Бензолсульфонатная соль (2s, 4s)-1-циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1- диметил)этиламино]ацетилпирролидина

007613 Настоящее изобретение относится к бензолсульфонатным солям производных 4-фтор-2-цианопирролидина. Дипептидилпептидаза-IV (ДПП IV), представитель сериновой протеазы, широко распространена в тканях (например, почках, печени) и плазме и участвует в метаболизме различных физиологически активных пептидов. Соединение, известное как ингибитор ДПП IV, является (2S,4S)-2-циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1 диметил)этиламино]ацетилпирролидином (WO 02/38541). Однако в свободной форме это соединение имеет низкую стабильность в твердом состоянии, и его соли с неорганическими или органическими кислотами, описанные в заявке, также имеют недостатки с точки зрения низкой стабильности в твердом состоянии, низкой стабильности в условиях влажности, трудности их синтеза и т.п. Целью настоящего изобретения является получение производных 4-фтор-2-цианопирролидина, которые имеют отличную активность ингибирования ДПП IV, а также физические свойства (например,стабильность), необходимые для фармацевтических препаратов. Для достижения указанной выше цели авторы настоящего изобретения провели различные исследования производных 4-фтор-2-цианопирролидина и таким образом обнаружили, что предпочтительные стабильные соединения могут быть получены в результате превращения производных в солевую форму путем взаимодействия с бензолсульфоновой кислотой. Это открытие привело к осуществлению настоящего изобретения. А именно, настоящее изобретение направлено на бензолсульфонатную соль (2S,4S)-2-циано-4 фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил)этиламино]ацетилпирролидина, представленную формулой [I]: Бензолсульфонатная соль настоящего изобретения может быть получена следующим образом:(2S,4S)-2-циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил)этиламино]ацетилпирролидин, полученный, как описано в документе WO 02/38541, растворяют в подходящем растворителе и смешивают с бензолсульфоновой кислотой или ее гидратом, напрямую или в растворенном виде, с последующей фильтрацией для сбора полученного осадка как целевого продукта, после добавления слабого растворителя, если необходимо. При применении описанной выше процедуры можно легко получить соединение настоящего изобретения в виде однородных кристаллов, с превосходной кристалличностью по сравнению с другими солями композиции (например, тозилатной солью). Также можно было получить более стабильные композиции с точки зрения стабильности при смешении с компонентами препарата, обычно используемыми для составления фармацевтических препаратов. Соединение настоящего изобретения может ингибировать дипептидилпептидазу-IV in vivo, усиливая таким образом активность инсулина и улучшая метаболизм глюкозы. Соединение настоящего изобретения может также вносить вклад в ингибирование метаболизма нейропептида Y, в ингибирование активации Т-клеток,в ингибирование прилипания раковых клеток к эндотелию и в предотвращение входа вируса ВИЧ в лимфоциты. Следовательно, настоящее изобретение обеспечивает такой фармацевтический препарат для профилактики или лечения заболеваний или состояний, которые можно облегчить ингибированием дипептидилпептидазы-IV, как, например, сахарный диабет (особенно II-го типа), иммунные заболевания, артрит, ожирение, остеопороз, состояния нарушенной толерантности к глюкозе, доброкачественная гиперплазия предстательной железы и кожные болезни. Примеры фармацевтических препаратов для иммунных заболеваний включают иммунодепрессанты для применения в трансплантации тканей, например ингибиторы высвобождения цитокинов для различных аутоиммунных заболеваний, таких как воспалительный энтерит, рассеянный склероз и хронический ревматоидный артрит (РА), а также агенты, полезные для профилактики или лечения СПИДА путем блокирования входа ВИЧ в Т-клетки и агенты для предотвращения метастаза, особенно метастазов опухолей груди и простаты в легкие. Фармацевтический препарат настоящего изобретения может вводиться систематически или топически оральным или парантеральным путем (например, внутриректально, подкожно, внутримускульно,внутривенно, чрескожно). Для применения в качестве фармацевтического препарата соединение настоящего изобретения может быть составлено в любой желаемой форме дозировки, выбранной из твердых композиций, жидких композиций и других композиций, какие соответствуют намеченной цели. Фармацевтический препарат настоящего изобретения может быть приготовлен смешиванием соединения настоящего изобретения с фармацевтически приемлемым носителем(ями). Более точно, к соединению настоящего изобретения могут быть добавлены обычно используемые наполнители, сухие разбавители, вяжущие средства, разрыхлители, покрывающие агенты, подсластители, регуляторы рН, солюбилизаторы, водные или неводные растворители и так далее, и затем, с использованием стандартных методов, указанная смесь формируется в таблетки, пилюли, капсулы, гранулы, порошки, растворы, эмульсии, суспензии, инъекции и т.д. Также соединение настоящего изобретения до его приведения в готовую форму может быть модифицировано, чтобы получить соединение, например, с -, - или -циклодекстрином или метилированным циклодекстрином.-1 007613 Доза соединения настоящего изобретения будет меняться в зависимости от подлежащих лечению заболеваний или симптомов, веса тела, возраста, пола, способа приема и т.д. Доза для взрослого при оральном приеме предпочтительно составляет от примерно 1 до примерно 1000 мг/человек/сутки, более предпочтительно от примерно 10 до примерно 200 мг/человек/сутки, задаваемая как разовая доза или в разделенных дозах на день. Далее настоящее изобретение будет проиллюстрировано следующими ссылочными примерами,примерами и примерами испытаний. Ссылочный пример 1. Синтез гидрохлорида (2S,4S)-2-циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил) этиламино]ацетилпирролидина. К суспензии (2S,4S)-2-циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил)этиламино]ацетилпирролидина(5,00 г) в метаноле (75 мл) добавляли соляную кислоту концентрации 4 М (в этилацетате, 6,17 мл) с получением прозрачного раствора. К этому раствору добавляли диизопропиловый эфир (300 мл) и перемешивали с последующей фильтрацией для сбора осажденного порошка, являющегося целевым соединением(0,15 г) в метаноле (0,92 мл) добавляли раствор метансульфоновой кислоты (0,042 мл) в метаноле (0,08 мл) с получением прозрачного раствора. Этот раствор добавляли по каплям в диизопропиловый эфир (5 мл) при перемешивании. Осажденный порошок собирали фильтрацией с получением целевого соединения(1) (2S,4S)-2-Циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил)этиламино]ацетилпирролидин. 2-Амино-2-метил-1-пропанол (0,54 г) растворяли в смешанном растворителе, состоящем из тетрагидрофурана (7,5 мл) и этанола (2,5 мл). К этому раствору при охлаждении на льду добавляли (2S,4S)-1 бромацетил-2-циано-4-фторпирролидин (0,71 г) и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Выпавшие в осадок кристаллы собирали фильтрацией с получением целевого соединения(0,36 г) в виде бесцветного твердого вещества. Далее, фильтрат также очищали на хроматографической колонке с силикагелем (проявляющий растворитель; хлороформ:метанол:25%-ный водный аммиак=300:10:1) с получением целевого соединения (0,22 г).(2S,4S)-2-Циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил)этиламино]ацетилпирролидин (20 г) при нагревании растворяли в метаноле (300 мл). После добавления раствора моногидрата бензолсульфоновой кислоты (15,2 г) в метаноле (30 мл) из этого раствора выпадал в осадок порошок. После добавления к этой суспензии диизопропилового эфира (330 мл) порошок собирали фильтрацией с получением целевого соединения (31,5 г) в виде бесцветного порошка. Температура плавления: 220-221 С. Пример испытаний 1. Проверка на изменение веса в условиях увлажнения. Каждый анализируемый образец (10,0 мг) дозировали в микротрубку (диаметр: 8 мм, длина: 50 мм) и оставляли стоять в испарителе, содержащем воду, таким образом, чтобы не допустить контакта трубки с водой. Испаритель поддерживался при комнатной температуре. Велось наблюдение за состоянием анализируемых образцов, и измеряли их вес во времени. Изменения в весе выражали в процентах (%). Изменения в весе и состоянии. Таблица 1-2 007613 Обе соли, гидрохлорид ссылочного примера 1 и метансульфонат ссылочного примера 2, поглощали влагу и таким образом растворялись, в то время как бензолсульфонатная соль примера 1 показала отсутствие изменений в весе и растворимости. Пример испытания 2. Проверка стабильности в твердом состоянии. Каждый анализируемый образец (около 1 мг) точно дозировали и помещали в пробирку с завинчивающейся крышкой, покрытую алюминиевой фольгой для защиты от света, которую запаивали в условиях нагрева (70 С) или открывали в условиях нагрева и увлажнения (40 С, 75% отн. влажность). Оставшуюся долю каждого медикамента измеряли следующим образом. По окончании заданного периода хранения в пробирки добавляли 10 мл подвижной в ВЭЖХ фазы для растворения анализируемых образцов,а затем подавали для количественной оценки на ВЭЖХ. Для расчета оставшейся доли медикамента результаты сравнивали по площади с начальными значениями, полученными до нагревания или перед нагреванием и увлажнением. Условия ВЭЖХ. Колонка: CAPCELL РАК UG120, 5 мкм, 4,6 х 150 мм (SHISEIDO). Температура в колонке: 40 С. Детектирование: УФ-абсорбциометр (длина волны детектирования: 210 нм). Скорость течения: 1,0 мл/мин. Объем впрыска: 10 мкл. Подвижная фаза: вода/ацетонитрил/фосфорная кислота/ДСН (700:300:1:2). Оставшаяся доля медикаментов. Таблица 2 Соли гидрохлорид ссылочного примера 1 и метансульфонат ссылочного примера 2 показали оставшееся процентное содержание 97% или менее при всех условиях, в то время как бензолсульфонатная соль примера 1 имела оставшееся процентное содержание 99% или выше при всех условиях. Пример испытания 3. Проверка на совместимость с добавками. Эта проверка была проведена согласно отчету Serajuddin А.Т.М. et al. (J.Pharm.Sci., 88, 696-704,1999). Лекарственную субстанцию и добавки дозировали в пробирку с завинчивающейся крышкой согласно рецепту А (10 мг лекарственной субстанции, 68 мг кристаллической целлюлозы, 2 мг стеарата магния) или рецепту В (10 мг лекарственной субстанции, 68 мг лактозы, 2 мг гидрогенизированного жира) и перемешивали в роторной мешалке (MIX-ROTAR VMR-5, Iuchi Seieido Co., Ltd., Япония) в течение 1 ч. Далее смесь согласно рецептам А или В перемешивали, используя вихревой смеситель (TOUCHMIXER MT-31, Yamato Scientific Co., Ltd., Япония), при условии, что в рецепт А не добавляли никаких дополнительных компонентов, а в рецепт В добавляли 16 мкл очищенной воды. Смеси выдерживали при 65 С в течение 1 недели в герметичных и полностью защищенных от света условиях и затем измеряли содержание лекарства после хранения для расчета оставшегося процентного содержания каждого лекарства в каждом рецепте. Содержание лекарства определяли следующим образом. В находившиеся на хранении образцы добавляли 10 мл 50%-ного метанола, облучали ультразвуком в течение 30 мин (используя BRANSONIC 5200, BRANSON Co.) для диспергирования и экстрагирования лекарственных веществ и затем встряхивали в шейкере в течение 1 ч. Полученные в результате растворы переливали в 50-миллилитровые мерные колбы, а растворы, оставшиеся в пробирках, также собирали путем промывания 50%-ным метанолом с последующим доливом до 50 мл 50%-ного метанола. Далее колбы облучали ультразвуком еще 30 мин. Каждый из полученных в результате растворов фильтровали через мембранный фильтр с порами 0,45 мкм,из каждого отбирали по 5 мл и доливали 50%-ным метанолом в 10-миллилитровую мерную колбу для использования как пробный раствор, а затем оценивали количественно по ВЭЖХ. Условия ВЭЖХ были теми же, что и примере испытания 2.-3 007613 Остаточное процентное содержание лекарственного препарата. В случае рецепта А остаточное содержание медикамента понизилось до 91,6% в метансульфонатной соли ссылочного примера 2, в то время как в остаточном содержании бензолсульфонатной соли примера 1 почти не наблюдалось уменьшения. Аналогично, даже в случае рецепта В, где метансульфонатная соль показала снижение содержания до 74,5%, бензолсульфонатная соль сохраняла остаточное содержание на уровне 90% или выше. Было подтверждено, что соединение примера 1 устойчиво к ухудшению, даже когда в него добавляли компоненты рецепта, используемые для составления фармацевтических препаратов, таким образом создается возможность получить готовые композиции, которые достаточно стабильны как фармацевтические препараты. Промышленная применимость Соединение настоящего изобретения может быть легко получено в виде высокочистого однородного кристалла с превосходной стабильностью в условиях повышенной влажности. Этот факт устраняет такую опасность, как прилипание порошка к машинам, и снижает сыпучесть во время приготовления, и обеспечивает стабильную поставку фармацевтических препаратов, содержащих данное соединение. Благодаря своей превосходной стабильности в твердом состоянии соединение настоящего изобретения также не имеет таких проблем, как изменение вида и трансформация кристаллической структуры, устойчиво к экстремальным условиям, требуемым для рецептов фармацевтических препаратов, и также гарантирует долговременное сохранение качества, даже когда в него добавляют компоненты для приготовления лекарственной формы. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Соль бензолсульфонат (2S,4S)-2-циано-4-фтор-1-[(2-гидрокси-1,1-диметил)этиламино] ацетилпирролидина.