Применение левосимендана или его солей для приготовления медикамента для лечения болезни альцгеймера и родственных расстройств или для защиты эндотелиальных и/или нервных клеток от аβ токсичности и способ лечения указанных заболеваний

ПРИМЕНЕНИЕ ЛЕВОСИМЕНДАНА ИЛИ ЕГО СОЛЕЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МЕДИКАМЕНТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА И РОДСТВЕННЫХ РАССТРОЙСТВ ИЛИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ И/ИЛИ НЕРВНЫХ КЛЕТОК ОТ А ТОКСИЧНОСТИ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ УКАЗАННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ(57) Изобретение имеет отношение к применению левосимендана или его солей для приготовления медикамента для лечения болезни Альцгеймера и родственных расстройств или для защиты эндотелиальных и/или нервных клеток от А токсичности, а также к способу лечения указанных заболеваний. В частности,изобретение касается использования левосимендана или его солей, которые отдельно или в комбинации(ях) могут эффективно модулировать функцию синапса и/или ангиогенез и/или ответ клетки на стресс. Область техники, к которой относится изобретение Изобретение имеет отношение к применению левосимендана или его солей для приготовления медикамента для лечения болезни Альцгеймера (БА) и родственных расстройств. В частности, настоящее изобретение касается использования указанных соединений, которые, отдельно или в комбинации(ях),могут эффективно модулировать функцию синапса, и/или ангиогенез, и/или реакцию (ответ) клетки на стресс. Предшествующий уровень техники БА представляет собой прототипную кортикальную деменцию (слабоумие), характеризующуюся нарушением памяти в сочетании с дисфазией (речевое нарушение, при котором наблюдается расстройство речи и способности понимать речь), диспраксией (затруднение координации и выполнения определенных целенаправленных движений и жестов при отсутствии моторных или сенсорных нарушений) и агнозией (способность узнавать предметы, людей, звуки, формы или запахи), связанными с поражением кортикальных ассоциативных зон. Кроме того, могут наблюдаться особенные симптомы, такие как спастический парапарез (слабость, затрагивающая нижние конечности) (1-4). Частота заболевания болезнью Альцгеймера значительно увеличивается с возрастом. В настоящее время БА является наиболее частой причиной деменции (слабоумия). Клинически она характеризуется общим упадком когнитивной функции, который развивается медленно и на терминальной стадии приковывает пациентов к постели, приводит к недержанию и зависимости от опекунского ухода. Смерть наступает в среднем через 9 лет после постановки диагноза (5). Рост заболеваемости болезнью Альцгеймера резко увеличивается с возрастом. Демографический прогноз, проведенный Организацией Объединенных Наций, полагает, что к 2050 году количество людей в возрасте старше 80 лет достигнет 370 млн. По имеющимся оценкам в настоящее время 50% людей старше 85 лет страдает БА. Следовательно, более чем 100 млн человек во всем мире будет страдать слабоумием через 50 лет. Огромное количество людей, нуждающихся в постоянном уходе и другом обслуживании, будет существенно затрагивать медицинские, денежные и человеческие ресурсы (6). Нарушение памяти является ранним признаком болезни и касается эпизодической памяти (память для ежедневных событий). Позднее болезнь затрагивает семантическую память (память для хранения значения слов и зрительных образов). В противоположность этому, оперативная память (кратковременная память, вовлекающая структуры и процессы, используемые для временного хранения и управления информацией) и процедурная память (бессознательная память, а именно долговременная память навыков и приемов) сохраняются долгое время. По мере прогрессирования болезни появляются дополнительные признаки нарушения речи, визуального восприятия и недостатка восприятия пространства, агнозии (нарушения процессов узнавания) и апраксии (нарушения целенаправленных движений). Классическая картина болезни Альцгеймера является достаточно характерной для установления болезни приблизительно в 80% случаев (7). Тем не менее, встречается клиническая разнородность, и это является важным не только для тактики клинического ведения, но требует привлечения дополнительных специальных методов лекарственного лечения функционально различающихся форм (8). Патологические признаки БА включают амилоидные бляшки, содержащие бета-амилоид (Абета),нейрофибриллярные клубки (NFT), содержащие тау-белок, и нарушение функций нейронов и синапсов и их утрату (9-11). В течение последнего десятилетия были предложены две основные гипотезы, касающиеся причин возникновения БА: "гипотеза амилоидного каскада", которая считает, что нейродегенеративный процесс представляет собой ряд событий, запускаемых неправильным преобразованием предшественника амилоидного белка (АРР) (12), и "гипотеза дегенерации цитоскелета нейронов" (13), которая предполагает, что запускающими событиями являются изменения цитоскелета. Самое широкое признание получила гипотеза амилоидного каскада развития БА (14-16) и исследователи главным образом сосредоточивают внимание на установлении механизмов, лежащих в основе токсичности, связанной с белками Абета. С другой стороны, Фарминдустрия уделяет намного меньше внимания тау-белку, чем амилоиду, вследствие и фундаментальных и практических соображений. Кроме того, изменение плотности синапсов является патологическим нарушением, которое лучше всего коррелирует с когнитивным нарушением, чем два других. Исследования показали, что, по-видимому, амилоидная патология прогрессирует особым, связанным с нейромедиатором образом, когда наиболее уязвимыми оказываются холинэргические окончания, затем глутаматергические окончания и, наконец, GABA-ергические окончания (11). Сущность изобретения Цель настоящего изобретения - предоставить новые терапевтические подходы для лечения БА и родственных нарушений. Изобретатели установили несколько лекарственных средств, которые, отдельно или в комбинации(ях), могут эффективно влиять на метаболические пути, связанные с БА, и представляют собой новые и эффективные методы лечения БА и родственных нарушений. Конкретно, изобретение имеет отношение к применению левосимендана или его соли для приготовления медикамента для лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения, выбираемого из сенильного (старческого) слабоумия типа Альцгеймера (SDAT), болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, сосудистой (микроинфарктной) деменции, умеренных когнитивных нарушений (MCI),-1 024465 возрастного нарушения памяти (AAMI) и проблем, связанных со старением, постцеребрального Паркинсонизма, бокового амиотрофического склероза (ALS), рассеянного склероза (MS) и синдрома Дауна. В частном случае изобретения левосимендан или его соль используется в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным агентом, выбранным из аминокапроновой кислоты, акампросата, амлодипина, баклофена, цинакалцета, фенолдопама, лефлуномида, фенформина, прилокаина, сульфизоксазола,тадалафила, тербинафина, циннаризина, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, этомидата и зонисамида или их солей, которые вводятся совместно, отдельно или последовательно. В другом частном случае указанный по меньшей мере один дополнительный агент выбран из аминокапроновой кислоты, баклофена, сульфизоксазола, тербинафина и зонисамида или их соли. Предпочтительно левосимендан или его соль составлены в композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Левосимендан или его соль вводятся пациенту многократно или левосимендан или его соль, дополнительный агент или его соль вводятся пациенту многократно. В одном из вариантов изобретения дополнительный агент или его соль составлены в композицию,содержащую фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. В другом варианте левосимендан или его соль, по меньшей мере один дополнительный агент или его соль составлены в одну и ту же композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. В его одном варианте изобретения предлагается применение композиции, содержащей левосимендан или его соль для приготовления медикамента защиты эндотелиальных и/или нервных клеток от Атоксичности. И наконец, изобретение касается способа лечения болезни Альцгеймера у млекопитающего, включающего введение указанному субъекту эффективного количества левосимендана, его соли(ей) или его состава(ов) с замедленным высвобождением. Краткое описание чертежей Фиг. 1. Влияние отобранных лекарственных средств на рост нейритов в первичной культуре корковых нейронов крыс при интоксикации бета-амилоидом.: р 0.00001: значимое различие с носителем. : р 0.05; : р 0.0001: значимое отличие от Абета 25-35. Двухсторонний критерий Стьюдента. A25-35 20 мкМ дает значительную интоксикацию, больше 25%, по сравнению с нейронами,обработанными носителем. Такая интоксикация значимо предотвращается или с помощью акампросата(фиг. 1 А) или зонисамида (фиг. 1 В). Фиг. 2. Влияние фенформина на прорастание нейритов в первичной культуре корковых нейронов крыс при интоксикации бета-амилоидом.: р 0.01: значимое различие с носителем. : р 0.001: значимое отличие от А 25-35. Двухсторонний критерий Стьюдента. A25-35 20 мкМ дает значительную интоксикацию, больше 25%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Такая интоксикация значимо предотвращается фенформином. Фиг. 3. Защитное действие отобранных лекарственных средств от токсичности бета-амилоидного пептида на высвобождение LDH из эндотелиальных клеток мозга крыс. : р 0.05: достоверное отличие от носителя. : р 0.01; : р 0.0001; : р 0.00001: достоверное различие с А 25-35. Двухсторонний критерий Стьюдента. А 25-35 30 мкМ дает умеренную, значимую интоксикацию (фиг. 3 А-D). Эта интоксикация значимо предотвращается лефлуномидом (фиг. 3 А), тербинафином (фиг. 3 В), сульфизоксазолом(фиг. 3 С) или баклофеном (-) (фиг. 3D). Кроме того, лефлуномид и тербинафин не только предотвращают вредное воздействие амилоида, но также уменьшают самопроизвольную гибель клеток в культуральной среде. Фиг. 4. Влияние отобранных лекарственных средств на жизнеспособность NGFдифференцированных РС 12 после интоксикации бета-амилоидом.: р 0.00001: значимое отличие от носителя. : р 0.01; : р 0.0001: значимое отличие от А 25-35. Двухсторонний критерий Стьюдента. А 25-35 10 мкМ вызывает существенную интоксикацию, больше 25%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем (фиг. 4 А и 4 В). Эта интоксикация значимо предотвращается прилокаином (фиг. 4 А) или амлодипином (фиг. 4 В). Фиг. 5. Влияние отобранных лекарственных средств на высвобождение LDH в первичной культуре корковых нейронов крыс, подвергнутых интоксикации бета-амилоидом.: р 0.000001: значимое отличие от носителя. : р 0.05; : р 0.001: значимое отличие от А 25-35. Двухсторонний критерий Стьюдента. А 25-35 20 мкМ вызывает существенную интоксикацию, больше 25%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем (фиг. 5 А и В). Эту интоксикацию значимо предотвращал или зонисамид(фиг. 5 А), или сульфизоксазол (фиг. 5 В), или лефлуномид (фиг. 5 С). Фиг. 6. Влияние предварительной обработки отобранных лекарственных средств против повреждения человеческим А 1-42 в НВМЕС. А) Подтверждение соответствия экспериментальной модели, использованной для скрининга лекарственных средств: 1 ч предварительной обработки VEGF при концентрации 10 нМ достоверно защищает капиллярную сеть от амилоидного повреждения (+78% капиллярной сети по сравнению с амилоидной интоксикацией). : р 0.05: значимое отличие от контроля (нет инток-2 024465 сикации) : р 0.05: значимое отличие от амилоидной интоксикации (ANOVA + тест Dunett Post-Hoc). Интоксикация значимо предотвращается сульфизоксазолом, левосименданом, тербинафином, баклофеном, аминокапроновой кислотой, сулодексидом или фенолдопамом, как показано в дозозависимых экспериментах, соответственно на фиг. 6 В, 6 С, 6D, 6 Е, 6F, 6G, 6 Н. : р 0.05: значимое отличие от следующей дозы : р 0.05: значимое отличие от амилоидной интоксикации (ANOVA + тест Dunett Post-Hoc). Фиг. 7. Влияние предварительной обработки отобранных лекарственных средств на высвобождениеLDH при токсичности человеческого А 1-42 на первичной культуре корковых клеток крыс. А) Подтверждение соответствия экспериментальной модели, использованной для скрининга лекарственных средств: предварительная обработка 1 ч BDNF (50 нг/мл) достоверно защищает нейроны от амилоидного повреждения (-62%), что считается положительным контролем для нейропротекции.: р 0.05: достоверное различие с контролем (нет интоксикации) : р 0.05: достоверное отличие от амилоидной интоксикации(ANOVA + тест Dunett Post-Hoc). Во всех экспериментах A1-42 вызывает значительную интоксикацию по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Интоксикация значительно предотвращается баклофеном (-86%) (В), сульфизоксазолом (-42%) (С), левосименданом (-133%) (D), этомидатом (-50%) (Е),карбеноксолоном (-39%) (F) и циннаризином (-50%) (G), для всех экспериментов, : р 0.05: значимо отличается от А 1-42 интоксикации (ANOVA + тест Dunett Post-Hoc). Фиг. 8. Влияние комбинированного лечения сульфизоксазолом и левосименданом на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС, подвергнутых токсическому действию бета-амилоида. : р 0.05,значимое различие с А 1-42. : р 0.05, значимое отличие от носителя. ANOVA + тест Bunett Post-Hoc. Агрегированный человеческий амилоидный пептид (A1-42 2,5 мкМ) оказывает значимую интоксикацию,больше 40%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Эта интоксикация значимо предотвращается комбинацией сульфизоксазола и левосимендана (А) тогда как, в тех же самых концентрациях,левосимендан (В) и сульфизоксазол (С) по отдельности не оказывают существенного влияния на интоксикацию. Фиг. 9. Эффект комбинированного лечения сульфизоксазолом и тербинафином на общую длину капиллярной сети в НВМЕС культурах, подвергнутых токсическому действию бета-амилоида. : р 0.05,значимое отличие от A1-42. : р 0.05, значимое различие с носителем. ANOVA + тест Bunett Post-Hoc. Агрегированный человеческий амилоидный пептид (A1-42 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию, больше 40%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Такую интоксикацию значимо предотвращает комбинация сульфизоксазола и левосимендана (А), в то время как при тех же концентрациях сульфизоксазол (В) и тербинафин (С) отдельно не оказывают значимого влияния на интоксикацию. Фиг. 10. Эффект комбинированного лечения баклофеном и левосименданом на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС, подвергнутых токсическому действию бета-амилоида. : р 0.05,достоверное отличие от A1-42. : р 0.05, достоверное отличие от носителя. ANOVA + тест Bunett PostHoc. Агрегированный человеческий амилоидный пептид (A1-42 2.5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию, больше 40%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Эту интоксикацию значимо предотвращает комбинация баклофена и левосимендана (А), в то время как в тех же концентрациях левосимендан (В) и баклофен (С) по отдельности не оказывают значимого влияния на интоксикацию. Фиг. 11. Эффект комбинированного лечения тербинафином и аминокапроновой кислотой на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС, подвергнутых токсическому действию бета-амилоида. : р 0.05, достоверное отличие от A1-42. : р 0.05, достоверное отличие от носителя. ANOVA + тест BunettPost-Hoc. Агрегированный человеческий амилоидный пептид (A1-42 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию, больше 40%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Эту интоксикацию значимо предотвращает комбинация тербинафина и аминокапроновой кислоты (А), в то время как в тех же концентрациях аминокапроновая кислота (В) и тербинафин (С) по отдельности не оказывают значимого влияния на интоксикацию. Фиг. 12. Влияние комбинации аминокапроновой кислоты и левосимендана на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС, подвергнутых токсическому действию бета-амилоида. : р 0.05, значимое отличие от A1-42. : р 0.05, значимое отличие от носителя. ANOVA + тест Bunett Post-Hoc. Агрегированный человеческий амилоидный пептид (A1-42 2.5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию,больше 40%, по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Эту интоксикацию значимо предотвращает комбинация левосимендана и аминокапроновой кислоты (А), в то время как в тех же концентрациях аминокапроновая кислота (В) и левосимендан (С) по отдельности не оказывают значимого влияния на интоксикацию. Фиг. 13. Влияние комбинации тербинафина и левосимендана на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС, подвергнутых токсическому действию бета-амилоида. : р 0.05, достоверное отличие A1-42. : р 0.05, достоверное отличие от носителя. ANOVA + тест Bunett Post-Hoc. Агрегированный человеческий амилоидный пептид (A1-42 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию, больше 40%,по сравнению с нейронами, обработанными носителем. Эту интоксикацию достоверно предотвращает комбинация тербинафина и левосимендана (А) в то время как в тех же концентрациях тербинафин (В) и левосимендан (С) по отдельности не оказывают значимого влияния на интоксикацию. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение предоставляет новые терапевтические подходы для лечения БА или родственных нарушений. Изобретение раскрывает новое применение лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств, которое обеспечивает эффективную коррекцию таких болезней и может использоваться для лечения пациентов. Термин "нарушения, родственные с БА", включает сенильное (старческое) слабоумие типа Альцгеймера (SDAT), болезнь Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, сосудистую (микроинфарктную) деменцию, умеренные когнитивные нарушения (MCI), возрастное нарушение памяти (AAMI) и проблемы,связанные со старением, постцеребральный Паркинсонизм, боковой амиотрофический склероз (ALS),рассеянный склероз (MS) и синдром Дауна. При использовании в описании "лечение" нарушения включает терапию, предотвращение, профилактику, задержку или уменьшение симптомов, вызванных нарушением. Термин "лечение" включает, в частности, контроль за развитием болезни и связанных с этим симптомов. Термин "улучшать", когда он относится к функции синапса, включает любое увеличение синаптической функции по сравнению с функцией, существующей у субъекта. Такое улучшение может включать восстановление, т.е. до нормальных уровней, или более низкое увеличение, которое все же является достаточным, чтобы улучшить состояние пациента. Такое улучшение можно оценить и проверить с помощью известных биологических тестов, например, описанных в экспериментальной части. Термин "увеличить", когда он относится к ангиогенезу, включает любое увеличение ангиогенеза по сравнению с уровнем, существующим у субъекта. Такое улучшение может включать восстановление, т.е. до нормальных уровней, или более низкое увеличение, которое все же является достаточным, чтобы улучшить состояние пациента. Такое улучшение можно оценить и проверить с помощью известных биологических тестов, например, описанных в экспериментальной части. Термин "ингибировать", когда он относится к реакции (ответу) клетки на стресс ("CSR"), включает любое уменьшение CSR по сравнению с существующей активностью у субъекта. Такое уменьшение может включать частичное уменьшение, например от 5 до 20%, которое является достаточным для того,чтобы улучшить состояние пациента, а также более значительные уменьшения, например от 20 до 50% или более полное ингибирование, например выше 50%. Ингибирование можно оценить и проверить с помощью известных биологических тестов, например тестов, описанных в экспериментальной части. При этом обозначение специальных соединений в контексте этого изобретения предназначается для того, чтобы включать не только специально названные молекулы, но также любую фармацевтически приемлемую соль, гидрат, эфир, сложный эфир, изомеры, рацемат, конъюгаты или их пролекарства любой степени очистки. Термин "комбинация или комбинированное лечение/терапия" означает лечение, при котором по меньшей мере два или более лекарственных препаратов вводятся субъекту совместно, чтобы вызвать биологический эффект. При комбинированном лечении согласно этому изобретению по меньшей мере два лекарственных средства могут вводиться вместе или отдельно, в одно и то же время или последовательно. Кроме того, по меньшей мере два лекарственных средства могут вводиться разными путями или по разным протоколам. В результате, несмотря на то, что лекарственные средства комбинации могут заключаться в состав вместе, они также могут заключаться в состав по отдельности. Как обсуждалось выше, изобретение имеет отношение к композициям и способам лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, с помощью лекарственных средств или комбинации лекарственных средств, которые улучшают функцию синапса, и/или увеличивают ангиогенез, и/или ингибируют реакцию клетки на стресс. Путем сведения в единое целое полных экспериментальных данных, охватывающих результаты исследований биологии клетки, экспериментов по определению профиля экспрессии и исследований генетической связи, описания различных аспектов болезни Альцгеймера и связей, существующих в клеточных сигнальных и функциональных путях, изобретатели обнаружили, что функция синапса, ангиогенез и реакция клетки на стресс представляют собой важные механизмы, которые изменяются у субъектов с БА. С помощью дополнительных экспериментальных исследований, изобретатели отобрали лекарственные средства или комбинации лекарственных средств, которые эффективно изменяют эти пути и эффективно улучшают БА, как проиллюстрировано в примерах. Таким образом, эти лекарственные средства и комбинации представляют собой новые подходы для лечения БА и родственных нарушений. Гены, расположенные в указанных функциональных сетях и вовлеченные в болезнь Альцгеймера,были отобраны по следующим критериям:(1) прямое взаимодействие с генами, которые являются причиной и несут ответственность за семейные случаи болезни Альцгеймера (АРР, АроЕ, пресенелины, тау-белок);(2) функциональные партнеры генов, отобранных по критерию (1);(3) ближайшие функциональные партнеры генов, отобранных по критерию (2). Благодаря этому изобретатели установили, что сети, несущие ответственность за функцию синапса,-4 024465 ангиогенез и реакцию клетки на стресс, являются основными функциональными сетями, пораженными при болезни Альцгеймера. Конкретнее, изобретатели установили, что потеря синапсов является функционально значимым признаком болезни Альцгеймера, что, в конечном счете, приводит к прогрессирующему снижению когнитивных способностей, потере памяти и слабоумию. Важно отметить, что потеря синапсов лучше коррелирует с когнитивным расстройством, характеризующим патологию Альцгеймера, по сравнению с другими специфическими для БА маркерами повреждения клеток, обнаруженными при развитии нейрофибриллярных клубков или отложении амилоидных бляшек. Поэтому формирование синапса и синаптическая пластичность представляет важную мишень для терапевтического вмешательства в контексте болезни Альцгеймера. АРР-белок транпортируется по аксонам и подвергается обработке в пресинаптических окончаниях,что приводит к высокому накоплению Абета в синапсах. Олигомеры Абета 42, а также и сами амилоидные бляшки являются важными для ингибирования долговременной потенциации и несут основную ответственность за ухудшение памяти у пациентов с БА. С помощью нашего метода интеграции данных была обнаружена группа генов, вовлеченных в нарушение синапса при БА, которую формально можно разделить на три основные функциональные группы: белки, участвующие в формировании постсинаптического уплотнения ("PSD") и в правильной передаче нервного сигнала на постсинаптическую мембрану; белки, обеспечивающие высвобождение нейромедиатора; и белки, участвующие в росте аксона и развитии синаптического аппарата до созревания. В отдельном варианте осуществления настоящее изобретение, таким образом, принимает во внимание, что для эффективного лечения БА является важным улучшить активность белков, связанных с постсинаптическим уплотнением. В числе генов, установленных с помощью нашего исследования, особый интерес представляет генDLG2, который кодирует семейство белков MAGUK и создает границу раздела между сгруппированными (собранными в кластеры) мембраносвязанными рецепторами, молекулами клеточной адгезии и цитоскелетом на основе актина (17-18). Изобретатели определили большую группу глутаматных ионотрофических/метаботрофических рецепторов и рецепторов фактора роста, которые непосредственно взаимодействуют с белком DLG2 или DLG2/PSD95 белковым комплексом в деполяризующих синапсах и которые, следовательно, можно считать терапевтическими мишенями для лечения болезни Альцгеймера. Таким образом, в другом отдельном варианте осуществления настоящее изобретение принимает во внимание, что для эффективного лечения БА также является важным улучшить активность белков, участвующих в регуляции высвобождения нейромедиатора на пресинаптической мембране. Высвобождение нейромедиаторов на ограниченной и узкоспециализированной активной зоне пресинаптической плазматической мембраны запускается потенциалом действия и контролируется совместным действием потенциалозависимых кальциевых Cav каналов, MaxiK/BK каналов (калиевые кальцийактивируемые каналы с высокой проводимостью) и cGMP-зависимыми PRKG протеинкиназами, все они являются тесно связанными, как продемонстрировано нашим исследованием, при развитии болезни Альцгеймера. В дополнение к этим функциональным модулям, вовлеченным в высвобождение нейромедиатора, изобретатели установили другую группу белков, связанных с дисрегуляцией синаптической нейропередачи в ходе болезни Альцгеймера, которые являются ответственными за созревание, "стыковку" и слияние синаптических пузырьков (например, STX2, STXBP6, BIN1, RAB3B, UNC13C и RIMS 1/2 поддерживающие белки). Поэтому эти функциональные пути были определены как подходящие терапевтические мишени для лечения болезни Альцгеймера. Кроме того, в другом отдельном варианте осуществления настоящее изобретение принимает во внимание, что для эффективного лечения БА важно улучшить активность белков, участвующих в регуляции и направлении роста аксонов. Белки, участвующие в регуляции направления и роста аксонов, дают возможность клеткампредшественникам нейронов и аксонам мигрировать в надлежащее место назначения, чтобы обеспечить правильное местоположение и возможность взаимодействия; кроме того, они вовлечены в созревание вновь создаваемых синапсов, а также деградацию аксонов и синапсов при БА. Эти процессы играют существенную роль при осуществлении когнитивных функций и, по-видимому, являются чрезвычайно подверженными токсичному влиянию отложений Абета. Последовательные стадии направления и роста аксона плотно контролируются совместным действием внеклеточных или мебраносвязанных нетринов, семафоринов, эфринов, DLL и Slits молекул и их соответствующих функциональных рецепторов, большинство из которых были обнаружены с помощью нашего метода сбора данных. Функциональные результаты активации большинства рецепторов, связанных с ростом аксонов, являются тесно связанными с их способностью избирательно модулировать активность небольших ГТФ-аз RhoA, Rac1 и Cdc42, вместе с RhoA ГТФ-азой, несущей главную ответственность за сокращения нейрита и разрушение конуса роста (19). Эти сигнальные пути расцениваются как подходящие терапевтические мишени для лечения болезни Альцгеймера. Таким образом, настоящее изобретение принимает во внимание, что для эффективного лечения БА важно улучшить синаптическую функцию, измененную при болезни Альцгеймера и других нейродеге-5 024465 неративных нарушениях, путем модулирования генов-мишеней и белков, описанных выше. Благодаря нашему способу получения данных изобретатели также установили, что сеть, несущая ответственность за ангиогенез, представляет собой другую основную функциональную сеть, поврежденную при болезни Альцгеймера. Ангиогенез играет существенную роль в обеспечении гомеостаза ткани и адаптивных ответов на физиологические требования и требования окружающей среды, такие как гипоксия или заживление ран; его дисфункция способствует развитию многочисленных и разнородных патологий, начиная от сердечно-сосудистых осложнений до роста опухоли и метастазирования. Хотя болезнь Альцгеймера традиционно считается нейродегенеративным состоянием, сопровождаемым второстепенной патологией сосудов, наше исследование дало возможность переоценить патогенное влияние отмены сосудистого регулирования (контроля за сосудами) и признать важную и возможно причинную роль путей, связанных с ангиогенезом, в этиологии этой болезни. Изобретатели обнаружили, что сигнальные пути, вовлеченные в развитие болезни Альцгеймера, крайне богаты генами, регулирующими ангиогенез. Этот вывод имеет глубокие последствия для предотвращения и излечения болезни Альцгеймера и определяет новые рекомендации в отношении комбинированного лечения этого сложного нейродегенеративного нарушения. Среди сигнальных путей, тесно вовлеченных в ремоделирование сосудов, связанное с болезнью Альцгеймера, установлено несколько функциональных модулей, опосредованных VEGFR1, ErbB4,Notch, DCC, CD44, эфриновыми рецепторами и кадхеринами. При анализе наших данных было обнаружено, что другие белки-мишени, возможно участвующие в развитии сосудистых дефектов, проявляющихся в ходе болезни Альцгеймера, включают IL20R, LEPTR,NRP1, NRP2 и эндотелиновые EDNRA рецепторы, белки, принимающие участие в организации и ремоделировании внеклеточного матрикса (THBS2, LAMA1, COL4A2, ADAMTS12 и ADAM10), или белки(например, TLL2), играющие важную роль в функциональном процессинге хорошо известных модуляторов ангиогенеза, таких как пролактин, гормон роста и плацентарный лактоген (20). Более того, авторы обнаружили, что некоторые гены, связанные с болезнью Альцгеймера, представляют расположенные выше модуляторы и расположенные ниже эффекторные молекулы АМРактивируемых киназ, важных регуляторов сосудистой системы (например, лептин и CNTF рецепторы,сигнальный путь тромбина, киназы CAMKK2 и LKB1) (21-24). Это открытие дало возможность определить AMPK-опосредованную сигнальную сеть как обоснованную терапевтическую мишень для лечения болезни Альцгеймера. Фосфатидная кислота (РА), лизофосфатидиловая кислота (LPA) и сфингозин 1-фосфат (S1P) являются природными фосфолипидами, обладающими сильными сигнальными свойствами (передачи сигнала). В частности, эти фосфолипидные факторы роста проявляют неоднородные действия на ангиогенный потенциал эндотелиальных клеток (25). Используя собственный способ получения данных, авторы изобретения установили большое число генов, участвующих в метаболизме LPA или модулируемых сигнальным путем LPA и вероятно связанных с прогрессированием болезни Альцгеймера (MTR, MAT2B,CUBN, АТР 10 А, ТНЕМ 2, PITPNC1, ENPPG, SGPP2, AGPAT, DGKH, DGKB, MGST2, PLD2 и DRD2). Поэтому, изобретатели сделали вывод, что эта сигнальная сеть представляет собой подходящую терапевтическую мишень для лечения болезни Альцгеймера. Кроме того, настоящее изобретение подчеркивает важность увеличения ангиогенеза, измененного при болезни Альцгеймера и других нейродегенеративных нарушениях, при помощи модулирования генов-мишеней и белков, описанных выше. Наконец, авторы установили, что сеть, несущая ответственность за ответ клетки на стресс, является третьей основной функциональной сетью, затронутой при болезни Альцгеймера. Конкретнее, авторы установили, что ответ клетки на стресс является функциональным признаком болезни Альцгеймера. Как обсуждалось выше, изобретатели установили три семейства белков в пределах сети, отвечающей за ответ клетки на стресс, которые с функциональной точки зрения относятся к возникновению и контролю за болезнью Альцгеймера, и представляют собой полезные мишени для комбинированных видов терапии. Конкретнее, эти группы белков представляют собой белки, принимающие участие в гомеостазе кальция, в сворачивании белка и в осуществлении апоптоза. В отдельном варианте осуществления настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам, использующим комбинацию лекарственных средств, которые модулируют активность белка,принимающего участие в гомеостазе кальция. Кальций, один из наиболее важных внутриклеточных мессенджеров (посредников), опосредует множество клеточных процессов и в нейронах и в эндотелиальных клетках, включая синаптическую пластичность, ангиогенез и апоптоз. Внутриклеточный уровень кальция строго регулируется совместным действием серии проницаемых для кальция каналов, кальциевых насосов и кальциевых обменников в плазматической мембране и эндоплазматическом ретикулуме (26-27). Авторы изобретения установили сеть генов, вовлеченных в гомеостаз кальция, функция которых может модифицироваться мутантными белками пресенелинами или ток-6 024465(SERCA3 Са 2+ АТФаза), регулирующая гомеостаз кальция на уровне ER, АТФаза цитоплазматической мембраны АТР 2 В 1, выталкивающая ионы кальция из эукариотических клеток против градиента концентрации, и потенциалозависимые Na+ каналы представляют особый интерес как терапевтические мишени для лечения болезни Альцгеймера. В другом отдельном варианте осуществления настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам, использующим лекарственную комбинацию, которая модулирует активность белка,вовлеченного в свертывание или агрегацию белка. Агрегация белка представляет собой главное цитопатологическое явление при БА. Два основных клеточных признака болезни Альцгеймера проявляются в развитии нейрофибриллярных клубков (NFT) и отложении амилоидных бляшек, состоящих из агрегированного гиперфосфорилированного тау-белка и А-фрагментов АРР-белка соответственно. Другой белок, склонный к агрегации -синуклеин, признанный скорее специфическим признаком болезни Паркинсона, тем не менее, может обнаруживаться в амилоидных бляшках в большинстве случаев спорадических и семейных форм болезни Альцгеймера. Авторы изобретения определили несколько генов, вовлеченных в изменение сворачивания, посттрансляционную модификацию и процессинг каждого основного компонента белковых агрегатов, связанных с болезнью Альцгеймера, как подходящие терапевтические мишени для лечения болезни Альцгеймера, например, белки АРВА 1 и АРВА 2 ВР, которые взаимодействуют с АРР и регулирует его стабильность и функции, или PARK2 убиквитин-протеин лигаза, которая вовлечена в клиренс -синуклеина(28). Точно так же GSK-3 киназа может играть чрезвычайно важную роль в патогенезе неправильного сворачивания белка в ходе болезни Альцгеймера. Этот вывод подкрепляется нашим открытием, что некоторые сигнальные модули, регулирующие активность GSK-3 киназы, и их взаимодействие с таубелком - WWOX (29), гиалуроновым CD44 рецептором, Wnt рецепторами Fz2/ROR2 и комплексом инсулиновый рецептор/PTPRG фосфатаза (30) - являются связанными с развитием болезни Альцгеймера. В следующем варианте осуществления настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам, использующим лекарственную комбинацию, ингибирующую апоптоз, который считается основным клеточным механизмом, несущим ответственность за потерю клеток при болезни Альцгеймера. Как установлено нашим исследованием, апоптоз в случае болезни Альцгеймера, наиболее вероятно осуществляется через канонические р 53-зависимые пути. Белок р 53 может регулироваться через посттрансляционные модификации и благодаря взаимодействиям с положительными и отрицательными регуляторными факторами. Авторы изобретения установили несколько таких регуляторных белков, WWOX, MDM1, HIPK2 и PML, подтверждая предположение о ключевой роли белка р 53 в осуществлении клеточной смерти при болезни Альцгеймера (31-33). Среди рецепторных систем, которые могут быть непосредственно и специфически вовлечены в индукцию апоптоза в контексте болезни Альцгеймера, особый интерес представляют UNC5C (Unc-5 гомолог С) и DCC (отсутствующие при колоректальной карциноме) нетриновые рецепторы, участвующие в аксональном поиске пути и ангиогенезе. Эти рецепторы определяются как предполагаемые условные опухолевые супрессоры, так как они ведут себя как нетрин-зависимые рецепторы, индуцирующие апоптоз при отсутствии лигандов (34). Связывание нетрина-1 с этими рецепторами ингибирует р 53 зависимый апоптоз, в то время как р 53 непосредственно участвует в регуляции транскрипции нетрина-1 и его рецепторов (33). Кроме того, известно, что рецептор DCC возбуждается пресенелином, указывая на его важную роль в развитии болезни Альцгеймера (35). Таким образом, полученные нами данные говорят о том, что зависимая от рецепторов нетрина и р 53-опосредованная клеточная смерть может быть одним из специфических проапоптотических путей, вовлеченных в патологическую потерю клеток при болезни Альцгеймера, в дополнение к скорее неспецифическим проапоптотическим программам, индуцированным нарушенным гомеостазом кальция и чрезмерной выработкой ROS. В отдельном варианте осуществления настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам, использующим лекарственную комбинацию, которая ингибирует активность по меньшей мередвух разных белков, вовлеченных в гомеостаз кальция, сворачивание белков и осуществление апоптоза. В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает новые композиции, которые могут использоваться для ингибирования ответа клетки на стресс, вызванный при болезни Альцгеймера и других нейродегенеративных нарушениях, при помощи регулирования (модулирования) генов-мишеней и белков, описанных выше. Как обсуждалось выше, изобретение имеет отношение к композициям и способам для лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, с помощью комбинации лекарственных средств, улучшающей функцию синапса и/или увеличивающей ангиогенез и/или ингибирующей ответ клетки на стресс. Изобретатели отобрали и протестировали целый ряд лекарственных средств и комбинаций лекарственных средств, которые изменяют один или, предпочтительно, все из описанных выше путей. Как рас-7 024465 крывается в примерах, эти лекарственные комбинации оказывают сильное действие на болезнь Альцгеймера и представляют собой новые терапевтические подходы к лечению этой патологии. Эти лекарственные комбинации являются чрезвычайно полезными, так как они оказывают воздействие разными путями и таким образом являются более эффективными. Кроме того, вследствие их эффективности и механизма действия, лекарственные комбинации могут использоваться в низких дозах, что является дополнительным очень существенным преимуществом. Наиболее предпочтительные лекарственные средства перечислены в табл. 1 ниже. Таблица 1 В этой связи предпочтительная цель этого изобретения имеет отношение к композициям, содержащим комбинацию по меньшей мере двух соединений, выбранных из группы, состоящей из аминокапро-8 024465 новой кислоты, акампросата, амлодипина, агратробана, баклофена, цилостазола, цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида, мепакрина, метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала, цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида,ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина, параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, бенидипина, левосимендана и зонисамида или солей или пролекарств или производных любой степени чистоты или их композиций с замедленным высвобождением для одновременного, отдельного или последовательного введения. В отдельном варианте осуществления изобретение имеет отношение к композициям, содержащим по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из аминокапроновой кислоты, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала, цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида, ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина, параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, бенидипина и левосимендана, или их соли(ей), или пролекарства(в), или производного(ых), или композиции(ий) с замедленным высвобождением, в комбинации по меньшей мере с одним соединением, выбранным из группы, состоящей из акампросата, амлодипина, агратробана, баклофена, цилостазола, цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида, мепакрина, метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола,тадалафила, тербинафина и зонисамида, или соли(ей), или пролекарста(в), или производного(ых), или их композиции(й) с замедленным высвобождением для одновременного, отдельного или последовательного введения. Как описано в примерах, комбинированные способы лечения с использованием по меньшей мере 2 из перечисленных выше лекарственных средств приводят к эффективной коррекции болезни Альцгеймера. Лечение согласно изобретению может осуществляться само по себе (отдельно) или в виде лекарственной комбинации. В предпочтительном варианте осуществления лекарственные средства изобретения используются в комбинации(ях) для совместного, отдельного или последовательного введения в целях обеспечения наиболее эффективного результата. В этом отношении композиции для лечения болезни Альцгеймера согласно изобретению используют лекарственное средство(а), улучшающее функцию синапсов, и лекарственное средство(а), ослабляющее дисрегуляцию ангиогенеза, и/или лекарственное средство(а), ингибирующее ответ клетки на стресс. Конкретнее, композиции согласно изобретению для применения при лечении болезни Альцгеймера или родственного нарушения можно выбрать из композиций, содержащих по меньшей мере одну из следующих комбинаций лекарственных средств: модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид); модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и модулятор активности GABA-ергических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно выбирают из акампросата, этомидата и априндина); модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и антагонист рецептора эндотелина EDNRA(предпочтительно сульфизоксазол); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор рианодинового рецептора RYR3(предпочтительно прилокаин); модулятор GABBR2 рецептора (предпочтительно баклофен) и модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната); модулятор GABBR2 рецептора (предпочтительно баклофен) и антагонист рецептора эндотелинаEDNRA а (предпочтительно сульфизоксазол); модулятор GABBR2 рецептора (предпочтительно баклофен) и ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид); модулятор GABBR2 рецептора (предпочтительно баклофен) и модулятор гиаулоран-синтаз HAS1 -3(предпочтительно лефлуномид); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор аденозиновых рецепторов ADORA1/2/3 (предпочтительно дифиллин); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и антагонист рецептора эндотелина EDNRA(предпочтительно сульфизоксазол); модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната) и антагонист рецептора эндотелина EDNRA (предпочтительно сульфизоксазол); модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната) и ингибитор фосфо-9 024465 липаз PLA1A и PLA2 (предпочтительно мепакрин); модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната) и модулятор активности GABA-ергических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно выбирают из акампросата,этомидата и априндина); модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната) и химический шаперон (предпочтительно рифабутин); модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и ингибитор PDE11 А и PDE4A, PDE5A фосфодиэстераз (предпочтительно выбирают из тадалафила, энпрофиллина и окстрифиллина); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор сигнального пути рецептора тромбина F2R (предпочтительно агратробан и цефменоксим); модулятор AMPK (предпочтительно фенформин) и модулятор пуринергических рецепторов P2RY1 и P2RY12 (предпочтительно клопидогрел); модулятор активности GABA-ергических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно выбирают из акампросата, этомидата и априндина) и модулятор CASR (предпочтительно цинакалцет); антагонист рецептора эндотелина EDNRA (предпочтительно сульфизоксазол) и модулятор CASR(предпочтительно цинакалцет); модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната) и модулятор сигнального пути рецептора тромбина F2R (предпочтительно выбирают из агратробан и цефменоксим); модулятор рецептора GABBR2 (предпочтительно баклофен) и модулятор пуринергических рецепторов P2RY1 и P2RY12 (предпочтительно клопидогрел); модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната) и модулятор пуринергических рецепторов P2RY1 и P2RY12 (предпочтительно клопидогрел); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и антагонист потенциалозависимых кальциевых каналов CACNA (предпочтительно выбирают из циннаризина, бенидипина, параметадиона и амлодипина); модулятор активности GABA-ергических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно выбирают из акампросата, этомидата и априндина) и антагонист потенциалозависимых кальциевых каналовCACNA (предпочтительно выбирают из циннаризина, бенидипина, параметадиона и амлодипина); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор сигнального пути HIF1 А (предпочтительно циклопирокс); модулятор GABA-ергических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно выбирают из акампросата, этомидата и априндина) и модулятор сигнального пути HIF1A (предпочтительно циклопирокс); антагонист рецептора эндотелина EDNRA (предпочтительно сульфизоксазол) и модулятор окислительного фосфорилирования (предпочтительно выбирают из амобарбитала и метимазола); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор окислительного фосфорилирования (предпочтительно выбирают из амобарбитала и метимазола); антагонист рецептора эндотелина EDNRA (предпочтительно сульфизоксазол) и модулятор метаболизма витамина K (предпочтительно цефотетан); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор метаболизма витамина K (предпочтительно цефотетан); модулятор активности GABA-ергических и глутаматергических рецепторов (предпочтительно выбирают из акампросата, этомидата и априндина) и модулятор PRKG1 (предпочтительно эритритила тетранитрат); ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид) и модулятор PRKG1 (предпочтительно эритритила тетранитрат); антагонист рецептора эндотелина EDNRA (предпочтительно сульфизоксазол) и модулятор PRKG1(предпочтительно эритритила тетранитрат); модулятор KCNJ11 (предпочтительно выбирают из митиглинида и левосимендана) и модуляторPRKG1 (предпочтительно эритритила тетранитрат); модулятор KCNJ11 (предпочтительно выбирают из митиглинида и левосимендана) и ингибитор натриевого канала SCN1A и активатор BK-каналов (предпочтительно зонисамид) или модулятор BK-каналов (предпочтительно метиклотиазид); модулятор KCNJ11 (предпочтительно выбирают из митиглинида и левосимендана) и модулятор RHOA (предпочтительно выбирают из тербинафина и ризедроната). В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретение имеет отношение к комбина- 10024465 ции соединений, выбранных из аминокапроновой кислоты, акампросата, амлодипина, агратробана, баклофена, цилостазола, цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида, мепакрина,метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала, цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида, ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина, параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, беиидипина, левосимендана и зонисамида или их солей или пролекарств или производных или композиций с замедленным высвобождением для применения при лечении болезни Альцгеймера или родственного нарушения. В отдельном варианте осуществления композиция изобретения для применения при лечении болезни Альцгеймера или родственного нарушения содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из аминокапроновой кислоты, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала, цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида,ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина, параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, бенидипина и левосимендана или их соли(ей) или пролекарства(в) или производного(ых) или композиции(й) с замедленным высвобождением в комбинации по меньшей мере с одним соединением,выбранным из группы, состоящей из акампросата, амлодипина, агратробана, баклофена, цилостазола,цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида, мепакрина, метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина и зонисамида или их соли(ей) или пролекарства(в) или производного(ых) или композиции(й) с замедленным высвобождением. В частности, другой предпочтительный вариант осуществления изобретения имеет отношение к композиции для лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, содержащей, по меньшей мере, аминокапроновую кислоту, или ее соль(и), или пролекарство(а), или производное(ые), или композицию(и) с замедленным высвобождением. В отдельном варианте осуществления аминокапроновая кислота используется в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным соединением, предпочтительно выбранным из акампросата, амлодипина, агратробана,баклофена, цилостазола, цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида, мепакрина, метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала, цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида, ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина, параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, бенидипина, левосимендана и зонисамида или их солей или пролекарств или производных или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения. Предпочтительная композиция изобретения содержит аминокапроновую кислоту, или ее соль(и),или пролекарство(а), или производное(ые), или композицию(и) с замедленным высвобождением и по меньшей мере одно дополнительное соединение, выбранное из баклофена, сульфизоксазола, тербинафина и левосимендана, или их солей, или пролекарств, или производных, или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения. Такая композиция сама по себе также представляет отдельную цель изобретения. Кроме того, изобретение имеет отношение к способу лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества аминокапроновой кислоты, или ее соли(ей), или пролекарства(в), или производного(ых), или композиции(ий) с замедленным высвобождением предпочтительно в комбинации, как раскрыто выше. В частности, другой предпочтительный вариант осуществления изобретения имеет отношение к композиции для лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, содержащей, по меньшей мере, левосимендан или его соль(и) или пролекарство(а) или производное(ые) или композицию(ии) с замедленным высвобождением. В отдельном варианте осуществления левосимендан используется в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным соединением, предпочтительно выбранным из числа аминокапроновой кислоты, акампросата, амлодипина, агратробана, баклофена, цилостазола, цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида,мепакрина, метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала, цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида, ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина,параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, бенидипина и зонисамида, или их солей или пролекарств или производных или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения. Предпочтительная композиция изобретения содержит левосимендан, или его соль(и), или пролекарство(а), или производное(ые), или композицию(ии) с замедленным высвобождением и по меньшей мере одно дополнительное соединение, выбранное из числа аминокапроновой кислоты, баклофена,сульфизоксазола и тербинафина, или их солей, или пролекарств, или производных, или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения. Такая композиция сама по себе также представляет отдельную цель изобретения. Кроме того, изобретение имеет отношение к способу лечения болезни Альцгеймера (БА) или род- 11024465 ственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества левосимендана, его соли(ей), или пролекарства(в), или производного(ых), или композиции(ий) с замедленным высвобождением предпочтительно в комбинации, как раскрыто выше. В частности, другой предпочтительный вариант осуществления изобретения имеет отношение к композиции для лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, причем композиция содержит, по меньшей мере, эплеренон, карбеноксолон, сулодексид, циннаризин или карбамазин, или их соль(и), или пролекарство(а), или производное(ые), или композицию(ии) с замедленным высвобождением. В отдельном варианте осуществления эплеренон, карбеноксолон, сулодексид, циннаризин или карбамазин используются в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным соединением, предпочтительно выбранным из левосимендана, аминокапроновой кислоты, акампросата, амлодипина, агратробана, баклофена, цилостазола, цинакалцета, клопидогрела, дифиллина, фенолдопама, лефлуномида, мепакрина, метимазола, фенформина, прилокаина, рифабутина, сульфизоксазола, тадалафила, тербинафина, циннаризина, циклопирокса, эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, карбамазина, амобарбитала,цефотетана, эритритила тетранитрата, метиклотиазида, ризедроната, энпрофиллина, окстрифиллина, параметадиона, цефменоксима, априндина, этомидата, митиглинида, бенидипина и зонисамида или их солей или пролекарств или производных или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения. Предпочтительная композиция изобретения содержит эплеренон, карбеноксолон, сулодексид, циннаризин или карбамазин или их соль(и) или пролекарство(а) или производное(ые) или композицию(ии) с замедленным высвобождением и по меньшей мере одно дополнительное соединение, выбранное из левосимендана, аминокапроновой кислоты, баклофена, сульфизоксазола и тербинафина или их солей или пролекарств или производных или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения. Такая композиция сама по себе также представляет отдельную цель изобретения. Кроме того, изобретение имеет отношение к способу лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества эплеренона, карбеноксолона, сулодексида, циннаризина или карбамазина, или их соли(ей),или пролекарства(в), или производного(ых), или композиции(ий) с замедленным высвобождением предпочтительно в комбинации, как раскрыто выше. Более предпочтительно композиция изобретения для комбинированного лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, содержит по меньшей мере одну из следующих лекарственных комбинаций для совместного, отдельного или последовательного введения: фенформин и зонисамид; фенформин и метиклотиазид; феиформин и акампросат; фенформин и сульфизоксазол; баклофен и аминокапроновая кислота; баклофен и левосимендан; баклофен и тербинафин; баклофен и ризедронат; баклофен и сульфизоксазол; баклофен и зонисамид; баклофен и метиклотиазид; баклофен и сульфизоксазол; баклофен и лефлуномид; амииокапроиовая кислота и сульфизоксазол; аминокапроновая кислота и тербинафин; аминокапроновая кислота и левосимендан; левосимендан и сульфизоксазол; левосимендан и тербинафин; зонисамид и дифиллин; метиклотиазид и дифиллин; зонисамид и прилокаин; метиклотиазид и прилокаин; зонисамид и сульфизоксазол; фенформин и клопидогрел; акампросат и цинакалцет; сульфизоксазол и цинакалцет; тербинафин и агратробан; тербинафин и цефменоксим; баклофен и клопидогрел; тербинафин и клопидогрел; ризедронат и клопидогрел; зонисамид и циннаризин; акампросат и эритритила тетранитрат; сульфизоксазол и эритритила тетранитрат; митиглинид или левосимендан и эритритила тетранитрат; митиглинид или левосимендан и зонисамид; митиглинид или левосимендан и тербинафин; митиглинид или левосимендан и ризедронат; митиглинид или левосимендан и метиклотиазид; метиклотиазид или зонисамид и сульфизоксазол; тербинафин или ризедронат и сульфизоксазол; тербинафин или ризедронат и мепакрин; тербинафин или ризедронат и акампросат; тербинафин или ризедронат и рифабутин; тадалафил или энпрофиллин или окстрифиллин и фенформин; зонисамид или метиклотиазид и агратробан или цефменоксим; ризедронат и агратробан или цефменоксим; зонисамид или метиклотиазид и циннаризин или бенидипин или параметадион или амлодипин; акампросат и циннаризин или бенидипин или параметадион или амлодипин; зонисамид или метиклотиазид и циклопирокс; сульфизоксазол и амобарбитал; зонисамид или метиклотиазид и амобарбитал; сульфизоксазол и цефотетан; зонисамид или метиклотиазид и цефотетан; зонисамид или метиклотиазид и эритритила тетранитрат. Конкретные примеры предпочтительных композиций изобретения включают одну из следующих лекарственных комбинаций для совместного, отдельного или последовательного введения: баклофен и аминокапроновая кислота; баклофен и левосимендан; аминокапроновая кислота и сульфизоксазол; аминокапроновая кислота и тербинафин; аминокапроновая кислота и левосимендан; левосимендан и сульфизоксазол; левосимендан и тербинафин; эплеренон и левосимендан; эплеренон и сульфизоксазол; эплеренон и фенолдопам; сулодексид и левосимендан; сулодексид и сульфизоксазол; сулодексид и фенолдопам или эплеренон и сулодексид. Как показано в экспериментальной части, композиции, содержащие, по меньшей мере, аминокапроновую кислоту или левосимендан обеспечивают значительный терапевтический или биологический эффект для того, чтобы улучшить состояние при болезни Альцгеймера у людей. Эти композиции эффективно предотвращают токсическое действие амилоидного Р-белка или пептида на человеческие клетки и представляют собой новые и эффективные способы лечения такого нарушения. В другом предпочтительном варианте осуществления композиции согласно изобретению содержат комбинацию по меньшей мереиз трех соединений, или их солей, или пролекарств, или производных любой степени очистки, или композиций с замедленным высвобождением для совместного, отдельного или последовательного введения с целью комбинированного лечения болезни Альцгеймера (БА) или родственного нарушения у субъекта, нуждающегося в этом. Терапевтические подходы согласно изобретению могут использовать лекарственные средства по отдельности или лекарственные комбинации в сочетании с любым другим видом лечения, нацеленным на тот же самый путь или имеющим особый механизм действия. В отдельных вариантах осуществления композиции настоящего изобретения могут дополнительно содержать лекарственное средство или лекарственные средства, которые уже существуют или могут быть разработаны, связывающиеся с белком или модулирующие активность белка, кодируемого геном,выбранным из числа Последовательности всех вышеперечисленных генов и белков имеются в библиотеках генов и могут быть выделены с помощью известных в данной области техники методов. Активность этих генов и белков также можно оценить с помощью методов, известных в данной области техники. Изобретение также описывает дополнительные лекарственные средства, которые могут использоваться для модулирования генов-мишеней и белков. Авторы изобретения установили конкретные лекарственные средства, которые по отдельности или в комбинации(ях) модулируют описанные выше пути и могут использоваться для лечения болезни Альцгеймера или родственных нарушений. В предпочтительном варианте осуществления композиции изобретения могут дополнительно содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из числа ингибитора АВАТ, (предпочтительно вигабатрин), и/или ингибитора ABL1 (предпочтительно иматиниб), и/или ингибитора АСАТ (предпочтительно гесперитин), и/или модулятора ADCY2 (предпочтительно видарабин), и/или модулятора аденозиновых рецепторов ADORA1/2A/3 (предпочтительно выбирают из клофарабина и дефибротида), и/или модулятора адренергических рецепторов ADRA (предпочтительно выбирают из проперизиазина, метотримепразина, мефентермина и дипивефрина), и/или модулятора адренергическихADRB рецепторов (предпочтительно выбирают из гуанетидина, бетанидина, битолтерола и прокатерола),и/или ингибитора ALOX5/12 (предпочтительно выбирают из диэтилкарбамазина и мазопросола), и/или ингибитора АТР 1 А 1 (предпочтительно десланозид и омепразол), и/или активатора аутофагии (предпочтительно трегалоза), и/или ингибитора СА 10 (предпочтительно метазоламид), и/или модулятора кальцификации (предпочтительно выбирают из фоскарнета, нитрата галлия, кальцифедиола, кальцитонина,кальцитриола, клодроновой кислоты, дигидротахистерола, элкатонина, этидроновой кислоты, иприфлавона и терипаратида ацетата), и/или модулятора CALM1 (кальмодулин) (предпочтительно априндин),и/или модулятора CD44 (предпочтительно выбирают из эфлорнитина и бензбромарона), и/или химического шаперона (предпочтительно выбирают из арабитола и маннитола), и/или модулятора мускариновых рецепторе CHRM (предпочтительно выбирают из циклопентолата, оксифенциклимина, троспия и изофлурофата), и/или антагониста никотиновых ацетилхолиновых CHRNA рецепторов, который не способен проникать через гемато-энцефалический барьер, (предпочтительно выбирают из панкурония, пипекурония, рапакурония, рокурония, сукцинилхолина, векурония, атракурия, цисатракурия, доксакурия,мекамиламина, метокурина, мивакурия и неомицина), и/или ингибитора CNGB3 (предпочтительно амилорид), и/или модулятора CYSLTR1/2, PTGER1, PTGFR и TBXA2R эйкозаноидных рецепторов (предпочтительно выбирают из травопроста, монтелукаста, циналукаста, амлексанокса, карбопроста трометамина, биматопроста и ридогрела), и/или ингибитора DHFR (предпочтительно пириметамин и триамтерен), и/или модулятора допаминового рецептора DRD2 (предпочтительно выбирают из дигидроэрготамина и каберголина), и/или агониста допаминового рецептора DRD5 (предпочтительно фенолдопам),и/или ингибитора EDNRA (предпочтительно выбирают из сульфаметоксазола и гентамицина), и/или модулятора ENPP2 (аутотаксин) (предпочтительно L-гистидин), и/или ингибитора ERBB2 (предпочтительно лапатиниб), и/или модулятора тромбина F2 (предпочтительно выбирают из сулодексида, ксимелагатрана, варфарина, фенпрокоумона, эноксапарина, ардепарина, фондапаринукса, латамоксефа, бацитрацина, тиклопидина и эрдостеииа), и/или ингибитора FDPS (предпочтительно алендронат), и/или модулятора GABRA2 (предпочтительно выбирают из фенобарбитала, метогекситала, цефотиама, клометиазола,тиопентала, лубипростона и азтреонама), и/или антагониста GRIK1 (предпочтительно топирамат), и/или модулятора GSK3B активности (предпочтительно выбирают из альбутерола и метараминола), и/или модулятора сигнального пути HIF1A (предпочтительно выбирают из мелоксикама, топотекана, дефероксамина, усниновой кислоты, гидралазина, деферипрона, дибензоилметана, авобензона, динопростона, эпопростенола, 2-оксоглутарата и мимозина), и/или ингибитора НК 2 (гексокиназа II) (предпочтительно выбирают из хинина, габексата, бифоназола и клотримазола), и/или модулятора HMOX1 (предпочтительно выбирают из ауранофина, гематина/гемина и гем аргината), и/или модулятора рецепторов HTR1B/1D(предпочтительно выбирают из эрготамина и элетрипана), и/или ингибитора IMPDH1 и IMPDH2 (предпочтительно тиогуанина), и/или модулятора интегринов ITGA/B (предпочтительно рабепразол), и/или ингибитора KCND2 калиевого канала (предпочтительно лидокаин), и/или ингибитора KCNH2 калиевого канала (предпочтительно ибутилид), и/или модулятора KCNMA1 (предпочтительно выбирают из кромогликата, этинамата, кетоконазола, хлорзоксазона, унопростона, гесперитина, бендрофлуметиазида,бензтиазида, хлортиазида, циклотиазида, диазоксида, гидрофлуметиазида, квинетазона и тризлорметиазида), и/или модулятора MGST2 (предпочтительно балсалазид), и/или модулятора ММР 2 и ММР 9 (предпочтительно кандоксатрил), и/или модулятора изменения проницаемости митохондриальных пор (предпочтительно выбирают из карбеноксолона и ципрофлоксацина), и/или ингибитора MTOR (предпочтительно рапамицин), и/или модулятора NOS1/2A/3 (предпочтительно выбирают из пропилтиоурацила,тиэтилперазина и кетотифена), и/или модулятора сигнального пути рецептора NR3C1 (предпочтительно выбирают из метирапона и мометазона), и/или модулятора рецептора NR3C2 (предпочтительно выбирают из эплеренона и флудрокотизона), и/или ингибитора NRP2 (предпочтительно пегаптаниб), и/или модулятора OPCML (предпочтительно алфентанил), и/или модулятора OPRK1 и OPRS1 (предпочтительно выбирают из бупренорфина и пентазоцина), и/или OPRM (предпочтительно леваллорфан), и/или модулятора окислительного фосфорилирования (предпочтительно выбирают из алмитрина, эритромицина, канамицина и церуленина), и/или ингибитора рецепторов P2RY1 и/или P2RY12 (предпочтительно тирофибан), и/или ингибитора PDE11A, PDE4A и PDE5A фосфодиэстераз (предпочтительно выбирают из ме- 15024465 зембрина, милринона и анагрелида), и/или ингибитора PDE3A/3B и PDE4A/4B фосфодиэстераз и активатора BK-каналов (предпочтительно цилостазол), и/или модулятора рецепторов PDGFRA/B (предпочтительно выбирают из бекаплермина, стрептомицина, делфинидина, цианидина и фумагиллина), и/или модулятора PLA2 (предпочтительно выбирают из нифлумовой кислоты, гидрокортамата и нетилмицина),и/или модулятора PLAT (предпочтительно натрий фенилбутират), и/или модулятора PLD2 (предпочтительно амбрисентан), и/или ингибитора PLG (предпочтительно аминокапроновая кислота), и/или модулятора PPARD (предпочтительно икозапент), и/или модулятора PPARG (предпочтительно фенилбутират), и/или модулятора PRKG1 (предпочтительно выбирают из нитропруссида, нитроглицерина и парикальцитола), и/или ингибитора РТР 1 В (предпочтительно тилудронат), и/или модулятора RHOA/RACSLC6A1 (предпочтительно тиагабин), и/или модулятора SLC9A1 (предпочтительно буклизин), и/или ингибитора SRD5A1 (предпочтительно дутастерид), и/или антагониста TACR1 (предпочтительно выбирают из апрепитанта и вапреотида), и/или модулятора TGFB сигнального пути (предпочтительно алискирен),и/или модулятора THRA/B (предпочтительно выбирают из лиотеронина), и/или ингибитора ТОР 2 А(предпочтительно люкантон), и/или модулятора TSPO (предпочтительно выбирают из флунитразепама и темазепама), и/или модулятора VDAC1 (предпочтительно дигидроксиалюминий), и/или ингибитораVEGFR1 (предпочтительно сунитиниб), и/или модулятора метаболизма витамина K (предпочтительно выбирают из цефметазола, цефамандола и цефоперазона), и/или ингибитора VMAT (предпочтительно выбирают из тетрабеназина, десерпидина и нитисинона), и/или ингибитора потенциалозависимых кальциевых каналов (CACNA) (предпочтительно выбирают из лерканидипина, прегабалина, мибефрадила,аранидипина, бамидипина, бенциклана, бепридила, клентиазема, эфонидипина, элгодипина, этафенона,фендилина, флунаризина, галлопамила, исрадипина, лацидипина, лидофлазина, ломеризина, манидипина, никардипина, нилвадипина, нимодипина, низолдипина, нитрендипина, пергексилина, прениламина,семотиадила и теродилина), и/или ингибитора YES1, SRC и ЕРНА 3 (предпочтительно дазатиниб). Другие методы лечения, используемые в сочетании с лекарственным средством(ами) или лекарственной комбинацией(ями) согласно настоящему изобретению, могут включать одно или более лекарственных средств, улучшающих симптомы болезни Альцгеймера или лекарственное средство(а), которое может использоваться для паллиативного лечения болезни Альцгеймера. Предпочтительно указанное одно или более лекарственных средств выбирают из 3APS, ААВ-001, АВТ-089, АВТ-126, АС-3933, АСС 001, ацетаминофена, AFFITOPE AD01, AFFITOPE AD02, альфа-липоевой кислоты, альфа-токоферола,AN1792, анти-Абета, AQW051, арипипразола, атомоксетина, аторвастатина, AVE1625, AVP-923,AZD0328, AZD3480, бапинеузумаба, BAY94-9172 (ZK 6013443), бифепрунокса, биоперин, BMS-708163,BRL-049653, бриостатина, CAD106, целекоксиба, CERE-110, церебролизина, CHF 5074, холина, циркадина, циталопрама, коэнзима Q, меди (Copper), CTS21166, куркумина, СХ 516 (ампалекса), СХ 717, циклофосфамата, DCB-AD1, декстроамфетамина, DHA (докозагексаеновой кислоты), дигоксина, димебонаGinkgo biloba (например, EGb 761 или СР 401), улучшенных экстрактов Ginkgo biloba (например, богатых активными ингредиентами, или экстрактов с уменьшенным количеством загрязняющих веществ) или лекарственных средств, содержащих экстракты Ginkgo biloba (например, танакан или Гинкго Форте),глюкозы, L-глютамновой кислоты, GSI 136, GSI-953, GSK239512, GSK933776A, галоперидола, HF0220,хуперзина А, гидрокодон/АРАР, ибупрофена, IFN-альфа 2 А, индометацина, инсулина, иммуноглобулина для внутривенного введения, кетасина, лекозотана, леупролида, леводопа, липоевой кислоты, лития, лоразепама, ловостатина, лютеина, LY2062430 (соланезумаба), LY2811376, LY450139, LY451395,МАВТ 5102 А, малата, мазитиниба (АВ 1010), медроксипрогестерона, мелатонина, MEM 1003, MEM 3454,мемантина, метиленового синего, метилфенидата, мифепристона, MK0249, MK0677, MK0952, MK0952,MK3328, модафинила, МРС-7869, NADH, напроксена, нефирацетама, Neptune Krill Oil (Нептун Криль масло), нерамексана, NIC5-15, пластырей Nicoderm Patch, никотинамида (витамина ВЗ), Novasoy,NP031112, NS 2330, NSA-789, NSAIDs, оланзапина, омега-3 полиненасыщенных жирных кислот тамина С, витамина Е, VP4896, ксалипродена, зеаксантин, золпидема и ZT-1 (DEBIO-9902 SR). Изобретение также имеет отношение к способу лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения, включающему одновременное, отдельное или последовательное введение субъекту, нуждающемуся в этом, лекарственной комбинации, как описано выше. Дополнительной целью изобретения является способ лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения, способ, включающий одновременное, отдельное или последовательное введение субъекту, нуждающемуся в этом, лекарственной комбинации, модулирующей функцию синапса, и/или лекарственного средства, модулирующего ангиогенез, и/или лекарственного средства, модулирующего ответ клетки на стресс. Дополнительная цель изобретения заключается в способе отбора лекарственного средства для основанного на комбинировании лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения, способе,включающем стадию тестирования возможного лекарственного средства в отношении влияния на функцию синапса и/или ангиогенез и/или ответ клетки на стресс и отбора возможного лекарственного средства, улучшающего функцию синапса, уменьшающего дисрегуляцию ангиогенеза и модулирующего ответ клетки на стресс. В другом варианте осуществления изобретение имеет отношение к способу отбора композиции для лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения, способу, включающему получение комбинации лекарственного средства, модулирующего функцию синапса, и/или лекарственного средства,уменьшающего дисрегуляцию ангиогенеза, и/или лекарственного средства, модулирующего ответ клетки на стресс, для одновременного, отдельного или последовательного введения субъекту, нуждающемуся в этом. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение имеет отношение к способу лечения болезни Альцгеймера или родственного нарушения, причем способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение субъекту, нуждающемуся в этом, лекарственного средства, модулирующего функцию синапса, и/или лекарственного средства, уменьшающего дисрегуляцию ангиогенеза, и/или лекарственного средства, модулирующего ответ клетки на стресс. Композиции изобретения можно вводить субъекту неоднократно. Как правило, композиции изобретения содержат один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов. Продолжительность лечения зависит от стадии болезни, которую нужно лечить, используемой композиции, возраста и состояния пациента, и того, как пациент отвечает на лечение. Дозировку, частоту и способ введения каждого компонента комбинации можно контролировать независимо. Например, одно лекарственное средство может быть введено перорально, тогда как второе лекарственное средство может быть введено внутримышечно. Комбинированное лечение можно проводить периодическими циклами, которые включают периоды отдыха, так что организм пациента имеет возможность восстановиться от каких-либо пока непредвиденных побочных действий. Лекарственные средства могут быть заключены в состав все вместе, так что одно введение доставляет все лекарственные средства. Введение каждого лекарственного средства комбинации можно осуществить любыми подходящими способами, дающими в результате концентрацию лекарственного средства, которая в сочетании с другим компонентом способна исправить функционирование путей, связанных с БА. Несмотря на то что возможно введение активных ингредиентов комбинации в виде чистого химического вещества, предпочтительным является предоставлять их в виде фармацевтической композиции, в этом контексте также называемой фармацевтическим составом. Возможные композиции включают композиции, пригодные для перорального ректального, местного (включая чрескожное, защечное и подъязычное) или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) введения. В большинстве случаев эти фармацевтические композиции назначаются пациенту в виде "упаковок для пациента", содержащих некоторое количество дозаторов или других приспособлений для введения отмеренных однократных доз для использования в течение отдельного периода лечения в единой упаковке, обычно в блистерной упаковке. Упаковка для пациента имеет преимущество по сравнению с традиционными назначениями, при которых фармацевт отделяет от крупной партии предназначенную для пациента долю фармацевтического препарата, заключающееся в том, что у пациента всегда есть доступ к листку-вкладышу, содержащемуся в упаковке для пациента, который обычно отсутствует при традиционных назначениях. Показано, что включение листка-вкладыша улучшает согласие пациента с инструкциями врача. Таким образом, изобретение дополнительно включает фармацевтическую композицию, как описано выше, в комбинации с упаковочным материалом, пригодным для указанных композиций. В таких упаковках о предусмотренном применении композиции для комбинированного лечения можно судить по инструкциям, приспособлениям, устройствам и/или другим средствам, помогающим использовать композицию наиболее соответствующим для лечения образом. В частности, такие меры делают упаковку подходящей и приспособленной для лечения с помощью комбинации настоящего изобретения. Лекарственное средство может содержаться в любом подходящем количестве в любом пригодном носителе и может присутствовать в количестве 1-99% по весу от общего веса композиции. Композиция может быть предоставлена в лекарственной форме, пригодной для перорального, парентерального (например, внутривенного, внутримышечного), ректального, кожного, назального, вагинального, ингаляционного введения, введения с помощью накожных пластырей или окулярного способа введения. Таким образом, композиция может иметь форму таблеток, капсул, пилюль, порошков, гранул, суспензий,эмульсий, растворов, гелей, включая гидрогели, паст, мазей, кремов, пластырей, пропиток, осмотических средств доставки, суппозиториев, клизм, инъецируемых составов, имплантов, спреев или аэрозолей. Фармацевтические композиции могут быть созданы в соответствии с обычной фармацевтической практикой (см., например, Remington: The Science и Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A.R. Gennaro, Lippincott WilliamsWilkins, 2000 и Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick и J.C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York). Фармацевтические композиции согласно изобретению могут быть созданы так, чтобы высвобождать активное лекарственное средство практически сразу же после введения или в заранее определенное время или период времени после введения. Композиции с контролируемым высвобождением включают (i) композиции, создающие практически постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение продолжительного периода времени; (ii) композиции, после определенного времени задержки создающие практически постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение продолжительного периода времени; (iii) композиции, поддерживающие действие лекарственного средства в течение предопределенного периода времени путем сохранения относительно постоянного эффективного уровня лекарственного средства в организме с одновременным сведением к минимуму нежелательных побочных эффектов, связанных с изменениями уровня активного лекарственного средства в плазме; (iv) композиции, пространственно ограничивающие действие лекарственного средства, например, путем размещения композиции с контролируемым высвобождением рядом с или в желательной ткани или органе; и (v) композиции, нацеливающие действие лекарственного средства с помощью носителей или химических производных для доставки лекарственного средства в конкретный тип клеток-мишеней. Введение лекарственных средств в виде композиции с контролируемым высвобождением является особенно предпочтительным в тех случаях, когда лекарственное средство (или отдельно или в комбинации) имеет (i) низкий терапевтический индекс, то есть, различие между концентрацией в плазме, приводящей к вредным побочным действиям или токсическим реакциям, и концентрацией в плазме, дающей терапевтический эффект, является небольшим; в общем, терапевтический индекс, TI, определяется как отношение средней летальной дозы (LD50) к средней эффективной дозе (ED50;(ii) узкое "окно" абсорбции (всасывания) в желудочно-кишечном тракте; или (iii) очень короткий биологический период полувыведения, при котором является необходимым частое дозирование в течение дня для поддержания концентрации в плазме на терапевтическом уровне. Из целого ряда стратегий может быть осуществлена любая для того, чтобы получить контролируемое высвобождение, при котором скорость высвобождения превосходит скорость метаболизма рассматриваемого лекарственного средства. Контролируемое высвобождение можно получить с помощью правильного выбора различных характеристик композиции и ингредиентов, включая, например, разные типы композиций и покрытий с контролируемым высвобождением. Таким образом, лекарственное средство вместе с подходящими эксципиентами (вспомогательными веществами) заключается в состав фармацевтической композиции, которая после введения высвобождает лекарственное средство контролируемым образом (композиции для отдельных таблеток или групповых упаковок или композиции для капсул,масляные растворы, суспензии, эмульсии, микрокапсулы, микросферы, наночастицы, пластыри и липосомы). Твердые лекарственные формы для перорального применения. Композиции для перорального применения включают таблетки, содержащие активный ингредиент(ы) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Эти эксципиенты, например, могут быть инертными разбавителями или наполнителями (например, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмалы, включая картофельный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия, фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия); гранулирующими средствами и средствами для улучшения распадаемости таблеток (например, производные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, кросскармелозу натрия, альгинаты или альгиновую кислоту); связывающие вещества (например, гуммиарабик, альгиновая кислота, альгинат натрия, желатин, крахмал, предварительно желатинизированный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропил метилцеллюлоза, этилцеллюлоза,поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль) и смазывающие вещества, способствующие скольжению вещества и антиклеящие вещества (например, стеариновая кислота, диоксид кремния или тальк). Другие фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть красителями, ароматизирующими веществами,мягчителями, увлажняющими веществами, буферными веществами и т.п. Таблетки могут быть непокрытыми или они могут быть покрыты с помощью известных методов,необязательно, чтобы задерживать распад и абсорбцию в желудочно-кишечном тракте, таким образом обеспечивая пролонгированное действие в течение более продолжительного периода. Покрытие может быть приспособлено для высвобождения активного лекарственного вещества по предопределенной схеме (например, для того, чтобы достичь контролируемого высвобождения композиции) или оно может быть приспособлено так, чтобы высвобождать активное лекарственное вещество только после прохождения желудка (энтеросолюбильное покрытие). Покрытие может представлять собой покрытие из сахара,пленочное покрытие (например, на основе гидроксипропил метилцеллюлозы, метилцеллюлозы, метилгидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропил-целлюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, акрилатсополимеров,полиэтиленгликолей и/или поливинилпирролидона) или энтеросолюбильное покрытие (например, на основе сополимера метакриловой кислоты, ацетатфталатцеллюлозы, фталат гидроксипропил метилцеллюлозы, гидроксипропил метилцеллюлозы ацетат сукцината, поливинил ацетатфталата, шеллака и/или этилцеллюлозы). Может использоваться материал, вызывающий задержку высвобождения по времени такой как, например, глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Твердые таблетированные композиции могут включать покрытие, приспособленное для защиты композиции от нежелательных химических изменений, (например, химической деградации до высвобождения активного лекарственного вещества). Подобным образом покрытие может быть нанесено на твердую лекарственную форму, как описано в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology. Несколько лекарственных средств может быть смешано вместе в таблетке или может быть разделено. Например, первое лекарственное средство содержится во внутренней части таблетки, а второе лекарственное средство - на внешней стороне, так что существенная часть второго лекарственного средства высвобождается до высвобождения первого лекарственного средства. Рецептуры для перорального применения также можно приготовить в виде жевательных таблеток или твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем (например, картофельным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой, карбонатом кальция,фосфатом кальция или каолином) или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, например, жидким парафином или оливковым маслом. Порошки и гранулы можно приготовить с использованием ингредиентов, упомянутых выше для таблеток и капсул, традиционным способом. Например, композиции для перорального применения с контролируемым высвобождением могут быть созданы так, чтобы высвобождение активного лекарственного средства контролировалось растворением и/или диффузией активного лекарственного вещества. Высвобождение, контролируемое растворением или диффузией, может быть достигнуто с помощью соответствующего покрытия композиций лекарственных средств в виде таблеток, капсул, пилюль или гранул, или путем включения лекарственного средства в подходящую матрицу. Покрытие с контролируемым высвобождением может включать одно или более из веществ для покрытия, упомянутых выше,и/или, например, шеллак, воск, гликосмолу, гидрированное касторовое масло, карнаубский воск, стеариловый спирт, глицерил моностеарат, глицерил дистеарат, глицерин пальмитостеарат, этилцеллюлозу,акриловые смолы, dl-полимолочную кислоту, ацетат бутират целлюлозу, поливинилхлорид, поливинилацетат, винилпирролидон, полиэтилен, полиметакрилат, метилметакрилат, 2-гидроксиметакрилат, метакрилатные гидрогели, 1,3 бутиленгликоль, этиленгликоль метакрилат и/или полиэтиленгликоли. В композиции с контролирующей высвобождение матрицей материал матрицы может также включать, например,гидратированную метилцеллюлозу, карнаубский воск и стеариловый спирт, карбопол 934, силикон, глицерил тристеарат, метилакрилат-метилметакрилат, поливинилхлорид, полиэтилен и/или галогенированный фторуглерод. Композиции с контролируемым высвобождением, содержащие одно или более лекарственных средств из заявленных комбинаций также могут иметь форму "плавучих" таблеток или капсул (т.е. таблетки или капсулы, которая после перорального приема плавает сверху содержимого желудка в течение определенного периода времени). "Плавучие" таблетки из лекарственного средства(в) могут быть приготовлены с помощью гранулирования смеси лекарственного средства(в) с эксципиентами и 20-75% об./об. гидроколлоидов, таких как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Затем полученные гранулы могут быть спрессованы в таблетки. При контакте с желудочным соком таблетка образует практически водонепроницаемый гелевый барьер вокруг своей поверхности. Этот гелевый барьер участвует в сохранении меньшей плотности, чем плотность желудочного сока,что дает возможность таблетке оставаться "плавающей" в нем. Жидкости для перорального введения. Порошки, диспергируемые порошки или гранулы, пригодные для приготовления водной суспензии путем добавления воды, являются удобными лекарственными формами для перорального применения. Композиции в виде суспензий предоставляют активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим веществом, суспендирующим веществом и одним или более консервирующими веществами. Подходящими суспендирующими веществами являются, например, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, альгинат натрия и т.п. Парентеральные композиции. Фармацевтическая композиция также может быть введена парентерально с помощью инъекции,инфузии (вливания) или имплантации (внутривенной, внутримышечной, подкожной и т.п.) в виде лекар- 19024465 ственных форм, композиций или с помощью подходящих устройств для доставки или имплантов, содержащих общепринятые, нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и адъюванты. Состав и приготовление таких композиций хорошо известны специалистам в данной области техники. Композиции для парентерального применения могут предоставляться в стандартных лекарственных формах (например, в ампулах с одной дозой) или во флаконах, содержащих несколько доз, в которые может быть добавлено подходящее консервирующее вещество (смотри ниже). Композиция может быть в виде раствора, суспензии, эмульсии, устройства для инфузии или имплантируемого устройства для доставки или она может быть представлена в виде сухого порошка, который необходимо разбавлять водой или другим подходящим носителем перед применением. Помимо активного лекарственного средства(средств) композиция может включать подходящие парентерально приемлемые носители и/или эксципиенты. Активное лекарственное средство(а) может быть заключено в микросферы, микрокапсулы, наночастицы, липосомы или т.п. для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, повышающие растворимость, стабилизирующие вещества, средства, регулирующие рН,и/или диспергирующие вещества. Фармацевтические композиции согласно изобретению могут иметь форму, пригодную для стерильных инъекций. Для приготовления такой композиции подходящее лекарственное средство(а) растворяют или суспендируют в парентерально приемлемом жидком разбавителе. К числу приемлемых разбавителей и растворителей, которые можно использовать, относятся вода, вода, отрегулированная до подходящего значения рН добавлением соответствующего количества соляной кислоты, гидроксида натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиол, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Водная композиция может содержать одно или более консервирующих веществ (например, метил, этил или нпропил р-гидроксибензоат). В тех случаях, когда одно из лекарственных средств является труднорастворимым или слаборастворимым в воде, можно добавить вещества, увеличивающие растворимость, или солюбилизирующие вещества, или растворитель может содержать 10-60% об./об. пропиленгликоля или т.п. Парентеральные композиции с контролируемым высвобождением могут иметь форму водных суспензий, микросфер, микрокапсул, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий или эмульсий. Альтернативно, активное лекарственное средство(а) может быть заключено в биосовместимые носители, липосомы, наночастицы, импланты или инфузионные устройства. Используемыми материалами для приготовления микросфер и/или микрокапсул являются, например, биодеградируемые/биоразлагаемые полимеры, такие как полигалактин, поли-(изобутилцианоакрилат), поли(2 гидроксиэтил-L-глутамин). Биосовместимыми носителями, которые можно использовать при создании парентеральных композиций с контролируемым высвобождением, являются углеводороды (например,декстраны), белки (например, альбумин), липопротеины или антитела. В имплантатах могут использоваться небиодеградируемые материалы (например, полидиметилсилоксан) или биодеградируемые материалы (например, поли(капролактон), поли(гликолевая кислота) или поли(ортоэфиры. Ректальные композиции. Подходящие лекарственные формы композиций для ректального применения включают суппозитории (типа эмульсий или суспензий) и ректальные желатиновые капсулы (растворы или суспензии). В типичных составах для суппозиториев активное лекарственное средство(а) объединяют с подходящей фармацевтически приемлемой основой, такой как масло какао, этерифицированные жирные кислоты,глицеринизированный желатин и различные водорастворимые или диспергируемые основы, подобные полиэтиленгликолям. В состав можно вводить различные добавки, усилители или поверхностноактивные вещества. Композиции для подкожного и местного введения. Фармацевтические композиции также могут применяться местно на коже для впитывания через кожу в лекарственных формах или составах, содержащих стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, включая микросферы и липосомы. Композиции включают кремы,мази, лосьоны, линименты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, карандаши, спреи, пасты, пластыри и другие разновидности систем чрескожной доставки лекарственного средства. Фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты могут включать эмульгирующие вещества, антиоксиданты, буферные вещества, консервирующие вещества, увлажняющие вещества, способствующие всасыванию вещества,хелатирующие агенты, гелеобразующие вещества, мазевые основы, ароматизирующие вещества и вещества, защищающие кожу. Эмульгирующие вещества могут быть камедями природного происхождения (например, аравийской камедью или трагакантовой камедью). Консервирующие вещества, увлажняющие и способствующие всасыванию вещества могут представлять собой парабены, такие как метил или пропил р-гидроксибензоат, и бензалконий хлорид, глицерин, пропиленгликоль, мочевину и т.д. Описанные выше фармацевтические композиции для местного применения на коже также могут использоваться в случае местного введения в или близко к части организма, которую необходимо лечить. Композиции могут быть приспособлены для прямого нанесения или нанесения с помощью специальных устройств для доставки лекарственного средства, таких как перевязочный материал, или альтернативно в виде пластырей, прокладок, губок, полосок или других форм из подходящего эластичного материала. Дозировки и продолжительность лечения. Следует принимать во внимание, что лекарственные средства комбинации могут вводиться одновременно, в одной и той же или в другой фармацевтической композиции или последовательно, одно за другим. При последовательном введении задержка при введении второго (или дополнительного) активного ингредиента не должна быть такой, чтобы потерять полезный эффект комбинации активных ингредиентов. Минимальное требование в отношении комбинации согласно этому описанию заключается в том, что комбинация должна предназначаться для комбинированного использования, принимая во внимание преимущество эффективного действия комбинации активных ингредиентов. О предполагаемом использовании комбинации можно судить по оснащению, приспособлениям, устройствам и/или другим средствам, помогающим использовать комбинацию согласно изобретение. Хотя активные лекарственные средства настоящего изобретения могут быть введены в разделенных на части дозах, например, два или три раза в день, предпочтительной является одна ежедневная доза каждого лекарственного средства в комбинации, при этом наиболее предпочтительной является одна ежедневная доза всех лекарственных средств в одной фармацевтической композиции (стандартная лекарственная форма). Термин "стандартная лекарственная форма" относится к физически раздельным единицам (таким как, капсулы, таблетки или заполненные цилиндры шприцов), пригодным в качестве единичных дозировок для людей, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного вещества или веществ, рассчитанное для получения желательного терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Введение может осуществляться от одного до нескольких раз в день, в течение от нескольких дней до нескольких лет, и может длиться даже в течение жизни пациента. В большинстве случаев будет требоваться постоянное или, по меньшей мере, периодически повторяющееся продолжительное введение. Кроме того, на используемые дозировки могут влиять фармакогеномные сведения (влияние генотипа на фармакокинетику, фармакодинамику или профиль эффективности терапевтического средства) о конкретном пациенте. За исключением случаев, когда в ответ на ухудшение болезни БА могут требоваться более высокие дозировки, предпочтительная дозировка каждого лекарственного средства в комбинации обычно заключается в пределах доз, не выше тех доз, которые обычно назначаются для продолжительного поддерживающего лечения, или безопасность которых подтверждена на 3 фазе клинических испытаний. Одно выдающееся преимущество изобретения состоит в том, что каждое соединение может использоваться при низких дозах в комбинированной терапии и наряду с этим давать в комбинации существенную клиническую пользу пациенту. Комбинированная терапия действительно может быть эффективна при использовании доз, которые не дают существенного эффекта в случае применения соединений по отдельности. Соответственно, отдельное преимущество изобретения заключается в возможности использовать субоптимальные дозы каждого соединения, т.е. дозы более низкие, чем обычно назначаемые терапевтические дозы, предпочтительно 1/2 терапевтических доз, более предпочтительно 1/3, 1/4, 1/5, или даже более предпочтительно от 1/10 до 1/100 терапевтических доз. Как правило, при таких субоптимальных дозировках соединения по отдельности неактивны, тогда как в комбинации(ях) согласно изобретению являются вполне эффективными. Предпочтительная дозировка соответствует количествам от 1 до 50% от количеств, обычно назначаемых для продолжительного поддерживающего лечения. Наиболее предпочтительные дозировки могут соответствовать количествам от 1 до 10% от обычно назначаемых при продолжительном поддерживающем лечении. Конкретные примеры дозировок, использованных в изобретении, предоставляются ниже: аминокапроновая кислота примерно от 0,05 до 15 г в день; левосимендан от 0,05 до 4 мг в день; амлодипин перорально примерно от 0,05 до 1 мг в день; клопидогрел перорально примерно от 0,75 до 7,5 мг в день; тадалафил перорально примерно от 0,05 до 0,5 мг в день; цилостазол перорально примерно от 1 до 10 мг в день; тербинафин перорально примерно от 2,5 до 25 мг один раз или два раза в день; лефлуномид перорально примерно от 0,25 до 2,5 мг в день; цинакалцет перорально примерно от 0,3 до 3 мг в день; акампросат перорально примерно от 7 до 70 мг три раза в день; метимазол перорально примерно от 0,05 до 1,5 мг в день; мепакрин перорально примерно от 3 до 30 мг в день; фенформин перорально примерно от 0,5 до 5 мг в день; баклофен перорально примерно от 0,4 до 8 мг в день, введенные в два или три приема; рифабутин перорально примерно от 6 до 60 мг в день; амобарбитал перорально примерно от 0,06 до 15 мг в день; цефотетан перорально примерно от 0,01 до 0,4 мг в день; дифиллин перорально примерно от 6 до 60 мг в день, разделенные на две или три дозы; метиклотиазид перорально примерно от 0,025 до 1 мг в день; ризедронат перорально примерно от 0,05 до 3 мг в день; этомидат перорально примерно от 0,6 до 6 мг в день; зонисамид перорально примерно от 1 до 40 мг в день. Следует понимать, что количество вводимого лекарственного средства будет определяться врачом в свете соответствующих обстоятельств, включая состояние или состояния, которые необходимо лечить,конкретной вводимой композиции, возраст, вес и ответ отдельного пациента, тяжесть симптомов у пациента и выбранный способ введения. Поэтому вышеуказанные пределы дозировок даются в целях общего руководства и поддержки изложенных в описании идей, но не предназначаются для ограничения рамок изобретения. Следующие примеры приводятся с целью иллюстрации, но не для ограничения. ПримерыI. Соединения и их комбинации предотвращают токсичность пептида A25-35. В этой первой серии экспериментов соединения-кандидаты были проверены в отношении их способности предотвращать или уменьшать токсические эффекты пептида A25-35. Сначала лекарственные средства проверили по отдельности, а затем исследовали их комбинированное действие. Действие проверяли на разных типах клеток для того, чтобы дополнительно проиллюстрировать активность соединений. При болезни Альцгеймера АРР-белок образует агрегаты нерастворимых -складчатых конформаций фибриллярного Абета-белка (амилоид). Конформационное изменение от растворимых до фибриллярных форм, по-видимому, является спонтанным явлением, которое увеличивается при более высоких концентрациях Абета, так что любая выработка больших, чем в норме, количеств Абета (или производство более крупных, менее растворимых форм Абета) будет приводить к увеличению образования бляшек. Как только бляшка Абета начинает формироваться, с ней могут взаимодействовать другие молекулы, что дает окончательно созревшую бляшку вместе с окружающей ее областью гибнущих нейронов. Принимая это во внимание, авторы уделили первостепенное значение исследованию действия лекарственных средств на выживаемость клеток, подвергнутых действию амилоидногобелка.I.1. Исследование защиты от токсичности A25-35 пептида на корковых нейронах. Культура клеток. Первичные корковые нейроны крыс культивировали, как описано в Singer et al., 1999. Коротко, беременных самок крыс с 15-дневной беременностью забивали смещением шейных позвонков (крысы Wistar; Janvier) и извлекали плоды из матки. Кору удаляли и помещали в ледяную среду Leibovitz (L15; Invitrogen), содержащую 1% пенициллина-стрептомицина (PS; Invitrogen) и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA; Sigma). Кору трипсинизировали в течение 20 мин при 37 С (трипсин ЭДТА 1X; Invitrogen) разводили в PBS без кальция и магния. Реакцию останавливали добавлением модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM; Invitrogen), содержащей ДНКазу I степень очистки II (0,1 мг/мл;Roche Diagnostic) и 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FCS; Invitrogen). Затем клетки механически разъединяли, пропустив три раза через 10-мл пипетку. Затем клетки центрифугировали при 180g в течение 10 мин при 10 С. Супернатант отбрасывали, а клетки из осадка ресуспендировали в определенной культуральной среде, состоящей из Neurobasal (Invitrogen) с добавлением В 27 (2%; Invitrogen), Lглутамина (0,2 мМ; Invitrogen), 1% PS раствора и 10 нг/мл полученного из мозга нейротрофического фактора (BDNF, Pan Biotech). Жизнеспособные клетки подсчитывали с помощью цитометра Neubauer,используя тест вытеснения трипанового синего. Клетки высевали при плотности 30000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты (лунки предварительно покрывали поли-L-лизином (10 мкг/мл; Sigma и культивировали при 37 С во влажной воздушной (95%)/СО 2 (5%) атмосфере. Через 6 дней культивирования клетки инкубировали с лекарственными средствами (5 концентраций). Через 1 ч клетки подвергали интоксикации с помощью 20 мкМ бета-амилоида (25-35; Sigma) в определенной среде без BDNF, но вместе с лекарственными средствами. Корковые нейроны подвергали интоксикации в течение 2 дней. На одно условие эксперимента было взято две независимые культуры, 6 лунок на условие. Количественная оценка длины нейритов. Клетки фиксировали холодным раствором этанола (95%) и уксусной кислоты (5%) в течение 10 мин. После пермеабилизации с помощью 0,1% сапонина клетки блокировали в течение 2 ч с помощьюPBS, содержащего 10% козьей сыворотки. Затем клетки инкубировали с моноклональными антителами к связанному с микротрубочками белку 2 (МАР-2; Sigma). Эти антитела специфически обнаруживают клеточные тела (протопласты) и нейриты. В качестве вторичных антител использовали Alexa Fluor 488 козьи анти-мышь IgG (Molecular probe). Ядра нейронов выявляли с помощью флуоресцентного красителя (раствор Хекста, SIGMA). Делали двадцать изображений на лунку, используя анализатор InCell AnalyzerTM 1000 (GE Healthcare) при увеличении 20. Все изображения были сделаны в одинаковых условиях. Длину нейритов измеряли с помощью программного обеспечения Developer (GE Healthcare). Результаты. Представленные на фиг. 1 результаты получены от двух независимых культур, 6 лунок на условие. Все значения выражены как среднеестандартная ошибка среднего. Двусторонний t-критерий Стьюдента проводился на первичных данных. Результаты выражены в процентах длины нейритов по сравнению с контролем (разбавитель). Первичные корковые нейроны крыс инкубировали с лекарственными средствами 1 ч до интоксикации Абета 25-35 20 мкМ, которая продолжалась 2 дня (36). Через два дня после инкубации измеряли длину сети нейритов, что отражало рост аксонов клетки. Результаты показали, что протестированные лекарственные средства явно оказывают нейропротекторное действие против интоксикации Абета 25-35 (фиг. 1 и 2).I.2. Исследование защиты от токсичности пептида A25-35 на эндотелиальных клетках мозга. Культура клеток. Прежде всего, культуру эндотелиальных клеток мозга крыс (Vect-Horus SAS, Marseille) культивировали с пассажа 0. После слияния эндотелиальные клетки обрабатывали трипсин-ЭДТА (Pan BiotechRef: P10-023100). Клетки высевали при плотности 25000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты (лунки предварительно покрывали 30 мкл крысиного коллагена I типа при 1,5 мг/мл, Vect-Horus SAS, Marseille) и культивировали в среде MCBD 131 (М-131-500, Invitrogen) с добавлением 1% среды для роста микрососудов (MVGS, S-005-25, Invitrogen). Клетки культивировали при 37 С во влажной воздушной(95%)/СО 2 (5%) атмосфере. Раз в двое суток половину среды заменяли свежей средой. Через 4 дня к среде в культуры клеток добавили лекарственные средства в разных концентрациях,растворенные в DMSO 0,1% или воде. В течение 1 ч проводили предварительную инкубацию в культуральной среде, содержащей модифицированную по способу Дульбекко среду Игла (DMEM, Pan BiotechRef: P04-03600) с добавлением 2% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS; Invitrogen ref: 16000-036), 1%L-глутамина (Pan Biotech ref: P04-80100), 1% пенициллина-стрептомицина (PS; Pan Biotech ref: P0607100), 0,1 мг/мл гепарина (Sigma), 10 нг/мл эпидермального фактора роста (EGF, Invitrogen) и 10 нг/мл фактора роста эндотелия сосудов (VEGF, PHG0146, Invitrogen). Затем клетки подвергали интоксикации с помощью 30 мкМ -амилоида (25-35; Sigma) вместе с лекарственными средствами в той же самой культуральной среде. Далее интоксикацию клеток проводили в течение 3 дней. Метод исследования активности лактатдегидрогеназы (LDH). Через 3 дня интоксикации в каждой культуре собирали супернатант и анализировали с помощью набора Cytotoxicity Detection Kit (LDH, Roche Applied Sciences). Этот колориметрический анализ с целью определения количества клеточной смерти основывается на измерении активности лактатдегидрогеназы(LDH), высвобождаемой из поврежденных клеток в супернатант. Оптическую плотность (DO) измеряли с помощью многорежимного спектрофотометра (Thermo, Ref Ascent) при длине волны 492 нм. Результаты. Представленные на фиг. 3 результаты получены от двух независимых культур, 6 лунок на условие. Все значения выражены как среднеестандартная ошибка среднего. Двусторонний t-критерий Стьюдента проводился на первичных данных. Результаты выражены в процентах жизнеспособности клеток по сравнению с отрицательным контролем (разбавитель). Первичные крысиные эндотелиальные клетки мозга инкубировали с лекарственными препаратами 1 ч до интоксикации А 25-35 30 мкМ, которая продолжалась 3 дня. Через три дня после интоксикации измеряли высвобождение LDH в культуральную среду, что отражало уровень гибели клеток. Полученные результаты явно показали, что протестированные соединения оказывают сильное защитное действие против интоксикации А 25-35 (фиг. 3).I.3. Исследование защиты от токсичности А 25-35 пептида на клетках феохромоцитомы. Культура клеток РС 12. Клетки PC12 (феохромоцитома крыс, АТСС ref: CRL-1721) от АТСС (АТСС CRL-1721) быстро размораживали в теплой воде 37 С. Супернатант сразу помещали в 9 мл среды для пролиферации PC12,содержащей модифицированную по способу Дульбекко среду Игла DMEM-F12 (Pan Biotech ref: P0441450) с 15% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки (Invitrogen ref: 16050-130), 2,5% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS; Invitrogen ref: 16000-036), 1% пенициллина 10.000U/мл и стрептомицина 10 мг/мл (PS; Pan Biotech ref: P06-07100) и 1% L-глутамина 200 мМ (Pan Biotech ref: P04-80100). Клетки центрифугировали (800 об/мин, 4 С в течение 5 мин) и поместили в 5 мл среды для пролиферации PC12, жизнеспособные клетки подсчитывали вместе с клетками Малассе с помощью теста исключения нейтрального красного (Sigma). Затем клетки высевали с плотностью 3104 клеток на 1 см 2 в среду для пролиферации РС 12 в 75 см 2 пластиковые флаконы (Greiner Ref: 658175) предварительно покрытые поли-L-лизином (10 мкг/мл, SigmaRef: P2636). Среду меняли через день. Через 3 дня культивирования, когда клетки достигали 80% слияния, их промывали HBSS без кальция и магния (Pan Biotech Ref: P06-33500) и инкубировали в трипсин-ЭДТА(0,05%, Pan Biotech Ref: P10-023100). Ферментативную реакцию останавливали с помощью среды для пролиферации PC12 с добавлением 0,5 мг/мл ДНКазы 1 степени очистки 2 (Pan Biotech Ref: T6037780100). Затем PC12 центрифугировали (800 об/мин при 4 С в течение 10 мин) и рассевали клетки при плотности 2.9104 на 1 см 2 в 175 см 2 культуральные флаконы (Greiner Ref: 661195), предварительно покрытые поли-L-лизином. Интоксикация и МТТ тест на жизнеспособность. Клетки PC12 (пассаж 2) высевали, исходя из плотности 3300 клеток на 1 см 2, в 96-луночные планшеты (Greiner Ref: 655 180), предварительно покрытые поли-L-лизином (Sigma), в среде Neurobasal (Invitrogen, Ref: 21103049), содержащей В 27 (2%, Invitrogen, Ref: 21103049), пенициллин (50 U/мл)стрептомицин (50 мкг/мл) и глутамин (1%) и 50 нг/мл NGF (Sigma Ref: N1408). NGF дает возможность РС 12 дифференцироваться подобно симпатическим нейронам. Через 5 дней культивирования среду заменяли на Neurobasal с добавлением NGF (50 нг/мл), В 27 без антиоксиданта, глютамина и антибиотиков. Через 24 ч клетки инкубировали в течение 1 ч с лекарственными средствами в 5 концентрациях, 6 лунок на условия. Через 1 ч предварительной инкубации клетки подвергали интоксикации 10 мкМ бета-амилоида (25-35; Sigma) вместе с лекарственными средствами в культуральной среде. Через 24 ч клетки один раз промывали PBS (Pan Biotech, Ref: Р 04-36100) и оценивали выживаемость PC12 клеток с помощью теста на выживаемость с использованием МТТ (3-[4,5 диметилтиазол-2-ил]-2,5 дифенилтетразолий бромида). Культура клеток нейронов мозга. Первичные нейроны мозга крыс культивировали, как описано Singer et al., 1999. Коротко, беременных самок крыс с 15-дневной беременностью забивали смещением шейных позвонков (крысы Wistar;Janvier) и извлекали плоды из матки. Кору удаляли и помещали в ледяную среду Leibovitz (L15; Invitrogen), содержащую 1% пенициллина-стрептомицина (PS; Invitrogen) и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA; Sigma). Кору трипсинизировали в течение 20 мин при 37 С (трипсин ЭДТА 1X; Invitrogen) разводили в PBS без кальция и магния. Реакцию останавливали добавлением модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM; Invitrogen), содержащей ДНКазу I степень очистки II (0,1 мг/мл;Roche Diagnostic) и 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FCS; Invitrogen). Затем клетки механически разъединяли, пропустив три раза через 10-мл пипетку. Затем клетки центрифугировали при 180g в течение 10 мин при 10 С. Супернатант отбрасывали, а клетки из осадка ресуспендировали в культуральной среде, состоящей из Neurobasal (Invitrogen) с добавлением В 27 (2%; Invitrogen), L-глутамина (0,2 мМ;Invitrogen), 1% PS раствора и 10 нг/мл полученного из мозга нейротрофического фактора (BDNF, PanBiotech). Жизнеспособные клетки подсчитывали с помощью цитометра Neubauer, используя тест вытеснения трипанового синего. Клетки высевали при плотности 30000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты(лунки предварительно покрывали поли-L-лизином (10 мкг/мл; Sigma и культивировали при 37 С во влажной воздушной (95%)/СО 2 (5%) атмосфере. Через 6 дней культивирования клетки инкубировали с лекарственными средствами (5 концентраций). Через 1 ч клетки подвергали интоксикации с помощью 20 мкМ бета-амилоида (25-35; Sigma) в среде без BDNF, но вместе с лекарственными средствами. Корковые нейроны подвергали интоксикации в течение 2 дней. Исследование активности лактатдегидрогеназы (LDH). Через 2 дня культивирования супернатант собирают и анализируют с помощью набора CytotoxicityDetection Kit (LDH, Roche Applied Sciences). Этот колориметрический анализ с целью количественного определения клеточной смерти основывается на измерении активности лактатдегидрогеназы (LDH), высвобождаемой из поврежденных клеток в супернатант. Оптическую плотность (DO) измеряли с помощью многорежимного спектрофотометра (Thermo, Ref Ascent) при длине волны 492 нм. Результаты выражены в процентах жизнеспособности клеток по сравнению с отрицательным контролем (разбавитель). Результаты. Результаты, представленные на фиг. 4 и 5, получены от двух независимых культур, 6 лунок на условие. Все значения выражены как среднеестандартная ошибка среднего. Двусторонний t-критерий Стьюдента проводился на первичных данных. Результаты выражены в процентах жизнеспособности клеток по сравнению с отрицательным контролем (разбавитель).NGF-дифференцированные клетки PC12 инкубировали с лекарственными средствами 1 ч перед проведением интоксикации Абета 25-35 10 мкМ, которая продолжалась 24 ч. Через день после инкубации жизнеспособность дифференцированных с помощью NGF- РС 12 клеток определяли с помощью МТТ-теста. Результаты явно показывают, что прилокаин и амлодипин проявляют сильное нейропротекторное действие против интоксикации Абета 25-35 (фиг. 4). Первичные нейроны мозга крыс также инкубировали с соединениями изобретения 1 ч перед интоксикацией А 25-35 20 мкМ, которая продолжалась 2 дня. Через 2 дня после этой инкубации измеряли вы- 24024465 свобождение LDH в культуральную среду, что отражало уровень гибели клеток. Полученные результаты показывают, что соединения проявляют сильное нейропротекторное действие против интоксикации Абета 25-35 (фиг. 5).I.4. Действие (активность) лекарственных комбинаций. Кроме того, были проведены исследования in vitro нескольких комбинаций лекарственных средств,модулирующих функцию синапса и/или ангиогенез и/или ответ клетки на стресс. Инкубацию с лекарственными средствами проводили в тех же самых экспериментальных условиях,как описано выше (смотри разделы I.1-I.3). Наиболее эффективно действующие на мишени лекарственные комбинации суммированы в табл. 2. Таблица 2+ Показывает положительное нейропротекторное действие от интоксикации А 25-35.II. Соединения предотвращают токсичность человеческого А 1-42. В этих дополнительных сериях экспериментов соединения-кандидаты были проверены в отношении их способности предотвращать или уменьшать токсические эффекты человеческого А 1-42. А 1-42 представляет собой полноразмерный пептид, который образует агрегаты, видимые в биопсийном материале людей-пациентов, пораженных болезнью Альцгеймера. Сначала лекарственные средства протестировали по отдельности, а затем изучали их комбинированное действие. Эффект определяли на разных типах клеток, чтобы дополнительно подтвердить активность соединений.II.1. Защита от токсичности А 1-42 на модели эндотелиальных клеток микрососудов мозга человека. Для исследования защитных возможностей упомянутых выше соединений-кандидатов от токсичности А 1-42 использовали культуры эндотелиальных клеток микрососудов мозга человека. Эндотелиальные клетки микрососудов мозга человека (НВМЕС, ScienCell Ref: 1000, замороженные на 10 пассаже) быстро разморозили в водяной бане при +37 С, Супернатант сразу поместили в 9 мл модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM; Pan Biotech ref: P04-03600), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FCS; GIBCO ref 10270-106). Суспензию клеток центрифугировали при 180g в течение 10 мин при +4 С, а осадки ресуспендировали в среде CSC без сыворотки (CSC без сыворотки, Cell System, Ref: SF-4Z0-500-R, Batch 51407-4) с 1,6% RocketFuel без сыворотки (Cell System, Ref: SF-4Z0-500-R, Batch 54102), 2% пенициллина 10.000 U/мл и стрептомицина 10 мг/мл (PS; PanBiotech ref: P06-07100 batch 133080808) и высевали при плотности 20000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты (система для ангиогенеза matrigel layer biocoat angiogenesis system, BD, Ref 354150, BatchA8662) в окончательном объеме 100 мкл. На matrigel (матричной гелевой) подложке эндотелиальные клетки мозга спонтанно начинали процесс морфогенеза капиллярной сети (47). На условие было взято три отдельных культуры, 6 лунок на условие. Соединения-кандидаты и обработка человеческим амилоидом-1-42. Коротко, А 1-42 пептид (Bachem, ref: H1368 batch 1010533) был восстановлен в определенной культуральной среде при 20 мкМ (материнский раствор), затем его медленно встряхивали при +37 С в течение 3 дней в темноте для агрегации. Контрольную среду приготавливали в тех же самых условиях. Через 3 дня этот агрегированный человеческий амилоидный пептид, разведенный в контрольной среде до 2,5 мкМ, вносили к НВМЕС (оптимальное время инкубации). Пептид А 1-42 добавляли через 2 ч после высевания НВМЕС на матрицу matrigel для инкубирования в течение 18 час. Через один час после высевания НВМЕС на матрицу matrigel, тестируемые соединения и VEGF-165 растворили в культуральной среде (+0,1% DMSO) и затем предварительно инкубировали с НВМЕС в течение 1 ч до внесения А 1-42 (в окончательном объеме 100 мкл на культуральную лунку). Через 1 ч инкубации с тестируемыми соединениями или VEGF (через 2 ч после высевания клеток на матрицуmatrigel), добавили 100 мкл разведенного в контрольной среде пептида А 1-42 до окончательной концентрации 2,5 мкМ в присутствии тестируемых соединений или VEGF (в общем объеме 200 мкл на лунку),во избежание дополнительных разбавлений лекарственного средства. Постановка культуры на планшетах. В качестве контрольного соединения во всех экспериментах в данном исследовании использовалиVEGF-165, известный как проангиогенная изоформа VEGF-A. VEGF-165 является одной из наиболее распространенных изоформ VEGF, участвующих в ангиогенезе. VEGF использовали как контрольное соединение при концентрации 10 нМ. Были оценены следующие условия: Отрицательный контроль: только среда + 0,1% DMSO; Интоксикация: амилоид-1-42. (2,5 мкМ) в течение 18 ч; Положительный контроль: VEGF-165 (10 нМ) (1 контрольное соединение/культура) 1 ч до добавления А 1-42 (2,5 мкМ) на 18 ч инкубации; Тестируемые соединения: тестируемое соединение за 1 ч до добавления А 1-42 (2.5 мкМ) (2,5 мкМ) на 18 ч инкубации. Количественная оценка капиллярной сети. Делали по 2 изображения на лунку, используя объектив с увеличением 4, с помощью клеточного анализатора In Cell AnalyzerTM 1000 (GE Healthcare) при пропускании света. Все изображения были сделаны в одинаковых условиях. Анализ ангиогенеза проводили с помощью программного обеспечения Developer (GE Healthcare). Была оценена общая длина капиллярной сети. Обработка данных. Все значения были выражены как среднеестандартная ошибка среднего от 3 культур (n = 6 на условие). Статистический анализ проводили при различных условиях, используя ANOVA с последующим тестом Дуннетта, когда была возможность (Statview software version 5.0). Значения (в виде %) наносили на графики, показывающие рост токсичности амилоида. Токсичность амилоида была принята за 100%, а эффект тестируемого соединения подсчитывали в виде % от токсичности амилоида. Результаты. Результаты показаны на фиг. 6 и в табл. 3. Как видно из представленных результатов, лекарственные средства по отдельности оказывают существенное защитное действие от токсичности, вызванной пептидом А 1-42: аминокапроновая кислота, отдельно, в низкой дозе, например, 160 нМ, оказывает сильное защитное действие; левосимендан в дозе до 8 нМ оказывает сильное защитное действие.II.2 Исследование защиты от токсичности А 1-42 на первичных корковых нейронах. Тестируемые соединения и обработка человеческим амилоидом-1-42. Первичные нейроны крыс культивировали, как описано ранее. Коротко, петид А 1-42 восстанавливали в определенной культуральной среде при 40 мкМ (материнский раствор) и медленно встряхивали при +37 С в течение 3 дней в темноте для агрегации. Контрольную среду готовили в тех же самых условиях. Через 3 дня раствор использовали на первичных корковых нейронах, как указано далее. Через 10 дней культивирования нейронов лекарственное средство растворили в культуральной среде (+0,1 % DMSO) и затем предварительно инкубировали с нейронами в течение 1 ч до внесения А 1-42 (в окончательном объеме 100 мкл на культуральную лунку). Через 1 ч инкубации с лекарственным средством добавили 100 мкл пептида А 1-42 до окончательной концентрации 10 мкМ в присутствии лекарственного средства, чтобы избежать дополнительного разбавления лекарственного средства. Коровые нейроны подвергали интоксикации в течение 24 ч. Три отдельные культуры брали на условие, 6 лунок на условие. В качестве положительного контроля и эталонного соединения использовали BDNF (50 нг/мл) и эстрадиол- (100 и 150 нМ) соответственно. Три отдельные культуры брали на условие, 12 лунок на усло- 27024465 вие. Постановка культуры на планшетах. В качестве эталонного соединения использовали эстрадиол- при 100 и 150 нМ, а в качестве положительного контроля использовали BDNF при 50 нг/мл. Эстрадиол- и BDNF растворяли в культуральной среде и предварительно инкубировали 1 ч до внесения агрегированного амилоида-1-42. Были оценены следующие условия:- 1 контрольная бляшка: 12 лунок/условие; Отрицательный контроль: только среда + 0,1% DMSO; Интоусикация: амилоид-А 1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч; Положительный контроль: BDNF (50 нг/мл) 1 ч, а затем амилоид-1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч; Контрольное соединение: эстрадиол (150 нМ) 1 ч, а затем амилоид-1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч; Планшет с лекарственным средством: 6 лунок/условие; Отрицательный контроль: только среда + 0,1% DMSO; Интоусикация: амилоид-1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч; Лекарственное средство 1: лекарственное средство 1 - 1 ч, а затем амилоид-1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч; Лекарственное средство 2: лекарственное средство 2 - 1 ч, а затем амилоид-1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч. Исследование активности лактатдегидрогеназы (LDH). Через 24 ч после интоксикации отбирали супернатант и проводили анализ с помощью набора Cytotoxicity Detection Kit (LDH, Roche Applied Science, ref: 11644793001, batch: 11800300). Этот колориметрический анализ с целью определения токсичности на клетки основывается на измерении активности лактатдегидрогеназы (LDH), высвобождаемой из цитозоля погибших клеток в супернатант. Обработка данных. Все значения были выражены как среднеестандартная ошибка среднего от 3 культур (n = 6 на условие). Статистический анализ проводили при различных условиях (ANOVA с последующим тестом Дуннетта, когда была возможность, Statview software version 5.0). Результаты. В табл. 3 и на фиг. 7 представлены результаты, полученные для отдельных отобранных лекарственных средств при исследовании токсичности на первичные корковые нейроны. Таблица 3