводили в объеме 1 мл/кг внутривенно через боковую вену хвоста для получения дозы маркера 3 мкг/кг. Крысам вводили исследуемое соединение, кетансерин или среду (N=4), после этого через 1 ч внутривенно вводили дозу 3 мкг/кг маркера, MDL 100907. Временем измерения заполнения рецепторов(ЗР) считали время введения маркера. Через 15 мин после введения маркера крыс умерщвляли смещением шейных позвонков. Отбирали образцы плазмы и извлекали образцы коры лобных долей и мозжечка. Измеряли содержание маркера MDL 100907 в каждом образце коры и мозжечка. Вычисляли ЗР с использованием надежного метода отношения, в котором используют область с высокой плотностью рецепто-8 023460 ров, представляющую суммарное связывание (кора лобных долей), нормализованную по области, не содержащей или содержащей малое количество рецепторов (мозжечок). Указанная область, рассматриваемая как нулевая область, представляет неспецифическое связывание лиганда-зонда. Отношение содержания маркера в коре к содержанию маркера в мозжечке для среды представляло заполнение 0%. Отношение 1 представляло заполнение 100% и достигалось, когда все специфическое связывание маркераMDL 100907 с рецептором 5-НТ 2 А было блокировано. Промежуточные отношения содержания маркера в коре к содержанию в мозжечке, полученные в группе, получавшей исследуемые соединения, линейно интерполировали между концентрациями маркера у животных, получавших среду (0% заполнение) и отношением 1 (100% заполнение), для определения процента ЗР 5-НТ 2 А. Анализ MDL 100907. Образцы коры и мозжечка взвешивали и помещали в конические центрифужные пробирки на лед. В каждую пробирку добавляли четыре объема (мас./об.) ацетонитрила, содержащего 0,1% муравьиной кислоты. Затем образцы гомогенизировали и центрифугировали при 14000 об/мин (21920g) в течение 16 мин. Надосадочную жидкость разбавляли добавлением 100-900 мкл стерильной воды в виалах для проб ВЭЖХ для анализа ЖХ/МС/МС. Анализ MDL 100907 проводили на ВЭЖХ модели Agilent 1200(Agilent Technologies, Palo Alto, CA) и масс-спектрометре API 4000. Хроматографическое разделение проводили на колонке С 18 2,150 мм (номер по каталогу Agilent 971700-907) с подвижной фазой, состоящей из 60% ацетонитрила в воде и общим содержанием 0,1% муравьиной кислоты. ДетектированиеMDL 100907 осуществляли, наблюдая за родоначальным ионом, для получения ионного перехода с отношением массы к заряду (m/z) от 374,2 до 123,0. Стандарты готовили, добавляя известные количества анализируемого вещества к образцам мозговой ткани от не получавших воздействие крыс, и обрабатывая, как описано выше. Статистические методы. Кривые для каждого исследования обрабатывали с использованием 4-параметрической логистической функции с нижней границей, закрепленной на 0%, при помощи программного обеспечения JMP версии 8.0 (SAS Institute Inc, Cary NC) и вычисляли абсолютные значения ED50 при помощи указанного программного обеспечения. Значения указаны как средние значения, стандартные ошибки и 95% доверительные интервалы. Соединение из примера 3 испытывали, по существу, как описано, и обнаружили, что достигается высокая заполняемость рецепторов 5-HT2A при значении ED50 0,09 мг/кг. Обратный агонизм к H1. Для определения свойств обратных агонистов соединений согласно настоящему изобретению, измеряли их действие на концентрации миоинозит-1-фосфата (ИФ 1) в клетках HEK-293, трансфицированных рекомбинантным рецептором H1 человека (HEK-293/hm H1 клон R-40). Вкратце, клеткиHEK-293/hm H1 (клон R-40) выращивали до заселенности 90% (3:1 DMEM/F12, 5% ФБС, 20 мМHEPES, G418 500 мкг/мл, 1% пенициллин/стрептомицин/глутамин) и собирали в день анализа при помощи 1 трипсина/ЭДТА (РАА Pasching, Austria L11-003). 35 мкл клеток (300 K) высевали в 96-луночные полуплощадные планшеты с белым сплошным дном (Corning, UK 3688) в стимулирующем буферном растворе (NaCl 146 мМ, CaCl2 1 мМ, KCl 4,2 мМ, MgCl2 0,5 мМ, глюкоза 5,5 мМ, HEPES 10 мМ и LiCl 50 мМ). Вначале исследуемые соединения растворяли в 100% ДМСО в 100 конечной концентрации. Далее разбавляли до 2 конечной концентрации в стимулирующем буферном растворе, затем 35 мкл указанного раствора добавляли к клеткам в аналитическом планшете. Клетки с соединением инкубировали в течение 1 ч 30 мин при 37 С/5% СО 2 перед добавлением 15 мкл каждого из реагентов из набора для детектирования HTRF IP1 (CisBio 62P1APEC). Планшет с клетками инкубировали еще в течение 1 ч при комнатной температуре перед измерением накопления ИФ 1 (Envision plate reader, PerkinElmer). Накопление ИФ 1 (нМ) рассчитывали путем экстраполяции хода стандартной кривой ИФ 1 в день эксперимента. Отрицательные значения эффективности выражали относительно положительного контроля трипеленнамина (10 мкМ, Sigma, UK P5514). Соединение 3 испытывали, по существу, как описано,и обнаружили, что оно полностью подавляло конститутивную активность (105% при 1 мкМ и 85% при 10 мкМ (n=2. Подавление вызванного DOI эффекта встряхивания головой. Активность in vivo соединения согласно настоящему изобретению в качестве антагонистов рецептора 5-HT2A дополнительно можно продемонстрировать по их способности блокировать эффект встряхивания головой, вызванное агонистом рецептора 5-HT2A 2,5-диметокси-4-йодамфетамином (DOI) (см.,например, Bartoszyk G.D., van Amsterdam С., Bottcher H., Seyfried C.A. EMD 281014, a new selectiveC57BL/6J (20-25 г, Charles River) содержали в стандартных условиях содержания (32 мыши в большой клетке IVC, световой день с 07:00 до 19:00, постоянная температура (19-23 С) и влажность (5010%),пища и вода без ограничений). Мыши получали среду (0,25% метилцеллюлозы), DOI (3 мг/кг в солевом растворе) или исследуемое соединение в дозе 10 мг/кг п/о плюс DOI (3 мг/кг в солевом растворе). Исследуемые соединения оценивали по отдельности в группах по четыре эксперимента с n=4 для каждого соединения, вместе со средой и DOI+среда (n=8). После предварительного воздействия исследуемого со-9 023460 единения в течение 60 мин мыши получали среду (солевой раствор) или 3 мг/кг DOI подкожно, затем мышей помещали в камеры для наблюдений из прозрачного оргстекла. Спустя пять минут после введения DOI или среды подсчитывали визуально количество встряхиваний головой, производимых каждой отдельной мышью, в течение 15 мин. Полученные данные анализировали при помощи ANOVA и апостериорного сравнения Дуннета. Соединение из примера 3 испытывали, по существу, как описано, и обнаружили, что оно подавляло вызванную DOI реакцию встряхиваний головой на 100% в концентрации 10 мг/кг. Наблюдения за сном и поведением у крыс. Соединение согласно настоящему изобретению испытывали на крысах на способность увеличивать количество сна, или уменьшать прерывание сна, или оказывать оба указанных действия, без таких нежелательных эффектов, как подавление БДГ-сна, двигательная недостаточность при бодрствовании и/или бессонница после отмены препарата. За подопытными животными непрерывно наблюдали при помощи электроэнцефалограмм (ЭЭГ), электромиограмм (ЭМГ) и за телодвижениями для измерения суммарного ББДГ-сна, суммарного общего сна, средней продолжительности сеанса сна, наибольшей продолжительности сеанса сна, бессонницы после отмены препарата, подавления БДГ-сна и интенсивности локомоторной активности во время бодрствования. Способы для указанных исследований известны в данной области техники (см., например, способы описанные в работах Edgar D.M., Seidel W.F Modafinil inducesautomated sleep scoring software using electrophysiological recordings in rats. J Neurosci Methods. 2009; 184(1): 10-8.) Исследования проводили следующим образом: Подготовка животных. Взрослых самцов крыс Уистара (приблизительно 270-300 г на момент хирургического вмешательства) хирургически подготавливали для длительной регистрации ЭЭГ, ЭМГ и движений следующим образом: крыс хирургически подготавливали, устанавливая черепной имплантат, состоящий из четырех винтов из нержавеющей стали, для регистрации ЭЭГ (два лобных [3,9 мм кпереди от брегмы и 2,0 мм медиолатерально] и два затылочных [6,4 мм кзади от брегмы, 5,5 мм медиолатерально]), и двух проводов из нержавеющей стали с тефлоновым покрытием для регистрации ЭМГ (расположенных под затылочными трапециевидными мышцами). Все выводы припаивали к миниатюрному коннектору (Microtech,Boothwyn, PA) перед хирургическим вмешательством. Имплантат в сборе закрепляли на черепе при помощи комбинации винтов из нержавеющей стали для регистрации ЭЭГ, цианакрилата, нанесенного между коннектором имплантата и черепом, и стоматологического акрилового полимера. За локомоторной активностью наблюдали при помощи миниатюрного трансмиттера (Minimitter PDT4000G, PhilipsRespironics, Bend, OR), хирургически помещенного в брюшную полость. На восстановление отводили по меньшей мере 3 недели. Окружающая обстановка при регистрации. Каждую крысу содержали отдельно в клетке-микроизоляторе, модифицированной путем установки надстройки фильтра-крышки из поликарбоната для обеспечения большей вертикальной габаритной высоты. Гибкий кабель, минимально ограничивающий движения, подсоединяли с одной стороны к коммутатору, закрепленному на крышке клетки, а с другой стороны к черепному имплантату животного. Каждую клетку помещали в отдельный вентилируемый отсек камеры для регистрации сна/бодрствования из нержавеющей стали. Пища и вода были доступны ad libitum, температуру окружающей среды поддерживали приблизительно 231 С. На протяжении исследования поддерживали 24-часовой цикл чередования света и темноты (СТ 12:12) с использованием ламп дневного света. Относительную влажность поддерживали приблизительно 50%. Животных не беспокоили в течение по меньшей мере 30 ч до и после каждого воздействия. Дизайн исследования и дозировка. Среду (плацебо, метилцеллюлозу 15 сП 0,25% в воде) или один из уровней дозировки исследуемых соединений вводили перорально в количестве 1 мл/кг псевдослучайно, так чтобы ни одна крыса не получала дважды одно и то же воздействие и ни одна крыса не получала более двух из 8 воздействий в любом отдельном исследовании. Каждую крысу извлекали из клетки примерно на минуту для взвешивания и введения препарата. Присутствовал по меньшей мере 6-дневный интервал "вымывания" до и после каждого воздействия. Сбор данных. Распознавание сна и бодрствования может быть автоматизировано (см., например, Van Gelder et al. 1991 (выше); Edgar et al. 1997 (выше); Winrow C.J., et al., Neuropharmacology, 2010; 58(1): 185-94 и Grosset al., 2009 (выше). ЭЭГ усиливали и фильтровали (X10000, полоса пропускания 1-30 Гц), ЭМГ усиливали и интегрировали (полоса пропускания 10-100 Гц, среднеквадратичная интеграция), а неспецифическую локомоторную активность (ЛМА) регистрировали одновременно. Состояния активности классифи- 10023460 цировали с интервалами 10 с как ББДГ-сон, БДГ-сон, бодрствование или бодрствование с преобладанием тета-ритма. Локомоторную активность (ЛМА) регистрировали как число движений в минуту и детектировали коммерчески доступными телеметрическими приемниками (ER4000, Minimitter, Bend, OR). Статистический анализ. Все животные, имеющие по меньшей мере один результат, включались в итоговые результаты (например, включили соответствующие данные по воздействию на животных, для которых данные телеметрии были пригодны к использованию, а данные ЭЭГ непригодны). Период наблюдения после воздействия разделяли на промежутки после дозирования, подходящие для каждого результата, причем время дозирования определялось как начало час = 0, и результаты суммировали за период наблюдения путем вычисления или среднего значения ежечасно, или накопительного значения за каждый период (см. легенду табл. 1 для точного определения каждого результата). Сеансы сна анализировали в логарифмическом масштабе для стабилизации отклонений, все остальные переменные анализировали в линейном масштабе. Каждый результат за каждый период анализировали при помощи ковариационного анализа с использованием группы воздействия и даты воздействия в качестве факторов, и соответствующего периода перед воздействия, на 24 ч ранее, в качестве ковариаты. Скорректированные средние значения и изменение относительно средних для среды, с соответствующими стандартными ошибками, суммировали для каждой группы воздействия. Результаты, проанализированные в логарифмическом масштабе, переводили обратно для получения результатов геометрических средних и среднего отношения к среде. Соединение из примера 3 испытывали, по существу, как описано. Обнаружили, что соединение из примера 3 значительно увеличивало суммарное время ББДГ-сна и общее суммарное время сна, без значительной бессонницы после отмены препарата, подавления БДГ-сна или подавления локомоторной активности (ЛМА) в дозе 3 мг/кг (см. профиль сна и интенсивность локомоторной активности в табл. 2.) Таблица 2. Статистика результатов. Сокращения: N = размер образца; Скорр. среднее = скорректированное среднее значение по группе по сравнению с контролем по среде; СО = стандартная ошибка среднего; НДП = ниже 95% доверительного предела, ББДГ-сон = без БДГ, т.е. весь сон, кроме БДГ-сна. Размер образца в параллельной эталонной группе контроля по среде составлял N=27. Определения и единицы - средние представляют собой скорректированные различия по сравнению с контролем по среде: суммарная продолжительность сна: в течение первых 6 ч после воздействия, в минутах ("общий сон" означает ББДГ-сон + БДГ-сон); средняя длительность сеанса сна: средние, усредненные за часовые интервалы, сеансы сна, в течение первых 6 ч после воздействия, выраженные как n-кратное увеличение по сравнению с контролем по среде; наибольшая длительность сеанса сна: наибольшая длительность сеанса сна в течение первых 6 ч после воздействия, выраженная как n-кратное увеличение по сравнению с контролем по среде; бессонница после отмены препарата: суммарные минуты ББДГ- и БДГ-сна в течение первых 3 ч периода включенного света, т.е. 7-, 8- и 9- ч после воздействия; подавление БДГ-сна: суммарные минуты БДГ-сна в течение первых 12 ч после воздействия; интенсивность локомоторной активности (ЛМА): выражена как число актов ЛМА/мин при подтвержденном ЭЭГ бодрствовании, усредненная за первые 6 ч после воздействия. Определение эффективности. Пороговую эффективность для каждой из четырех переменных эффективности рассчитывали, нанося на график увеличение каждой переменной по сравнению с контролем по среде в течение первых 6 ч после воздействия, в зависимости от log (дозы). Пороговая эффективность для каждой из переменных представляла собой дозу, полученную из 4-параметрической логистической нелинейной регрессии, которая давала определенное пороговое значение эффективности; +30 мин дополнительного суммарного ББДГ-сна, +25 мин дополнительного суммарного общего сна, увеличение в 1,75 раза средней длительности сеанса сна, и увеличение в 1,5 раза максимальной длительности сеанса сна. Было обнаружено, что соединение из примера 3 имеет пороговые эффективные дозы, показанные в табл. 3. Таблица 3 Определение нежелательных эффектов. Каждую переменную результата "нежелательных эффектов" (см. легенду табл. 2 для определений) наносили на график в зависимости от log (дозы), см. фигуру. Пороговую величину для подавления БДГсна определяли как суммарное уменьшение БДГ-сна на -10 мин. Пороговую величину для бессонницы после отмены препарата определяли как -20 мин. Пороговую величину для сниженной ЛМИ определяли как -5 актов локомоторной активности в минуту бодрствования, подтвержденного ЭЭГ. Определяли, что наблюдался значительный нежелательный эффект, когда нижний предел доверительного интервала опускался ниже пороговой величины для любой дозы, равной или меньшей 10-кратной средней эффективной дозы, и изменение дозозависимого эффекта очевидно для доз выше пороговой эффективной дозы. Для соединения из примера 3 не наблюдалось нежелательного подавления БДГ-сна, бессонницы после отмены препарата или уменьшения ЛМИ в дозах вплоть по меньшей мере до 1,2 мг/кг (1,2 мг/кг представляла собой 10-кратную наиболее умеренную эффективную дозу 0,12 мг/кг [табл. 3]). Отрицательные значения показаны для подавления БДГ-сна, бессонницы после отмены препарата и пониженного ЛМИ соответственно. В дополнительных исследованиях соединения согласно настоящему изобретению можно вводить совместно с селективными ингибиторами обратного захвата серотонина, чтобы показать усиление их эффекта на сон без быстрых движений глаз (ББДГ-сон) и поддержание сна. Соединение из примера 3 вводили совместно с циталопрамом в исследованиях сна на крысах, по существу, как описано выше для соединения в отдельности, и обнаружили значительное увеличение ББДГ-сна при значительно меньших дозах. Выведение из плазмы. Для соединения, подходящего для лечения нарушений сна, таких как бессонница, важно, чтобы указанное соединение адекватно выводилось из организма с благоприятной скоростью выведения, чтобы избежать таких нежелательных эффектов, как длительная сонливость вне желаемого периода сна, дневная сонливость, нарушение восприятия после пробуждения и т.д. Согласно настоящему изобретению предложены соединения с улучшенными скоростями выведения. Скорость выведения можно оценить, по существу, как описано ниже. Самцов крыс Спрага-Доули (масса тела 250-320 г) с постоянным катетером бедренной артерии получали от Charles River, Wilmington, MA 01887, USA. Исследуемое соединение вводили внутривенно в растворе (1 мл/кг) в 20% Captisol в 22,5 мМ фосфатном буферном растворе, рН 2, с конечной концентрацией лекарственного средства 1,0 мг/мл (эквивалентов свободного основания). Образцы крови получали при помощи постоянного катетера в течение 24 ч. Образцы плазмы получали путем центрифугирования и хранили до анализа замороженными (-20 С) или на сухом льду. Самцов собак породы бигль (масса тела 10-12 кг) получали от Marshall Bioresources, USA. Исследуемое соединение вводили внутривенно в растворе (1 мл/кг) в 20% Captisol в 22,5 мМ фосфатном буферном растворе, рН 2, с конечной концентрацией лекарственного средства 1,0 мг/мл (эквивалентов свободного основания). Образцы крови получали из яремной вены в течение 24 ч. Образцы плазмы получали путем центрифугирования и хранили до анализа замороженными (-20 С). Замороженные образцы плазмы оттаивали при комнатной температуре для биоанализа концентраций исследуемого соединения. Родственное соединение в качестве внутреннего стандарта в ацетонитриле/метаноле (1:1, об./об.) вводили во все образцы плазмы (1:1, об./об.). Образцы центрифугировали для удаления осажденного белка перед анализом. Надосадочные жидкости анализировали путем инъекции и быстрого градиентного элюирования на колонке Javelin Betasil C18 (картридж 202,1 мм, подвижная фаза А: вода/1 М NH4HCO3, 2000:10 об./об., подвижная фаза В: МеОН/1 М NH4HCO3, 2000:10 об./об.). Элюированные анализируемые вещества детектировали при помощи анализа ЖХ-МС-МС с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра Sciex API 4000. Концентрации соединений определяли на основании стандартов, приготовленных и проанализированных в идентичных условиях. Клиренс рассчитывали при помощи анализа без учета компартментов в программе Watson 7.4, Thermo Fisher Соединения из примеров 1 и 3 анализировали, по существу, как описано, и обнаружили, что они имели благоприятные профили клиренса: Хотя возможно вводить соединения, применяемые в способах согласно настоящему изобретению,непосредственно, без какого-либо состава, обычно указанные соединения вводят в форме фармацевтических композиций, содержащих указанное соединение или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения в качестве активного ингредиента и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или наполнитель. Указанные композиции можно вводить при помощи различных путей, включая пероральный, сублингвальный, назальный, подкожный, внутривенный и внутримышечный. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (University of the Sciences Указанные композиции предпочтительно изготавливают в виде стандартных лекарственных форм,каждая доза которых содержит от примерно 0,1 до примерно 60 мг, более обычно от примерно 0,5 до примерно 30 мг, как, например, от примерно 1 до примерно 10 мг активного ингредиента. Термин "стандартная лекарственная форма" относится к физически отдельным единицам, подходящим в качестве однократных дозировок для субъекта, представляющего собой человека, и других млекопитающих, причем каждая единица содержит заранее заданное количество активного вещества, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем и/или наполнителем. Соединения формулы I в целом эффективны в широком диапазоне дозировок. Например, суточные дозы обычно находятся в диапазоне от примерно 0,002 до примерно 1,0 мг/кг, более обычно от примерно 0,008 до 0,5 мг/кг и в качестве примера от 0,015 до 0,15 мг/кг массы тела. В некоторых случаях более подходящими могут быть уровни дозировок ниже нижнего предела указанного выше диапазона, тогда как в других случая можно применять еще более высокие дозировки, не вызывая никаких неблагоприятных побочных эффектов, и, следовательно, вышеуказанные диапазоны дозировок не предназначены никоим образом ограничивать объем настоящего изобретения. Понятно, что реально вводимое количество соединения будет определять лечащий врач с учетом значимых обстоятельств, включая состояние, лечение которого проводят, выбранный путь введения, реально вводимое соединение или соединения, возраст, массу и отклик отдельного пациента и тяжесть симптомов указанного пациента. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, которое представляет собой HCl соль. 3. Фармацевтическая композиция для лечения бессонницы, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем. 4. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для терапии нарушений сна. 5. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения бессонницы. 6. Применение по п.5, отличающееся тем, что указанная бессонница характеризуется затрудненным засыпанием или затрудненным поддержанием сна или и тем и другим. 7. Применение по п.5 или 6 у человека. 8. Фармацевтическая композиция для лечения бессонницы, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или разбавителем и другие терапевтические ингредиенты, представляющие собой селективный ингибитор обратного захвата серотонина.