Нейропротективное соединение dlhw и его применение

Дата публикации и выдачи патента Номер заявки Настоящее изобретение относится к нейропротективному соединению, состоящему из аминокислотной последовательности DLHW.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭВЕР НЕЙРО ФАРМА ГМБХ (AT) 016040 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к нейропротективному соединению и его применению. Сведения о предшествующем уровне техники Население в индустриализованных странах быстро стареет из-за большей продолжительности жизни, и возрастающее число людей поражаются нейродегенеративными заболеваниями, что приводит к глобальному распространению данных заболеваний. Нейродегенеративные заболевания развиваются из-за постепенной и прогрессирующей утраты нервных клеток, приводящей к дисфункции нервной системы, и могут иметь различные причины помимо старения (например, влияние окружающей среды, генетические дефекты). На сегодня известно более 600 неврологических заболеваний. Основные известные факторы риска нейродегенеративных заболеваний включают определенный генетический полиморфизм и увеличивающийся возраст. Другие возможные причины могут включать пол, плохое образование, состояние эндокринной системы, окислительный стресс, воспаление, инсульт,гипертензию, диабет, курение, травму головы, депрессию, инфекцию, опухоли, дефицит витаминов, состояние иммунной системы и метаболизма и воздействие химикалий. Поскольку патогенез многих этих заболеваний остается неизвестным, может также учитываться роль факторов окружающей среды в развитии этих заболеваний. Обзор нейродегенеративных заболеваний можно найти, например, в "Neurodegenerative Diseases: Neurobiology, Pathogenesis and Therapeutics" (M. Flint Beal, Anthony E. Lang, and Albert С Ludolph; Cambridge University Press; 2005). Для лечения нейродегенеративных заболеваний регулярно применяются некоторые медикаменты,включающие одно или более активных соединений, таких как пирацетам, нимотоп, винпоцетин, глиатилин, церебролизин, цитофлавин и т.д. Соединения, известные в данной области техники, имеют различные способы действия. Церебролизин, например, лекарственное соединение, основанное на пептидах,произведенное из очищенных белков мозга животных путем стандартизованного ферментативного разрушения, проявляет активность, подобную фактору роста нервов, в отношении нейронов ганглиев задних корешков спинного мозга, нейротрофные и нейропротективные эффекты. В предшествующем уровне техники известны некоторые лечебные вещества с нейропротективными свойствами. WO 01/29067, например, относится к тетрапептиду L-аланил-L-глутамил-L-аспарагил-Lпролину, который как биологически активное соединение стимулирует функциональную активность нейронов. Предложено применение тетрапептида L-Ала-L-Глу-L-Асп-L-Про в медицине для приготовления лекарств, стимулирующих функциональную активность нейронов.US 2004/102370 относится к пептидам, включающим основную тетрамерную пептидную структурную единицу Хаа-Хаа-Хаа-Хаа, в которой Хаа в положении 1 представлен Глу или Асп, Хаа в положении 2 представлен любой аминокислотой, Хаа в положении 3 представлен любой аминокислотой, и Хаа в положении 4 представлен Глу или Асп. Указанные пептиды применяются для лечения нейродегенеративных заболеваний и повреждений нервов и описаны как стимуляторы регенерации и выживания аксонов. Сущность изобретения Задача настоящего изобретения - предоставить новые соединения для применения в курсе лечения нейродегенеративных заболеваний и для улучшения памяти у здоровых людей. Поэтому настоящее изобретение относится к нейропротективному соединению, состоящему из аминокислотной последовательности DLHW. Аббревиатуры для аминокислотных остатков являются обычно используемыми в данной области техники, а именно D означает аспарагиновую кислоту (Асп), L означает лейцин (Лей), Н означает гистидин (Гис), a W означает триптофан (Трп). Соединение по настоящему изобретению может проявлять нейропротективные и нейротрофные свойства посредством влияния на жизнеспособность нервных клеток. Эти свойства позволяют повысить жизнеспособность нейрональных клеток. Указанное соединения, которое может также быть частью белка, конъюгированным с белком, конъюгированным с другими молекулами и т.д., демонстрирует сходные нейропротективные свойства с другими хорошо известными в данной области техники нейропротективными агентами. Соединение в соответствии с данным изобретением может применяться вместе (например, в одной стандартной лекарственной форме), или параллельно (например, при различных способах и/или местах введения) с другими активными компонентами, или как отдельный активный компонент. Если соединение по настоящему изобретению является частью или конъюгировано или слито с другой молекулой (например, гликаном), указанное соединение должно экспонироваться на поверхности указанного белка или указанной конъюгированной молекулы, чтобы активировать или инактивировать каскады передачи сигналов. Доступность пептида по настоящему изобретению может определяться вычислительным белковым дизайном или экспериментальными подходами. Предпочтительными партнерами для конъюгации или слияния соединения настоящего изобретения являются молекулы, которые могут позволить нацеливать соединение в специфический участок организма индивидуума после его введения. Партнерами для слияния могут быть, например, антитела, направленные к конкретным клеткам индивидуума.-1 016040 Как применяется здесь, термин нейропротективное соединение или нейропротективная композиция относится к соединению (или к смеси соединений), защищающему нейрональные клетки от токсического вещества, стабилизирующему клеточную мембрану нейрональной клетки и/или помогающему нормализации функций нейрональных клеток. Нейропротективное соединение, таким образом, предотвращает потерю жизнеспособности или функций нейрональных клеток в условиях стресса. Нейропротективная активность может быть определена с помощью анализа клеточных культур (путем измерения жизнеспособности нейрональных клеток, например путем МТТ анализа (Mosmann Т. (1983), J. Immunol.Methods 65: 55-61. Соединения из настоящего изобретения проявляют также нейротрофные и/или нейрогенные свойства. Это означает, что соединения изобретения могут также стимулировать рост нейрональных клеток. Базовая структура соединения в соответствии с настоящим изобретением, образованного аминокислотами, предпочтительно синтезируются химически в соответствии со способами, известными в данной области техники, например способом, разработанным Merrifield et al. (Merrifield R.В. (1963) J. Am. Chem.Soc. 85, 2149-2154; твердофазный синтез пептидов). Способ твердофазного синтеза пептидов, введенный Merrifield в 1963 г., например, включает присоединение растущей пептидной цепи к твердой подложке. Аминокислота, соответствующая С-концу целевого пептида, ковалентно присоединяется к нерастворимой полимерной подложке (смоле). Следующая аминокислота с защищенной -аминогруппой активируется и вступает в реакцию с аминокислотой, связанной со смолой до получения аминозащищенного дипептида на смоле. Защитная группа для амина удаляется, и удлинение цепи продолжается с третьей и последующими защищенными аминокислотами. После построения целевой защищенной пептидной цепи ее отделяют от смолы подходящими химическими средствами, высвобождая, таким образом, в раствор неочищенный пептидный продукт (по способам твердофазного синтеза пептидов и другим способам синтеза пептидов см. также Fields G.B.Pennington M.W., Dunn B.M. (eds.), Peptide Synthesis Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 35,Humana Press Inc., Totowa (1994); Grant G.A. (ed.), Synthetic peptides: a user's guide, W.H. FreemannCo.,New York (1992. Неорганический катион на С-концевом участке соединения по данному изобретению может быть катионом щелочного металла или щелочно-земельного металла, предпочтительно катионом лития, натрия, калия, магния или кальция. Эти неорганические катионы регулярно используют для приготовления солей фармацевтически активных субстанций. Органическим катионом может быть четвертичный аммонийный ион. Если N-концевой участок соединения по данному изобретению включает положительный заряд,указанный заряд может быть предпочтительно компенсирован эквивалентом неорганического или органического аниона. Органический анион может быть, например, ацетат-анионом. В соответствии с другим предпочтительным воплощением данного изобретения алкильный остаток включает менее 30, предпочтительно менее 20, более предпочтительно менее 10 атомов углерода. Жирная кислота, например, этерифицирующая соединение по настоящему изобретению, может менять его физические свойства, приводя к более гидрофобному соединению. В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение из формулы (I) может быть повторяющимся звеном высокомолекулярной молекулы. Указанная молекула может включать 2, 3, 4, 5, 6, 10 или более соединений в соответствии с настоящим изобретением. Такая высокомолекулярная молекула может проявлять значительно более высокую эффективность при применении у индивидуума, чем молекула единичного компонента. Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей соединение в соответствии с настоящим изобретением и дополнительно по крайней мере один фармацевтически пригодный наполнитель и/или носитель. Соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть сформировано в виде фармацевтического препарата, который может вводиться пациенту для профилактики или лечения церебральных заболеваний, в частности нейродегенеративных заболеваний. Фармацевтический препарат может дополнительно включать фармацевтически пригодные наполнители и/или носители. Подходящие наполнители и носители хорошо известны в данной области техники (см., например, "Handbook of Pharmaceutical Excipients 5th Edition by Raymond C. Rowe, Paul J. Sheskey, Sian C. Owen (2005), APhA Publications). В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция может дополнительно включать по крайней мере один дополнительный фармацевтически активный компонент. Фармацевтический препарат в соответствии с настоящим изобретением может включать помимо нейропротективного соединения по настоящему изобретению другие активные компоненты, которые могут проявлять сходные свойства при применении у индивидуума или которые могут вызывать другие реакции у пациентов, прошедших лечение.-2 016040 Указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент предпочтительно выбирают из группы, состоящей из тетрапептида L-аланил-L-глутамил-L-аспарагил-L-пролина (см., например, WO 01/29067) и церебролизина (см., например, ЕР 452299). В соответствии с настоящим изобретением, например, антиоксиданты, такие как витамины, могут рассматриваться как дальнейшие активные компоненты, поскольку антиоксиданты ингибируют окисление или подавляют реакции, стимулируемые кислородом, свободными радикалами кислорода, реакционноспособными формами кислорода, включая пероксиды. Антиоксиданты, в особенности жирорастворимые антиоксиданты, могут абсорбироваться клеточной мембраной для нейтрализации радикалов кислорода и защищать таким образом мембрану. Антиоксиданты, пригодные в настоящем изобретении, предпочтительно являются антиоксидантными витаминами, которые могут быть выбраны из группы, состоящей из всех форм витамина А, включая ретиналь и 3,4-дидегидроретиналь, все формы каротина, такие как -каротин, -каротин, -каротин, -каротин, все формы витамина С (D-аскорбиновую кислоту, Lаскорбиновую кислоту), все формы токоферола, такие как витамин Е (-токоферол, 3,4-дигидро-2,5,7,8 тетраметил-2-(4,8,12-триметилтридецил)-2 Н-1-бензопиран-6-ол),-токоферол,-токоферол,токоферол, токохинон, токотриенол и эфиры витамина Е, которые легко подвергаются гидролизу до витамина Е, такие как витамин Е ацетат и витамин Е сукцинат, и фармацевтически пригодные соли витамина Е, такие как витамин Е фосфат, пролекарства витамина А, каротина, витамина С и витамина Е,фармацевтически приемлемые соли витамина А, каротина, витамина С и витамина Е и т.п. и их смесей. В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция предназначена для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, трансдермального,парентерального, перорального, энтерального, интраназального или ректального введения. В зависимости от способа применения фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть сформулирована, например, в виде таблеток, капсул, жидкостей, инфузий и суппозиториев (см., например, "Pyarmaceutical Formulation Development of Compounds" by Sven Frokjaer(1999), CRC; "Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations" by Sarfaraz K. Niazi (2004), CRC. Соединения предпочтительно включаются в композицию в количестве между 0,1 и 100 мкг/г, предпочтительно от 1 до 80 мкг/г. Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения с нейропротективной активностью, включающего молекулу по формуле (I)Xn-DLHW-Ym где X и Y представлены аминокислотными остатками, а п и m - целыми числами от 0 до 3, и как определено выше, для производства медикамента для лечения и/или профилактики нейродегенеративного заболевания. В соответствии с настоящим изобретением все компоненты формулы (I), проявляющие нейропротективную активность, могут применяться для производства медикамента для лечения и/или профилактики нейродегенеративных заболеваний. Нейропротективная активность может быть определена, например, с помощью МТТ теста (Mosmann Т. (1983), J. Immunol. Methods 65: 55-61). МТТ тест является анализом жизнеспособности клеток. В метаболически активных клетках (например, нейрональных клетках), фермент сукцинатдегидрогеназа разрушает МТТ до розово-синих частиц формазана. Все жизнеспособные клетки, обработанные МТТ,становятся розово-синими по цвету. Все обработанные клетки, которые погибли, не способны разрушать МТТ и поэтому их окраска не меняется. Скорость изменения окраски, измеряемая по количеству частиц формазана, может быть измерена посредством считывания поглощения с применением ридера микропланшетов. Жизнеспособность выражают в процентах от контроля. Если С-концевой участок соединения (I) отрицательно заряжен, указанный заряд может быть компенсирован эквивалентом неорганического или органического катиона или алкильным остатком. Соединение в соответствии с настоящим изобретением может проявлять нейропротективные и нейротрофные свойства посредством влияния на жизнеспособность нейрональных клеток. Эти свойства позволяют увеличить жизнеспособность нейрональных клеток. Указанное соединение, которое может также быть частью белка, конъюгировано с белком, конъюгировано с другой молекулой и т.д., демонстрирует сходные нейропротективные свойства, как и другие хорошо известные нейропротективные агенты,известные в данной области техники. Соединение в соответствии с настоящим изобретением может применяться совместно (например, в одной стандартной лекарственной форме) или параллельно (например,при различных способах и/или местах введения) с другими активными компонентами, или как отдельный активный компонент. Если соединение в соответствии с настоящим изобретением является частью белка, или конъюгировано или слито с белком, или конъюгировано с другой молекулой (например, гликаном), указанное соединение должно экспонироваться на поверхности указанного белка или указанной конъюгированной молекулы, чтобы активировать или инактивировать каскад сигнальной трансдукции. Доступность пептида в соответствии с настоящим изобретением может определяться вычислительным белковым дизайном или экспериментальными подходами.-3 016040 Предпочтительными конъюгированными или слитыми партнерами соединения из настоящего изобретения являются молекулы, которые могут позволить нацеливать соединение в специфический участок организма индивидуума после введения. Партнерами для слияния могут быть, например, антитела, направленные к конкретным клеткам индивидуума. Аминокислотные остатки, предпочтительно связываемые с соединением в соответствии с настоящим изобретением, могут быть выбраны из группы из всех известных природных аминокислот (аланина,аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина,гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина) или, конечно, из нестандартных аминокислот, таких как селеноцистеин, пирролизин, таурин, GABA (-аминомасляная кислота), лантионин, 1-аминоизобутировая кислота, дегидроаланин, дегидроаминомасляная кислота, гидроксипролин и орнитин. Соединение в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно является неиммуногенным. Термин неиммуногенное соединение, как применяется здесь, относится к молекуле, в частности к соединению, которое, по существу, не вызывает иммунного ответа in vivo, когда применяется у человека или животного. Это свойство молекулы может быть определено способами, известными в данной области техники. Например, если применение молекулы в соответствии с настоящим изобретением у животного (например, кролика, мыши) вызывает у животного существенное повышение антител, направленных против указанной молекулы, указанная молекула считается иммуногенным соединением, если,напротив, нельзя вызвать существенного повышения антител, специфичных к молекуле, при применении указанной молекулы у животных или человека она считается неиммуногенным соединением. Важно,что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются неиммуногенными, поскольку иммуногенные соединения в норме элиминируются из организма иммунной системой. Основная структура соединения в соответствии с настоящим изобретением, которая образована аминокислотами, предпочтительно синтезируется химически в соответствии со способами, известными в данной области техники, например, по способу, разработанному Merrifield et al. (Merrifield, R.B. (1963) J.Am. Soc. 85, 2149-2154; твердофазный пептидный синтез). Неорганический катион на С-концевом участке соединения в соответствии с настоящим изобретением может быть катионом щелочного металла или щелочно-земельного металла, предпочтительно катионом лития, натрия, калия, магния или кальция. Эти неорганические катионы регулярно применяются для приготовления солей фармацевтически активных веществ. Органический катион может быть четвертичным аммонийным ионом. Если N-концевой участок соединения в соответствии с настоящим изобретением включает положительный заряд, указанный заряд может быть предпочтительно компенсирован эквивалентом неорганического или органического аниона. Органический анион может быть, например, ацетат-анионом. В соответствии с другим предпочтительным воплощением данного изобретения алкильный остаток включает менее 30, предпочтительно менее 20, более предпочтительно менее 10 атомов углерода. Жирная кислота, например, этерифицирующая соединение по настоящему изобретению, может менять его физические свойства, приводя к более гидрофобному соединению. В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение из формулы (I) может быть повторяющимся звеном высокомолекулярной молекулы. Указанная молекула может включать 2, 3, 4, 5, 6, 10 или более соединений в соответствии с настоящим изобретением. Такая высокомолекулярная молекула может проявлять значительно более высокую эффективность при применении у индивидуума, чем единичная молекула соединения. В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение является соединением в соответствии с настоящим изобретением, как определено выше. Нейродегенеративное заболевание предпочтительно выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни Пелицеуса-Мерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа, болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, инсульта и спинной сухотки. В дополнение к этим предпочтительным нейродегенеративным заболеваниям соединения в соответствии с настоящим изобретением может также применяться для лечения других церебральных нарушений. В предпочтительном воплощении настоящего изобретения соединения настоящего изобретения может применяться для производства медикамента для улучшения способностей к обучению и долговременной памяти у индивидуумов. Применение соединения настоящего изобретения у индивидуума,здорового лица или лица, страдающего заболеванием, предпочтительно неврологическим заболеванием,ведет к значительному улучшению способностей к обучению и запоминанию у указанного лица. Так,-4 016040 применение соединений настоящего изобретения также у здоровых индивидуумов ведет к улучшению памяти. Подходящим тестом для демонстрации этих положительных эффектов на животной модели является тест водного лабиринта Морриса. В одном воплощении изобретения пептид или белок, включающий DLHW, может употребляться в качестве лекарства, стимулирующего репаративные процессы в мозге, и применяться для лечения и профилактики церебральных поражений, связанных с травмой, включая лечение церебральных поражений после перелома свода черепа, основания черепа, множественных переломов костей, для лечения церебральных поражений в случае внутричерепной травмы (например, посттравматического сотрясения мозга,ран и контузий мозга, субарахноидальной, субдуральной и экстрадуральной геморрагии), для лечения и профилактики травматического шока, лечения церебральных поражений, связанных с воздействием радиации, пониженной температуры, нагревания и света, воздушного давления, электрического и высокочастотного тока, лечения и профилактики отдаленных эффектов перелома черепа, лечения и профилактики отдаленных эффектов внутричерепной травмы, лечения и профилактики отдаленных церебральных поражений, вызванных радиацией, осложнений после хирургических и других медицинских вмешательств. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, подавляющее нейротоксические эффекты нейротрофных агентов, стимулирующее процессы восстановления мозга и демонстрирующее церебропротективную активность для лечения и профилактики церебральных поражений после отравления, включая лечение церебральных поражений после отравления терапевтическими агентами, медицинскими и биологическими соединениями, лечение церебрального повреждения агентами немедицинского происхождения, лечение и профилактику отдаленных церебральных поражений, вызванных отравлением наркотиками и немедицинскими веществами. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство с ноотропной активностью и стимулирующее процессы церебрального восстановления для лечения и профилактики недостаточности умственных способностей. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться для стимуляции процессов церебрального восстановления и двигательной активности для лечения и профилактики паралитических расстройств, включая лечение и профилактику гемиплегии, лечение и профилактику детского церебрального паралича, лечение и профилактику других паралитических синдромов (квадриплегии, параплегии, диплегии верхних конечностей, моноплегии нижних конечностей). В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, стимулирующее процессы церебрального восстановления с церебропротективной активностью для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае хромосомных аномалий, включая синдром Дауна. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, стимулирующее процессы церебрального восстановления с церебропротективной активностью для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае воспалительных церебральных расстройств, включая лечение и профилактику церебральных повреждений в случае бактериального менингита, включая криптококковый менингит у больных СПИД, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае небактериальных менингитов, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае менингита неясного происхождения, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае энцефалита, миелита и энцефаломиелита, включая церебральный токсоплазмоз у больных СПИД, для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае внутричерепных абсцессов, для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае флебита и тромбофлебита внутричерепного венозного синуса, для лечения и профилактики последствий внутричерепных абсцессов или гнойной инфекции. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, стимулирующее процессы церебрального восстановления с церебропротективной и ноотропной активностью для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае цереброваскулярных расстройств, включая лечение и профилактику церебральных повреждений в случае субарахноидальной геморрагии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае церебральной геморрагии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае непроходимости и стеноза прецеребральных артерий, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае непроходимости церебральных артерий, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае транзиторной церебральной ишемии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае других цереброваскулярных расстройств (острых цереброваскулярных расстройств, церебрального атеросклероза и других генерализованных цереброваскулярных расстройств, гипертензионной энцефалопатии,церебральной аневризмы, церебрального артериита и негнойного тромбоза внутричерепного венозного синуса). В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобрете-5 016040 нием могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления, обладающего церебропротективной и ноотропной активностью, для лечения и профилактики алкогольного психоза, включая лечение и профилактику белой горячки при абстинентном синдроме, лечения и профилактики синдрома алкогольной амнезии и других расстройств алкогольной деменции, лечения и профилактики патологической алкогольной интоксикации, лечения и профилактики алкогольной паранойи и алкогольного психоза параноидного типа. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления, обладающего церебропротективной и ноотропной активностью для лечения и профилактики церебрального повреждения в случае алкоголизма. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, подавляющего токсические эффекты нейротропных агентов и обладающего церебропротективной и ноотропной активностью для лечения и профилактики психоза, вызванного наркотиками, включая лечение и профилактику синдрома наркотической абстиненции,лечение и профилактику вызванных наркотиками параноидных и/или галлюцинаторных расстройств,лечения и профилактики патологической интоксикации медицинскими агентами, лечения и профилактики других вызванных наркотиками психических расстройств (делирия, деменции, синдрома амнезии и органического аффективного синдрома). В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, подавляющего токсические эффекты нейротропных агентов и обладающего церебропротективной активностью, для лечения и профилактики лекарственной зависимости, включая лечение и профилактику зависимости от опиоидных агентов, лечение и профилактику зависимости от барбитуратов, седативных агентов и транквилизаторов, лечение и профилактику кокаиновой зависимости, лечение и профилактику зависимости от марихуаны и е производных, лечение и профилактику зависимости от амфетамина и психостимулирующих агентов, лечение и профилактику зависимости от галлюциногенных агентов, лечение и профилактику церебральных повреждений, вызванных злоупотреблением лекарствами без лекарственной зависимости (злоупотреблением алкоголя, табака, марихуаны, галлюциногенов, опиоидов, кокаина, психостимулирующих агентов, антидепрессантов). В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве агента для лечения и профилактики психогенных симптомов и синдромов, включая лечение и профилактику психогенных психологических нарушений, лечение и профилактику других психогенных симптомов и синдромов (заикания и дефектов речи, психогенных аноректических судорог, повторяющихся стереотипных движений, неорганических расстройств сна, психогенных расстройств питания, энуреза, психалгии), лечения и профилактики острого стрессового ответа, лечения и профилактики реакций, вызванных психологическими причинами. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве агента для лечения и профилактики неорганических психозов, включая лечение и профилактику шизофренических расстройств, лечение и профилактику аффективных психозов, лечение и профилактику параноидных состояний, лечение и профилактику других неорганических психозов (психозов депрессивного и возбужденного типа, реактивного психоза со спутанностью сознания, острых параноидных реакций, психогенных параноидных психозов) и недифференцированных психозов, включая психозы, индуцированные церебральными повреждениями у больных СПИД, лечение и профилактику инфантильных психозов, включая инфантильный аутизм и дезинтегративные психозы. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления и обладающего церебропротективной и ноотропной активностью, для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае других церебральных расстройств, включая лечение и профилактику церебральных повреждений церебральных кист, лечение и профилактику гипоксического повреждения мозга, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае внутричерепной гипертензии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае энцефалопатии. В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления и двигательную активность, обладающего церебропротективными и ноотропными эффектами, для лечения и профилактики симптомов и синдромов в случае различных церебральных расстройств, включая лечение и профилактику когнитивных расстройств, нарушений памяти и внимания (например, в случае амнестических заболеваний, недостаточности умственных способностей, неорганических психозов и т.д.), лечения и профилактики афазии и апраксии (например, в случае амнестических заболеваний, неогранических психозов, церебральных повреждений из-за хромосомных аномалий и т.д.), лечения и профилактики эмоциональных расстройств (например, в случае неорганических психозов, демиелинизирующих церебральных расстройств и т.д.), лечения и профилактики психопатологического синдрома(например, в случае транзиторных органических психотических состояний, психозов, вызванных лекар-6 016040 ствами, лекарственной зависимости и т.д.), лечения и профилактики астено-депрессивного синдрома(например, в случае неорганических психозов, церебральных повреждений из-за хромосомных аномалий и т.д.), лечения и профилактики синдрома делирия (например, в случае психозов, индуцированных наркотиками и наркотической зависимости, неорганических психозов и т.д.), лечения и профилактики нарушений сна (например, в случае опухолей мозга, транзиторных органических психотических состояний и т.д.), для лечения и профилактики церебрального фокального синдрома (фокальных патологических симптомов) (например, в случае церебральных нарушений, вызванных осложнениями хирургических или других медицинских вмешательств, демиелинизирующих церебральных расстройств и т.д.), лечения и профилактики синдрома моторных расстройств (например, в случае опухолей мозга, церебральных нарушений, вызванных отравлениями и т.д.), лечения и профилактики периферической нейропатии, предпочтительно диабетической нейропатии. В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция дополнительно включает фармацевтически пригодный наполнитель и/или носитель, как определено выше. В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция далее включает по крайней мере один дополнительный фармацевтически активный компонент. Указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент предпочтительно выбран из группы, состоящей из тетрапептида L-аланил-L-глутамил-L-аспарагил-L-пролина и церебролизина. Медикамент предпочтительно предназначается для внутривенного, внутримышечного, спинального,эпидурального, чрескожного, парентерального, перорального, энтерального или ректального введения. В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения медикамент включает соединение в количестве между 0,1 мкг/г и 100 мг/г, предпочтительно от 1 до 80 мг/г. В частности, предпочтительно применять в качестве соединения тетрапептид, имеющий аминокислотную последовательность DLHW. Другой аспект настоящего изобретения относится к способу профилактики проявления нейродегенеративного заболевания у индивидуума и лечения индивидуума, страдающего нейродегенеративным заболеванием, включающему введение фармацевтического препарата или эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением. Термин эффективное количество соединения, как применяется здесь, зависит среди прочих факторов от пути введения и физического состояния индивидуума, у которого применяют указанное соединение. Способы определения эффективного количества известны специалистам в данной области техники. Нейродегенеративное заболевание предпочтительно выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни Пелицеуса-Мерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа, болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, периферической нейропатии,диабетической нейропатии, инсульта и спинной сухотки. В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение вводят указанному индивидууму в дозе от 0,1 мкг до 20 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,5 мкг до 10 мг/кг массы тела. Другой аспект настоящего изобретения относится к способу культивирования нейрональных клеток, включающему этапы обеспечения культуры нейрональных клеток; добавления в указанную культуру соединения в соответствии с настоящим изобретением и инкубации смеси соединения/культуры. Соединение в соответствии с настоящим изобретением может также быть выгодно использовано для in vitro целей для культивирования нейрональных клеток, например. Указанное соединение просто добавляют в культуральные среды, известные в данной области техники. Соединение предпочтительно содержится в указанной культуре в количестве от 5 мкг/мл до 2 мг/мл, предпочтительно от 10 до 1 мкг/мл, более предпочтительно от 15 до 900 мкг/мл культуральной среды. Соединение в соответствии с настоящим изобретением проявляет нейропротективный эффект в отношении нейрональных клеток, в частности, когда оно включено в вышеуказанной концентрации в культуральную среду. Настоящее изобретение далее проиллюстрировано следующей фигурой и примерами, не ограничиваясь ими. Чертеж показывает эффекты DLHW по сравнению с матриксом анализа, добавленным в IDIV (первый день in vitro), в отношении жизнеспособности кортикальных нейронов, полученные способом анализа с МТТ с низким содержанием сыворотки 2%. Результаты показаны как среднее значение и стандарт-7 016040 ная ошибка среднего от данных в процентах (контроль составляет 100%). Величины представляют среднее значение и SEM % (100% = контроль) от двух независимых экспериментов, выполненных за два дня на двух идентичных 96-луночных планшетах (n8 для каждой концентрации используемого объекта и для контролен). Неповрежденный контроль представляет 0 и не получает какого-либо испытуемого объекта. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Пример 1. Представленный пример с применением способа анализа с низким содержанием сыворотки 2% проводили для оценки нейропротективного потенциала пептида DLHW, состоящего из аминокислотной последовательности. Эффекты оценивали также для матрикса анализа (6,18 мг/мл NaCl и 0,35 мг/млKCl). 1.1. Испытуемые и контрольный объекты. 1.1.1. Испытуемые объекты. Пептиды, состоящие из аминокислотной последовательности DLHW, NIVTPR, HGFLPR и 1.2. Результаты экспериментов. Этот пример описывает эффекты пептидов, состоящих из аминокислотных последовательностейDLHW, NIVTPR, HGFLPR и NMVPFPR, в валидированном анализе с низким содержанием сыворотки 2% с применением куриных кортикальных нейронов in vitro. Эффекты оценивали также для матрикса анализа (6,18 мг/мл NaCl и 0,35 мг/мл KCl). Общие выводы, которые могут быть сделаны по результатам, состоят в следующем. Полученные результаты демонстрируют дозозависимый профиль, явно улучшающий нейрональную жизнеспособность, достигающую величины максимального эффекта более 300% в отношении необработанного контроля. Это дополнительно указывает, что выбранный способ анализа способен без всяких сомнений оценить дозозависимый профиль ответа. В то время как матрикс анализа был не способен повысить нейрональную жизнеспособность выше степени необработанного контроля, пептид DLHW явно проявлял нейропротективные эффекты. В данном примере DLHW по результатам анализа был эффективным соединением, достигающим высокой величины эффекта (330% по сравнению с контролем) при относительно низких концентрациях. Результаты представленного эксперимента показывают, что этот малый пептид DLHW или соединения,включающие указанный пептид, вносят значительный и эффективный вклад в повышение нейрональной жизнеспособности. В противоположность этому, пептиды, включающие другую аминокислотную последовательность, не демонстрируют таких эффектов. 2. Испытуемые вещества. 2.1. Цель эксперимента. Эксперименты были проведены для оценки нейропротективных эффектов пептидов, состоящих из аминокислотной последовательности DLHW, NIVTPR, HGFLPR, NMVPFPR и матрикса анализа. 2.2. Испытуемые и контрольные объекты. 2.3. Условия анализа. Способ анализа на клеточной культуре: анализ с низким содержанием сыворотки 2%. 3. Методы. Процедурой анализа, использованной в данном эксперименте, является способ анализа с низким содержанием сыворотки 2% с применением изолированных птичьих кортикальных нейронов. С данным анализом в культуре клеток in vitro нейропротективный и/или нейротрофный потенциал соединений может быть оценен путем определения жизнеспособности живых нейронов после определенного периода времени в культуре. Методом измерения количества жизнеспособных нейронов является МТТ-анализ. 3.1. Испытуемые объекты. Биологическую активность DLHW, NIVTPR, HGFLPR, NMVPFPR и матрикса анализа (6,18 мг/млNaCl и 0,35 мг/мл KCl) исследовали с применением валидированной модельной системы в культуре птичьих клеток. 3.1.1. Приготовление маточных растворов пептидов. Пептиды, предназначенные для анализа, растворяли в матриксе анализа (6,18 мг/мл NaCl и 0,35 мг/мл KCl). 3.2. Контроль. Для контроля применяли нейроны, которые не обрабатывали DLHW, NIVTPR, HGFLPR иNMVPFPR. 3.3. Задачи процедуры анализа. В данном примере пептиды, содержащие аминокислотную последовательность DLHW, NIVTPR,HGFLPR и NMVPFPR, исследовали для оценки их возможной активности в отношении повышения нейрональной жизнеспособности изолированных кортикальных нейронов. Пептиды применяли в концентрации 4,5 мг/мл. 3.4. Размер группы и концентрации. К изолированным нервным клеткам пептиды или матрикс анализа добавляли один раз, т.е. на первые сутки. 8 концентраций, включающих диапазон доз 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 и 720 мкг на 1 мл среды, вводимые объемы составили 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл на 1 мл среды. 4. Оценка. 4.1. МТТ-анализ жизнеспособности. Нейрональную жизнеспособность культур определяли МТТ-анализом с применением ридера микропланшетов (570 нм). МТТ-анализ является чувствительным тестом, измеряющим активность митохондриальной дегидрогеназы только в живых клетках. Он выполняется в соответствии со способом, описанным Mosmann, J. Immunol. Meth., 1983, 55-63. Анализ основан на восстановлении желтого МТТ (3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида) до темно-синих кристаллов формазана митохондриальными дегидрогеназами (сукцинатдегидрогеназой). Поскольку эта реакция катализируется только в живых клетках, анализ может применяться для количественного определения жизнеспособности клеток. Для определения жизнеспособности клеток раствор МТТ добавляли в каждую лунку до конечной концентрации 0,5 мг/мл. Спустя 2 ч МТТ-содержащую среду удаляли аспирацией. Клетки лизировали 3% ДСН, кристаллы формазана растворяли в изопропаноле/HCl. Для оценки оптической плотности использовали ридер микропланшетов (Anthos HT II) при длине волны 570 нм. Нейрональную жизнеспособность выражали в виде оптической плотности (ОП). 5. Статистика. Для оценки различия между обработанным и необработанными нейронами применяли t-критерий Стьюдента. Различия считали значимыми при р 0,05. 6. Результаты. Данный пример описывает нейротрофные/нейропротективные эффекты in vitro пептида, содержащего аминокислотную последовательность DLHW. Дополнительно матрикс анализа тестировали в анализе с низким содержанием сыворотки 2%, с применением кортикальных куриных нейронов. Эффекты оценивали, как упоминалось для DLHW, NIVTPR, HGFLPR и NMVPFPR. Дополнительно- 10016040 матрикс анализа (6,18 мг/мл NaCl и 0,35 мг/мл KCl) анализировали в данном тесте. Описательная статистика для каждой концентрации пептидов и матрикса анализа, такая как среднее значение, стандартное отклонение и SEM, показаны в табл. 2 и 3 и на чертеже. В табл. 4 суммированы р-значения, полученные при t-анализе Стьюдента, статистически оценивающем различия между необработанными контролями и каждой из 8 концентраций (от 5,6 до 720 мкг/мл) DLHW и матрикса анализа. Таблица 2 Эффекты анализируемых пептидов и матрикса анализа, добавленных в 1DIV, на жизнеспособность кортикальных нейронов, полученные способом анализа с МТТ с низким содержанием сыворотки 2%. Результаты показаны в виде среднего значения, стандартного отклонения и стандартной ошибки среднего (SEM) оптических плотностей (ОП). Среднее значение Величины представляют ОП в виде среднего значения, стандартного отклонения и SEM по четырем независимым экспериментам, выполненным за четыре дня с двумя идентичными 96-луночными планшетами (n8 для каждой концентрации пептида и матрикса анализа и для контролей). Неповрежденный контроль представлен 0 и не получал ни пептида, ни матрикса анализа.- 11016040 Таблица 3 Эффекты анализируемых пептидов и матрикса анализа, добавленных на 1DIV, на жизнеспособность кортикальных нейронов, полученные в способе анализа с МТТ с низким содержанием сыворотки 2%. Результаты показаны в виде среднего значения, стандартного отклонения и стандартной ошибки среднего (SEM) для данных в процентах (контроль составляет 100%; см. также чертеж для DLHW). Среднее значение Величины представляют жизнеспособность в процентах в виде среднего значения, стандартного отклонения и SEM по четырем независимым экспериментам, выполненным за четыре дня с двумя идентичными 96-луночными планшетами (n8 для каждой концентрации пептида и матрикса анализа и для контролей). Неповрежденный контроль представлен 0 и не получал ни пептида, ни матрикса анализа. Таблица 4 Результаты статистического анализа - р-величины: в верхней части таблицы показаны р-величины,отображающие разницу между необработанным контролем и различными концентрациями пептидов и матрикса анализа. Разница между концентрациями и контролем Различия между разными значениями считали значимыми при р 0,05. Значения для расчета различий были получены из четырех независимых экспериментов, проведенных за четыре дня с двумя идентичными 96-луночными планшетами (n8 для концентраций DLHW и матрикса анализа и для контро- 12016040 лей). Неповрежденный контроль не получал ни пептида, ни матрикса анализа. В то время как в табл. 2 результаты показаны в виде среднего значения, стандартного отклонения иSEM оптических плотностей (ОП), табл. 3 иллюстрирует результаты относительно необработанного контроля, в процентах, где среднее значение необработанного контроля взято за 100%. Чертеж соответствует результатам, показанным в табл. 3 для DLHW. Чертеж показывает эффекты эффективного пептида, DLHW, по сравнению с матриксом анализа. Максимальный эффект 430% может быть получен для концентрации 360 мкг/мл DLHW, но даже при более высоких концентрациях эффекты остаются в диапазоне 300% от уровня контроля. В противоположность этому, другие анализируемые пептиды не показывают какого-либо значимого эффекта. В табл. 5 приведены основные эффекты, полученные для DLHW и матрикса анализа. Вновь обобщены результаты, описанные выше. Таблица 5 Обобщение эффектов пептидов и матрикса анализа, добавленных на 1DIV, в отношении жизнеспособности кортикальных нейронов, полученных МТТ-методом. 7. Обобщение экспериментальных данных. Обобщая возможные нейротрофные/нейропротективные эффекты DLHW, полученные в анализе с 2% низким содержанием сыворотки, можно установить, что DLHW значительно повышает нейрональную жизнеспособность по сравнению с необработанным контролем. Далее можно ясно продемонстрировать, что пептиды, имеющие иную аминокислотную последовательность, чем DLHW, не проявляют нейротрофных и нейропротективных свойств. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Нейропротективное соединение, состоящее из аминокислотной последовательности DLHW. 2. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по п.1 и при необходимости фармацевтически приемлемый наполнитель и/или носитель. 3. Композиция по п.2, характеризующаяся тем, что композиция дополнительно включает по крайней мере один фармацевтически активный компонент. 4. Композиция по п.3, характеризующаяся тем, что указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент выбран из группы, состоящей из тетрапептида L-аланил-L-глутамил-Lаспарагил-L-пролина и церебролизина. 5. Композиция по любому из пп.2-4, характеризующаяся тем, что композиция предназначена для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, чрескожного, парентерального, перорального, энтерального, интраназального или ректального введения. 6. Композиция по любому из пп.2-5, характеризующаяся тем, что соединение содержится в композиции в количестве от 0,1 мкг/г до 100 мг/г, предпочтительно от 1 мкг/г до 80 мг/г. 7. Применение соединения с нейропротективной активностью, состоящего из аминокислотной последовательности DLHW, для производства медикамента для лечения и/или профилактики нейродегенеративного заболевания. 8. Применение соединения с нейропротективной и нейротрофной активностью, состоящего из аминокислотной последовательности DLHW, для производства медикамента для улучшения способности к обучению и запоминанию у индивидуума. 9. Применение по п.7, характеризующееся тем, что нейродегенеративное заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни ПелицеусаМерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа,болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, периферической нейропатии, диабетической нейропатии, инсульта и спинной сухотки. 10. Применение по любому из пп.7-9, характеризующееся тем, что медикамент дополнительно включает фармацевтически приемлемый наполнитель и/или носитель.- 13016040 11. Применение по любому из пп.7-10, характеризующееся тем, что композиция дополнительно включает по крайней мере один фармацевтически активный компонент. 12. Применение по п.11, характеризующееся тем, что указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент выбран из группы, состоящей из тетрапептида L-аланил-L-глутамил-Lаспарагил-L-пролина и церебролизина. 13. Применение по любому из пп.7-12, характеризующееся тем, что медикамент предназначен для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, мукозального, чрескожного, парентерального, перорального, энтерального, интраназального или ректального введения. 14. Применение по любому из пп.7-13, характеризующееся тем, что медикамент включает соединение в количестве от 0,1 мкг/г до 100 мг/г, предпочтительно от 1 мкг/г до 80 мг/г. 15. Способ профилактики проявления нейродегенеративного заболевания у индивидуума и лечения индивидуума, страдающего нейродегенеративным заболеванием, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.2-6 или эффективного количества соединения по п.1. 16. Способ по п.15, характеризующийся тем, что нейродегенеративное заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни ПелицеусаМерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа,болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, периферической нейропатии, диабетической нейропатии, инсульта и спинной сухотки. 17. Способ улучшения способностей к обучению и запоминанию у индивидуума, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.2-6 или эффективного количества соединения по п.1. 18. Способ по любому из пп.15-17, характеризующийся тем, что соединение вводят указанному индивидууму в дозе от 0,1 мкг/кг до 20 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,5 мкг/кг до 10 мг/кг массы тела. 19. Способ культивирования нейрональных клеток, включающий этапы обеспечения культуры нейрональных клеток; добавления в указанную культуру соединения по п.1 и инкубации смеси соединения и культуры клеток. 20. Способ по п.19, характеризующийся тем, что соединение содержится в указанной культуре в количестве от 5 мкг/мл до 2 мг/мл, предпочтительно от 10 мкг/мл до 1 мг/мл, более предпочтительно от 15 до 900 мкг/мл культуральной среды.