Способы профилактики и защиты кровеносных сосудов от повреждений (варианты), способы лечения и профилактики различных видов гипертензии, атеросклероза (варианты)

1 Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение касается способа лечения и профилактики атеросклероза, различных видов гипертензии, профилактики повреждений сосудов с использованием экзохелинов, в частности экзохелинов Mycobacterium tuberculosis, с целью предупреждения пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов. Предшествующий уровень техники Известно, что экзохелины представляют собой растворимые в липидах агенты, которые могут хелатировать железо и блокировать железоопосредованные реакции, такие как образование гидроксильного радикала в результате реакции Фентона. Благодаря растворимости в липидах экзохелины способны проникать в клетки значительно быстрее, чем не растворимые в липидах хелаторы железа, такие как дефероксамин. Растворимость в липидах может также позволить экзохелинам локализоваться и хелатировать железо в иных частях клеток, чем не растворимые в липидах хелаторы железа, такие как дефероксамин.Horwitz L.D. и соавт. обнаружили, что экзохелины могут блокировать или значительно снижать окислительное повреждение ткани,обусловленное железоопосредованным катализом реакций типа ткань/свободный радикал,таких как образование гидроксильного радикала(ОН) в результате реакции Фентона. Данная реакция является важной причиной реперфузионных повреждений, которые происходят при восстановлении кровотока после временного нарушения. Исследования Horwitz L.D. и соавт. продемонстрировали, что экзохелины эффективно замедляют или предотвращают реперфузионные нарушения при введении во время реперфузии (публикация международной заявкиWO 96/23502, 08.12.1996). Кроме того, Horwitz L.D. и соавт. обнаружили, что экзохелины охватывают значительно более широкий класс материалов и имеют химическую структуру, отличающуюся от теоретической структуры, предложенной Macham и соавт. и Barclay и соавт. В работе Horwitz L.D. и соавт. было показано, что данные материалы могут хелатировать широкий круг металлов с образованием ранее неизвестных материалов. Кроме профилактики реперфузионных повреждений, соответствующим образом модифицированные экзохелины могут быть использованы для лечения определенных заболеваний и воздействуют на определенные клетки, такие как раковые клетки (WO 96/23502, 1996). В частности, известно, что удаление железа с помощью хелатирующего железо соединения дефероксамина оказывает отрицательное воздействие на рост клеток нейробластомы, не влияя подобным образом на рост нормальных клеток. Другие применения экзохе 001870 2 линов включают лечение сверхнагрузки железа при трансфузиях или химиотерапии рака. В результате выделения и очистки экзохелинов было обнаружено, что экзохелины представляют собой семейство молекул с различными молекулярными массами и рядом различных боковых цепей. Horwitz L.D. и соавт. получили очищенные экзохелины и впервые продемонстрировали их применение в качестве ловушек свободного железа, так что они оказались эффективными для предупреждения образования повреждающих ткань гидроксильных радикалов(OH) (WO 96/23502, 1996). В частности, были выделены очищенные экзохелины М. tuberculosis и показано, что они эффективно удаляют железо из трансферрина, лактоферрина и ферритина при физиологическом рН без переноса каких-либо инфекционных свойств бактерий, из которых они были выделены. Было также продемонстрировано, что данные экзохелины блокируют образование гидроксильных радикалов в результате реакции Фентона и, основываясь на ответе кардиомиоцитов, могут быть эффективными для профилактики реперфузионных повреждений после инфаркта миокарда или сосудистых инсультов в других тканях при введении сразу после приступа, а также в первые несколько часов после него. До упомянутой работы Horwitz L.D. и соавт. (международная заявка, опубликованнаяWO 96/23502, 08.12.1996) в уровне техники,относящемся к исследованиям микобактинов, не были выделены и очищены индивидуальные экзохелины, а их структура и композиция не была установлена. Более того, Horwitz L.D. и соавт. было обнаружено, что в предшествующих ссылках экзохелины были охарактеризованы неправильно, следовательно структура данных соединений не была идентифицирована. В частности, Macham (ibid.) идентифицировал их как пента- или гексапептид, имеющий молекулярную массу от 750 до 800, содержащий 3 мольN-гидроксилизина, N-ацетил-N-гидроксилизина или N-гидроксиорнитина и 1 моль треонина. Horwitz L.D. и соавт. показали, что экзохелины имеют значительно более широкий диапазон молекулярных масс, содержат несколько серий соединений с идентифицируемой разницей молекулярных масс, включают только 2 моля N-гидроксилизина и не являются пептидами. Пептид представляет собой полимер аминокислот (NH2-CHR-COOH), образованный при конденсации карбоксильной группы первой молекулы с аминогруппой другой молекулы с образованием амидной связи (-CO-NH-). Экзохелины не могут рассматриваться как пептиды. Вместо этого они содержат три аминокислоты и другие структурные группы (салициловую кислоту, дикарбоновые кислоты или моноэфирные аналоги и гидроксикарбоновые кислоты), образованные амидной (-NH-CO-), гидроксиматной(-NН(ОН)-СО-) и сложноэфирной (-СО-O-) конденсациями (WO 96/23502, 1996). Несоответствующая пролиферация гладкой мускулатуры сосудов является основным компонентом патофизиологии ряда клинически важных форм сосудистых заболеваний. Пролиферация и миграция клеток гладкой мускулатуры сосудов представляют собой важный механизм происхождения атеросклеротических бляшек, которые вызывают сердечные приступы,инсульты или заболевание периферических сосудов (N. Eng. J. Med., т. 314, с. 488-500,1986). Рестеноз после лечения атеросклеротических сосудистых повреждений посредством чрескожной внутрисосудистой ангиопластики является обычным неблагоприятным клиническим последствием данной процедуры. Рестеноз включает пролиферативный ответ гладкой мускулатуры сосудов в области повреждения (J.Am. Coll. Cardiol., т. 6, с. 369-375, 1985). Наконец, пролиферация гладкой мускулатуры сосудов, как полагают, является важным компонентом возникновения других форм сосудистых повреждений или обструкции, включая закрытие хирургических обходных путей (J. VascularResearch, т. 29, с. 405-409, 1992), радиационные повреждения сосудистой сети (J. Am. Coll. Cardiol., т. 19, с. 1106-1113, 1992), системную гипертензию (J. Hyper-tension, т. 12, с. 163-172,1994) и неонатальную или первичную легочную гипертензию (J. Clin. Invest., т. 96, с. 273-281,1995 и Circulation, т. 42, с. 1163-1184, 1970). Препараты клеточных культур in vitro часто используют при изучении пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов. Пролиферация клеток в культуре после обработки сывороткой, содержащей ростовые факторы, или обработки ростовыми факторами в индивидуальной форме может быть количественно оценена измерением поглощения клетками радиоактивного тимидина (Circulation, т. 90, с. 19081918, 1994). Соединения, которые ингибируют рост культивируемых клеток гладкой мускулатуры сосудов, обладают способностью препятствовать анормальной пролиферации гладкой мускулатуры сосудов при заболеваниях человека (Am. J. Physiol, т. 269, с. Н 1641-Н 1647,1995). Существуют доказательства того, что присутствие железа может быть важным фактором при развитии атеросклероза. Сверхнагрузка железа вследствие инъекций железодекстранового комплекса приводит к образованию атеросклеротических повреждений артерий у кроликов с гиперхолестеринемией (Arterioscler. Thromb.Vasc. Biol., т. 15, с. 1172-1180, 1995). Окисление холестеринового липопротеина низкой плотности представляет собой важный этап первых стадий развития атеросклероза и является железозависимым (J. Clin. Invest., т. 95, с. 2104-2110,1995). Это может отражать способность свободного железа катализировать образование свободных радикалов кислорода с высокой реакци 001870 4 онной способностью (Biochem. J., т. 184, с. 469472, 1979). Однако хелатирование железа ингибирует рост клеток или развитие клеточного цикла на других моделях, включая рост лимфоцитов и клеток нейробластомы, при котором могут существовать механизмы, не связанные с окислением холестеринового липопротеина низкой плотности (Blood, т. 86, с. 2268-2280,1995). Наконец, хелатор железа дефероксамин препятствует пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов in vitro и препятствует утолщению интимы (внутренней оболочки сосудов) in vivo у кроликов (Arterioscler. Thromb.,т. 14, с. 299-304, 1994). Дефероксамин также снижает пролиферацию гладкой мускулатуры интимы в экспериментальных венозных трансплантатах (J. Vascular Research, т. 29, с. 405-409,1992). Однако дефероксамин, соединение, которое не экстрагируется хлороформом и вследствие этого нерастворимо в липидах, имеет значительные ограничения для применения в качестве средства для лечения атеросклероза, рестеноза или других форм повреждений сосудов. Дефероксамин имеет существенные побочные эффекты при введении в высоких дозах in vivo и обычно не достигает уровней, превышающих 10 мкмол/л (Br. J. Haematol., т. 42, с. 547-555,1979), что считают недостаточно высоким уровнем для получения антипролиферативного эффекта у человека. Дефероксамин можно вводить только внутривенно, он проникает в клетки или ткани очень медленно только путем пиноцитоза. При этом требуется непрерывное введение, поскольку он быстро выводится (Biochem. Pharmacol., т. 41, с. 1361-1363, 1991). Следовательно, в настоящее время существует необходимость лечения и профилактики атеросклероза путем получения агента, который способен хелатировать железо и препятствовать образованию железоопосредованных свободных радикалов, но, в противоположность дефероксамину, является растворимым в липидах. Растворимый в липидах хелатор железа с данными свойствами, вероятно, пригоден для перорального или чрескожного введения и имеет значительную эффективность для профилактики как пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов, так и окисления липидов, двух главных механизмов развития атеросклероза. Постоянное введение данного растворимого в липидах хелатора железа было бы идеальным способом лечения с целью профилактики и препятствования развитию атеросклероза. Кроме того, существует необходимость профилактики рестеноза после ангиопластики(пластических операций на сосудах) или других способов, которые уменьшают обструкции в сосудах, посредством получения агента, который, подобно дефероксамину, способен хелатировать железо и препятствовать железоопосредованному образованию свободных ра 5 дикалов, но является растворимым в липидах. В соответствии с этим существует необходимость предотвращения атеросклероза посредством получения агента, который растворим в липидах, способен препятствовать перокислению липидов и пригоден для перорального введения. Далее, для профилактики рестеноза необходим агент, который является эффективным в первые несколько часов после проведения ангиопластики (J. Clin. Invest., т. 90, с. 2044-2049,1992; J. Vasc. Surg., т. 19, с. 1084-1091, 1994). В идеале данный агент должен вводиться непосредственно в сосуд, который будет подвергнут ангиопластике, вовремя процедуры или в течение нескольких минут или менее после операции. Чтобы быть эффективным, агент должен быстро всасываться клетками сосудов в области лечения. Растворимые в липидах агенты способны к быстрому проникновению в липидную фракцию клеточных мембран и внутриклеточному взаимодействию, тогда как агенты, подобные дефероксамину, которые не растворимы в липидах, проникают в клетки значительно более медленно. Дефероксамин, будучи не растворимым в липидах, является бесполезным при внутрисосудистом введении в виде шарика. Однако следует ожидать, что растворимый в липидах хелатор железа будет пригоден для быстрого внутрисосудистого введения, поскольку он,вероятно, будет быстро поглощаться клетками гладкой мускулатуры сосуда. Таким образом, существует потребность в агенте, который может быть доставлен отличным от внутривенного путем и который может быстро проникать в клетки гладкой мускулатуры сосудов и препятствовать их пролиферации. Данный агент был бы потенциально пригодным для профилактики атеросклероза, рестеноза и других неблагоприятных последствий повреждений сосудов. Сущность изобретения Дефероксамин не соответствует данным критериям. Однако в настоящем изобретении показано, что специфические экзохелины представляют собой уникальные хелаторы железа,поскольку они являются растворимыми в липидах, что позволяет им быстро проникать в липидную фракцию клеточной мембраны, и они препятствуют железоопосредованному образованию гидроксильных радикалов или иных свободных радикалов с высокой реакционной способностью. В результате, в настоящем изобретении продемонстрирована способность специфических экзохелинов препятствовать пролиферации гладкой мускулатуры. Все другие известные в настоящее время хелаторы железа не могут быстро проникать в клетки, и до сих пор не было показано, что они препятствуют пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов. В соответствии с этим, в настоящем изобретении предложены способ защиты кровеносных сосудов живого организма от рестеноза, 001870 6 обусловленного пролиферацией клеток гладкой мускулатуры сосудов после ангиопластики или сосудистой хирургии, способ лечения, профилактики или замедления развития атеросклероза, способы лечения, профилактики или замедления развития системной гипертензии, легочной гипертензии, гипоксической, неонатальной и первичной легочной гипертензии у живого организма, способ предупреждения или замедления развития радиационного повреждения у живого организма, способ профилактики или замедления развития стеноза или закрытия обходного шунта коронарных артерий или других кровеносных сосудов после хирургической операции, способ предупреждения или замедления повышенной пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов у живого организма и способ предупреждения или замедления образования новых сосудов у живого организма. Указанные способы лечения и профилактики различных заболеваний, защиты сосудов от повреждений осуществляют путем введения в живой организм композиции, которая содержит эффективное количество десферриэкзохелина. Десферриэкзохелин может доставляться в живой организм внутриартериально или ингаляционным путем. Возможно также внутривенное, пероральное или внутриглазное введение. Может применяться десферриэкзохелин, выделенный из Mycobacterium tuberculosis. Перечень чертежей и иных материалов На фиг. 1 А, 1 В и 1 С представлена химическая структура экзохелинового хелата железа(ферриэкзохелина) и молекулы десферриэкзохелина (не содержащей железо); на фиг. 2 А и 2 В - профиль элюции фильтрата культуры М. tuberculosis при 220 нм и 450 нм соответственно; на фиг. 3 - профиль элюции того же фильтрата при 450 нм с показанной для каждого пика молекулярной массой; на фиг. 4 А - структура основного серинсодержащего экзохелина при m/z=720,3; на фиг. 4 В представлен полученный при масс-спектрометрии спектр серинсодержащего экзохелина, показанного на фиг. 4 А; на фиг. 5 - график, показывающий сравнительное ингибирование повреждения клеток в результате обработки десферриэкзохелином 772 С или дефероксамином кардиомиоцитов; на фиг. 6 А и 6 В - химическая структура экзохелинового хелата железа (ферриэкзохелина) и молекулы десферриэкзохелина (не содержащей железо) с идентифицированными участками модификации; на фиг. 7 - график сравнения нескольких образцов культивируемых клеток гладкой мускулатуры сосудов, обработанных различными концентрациями десферриэкзохелина; на фиг. 8 - график сравнения эффекта обработки культур клеток гладкой мускулатуры 7 сосудов десферриэкзохелином, ферриэкзохелином и дефероксамином; на фиг. 9 А и 9 В - графики, показывающие влияние различных доз десферриэкзохелина на систолическую функцию левого желудочка в восстановительный период (при выходе) после ишемии; на фиг. 10 - график, показывающий результаты измерения коронарного оттока перед и после ишемии при различных дозах десферриэкзохелина; на фиг. 11 А и 11 В - диаграммы, показывающие результаты измерения 2,3-дигидроксибензойной кислоты (ДГБА) и 2,5-ДГБА в сердечной ткани через 30 мин после реперфузии различных доз десферриэкзохелина. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения В данном изобретении показано, что экзохелины могут предотвращать пролиферацию культивируемых клеток гладкой мускулатуры сосудов. Получение. Экзохелины были получены и очищены из вирулентного (Эрдмана) и авирулентного(H37Ra) штаммов М. tuberculosis. Для повышения образования экзохелинов М. tuberculosis бактерии культивировали в среде с дефицитом железа. В частности, штамм Эрдмана М. tuberculosis (Американская коллекция типовых культур (АТСС) 35801) и H37Ra (АТСС 25177) выращивали на чашках с агаризованной средойMiddlebrook 7H11 при 37 С в 5% СО 2. Через 14 дней бактерии собирали, суспендировали в 150 мл модифицированной среды Sauton в колбах для культивирования и инкубировали в течение от 3 до 8 недель. Модифицированная средаSauton содержала 0,12 мг/л цитрата аммония,содержащего железо, без добавления поверхностно-активного вещества. Затем богатые железом экзохелины (ферриэкзохелины) выделяли фильтрованием, насыщали железом, экстрагировали хлороформом и очищали с помощью высоко эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В частности, супернатант вышеуказанной суспензии фильтровали последовательно через фильтры 0,8 мкм и 0,2 мкм с низким связыванием железа. Затем экзохелины нагружали железом путем насыщения фильтрованного супернатанта посредством обработки хлоридом железа (150 мг/л культурального фильтрата). Ферриэкзохелины смешивали с хлороформом (1 объем культурального фильтрата/1,5 объем хлороформа) и после разделения слоев богатый экзохелином слой хлороформа отделяли и хранили над безводным сульфатом магния (2 г/л). Хлороформный экстракт затем пропускали через фильтр из оплавленного стекла и выпаривали в роторном испарителе с образованием коричневого осадка. Коричневый осадок далее очищали путем суспендирования в 5 мл первого буферного рас 001870 8 твора (0,1% трифторуксусной кислоты (ТФА,который вносили в колонку для жидкостной хроматографии (картридж С-18 Sep-Pak). Коричневую полосу, которая образовывалась внизу колонки, элюировали вторым буфером (0,1% ТФА, 50% ацетонитрила). Затем частично очищенный материал разводили в три раза в 0,1% ТФА и подвергали жидкостной хроматографии с обращенной фазой под высоким давлением при скорости 1 мл/мин с последующей обработкой на колонке С-18. Присутствие богатых железом экзохелинов в элюате, полученном при ВЭЖХ, определяли одновременным мониторингом с поглощением в УФ-спектре пика при 450 нм (соединения железа) и пика при 220 нм,который является показателем амидных и ароматических групп. Приблизительно 5 основных и 10 небольших пиков, представленных на фиг. 2, которые элюировали с конечной колонки С 18, показывали высокое значение соотношения поглощений при 450/220 нм. Подтверждение того, что они являются экзохелинами, было получено с помощью масс-спектроскопии. Основные пики были затем очищены на второй стадии ВЭЖХ с обращенной фазой на алкилфенильной колонке. Экзохелины, выделенные из штамма Эрдмана М. tuberculosis, были идентичны экзохелинам, выделенным из штамма H37Ra. Характеристика. На основе анализов LSIMS (массспектрометрия с лазерной вторичной ионизацией) и ESIMS (масс-спектрометрия с электронной вторичной ионизацией) ряда пиков в ферри(Fе 3+)-форме, элюированных с колонки (см. фиг. 3), железосодержащие экзохелины не ограничиваются двумя подробно описанными выше специфическими молекулами, а включают семейство членов, молекулярные массы которых находятся в диапазоне от 716 до 828 дальтон. Каждый член семейства, как полагают, отличается от своего соседа на 14 дальтон, что отражает число СН 2-групп в алкильной боковой цепи R1, и/или на 2 дальтона, что отражает присутствие двойной связи в боковой алкильной цепи R1. В соответствии с этим экзохелины, вероятно, образуют две серии, при этом последовательные члены каждой из серий различаются по массе на 14 дальтон,насыщенные серии имеют массы приблизительно 716, 730, 744, 758, 772, 786, 800, 814 и 828 дальтон, а ненасыщенные серии имеют массы 742,756, 770, 784, 798, 812 и 826. Кроме того, присутствие или отсутствие метильной группы в R3 (т.е. Н или СН 3) далее характеризует две дополнительные серии молекул, обозначаемые сериновой(R3=Н) и треониновой (R3=СН 3) сериями, что подтверждено аминокислотным анализом. Наиболее полярные соединения расположены на фигуре слева (элюируются раньше), а соединения с минимальной полярностью (наиболее растворимые в липидах) - справа. Однако все пики являются водорастворимыми. В случаях, когда было обнаружено, что несколько пиков имеют одина 9 ковую молекулярную массу, каждый из пиков далее обозначали А, В и С (т.е. 758 А, В и С) для того, чтобы указать уровень полярности. При этом А представляет наиболее полярное соединение, а С представляет форму с минимальной полярностью. Полагают, что более полярные формы являются результатом присоединения метильной группы в ином положении молекулы. Структура экзохелина. На фиг. 4 представлены результаты тандемного масс-спектрометрического анализа в условиях индуцированной диссоциации (водородный электрод находился при 2 кэВ при энергии события 6 кэВ) основного насыщенного серинсодержащего десферриэкзохелина с(М+Н)+ при m/z 720,3. Ионные фрагменты были определены для одной из шести структурных единиц A-F, полученных из продуктов расщепления, образующихся около амидных или эфирных связей. При этом перенос водорода на нейтральную молекулу ассоциировался с пиком,указанным на спектре, который представлен на фиг. 4. Кислотный гидролиз и метилирование экзохелинов приводило к образованию салициловой кислоты и пимелиновой кислоты. Массспектрографический анализ показывает, что пимелиновая кислота присутствует в экзохелине в виде сложного метилового эфира. Полученная на основе данного анализа основная структура ферриэкзохелинов и десферриэкзохелинов представлена на фиг 1. Метильная группа, показанная на фиг. 1 в положенииR4, как показано на фиг. 6, может находиться в положении R5, что также определено на фиг. 6. Ядро железосодержащей молекулы экзохелина является кольцевым с железом в центре. Молекула содержит 3 аминокислотные единицы (дваN-гидроксилизина и 1 серин или треонин в зависимости от того, является ли R3 водородом или метильной группой). Основное различие между экзохелинами и микобактинами М. tuberculosis состоит в том, что R1 в экзохелинах присутствует обычно в виде либо метилового эфира насыщенного алкила СН 2)NСООСН 3), метилового эфира с одной ненасыщенной связью(СН 2)xСН=СН(CH2)уСООСН 3, либо в виде карбоновой кислоты, и экзохелины имеют значительно более короткую алкильную боковую цепь, чем микобактины. При этом данные более короткие боковые цепи заканчиваются структурами метиловых эфиров. Указанные различия обеспечивают растворимость экзохелинов в воде и их способность к функционированию во внеклеточной среде. На фиг. 5 сравнивают эффект предупреждения повреждений клеток при добавлении дефероксамина и значительно меньшего количества экзохелина в культуру кардиомиоцитов крысы, обработанную H2O2. Данный график демонстрирует, что экзохелин может быстро проникать в клетки и снижать или предупреж 001870 10 дать повреждение, тогда как дефероксамин не дает благоприятного результата. В приведенных ниже примерах десферриэкзохелины и ферриэкзохелины обозначают массой ферриэкзохелинов, как показано на фиг. 3. Буква, следующая за числом массы (А, В, С и т.д.) означает, что сущecтвуют соединения одной молекулярной массы, но имеющие различные характеристики элюции, что указывает на различное положение боковых цепей или различную оптическую ориентацию, которая влияет на полярность (растворимость) соединений. Пики с одной и той же массой дополнительно помечают буквой (А, В, С) в порядке их элюции с колонки. При этом А выходит первым, затем В и затем С. Число, следующее за SM, означает,что соединение является представителем сериновой серии (S) и метиловым эфиром (М), тогда как ТМ обозначает представителя треониновой серии (Т), а также метиловый эфир (М). Масса не содержащей железо (десферри) формы на 53 меньше, чем масса ферри-формы,поскольку ферри-форма теряет один атом железа (56), но приобретает 3 атома Н (1). Пример 1. Клетки гладкой мускулатуры сосудов человека получают из участков подкожной вены ноги, удаленных во время рекомендуемой хирургической операции. Внутренний мышечный слой участков вены отделяют от остающегося участка вены, измельчают и подвергают ферментативному перевариванию смесью коллагеназы и эластазы при рН 7,4. Затем проводят четыре последовательных стадии ферментативного расщепления средой, содержащей бычий трипсин, -химотрипсин и эластазу. Это приводит к отделению жизнеспособных клеток гладкой мускулатуры от оставшихся компонентов сосуда. После центрифугирования с целью удаления дебриса клетки ресуспендируют в колбах объемом 25 см 3 в среде с 10% сыворотки (50% телячьей сыворотки и 50% сыворотки крови пуповины новорожденных детей, которую инактивируют тепловой обработкой) в течение двух недель. Затем клетки вносят в 24-луночные планшеты для культивирования (20000 клеток/лунку) на 2 дня в 10% сыворотке. Далее клетки приводят в состояние покоя в среде с 0,1% бычьей сывороткой в течение трех дней. Затем проводят предварительное инкубирование клеток в течение 30 мин в 0,1% сыворотке. После этого десферриэкзохелин 772SM (ранее обозначаемый как 772 С, см. фиг. 3) в концентрациях 2, 10 или 20 микромолей добавляют в тест-лунки, содержащие 0,1%, 1%, или 2% бычьей сыворотки на 24 ч. В контрольные лунки вносят такие же концентрации сыворотки, но не вносят 772SM. Для каждого условия изучение образцов проводят в трех повторностях. За четыре часа до конца 24-часовой обработки в каждую лунку добавляют 0,5 мкКи/мл тимидина, содержащего тритий. В конце 24-часового 11 инкубационного периода клетки лизируют и измеряют радиоактивность содержимого каждой лунки в сцинтилляционном счетчике. Результаты приводят на фиг. 7, где графически представлены данные для каждой группы лунок из трех повторностей для каждого из 12 изучаемых условий (в целом для 36 лунок). Столбики представляют средние величины для каждой группы из трех лунок, а вертикальные линии над каждым столбиком означают стандартную ошибку среднего значения. Каждую группу образцов из трех лунок метят % присутствующей сыворотки (0,1%, 1,0% или 2,0%) и молярной концентрацией десферриэкзохелина 772SM (0,2,10 или 20 мкМ), если его добавляют. Из трех концентраций сыворотки либо 10, либо 20 микромолей десферриэкзохелина 772SM заметно снижают поглощение тимидина по сравнению с лунками, содержащими такие же концентрации сыворотки, но не содержащие или с низким содержанием (2 мкМ) десферриэкзохелина. Поскольку поглощение тимидина является мерой пролиферации клеток, можно заключить, что десферриэкзохелин 772SM в концентрациях,превышающих 10 микромолей, и особенно в интервале 10-20 микромолей препятствует стимулируемому сывороткой росту клеток гладкой мускулатуры сосудов. Пример 2. Клетки гладкой мускулатуры сосудов человека получают и обрабатывают таким же образом, как описано в примере 1. Клетки вносят в 24-луночные планшеты для культивирования(приблизительно 12800 клеток/лунку) на 2 дня в 10% сыворотке и затем приводят в состояние покоя в среде с 0,1% бычьей сывороткой в течение четырех дней. Затем эксперименты проводят в лунках, содержащих 0,1% или 2% бычьей сыворотки, в течение 24 ч. Во время 24-часового периода тестирования лунки не содержат лекарственное вещество (Контроль) или содержат 10 мкМ десферриэкзохелина 798 ТМ (Des-Exo 798TM), 10 мкМ ферриэкзохелина 798 ТМ(Deferox.) Десферриэкзохелин 798 ТМ (Des-Exo 798TM) и ферриэкзохелин 798 ТМ (FerriExo798TM) представляют собой соединения,имеющие массы 745 и 798 соответственно (см. фиг. 3). Для каждого условия изучение образцов проводят в трех повторностях. В течение последних четырех часов 24-часовой обработки в каждую лунку добавляют 0,5 мкКи/мл тимидина, содержащего тритий. В конце 24-часового инкубационного периода клетки лизируют и измеряют радиоактивность содержимого каждой лунки в сцинтилляционном счетчике. Результаты приводят на фиг. 8, где представлены данные для каждой группы лунок из трех повторностей для каждого из 8 изучаемых условий(в целом для 24 лунок). Столбики представляют средние величины для каждой группы из трех лунок, а вертикальные линии над каждым стол 001870 12 биком означают стандартную ошибку среднего значения. Каждую группу образцов из трех лунок метят % присутствующей сыворотки и молярной концентрацией лекарственного вещества, если его добавляют. Тимидин поглощается только в незначительных количествах (что определяют числом импульсов в минуту) в лунках,содержащих 0,1% сыворотки, поскольку при данной концентрации сыворотки наблюдается очень незначительная пролиферация клеток. Однако в контрольных (необработанных) лунках наблюдают высокий уровень поглощения тимидина через 24 ч в 2,0% сыворотке. Напротив, в лунках, обработанных десферриэкзохелином 798 ТМ, фактически не отмечают повышения поглощения тимидина при обработке 2,0% сывороткой, превышающего уровни, определенные для необработанных клеток в 0,1% сыворотке. В лунках, обработанных ферриэкзохелином 798 ТМ, который представляет собой полностью насыщенный железом экзохелин 798 ТМ, и подвергнутых воздействию 2,0% сыворотки отмечают значительное поглощение тимидина, но не превышающее отмеченное в контрольных клетках в 2% сыворотке. В лунках,обработанных дефероксамином и подвергнутых воздействию 2,0% сыворотки, наблюдают поглощение тимидина, близкое поглощению контрольных клеток, подвергнутых воздействию 2,0% сыворотки. Поскольку поглощение тимидина является мерой пролиферации клеток,можно заключить, что десферриэкзохелин 798 ТМ в концентрации 10 микромолей препятствует стимулируемому сывороткой росту клеток гладкой мускулатуры сосудов. Ферриэкзохелин 798 ТМ обладает небольшим ингибирующим эффектом на рост стимулируемых сывороткой человеческих клеток гладкой мускулатуры сосудов, а дефероксамин в концентрации 25 мкмол (в 2,5 раза больше концентрации десферриэкзохелина) не действует на стимулированный сывороткой рост человеческих клеток гладкой мускулатуры сосудов, указывая на то,что тестируемый экзохелин обладает эффектом ингибирования роста клеток, который не связан с его способностью хелатировать железо. Пример 3. Для оценки способности растворимых в липидах десферриэкзохелинов быстро всасываться сердечной тканью во время быстрой инъекции проводят исследование на изолированных сердцах кроликов. Защитные эффекты от реперфузионных повреждений и накопления метаболитов гидроксильного радикала измеряют после быстрой инъекции десферриэкзохелинов в корень аорты. Определяют также экзохелины в венозном оттоке, для которых в данной системе незамкнутой циркуляции требуется быстрое исходное поглощение инъецированных ферриэкзохелинов сердечной тканью. 13 Препарат изолированного перфузионного сердца. Пятнадцать взрослых новозеландских белых кроликов любого пола массой 2,3-2,5 кг гепаринизируют (1000 ед/кг) и анестезируют пентобарбиталом натрия (60 мг/кг внутривенно). Сердца быстро извлекают и проводят перфузию модифицированным буфером KrebsHenseleit с использованием способа с незамкнутой циркуляцией Langendorff. Для захвата изомеров гидроксильных радикалов в буфер добавляют 1 мМ салициловую кислоту. Перфузат буфера доставляют в сердце через канюлю в аорте под давлением 73 мм рт. ст. Наполненный жидкостью баллон из латекса вводят в левый желудочек для измерения давления. Перед измерением давления объем баллона доводят до объема,соответствующего базовому диастолическому давлению 55 мм рт.ст. и не подводят в течение эксперимента. Развивающееся давление определяют как разницу между пиком систолического давления и конечным диастолическим давлением. Первую производную давления левого желудочка (dр/dt) получают с использованием цикла дифференциатора. Все сердца имеют ритм 240 ударов/мин. Коронарный отток получают с помощью иглы, введенной в полость левого желудочка. Салицилатный способ детекции ОН. Количественное определение метаболитов салицилата проводят тандемной капиллярной газовой хроматографией (GC) и массспектрометрией (MS). В образцы и стандарты вводят 2,6-дигидроксибензойную кислоту(внутренний стандарт), экстрагируют этилацетатом (эффективность 97%) и дериватизируют с образованием триметилсилиловых эфиров с помощью бис(триметилсилил)трифторацетамида. Разделение с помощью капиллярной GC дает отдельные пики салицилата, внутреннего стандарта (2,6-дигидроксибензойной кислоты) и салицилатных метаболитов ОН, а именно 2,3- и 2,5-дигидробензойных кислот. Качественный анализ проводят с использованием стандартных кривых, на которых строят график отношения ионов каждого аналита к внутреннему стандарту в зависимости от концентрации. Аутентичные стандарты 2,3-, 2,4-, 2,5-, 3,4 и 2,6-ДГБА и салициловой кислоты покупают. Получают стандартные кривые для 2,3-, 2,4- 2,5 и 3,4-ДГБА в метаноле в сериях концентраций в диапазоне от 1 до 1000 пмол. Внутренний стандарт добавляют в концентрации 100 пмол. Стандарты и биологические экстракты анализируют в трех повторностях с помощью GC-MS,используя газовый хроматограф Hewlett Packard 5890 с масс-селективным детектором 5970. Условия GC включают исходную температуру колонки 100 С в течение 5 мин, которую повышают на 10 С в минуту до 300 С. Мониторинг ионов осуществляют при m/z 355, 356 и 357 для дигидробензойных кислот. Все ионы имеют 14 время жизни 25 мс. Минимальные уровни детекции 2,3- и 2,5-ДГБА находятся в диапазоне концентраций 200 фемтомол. Измерения, проведенные в гомогенизированном миокарде, выражают в пмол/г миокарда. Измерения коронарного оттока выражают в пмол/г миокарда/мин. Протокол. Через 10-минутный период уравновешивания, во время которого получают базовые данные, канюлю зажимают и удаляют водитель ритма. После 30-минутного ишемического периода возобновляют реперфузию и восстанавливают ритм. В течение 30-минутного реперфузионного периода регистрируют давление и собирают коронарный отток каждые 5 мин. В конце реперфузионного периода сердца немедленно фиксируют путем замораживания алюминиевыми щипцами, охлажденными в жидком азоте и хранят при -70 С для последующего анализа. В контроли вводят нормальный физиологический раствор, а в обработанные сердца вводят десферриэкзохелин в нормальном физиологическом растворе в дозе 0,1, 0,2 или 0,4 мкмол в корень аорты в течение первых 3 мин реперфузии. Результаты. Исследуют шесть контрольных (необработанных) сердец, три сердца, обработанных 0,2 мкмол десферриэкзохелинов и три сердца, обработанных 0,4 мкмол десферриэкзохелинов. Эффекты на систолическую функцию левого желудочка (LV) во время выхода из ишемии представляют на фиг. 9. В контрольных сердцах происходит лишь минимальное улучшение давления в левом желудочке, как представлено его первой положительной производной (LV dp/dtMAX), и давление развивается в течение 30 минутного периода восстановления, что указано на полной кривой давления в течение 30 минутного периода. В конце 30-минутного периода восстановления как LV dp/dt МАХ, так и давление в LV повышаются более чем в два раза при всех дозах десферриэкзохелина по сравнению с контролем. Существует прямая зависимость доза-ответ. При этом самая высокая из тестированных концентраций приводит, по меньшей мере, к трехкратному увеличению. На основании этого показывают, что сердца, обработанные 0,1, 0,2 и 0,4 мкмол десферриэкзохелина, введенного в корень аорты в течение трехминутного периода, демонстрируют значительное улучшение систолической функции LV по сравнению с контролями, и имеется прямая зависимость доза-ответ. На фиг. 10 представляют результаты измерения коронарного оттока перед и после ишемии. Коронарный поток во время реперфузии в контрольных сердцах ниже, чем в сердцах, обработанных десферриэкзохелином. Более высокий уровень коронарных потоков в обработанных сердцах в период реперфузии отражает снижение повреждения коронарных сосудов. 15 На фиг. 11 представляют результаты измерения 2,3-ДГБА и 2,5-ДГБА в сердечной ткани через 30 мин реперфузии. 2,3-ДГБА и 2,5-ДГБА представляют собой салицилатные изомеры гидроксильного радикала. Исследуют шесть необработанных сердец и 3 сердца при каждой концентрации десферриэкзохелина (0,1, 0,2 и 0,4 мкмол). Уровни как 2,3-ДГБА, так и 2,5 ДГБА снижаются в обработанных сердцах дозазависимым образом, указывая на то, что существует дозазависимое снижение метаболитов гидроксильного радикала в сердцах, обработанных десферриэкзохелинами. Это обусловлено пониженным образованием гидроксильного радикала в результате хелатирования железа десферриэкзохелинами. В одном из сердец, в которое вводили 0,2 мкмол растворимых в липидах десферриэкзохелинов, венозный отток собирают каждые 5 мин во время реперфузии и измеряют количество присутствующего экзохелина. В данное сердце вводят относительно неполярные (хорошо растворимые в липидах) практически не содержащие железо экзохелины - 0,042 мкмол 770SM(альтернативно обозначаемый 770 на фиг. 3),0,110 мкмол 784SM (альтернативно обозначаемый 784 В на фиг. 3) и 0,047 мкмол 798 ТМ (альтернативно обозначаемый 798 на фиг. 3). Экзохелины, введенные в корень аорты, имеют 5% насыщения железом (95% в десферри-форме). Во время реперфузии определяют количества десферриэкзохелинов и общие количества экзохелинов (как десферри-, так и ферри-форм) в оттоке. Количество ферриэкзохелина в оттоке оценивают способом, предусматривающим экстракцию образца оттока хлороформом для удаления экзохелинов, выпаривание хлороформного экстракта досуха, суспендирование экзохелинов в буфере, хроматографирование экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой, измерение площади пика поглощения при 450 нм, соответствующего каждому экзохелину, и пересчет данной площади в единицы массы с помощью стандартной кривой. Общее количество экзохелина в оттоке определяют насыщением аликвоты оттока железом с целью превращения всех экзохелинов в образце в форму ферриэкзохелина с последующим анализом экзохелинов ранее описанным способом. Отток, собранный в течение первых 5 мин реперфузии, содержит 0,048 мкмол экзохелина. В последующих образцах определяемый экзохелин отсутствует. Поскольку в аорту вводят всего 0,2 мкмол экзохелина,процент выделенного из оттока составляет 0,048 мкмол/0,2 мкмол х 100 = 23,8%. Это указывает на то, что значительные количества (76,2%) инъецированных экзохелинов остаются в сердце. Далее экзохелины, определяемые в оттоке,насыщены железом на 25,9%. Следовательно даже во время одного прохода через сердце де 001870 16 сферриэкзохелины способны связывать значительные количества железа. Комбинированный эффект десферриэкзохелинов на систолическую функцию левого желудочка и образование метаболитов гидроксильного радикала, пониженное количество экзохелинов в коронарном оттоке и доказательство того, что значительное количество десферриэкзохелинов, введенных в сердце, связывают железо при прохождении через сердце подтверждают, что физиологические эффективные количества десферриэкзохелинов всасываются в сердце во время однократной короткой инъекции около начала коронарных артерий. Как было продемонстрировано выше в примере 1 (фиг. 7) десферриэкзохелины способны препятствовать пролиферации гладкой мускулатуры сосудов. Данный факт в сочетании с результатами, полученными в других примерах,показывает, что данные соединения могут применяться для профилактики заболеваний, связанных с пролиферацией клеток гладкой мускулатуры сосудов, таких как атеросклероз, сосудистый рестеноз после коронарной ангиопластики или операций коронарного шунтирования, или других форм повреждений сосудов или заболеваний, включающих системную гипертензию и различные формы легочной гипертензии. Как показано на фиг. 8, десферри-форма экзохелина препятствует пролиферации гладкой мускулатуры сосудов, тогда как ферри-форма данного экзохелина только слабо ингибирует, а в 2,5 раза большее количество не растворимого в липидах хелатора железа дефероксамина не обладает эффектом на пролиферацию человеческой гладкой мускулатуры сосудов. Как показано на фиг. 9, десферриэкзохелины способны проникать в сердце достаточно быстро для того,чтобы хелатировать железо и предупреждать вредные окислительные эффекты при однократной кратковременной инъекции. Данное уникальное свойство десферриэкзохелинов показывает, что однократная доза экзохелина при доставке в сосуд, который лечат, после или во время ангиопластики или операции на сосудах предупреждает повреждения сосудов. Для дефероксамина, единственного другого хелатора железа,который, как предполагают, имеет потенциал предупреждения пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов, необходимо непрерывное внутривенное введение, поскольку он быстро выводится клетками. Даже при непрерывной доставке существуют большие сомнения в том,что при внутривенном введении могут быть достигнуты достаточно высокие нетоксические дозы данного полярного не растворимого в липидах хелатора железа (дефероксамина), чтобы защитить сосуды от повреждений. Напротив,при местном введении десферриэкзохелинов в поврежденные или больные сосуды достигается быстрый и эффективный физиологический ответ. Кроме того, демонстрация слабого ингиби 17 рования пролиферации гладкой мускулатуры сосудов ферри-формой экзохелина является доказательством преимущества экзохелинов, которое не связано с их хелатирующими свойствами. Хотя структура экзохелинов, выделенных из М. tuberculosis, представлена на фиг. 1, известно, что другие микобактерии могут образовывать экзохелины и что данные экзохелины могут иметь иную структуру и включать различные аминокислоты в зависимости от микобактерии, из которой они выделены. Однако все экзохелины будут вести себя аналогичным образом и иметь аналогичные серии с последующими членами серий, имеющими аналогичную прогрессию молекулярных масс. Эффективность различных членов серий будет также зависеть от относительной полярности молекул. Вследствие этого в изобретении рассматриваются экзохелины, полученные из других микобактерий, включая, но не ограничиваясь М. tuberculosis, М. microti, М. bovis, М. africanum, М.sphagni, M. tokaiense или М. vaccae. Предусматривается также, что экзохелины могут быть модифицированы в плане воздействия на их растворимость, способность хелатирования металлов или скорость поглощения клетками. В частности, касательно структур содержащих металл и не содержащих металл соединений, представленных на фиг. 6 А и 6 В,рассматриваются следующие замещения:R1 - (СН 2)nСН 3 в виде линейной или разветвленной цепи; (СН 2)nСООН, жирная кислота;(CH2)nCOOR, сложный эфир жирной кислоты,где R - алкил; (СН 2)nСОNН 2;R2 - замещение по любому из 4 мест открытых циклов алкильных групп, сульфонамидов, гидроксила, галогена, ацетила, карбамила,аминов, NO2 или их любых сочетаний;R3 - Н (серина) или СН 3 (треонина) может быть замещен боковыми цепями, имеющимися у бета-гидроксиаминокислот, которые способны к образованию циклических оксазолиновых структур.R4 а и R4b - H, СН 3 или другие алкильные или замещенные алкильные группы;R5 а и R5b - H, CH3 или другие алкильные или замещенные алкильные группы; Х - O, NH, S, CH2; 18 М - одно, двух- или трехвалентные металлы, такие как Pb, Al, Cd, Ni, Аg, Au, As, Мg, Mn,Zn, Cu, Ru, Nb, Zr, Та, V, Ga, Pt, Cr, Sc, Y, Co,Ti, Na, K;показывает хиральные центры, которые могут быть R или S. Различные гидроксильные группы (ОН),участвующие в хелатировании металла, могут быть замещены различными функциональными группами, такими как Н или галоген, с целью изменения аффинности соединения к хелатируемому металлу или для превращения молекулы в антагонист металла. На основе данных результатов заключают,что доставка эффективного количества десферриэкзохелина в живой организм, такой как организм животного или человека, пероральным или внутривенным путем или прямой доставкой в область, где желательно получение эффекта,будет а) защищать кровеносные сосуды живого организма от рестеноза, обусловленного пролиферацией клеток гладкой мускулатуры сосудов после ангиопластики или сосудистой хирургии,b) предупреждать или замедлять развитие атеросклероза у пациента, с) предупреждать или замедлять развитие системной гипертензии у пациента, d) предупреждать или замедлять развитие радиационных повреждений сосудистой сети, е) предупреждать или замедлять развитие стеноза или закрытия обходного шунта коронарных артерий или других кровеносных сосудов после хирургической операции, f) препятствовать или замедлять развитие различных форм легочной гипертензии, включая, но не ограничиваясь, гипоксической, неонатальной и первичной легочной гипертензией, и g) препятствовать или замедлять ангиогенез (образование новых сосудов). Данные заключения делают,поскольку каждое из перечисленных событий является результатом неконтролируемого и нежелательного роста и/или пролиферации тканей, индуцированных травмой или заболеванием, и все они будут контролироваться доставкой десферриэкзохелинов. Все вышеупомянутые заболевания включают пролиферацию гладкой мускулатуры сосудов в качестве критического механизма. Например, рестеноз, обусловленный дилатацией или другими процедурами, устраняющими обструкции в артериях, такими как ангиопластика или атеректомия, включает пролиферацию гладкой мускулатуры сосудов в области проведения процедуры, приводя к новой обструкции сосуда. Данный процесс начинается в первые несколько часов после ангиопластики или атеректомии. Вышеприведенные примеры показывают,что интракоронарная инъекция шарика (болюса)десферриэкзохелина сразу после проведения ангиопластики или атеректомии будет ингибировать пролиферацию гладкой мускулатуры сосудов в течение данного критического перио 19 да, когда обычно начинается процесс рестеноза,и, вследствие этого, будет препятствовать появлению рестеноза. Поскольку рестеноз появляется в высоком проценте ангиопластических процедур, а интракоронарную инъекцию легко сделать сразу после ангиопластики или атеректомии, т.к. обе процедуры требуют использования интракоронарных катетеров, доставка десферриэкзохелинов предполагает новую форму лечения данной очень распространенной и серьезной проблемы. Неизвестен никакой другой агент, который может быть инъецирован в форме внутрисосудистого болюса, который быстро поглощается сердечно-сосудистой тканью и который также препятствует росту гладкой мускулатуры сосудов. Поскольку интракоронарные катетеры могут быть оставлены на месте только на короткие периоды времени, быстрое поглощение любого агента, используемого для лечения, является важным. Применение десферриэкзохелинов является новым способом лечения рестеноза. Растворимость десферриэкзохелинов в липидах делает их уникально пригодными для быстрого поглощения тканью. Данное свойство отсутствует у не растворимых в липидах агентов, таких как хелатор железа дефероксамин, и также делает их уникально привлекательными для профилактики окисления холестериновых липопротеинов низкой плотности. Два основных механизма образования атеросклеротических бляшек, которые создают обструкции сосудов при заболевании коронарных артерий, представляют собой поглощение окисленного холестеринового липопротеина низкой плотности стенкой сосуда и пролиферацию гладкой мускулатуры сосудов. Поскольку десферриэкзохелины являются растворимыми в липидах антиоксидантами, они способны препятствовать окислению холестеринового липопротеина низкой плотности, а также предупреждать пролиферацию гладкой мускулатуры. Никакой другой агент, и особенно не растворимые в липидах хелаторы железа,такие как дефероксамин, не обладают таким сочетанием свойств. Вследствие этого десферриэкзохелины представляют собой новое средство для профилактики атеросклероза. Постоянное введение десферриэкзохелинов пероральным или чрескожным способом, как предполагают, является потенциальным средством лечения с целью профилактики образования атеросклеротических бляшек. Аналогичным образом постоянное введение пероральным, чрескожным или ингаляционным путями могло бы предотвратить пролиферацию гладкой мускулатуры,которая является основным механизмом системной или легочной гипертензии или индуцированного облучением повреждения сосудов. Никакой другой агент не является пригодным для постоянного введения данными способами и способным при этом препятствовать пролиферации гладкой мускулатуры сосудов, представ 001870 20 ляющей собой основной компонент данных процессов. Например, дефероксамин, не растворимый в липидах хелатор железа, должен вводиться внутривенно путем пролонгированного вливания и не является пригодным или эффективным. Более того, не имеется доказательств токсичности десферриэкзохелинов в эффективной антипролиферативной или антиоксидантной концентрациях данных агентов в гладкой мускулатуре сосудов и эндотелиальных клетках миокарда и сосудов. Несмотря на то, что данное изобретение было описано во всех деталях со ссылкой на определенные предпочтительные варианты и их применение, другие варианты и применения являются возможными. Например, варианты описанных экзохелинов, включающие оптические изомеры и модифицированные соединения,как описано выше, могут обладать аналогичными или улучшенными благоприятными свойствами. Далее, полагают, что экзохелины, образованные другими бактериями, могли бы также быть использованы в описанных процедурах. М.bovis BCG содержит такие же экзохелины, что М. tuberculosis. M avium имеет очень близкие экзохелины. Однако описанное в данном контексте применение не ограничивается данными перечисленными экзохелинами. Более того,считают, что применение экзохелинов включает снижение уровня образования и роста новых кровеносных сосудов в теле и органах, таких как глаз. Вследствие этого сущность и объем прилагаемой формулы изобретения не должны ограничиваться описанием предпочтительных вариантов осуществления, содержащихся в данном контексте. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ защиты кровеносных сосудов живого организма от рестеноза, обусловленного пролиферацией клеток гладкой мускулатуры сосудов после ангиопластики или сосудистой хирургии, предусматривающий введение в живой организм композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что введение композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина, осуществляют прямой внутриартериальной доставкой. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что введение композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина, осуществляют системной внутривенной доставкой. 4. Способ лечения, профилактики или замедления развития атеросклероза у живого организма, предусматривающий введение живому организму композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют перорально. 21 6. Способ по п.4, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют внутривенно. 7. Способ лечения, профилактики или замедления развития системной гипертензии у живого организма, предусматривающий введение живому организму композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют перорально. 9. Способ по п.7, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют внутривенно. 10. Способ предупреждения или замедления развития радиационного повреждения у живого организма, предусматривающий введение живому организму композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина. 11. Способ по п.10, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют перорально. 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют внутривенно. 13. Способ профилактики или замедления развития стеноза или закрытия обходного шунта коронарных артерий или других кровеносных сосудов после хирургической операции у живого организма, предусматривающий введение живому организму композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют перорально. 15. Способ по п.13, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют внутривенно. 22 16. Способ лечения, профилактики или замедления развития легочной гипертензии у живого организма, предусматривающий введение живому организму композиции, содержащей эффективное количество десферриэкзохелина. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют перорально. 18. Способ по п.16, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют внутривенно. 19. Способ по п.16, отличающийся тем, что эффективное количество десферриэкзохелина доставляют в организм ингаляционным путем. 20. Способ лечения, профилактики или замедления развития гипоксической, неонатальной и первичной легочной гипертензии у живого организма, предусматривающий введение в живой организм композиции, которая содержит эффективное количество десферриэкзохелина. 21. Способ предупреждения или замедления повышенной пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов у живого организма, предусматривающий введение в живой организм композиции, которая содержит эффективное количество десферриэкзохелина, выделенного из Mycobacterium tuberculosis. 22. Способ предупреждения или замедления образования новых сосудов у живого организма, предусматривающий введение в живой организм композиции, которая содержит эффективное количество десферриэкзохелина. 23. Способ по п.22, отличающийся тем, что десферриэкзохелин доставляют перорально или внутривенно. 24. Способ по п.22, отличающийся тем, что десферриэкзохелин доставляют внутриглазно,причем он предупреждает образование новых кровеносных сосудов глаза.