Применение 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата для лечения сердечно-сосудистых заболеваний

способу его получения и его применению для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ГРИНДЕКС, ДЖОИНТ СТОК КАМПАНИ (LV) Область изобретения Настоящее изобретение относится к новому соединению 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата, а также к способу его получения (соединение формулы 5). Настоящее изобретение также относится к применению 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Предпосылки создания изобретения Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) - это группа заболеваний, поражающих сердце и кровеносные сосуды. Подсчитано, что 16,7 млн или 29,2% от всех смертей в мире являются результатом сердечнососудистых заболеваний (ССЗ). Инфаркт миокарда (сердечный приступ) является самым серьезным последствием заболевания коронарных артерий. Инфаркт миокарда (ИМ) представляет собой необратимый некроз сердечной мышцы,являющийся результатом длительной ишемии. Сердечный приступ или инфаркт миокарда представляет собой острое состояние, требующее немедленной медицинской помощи, поскольку кровоснабжение сердечной мышцы внезапно и серьезно уменьшается или прекращается полностью, что приводит к гибели ткани из-за дефицита кислорода. Более чем у 1,1 млн людей ежегодно происходит сердечный приступ(инфаркт миокарда), и для многих из них инфаркт миокарда оказывается первым симптомом заболевания коронарных артерий. Сердечный приступ может быть как очень сильным и приводить к смерти, так и протекать бессимптомно. У каждого пятого пациента симптоматика отсутствует или симптомы выражены незначительно, а перенесенный сердечный приступ диагностируется случайно во время регулярного электрокардиографического обследования много позже. Сердечный приступ (инфаркт миокарда) обычно является следствием образования тромба, блокирующего коронарную артерию. К этому моменту просвет сосуда обычно уже сужен за счет жировых атеросклеротических отложений на его стенках. Указанные отложения могут отрываться и проникать в просвет сосуда, замедляя кровоток и высвобождая соединения, которые увеличивают вязкость крови и способствуют формированию тромбов. Иногда тромб образуется непосредственно в камерах сердца, где он может оторваться и закупорить артерию, питающую сердечную мышцу. Спазм одной из коронарных артерий приводит к прекращению кровотока. Гамма-бутуробетаин, соединение, из которого в организме млекопитающих синтезируется карнитин, изначально был описан как токсичное вещество, усиливающее дыхание, вызывающее слюноотделение и слезотечение, расширение зрачков, вазоконстрикцию и остановку сердца в диастоле (LINNEWEHphysiologische Chemie. 1929, vol. 181, p. 42-53). В то же время, в более поздних работах другие авторы утверждают, что гамма-бутуробетаин является чрезвычайно низкотоксичным соединением (LD507000 мг/кг, s.c.) (ROTZSCH. W. Iber die Toxizitat des Carnitins und einiger verwandter Stoffe. Acta boil. med. germ. 1959, vol. 3, p. 28-36). Данные, представленные в литературе и касающиеся сердечно-сосудистых эффектов гаммабутуробетаина (HOSEIN E.A. Pharmacological actions of -buturobetaine, Nature, 1959, vol. 183, p. 328-329),свидетельствуют о том, что гамма-бутуробетаин представляет собой соединение, сходное по своим свойствам с ацетилхолином, но обладающее более пролонгированным действием. Однако, позднее некоторые авторы сообщили, что во время экспериментов произошла ошибка и на самом деле не гаммабутуробетаин, а метиловый эфир, в действительности, обладает ацетилхолиновой активностью. В противоположность представленным ранее данным, утверждалось, что гамма-бутуробетаин представляет собой фармацевтически интертное соединение (HOSEIN Е.А. Isolation and probable functions of betaine estersin brain metabolism. Nature. 1960, vol. 187, p. 321-322). Родственные по структуре 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноату соединения описаны в следующих источниках:GB 1238868 А 14.07.1971, где раскрываются бетаины, такие как 4-триметиламмониобутаноат, используемые для полимеров. Однако фармакологические свойства указанных бетаинов не описываются;LLOYD ANDREW и соавт. Сравнение глицина, саркозина, N,N-диметилглицина, глицинбетаина и Nмодифицированных бетаинов в качестве криопротекторов липосом (Journal of pharmacy and pharmacology. 1992, vol. 44, no.6, p. 507-511). В статье описывается использование 2-[этил(диметил)аммионио]ацетата в качестве криопротектора липосом;lyte-and pH-Responsive Carboxybetaine-Containing Cyclopolymers. Macromolecules. 2003. vol. 36, no. 26, p. 9710-9715, где описываются 4-[диаллил(метил)аммонио]бетаноат и его синтез, начиная с N,N-диаллилN-метиламинионна и этил-4-бромбутаноата. Свободную кислоту получают из сложного эфира на втором этапе при помощи амберлитовой ионообменной смолы. Продукт использую в качестве промежуточного соединения для синтеза полимеров;Prelog V. 1930, vol. 2, p. 712-722 описывает синтез 4-триметиламмониобутаноата, начиная с 4 диметиламмиониобутаноата и метилйодида; 4-Триметиламмониобутаноат и его синтез, начиная с триметиламина и этил 4-бромбутаноата, описан в заявке JP 2009096766 A (KONAN GAKUEN) от 07.05.2009. Свободную кислоту получают из эфира на втором этапе при помощи амберлитовой ионообменной смолы;PUGOVICHS OSVALDS) от 15.05.2008 относится к 4-триметиламмониобутаноату и его синтезу, который начинается с соответствующего сложного эфира и включает использование раствора KOH; СА 2508094 A (VIVIER CANADA INC) от 20.11.2006, где раскрываются бетаины, такие как 4 триметиламмониобутаноат, и их применение в качестве лекарственных агентов для усиления синтеза коллагена;US 5965615 A (TAIHO PHARMACEUTICAL CO LTD; VALSTS ZINATNISKA IESTADE BEZP) от 12.10.1999, где раскрывается 4-триметиламмониобутаноат в качестве лекарственного агента для лечения миокардиальных метаболических нарушений; аналогичное соединение описано в заявке US 2007191381A (CONCERT PHARMACEUTICALS INC) от 16.08.2007 для лечение инфаркта миокарда. 3-(2,2,2-Триметилгидразиний)пропионат дигидрат известен как соединение, обладающее кардиопротективными свойствами (это вещество известно под своим международным непатентованным названием - Мелдоний). 3-(2,2,2-Триметилгидразиний)пропионат описан в заявке US 4481218 (INST ORGANICHESKOGOSINTESA) от 06.11.1984, а также в заявке US 4451485 А (INSTITU ORCH SINTEZA AKADEMII) от 29.05.1984. Хорошо известно, что 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионат в форме дигидрата широко применяется для контроля соотношений концентраций карнитина и гамма-бутуробетаина и, соответственно, скорости -окисления жирных кислот в организме человека (DAMBROVA M., LIEPINSH E., KALVINSH 1.1. Милдронат: кардиопротективное действие за счет снижения концентрации карнитина. Trends in Cardiovascular Medicine., 2002, vol. 12, no. 6, p. 275-279). Благодаря указанным свойствам, Мелдоний широко применяется в медицине в качестве антиишемического, кардиопротективного лекарственного средства и лекарственного средства, повышающего стрессоустойчивость, для лечения различных сердечно-сосудистых заболеваний и других патологических состояний, при которых отмечается ишемия тканей (KARPOV R.S., KOSHELSKAYA O.A.,VRUBLEVSKY A.V., SOKOLOV A.A., TEPLYAKOV A.T., SKARDA I., DZERVE V., KLINTSARE D.,VITOLS A., KALNINS U., KALVINSH I., MATVEYA L., URBANE D. Clinical Efficacy and Safety of Mildronate in Patients With Ischemic Heart Disease and Chronic Heart Failure. Kardiologiya. 2000, no. 6, p. 69-74). При лечении сердечно-сосудистых заболеваний механизм действия 3-(2,2,2 триметилгидразиний)пропионата основан на снижении скорости биосинтеза карнитина и скорости транспорта жирных кислот с длинными цепями через митохондриальные мембраны (SIMKHOVICH B.Z.,SHUTENKO Z.V., MEIRENA D.V., KHAGI K.B., MEZHAPUKE R.J., MOLODCHINAT.N., KALVINS I.J.,LUKEVICS Е). 3-(2,2,2-Триметилгидразиний)пропионат (ТГП) - новый ингибитор гамма-бутуробетаин-гидроксилазы с кардиопротективными свойствами (Biochemical Pharmacology. 1988, vol. 37, p. 195-202, KIRIMOTO Т., ASAKA N., NAKANO M., TAJIMA K., MIYAKE H., MATSUURA N. Beneficial effects of MET88, -butyrobetaine hydroxylase inhibitor in rats with heart failure following myocardial infarction. EuropeanJournal of Pharmacology. 2000, vol. 395, no. 3, p. 217-224). Сущность изобретения Хорошо известно, что Мелдоний дигидрат обладает кардиопротективными свойствами, однако, к настоящему моменту нет данных о том, обладает ли подобными свойствами гамма-бутуробетаин сам по себе. В патенте ЕР 0845986 В (KALVINSH IVARS, VEVERIS MARIS) от 02.04.2003 описывается фармацевтическая композиция Мелдоний дигидрата и гамма-бутуробетаина, предназначенная для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Целью настоящего изобретения является создание нового соединения, обладающего выраженными кардиопротективными свойствами. Указанная цель достигается получением нового соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноат(формулы 5), которое обладает структурой, сходной со структурой Мелдония или гамма-бутуробетаина. Неожиданно оказалось, что 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноат обладает выраженным кардиопротективным действием и является более эффективным, чем Мелдоний дигидрат, при тестировании на моделях инфаркта миокарда in vivo; благодаря указанным свойствам 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноат может использоваться в медицине. Соединение 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноат может применяться как в растворе для инъекционного введения, так и в форме таблеток. Еще одной целью настоящего изобретения является способ получения указанного соединения(формулы 5). В настоящем описании представлены четыре способа, которые могут использоваться для получения желаемого соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата, имеющего формулу 5. См. схему, представленную ниже. Первый способ (А) включает следующие последовательные этапы: а) добавление этилбромида к 4-(диметиламмонио)бутаноату для получения N-этил-4-метокси-N,Nдиметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; б) обработка полученного N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида гидроксидом калия с получением желаемого соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. Второй способ (Б) включает следующие последовательные этапы: а) добавление карбоната калия и бромметана к 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлориду с получением N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; б) пропускание N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида через колонку с ионообменной смолой с получением 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. Третий способ (В) включает следующие последовательные этапы: а) добавление карбоната калия и дихлорметана к 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлориду с получением метил-4-(диметиламино)бутаноата; б) перемешивание метил-4-(диметиламино)бутаноата с бромэтаном в дихлорметане с получениемN-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; в) обработка N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида гидроксидом калия с получением желаемого соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. Четвертый способ (Г) включает следующие последовательные этапы: а) добавление N,N-диметилэтиламина к этил 4-бромбутаноату в дихлорметане с получением 4 этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; б) пропускание 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида через колонку с ионообменной смолой с получением желаемого соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. Описание вариантов осуществления изобретения Настоящее изобретение подробно описано со ссылкой на представленные ниже примеры, которые никоим образом не ограничивают сущность изобретения. Синтез 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата (5) Получение 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлорида (3) К раствору 3-карбокси-N,N-диметил-1-пропанаминиум хлорида (2) (45,93 г, 0,27 моль) в безводном метаноле (300 мл) при температуре -10-0 С медленно добавляют тионилхлорид (55 мл, 0,76 моль) и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при температуре окружающей среды. Затем реакционную смесь перемешивают при температуре 40-50 С в течение 3 ч и выпаривают. Полученный осадок растворяют в ацетоне (110 мл) и преципитируют путем добавления эфира (400 мл). Твердое вещество отфильтровывают, отмывают эфиром и повторно растворяют в ацетоне (110 мл) с последующей преципитацией эфиром (400 мл). Преципитат фильтруют, отмывают эфиром и высушивают с получением 38,4 г (77%) 4 метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлорида. 1H NMR (DMSO-d6, HMDSO) : 1,91 (qui, J = 7,7 Hz, 2H); 2,43 (t, J = 7,74 Hz, 2H); 2,71 (d, J = 4,9 Hz,6H); 2,98-3,06 (m, 2H), 3,61 (s, 3H); 10,76 (b s, 1H). Способ А Получение 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата (5) Смесь 4-(диметиламмонио)бутаноата (4) (7,87 г, 0,06 моль) и этилбромида (13,08 г, 0,12 моль) в безводном ацетоне (20 мл) нагревают в колбе с обратным холодильником до тех пор, пока исходное вещество 4-(диметиламмонио)бутаноат не растворится (TLC контроль, метанол-водный гидроксид аммония, 3:1). Реакционную смесь обогащают изопропанолом (100 мл) и раствор выпаривают до полного высушивания. К осадку при температуре 0 С добавляют раствор KOH (7,28 г, 0,13 моль) в 96% этаноле (70 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч. Преципитат отфильтровывают, а полученный фильтрат обрабатывают 2 N HCl в метаноле до тех пор, пока величина рН среды не достигнет 7-8. Реакционную смесь выдерживают при температуре -18 С в течение 12 ч и фильтруют. Фильтрат выпаривают до полного высушивания, а полученный осадок азеотропно высушивают изопропанолом (3100 мл). Полученное маслянистое твердое вещество (13,4 г) растворяют в изопропаноле (100 мл) и выдерживают при температуре -18 С в течение 12 ч. Преципитат фильтруют и полученный фильтрат выпаривают до полного высушивания и кристаллизуют из ацетона (30 мл) при -18 С с получением 4,14 г (43%) 4[этил(диметил)аммонио]бутаноата. 1 Н NMR (DMSO-d6, HMDSO) : 1,24 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 1,68-1,78 (m,2H); 1,87 (t, J = 6,5 Hz, 2H); 2,96(s, 6H), 3,16-3,23 (m, 2H); 3,29 (q, J = 7,3 Hz, 2H). LC ESI-MS (m/z): 160 [M+H]+. Аналогичный расчет для C8H17NO21,3 H2O: С 52,61, Н 10,82, N 7,67. Получено: С 52,64, Н 11,00, N 7,58. Способ Б Получение N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида (6 а) Смесь 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлорида (3) (7,27 г, 0,14 моль), безводногоK2CO3 (5,52 г, 0,04 моль) и бромоэтана (4,48 мл, 0,06 моль) в ацетоне (40 мл) интенсивно перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 дней. Преципитат фильтруют, отмывают ацетоном, суспендируют в изопропаноле (100 мл) и интенсивно перемешивают полученную смесь при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Смесь фильтруют, фильтрат выпаривают до полного высушивания и азеотропно высушивают несколько раз при помощи изопропанола. Осадок кристаллизуют из ацетона (10 мл) путем добавления этилацетата (35 мл) и высушивают над Р 2 О 5 в вакууме с получением 6,51 г (10 мл)N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида. 1 Н NMR (CDCl3, HMDSO) : 1,44 (t, J = 7,2 Hz, 3 Н); 2,01-2,12 (m, 2H); 2,55 (t, J = 6,6 Hz, 2H); 3,40 (s,6H), 3,66-3,73 (m, 4H), 3,69 (s, 3H). LC ESI-MS (m/z): 174 [M+H]+. Аналогичный расчет для C9H20BrNO20,09 Н 2 О: С 42,26, Н 7,95, N 5,48. Получено: С 42,26, Н 8,28, N 5,35. Получение 4-[этил(диметил)аммионио]бутаноата (5) Раствор N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида (6 а) (6,51 г, 0,025 моль) в этаноле (20 мл) пропускают через колонку с ионообменной смолой Амберлит IRA-410 (ОН) (190 мл) и медленно элюируют этанолом (100 мл). Элюат выпаривают до полного высыхания и осадок несколько раз азеотропно высушивают изопропанолом, затем растворяют в изопропаноле (50 мл) и выдерживают при температуре 0 С в течение 12 ч. Смесь фильтруют и фильтрат выпаривают. Осадок (7,35 г) смешивают с холодным этилацетатом и выдерживают при температуре 0 С в течение 12 ч. Смесь фильтруют и преципитат высушивают над Р 2 О 5 в вакууме с получением 3,54 г (86%) 4-[этил(диметил)аммионио]бутаноата. Степень очистки материала увеличивают путем пропускания водного раствора 4[этил(диметил)аммионио]бутаноата через ионообменную смолу DOWEX 50WX8. Раствор выпаривают до полного высушивания; осадок азеотропно высушивают изопропанолом с последующим высушиванием в вакууме над Р 2 О 5 с получением 1,27 г (31%) 4-[этил(диметил)аммионио]бутаноата. Способ В Получение метил 4-(диметиламино)бутаноата (7) Суспензию 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлорида (3) (5,44 г, 0,03 моль) и безводного K2CO3 (5,52 г, 0,04 моль) в дихлорметане (70 мл) интенсивно перемешивают при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Преципитат фильтруют, отмывают дихпорметаном, а полученный фильтрат выпаривают. Осадок подвергают дистилляции при 32-35 С/3-4 мм Hg с получением 2,88 г(66%) 4-(диметиламино)бутаноата. 1 Н NMR (DMSO-d6, HMDSO) : 1,64 (qui, J = 7,2 Hz, 2H); 2,09 (s, 6H); 2,17 (t, J = 7,1 Hz, 2H); 2,30 (t,J = 7,4 Hz, 2H); 3,57 (s, 3H). Получение N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида (6 а) Смесь метил 4-(диметиламино)бутаноата (7) (1,45 г, 10 ммоль) и бромэтана (1,2 мл, 16 ммоль) в дихлорметане (15 мл) перемешивают при температуре окружающей среды. Реакционную смесь выпаривают до полного высушивания, твердое белое вещество (2,438 г) измельчают в порошок с ацетоном, фильтруют и высушивают в вакууме над P2O5 с получением 2,397 г (94%) N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4 оксо-1-бутанаминиум бромида. Способ Г Получение 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминий бромида (6b) К раствору этил-4-бромбутаноата (8) (19,5 г, 0,1 моль) в дихлорметане при температуре ледяной бани добавляют N,N-диметилэтиламин (10,8 мл, 0,1 моль) и перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь выпаривают до полного высушивания, осадок растирают в порошок с ацетоном (50 мл) и выдерживают при температуре 0 С в течение 0,5 ч. Преципитат фильтруют и высушивают в вакууме над Р 2 О 5 с получением 22,274 г (94%) 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо 1-бутанаминиум бромида. 1 Н NMR (CDCl3, HMDSO) : 1,26 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,44 (t, J = 7,4 Hz, 3H); 2,00-2,11 (m, 2H); 2,52 (t,J = 6,6 Hz, 2H); 3,40 (s, 6H), 3,64-3,37 (m, 2H); 3,69 (q, J = 7,4 Hz, 2H); 4,14(q, J = 7,2 Hz, 2H). Получение 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата (5) Раствор 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида (6b) (12,00 г, 44,7 моль) в воде (10 мл) пропускают через колонку с ионообменной смолой Амберлит IRA-410 (ОН) (250 мл), медленно элюируют (приблизительно 10 капель в мин) этанолом (TLC контроль). Элюат выпаривают, а полученный осадок (12 г) растворяют в воде (50 мл). К полученному раствору добавляют ионообменную смолу DOWEX 50WX8 (5 г) и полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 0,5 ч. Реакционную смесь фильтруют через целит (1 см) и элюат выпаривают до полного высушивания. Осадок азеотропно высушивают изопропанолом, ацетонитрилом и ацетоном. Полученное твердое вещество измельчают в порошок с ацетоном (10 мл) и полученную смесь выдерживают при температуре 0 С в течение 2 ч. Преципитат фильтруют и высушивают в вакууме над Р 2 О 5 с получением 4,65 г (65%) 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. 1 Н NMR (DMSO-d6, HMDSO) : 1,24 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 1,66-1,76 (m, 2H); 1,81 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 2,95(s, 6H); 3,16-3,23 (m, 2H), 3,29 (q, J = 7,3 Hz, 2H). LC ESI-MS (m/z): 160 [M+H]+. Аналогичный расчет для C8H17NO21,55 H2O: С 51, 34; H 10,82; N 7,48. Обнаружено: С 51,36; Н 11,40; N 7,34. Кардиопротективная активность Пятьдесят 10-недельных крыс женского пола линии Wistar весом 200-250 г содержали при стандартных условиях (21-23 С, 12-часовой цикл смены дня и ночи) без ограничения доступа к пище (диетаR3, Lactamin AB, Sweden) и воде. Крысы адаптировались к местным условиям в течение двух недель перед началом исследования. Мелдоний дигидрат в дозе 5 или 100 мг/кг, гамма-бутуробетаин в дозе 5 мг/кг и EG в дозе 20 мг/кг вводили животным перорально один раз в день в течение 8 недель. Контрольные животные получали воду. Исследование инфаркта миокарда у крыс на изолированном сердце Исследование инфаркта миокарда у крыс на изолированном сердце осуществляли так же, как описано ранее (Liepinsh et al., J. Cardiovasc. Pharmacol, 2006, 48(6): 314-9). Через 24 ч после последнего введения лекарственного средства сердца иссекали и ретроградно через аорту подвергали перфузии оксигенированным буфером Кребса-Хенселейта при постоянном давлении и температуре 37 С. Регистрировали сердечный ритм, конечное диастолическое давление в левом желудочке и развиваемое давление в левом желудочке. Поток в коронарных артериях измеряли при помощи ультразвукового детектора потока(HSE) и системы PowerLab 8/30 лаборатории ADlnstruments. Сердца подвергали перфузии в течение 20 мин для стабилизации гемодинамических показателей,после чего осуществляли окклюзию в течение 60 мин, перекрывая поток через пластиковые трубки. Окклюзия считалась успешной при снижении потока в коронарных сосудах приблизительно на 40%. Реперфузию осуществляли, ослабляя зажим и возобновляя поток. В конце 150-мин периода реперфузии, зону риска ограничивали при помощи окрашивания 0,1% метиленовым синим. Затем осуществляли поперечную секцию сердец от верхушки к основанию, всего 5 срезов толщиной около 2 мм, которые инкубировали в 1% трифенилтетразолий хлориде в фосфатном буфере (рН 7,4, 37 С) в течение 10 мин до полного окрашивания живой ткани в красный цвет, а мертвой ткани в белый. Для определения зоны риска и зоны некроза осуществляли компьютеризированный планиметрический анализ фотографий, сделанных аппаратом Sony A900; для анализа использовали программу Image-Pro Plus 6,3, размер зон выражали в процентах от общей площади левого желудочка. Полученные величины затем использовали для расчета размера инфаркта (РИ) в процентах по отношению к зоне риска при помощи следующей формулы: Размер инфаркта = Зона некроза/Зона риска 100% Эффекты моделей инфаркта миокарда на изолированном сердце у крыс Антиинфарктное действие тестируемых соединений изучали на модели инфаркта миокарда на изолированном сердце у крыс. Во время окклюзии левой коронарной артерии поток в коронарных артериях во всех экспериментальных группах снижался на 40% ( с 11 до 7 мл/мин). Кроме того, отмечалось падение развиваемого давления в левом желудочке на 50%. Частота сердечных сокращений во время периода окклюзии существенно не менялась. На стадии реперфузии коронарный поток, развиваемое давление в левом желудочке, dp/dt величины восстанавливалось до уровня приблизительно 80% от контрольного уровня. Не было выявлено существенных различий между контрольной и исследуемой группами. Влияние Мелдоний дигидрата (5 и 100 мг/кг), гамма-бутуробетаина (5 мг/кг) и 4[этил(диметил)аммонио]бутаноата (EG) (5 мг/кг) через 2 недели лечения на размер зоны инфаркта, изученное на модели инфаркта миокарда на изолированном сердце у крыс, представлены в таблице. Влияние Мелдоний дигидрата, гамма-бутуробетаина и EG на размер зоны инфаркта Каждая величина представляет собой среднеесреднее арифметическое для 9-10 животных. Существенное отличие от контрольной группы (t-тест Р 0,05). Как показано в таблице, лечение Мелдоний дигидратом в дозе 5 мг/кг приводило к уменьшению размеров зоны инфаркта на 5%; терапевтическая активность Мелдоний дигидрата наблюдалась только при его применении в дозе 100 мг/кг, при этом происходило уменьшение размеров зоны инфаркта на 24%. Гамма-бутуробетаин в дозе 5 мг/кг не оказывал терапевтического действия. 4[этил(диметил)аммонио]бутаноат в дозе 5 мг/кг обладал наилучшим терапевтическим эффектом и способствовал уменьшению размеров инфарктной зоны на 41%. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. 4-[Этил(диметил)аммонио]бутаноат 2. Способ получения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата, включающий: а) добавление этилбромида к 4-(диметиламмонио)бутаноату в ацетоне с получением N-этил-4 метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; б) обработку N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида раствором гидроксида калия в этаноле с получением желаемого соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. 3. Способ получения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата, включающий: а) добавление карбоната калия и бромметана к 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлориду в ацетоне с получением N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; б) пропускание N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминий бромида в присутствии этанола через колонку с ионообменной смолой с получением 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. 4. Способ получения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата, включающий: а) добавление карбоната калия и дихлорметана к 4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум хлориду с получением метил-4-(диметиламино)бутаноата; б) перемешивание метил-4-(диметиламино)бутаноата с бромэтаном в дихлорметане с получениемN-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; в) обработку N-этил-4-метокси-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида раствором гидроксида калия в этаноле с получением желаемого соединения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата. 5. Способ получения 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата, включающий: а) добавление N,N-диметилэтиламина к этил 4-бромбутаноату в дихлорметане с получением 4 этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида; б) пропускание 4-этокси-N-этил-N,N-диметил-4-оксо-1-бутанаминиум бромида, растворенного в воде, через колонку с ионообменной смолой с получением желаемого соединения 4[этил(диметил)аммонио]бутаноата. 6. 4-[Этил(диметил)аммонио]бутаноат для применения в качестве лекарственного средства для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. 7. 4-[Этил(диметил)аммонио]бутаноат для применения в лечении сердечно-сосудистых заболеваний. 8. Применение 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата для производства лекарственного средства,предназначенного для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. 9. Применение 4-[этил(диметил)аммонио]бутаноата по п.8 для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения ишемической болезни сердца. 10. Применение по п.9, где ишемическая болезнь сердца проявляется инфарктом миокарда.