Фармацевтическое применение белковых молекул, иммунологически взаимосвязанных с дифтерийным токсином

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ БЕЛКОВЫХ МОЛЕКУЛ,ИММУНОЛОГИЧЕСКИ ВЗАИМОСВЯЗАННЫХ С ДИФТЕРИЙНЫМ ТОКСИНОМ Белковые молекулы, иммунологически связанные с дифтерийным токсином, предложены для лечения атеросклероза и других патологических состояний, связанных с ним. 015863 Область техники Настоящее изобретение относится к применениям белковых молекул для лечения атеросклероза и для лечения и/или профилактики других патологий, связанных с атеросклерозом. Уровень техники Патологические состояния сердечно-сосудистой системы в настоящее время являются одной из наиболее значительных причин смерти в средне- и высокоразвитых промышленных странах. Атеросклероз представляет собой сердечно-сосудистую патологию, характеризующуюся отвердеванием и сужением артерий, которое происходит у большинства людей с возрастом. Атеросклероз обычно не проявляет симптомов до серьезного нарушения кровотока в кровеносных сосудах. Характерные симптомы атеросклероза включают боль в груди, при вовлечении коронарной артерии, или боль в ноге,при вовлечении артерии ноги. Возможные осложнения атеросклероза включают апоплексию, некроз и заболевание коронарных артерий (одним из симптомов которого является стенокардия) с ишемией и инфарктом. На основании вышеизложенного очевидно, что все еще существует значительная необходимость в получении лекарственных средств, доступных для лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний. Описание изобретения Целью настоящего изобретения является предоставление новых возможностей для лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний. В соответствии с настоящим изобретением представлены способы лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний и применения производных дифтерийного токсина в получении лекарственных средств для лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний, как заявлено в независимых пунктах формулы изобретения, которые следуют в конце этого описания, и, предпочтительно, в любом из отдельных пунктов прямо или опосредованно зависимых от независимых пунктов. Если явным образом не утверждается обратное, следующие термины имеют указанное ниже значение. В тексте настоящего описания "процент идентичности" и "% идентичности" между двумя аминокислотными последовательностями означает процент идентичных аминокислотных остатков в соответствующих положениях в двух последовательностях при оптимальном выравнивании. Для определения "процента идентичности" двух аминокислотных последовательностей или последовательностей нуклеиновых кислот, последовательности попарно выравнивают для достижения оптимального сравнения. В эту последовательность могут быть введены разрывы (т.е., удаления или вставки). Затем сравнивают аминокислоты в соответствующих положениях. В тех случаях, когда положение в первой последовательности занято той же аминокислотой, которая занимает соответствующее положение во второй последовательности, молекулы являются идентичными в этом положении (т.е., это положение является идентичным). Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой следствие наличия определенного числа идентичных положений в последовательностях [т.е. процент идентичности = (число идентичных положений/общее число положений)100]. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления, последовательности имеют одинаковую длину. В сравниваемых последовательностях могут присутствовать разрывы. Процент идентичности может быть получен с помощью математических алгоритмов. Неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей,является алгоритм Karlin и Altschul 1990), Proc. Natl Acad Sci USA 87: 2264-2268) модифицированныйKarli и Altschul 1993), Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 5873-5877). Такой алгоритм включен в программыAltschul BLASTn и BLASTp (Altschul, et al, (1990). J. Mol. Biol. 215: 403-410). Для получения выравниваний также в присутствии одного или нескольких разрывов можно применять способы, которые налагают сравнительно высокий штраф за каждый разрыв и более низкий штраф за каждый дополнительный аминокислотный остаток или нуклеотид в разрыве (такой дополнительный аминокислотный остаток или нуклеотид определяется как удлинение разрыва). Очевидно, высокие штрафы будут определять оптимизированные выравнивания с меньшим числом разрывов. Примером программы, подходящей для реализации этого типа выравнивания, является программаBLASTn и BLASTp могут быть использованы с параметрами по умолчанию. При использовании программы BLAST обычно употребляется матрица BLOSUM62. Предпочтительным и неограничивающим примером программы для получения оптимального выравнивания является пакет GCG Winsconsin Bestfit (University of Winsconsin, USA; Devereux et al.(1984).Nucleic Acids Research 12:387). В этом случае также используются параметры по умолчанию, которые для последовательности аминокислот предусматривают штраф за разрыв -12 и штраф за каждое удлинение -4. В тексте настоящего описания под "гомологичными положениями" подразумеваются положения,которые имеют две гомологичных аминокислоты, то есть аминокислоты, наделенными сходными физи-1 015863 ко-химическими свойствами. Например, аминокислоты, принадлежащие тем же группам, таким как: ароматическая (Phe, Trp, Tyr), кислая (Glu, Asp), полярная (Gin, Asn), основная (Lys, Arg, His), алифатическая (Ala, Leu, He, Val), с одной гидроксигруппой (Ser, Thr), с короткой боковой цепью (Gly, Ala, Ser,Thr, Met) . Можно было бы ожидать, что замены между такими гомологичными аминокислотами не изменят фенотип белка (консервативная замена аминокислот). Конкретные примеры консервативных замен хорошо известны в уровне техники и описаны в различных работах (например, Bowie et al. (1990). Science 247:1306-1310). В тексте настоящего описания под "условиями строгости" подразумевается, предпочтительно, промывание в течение одного часа буфером SSC (0,15 М раствор хлорида натрия и 20 мМ цитрат натрия) и 0,1% SDS (додецилсульфат натрия) при 50 С. Альтернативно, "условия строгости" были описаны ранее(Ausubel F М et al. eds. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates,Tnc. and John WileySons Inc. New York). В тексте настоящего описания под "фармацевтически приемлемым производным" подразумевается соль или комплекс (т.е. соединение, в котором одна или более молекул или ионов образуют одну или несколько координатных связей с одним или более атомами металлов или ионов металла), которые сохраняют биологические свойства исходной молекулы. Неограничивающие примеры способов получения таких производных включают следующие положения: добавление неорганических кислот (например,соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты и им подобных) или органических кислот (например, уксусной кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, метасульфоновой кислоты, салициловой кислоты, янтарной кислоты, лимонной кислоты или подобных) к свободному основанию исходной молекулы; замена протона кислоты исходной молекулы катионом металла (например, катионом щелочного металла или алюминия или подобного); перенос протона кислоты исходного соединения на органическое основание (например, диметиламин, триэтиламин и подобное) и координация с таким органическим основанием. Должно быть понятно, что молекулы, которые являются объектом настоящего изобретения, если не указано обратное, включают их "фармацевтически приемлемые производные". Краткое описание чертежей Неограничивающие варианты осуществления настоящего изобретения будут описаны посредством примеров со ссылкой на сопровождающие чертежи, на которых на фиг. 1 и 2 показаны цветные Допплеровские изображения, полученные у пациента из примера 3 до, и, соответственно, после лечения с использованием CRM197. Наилучший способ осуществления изобретения В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения предложены белковая молекула для лечения атеросклероза и/или для лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих, и применение белковой молекулы для лечения атеросклероза и/или для лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих. В частности, в соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предлагается применение белковой молекулы для получения фармацевтического препарата для лечения атеросклероза и/или для лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих. Патологические состояния, связанные с атеросклерозом, включают: апоплексию, некроз и заболевание коронарных артерий с ишемией и инфарктом. Ишемия также может быть, в частности, почечной,легочной и цереброваскулярной. Белковая молекула, предпочтительно, имеет идентичность по меньшей мере 90% с последовательностью CRM197, содержит первый и второй дисульфидный мостик, два фрагмента, оба из которых соединены друг с другом посредством первого дисульфидного мостика, и имеет глутаминовую кислоту в положении 52.CRM197 представляет собой токсин, продуцируемый мутантным штаммом Corynebacterium diphtheriae (Uchida Т., Pappenheimer AM Jr, Greany R (1973). Diphtheria toxin and related proteins. I Isolation andproperties of mutant proteins serologically related to diphtheria toxin. J. Biol. Chem. 248: 3838-3844), является,по существу, нетоксичным (см. Uchida et al. , выше), в настоящее время используется в качестве носителя для детских вакцин (см., в частности, Bartolozzi G, Rappuoli R. I vaccini, UTET, 2001. pp 114, 164), отличается от дифтерийного токсина наличием глутаминовой кислоты вместо глицина в положении 52, и продается (для лабораторного применения) фирмой Sigma-Aldrich под номером CAS 92092-36-9 и номером MDL MFCD00166638. Дифтерийный токсин представляет собой токсин, как известно, продуцируемый Corynebacterium diphtheriae. Были описаны последовательность и структура дифтерийного белкаproperties. Biochim Biophys Acta 827: 45-50). CRM197 может быть получен тем же способом, описаннымPark H W и Williams A W (J Exp Med 1:164-185) с использованием мутантного штамма Corynebacterium-2 015863 В соответствии со все более предпочтительными вариантами осуществления, белковая молекула должна иметь по меньшей мере 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и 100% идентичность последовательностиCRM197. Где белковая молекула и CRM 197 демонстрируют одно или более различных положений,предпочтительно по меньшей мере одно из этих различных положений должно быть гомологичным; более предпочтительно, различные положения должны быть гомологичными. Предпочтительно, белковая молекула содержит первый цистеин в положении 186, а второй цистеин в положении 201. Первый и второй цистеины соединены вместе первым дисульфидным мостиком. Белковая молекула содержит третий цистеин в положении 461, и четвертый цистеин в положении 471. Третий и четвертый цистеины соединены вместе посредством второго дисульфидного мостика. Белковая молекула действует путем присоединения ее к НВ-EGF (Raab G, Klagsbrun H (1997). Heparin-binding EGF-like Growth Factor, Biochim Biophys Acta 1933: 179-199) и стимуляции иммунной системы таким образом, что притягивает антитела и лейкоциты (Harrison's Principles of Internal Medicine, ninthedition, pp 672-674). HB-EGF представляет собой гепаринсвязывающий фактор роста, способный активировать два подтипа (HER1 и HER4) EGFR (рецептор эпидермального фактора роста) и в основном сверхэкспрессируется при некоторых патологических процессах, таких как атеросклероз (Miyagawa JI, Higashiyama S, Kawata S, et al. (1995). Localization of heparin-binding EGF-like growth factor in the smooth muscle cells and macrophages of human atherosclerotic plaques. J Clin Invest 95: 404-411). Следовательно, предпочтительно, эта молекула способна прикрепляться к HB-EGF в условиях строгости и стимулировать иммунологическую реакцию таким образом, чтобы притягивать антитела и/или лейкоциты. В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предложены фармацевтический препарат, содержащий белковую молекулу, описанную выше, или один из ее фармацевтически приемлемых производных и эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель. В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предложен способ лечения атеросклероза и/или лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих. Способ предусматривает введение млекопитающим эффективной дозы белковой молекулы, определенной выше. Предпочтительно, белковую молекулу вводят путем подкожной инъекции. В этом случае риск возникновения иммунологической реакции немедленного типа у гиперчувствительных пациентов резко снижен. В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления способ включает в себя первую фазу введения, в которой дозу молекулы вводят пациенту каждый первый установленный период. Первый установленный период составляет от двух до четырех дней. Предпочтительно первый установленный период составляет приблизительно три дня. Продолжительность первой фазы введения составляет от десяти до тридцати дней. Предпочтительно продолжительность первой фазы должна составлять приблизительно восемнадцать дней. Предпочтительно, способ включает в себя вторую фазу введения, которая следует за первой фазой введения. Во второй фазе дозу молекулы вводят однократно каждый второй установленный период. Второй установленный период составляет от одного до трех месяцев. Более предпочтительно, второй установленный период составляет приблизительно два месяца. Продолжительность второй фазы составляет от четырех до восьми месяцев. Более предпочтительно, продолжительность второй фазы должна быть приблизительно восемь месяцев. Предпочтительно каждая единичная доза составляет от 0,5 до 4,0 мг, более предпочтительно от 0,5 до 3,6, еще более предпочтительно от 0,5 до 3,0 мг. Предпочтительно способ включает в себя фазу предварительной обработки, предшествующую первой фазе введения с целью идентификации пациентов с гиперчувствительностью немедленного типа(ITH) или гиперчувствительностью замедленного типа (DTH). Фаза предварительной обработки ранее была описана подробно (Buzzi S, Rubboli D, Buzzi G, et al. (2004). CRM197 (non-toxic diphtheria toxin):effects on advanced cancer patients. Cancer Immunol Immunother 53: 1041-1048). Состояние ITH обнаруживается при развитии зуда и эритематозных реакций в местах инъекций в течение нескольких минут после введения белка, и когда уровень IgE составляет выше 500 нг/мл. Состояние DTH обнаруживается при развитии зуда и эритематозных реакций в местах инъекций в течение 24 ч после введения белка. Полная ссылка дана в настоящем описании к содержанию ссылок (статей, пособий и т.д.), процитированных выше с целью полного описания. Дополнительные характеристики настоящего изобретения будут очевидны из описания, содержащего далее всего лишь иллюстративные и неограничивающие примеры. В частности, следующие примеры иллюстрируют то, как применение определенной выше белковой молекулы неожиданно вызывает крайне важное уменьшение атеросклеротических бляшек и, следовательно, улучшение связанных с ними патологических состояний. Следующие примеры также демонстрируют, что определенная выше белковая молекула имеет крайне низкую токсичность (как уже показаноCRM197 разводили до достижения концентрации 3,0 мг/мл в стерильном фосфатном буфере (10 мМ фосфатно-натриевый буфер, рН 7,2), содержащем 10% сахарозу в качестве стабилизатора. Конечный продукт разливали аликвотами в апирогенные флаконы и хранили при -20 С. Пример 2. Мужчина в возрасте 68 лет, с 55% стенозом (ультразвуковое исследование) правой внутренней сонной артерии, получал лечение дозой 3,5 мг CRM197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, подобно первым, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев. Восемнадцать месяцев спустя ультразвуковое цветное допплеровское исследование подтвердило 27% уменьшение первоначального стеноза (все случаи стеноза сонной артерии, цитируемые в настоящем описании, были выявлены и контролировались с помощью ультразвукового прибора, всегда используемого одним и тем же лечащим врачом). Пример 3. Мужчина в возрасте 74 лет с 40% стенозом (NASCET) правой внутренней сонной артерии (смешанная бляшка) и 67,8% стенозом общей левой сонной артерии (мягкая бляшка) получал лечение дозой 3,5 мг CRM197, полученной как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз (в левой внутренней сонной артерии и правой общей сонной артерии было показано только утолщение интимы). Следующую дозу, как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, шесть раз. У пациента была гуморальная иммунная реакция и умеренная гиперчувствительность замедленного типа на дифтерийный токсин иCRM197. После лечения единственным побочным эффектом, проявившимся у пациента, было развитие зудящей эритемы в местах инъекций. После лечения пациента проверяли с равными промежутками времени в течение 58 месяцев. Через 14 месяцев после начала лечения наблюдалось 8% уменьшение стеноза левой общей сонной артерии. Через 25 месяцев после начала лечения наблюдалось 15% уменьшение стеноза левой общей сонной артерии. Через 58 месяцев после начала лечения наблюдалось 71,5% уменьшение стеноза правой внутренней сонной артерии и 93,3% уменьшение стеноза левой общей сонной артерии. Фиг. 1 относится к ультразвуковому исследованию левой общей сонной артерии, проведенному до исследования. Эта ультразвуковая картина позволила определить общую площадь сечения артерии 0,59 см 2, окружность целого сечения 2,8 см, площадь свободного кровотока (просвета) 0,19 см 2, процент свободной площади (просвета) 32,2% и процент площади стеноза 67,8%. Фиг. 2 относится к ультразвуковому исследованию левой общей сонной артерии, проведенному через 58 месяцев после лечения. Эта ультразвуковая картина позволяет определить общую площадь сечения артерии 40,62 мм 2, площадь свободного кровотока (просвета) 38,68 мм 2, процент свободной площади(просвета) 95,5% и процент площади стеноза 4,5%. Пример 4. Женщина в возрасте 74 лет с 65% стенозом (NASCET) правой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) и 40% стенозом (NASCET) левой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) получала лечение дозой 1,7 мг CRM197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, как и первые, вводили каждые два месяца, в течение шести месяцев. У пациентки не было иммунокомпетентности в отношении дифтерийного токсина и CRM197. Через восемь месяцев после начала лечения наблюдалось 46% уменьшение стеноза правой внутренней сонной артерии и 50% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии. Пример 5. Мужчина в возрасте 79 лет с 59% стенозом (NASCET) правой внутренней сонной артерии и 20% стенозом (NASCET) левой внутренней сонной артерии (мягкая бляшка и твердая бляшка, соответственно) получал лечение дозой 1,7 мг CRM197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев. У пациента не было иммунокомпетентности в отношении дифтерийного токсина и CRM197. Через восемь месяцев после начала лечения наблюдалось 90% уменьшение стеноза правой внутренней сонной артерии и 30% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии. Пример 6. Женщина в возрасте 65 лет с 60% стенозом (NASCET) правой внутренней сонной артерии и 55% стенозом (NASCET) левой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) получала лечение дозой 1,7 мг CRM197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу,как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев. У пациентки не было показано иммунокомпетентности в отношении дифтерийного токсина иCRM197. Через шестьдесят месяцев после начала лечения наблюдалось 30% уменьшение стеноза внутренней правой сонной артерии и 25% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии. Пример 7. Женщина в возрасте 78 лет с 60% стенозом (NASCET) правой внутренней сонной артерии и 40%-4 015863 стенозом (NASCET) левой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) получал лечение дозой 3,5 мг CRM197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу,как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев. У пациентки была сильная гуморальная иммунная реакция на дифтерийный токсин и CRM197. Через шестьдесят месяцев после начала лечения наблюдалась 40% уменьшение стеноза внутренней правой сонной артерии и 30% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения атеросклероза у млекопитающих. 2. Применение по п.1, где молекула идентична по меньшей мере на 95% последовательностиCRM197. 3. Применение по п.2, где молекула идентична по меньшей мере на 97% последовательностиCRM197. 4. Применение по п.3, где молекула идентична по меньшей мере на 98% последовательностиCRM197. 5. Применение по п.4, где молекула идентична по меньшей мере на 99% последовательностиCRM197. 6. Применение по любому из предыдущих пунктов, где в том случае, когда молекула и CRM197 имеют одно или более различных положений по меньшей мере одно из этих различных положений представляет собой гомологичное положение. 7. Применение по п.6, где все различные положения являются гомологичными. 8. Применение по п.5, в котором молекула представляет собой CRM197. 9. Применение по любому из предыдущих пунктов, где молекула содержит первый цистеин в положении 186 и второй цистеин в положении 201; первый и второй цистеин соединены вместе первым дисульфидным мостиком. 10. Применение по любому из предыдущих пунктов, где молекула содержит третий и четвертый цистеин в положении 461 и 471 соответственно, соединенные вместе вторым дисульфидным мостиком. 11. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения атеросклероза у млекопитающих, причем белковая молекула обладает способностью прикрепляться к HB-EGF в жестких условиях и стимулировать ответ иммунной системы таким образом, чтобы притягивать антитела и/или лейкоциты. 12. Применение по п.11, в котором молекула определена в соответствии с одним из пп.1-10. 13. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики апоплексии у млекопитающих. 14. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики инфаркта у млекопитающих. 15. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики патологических состояний коронарных артерий у млекопитающих. 16. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики некроза у млекопитающих. 17. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики ишемии. 18. Применение по одному из пп.13-17, где белковая молекула определена в соответствии с одним из пп.2-12. 19. Способ лечения атеросклероза у млекопитающих, причем способ предусматривает введение-5 015863 указанным млекопитающим эффективной дозы белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52. 20. Способ по п.19, где белковая молекула определена в соответствии с одним из пп.2-12. 21. Способ лечения патологического состояния у млекопитающего, выбранного из апоплексии, патологий коронарных артерий, некроза, ишемии, предусматривающий введение указанному млекопитающему эффективной дозы белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности CRM197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52. 22. Способ по п.21, где белковая молекула определена в соответствии с одним из пп.2-12. 23. Способ по п.19 или 21, где молекулу вводят путем подкожной инъекции. 24. Способ по одному из пп.19-23, причем указанный способ включает в себя первую фазу введения, где дозу молекулы вводят пациенту каждый первый установленный период с начальной продолжительностью от десяти до тридцати дней, причем первый установленный период составляет от двух до четырех дней. 25. Способ по п.24, где продолжительность первой фазы введения составляет приблизительно восемнадцать дней. 26. Способ по п.24 или 25, включающий в себя вторую фазу введения, где дозу молекулы вводят однократно каждый второй установленный период, причем второй установленный период составляет от одного до трех месяцев, а продолжительность второй фазы введения составляет от четырех до восьми месяцев. 27. Способ по любому из пп.24-26, где доза составляет от 0,5 до 4,0 мг. 28. Способ по п.27, где доза составляет от 0,5 до 3,0 мг.