Кристаллические формы фенилацетата l-орнитина и их применение

КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ ФОРМЫ ФЕНИЛАЦЕТАТА L-ОРНИТИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Изобретение относится к кристаллическим формам фенилацетата L-орнитина, которые представляют собой формы I, II и III. Кристаллические формы могут быть введены в составы фармацевтических композиций для лечения или ослабления интенсивности симптомов гипераммониемии. Андерсон Кит, Белинг Джим (US),Дуган Кристин Хендерсон, Уотт Стефен Уилльям (GB), Манини Петер,Фиджини Аттилиа (CH) Медведев В.Н. (RU) Область техники Настоящая заявка относится к областям фармацевтической химии, биохимии и медицины. В частности, она относится к фенилацетатным солям L-орнитина и способам получения и применения вышеуказанных солей. Известный уровень техники Гипераммониемия является маркером заболевания печени и характеризуется присутствием избытка аммиака в кровотоке. Печеночная энцефалопатия - основное клиническое следствие прогрессирующей гипераммониемии и представляет собой сложный нервно-психиатрический синдром, который может усугубить острую или хроническую печеночную недостаточность. Это заболевание характеризуется изменениями в психическом состоянии, включая широкий диапазон нервно-психиатрических симптомов,начиная от малых симптомов изменения функций мозга до проявления явных психиатрических и/или неврологических симптомов, или даже глубокой комы. Накопление неметаболизированного аммиака рассматривалось как основной фактор, вовлеченный в патогенез печеночной энцефалопатии, но и другие дополнительные механизмы могут быть задействованы. Для лечения гипераммониемии и печеночной энцефалопатии в настоящее время используются имеющиеся в распоряжении моногидрохлорид L-орнитина и другие соли L-орнитина. Например, в публикации заявки на патент США 2008/0119554, которая входит в настоящее описание в полном объеме в виде ссылки, описываются композиции L-орнитина и фенилацетата для лечения печеночной энцефалопатии. L-орнитин получали способами ферментативного превращения. Например, в патентах США 5405761 и 5591613, каждый из которых включен в настоящее описание в полном объеме в виде ссылки,описывается ферментативное превращение аргинина с получением солей L-орнитина. Фенилацетат натрия коммерчески доступен и, кроме того, доступен в виде инъецируемого раствора для лечения острой гипераммониемии. Инъецируемый раствор доступен на рынке под торговой маркой AMMONUL. Несмотря на то что солевые формы могут обладать хорошей устойчивостью к разложению, некоторые соли, в частности соли натрия или хлорида, могут быть неприемлемы для их применения при лечении пациентов, имеющих заболевания, связанные с заболеванием печени, таким как печеночная энцефалопатия. Например, высокий уровень поступления натрия в организм может быть опасным для пациентов с циррозом, подверженных асцитам, перегрузке жидкостью и электролитным дисбалансам. Аналогично, некоторые соли создают трудности для их введения внутривенным путем из-за повышенного осмотического давления, т.е. их раствор является гипертоническим. Для внутривенного введения раствор с высоким содержанием избыточного натрия может требовать значительного разбавления, что, в свою очередь, ведет к чрезмерной перегрузке жидкостью. Следовательно, существует потребность в получении солей L-орнитина и фенилацетата, которые были бы благоприятны для лечения печеночной энцефалопатии или других состояний, в которых перегрузка жидкостью и электролитный дисбаланс являются преобладающими. Краткое изложение существа изобретения Настоящее изобретение относится к кристаллической форме (II) фенилацетата L-орнитина, которая характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей по меньшей мере три характерных пика, выбранных из группы, состоящей из приблизительно 6,0, 13,9, 14,8, 17,1, 17,8 и 24,1 2. В предпочтительном варианте указанная кристаллическая форма характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характерные пики при углах 2 приблизительно 6,0,13,9, 14,8, 17,1, 17,8 и 24,1. Охарактеризованная выше кристаллическая форма (II) имеет точку плавления около 202 С. В предпочтительном варианте указанная кристаллическая форма (II) характеризуется согласно рентгеноструктурному кристаллографическому анализу монокристалла приблизительно следующими параметрами кристалла: размеры элементарной ячейки: а=6,594(2) , b=6,5448(18) , с=31,632(8) , =90, =91,12(3),=90; кристаллическая система: моноклинная и пространственная группа: P21. Охарактеризованная выше кристаллическая форма[C5H13N2O2][C8H7O2]. Ещ одним объектом изобретения является кристаллическая форма (I) фенилацетата L-орнитина,которая характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей по меньшей мере три характерных пика, выбранных из группы, состоящей из приблизительно 4,9, 13,2, 17,4, 20,8 и 24,4 2, и где указанная кристаллическая форма содержит молекулы воды и этанола. В предпочтительном варианте указанная кристаллическая форма (I) характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характерные пики при углах 2 приблизительно 4,9,13,2, 17,4, 20,8 и 24,4. Указанная кристаллическая форма содержит около 11 мас.% указанных молекул, определенных термогравиметрическим анализом, и характеризуется дифференциальной сканирующей калориметрией как имеющая эндотерму при температуре около 35 С. Охарактеризованная выше кристаллическая форма (I) дополнительно имеет точку плавления около 203 С. В предпочтительном варианте указанная кристаллическая форма (I) характеризуется согласно рентгеновскому кристаллографическому анализу монокристалла приблизительно следующими параметрами кристалла: размеры элементарной ячейки: а=5,3652(4) , b=7,7136(6) , с=20,9602(18) , =90, =94,986(6),=90; кристаллическая система: моноклинная и пространственная группа: P21. Охарактеризованная выше кристаллическая форма (I) представлена формулой [C5H13N2O2] [C8H7O2]EtOHH2O. Ещ одним другим объектом настоящего изобретения является кристаллическая форма (III) фенилацетата L-орнитина, которая характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей по меньшей мере 3 характерных пика, выбранных из группы, состоящей из приблизительно 5,8, 14,1,18,6, 19,4, 22,3 и 24,8 2. В предпочтительно варианте указанная кристаллическая форма характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характерные пики при углах 2 приблизительно 5,8, 14,1,18,6, 19,4, 22,3 и 24,8. В предпочтительном варианте указанная кристаллическая форма (III) характеризуется дифференциальной сканирующей калориметрией как имеющая эндотерму при около 40 С и дополнительно как имеющая точку плавления около 203 С. Ещ одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или ослабления интенсивности симптомов гипераммониемии у субъекта путем введения терапевтически эффективного количества кристаллической формы фенилацетата L-орнитина, где указанная кристаллическая форма выбрана из группы, состоящей из формы I, II и III, где указанная форма I характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, имеющей характерные пики при углах 2 приблизительно 4,9, 13,2, 17,4, 20,8 и 24,4, и где указанная форма I содержит молекулы воды и этанола; указанная форма II характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, имеющей характерные пики при углах 2 приблизительно 6,0, 13,9, 14,8, 17,1, 17,8 и 24,1; и указанная форма III характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, имеющей характерные пики при углах 2 приблизительно 5,8, 14,1, 18,6, 19,4,22,3 и 24,8. В предпочтительных вариантах осуществления указанного способа кристаллическая форма представляет собой форму I, II или III. В предпочтительном варианте осуществления указанного способа лечения по меньшей мере две кристаллические формы вводят приблизительно в одно и то же время. В предпочтительном варианте реализации настоящего способа лечения кристаллическую форму вводят от 1 до 3 раз в день. В другом предпочтительном варианте реализации настоящего способа лечения терапевтически эффективное количество находится в диапазоне от около 500 мг до около 50 г. В одном из вариантов осуществления предложенного выше способа лечения субъекта идентифицируют как пациента, страдающего печеночной энцефалопатией. В другом варианте осуществления предложенного выше способа лечения субъекта идентифицируют как пациента, страдающего гипераммониемией. Еще одним объектом настоящего изобретения является применение любой охарактеризованной выше кристаллической формы фенилацетата L-орнитина для получения фармацевтической композиции в форме водного раствора, содержащего терапевтически эффективное количество фенилацетата Lорнитина. Ещ одним вариантом настоящего изобретения является способ получения фармацевтической композиции в форме водного раствора, включающий растворение терапевтически эффективного количества любой охарактеризованной выше кристаллической формы фенилацетата L-орнитина в водном растворе. Ещ одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для лечения или ослабления интенсивности симптомов гипераммониемии у субъекта, содержащая терапевтически эффективное количество любой охарактеризованой выше кристаллической формы фенилацетата Lорнитина и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Краткое описание чертежей На фиг. 1 представлена порошковая рентгеновская дифрактограмма формы I. На фиг. 2 представлены результаты дифференциальной сканирующей калориметрии для формы I. На фиг. 3 представлены результаты термогравиметрического гравиметрического/дифференциального термического анализа формы I.-2 023051 На фиг. 4 представлен спектр 1 Н-ядерного магнитного резонанса, полученный для образца формы I. На фиг. 5 представлены результаты динамической сорбции паров для формы I. На фиг. 6 представлена порошковая рентгеновская дифрактограмма формы II. На фиг. 7 представлены результаты дифференциальной сканирующей калориметрии для формы II. На фиг. 8 представлены результаты термогравиметрического гравиметрического/дифференциального термического анализа формы II. На фиг. 9 представлен спектр 1 Н-ядерного магнитного резонанса, полученный для образца формыII. На фиг. 10 представлены результаты динамической сорбции паров для формы II. На фиг. 11 представлены порошковая рентгеновская дифрактограмма формы III. На фиг. 12 представлены результаты дифференциальной сканирующей калориметрии для формыIII. На фиг. 13 представлены результаты термогравиметрического гравиметрического/дифференциального термического анализа формы III. На фиг. 14 представлен спектр 1 Н-ядерного магнитного резонанса, полученный для образца формыIII. На фиг. 15 представлены результаты динамической сорбции паров для формы III. Подробное описание изобретения В настоящем описании раскрываются способы получения фенилацетатных солей L-орнитина и, в частности, кристаллических форм указанной соли. Эти способы позволяют осуществить крупномасштабное производство фармацевтически приемлемых форм фенилацетата L-орнитина, используя экономичные технологические процессы. Кроме того, раскрываются также кристаллические формы фенилацетата L-орнитина, включая формы I, II, III. Фенилацетатные соли L-орнитина позволяют внутривенное введение с пренебрежимо малой сопутствующей нагрузкой натрия и, тем самым, позволяют минимизировать количество внутривенно вводимой жидкости, которое требуется. Настоящая заявка относится к новым кристаллическим формам фенилацетатных солей L-орнитина,а также способам получения и использования фенилацетатных солей L-орнитина. Соль преимущественно демонстрирует долговременную стабильность без существенных количеств натрия или хлорида. В результате этого фенилацетат L-орнитина, как предполагают, имеет улучшенный профиль безопасности в сравнении с другими солями L-орнитина и фенилацетата. Кроме того, фенилацетат L-орнитина демонстрирует более низкую тоничность в сравнении с другими солями и поэтому его можно вводить внутривенно при более высоких концентрациях. Следовательно, фенилацетат L-орнитина, как предполагают,имеет существенные клинические преимущества при применении его для лечения печеночной энцефалопатии. Настоящая заявка также относится к различным полиморфным формам фенилацетата L-орнитина. Существование различных кристаллических форм (полиморфизм) является отличительной особенностью некоторых молекул и молекулярных комплексов. Солевые комплексы, такие как фенилацетат Lорнитина, могут обусловливать образование различных твердых веществ, имеющих различные физические характеристики, такие как, например, точка плавления, рентгеновская дифрактограмма, дактилоскопия поглощения в инфракрасной области спектра и спектр ядерного магнитного резонанса (ЯМР). Различия в физических характеристиках полиморфных форм являются следствием ориентации и межмолекулярных взаимодействий расположенных рядом молекул (комплексов) в объеме твердого вещества. Следовательно, полиморфные формы могут представлять собой различные твердые вещества, выступающие в качестве одного и того же активного фармацевтического ингредиента, однако все же имеющие различные полезные и/или неблагоприятные физико-химические свойства в сравнении с другими формами в семействе полиморфных форм. Способ получения фенилацетатной соли L-орнитина. В настоящем описании раскрыт способ получения фенилацетатной соли L-орнитина. ФенилацетатL-орнитина можно получить, например, через промежуточную соль, такую как бензоат L-орнитина. Как показано на схеме 1, соль L-орнитина форулы I может быть подвергнута взаимодействию с бензоатной солью форулы II с получением промежуточного бензоата L-орнитина. Схема 1 Различные соли L-орнитина могут быть использованы в соединении форулы I, и поэтому X в формуле I может быть любым ионом, способным образовывать соль с L-орнитином, кроме бензойной кислоты или фенилуксусной кислоты. X может быть моноатомным анионом, таким как, но не ограничиваясь им, галогенид (например, фторид, хлорид, бромид, и иодид). X может быть также полиатомным анионом,таким как, но не ограничиваясь ими, ацетат, аспартат, формиат, оксалат, бикарбонат, карбонат, битрат,сульфат, нитрат, изоникотинат, салицилат, цитрат, тартрат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат,малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкаронат, сахарат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат,бензолсульфонат, п-толуолсульфонат, памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат), фосфат и т.п. В некоторых вариантах X представляет собой моновалентный ион. В некоторых вариантах X представляет собой хлорид. Аналогично, бензоатная соль форулы II особенно не ограничивают, и поэтому Y в формуле II может быть любым подходящим ионом, способным образовывать соль с бензойной кислотой. В некоторых вариантах Y может быть моноатомным катионом, таким как ион щелочного металла (например, Li+, Na+ и K+) и другими моновалентными ионами (например, Ag+). Y может быть также полиатомным катионом,таким как аммоний, L-аргинин, диэтиламин, холин, этаноламин, 1 Н-имидазол, троламин и т.п. В некоторых вариантах Y представляет собой неорганический ион. В некоторых вариантах Y представляет собой серебро. Многие другие возможные соли L-орнитина и бензойной кислоты могут быть использованы для соединений формул I и I, соответственно, и они могут быть легко получены специалистами средней квалификации в данной области (см., например, Bighley L.D., et al., "Salt forms of drugs and absorption," In:Swarbrick J., Horlan J.C., eds. Encyclopedia of pharmaceutical technology, Vol. 12. New York: Marcel Dekker,Inc. pp. 452-499, которая входит в настоящее описание в полном объеме в виде ссылки. Промежуточный бензоат L-орнитина (т.е. формула III) можно получить перемешиванием растворов, содержащих соединения формул I и II. В качестве примера, соединения форулы I и II могут быть по отдельности растворены в воде и диметилсульфоксиде (ДМСО) соответственно. Затем два раствора могут перемешиваться с тем, чтобы L-орнитин и бензойная кислота могли провзаимодействовать с получением соли форулы III. Альтернативно, два солевых соединения могут быть непосредственно растворены в одном растворе. В некоторых вариантах L-орнитин и бензойную кислоту растворяют в раздельных растворителях и затем перемешивают. В некоторых вариантах L-орнитин растворяют в водном растворе,бензойную кислоту растворяют в органическом растворителе и затем растворы L-орнитина и бензойной кислоты перемешивают. Неограничивающие примеры растворителей, которые могут быть использованы при смешении Lорнитина и бензоатных солей, включают ацетонитрил, диметилсульфоксид (ДМСО), циклогексан, этанол, ацетон, уксусную кислоту, 1-пропанол, диметилкарбонат, N-метил-2-пирролидон (NMP), этилацетат(EtOAc), толуол, изопропиловый спирт (IPA), диизопропиловый эфир, нитрометан, воду, 1,4-диоксан,трет-диэтиловый эфир, этиленгликоль, метилацетат (МеОАс), метанол, 2-бутанол, кумол, этилформиат,изобутилацетат, 3-метил-1-бутанол, анизол, и их комбинации. В некоторых вариантах раствор бензоатаL-орнитина включает воду. В некоторых вариантах раствор бензоата L-орнитина включают ДМСО. После перемешивания L-орнитина и бензоатной соли противоионы X и Y могут образовать осадок,который можно удалить из перемешиваемого раствора, используя известные методы, такие как фильтрация, центрифугирование и т.п. В некоторых вариантах X представляет собой хлорид, Y представляет собой серебро, и их взаимодействие приводит к образованию осадка, содержащего AgCl. Хотя на схеме 1 соединения формул I и II представлены в виде солей, в пределах объема настоящей заявки находится и перемешивание свободного основания L-орнитина и бензойной кислоты с получением промежуточного продукта, бензоата L-орнитина. Следовательно, образование и выделение осадка не является обязательным. Относительное количество L-орнитина и бензоатных солей, которые подвергают смешиванию, не ограничено; однако молярное отношение L-орнитина к бензойной кислоте может необязательно находиться в диапазоне от около 10:90 до 90:10. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к бензоату может находиться в диапазоне от около 30:70 до 30:70. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к бензоату может находиться в диапазоне от около 40:60 до 60:40. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к бензоату составляет около 1:1. В вариантах, где X и Y представляют собой, оба, неорганические ионы (например, X и Y представляют собой хлорид и серебро соответственно), для стимулирования дополнительного осаждения противоиона Y могут быть добавлены дополнительные количества Х-содержащей соли. Например, если X представляет собой хлорид и Y представляет собой серебро, молярное отношение гидрохлорида Lорнитина к бензоату серебра может быть выше чем 1:1, для того чтобы присутствовал избыток хлорида относительно серебра. Следовательно, в некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к бензойной кислоте выше чем около 1:1. Однако добавление хлоридной соли не требуется при получении из соли L-орнитина (например, гидрохлорида L-орнитина). Например, для дополнительного удаления серебра к раствору могут быть добавлены разбавленные растворы хлористо-водородной кислоты. Хотя нет особого ограничения, но в тех случаях, когда добавляют дополнительную Х-содержащую соль, предпоч-4 023051 тительно ее добавлять до начала выделения AgCl. Как показано на схеме 2, бензоат L-орнитина может быть подвергнут взаимодействию с фенилацетатной солью форулы IV с получением фенилацетата L-орнитина. Например, фенилацетат натрия может быть смешан с раствором бензоата L-орнитина с получением фенилацетата L-орнитина. Могут быть использованы различные соли фенилацетата, и поэтому Z в формуле IV может представлять собой любой катион, способный образовывать соль с фенилацетатом, кроме бензойной кислоты или L-орнитина. В некоторых вариантах Z может представлять собой моноатомный катион, такой как ион щелочного металла (например, Li+, Na+ и K+) и другие моновалентные ионы (например, Ag+). Z может также представлять собой полиатомный катион, такой как аммоний, L-аргинин, диэтиламин, холин, этаноламин, 1 Нимидазол, троламин, и т.п. В некоторых вариантах Z представляет собой неорганический ион. В некоторых вариантах Z представляет собой натрий. Относительное количество L-орнитина и фенилацетатных солей, которые подвергают смешению,также не ограничено; однако молярное отношение L-орнитина к фенилацетату может необязательно находиться в диапазоне от около 10:90 до 90:10. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к фенилацетату может находиться в диапазоне от около 30:70 до 70:30. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к фенилацетату может находиться в диапазоне от около 40:60 до 60:40. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к фенилацетату составляет около 1:1. Схема 2 Затем фенилацетат L-орнитина форулы V может быть выделен из раствора с использованием известных методов. Например, путем выпаривания любого растворителя до тех пор, пока не выкристаллизуется фенилацетат L-орнитина, или, альтернативно, путем добавления антирастворителя, смешивающегося в растворе фенилацетата L-орнитина до тех пор, пока не высадится из раствора фенилацетат Lорнитина. Другой возможный способ для выделения фенилацетата L-орнитина заключается в доведении температуры раствора (например, понижении температуры) до температуры, при которой происходит осаждение фенилацетата L-орнитина. Как будет обсуждено более подробно в разделе, следующем ниже,способ выделения фенилацетата L-орнитина оказывает воздействие на тип кристаллической формы, которую получают. Выделенный фенилацетат L-орнитина может быть подвергнут различным дополнительным обработкам, таким как сушка и т.п. В некоторых вариантах полученный фенилацетат L-орнитина может быть затем подвергнут обработке путем перемешивания с разбавленным раствором HCl для осаждения остаточного серебра. Кроме того, фенилацетат L-орнитина может быть повторно выделен из раствора, используя способы, аналогичные раскрытым выше. Как очевидно среднему специалисту в данной области техники, руководствующемуся разъяснениями, предоставленными в настоящей заявке, фенилацетат L-орнитина может быть получен аналогичным образом, используя промежуточную соль, отличную от бензоата L-орнитина. Таким образом, например,L-орнитин или его соль (например, гидрохлорид L-орнитина), может быть подвернут смешению с раствором, содержащим уксусную кислоту. Затем ацетат L-орнитина может быть смешан с фенилуксусной кислотой, или ее солью (например, фенилацетатом натрия) с получением фенилацетата L-орнитина. Схема 4 иллюстрирует типичный способ получения фенилацетата L-орнитина, используя в качестве промежуточной соли ацетат L-орнитина. В некоторых вариантах промежуточная соль может представлять собой фармацевтически приемлемую соль L-орнитина. Например, промежуточной солью Lорнитина могут быть ацетат, аспартат, формиат, оксалат, бикарбонат, карбонат, битрат, сульфат, нитрат,изоникотинат, салицилат, цитрат, тартрат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкаронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат, памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат) или фосфат. Свободная кислота промежуточного продукта является предпочтительно более слабой кислотой относительно фенилуксусной кислоты. В некоторых вариантах промежуточный продукт представляет собой соль L-орнитина с анионным компонентом, который демонстрирует значение рКа, которое выше,чем значение рКа фенилуксусной кислоты. В качестве примера, в случае ацетата L-орнитина, уксусная кислота и фенилуксусная кислота демонстрируют значения рКа около 4,76 и 4,28 соответственно. В некоторых вариантах фенилацетат L-орнитина может быть получен без получения промежуточной соли, такой как бензоат L-орнитина. Схема 4 иллюстрирует типичный способ получения фенилацетата L-орнитина без получения промежуточной соли. К раствору соли L-орнитина (например, иллюстрированной на схеме 4 соединением форулы I) может добавляться модификатор рН до тех пор, пока не начнется осаждение соли из раствора, где соль не является солью L-орнитина. В качестве примера, к раствору гидрохлорида L-орнитина можно добавлять метоксид натрия (NaOMe) до тех пор, пока из раствора не начнет осаждаться хлорид натрия, оставляя свободное основание L-орнитина. Осадок может быть необязательно выделен из раствора, используя известные методы, такие как фильтрация, центрифугирование и т.п. Свободное основание L-орнитина (например, иллюстрированное на схеме 4 орнитина соединением форулы I-а) может быть подвергнуто смешению с фенилуксусной кислотой или ее солью (например, иллюстрированной на схеме 4 соединением форулы IV) с получением фенилацетата L-орнитина. Затем фенилацетат L-орнитина форулы V может быть выделен, как описано ранее. Схема 4 Модификатор рН может включать соединение основания, или его безводный предшественник,и/или химически защищенное основание. Неограничивающие примеры рН-модификаторов включают гидроксид натрия, гидроксид калия, метоксид натрия, трет-бутоксид калия, карбонат натрия, карбонат кальция, дибутиламин, триптамин, гидрид натрия, гидрид кальция, бутиллитий, этилмагнийбромид и их комбинации. К тому же количество рН-модификатора, подлежащего добавлению, особенно не ограничено; тем не менее, молярное отношение L-орнитина к рН-модификатору может необязательно находиться в диапазоне от около 10:90 до 90:10. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к рНмодификатору может находиться в диапазоне от около 30:70 до 70:30. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к рН-модификатору может находиться в диапазоне от около 40:60 до 60:40. В некоторых вариантах молярное отношение L-орнитина к рН-модификатору составляет около 1:1. В некоторых вариантах рН-модификатор может добавляться для регулирования рН до по меньшей мере около 8,0; по меньшей мере около 9,0 или по меньшей мере около 9,5. Другой способ получения фенилацетата L-орнитина в некоторых вариантах включает взаимодействие соли щелочного металла L-орнитина с фенилацетатной солью. В качестве примера гидрохлорид Lорнитина может быть смешан с фенилацетатом серебра и растворителем. Затем AgCl может высадиться и его необязательно выделяют из раствора. Оставшийся фенилацетат L-орнитина может быть также выделен с использованием известных методов. Этот способ может быть завершен с использованием, в общем, таких же методик и условий, как описаны в общих чертах выше. Например, относительные молярные количества L-орнитина по отношению к фенилацетату могут составлять от 10:90 до 90:10; 30:70 до 70:30; 40:60 до 60:40 или около 1:1. К тому же фенилацетат L-орнитина можно выделить путем выпаривания растворителя, добавления антирастворителя и/или снижения температуры. Композиции фенилацетата L-орнитина. В настоящем описании раскрываются также композиции фенилацетата L-орнитина. Композиции,раскрытые в настоящей заявке, преимущественно содержат небольшие количества неорганических солей, в частности соли щелочных металлов и/или галогенидные соли, и поэтому являются, в частности,подходящими для перорального и/или внутривенного введения пациентам с печеночной энцефалопатией. Между тем эти композиции могут демонстрировать аналогичные профили стабильности в сравнении с другими солями (например, смеси гидрохлорида L-орнитина и фенилацетата натрия). Композиции можно в некоторых вариантах получить одним из способов, раскрытых в настоящей заявке. Например,любой из раскрытых способов, использующий бензоат L-орнитина в качестве промежуточного продукта,может дать композиции по данному изобретению. В некоторых вариантах композиции могут содержать кристаллическую форму фенилацетата Lорнитина (например, формы I, II, III, раскрытые в данном описании). В некоторых вариантах композиции могут содержать по меньшей мере около 20 мас.% кристаллической формы фенилацетата L-орнитина(предпочтительно по меньшей мере около 50 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере около 80 мас.%). В некоторых вариантах композиции состоят, по существу, из кристаллической формы фенилацетата L-орнитина. В некоторых вариантах композиция содержит смесь по меньшей мере двух (например,двух, трех или четырех форм) форм I, II, III. Композиции в некоторых вариантах содержат форму II. Например, композиции могут содержать по меньшей мере около 20%; по меньшей мере, около 50%; по меньшей мере, около 90%; по меньшей мере,около 95% или по меньшей мере около 99% формы II. Аналогично, композиции могут также содержать,например, формы I или III. Композиции могут необязательно содержать по меньшей мере около 20%; по меньшей мере около 50%; по меньшей мере около 90%; по меньшей мере около 95% или по меньшей мере около 99% форм I, II, III. Предпочтительно, когда композиция содержит небольшие количества (если они вообще имеются) ионов или солей щелочных металлов и галогена, в частности натрия и хлорида. В некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 100 ч./млн щелочных металлов (предпочтительно не больше чем около 20 ч./млн и наиболее предпочтительно не больше чем около 10 ч./млн). В некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 100 ч./млн натрия (предпочтительно не больше чем около 20 ч./млн и наиболее предпочтительно не больше чем около 10 ч./млн). В некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 0,1 мас.% галогенидов (предпочтительно не больше чем около 0,01 мас.%). В некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 0,1 мас.% хлорида (предпочтительно не больше чем около 0,01 мас.%). Повышенное содержание щелочных металлов и галогенидов обеспечивает композицию, подходящую для получения концентрированных изотонических растворов. Как таковые, эти композиции могут более легко вводиться внутривенным путем по сравнению, например, с введением смесей гидрохлоридаL-орнитина и фенилацетата натрия. В некоторых вариантах раствор, содержащий от около 45 до около 55 мг фенилацетата L-орнитина на мл воды (предпочтительно около 50 мг/мл), является изотоническим в отношении жидкостей организма (например, раствор демонстрирует осмоляльность в диапазоне от около 280 до около 330 мОсм/кг). Композиции могут также содержать остаточные количества аниона от промежуточной соли, образовавшейся во время осуществления способа получения композиции фенилацетата L-орнитина. Например, некоторые из способов, раскрытых в настоящем описании, обеспечивают получение композиций,содержащих бензойную кислоту и ее соль. В некоторых вариантах композиция содержит по меньшей мере около 0,01 мас.% бензойной кислоты или ее соли (предпочтительно по меньшей мере около 0,05 мас.% и более предпочтительно около 0,1 мас.%). В некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 3 мас.% бензойной кислоты или ее соли (предпочтительно не больше чем около 1 мас.% и более предпочтительно не больше чем около 0,5 мас.%). В некоторых вариантах композиция содержит соль или ее кислоту в диапазоне от около 0,01 до около 3 мас.% (предпочтительно от около 0,1 до около 1%), где соль выбрана из ацетата, аспартата, формиата, оксалата, бикарбоната, карбоната, битрата, сульфата, нитрата, изоникотината, салицилата, цитрата, тартрата, пантотената, битартрата, аскорбата, сукцината, малеата, гентизината, фумарата, глюконата, глюкороната, сахарата, бензоата, глутамата,метансульфоната, этансульфоната, бензолсульфоната, п-толуолсульфоната, памоата (т.е. 1,1'-метиленбис-(2-гидрокси-3-нафтоата) или фосфата. Аналогично, композиция, полученная с использованием ацетатного промежуточного продукта, может иметь остаточные количества уксусной кислоты или ацетата. В некоторых вариантах композиция содержит по меньшей мере около 0,01 мас.% уксусной кислоты или ацетата (предпочтительно по меньшей мере около 0,05 мас.% и более предпочтительно около 0,1 мас.%). В некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 3 мас.% уксусной кислоты или ацетата (предпочтительно не больше чем около 1 мас.% и более предпочтительно не больше чем около 0,5 мас.%). Композиции могут также содержать небольшие количества серебра. Типичные способы, раскрытые в настоящем описании, используют, например, бензоат серебра, но все же дают композиции с неожиданно низким содержанием серебра. Таким образом, в некоторых вариантах композиция содержит не больше чем около 600 ч./млн серебра (предпочтительно не больше чем около 100 ч./млн и более предпочтительно не больше чем около 65 ч./млн). В некоторых вариантах композиция содержит по меньшей мере около 10 ч./млн серебра (альтернативно по меньшей мере около 20 или 25 ч./млн). Фармацевтические композиции. Композиции фенилацетата L-орнитина по данному изобретению могут быть использованы для получения фармацевтических композиций, предназначенных для введения субъекту (например, человеку). Фенилацетат L-орнитина и соответственно композиции, раскрытые в настоящем описании, могут быть введены в качестве активного ингредиента в состав фармацевтических композиций вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Таким образом, фенилацетат L-орнитина может быть использован вместе с обычным фармацевтически приемлемым носителем(ями) и/или наполнителем(ями) для получения лекарственного средства, предназначенного для определенного пути введения, что является рутинной процедурой в фармацевтической области. Конкретная природа фармацевтической композиции обычно зависит от нескольких факторов, включая желательный путь введения. Обычно фенилацетат L-орнитина используют в виде фармацевтических композиций, предназначенных для перорального,внутривенного, внутрижелудочного, подкожного, внутрисосудистого или внутрибрюшинного введения. Фармацевтический носитель или разбавитель может представлять собой, например, воду или изотонический раствор, такой как 5% декстроза в воде или обычный физиологический раствор. Твердые пероральные формы могут содержать, наряду с активным соединением, разбавители, например лактозу,декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; смазки, например диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция, и/или полиэтиленгликоли; связующие вещества, например крахмалы, аравийскую камедь, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон; дезинтегрирующие средства, например крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или натрий-крахмалгликолят; вспенивающиеся смеси; красители; подслащивающие вещества; увлажняющие средства, такие как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты; и, в общем, нетоксичные и фармакологически неактивные вещества, используемые в фармацевтических препаратах. Такие фармацевтические препараты могут быть получены известными способами, например посредством использования различных способов перемешивания, грануляции, таблетирования, нанесения сахарсодержащей оболочки или пленочного покрытия. Жидкие дисперсии для перорального введения могут представлять собой сиропы, эмульсии или суспензии. Сиропы могут содержать в качестве носителей, например, сахарозу или сахарозу наряду с глицерином, и/или маннитом, и/или сорбитом. Суспензии и эмульсии могут содержать носитель, например природную камедь, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт. Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций могут содержать, наряду с фенилацетатом L-орнитина, фармацевтически приемлемый носитель, например стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например пропиленгликоль, и, при желании, подходящее количество гидрохлорида лидокаина. Лекарственный препарат может состоять, по существу, из фенилацетата L-орнитина и фармацевтически приемлемого носителя. Такой лекарственный препарат поэтому, по существу, не содержит других аминокислот помимо L-орнитина и фенилацетата. Кроме того, такой лекарственный препарат помимо фенилацетата L-орнитина содержит незначительные количества других солей. Оральные готовые лекарственные формы могут в большинстве случаев отвечать дозам фенилацетата L-орнитина в диапазоне от около 500 мг до около 100 г. Следовательно, в некоторых вариантах пероральная лекарственная форма включает композиции фенилацетата L-орнитина, раскрытые в настоящем описании, в диапазоне от около 500 мг до около 50 г. В некоторых вариантах пероральная лекарственная форма, по существу, не содержит солей щелочных металлов и галогенидов (например, содержит не больше, чем следовые количества солей щелочных металлов и галогенидов). Готовые лекарственные формы для внутривенного введения могут также в большинстве случаев отвечать дозам фенилацетата L-орнитина в диапазоне от около 500 мг до около 100 г (предпочтительно от около 1 до около 50 г). В некоторых вариантах готовые лекарственные формы для внутривенного ведения, по существу, не содержат солей щелочных металлов и галогенидов (например, содержат не больше, чем следовые количества солей щелочных металлов и галогенидов). В некоторых вариантах готовая лекарственная форма для внутривенного введения имеет концентрацию фенилацетата L-орнитина от около 5 до около 300 мг/мл (предпочтительно от около 25 до около 200 мг/мл и более предпочтительно от около 40 до около 60 мг/мл). Композиция или лекарственное средство, содержащее указанную композицию, может быть необязательно находиться в герметизированной упаковке. Герметизированная упаковка может снижать или препятствовать контакту композиции или лекарственного средства с влагой и/или воздухом окружающей среды. В некоторых вариантах упаковка включает герметичное уплотнение. В некоторых вариантах упаковку запаивают в вакууме или герметизируют внутри инертным газом (например, аргоном). Таким образом, упаковка может ингибировать или снижать скорость разложения композиции или лекарственного средства, хранимого внутри упаковки. Различные типы герметизированной упаковки известны в данной области. Например, патент США 5560490 раскрывает типичную герметизированную упаковку для лекарственных средств и поэтому включен в настоящее описание в полном объеме в виде ссылки. Композиции с улучшенной плотностью. Авторами неожиданно было установлено, что можно получить композиции с большей плотностью,прикладывая к композициям, содержащим форму I (описанную ниже), давление, достаточное для того чтобы вызвать ее превращение в форму II (описанную ниже). Например, приложение силы величиной 3 т на протяжении 90 мин к формам I и II приводит к плотностям 1,197 и 1,001 кг/м 3 соответственно. Не-8 023051 ожиданно при этих условиях форма I превращалась в форму II; следовательно, более высокая плотность,по-видимому, объясняется наличием различной кристаллической формы как исходного материала. Таким образом, в настоящем описании раскрываются способы увеличения плотности композиции на основе фенилацетата L-орнитина, имеющей форму I, путем приложения к композиции давления, достаточного для того чтобы вызвать превращение в форму II. Подходящая величина силы или давления,которая может вызвать фазовое превращение, может изменяться в зависимости от величины времени приложения силы или давления. Таким образом, средний специалист в данной области согласно разъяснениям, предоставленным в настоящей заявке, может определить соответствующие величины давления и времени, которые могут вызвать фазовое превращение. В некоторых вариантах прикладывают силу величиной по меньшей мере около 1 т (предпочтительно по меньшей мере около 2 т и более предпочтительно по меньшей мере около 3 т). В некоторых вариантах прикладывают давление по меньшей мере около 500 фунт/дюйм 2 (предпочтительно по меньшей мере около 1000 фунт/дюйм 2 и более предпочтительно по меньшей мере около 2000 фунт/дюйм 2). Период времени для приложения давления особенно не ограничен и, как обсуждалось выше, обычно зависит от величины приложенной силы (давления). Например, при приложении большой силы (например, 10 т) к обычному пуансону для изготовления таблеток различных размеров время может составлять около 1 с или меньше. В некоторых вариантах время для приложения давления является заранее определенным временем. Время может составлять, например, около 0,1 с; около 1 с; по меньшей мере около 1 мин; по меньшей мере около 5 мин или по меньшей мере около 20 мин. В некоторых вариантах композиция содержит по меньшей мере около 10 мас.% формы I. В некоторых вариантах композиция содержит по меньшей мере около 30 мас.% формы I. Не отдавая предпочтения рассмотрению какого-либо теоретического обоснования, авторы полагают, что более высокая плотность может быть следствием по меньшей мере, частично наличия в форме I этанол-сольватного компонента. Приложение давления к сольвату может способствовать формированию более плотной структуры с меньшим числом дефектов (например, границ блоков). Следовательно, в некоторых вариантах способы увеличения плотности композиции на основе фенилацеата L-орнитина,имеющей сольватные компоненты, включают приложение давления к композиции, достаточного для того чтобы вызвать превращение в форму II. В некоторых вариантах давление составляет по меньшей мере около 500 фунт/дюйм 2 (предпочтительно по меньшей мере около 1000 фунт/дюйм 2 и более предпочтительно по меньшей мере около 2000 фунт/дюйм 2). В некоторых вариантах время для приложения давления является заданным. В некоторых вариантах композиция содержит по меньшей мере около 10% сольватной формы (предпочтительно по меньшей мере около 30% и более предпочтительно по меньшей мере около 50%). Композиции фенилацетата L-орнитина, раскрытые в настоящем описании, поэтому могут иметь более высокие плотности по сравнению с композициями, полученными, например, осаждением кристаллической формы. В некоторых вариантах композиция имеет плотность по меньшей мере около 1,1 кг/м 3(предпочтительно по меньшей мере около 1,15 кг/м 3 и более предпочтительно по меньшей мере около 1,18 кг/м 3). В некоторых вариантах композиция имеет плотность не больше чем около 1,3 кг/м 3 (предпочтительно не больше чем около 1,25 кг/м 3 и более предпочтительно не больше чем около 1,22 кг/м 3). В некоторых вариантах композиция имеет плотность около 1,2 кг/м 3. Кристаллические формы фенилацетата L-орнитина. Кроме того, в настоящем описании раскрываются кристаллические формы фенилацетата Lорнитинаи, в частности кристаллические формы I, II, III и V. В некоторых вариантах фенилацетат Lорнитина может быть получен с использованием способов, раскрытых выше, и затем кристаллизован с использованием любого из способов, раскрытых в настоящем описании. Форма I. Точные конкретные условия для образования кристаллической формы I могут быть определены эмпирически, и это возможно лишь при предоставлении целого ряда методов, которые, как было установлено, являются подходящими для их использования на практике. Таким образом, например, кристаллическую форму I в общем можно получить путем кристаллизации фенилацетата L-орнитина при контролируемых условиях. В качестве примера, осаждая фенилацетатL-орнитина из насыщенного раствора путем добавления этанола при пониженных температурах (например, 4 или -21 С). Типичные растворители для раствора, которые дают кристаллическую форму I после добавления этанола, включают, но не ограничиваясь ими, циклогексанон, 1-пропанол, диметилкарбонат,N-метилпирролидин (NMP), диэтиловый эфир, 2-бутанол, кумол, этилформиат, изобутилацетат, 3-метил 1-бутанол и анизол. Таким образом, в контексте обсуждения способов получения фенилацетата L-орнитина, раскрытых выше, способ может привести к получению формы I при использовании конкретных методов выделения. Например, для получения формы I фенилацетат L-орнитина может быть выделен путем добавления этанола при пониженной температуре. Кристаллическая форма I была охарактеризована с использованием различных методов, которые более детально описаны в разделе описания экспериментальных методов анализа. На фиг. 1 представле-9 023051 на кристаллическая структура формы I, определенная с использованием дифракции рентгеновских лучей с рентгеновской съемкой по методу порошка (PXRD). Форма I, которую можно получить способами,раскрытыми выше, демонстрирует характерные пики при углах 2 приблизительно 4,9, 13,2, 17,4,20,8 и 24,4. Таким образом, в некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина имеет один или несколько пиков (например, один, два, три, четыре или пять пиков), выбранных из приблизительно 4,9, 13,2, 17,4, 20,8 и 24,4 2. Как очевидно в данной области техники, из-за вариабельности экспериментальных результатов,возникающей в тех случаях, когда рентгеновские дифрактограммы получают на различных приборах,положения пиков принято считать идентичными, если значения 2 совпадают в пределах 0,2 (т.е. 0,2). Например, Фармакопея США утверждает, что если угловая установка 10 самых сильных дифракционных рефлексов совпадает в пределах 0,2 с угловой установкой 10 самых сильных дифракционных рефлексов эталонного вещества, и относительные интенсивности рефлексов различаются не больше чем на 20%, то идентичность подтверждается. Таким образом, полагают, что положения рефлексов в пределах 0,2 положений, цитированных в данном контексте, являются идентичными. На фиг. 2 представлены результаты, полученные дифференциальной сканирующей калориметрией(DSC) для формы I. Эти результаты указывают на эндотерму при 35 С, которая, возможно, связана с десольватацией и/или дегидратацией, приводящими к форме II. Второй переход при около 203 С указывает на точку плавления для кристалла. Для зондирования возможного существования перехода в результате десольватации и/или дегидратации форму I анализируют термогравиметрическим гравиметрическим/дифференциальным термическим анализом (TG/DTA), результаты которого представлены на фиг. 3. Форма I демонстрирует потерю в массе на 11,28% при около 35 С, и эти результаты дополнительно дают возможность предположить, что форма I претерпевает переход в результате десольватации и/или дегидратации при около 35 С. Точку плавления около 203 С можно было наблюдать и при TGA тестировании. Следовательно, в некоторых вариантах кристаллическую форму фенилацетата L-орнитина характеризуют согласно дифференциальной сканирующей калориметрии как имеющую эндотерму при около 35 С. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина демонстрирует потерю в массе на около 11% при около 35 С, определенную TGA (термогравиметрическим анализом). В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина демонстрирует точку плавления около 203 С. На фиг. 4 показаны интегральные интенсивности и химические сдвиги сигналов ядерного магнитного резонанса (ЯМР) для формы I. Интегралы подтверждают присутствие фенилацетата L-орнитина: 7,5(ароматическая СН), 3,8 (СН, смежная с NH2), 3,6 (СН 2-группа фенилацетата), 3,15 (СН 2, смежная с NH2) и 1,9 (алифатические СН 2-группы) м.д. (интегралы: 5:1:2:2:4 протонов; 1,2, 0,25, 0,5, 0,5, 1,0). Сигналы аминных и гидроксильных протонов не наблюдаются из-за протонного обмена как на цвиттер-ионе, так и месте солеобразования. Между тем фиг. 5 представляет результаты динамической сорбции паров (DVS) для формы I и показывает водопоглощение около 0,2 мас.%. XRPD результаты после DVS анализа (не показано) подтверждают, что форма I не переходит в другую полиморфную форму. Поэтому форма I может быть охарактеризована как негигроскопичная и стабильная на протяжении широкого диапазона влажности. Исследование стабильности формы I на 7 день в условиях 40C/75%RH (где RH - относительная влажность) показало, что при этих условиях происходит превращение в форму II. Кроме того, форма I превращается в форму II при повышенных температурах (например, 80 или 120 С), с или без приложения вакуума по истечении 7 или 14 дней. Следовательно, форма I является метастабильной. Дифракцию рентгеновских лучей на монокристалле (SXRD) также используют для определения структуры формы I при -20 и -123 С, и эти результаты суммированы в табл. 1 и 2. Результаты подтверждают, что форма I представляет собой сольват, содержащий молекулы этанола и воды внутри элементарной ячейки кристаллической решетки. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетатаL-орнитина может быть представлена формулой C15H28N2O6. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина может быть представлена формулой [C5H13N2O2][C8H7O2]EtOHН 2 О. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина демонстрирует согласно рентгеноструктурному кристаллографическому анализу монокристалла параметры кристалла, приблизительно равные следующему: размеры элементарной ячейки а=5,3652(4) , b=7,7136(6) , с=20,9602(18) ,=90, =94,98 6(6), =90; моноклинная кристаллическая система и пространственная группа Р 21. Таблица 1 Кристаллографические данные формы I,накопленные при -20 С Таблица 2 Кристаллографические данные для формы I,накопленные при -123 С Форма II. Точные конкретные условия для образования кристаллической формы II могут быть определены эмпирически, и это возможно лишь при предоставлении целого ряда способов, которые, как было установлено, являются подходящими для их использования на практике. Таким образом, например, кристаллическую форму II можно получить путем кристаллизации при контролируемых условиях. Кристаллическую форму II можно получить, например, путем упаривания насыщенного органического раствора фенилацетата L-орнитина. Неограничивающие примеры органических растворителей, которые могут быть использованы для получения формы II, включают этанол, ацетон, бензонитрил, дихлорметан (DCM), диметилсульфоксид (DMSO), этилацетат (EtOAc), ацетонитрил(MeCN), метилацетат (МеОАс), нитрометан, трет-бутилметиловый эфир (ТВМЕ), тетрагидрофуран и толуол. Другие растворители могут давать смесь форм I и II, такие как, но не ограничиваясь ими, 1,4 диоксан, 1-бутанол, циклогексан, IPA, THF, MEK, МеОАс и вода. Кроме того, форму II можно получить осаждением фенилацетата L-орнитина из насыщенного органического раствора, добавляя антирастворитель для фенилацетата L-орнитина, такой как IPA. Форма II может осаждаться на протяжении широкого диапазона температур (например, комнатная температура, 4 и -21 С). Неограничивающие примеры подходящих растворителей для насыщенного органического раствора включают циклогексанон, 1-пропанол, диметилкарбонат, N-метилпирролидон (NMP), диизопропиловый эфир, диэтиловый эфир, этиленгликоль, диметилформамид (DMF), 2-бутанол, кумол, изобутилацетат, 3-метил-1-бутанол и анизол. Альтернативно, те же перечисленные растворители (например, циклогексанон) могут быть использованы для образования раствора фенилацетата L-орнитина, и форма II может быть осаждена добавлением этанола в условиях окружающей среды. В качестве другого примера форму II можно также получить путем образования суспензии фенилацетата L-орнитина с перечисленными органическими растворителями и циклического воздействия температуры между 25 и 40 С каждые 4 ч на протяжении 18 циклов (или 72 ч). Таким образом, в контексте обсуждения способов получения фенилацетата L-орнитина, раскрытых выше, способ может привести к получению формы II при использовании конкретных методов выделения. Например, для получения формы II фенилацетат L-орнитина может быть выделен путем добавленияIPA или выпариванием органического растворителя. На фиг. 6 представлена кристаллическая структура формы II, определенная с использованием дифракции рентгеновских лучей с рентгеновской съемкой по методу порошка (PXRD). Форма II, которая может быть получена способами, раскрытыми выше, характеризуется пиками при углах 2 приблизительно 6,0, 13,9, 14,8, 17,1, 17,8 и 24,12. Таким образом, в некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина имеет один или несколько пиков (например, один, два, три, четыре,пять или шесть пиков), выбранных из приблизительно 6,0, 13,9, 14,8, 17,1, 17,8 и 24,12 2. На фиг. 7 представлены результаты, полученные дифференциальной сканирующей калориметрией(DSC), для формы II. Эти результаты указывают на точку плавления около 202 С, которая является при- 11023051 близительно такой же, как точка плавления для формы I. Это дает возможность предположить, что форма 1 переходит в форму II после нагревания при температуре выше около 35 С. Кроме того, форму II анализируют, используя TG/DTA, и как показано на фиг. 8, она демонстрирует потерю в массе на около 9,7 мас.%, связанную с остаточным растворителем. Точку плавления около 202 С можно также наблюдать и при TGA тестировании. Следовательно, в некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина демонстрирует точку плавления около 202 С. 7-дневное исследование стабильности формы II в условиях 40C/75%RH не обнаружило заметных следов фазового превращения. На самом деле форма II оказалась стабильной на протяжении 14 дней при воздействии на нее повышенных температур, изменения рН, УФ-излучения или кислорода. Таким образом, форму II считают стабильной. На фиг. 9 показаны интегральные интенсивности и химические сдвиги сигналов ядерного магнитного резонанса (NMR) для формы II. Интегралы подтверждают присутствие фенилацетата L-орнитина: 7,5 (ароматическая СН), 3,8 (СН, смежная с NH2), 3,6 (СН 2-группа фенилацетата), 3,15 (СН 2, смежная сNH2) и 1,9 (алифатические СН 2-группы) м.д. (интегралы: 5:1:2:2:4 протонов; 7,0; 1,4; 2,9; 3,0; 5,9). Сигналы аминных и гидроксильных протонов не наблюдаются из-за протонного обмена как на цвиттер-ионе,так и месте солеобразования. Между тем фиг. 10 представляет результаты динамической сорбции паров(DVS) для формы II и показывает водопоглощение около 0,3 мас.%. XRPD результаты после DVS анализа (не показано) подтверждают, что форма II не переходит в другую полиморфную форму. Поэтому форма II может быть охарактеризована как негигроскопичная и стабильная на протяжении широкого диапазона влажности. Дифракцию рентгеновских лучей на монокристалле (SXRD) используют также для определения структуры формы II при 23 и -123 С, и эти результаты суммированы в табл. 3 и 4. Результаты демонстрируют, что форма II является безводной и поэтому по структуре отличается от формы I. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина может быть представлена формулойC13H20N2O4. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина может быть представлена формулой [C5H13N2O2][С 8 Н 7 О 2]. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетатаL-орнитина демонстрирует согласно рентгеноструктурному кристаллографическому анализу монокристалла параметры кристалла, приблизительно равные следующему: размеры элементарной ячейки а=6,594(2) , =90, b=6,5448(18) , =91,12(3), с=31,632(8) , =90; моноклинная кристаллическая система и пространственная группа Р 21. Таблица 3 Кристаллографические данные формы II,накопленные при 23 С Таблица 4 Кристаллографические данные для формы II,накопленные при -123 С Форма III. Точные конкретные условия для образования кристаллической формы III могут быть определены эмпирически, и это возможно лишь при предоставлении целого ряда способов, которые, как было установлено, являются подходящими для их использования на практике. Таким образом, например, форму III можно получить, размещая насыщенный раствор фенилацетатаL-орнитина в среде охлаждения при температуре около -21 С, где раствор представляет собой смесь ацетона и воды (например, равные объемные части ацетона и воды). В качестве другого примера форму III можно получить, добавляя IPA в насыщенный раствор фенилацетата L-орнитина в 2-бутаноле при выполнении в условиях температуры окружающей среды. Кроме того, форму III можно получить, например, добавляя IPA в насыщенный раствор фенилацетата L-орнитина в изобутилацетате при выполнении при пониженных температурах около -21 С. Таким образом, в контексте обсуждения способов получения фенилацетата L-орнитина, раскрытых выше, способ может привести к получению формы III при использовании конкретных растворителей и методов выделения. Например, для получения формы III фенилацетат L-орнитина может быть получен в смеси ацетона и воды и затем размещен в холодной среде при температуре около -21 С. На фиг. 11 представлена кристаллическая структура формы III, определенной с использованием дифракции рентгеновских лучей с рентгеновской съемкой по методу порошка (PXRD). Форма III, которую можно получить способами, раскрытыми выше, характеризуется пиками при углах 2 приблизительно 5,8, 14,1, 18,6, 19,4, 22,3 и 24,8. Таким образом, в некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина имеет один или несколько пиков (например, один, два, три, четыре,пять или шесть пиков), выбранных из приблизительно 5,8, 14,1, 18,6, 19,4, 22,3 и 24,8 2. На фиг. 12 представлены результаты, полученные дифференциальной сканирующей калориметрией(DSC), для формы III. Эти результаты указывают на точку плавления около 203 С, которая является приблизительно такой же, как точки плавления для формы I и формы II. Кроме того, форма III демонстрирует эндотерму при около 40 С. Кроме того, форму III анализируют, используя метод TG/DTA, и, как показано на фиг. 13, она не демонстрирует никакой значимой потери массы до точки плавления. Поэтому форма III может быть охарактеризована как безводная. Точку плавления около 203 С можно также наблюдать и при TGA тестировании. Следовательно, в некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина демонстрирует точку плавления около 203 С. В некоторых вариантах кристаллическую форму фенилацетата L-орнитина охарактеризовывают дифференциальной сканирующей калориметрией как имеющую эндотерму при около 40 С. В некоторых вариантах кристаллическая форма фенилацетата L-орнитина является безводной. 7-дневное исследование стабильности формы III в условиях 40C/75%RH указало на то, что в этих условиях происходит превращение в форму II. В противоположность этому, форма II является стабильной при повышенных температурах, с или без вакуума, на протяжении периода времени 7 или 10 дней. В соответствии с этим наиболее вероятно, что форма III является метастабильной, но более стабильной,чем форма I. На фиг. 14 показаны интегральные интенсивности и химические сдвиги сигналов ядерного магнитного резонанса (ЯМР) для формы III. Интегралы подтверждают присутствие фенилацетата L-орнитина: 7,5 (ароматическая СН), 3,8 (СН, смежная с NH2), 3,6 (СН 2-группа фенилацетата), 3,15 (СН 2, смежная сNH2) и 1,9 (алифатические СН 2-группы) м.д. (интегралы: 5:1:2:2:4 протонов; 4,2; 0,8; 1,7; 1,7; 3,0). Сигналы аминных и гидроксильных протонов не наблюдаются из-за протонного обмена как на цвиттер-ионе,так и месте солеобразования. Между тем фиг. 15 представляет результаты динамической сорбции паров(DVS) для формы III и показывает водопоглощение около 2,0 мас.%. XRPD результаты после DVS анализа (не показано) подтверждают, что форма III не переходит в другую полиморфную форму. Следовательно, форма III демонстрирует более высокое водопоглощение в сравнении с формами I и II; однако форма III все же харатеризуется как негигроскопичная и стабильная на протяжении широкого диапазона влажности при комнатной температуре. Способы лечения печеночной недостаточности или печеночной энцефалопатии. Фенилацетат L-орнитина и, следовательно, любая из композиций фенилацетата L-орнитина, раскрытых в настоящем описании, могут вводиться субъекту для лечения или уменьшения интенсивности симптомов проявления печеночной недостаточности или печеночной энцефалопатии. Таким образом,фенилацетат L-орнитина может вводиться для улучшения состояния субъекта, например, субъекту, страдающему хроническим заболеванием печени, после провоцирующего приступа. В качестве другого примера фенилацетат L-орнитина может вводиться для устранения или замедления возникновения печеночной недостаточности или печеночной энцефалопатии. Фенилацетат L-орнитина может вводиться в комбинации субъекту для лечения печеночной энцефалопатии, для улучшения состояния пациента, страдающего печеночной энцефалопатией, для смягчения симптомов, связанных с печеночной энцефалопатией, для устранения печеночной энцефалопатии, для предотвращения или снижения возможности проявления первого эпизода печеночной энцефалопатии у человека с риском вспышки печеночной энцефалопатии, для снижения степени тяжести первого эпизода печеночной энцефалопатии у человека с риском вспышки печеночной энцефалопатии, для замедления наступления первого эпизода печеночной энцефалопатии у человека с риском вспышки печеночной энцефалопатии. Развитие печеночной недостаточности и печеночной энцефалопатии, как правило, включает "провоцирующие приступы" (или "острые приступы"). Такие провоцирующие приступы включают кровотечение в желудочно-кишечном тракте, инфекцию (сепсис), тромбофлебит воротной вены и обезвоживание. Вспышка такого острого приступа, вероятно, приводит к госпитализации. Пациент может страдать одним из этих острых приступов или испытать воздействие комбинации из этих острых приступов. Субъекта, который подвергся вспышке острого приступа или у которого имеется подозрение на проявление острого приступа, лечат согласно данному изобретению фенилацетатом L-орнитина для предотвращения или снижения вероятности прогрессирования заболевания печени до декомпенсационного состояния. Следовательно, фенилацетат L-орнитина может предотвратить или снизить вероятность клинических последствий печеночной недостаточности, такой как печеночная энцефалопатия. Фенилацетат может быть использован для сохранения функции печени. Таким образом, применение фенилацетата L-орнитина может продлить жизнь пациента с заболеванием печени. В одном варианте предотвращаются метаболические последствия желудочно-кишечного кровотечения, такие как гипераммониемия, гипоизолейкемия и снижение синтеза белка, возникающие в период после кровотечения. Как правило, лечение субъектов следует начинать как можно скорее после возникновения провоцирующего приступа или подозрения на проявление провоцирующего приступа (острый приступ). Предпочтительно лечение субъекта начинают до проявления повторных острых приступов. Более предпочтительно лечение субъекта начинают после первого острого приступа. Таким образом, в некоторых вариантах субъекта, лечимого фенилацетатом L-орнитина, идентифицируют как пациента, испытавшего провоцирующий приступ, или как пациента с подозрением на проявление провоцирующего приступа (острый приступ). К лечению, как правило, приступают сразу после возникновения острого приступа. Лечение можно начинать после симптома(ов) острого приступа или после того, как медицинским работником, таким как врач, парамедицинский работник или медицинская сестра, у пациента было обнаружено подозрение на возможную вспышку острого приступа. Лечение можно начинать после госпитализации субъекта. Таким образом, лечение можно начинать в пределах 6 ч, в пределах 3 ч, в пределах 2 ч или в пределах 1 ч после проявления симптома(ов) острого приступа или после обнаружения потенциальной возможности его вспышки. Лечение субъекта поэтому может начинаться в пределах от 1 до 48 ч, например от 1 до 36 ч или от 1 до 24 ч, после проявления симптома(ов) острого приступа или после обнаружения потенциальной возможности его вспышки. Лечение может происходить на протяжении вплоть до 8 недель, например вплоть до 6 недель,вплоть до 4 недель или вплоть до 2 недель после проявления симптома(ов) острого приступа или после обнаружения потенциальной возможности его вспышки. Поэтому лечение может происходить на протяжении вплоть до 48 ч, например на протяжении вплоть до 36 ч или на протяжении вплоть до 24 ч после проявления симптома(ов) острого приступа или после обнаружения потенциальной возможности его вспышки. Как правило, лечение происходит до того момента времени, когда восстановление от последствий острого провоцирующего приступа станет очевидным. Фенилацетат L-орнитина может также быть использован для лечения или уменьшения интенсивности симптомов гипераммониемии. Таким образом, фенилацетат L-орнитина может назначаться пациентам, идентифицированным как пациенты, имеющие избыточные уровни аммиака в крови, или пациентам, у которых проявляются симптомы избыточного аммиака в крови. Фенилацетат L-орнитина можно также вводить для снижения риска возникновения гипераммониемии. В некоторых вариантах фенилацетат L-орнитина можно вводить ежедневно на протяжении нечетко ограниченного периода времени. Например, суточные дозы можно вводить на протяжении всей жизни пациента или до тех пор, пока врач не определит, что пациент больше не имеет риска возникновения гипераммониемии. В некоторых вариантах терапевтически эффективное количество фенилацетата L-орнитина вводят для снижения риска возникновения гипераммониемии. В некоторых вариантах терапевтически эффективное количество фенилацетата L-орнитина вводят перорально для профилактики гипераммониемии. Терапевтически эффективное количество фенилацетата L-орнитина вводят субъекту. Как должно быть очевидно специалисту в данной области, используемая in vivo доза, подлежащая введению, и конкретный способ введения могут зависеть от возраста, массы тела, степени тяжести заболевания и вида млекопитающего, подлежащего лечению, конкретных используемых соединений и конкретного использования, для которого эти соединения используют (см., например, Fingl et al. 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", содержание которой включено в настоящее изобретение в полном объеме в виде ссылки, ссылаясь конкретно на главу 1, с. 1). Определение эффективных уровней доз, т.е. уровней доз, необходимых для достижения желаемого результата, может быть осуществлено специалистом в данной области, используя обычные фармакологические методы. Обычно клинические употребления препарата человеком начинают с более низких уровней доз, причем уровень дозы увеличивают до тех пор, пока не будет достигнуто желаемое действие. Альтернативно, для установления эффективных доз и пути введения композиций, идентифицированных согласно способам данного изобретения, могут быть использованы подходящие in vitro исследования, использующие общепринятые фармакологические методы. Обычная доза фенилацетата L-орнитина может составлять от около 0,02 до около 1,25 г/кг массы тела (предпочтительно от около 0,1 до около 0,6 г/кг массы тела). Поэтому доза может составлять от около 500 мг до около 50 г (предпочтительно от около 5 до около 40 г и более предпочтительно от около 10 до около 30 г). Может вводиться разовая суточная доза. Альтернативно, могут вводиться многократные дозы, например две, три, четыре или пять доз. Такие многократные дозы могут вводиться на протяжении периода времени один месяц, или две недели, или одна неделя. В некоторых вариантах разовая доза или многократные дозы, такие как две, три, четыре или пять доз, могут вводиться ежедневно. Примеры и экспериментальные методы. В нижеследующих примерах более подробно раскрываются дополнительные варианты, которые,как подразумевается, никоим образом не ограничивают объем форулы изобретения. Дифракция рентгеновских лучей с рентгеновской съемкой по методу порошка (XRPD).XRPD анализ осуществляют на усовершенственном приборе Bruker D8 или Seimens D5000, сканируя образцы в диапазоне углов 2 от 4 до 50. В вариантах, использующих прибор Bruker D8, приблизительно 5 мг образца осторожно прессуют на образцедержателе одинарного 96-луночного планшета дляXRPD. Затем образец загружают в дифрактометр Bruker D8-Discover и экспонируют на прохождение и анализируют, используя нижеследующие условия: Оператор D8-Discover Источник необработанных данных BRUKER-binary V3 (.RAW) Оси сканирования Gonio Начальная позиция [2] 4,000 Конечная позиция [2] 49,9800 Размер сканирующего шага [2] 0,0200 Время шага сканирования [с] 39,1393 Тип сканирования непрерывный Смещение [2] 0,0000 Тип дивергенционной щели фиксированный Размер дивергенционной щели [] 2,0000 Длина образца [мм] 10,00 Размер щели перед детектором [мм] 0,1000 Температура измерения [С] 25,00 Материал анода CuK-Бета [] 1,39225 Отношение K-А 2/K-А 1 0,50000 Режим работы генератора 40 мА, 40 кВ Тип дифрактометра неизвестный Номер дифрактометра 0 Радиус гониометра [мм] 250,00 Дист. фокус-Диверг.щель [мм] 91,00 Монохроматор падающего луча нет Вращение нет В вариантах, использующих прибор Seimens D5000, приблизительно 5 мг образца осторожно прессуют на предметном стекле, содержащем тонкий слой удерживающей пластичной смазки. Затем образец загружают в дифрактометр Seimens D5000, функционирующий в режиме отражения, и анализируют при вращении, используя нижеследующие экспериментальные условия: Источник необработанных данных Siemens-binary V2 (.RAW) Начальная позиция [2] 3,0000 Конечная позиция [2] 50,000 Размер сканирующего шага [2] 0,0200 Время шага сканирования [с] 0,8 Тип сканирования непрерывный Смещение 0,0000 Тип дивергенционной щели фиксированный Размер дивергенционной щели [] 1,0000 Длина образца [мм] различная Размер щели перед детектором [мм] 0,2000 Температура измерения [С] 20,00 Материал анода CuK-Бета [А] 1,39225 Отношение K-А 2/K-А 1 0,50000 (номинальное) Режим работы генератора 40 мА, 40 кВ Тип дифрактометра d5000 Номер дифрактометра 0 Радиус гониометра [мм] 217,50 Монохроматор падающего луча нет Монохроматор дифрагированного луча (графит) Вращение да Дифракция рентгеновских лучей на монокристалле (SXRO). Все эксперименты осуществляют, используя дифрактометр Bruker Smart Apex, функционирующий в режиме Мо-K-излучения. Если не оговорено особо, данные получают в режиме формирования изображений 60 -scan за 10 с, накопленных в трех различных положениях 2 и . Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC). Приблизительно 5 мг образца отвешивают в алюминиевую DSC чашку весов и герметизируют алюминиевым колпачком с проколотыми отверстиями (негерметически). Затем чашку с образцом загружают в Seiko DSC6200 (снабженный холодильником), охлаждают и выдерживают при 25 С. После стабилизации теплового потока образец и эталон нагревают до около 250 С при скорости сканирования 10 С/мин и отслеживают величину полученного теплового эффекта. До анализа прибор калибруют по температуре и тепловому потоку, используя стандартный образец индия. Анализ образца осуществляют в соответствии с программным обеспечением измерения Muse, где температуры тепловых эффектов объявляют как температуру начала проявления эффекта, измеряемую согласно техническим условиям производителя. Термогравиметрический гравиметрический/дифференциальный термический анализ (TG/DTA). Приблизительно 5 мг образца отвешивают в алюминиевую чашку весов и загружают в синхронный термогравиметрический/дифференциальный термоанализатор (DTA) и выдерживают при комнатной температуре. Затем образец нагревают со скоростью 10 С/мин от 25 С до 300 С и в течение этого времени отслеживают изменение массы образца наряду с соответствующими термальными эффектами (DTA). Азот используют в качестве продувочного газа при скорости потока 20 см 3/мин. До анализа прибор калибруют по массе и температуре, используя эталонную гирю массой 100 мг и стандартный образец индия соответственно. Динамическая сорбция паров (DVS). Приблизительно 10 мг образца помещают в чашку весов из проволочной сетки для измерения сорбции паров и загружают в весовой элемент для динамической сорбции паров DVS-1, поставляемый Scientific and Medical Systems (SMS). Затем образец сушат, поддерживая окружающую среду с влажностью 0% до тех пор, пока не перестанет регистрироваться дальнейшее изменение массы. Затем образец подвергают воздействию профиля линейного роста относительной влажности (RH) в диапазоне 0-90% при 10% приращениях, выдерживая образец на каждой стадии до достижения постоянного значения массы (завершение стадии 99,5%). После завершения цикла сорбции образец сушат, используя такую же процедуру. Затем наносят на график изменение массы во время циклов сорбция/десорбция, что дает возможность определить гидроскопическую природу образца. 1 Н ядерный магнитный резонанс (ЯМР). Спектры протонного ядерного резонанса (1 Н-ЯМР) регистрируют на приборе Bruker AC200. Образцы для снятия спектров ЯМР готовят в d-H2O и каждый образец получают при концентрации около 5 мг. Спектры ЯМР для бензоата L-орнитина и фенилацетата L-орнитина представлены на фиг. 21 и 22 соответственно. Аппроксимации растворимости. Аппроксимативно, порции образца по 25 мг помещают в ампулы и добавляют 5 объемных приращений соответствующей системы-растворителя. Между каждым добавлением смесь проверяют на растворение, и если растворение неочевидно, смесь нагревают до 50 С и снова проверяют. Процедуру продолжают до тех пор, пока не будет наблюдаться растворение или до добавления 100 объемов растворителя. Определение растворимости методом ВЭЖХ. Получают суспензии каждого растворителя и образцы встряхивают на протяжении 48 ч при 25 С. Каждый образец пропускают через фильтр и фильтрат переносят в ВЭЖХ пробирку для анализа. Исходя из этих данных определяют растворимость фенилацетата L-орнитина для каждого растворителя. Эксперименты по циклическому воздействию температуры. Используя информацию, собранную из аппроксимаций растворимости, получают суспензии образца в 24 отдельных системах растворителя. Суспензии подвергают циклическому воздействию температуры при 40 или 25 С в 4-часовых циклах на протяжении периода времени 72 ч. Твердые вещества визуально проверяют на наличие каких-либо заметных признаков разложения (т.е. изменение цвета) и затем,если нет деградации, выделяют фильтрацией. Твердые вещества подвергаются сушке в условиях окружающей среды на протяжении около 24 ч до анализа. Эксперименты по разрушающему охлаждению. Опыты по разрушающему охлаждению осуществляют, помещая насыщенные растворы образца в 24 отдельных системах растворителя, в среды 4 и -21 С на протяжении около 48 ч. Выделяют любые образовавшиеся твердые вещества, и эти твердые вещества предоставляют возможность подвергаться свободной сушке в условиях окружающей среды на протяжении около 24 ч до анализа. Эксперименты по выпариванию растворителя. Опыты по выпариванию растворителя проводят, предоставляя возможность насыщенным растворам образца свободно упариваться в условиях окружающей среды. Затем после завершения упаривания раствора досуха образовавшееся твердое вещество выделяют и анализируют. Эксперименты по добавлению антирастворителя. Опыты по добавлению антирастворителя проводят путем добавления антирастворителя в насыщенные растворы образца. Добавление продолжают до тех пор, пока не перестанет происходить дополнительное осаждение, и образцы доводят до различных температур на протяжении 24 ч: повышенной, окружающей среды, 4 или -21. Затем твердое вещество выделяют и сушат в условиях окружающей среды на протяжении 24 ч перед анализом. Микроскопия в поляризованном свете (PLM). Наличие кристалличности (двойное лучепреломление) определяют, используя поляризационный оптический микроскоп Leica Leitz DMRB, оснащенный камерой высокого разрешения Leica и программным обеспечением ввода изображения (Firecam V.I.0). Все изображения регистрируют, используя 10 объектив, если не оговорено особо. Анализ серебра. Анализ серебра осуществляют на масс-спектрометре с индукционной плазмой (ICP-MS) Agilent 7500ce. Истинные скорости растворения. Приблизительно 100 мг каждой формы прессуют в диски, помещая вещество в пресс-форму (диаметр 12 мм) и сжимая пресс-форму под давлением 5 т в гидравлическом прессе на протяжении около 2 мин. Прибор для растворения Sotax AT7 соответствует ЕР 2 и USP2, в котором для перемешивания среды используют мешалку. Каждую форму испытывают в следующих условиях рН: 1,0, 4,5 и 6,7, в стационарном состоянии диска (т.е. диски добавляют во время=0 с и дают им возможность опуститься на дно среды). Аликвоты среды объемом 1 см 3 отбирают из сосудов для растворения во времена 10, 20, 30, 40, 50,60, 70, 80 и 120 с и анализируют на концентрацию API посредством ВЭЖХ. Строят кривые растворения и исходя из первых 6 или 7 точек на кривых вычисляют истинные скорости растворения. Все испытания осуществляют при 37 С и скорости вращения мешалки 150 об/мин. Инструментальные детали ВЭЖХ-УФ. Прибор: Agilent 1200 Колонка: Gemini C18, 5 мкм, 150,04,6 мм Температура колонки: 40 С Подвижная фаза А: фосфатный буфер Подвижная фаза В: ацетонитрил Элюирование: градиент: 210 нм Объем инъецируемой пробы: 10 мкл Скорость потока: 1 мл/мин Тонкослойная хроматография (TLC). Небольшое пятно раствора, содержащего образец, наносят на пластину, около одного сантиметра от основания пластины. Затем пластину погружают в TLC емкость (герметичный контейнер), содержащий смесь растворителей метанол:этилацетат (95:5). Растворитель перемещается по пластине благодаря капиллярному действию и встречает смесь образца, которая растворяется и переносится смесью растворителя по пластине. Отмечают число пятен и для каждого пятна вычисляют значения Rf. Инфракрасная спектроскопия (IR) ИК-спектры регистрируют на спектрометре Bruker ALPHA P. Достаточное количество вещества помещают в центр пластины спектрометра и получают спектры, используя следующие параметры: Разрешение: 4 см-1 Время фонового сканирования: 16 сканов Время сканирования образца: 16 сканов Сбор данных: 4000 до 400 см-1 Результирующий спектр: коэффициент пропускания Программное обеспечение: OPUS версия 6 Исследования стабильности: среды с рН 1, 4, 7, 10 и 14. Для каждой формы получают суспензии (перенасыщенный раствор: около 250 мкл раствора с определенным рН и в него добавляют твердое вещество до тех пор, пока больше не будет наблюдаться растворение, и около 100 мг твердого вещества остается в суспензии) в средах, имеющих различный рН; 1,- 17023051 4, 7, 10 и 13,2. Суспензии постоянно встряхивают на протяжении периода времени 14 дней и делают измерения на 7 и 14 день. Получают соответствующие буферы для каждого рН, которые подробно описаны ниже. Буфер, имеющий рН 1, получают растворением 372,75 мг хлорида калия в 25 мл деионизированной воды с получением 0,2 М раствора. Впоследствии добавляют 67 мл 0,2 М хлористо-водородной кислоты(его получают из 5 М раствора; 10 мл добавляют к 40 мл деионизированной воды, получая 1 М раствор,который разбавляют далее; 20 мл добавляют к 80 мл деионизированной воды, получая требуемый 0,2 М раствор), достигая при этом требуемого рН. Буфер, имеющий рН 4, получают растворением 1,02 г гидрофталата калия в 50 мл деионизированной воды с получением 0,1 М раствора. Буфер, имеющий рН 7, получают растворением 680,00 мг дигидроортофосфата калия в 50 мл деионизированной воды с получением 0,1 М раствора. Впоследствии добавляют 29,1 мл 0,1 М гидроксида натрия (его получают из 1 М раствора; 5 мл добавляют к 45 мл деионизированной воды, получая требуемый 0,1 М раствор), достигая тем самым желаемый рН. Буфер, имеющий рН 10, получают растворением 210,00 мг бикарбоната натрия в 50 мл деионизированной воды с получением 0,05 М раствора. Впоследствии добавляют 10,7 мл 0,1 М гидроксида натрия(его получают из 1 М раствора; 5 мл добавляют к 45 мл деионизированной воды, получая требуемый 0,1 М раствор), достигая тем самым желаемый рН. Буфер, имеющий рН 13,2, получают растворением 372,75 мг хлорида калия в 25 мл деионизированной воды с получением 0,2 М раствора. Впоследствии добавляют 66 мл 0,2 М гидроксида натрия (его получают из 1 М раствора; 20 мл добавляют к 80 мл деионизированной воды, получая требуемый 0,2 М раствор), доводя тем самым рН до 13. Затем добавляют по каплям 1 М гидроксид натрия, достигая требуемый рН. Пример 1. Осаждение кристаллических форм. Насыщенные растворы фенилацетата L-орнитина подвергают воздействию термоциклирования, охлаждения с термодекструкцией, упаривания или добавления антирастворителя, как описано выше. Для определения типа кристаллической формы (если она имеется) осадок анализируют посредством PLM иXRPD. Результаты представлены в табл. 5. Из исследований по осаждению было идентифицировано шесть однозначно определяемых кристаллических структур формы I-VI. Однако, формы IV и VI были получены из растворов уксусной кислоты,и результаты ЯМР подтвердили, что эти формы принадлежат ацетату L-орнитина. Между тем в испытаниях 540-611 использовали образцы фенилацетата L-орнитина, изначально выделенного добавлением антирастворителя, этанола. Многие из этих примеров дали форму I, которая представляет собой этанольный сольват, и поэтому полагают, что эти образцы первоначально включали остаточный этанол. Следовательно, форма I не может быть получена при некоторых условиях, когда первональный образец не содержит остаточный этанол. Таблица 5 Примеры получения кристаллических форм