Применение солей 3-карбокси-n-этил-n,n-диметилпропан-1-аммония при лечении сердечно-сосудистого заболевания

ПРИМЕНЕНИЕ СОЛЕЙ 3-КАРБОКСИ-N-ЭТИЛ-N,N-ДИМЕТИЛПРОПАН-1 АММОНИЯ ПРИ ЛЕЧЕНИИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ Соли 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония, способ их получения и применение при лечении сердечно-сосудистого заболевания.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ГРИНДЕКС, ДЖОИНТ СТОК КАМПАНИ (LV) Область техники Настоящее изобретение относится к новому соединению - солям 3-карбокси-N-этил-N,Nдиметилпропан-1-аммония и способу его получения (соединение формулы 4) Кроме того, настоящее изобретение относится к применению солей 3-карбокси-N-этил-N,Nдиметилпропан-1-аммония при лечении сердечно-сосудистого заболевания. Уровень техники Сердечно-сосудистые заболевания (CVDs) представляют собой группу расстройств сердца и кровеносных сосудов. Приблизительно 16,7 млн, или 29,2% от общего числа смертных случаев в мире, являются результатом различных форм сердечно-сосудистого заболевания (CVD). Инфаркт миокарда (сердечный приступ) является результатом серьезного заболевания коронарной артерии. Инфаркт миокарда (MI) представляет собой необратимый некроз сердечной мышцы, как последствие длительной ишемии. Сердечный приступ или инфаркт миокарда является медицинским критическим положением, в котором подача крови в сердце внезапно и сильно снижается или прерывается,что вызывает гибель мышцы от недостатка кислорода. Ежегодно свыше 1,1 млн людей испытывают сердечный приступ (инфаркт миокарда), и для многих из них сердечный приступ означает первый симптом заболевания коронарной артерии. Сердечный приступ может быть достаточно сильным, чтобы вызвать смерть, или он может быть латентным. По меньшей мере один из пяти человек испытывает только слабые симптомы или они вообще отсутствуют, и сердечный приступ можно обнаружить только с помощью электрокардиографии в стандартных условиях, выполненной спустя некоторое время. Сердечный приступ (инфаркт миокарда) обычно вызывает сгусток крови, который блокирует сердечную артерию. Часто артерия уже сужена за счет жировых отложений на ее стенках. Указанные отложения могут отрываться или проникать в сосуды, уменьшая кровоток и выделяя вещества, которые делают тромбоциты клейкими, причем увеличивается вероятность образования сгустков. Иногда сгусток образуется внутри сердца, затем он отрывается и застревает в артерии, которая питает сердце. Спазм в одной из этих артерий приводит к прекращению кровотока.-Бутиробетаин, из которого синтезируется карнитин в организме млекопитающего, первоначально считался токсичным соединением, которое ускоряет дыхание, вызывает слюноотделение и слезотечение,расширение зрачков, сужение кровеносных сосудов и остановку сердца в фазе диастолы [Linneweh, W.physiologische Chemie. 1929, vol. 181, p. 42-53]. Несмотря на это, в более поздних работах другие авторы признали, что -бутиробетаин обладает очень низкой токсичностью (LD507000 мг/кг, подкожно)[Rotzsch, W. Uber die Toxizitat des Carnitins und einiger verwandter Stoffe. Acta Biol. Med. Germ. 1959,vol. 3, p. 28-36]. По литературным данным для незамещенного -бутиробетаина сердечно-сосудистая активность отсутствует, хотя сообщалось [Hosein, E.A. Pharmacological actions of -butyrobetaine. Nature. 1959, vol. 183,p. 328-329], что -бутиробетаин представляет собой вещество, подобное ацетилхолину, с длительным действием. Однако позже эти авторы сообщили, что в их экспериментах имеется ошибка: вместо-бутиробетаина был использован его метиловый эфир, который фактически обладает холинергическими характеристиками. В противоположность упомянутому выше, -бутиробетаин охарактеризован как фармакологически инертное соединение [Hosein, E.A. Isolation and probable functions of betaine esters in brainmetabolism. Nature. 1960, vol. 187, p. 321-322]. В качестве соединений, структурно родственных солям 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1 аммония, описаны: в патенте GB1238868 А 14.07.1971 - бетаины, такие как 4-триметиламмонийбутаноат, применяемые для полимеров. Однако фармакологические свойства указанных бетаинов не приведены; в патенте США 5973026 A (XEROX Corp.) 26.10.1999 г. - 4-триметиламмонийбутаноат и 3-[диэтил(метил)аммоний]пропионат, применяемые в композициях печатной краски;N-modified betaines as liposome cryoprotectants. Journal of pharmacy and pharmacology. 1992, vol. 44, No. 6,p. 507-511] - 2-[этил(диметил)аммоний]ацетат, используемый в качестве криозащитных веществ для липосом; 9715] - 4-(диаллил(метил)аммоний)бутаноат и его синтез, исходя из N,N-диаллил-N-метиламмония и этилового эфира 4-бромбутановой кислоты. Свободную кислоту получали из ее эфира на второй стадии с использованием ионообменной смолы Amberlite. Этот продукт используют в качестве промежуточного соединения для синтеза полимеров;Prelog V., 1930, vol. 2, p. 712-722 - синтез 4-триметиламмонийбутаноата, исходя из 4-диметиламмонийбутаноата и метилиодида; в патентеJP 2009096766 A (KONAN GAKUEN) 07.05.2009 г. - 4-триметиламмонийбутаноат и его синтез, исходя из триметиламина и этилового эфира 4-бромбутановой кислоты. Свободную кислоту получали из эфира на второй стадии с использованием ионообменной смолы Amberlite;WO 2008/055843 A (Kalvinsh Ivars; Chernobrovijs Aleksandrs; Varacheva Larisa; Pugovichs Osvalds) 15.05.2008 г. - 4-триметиламмонийбутаноат и его синтез, исходя из соответствующего эфира, с использованием раствора KOH; в патенте СА 2508094 A (VIVIER CANADA INC) 20.11.2006 г. - бетаины, такие как 4-триметиламмонийбутаноат, для использования в качестве лекарственного препарата для ускорения синтеза коллагена; в патенте США 5965615 A (TAIHO Pharmaceutical CO Ltd.; Valsts Zinatniska lestade Bezp) 12.10.1999 г. - 4-триметиламмонийбутаноат как лекарственный препарат для лечения метаболических расстройств миокарда; аналогичное соединение описано в патенте США 2007191381 A (CONCERTPharmaceuticals Inc.) 16.08.2007 для лечения инфаркта миокарда. Дигидрат 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионата известен как соединение с кардиозащитными свойствами (это соединение известно под международным непатентованным названием Мелдониум). 3-(2,2,2-Триметилгидразиний)пропионат раскрыт в патенте США 4481218 (Институт Органического синтеза) 06.11.1984, а также в патенте США 4451485 A (INSTITU ORCH SINTEZA AKADEMII) 29.05.1984 г. Хорошо известно, что 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионат в виде дигидрата широко применяется для регулирования отношения концентраций карнитина и -бутиробетаина и, следовательно, скорости бета-окисления жирных кислот в организме [Dambrova M., Liepinsh E., Kalvinsh I.I. Mildronate:cardioprotective action through carnitine-lowering effect. Trends in Cardiovascular Medicine, 2002, vol. 12,No. 6, p. 275-279]. Благодаря указанным свойствам Мелдониум широко применяется в медицине в качестве антиишемического, антистрессового и кардиозащитного лекарственного препарата при лечении различных сердечно-сосудистых заболеваний и других патологических состояний, в том числе местное малокровие ткани [Karpov R.S., Koshelskaya O.A., Vrublevsky A.V., Sokolov A.A., Teplyakov A.T., Skarda I., Dzerve V.,Klintsare D., Vitols A., Kalnins U., Kalvinsh I., Matveya L, Urbane D. Clinical Efficacy and Safety ofMildronate in Patients with Ischemic Heart Disease and Chronic Heart Failure. Kardiologiya. 2000, No. 6, p. 6974]. При лечении сердечно-сосудистых заболеваний механизм действия 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионата основан на ограничении скорости биосинтеза карнитина и ограничении транспорта родственных длинноцепочечных жирных кислот через мембрану митохондрий[Simkhovich B.Z., Shutenko Z.V., Meirena D.V., Khagi K.B., Mezhapuke R.J., Molodchina T.N., Kalvins I.J.,Lukevics E. 3-(2,2,2-Trimethylhydrazinium)propionate (THP) - a novel gamma-butyrobetaine hydroxylase inhibitor with cardioprotective properties. Biochemical Pharmacology. 1988, vol. 37, p. 195-202], [Kirimoto Т.,Asaka N., Nakano M., Tajima K., Miyake H., Matsuura N. Beneficial effects of MET-88, а у butyrobetaine hydroxylase inhibitor in rats with heart failure following myocardial infarction. European Journal of Pharmacology. 2000, vol. 395, No. 3, p. 217-224]. Краткое описание изобретения Как известно, Мелдониум-дигидрат обладает кардиозащитным действием; однако отсутствуют данные о том, что сам -бутиробетаин имеет определенный кардиозащитный эффект. В патенте ЕР 0845986 В (Kalvinsh Ivars, Veveris Maris) 02.04.2003 раскрыта фармацевтическая композиция Мелдониум-дигидрата и -бутиробетаина, применяемая при лечении сердечно-сосудистых заболеваний. Цель настоящего изобретения заключается в получении соединения, которое обладает определенным кардиозащитным действием. Указанная выше цель достигается путем получения новых соединений - солей 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (соединение формулы 4), которые обладают структурой, аналогичной Мелдониуму или -бутиробетаину. Неожиданно обнаружено, что 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммониевые соли обладают определенным кардиозащитным действием и являются более эффективными, чем Мелдониумдигидрат, в моделях инфаркта миокарда in vivo; благодаря указанному свойству соли 3-карбокси-N-этилN,N-диметилпропан-1-аммония могут быть использованы в медицине. Соли 3-карбокси-N-этил-N,Nдиметилпропан-1-аммония могут быть использованы в виде раствора для инъекции. Следующей целью настоящего изобретения является способ получения указанного соединения формулы 4. Описан способ, который может быть использован для получения целевого соединения - соли 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония, формула 4 в схеме, приведенной ниже: Способ получения соли 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония формулы 4 включает следующие технологические операции: а) добавление N,N-диметилэтиламина к этиловому эфиру 4-бромбутановой кислоты (1) в подходящем растворителе с образованием бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония (2); б) пропускание бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония (2) через колонку с ионообменной смолой с образованием 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата (3); в) добавление кислоты, которую выбирают из 2-(ацетилокси)бензойной кислоты (4 а), или(Е)-бутендикарбоновой кислоты (4b), или янтарной кислоты (4 с), или моногидрата 2,6-диоксо-1,2,3,6 тетрагидропиримидин-4-карбоновой кислоты(4 е),к 4-[этил(диметил)аммоний] бутаноату (3) в подходящем растворителе, чтобы получить соль 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (4). Предпочтительные варианты воплощения изобретения Настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие, не ограничивающие примеры. Приготовление бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония (2). Методика А. К раствору этилового эфира 4-бромбутановой кислоты (1) (20,0 г, 102,5 ммоль) в ацетонитриле(70 мл) добавляют N,N-диметилэтиламин (15 мл, 139 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 суток. Реакционную смесь выпаривают, остаток растирают с ацетоном (50 мл), фильтруют,промывают эфиром и сушат,чтобы получить 26,051 г(94,8%) бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония. Жидкостная хромато-масс-спектрометрия, LCMS, (ESI+, m/z): [M-Br-]+ 188, чистота 98,9%. 1 Н ЯМР (CDCl3, гексаметилдисилоксан) : 1,26 (т, J=7,2 Гц, 3 Н); 1,44 (т, J=7,4 Гц, 3 Н); 2,00-2,11 (м,2 Н); 2,52 (т, J=6,6 Гц, 2 Н); 3,40 (с, 6 Н); 3,64-3,73 (м, 2 Н); 3,69 (кв, J=7,4 Гц, 2 Н); 4,14 (кв, J=7,2 Гц, 2 Н). Методика Б. К раствору этилового эфира 4-бромбутановой кислоты (1) (19,5 г, 100 ммоль) в ацетоне (70 мл) добавляют N,N-диметилэтиламин (15 мл, 139 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 суток. Реакционную смесь фильтруют; твердое вещество промывают ацетоном, диэтиловым эфиром и сушат, чтобы получить 24,19 г (90,2%) соединения 2, указанного в заголовке. Фильтрат выпаривают; остаток (2,147 г) растирают с эфиром и сушат, чтобы получить дополнительную порцию (0,962 г,3,6%) продукта 2, такого же качества, что и основная порция. При выпаривании эфирных промывок можно извлечь 0,956 г (4,9 ммоль, 4,9%) исходного материала (1). Бромид 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония: LCMS (ESI+, m/z): [M-Br-]+ 188, чистота 98,4%. Н ЯМР (CDCl3, гексаметилдисилоксан ) : 1,26 (т, J=7,2 Гц, 3 Н); 1,44 (т, J=7,4 Гц, 3 Н); 2,00-2,11 (м,2 Н); 2,52 (т, J=6,6 Гц, 2 Н); 3,40 (с, 6 Н); 3,64-3,73 (м, 2 Н); 3,69 (кв, J=7,4 Гц, 2 Н); 4,14 (кв, J=7,2 Гц, 2 Н). Приготовление 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата (3). Раствор бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония (2) (12,00 г, 44,7 ммоль) в воде (10 мл) пропускают через колонку с ионообменной смолой Amberlite IRA-410 (ОН) (250 мл) и медленно элюируют (со скоростью около 10 капель/мин) этанолом (контроль - методом тонкослойной хроматографии). Элюат выпаривают, и остаток (12 г) растворяют в воде (50 мл). К этому раствору добавляют ионообменную смолу DOWEX 50WX8 (5 г) и перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Реакционную смесь фильтруют через слой целита (1 см) и элюат выпаривают. Из остатка удаляют воду путем азеотропной перегонки с изопропанолом, ацетонитрилом и ацетоном. Полученное твердое вещество растирают с ацетоном (10 мл) и смесь выдерживают 2 ч при 0 С. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме над P2O5, чтобы получить 4,65 г (65%) 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата (3).LCMS (ESI+, m/z): 160 [М+Н]+. Анализ по формуле CaH17NO21,55 Н 2 О: С 51,34; Н 10,82; N 7,48. Найдено: С 51,36, Н 11,40, N 7,34. Получение 2-(ацетилокси)бензоата. 3-Карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (4 а). 2-(Ацетилокси)бензоат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония получают в виде смеси с водой. Соответственно, приблизительно 90%-ный 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноат (3) (2,20 г,12,44 ммоль) и 2-(ацетилокси)бензойную кислоту (2,266 г, 12,57 ммоль) помещают в мерную колбу и разбавляют водой до 100 мл. Содержимое смеси растворяется при нагревании и выпадает в осадок при снижении температуры. По данным анализа 1 Н-ЯМР, осажденное твердое вещество представляет собой практически чистую 2-(ацетилокси)бензойную кислоту. Получение (2E)-3-карбоксиакрилата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (4b). К раствору 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата (3) (2,0 г, 12,56 ммоль) в безводном этаноле (10 мл) добавляют горячий (60 С) раствор (Е)-бутендикарбоновой кислоты (1,46 г, 12,56 ммоль) в этаноле(50 мл). Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч, осажденные кристаллы фильтруют и сушат над Р 2 О 5, чтобы получить 2,98 г (85%) (2E)-3-карбоксиакрилата 3-карбоксиN-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония. Температура плавления (Т.пл.) 122-123 С. 1 Н-ЯМР (D2O, DSS) : 1,36 (тт, J=1,9, 7,3 Гц, 3 Н); 2,06 (м, 2 Н); 2,49 (т, J=7,1 Гц, 2 Н); 3,06 (с, 6 Н); 3,31 (м, 2 Н); 3,40 (кв, J=7,3 Гц, 2 Н); 6,75 (с, 1,9 Н, СН=СН).LCMS ESI+ (m/z): 160 [М+Н]+. Данные титрования: содержание воды по Фишеру 0,13%, содержание бетаина (HClO4) 93,0%, содержание (Е)-бутендикарбоновой кислоты 46,1%. Анализ по формуле C8H17NO21,2 С 4 Н 4 О 4 (46,7%): С 51,50, Н 7,36, N 4,69. Найдено: С 51,52, Н 7,35, N 4,61. Получение 3-карбоксипропаноата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (4 с). 3-Карбоксипропаноат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония получают в виде водного раствора. Соответственно, приблизительно 90%-ный 4-[этил-(диметил)аммоний]бутаноат (3) (2,20 г,12,44 ммоль) и янтарную кислоту (1,49 г, 12,62 ммоль) помещают в мерную колбу, растворяют и разбавляют водой до объема 100 мл. Получение 2,6-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-карбоксиата 3-карбокси-N-этил-N,Nдиметилпропан-1-аммония (4d). К раствору 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата (3) (2,0 г, 12,56 ммоль) в изопропаноле (100 мл) добавляют моногидрат 2,6-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-карбоновой кислоты (2,187 г,12,56 ммоль) и реакционную смесь кипятят с дефлегматором, пока не растворится вся карбоновая кислота. Реакционной смеси дают охладиться до комнатной температуры, осажденные кристаллы фильтруют,промывают изопропанолом (5 мл) и диэтиловым эфиром (20 мл) и сушат над PrO5, чтобы получить 3,238 г (97,4%) 2,6-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-карбоксилата 3-карбокси-N-этил-N,Nдиметилпропан-1-аммония. Т.пл. 150,7 С. 1 Н-ЯМР (D2O, DSS) : 1,36 (тт, J=2,0, 7,3 Гц, 3 Н); 2,05 (м, 2 Н); 2,47 (т, J=7,0 Гц, 2 Н); 3,07 (с, 6 Н); 3,31 (м, 2 Н); 3,41 (кв, J=7,3 Гц, 2 Н); 6,20 (с, 1 Н, С=СН).LCMS ESI+ (m/z): 160 [М+Н]+. Анализ по формуле C8H17NO2C5H4N2O4 (49,5%): С 49,52, Н 6,71, N 13,33. Найдено: С 49,59, Н 6,69, N 13,26. Получение дигидрофосфата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (4 е). К раствору 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата (3) (6,4 г, 40 ммоль) в воде (10 мл) добавляют водный раствор Н 3 РО 4 (85%, 4,73 г, 40 ммоль) в ацетоне (10 мл) и образовавшийся раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную смесь выпаривают и сушат путем многократного азеотропного выпаривания с ацетоном в роторном испарителе при 45 С. Образовавшееся белое кристаллическое вещество сушат над Р 2 О 5, чтобы получить 9,82 г (95%) дигидрофосфата 3-карбокси-Nэтил-N,N-диметилпропан-1-аммония. Т.пл. 110-135 С. 1 Н-ЯМР (D2O, DSS) : 1,36 (тт, J=1,8, 7,3 Гц, 3 Н); 2,06 (м, 2 Н); 2,50 (т, J=7,0 Гц, 2 Н); 3,06 (с, 6 Н); 3,32 (м, 2 Н); 3,41 (кв, J=7,3 Гц, 2 Н).LCMS ESI+ (m/z): 160 [М+Н]+. Данные титрования: содержание воды по Фишеру 0,356%, содержание бетаина (HClO4) - 95,682%. Анализ по формуле [C8H17NO20,052H2O (0,356%)1,07 Н 3 РО 4 (39,6%)]: С 36,26, Н 7,73, N 5,29. Найдено: С 36,20, Н 7,72, N 5,11. Степень чистоты полученного дигидрофосфата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония повышается путем кристаллизации из метанола. Так, после кристаллизации дигидрофосфата 3-карбоксиN-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (6,9 г) из метанола (40 мл) получают 5,326 г (77%) очищенного дигидрофосфата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония с Т.пл. 139 С. Вычислено по формуле [C8H17NO2H3PO4 (38,1%)]: С 37,36, Н 7,84, N 5,45. Найдено: С 37,52, Н 7,85, N 5,39. Кардиозащитная активность. Самцов крыс Wistar (50 особей) возрастом 10 недель и массой 200-250 г размещают в стандартных условиях (21-23 С, 12-часовой цикл света-темноты) при неограниченном доступе к пище (диета R3,фирма Lactamin AB, Швеция) и воде. Крысы адаптируются к местным условиям в течение двух недель до начала лечения. Мелдониум-дигидрат в дозе 20 мг/кг, гамма-бутиробетаин в дозе 20 мг/кг и соли 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония в дозе 20 мг/кг ежедневно вводят перорально в течение 8 недель. Контрольным крысам давали воду. Исследование инфаркта на изолированном сердце крысы. Эксперимент с изолированным сердцем крысы проводят практически так же, как описано ранее(Liepinsh et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 2006; 48(6):314-9). Через 24 ч после последнего введения лекарственного препарата сердца вырезают и подвергают обратной перфузии через аорту кислородсодержащим буфером Krebs-Henseleit при постоянном давлении и температуре 37 С. Непрерывно регистрируют частоту сердечных сокращений, конечное диастолическое артериальное давление левого желудочка сердца и давление, развившееся в левом желудочке сердца. Коронарный кровоток измеряют с использованием ультразвукового проточного детектора (HSE) и системы PowerLab 8/30 от фирмы ADIinstruments. Сердца подвергают перфузии в течение 20 мин, чтобы стабилизировать гемодинамические функции, и затем осуществляется закупорка в течение 60 мин путем сжимания нитью пластмассовой трубки. Эффективность закупорки подтверждается уменьшением коронарного кровотока приблизительно на 40%. Реперфузия достигается путем удаления нити. В конце 150-минутного периода реперфузии зона риска очерчивается красителем - метиленовым синим (0,1%). Затем сердца рассекают поперек, от верхушки до основания, на пять срезов толщиной по 2 мм, в фосфатном буфере (рН 7,4, 37 С) с 1% хлорида трифенилтетразолия, которые выдерживают в течение 10 мин, чтобы жизнеспособная ткань окрасилась красным и омертвевшая ткань - белым цветом. Компьютеризированный контурный анализ фотоснимков Sony A900 осуществляется с использованием программного обеспечения Image-Pro Plus 6.3,чтобы определить область риска и область некроза, выраженную в процентах от левого желудочка сердца. Затем полученные данные используют для расчета размера инфаркта (РИ) в виде % от области риска,согласно формуле Размер инфаркта = (Область некроза/Область риска)100%. Эффективность соединений в модели инфаркта на изолированном сердце крысы. Эффективность исследуемых соединений против инфаркта испытывают в модели инфаркта на изолированном сердце крысы. Во время закупорки левой коронарной артерии во всех экспериментальных группах коронарный кровоток снижается на 40% (от 11 до 7 мл/мин). Кроме того, наблюдается падение давления, развившегося в левом желудочке сердца, на 50%. Частота сердечных сокращений в период закупорки существенно не изменяется. На стадии реперфузии коронарный кровоток, развивающий давление в левом желудочке сердца, dp/dt, восстанавливается приблизительно до 80% от уровня контроля. Значительные различия между контрольной и обрабатываемой группами животных не обнаружены. Экспериментальные данные о влиянии Мелдониум-дигидрата (20 мг/кг), гамма-бутиробетаина(20 мг/кг) и солей 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония (20 мг/кг), после двух недель лечения, на размер инфаркта в изолированном сердце крысы представлены в табл. 1-5. Каждая указанная в табл.1-5 величина представляет собой среднее значение для 9-10 животныхстандартная ошибка измерения: р 0,05 по сравнению с контрольной группой; р 0,05 по сравнению с группой гамма-бутиробетаина; р 0,05 по сравнению с группой Мелдониум-дигидрата. Как видно из табл. 1-5, обработка Мелдониум-дигидратом в дозе 20 мг/кг не дает терапевтического эффекта; гамма-бутиробетаин уменьшает размер инфаркта на 12,4%. 2-(Ацетилокси)бензоат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония в дозе 20 мг/кг уменьшает размер инфаркта на 38,4%.(2E)-3-карбоксиакрилат карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония в дозе 20 мг/кг уменьшает размер инфаркта на 53,5%. 2,6-Диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-карбоксилат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1 аммония в дозе 20 мг/кг уменьшает размер инфаркта на 39,4%. Дигидрофосфат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония в дозе 20 мг/кг уменьшает размер инфаркта на 43,9%. 3-Карбоксипропаноат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония в дозе 20 мг/кг уменьшает размер инфаркта на 37,1%. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. (2 Е)-3-Карбоксиакрилат 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония 4. Способ получения соли 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония, который включает в себя: а) добавление N,N-диметилэтиламина к этиловому эфиру 4-бромбутановой кислоты в подходящем растворителе с образованием бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония; б) пропускание бромида 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаммония через колонку с ионообменной смолой с образованием 4-[этил(диметил)аммоний]бутаноата; в) добавление кислоты, выбранной из группы, состоящей из фумаровой кислоты, оротовой кислоты и фосфорной кислоты, в подходящем растворителе, чтобы получить соответствующую соль 3-карбоксиN-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония. 5. Способ по п.4, где на стадии а) соответствующий растворитель представляет собой ацетонитрил или ацетон. 6. Применение солей 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония, выбранных из группы,состоящей из дигидрофосфата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония,(2 Е)-3-карбоксиакрилата, 2,6-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-карбоксилата в качестве лекарственного препарата. 7. Применение соли 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония, выбранной из группы, состоящей из (2 Е)-3-карбоксиакрилата, 2,6-диоксо-1,2,3,6-тетрагидропиримидин-4-карбоксилата и дигидрофосфата 3-карбокси-N-этил-N,N-диметилпропан-1-аммония, для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. 8. Применение по п.7, где сердечно-сосудистое заболевание представляет собой ишемическое заболевание сердца. 9. Применение по п.8, где ишемическое заболевание сердца представляет собой инфаркт миокарда.