Применение 2-(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты для лечения или предотвращения рестеноза

1 Область изобретения Изобретение относится к новому применению 2-(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты в качестве терапевтического средства для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарными вмешательствами. Более конкретно, изобретение относится к новому применению 2-(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты (далее обозначается как Траниласт), представленной формулой (I) или ее фармацевтически приемлемой соли для изготовления фармацевтической композиции для лечения или предотвращения рестеноза,ассоциированного с коронарными вмешательствами. Примерами фармацевтически приемлемых солей являются неорганические соли, такие как соли натрия или кальция, или органические соли, образованные с аминами, такими как морфолин, пиперидин, аргинин и т.д. В качестве примеров коронарного вмешательства по настоящему изобретению можно привести Чрезкожную Транслюминальную Коронарную Ангиопластику (РТСА), Направленную Коронарную Атерэктомию (DCA) и Стент. Предпосылки изобретения 1. Область техники, к которой относится изобретение Коронарное вмешательство представляет хирургический подход к лечению ишемических болезней сердца, таких как стенокардия и инфаркт миокарда. Технологически коронарное вмешательство включает реваскуляризацию стенозированных поражений в коронарной артерии с помощью баллонного катетера, катетера для атерэктомии и т.п. Следствием таких коронарных вмешательств часто бывает рестеноз,вызванный повреждением стенок сосудов. 2. Описание предшествующего уровня техникиTamai et al. обнаружили, что Траниласт снижает число случаев рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством и предложили применение 2-(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты в качестве терапевтического средства для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством (Европейский патент 558 518, Патент США 5 385 935). Указанное применение включает лечение Траниластом или его фармацевтически приемлемой солью с ежедневной дозой приема около 300-1000 мг,предпочтительно около 300-600 мг, на протяжении периода лечения, по меньшей мере, в течение 3 месяцев после коронарного вмешательства. Однако обнаружено, что лечение или предотвращение рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством, можно осуществлять и при других дозах и сроках приема лекар 001931 2 ственного средства, нежели как это указано в ЕР-588 518-В и U.S. 5 385 935. Краткое описание изобретения Данное изобретение обеспечивает клинически более привлекательное использование 2(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты в качестве терапевтического средства для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством. Другие технические результаты, характеристики и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего далее описания и примеров. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение направлено на улучшенное применение 2-(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты в качестве терапевтического средства для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарными вмешательствами.M.Nobuyoshi проводил патологические исследования на коронарных сосудах 7 пациентов,которые умерли в течение 3 месяцев после коронарного вмешательства (РТСА), и сообщает,что наблюдалась избыточная пролиферация клеток гладких мышц сосудов (далее обозначены как VSMC), но избыточного продуцирования коллагена не наблюдалось (РТСА, страницы 1521, published by IGAKUSHOIN, 1988). В этом сообщении указывается, что пролиферацияVSMC играет ключевую роль в рестенозе, ассоциированном с коронарными вмешательствами. В процессе исследований, предшествовавших созданию настоящего изобретения было сделано заключение, что концентрация лекарства в плазме человека, которая предотвращает пролиферацию VSMC, является желаемым способом лечения или предотвращения рестеноза,ассоциированного с коронарным вмешательством. Это было подтверждено клиническими испытаниями. Было обнаружено, что Траниласт в значительной степени препятствует пролиферации человеческих VSMC при концентрации 100 мкМ в плазме человека (Fukuyama et al., Canadian Journal of Physiology and Pharmacology,vol.74,1, pp.80-84, 1996). Было показано, что пролиферацию VSMC в организме человека можно предотвратить путем введения Траниласта при концентрации в плазме около 100 мкМ. Были получены данные клинических исследований, в которых Траниласт вводили трем здоровым взрослым пациентам в дозе 2,5 мг/кг три раза в день в течение пяти дней. Было подтверждено, что когда Траниласт вводили в дозе 2,5 мг/кг три раза в день, концентрация Траниласта в плазме достигала стабильного уровня около 18,7-27,4 мкг/мл (около 57-84 мкМ) на второй день после первого введения. Таким образом, было показано, что рестеноз, ассоциированный с коронарными вмешательствами можно лечить или предотвратить 3 при помощи введения Траниласта таким образом, чтобы поддерживать его концентрацию в плазме около 100 мкМ, что является эффективным для предотвращения пролиферации человеческих VSMC. Например, пациентам, весящим 60 кг, Траниласт вводили в дозе около 500790 мг в день, чтобы получить концентрацию в плазме около 100 мкМ, что необходимо для предотвращения или лечения рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством. Поскольку абсорбция Траниласта меняется в зависимости от веса, пола, и возраста пациентов, тяжести состояния, подлежащего лечению и т.п., предпочтительно определить суточную дозу Траниласта с тем, чтобы поддерживать его концентрацию в плазме около 100 мкМ с учетом состояния пациентов. Концентрация в плазме,препятствующая пролиферации VSMC является различной в зависимости от природы пациентов. Поэтому, концентрация в плазме, которая препятствует пролиферации VSMC, т.е. 100 мкМ, должна служить критерием для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством. Были также получены данные клинических исследований пациентов, каждому из которых вводили дозу 600 мг Траниласта в сутки в течение периода от 8 недель до 3 месяцев после коронарного вмешательства (РТСА), и было подтверждено, что случаи рестеноза после коронарного вмешательства (РТСА) при приеме лекарства составили менее 20%. При введении пациентам плацебо случаи рестеноза составили около 50%.Ueda et al. проводили патологические исследования с помощью ангиографии на кардиоваскулярных сосудах после коронарного вмешательства и сообщают, что значительная пролиферация VSMC возникает примерно в течение 12 дней после коронарного вмешательства (Kokyu to Junkan (RESPIRATION AND CIRCULATION), vol. 43,3, pp.257-262, 1995).Tamai et al. предложили введение Траниласта с суточной дозой 300-1000 мг непрерывно в течение 3-6 месяцев после коронарного вмешательства. Учитывая то, что пролиферацияVSMC является критическим фактором в возникновении рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством, и то, что пролиферация VSMC возникает на ранней стадии после коронарного вмешательства, способ, предложенный Tamai не является единственным протоколом для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарным вмешательством. Данные клинических исследований,о которых говорилось выше, показывают, что Траниласт нужно вводить после коронарного вмешательства способом, который препятствует чрезмерной пролиферации VSMC. Необязательно вводить Траниласт в течение более 3 месяцев, поскольку в соответствии с настоящим изобретением более короткий период лечения явля 001931 4 ется эффективным для предотвращения или лечения рестеноза. Траниласт и его фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению являются известными соединениями и их можно получить стандартными способами, такими как способ, описанный в патенте США 4 623 724. При терапевтическом использовании Траниласта или его фармацевтически приемлемой соли его можно вводить в виде приемлемых дозируемых форм, таких как порошок, гранулы,таблетки, капсулы, сухие сиропы, пластыри,суппозитории, растворы для инъекций и тому подобное. Фармацевтическую композицию Траниласта можно получить путем смешивания с различными носителями, такими как наполнители,дезинтеграторы, связующие, осветлители и т.п.,такие композиции готовят с использованием обычных методов формования и дозирования. Далее изобретение будет более подробно проиллюстрировано с помощью следующих примеров. Пример 1. Этот пример показывает действие Траниласта на пролиферацию и миграцию в культуре клеток гладких мышц сосудов человека(VSMC). А. Культура клеток. Клетки гладких мышц аорты новорожденного четвертого пассажа культивирования были получены от Kurabo (Osaka, Japan). Конфлюентные VSMC субкультивировали при соотношении деления потока 1:5 в DMEM, дополненной 10% FBS. VSMC использовали в рамках 5-10 пассажей и охарактеризовали как гладкомышечные в соответствии с морфологическими критериями и экспрессией гладкомышечного актина. В анализе микоплазмы клетки были негативными. В. Анализ клеточной пролиферации. Анализ клеточной пролиферации осуществляли путем подсчета количества клеток. Сначала VSMC высеивали с плотностью 3 х 103 клеток/см 2 в среде DMEM, дополненной 10% FBS в колбы для тканевой культуры площадью 25 см 2. На следующий день среду отбрасывали и к клеткам добавляли свежую DMEM (10% FBS),содержащую различные концентрации Траниласта. Через четыре дня после добавления Траниласта количество клеток определяли с помощью гемоцитометра. С. Измерение синтеза ДНК. Клетки выращивали до конфлюенции в 96 луночных пластинах для культуры тканей, и рост останавливали на 48 ч в не содержащей сыворотку среде, состоящей из DMEM, дополненной 5 мкг/мл инсулина, 5 мкг/мл трансферрина и 5 нг/мл селена (ITS). Среду DMEM-ITS использовали для поддержания VSMC в неактивном (латентном), но не в катаболическом состоянии, в состоянии, напоминающем состоя 5 ние здоровых клеток в нормальной стенке сосуда in vivo (Libby and O'Brien 1983). СредуDMEM-ITS затем удаляли и к латентным клеткам добавляли свежую DMEM, содержащую фактор роста. Затем клетки инкубировали в течение 20 ч в отсутствие или в присутствии Траниласта. Затем клетки инкубировали с [3 Н] тимидином (46 kBq/мл) в течение 2 ч в отсутствие или в присутствии Траниласта. Затем в каждую лунку добавляли ледяную 10%-ную трихлоруксусную кислоту, и пластины выдерживали при температуре 4 С в течение 10 мин. Нерастворимый в трихлоруксусной кислоте материал затем собирали на пластины Unifilter (GF/B 96, Packard Instrument, Meriden, Conn.) при помощи устройства для сбора клеток. Степень инкорпорации [3H] тимидина определяли при помощи сцинтилляционного счета. D. Анализ миграции Миграцию клеток анализировали модифицированным методом камеры Бойдена с использованием 96-луночной камеры Бойдена (Neuroprobe Inc., Cabin John, Md.) (Grotendorst et al. 1982). Хемоаттрактант (PDGF-BB) сначала разбавляли в DMEM с или без Траниласта, а затем загружали в нижние лунки камеры Бойдена. Затем лунки накрывали стандартным фильтром с размером пор 8 мкм (Nucleopore Corp., Pleasanton, Calif.), покрытым коллагеном типа 1. Суспензию клеток (1 х 104 клеток) в DMEM, содержащую 0,1%-ый альбумин бычьей сыворотки (BSA), с добавлением или без добавления Траниласта, затем загружали в верхние лунки камеры, после чего камеру инкубировали в течение 4 ч при 37 С в атмосфере 95% воздуха и 5% CO2. Непромигрировавшие клетки на верхней поверхности соскабливали. Фильтры фиксировали в метаноле и окрашивали при помощи красящего раствора Diff-Quick (InternationalReagent Corp., Kobe, Japan). Количество VSMC на поле при увеличении 400 х (HPF), которые мигрировали на нижнюю поверхность фильтров, затем определяли с помощью микроскопа. Было подсчитано 4 HPF на лунку, и значения усредняли. Е. Результаты(1) Действие Траниласта на пролиферацию человеческих VSMC. Траниласт значительно ингибировал пролиферацию человеческих(2) Действие Траниласта на синтез ДНК,индуцированный PDGF-BB, в латентных человеческих VSMC. Траниласт значительно ингибировал синтез ДНК в латентных человеческих VSMC, стимулированный 50 нг/мл PDGF-BB, при молярной концентрации 100 мкМ.(3) Действие Траниласта на индуцированную PDGF-BB миграцию в человеческих 6 Траниласт значительно ингибировал миграцию VSMC, вызванную 50 нг/мл PGGF/BB,при концентрации 100 мкМ. Пример 2. Этот пример демонстрирует период, достаточный для введения Траниласта для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с хирургическим вмешательством РТСА. Двести восемьдесят восемь пациентов со стенокардией или инфарктом миокарда, успешно перенесшие избирательный РТСА (включая повторный РТСА) на значительных стенозных поражениях, приняли участие в этом исследовании. Этих пациентов разделили на две группы,обе группы не имели сколь-либо значительных различий, что касается пола, возраста и веса; первая группа принимала плацебо (далее именуемая как Р группа), вторая группа принимала Траниласт с суточной дозой 600 мг (далее именуемая Т группа). Оба эти лекарства вводили непрерывно в течение 3 месяцев после РТСА. Коронарную ангиографию делали непосредственно перед и сразу же после РТСА и через 3 месяца (или в момент отмены лекарства), после завершения приема лекарства. Оценивали 256 поражений двухсот тридцати двух пациентов, у которых РТСА были успешными и которым не отменяли лечение. Каждое поражение оценивали по изменению стеноза с использованием следующей градации: Отсутствие рестеноза: утрата стенозированной области, расширенной при помощи РТСА, была менее 50% от достигнутого (потеря/достижение 50%). Рестеноз: утрата стенозированной области,расширенной за счет РТСА, была не менее 50% от достигнутого (потеря/достижение 50%). А. Исследуемые пациенты (для анализа эффективности исследовали 188 случаев). Характеристика пациента Пол Возраст В. Основные характеристики поражений (оцениваемых на эффективность лечения). Показатель Классификация РТСАI) Оценка рестеноза по поражению Характеристика пациента Пол Возраст В. Основные характеристики поражений (оцениваемых на эффективность лечения). Показатель(1) Оценка рестеноза по поражению Срок приема лекарства 8 недель Оценка 8 недельОценка(2) Оценка рестеноза пациентами Срок приема лекарства 8 недель Оценка 8 недельОценка ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение 2-(3,4-диметоксициннамоил)аминобензойной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли для лечения или предотвращения рестеноза, ассоциированного с коронарными вмешательствами, при этом продолжительность лечения составляет менее 3 месяцев после коронарного вмешательства и лечение включает введение суточной дозы, которая является достаточной для поддержания уровня концентрации Траниласта в плазме около 100 мкМ; при котором пролиферацию клеток гладких мышц сосудов человека предотвращают путем такого лечения. 2. Применение по п.1, при котором коронарное вмешательство представляет собой чреcкожную транслюминальную коронарную ангиопластику. 3. Применение по п.1, при котором коронарное вмешательство представляет собой направленную коронарную атерэктомию. 4. Применение по п.1, при котором коронарное вмешательство представляет собой стент.