Способ ингибирования клостридиум диффициле введением оритаванцина

СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ КЛОСТРИДИУМ ДИФФИЦИЛЕ ВВЕДЕНИЕМ ОРИТАВАНЦИНА Изобретение относится к гликопептидным антибиотикам, таким как оритаванцин, которые проявляют значительную активность и против вегетативной формы клостридиум диффициле, и против спор клостридиум диффициле. В изобретении приведены описания способов лечения,профилактики и предотвращения инфекций и заболеваний, вызванных клостридиум диффициле,у животных, включая людей. 017564 Предпосылки создания изобретения Инфекции, вызванные бактериями клостридиум диффициле (Clostridium difficile, или С.difficile),являются одной из постоянных проблем в учреждениях здравоохранения. Эти инфекции являются основной причиной осложнений у госпитализированных пожилых людей и почти исключительно связаны с бактерицидной терапией. По своей серьезности, проявление инфекции, вызванной клостридиум диффициле (ИКД), может варьироваться от умеренной диареи/колита, возникших в связи с приемом антибиотиков, до опасного для жизни псевдомембранного колита (Borriello, S.Р. 1998. J. Antimicrob Chemother. 41 (Suppl. С), 13-19). Стратегии лечения ИКД немного изменились за последние 20 лет: наиболее часто для лечения ИКД назначается пероральный прием метронидазола (250-500 мг, 3 или 4 раза в день) или ванкомицина (125 мг, 4 раза в день) (Wilcox, М.Н. 1998. J. Antimicrob Chemother. 41 (Suppl. С), 41-46; см. также веб-страницу postgradmed.com/issues/2002/1102/joyce3.htm). Бактерии клостридиум диффициле способны образовывать споры, имеющие долговременную высокую устойчивость к неблагоприятным условиям: высокой температуре, радиации, химическим воздействиям и сухости (Aronson, A.I., Fitz-James, P. 1976. Bacteriol. Rev. 40, 360-402). Известно, что споры клостридиум диффициле могут выживать во внутрибольничной среде, и считается, что они играют роль в передаче инфекции. Более того, споры клостридиум диффициле не поддаются бактерицидной терапии,включая лечение метронидазолом (МЕТ) и ванкомицином (VAN), и могут вызвать рецидив ИКД после прекращения приема антибиотика, использовавшегося в начале заболевания (Walters, В.А. 1983. Gut. 24,206-212). Тем не менее, проводилось мало исследований по оценке бактерицидной активности в отношении спор клостридиум диффициле, поэтому велика потребность в способах лечения, которые могут применяться для уничтожения спор или подавления прорастания спор у бактерий клостридиум диффициле. Сущность изобретения Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что гликопептидный антибиотик оритаванцин, также известный в медицине и упоминаемый здесь под названиями NDISACC-(4-(4 хлорфенил)бензил)А 82846 В и LY333328, проявляет значительную активность и против вегетативной формы клостридиум диффициле, и против спор клостридиум диффициле. Результаты экспериментов,описанных здесь, показывают, что гликопептидные антибиотики, такие как оритаванцин (или его фармацевтически приемлемые соли, гидраты или сольваты или их смесь), эффективны в лечении, профилактике и/или предотвращении заболеваний, вызванных клостридиум диффициле, у животных, включая людей. Ингибирование роста клостридиум диффициле. В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам ингибирования роста бактерий клостридиум диффициле in vitro, in vivo и/или ex vivo, заключающимся в воздействии на клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления роста бактерий клостридиум диффициле. Бактерии клостридиум диффициле могут находиться в форме вегетативных клеток,спор или смеси тех и других. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. В частности, настоящее изобретение относится к способу ингибирования активации спор клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на споры клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления активации спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования прорастания спор клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на споры клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления прорастания спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Настоящее изобретение относится также к способу ингибирования бурного прорастания спор клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на споры клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления бурного прорастания спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь.-1 017564 Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста вегетативной формы клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на вегетативную форму клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления вегетативной формы клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Настоящее изобретение относится также к способу ингибирования спорообразования клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на вегетативную форму клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления спорообразования клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Лечение инфекций, вызванных клостридиум диффициле. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающимся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика. Бактерии клостридиум диффициле находятся преимущественно в форме вегетативных клеток, спор или смеси тех и других. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. В частности, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует активацию спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава,содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует прорастание спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Настоящее изобретение относится также к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует бурное прорастание спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует рост вегетативной формы клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Настоящее изобретение относится также к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует спорообразование клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемле-2 017564 мая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Предотвращение инфекций, связанных с клостридиум диффициле. В третьем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения возникновения у субъекта инфекции, связанной с клостридиум диффициле, заключающимся во введении субъекту,имеющему риск возникновения такой инфекции, гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для предотвращения возникновения инфекции, связанной с клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Профилактика инфекций, вызванных клостридиум диффициле. В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к способам обеспечения субъекту профилактики инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающимся во введении субъекту, имеющему такую инфекцию, гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для достижения профилактики инфекции, вызванной клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Настоящее изобретение включает гликопептидный антибиотик предпочтительно оритаванцин или фармацевтически приемлемую соль, гидрат, или сольват этого соединения для введения субъекту в качестве лекарственного средства при лечении, профилактике и/или предотвращении инфекций, связанных с клостридиум диффициле. Настоящее изобретение также включает использование гликопептидного антибиотика в производстве медикамента для лечения, профилактики и/или предотвращения инфекций, связанных с клостридиум диффициле, у субъекта. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Настоящее изобретение включает набор, состоящий из фармацевтического состава или гликопептидного антибиотика настоящего изобретения и печатных инструкций по его применению для лечения,профилактики и/или предотвращения инфекции, связанной с клостридиум диффициле, в подходящей упаковке. Краткое описание чертежей Фиг. 1 - схематическое представление анализа спирального градиента конечных точек для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC). Фиг. 2 показывает геометрическое среднее (SE) минимальных ингибирующих концентраций оритаванцина (ORI) для вегетативных культур (V) и спор (SP) клостридиум диффициле по результатам анализа спирального градиента конечных точек. Фиг. 3 показывает процент (диапазон) выживания спор клостридиум диффициле, подвергнутых в течение 1 или 30 мин воздействию in vivo концентраций метронидазола (МЕТ), ванкомицина (VAN),оритаванцина (ORI), деминерализованной воды (С) или Tween 80 (Р-80). Фиг. 4 показывает формы клостридиум диффициле: а - фаза светлых спор;(фаза светлых спор (РВ), фаза темных спор (PD) и вегетативные клетки (V, подвергнутого воздействию оритаванцина (ORI) с концентрацией 10 мг/л и без бактерицидной обработки (С). Фиг. 6 показывает процент выживания спор клостридиум диффициле, подвергнутых воздействию метронидазола (МЕТ), ванкомицина (VAN) или оритаванцина (ORI) в течение очень короткого промежутка времени (1 мин; светло-серый цвет) или 30 мин (30 мин; темно-серый цвет), в сравнении с контрольными образцами, подвергнутыми воздействию чистой воды (С) или воды и Tween 80 (Р 80). Протестированы споры трех штаммов клостридиум диффициле (ПЦР-риботипы 001, 106 и 027). Разбавитель добавлялся в фильтрационные чашки после добавления реакционных растворов. Фиг. 7 показывает процент выживания спор клостридиум диффициле, подвергнутых воздействию метронидазола (МЕТ), ванкомицина (VAN) или оритаванцина (ORI) в течение очень короткого промежутка времени (1 мин; светло-серый цвет) или 30 мин (30 мин; темно-серый цвет), в сравнении с контрольными образцами, подвергнутыми воздействию чистой воды (С) или воды и Tween 80 (Р 80). Протестированы споры трех штаммов клостридиум диффициле (ПЦР-риботипы 001, 106 и 027). Разбавитель-3 017564 добавляли в фильтрационные чашки перед добавлением реакционных растворов. Фиг. 8 показывает среднюю (+SE) численность жизнеспособных микроорганизмов (log10 КОЕ/мл) культивируемой естественной микрофлоры кишечника в сосуде 3 модели микрофлоры кишечника с оритаванцином (A) и с ванкомицином (B). Вертикальные линии указывают заключительный день каждого экспериментального периода. Горизонтальные пунктирные линии указывают предел обнаружения для бактериальной культуры. Фиг. 9 показывает средние значения (+SE) для ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле - общая численность (log10 КОЕ/мл), численность спор (log10 КОЕ/мл), титры цитотоксинов (RU) и концентрации бактерицидного средства (мг/л) в экспериментах в сосуде 3 модели микрофлоры кишечника: (A) с оритаванцином (ORI) и (B) с ванкомицином (VAN). Горизонтальные пунктирные линии указывают предел обнаружения для бактериальной культуры. Фиг. 10 показывает графические результаты определения эффективности режима многократного дозирования оритаванцина по сравнению с ванкомицином в хомячковой модели инфекции, вызванной клостридиум диффициле (ИКД). Хомячкам (группа, n=10) внутривенно вводили оритаванцин или ванкомицин с различными режимами дозирования. В общей сложности внутривенно вводили 1, 2 или 3 дозы антибиотиков в каждые 2 дня в течение 5 дней.- одна доза оритаванцина 50 мг/кг (день 1);- две дозы оритаванцина 50 мг/кг 2 раза в день (дни 1 и 3);- три дозы ванкомицина 50 мг/кг 2 раза в день (дни 1, 3, 5);CD - инфицирование бактерией клостридиум диффициле через корм; Тх - инъекция антибиотиков;VAN - ванкомицин. Фиг. 11 А представляет валидацию хомячковой модели ИКД. Фиг. 11 В показывает эффективность оритаванцина (ORI), смешанного с HPCD, по сравнению с ванкомицином (VA) в хомячковой модели ИКД. Фиг. 11C показывает эффективность оритаванцина (ORI), смешанного с PEG400, по сравнению с ванкомицином (VA) в хомячковой модели ИКД. Фиг. 11D показывает общую численность (TC) жизнеспособных организмов клостридиум диффициле (CD) и численность спор в содержимом слепой кишки хомячка. Подробное описание изобретения Ингибирование роста клостридиум диффициле. В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам ингибирования роста бактерий клостридиум диффициле in vitro, in vivo и/или ex vivo, заключающимся в воздействии на клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления роста бактерий клостридиум диффициле. Бактерии клостридиум диффициле могут быть в форме вегетативных клеток, спор или смеси тех и других. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава,содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. В частности, настоящее изобретение относится к способу ингибирования активации спор клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на споры клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления активации спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования прорастания спор клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на споры клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления прорастания спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Настоящее изобретение относится также к способу ингибирования бурного прорастания спор клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на споры клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления бурного прорастания спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый но-4 017564 ситель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста вегетативной формы клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на вегетативную форму клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления вегетативной формы клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Настоящее изобретение относится также к способу ингибирования спорообразования клостридиум диффициле in vitro, in vivo или в обоих условиях, заключающемуся в воздействии на вегетативную форму клостридиум диффициле гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для подавления спорообразования клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик может быть в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Лечение инфекций, вызванных клостридиум диффициле. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающимся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика. Бактерии клостридиум диффициле находятся преимущественно в форме вегетативных клеток, спор или смеси тех и других. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. В частности, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует активацию спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава,содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует прорастание спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Настоящее изобретение относится также к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует бурное прорастание спор клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует рост вегетативной формы клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Настоящее изобретение относится также к способу лечения субъекта от инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающемуся во введении такому субъекту терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика, который ингибирует спорообразование клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содер-5 017564 жащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Предотвращение инфекций, связанных с клостридиум диффициле. В третьем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения возникновения у субъекта инфекции, связанной с клостридиум диффициле, заключающимся во введении субъекту,имеющему риск возникновения такой инфекции, гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для предотвращения возникновения инфекции, связанной с клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Профилактика инфекций, вызванных клостридиум диффициле. В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к способам обеспечения субъекту профилактики инфекции, вызванной клостридиум диффициле, заключающимся во введении субъекту, имеющему такую инфекцию, гликопептидного антибиотика в количестве, достаточном для достижения профилактики инфекции, вызванной клостридиум диффициле. Гликопептидный антибиотик вводится предпочтительно в форме фармацевтического состава, содержащего гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Предпочтительно способ введения антибиотика - внутривенный или пероральный. Настоящее изобретение включает гликопептидный антибиотик предпочтительно оритаванцин или фармацевтически приемлемую соль, гидрат, или сольват этого соединения для введения субъекту в качестве лекарственного средства при лечении, профилактике и/или предотвращении инфекций, связанных с клостридиум диффициле. Настоящее изобретение также включает использование гликопептидного антибиотика в производстве медикамента для лечения, профилактики и/или предотвращения инфекций, связанных с клостридиум диффициле, у субъекта. Гликопептидным антибиотиком предпочтительно является оритаванцин или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения или их смесь. Настоящее изобретение включает также набор, состоящий из фармацевтического состава или гликопептидного антибиотика и печатных инструкций по его применению для лечения, профилактики и/или предотвращения инфекции, связанной с клостридиум диффициле, в подходящей упаковке. Гликопептидные антибиотики по настоящему изобретению включают соединения, имеющие формулу I Формула I а также фармацевтически приемлемые соли, гидраты и сольваты этих соединений и их смеси,где R1 обозначает водород, алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил,арил, гетероарил, гетероцикл и -Ra-Y-Rb-(Z)x или R1 обозначает сахаридную группу, которая может также иметь заместители -Ra-Rb-(Z)x, -Ra-Y-Rb-(Z)x, Rf, -C(O)Rf или -C(O)-Ra-Y-Rb-(Z)x;R2 обозначает водород или сахаридную группу, которая может также иметь заместители -Ra-Rb-(Z)x,aR4 выбирается из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, -Ra-Y-Rb-(Z)x,-C(O)Rd и сахаридную группу, которая может также иметь заместители -Ra-Y-Rb-(Z)x, Rf или -C(O)-Ra-Y-Rb-(Z)x; илиR4 и R5 могут быть связаны и вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют гетероцикл, который может также иметь заместитель -NRc-Ra-Y-Rb-(Z)x;R6 выбирается из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, -Ra-Y-Rb-(Z)x, -C(O)Rd и сахаридную группу, которая может также иметь заместители -Ra-Y-Rb-(Z)x, Rf, -C(O)Rf или -C(O)-Ra-Y-Rb-(Z)x; или R5 и R6 могут быть связаны и вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют гетероцикл, который может также иметь заместитель -NRc-Ra-Y-Rb-(Z)x;R8 и R10 связаны, образуя группу -Ar1O-Ar2-, где Ar1 и Ar2 независимо могут обозначать арилен или гетероарилен;R13 выбирается из группы, включающей водород или -OR14;Ra в каждом случае независимо выбирается из группы, включающей алкилен, замещенный алкилен,алкенилен, замещенный алкенилен, алкинилен и замещенный алкинилен;Rb в каждом случае независимо выбирается из группы, включающей ковалентную связь, арилен,алкилен, замещенный алкилен, алкенилен, замещенный алкенилен, алкинилен и замещенный алкинилен;Rc в каждом случае независимо выбирается из группы, включающей водород, алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, гетероарил, гетероцикл и -C(O)Rd;Rd в каждом случае независимо выбирается из группы, включающей алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, гетероарил и гетероцикл;Re в каждом случае обозначает сахаридную группу;Rf в каждом случае независимо обозначает алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, алкинил, замещенный алкинил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, гетероарил или гетероцикл;X в каждом случае независимо обозначает водород, фтор, хлор, бром или йод;Y в каждом случае независимо выбирается из группы, включающей -СН 2-, кислород, серу, -S-S-,-NRc-, -S(O)-, -SO2-, -NRcC(O)-, -OSO2-, -OC(O)-, -N(Rc)SO2-, -C(O)NRc-, -C(O)O-, -SO2NRc-, -SO2O-,-P(O)(ORc)O-, -P(O)(ORc)NRc-, -OP(O)(ORc)O-, -OP(O)(ORc)NRc-, -OC(O)O-, -NRcC(O)O-, -NRcC(O)NRc-,-OC(O)NRc-, -C(O)- и -N(Rc)SO2NRc-;Z в каждом случае независимо обозначает водород, арил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероарил,гетероцикл или сахарид; выбирается из илиx обозначает 1 или 2 и В частности, гликопептидные антибиотики формулы I включают тейкопланин, далбаванцин и телаванцин.-7 017564 Гликопептидные антибиотики по настоящему изобретению также включают соединения, имеющие формулу II Формула II а также фармацевтически приемлемые соли, гидраты и сольваты этих соединений и их смеси,где X и Y в каждом случае независимо обозначают водород или хлор;R обозначает водород, 4-эпиванкозаминил, актинозаминил, ристозаминил или группу с формулойR1 обозначает водород или маннозу;R5 обозначает водород или маннозу;R7, R7a и R7b в каждом случае независимо выбираются из группы, включающей водород,(С 2-С 16)алкенил, (С 2-С 12)алкинил, (C1-C12-алкил)-R8, (С 1-С 12-алкил)галоген, (С 2-С 6-алкенил)-R8,(С 2-С 6-алкинил)-R8 и (C1-C12-алкил)-О-R8, при условии, что R7, R7a и R7b не могут быть одновременно все водородами; иR8 выбирается из группы, включающей: а) многоядерный циклический арил, незамещенный или имеющий один или более заместителей, независимо выбранных из группы:(i) гидрокси,(ii) галоген,(iii) нитро,(iv) (С 1-С 6)алкил,(v) (С 2-С 6)алкенил,(vi) (С 2-С 6)алкинил,(vii) (С 1-С 6)алкокси,(viii) галоген(С 1-С 6)алкил,(ix) галоген(С 1-С 6)алкокси,(х) карбо(С 1-С 6)алкокси,(xi) карбобензилокси,(xii) карбобензилокси с заместителем (С 1-С 6)алкил, (С 1-С 6)алкокси, галоген или нитро,(xiii) группа с формулой -S(O)n'-R9, где n' обозначает 0-2, a R9 обозначает (С 1-С 6)алкил, фенил или фенил с заместителем (С 1-С 6)алкил, (С 1-С 6)алкокси, галоген или нитро, и(xiv) группа с формулой -C(O)N(R10)2, где каждый заместитель R10 независимо обозначает(С 1-С 6)алкил, (С 1-С 6)алкокси, фенил или фенил с заместителем (С 1-С 6)алкил, (С 1-С 6)алкокси, галоген или нитро; б) гетероарил, незамещенный или имеющий один или более заместителей, независимо выбранных из группы: где А 1 обозначает -ОС(А 2)2-С(А 2)2-О-, -О-С(А 2)2-О-, -С(А 2)2-О- или -С(А 2)2-С(А 2)2-С(А 2)2-С(А 2)2-, а каждый заместитель А 2 независимо выбирается из группы, включающей водород, (С 1-С 6)алкил,(С 1-С 6)алкокси и (С 4-С 10)циклоалкил; г) группа с формулойR11 независимо выбирается из группы:(xxii) дифенил(С 1-С 6)алкил,при условии что, когда R11 представлен группой (С 1-С 8)алкил, (С 1-С 8)алкокси или галогеном, р должно быть больше или равно 2, или если R7 представлен группой (C1-С 3-алкил)-R8, то R11 не может быть водородом, (С 1-С 8)алкилом, (С 1-С 8)алкокси или галогеном; д) группа с формулойR12 независимо выбирается из группы:R13 независимо выбирается из группы:(iv) фенил, незамещенный или имеющий от 1 до 5 заместителей, независимо выбранных из группы: галоген, гидрокси, нитро, (С 1-С 10)алкил, (С 1-С 10)алкокси, галоген(С 1-С 3)алкокси, галоген(С 1-С 3)алкил,(С 1-С 3)алкоксифенил, фенил, фенил(С 1-С 3)алкил, (С 1-С 6)алкоксифенил, фенил(С 2-С 3)алкинил и(С 1-С 6)алкилфенил; е) (С 4-С 10)циклоалкил, незамещенный или имеющий один или более заместителей, независимо выбранных из группы: где А 3 и А 4 в каждом случае независимо выбираются из группы:(i) свободная связь,(ii) -О-,(iii) -S(O)t, где t - число от 0 до 2,(iv) -C(R17)2-, где каждый заместитель R17 независимо выбирается из группы, включающей водород,(С 1-С 6)алкил, гидрокси, (С 1-С 6)алкил, (С 1-С 6)алкокси, или оба заместителя R17 одновременно являются атомами О,(v) -N(R18)2-, где каждый заместитель R18 независимо выбирается из группы, включающей водород;(С 1-С 6)алкил; (С 2-С 6)алкенил; (С 2-С 6)алкинил; (С 4-С 10)циклоалкил; фенил; фенил с заместителями нитро,галоген, (С 1-С 6)алканоилокси; или оба заместителя R18 одновременно представляют группуR16 соответствует R12 или R13, определенным выше; u равно 0-4. Гликопептидные антибиотики настоящего изобретения включают все соединения, раскрытые в патенте США 5840684, включенном в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.- 10017564 Оритаванцин (также называемый N-(4-(4-хлорфенил)бензил)А 82846 В и LY333328) имеет следующую формулу III: Формула III Термин "алкил", упоминаемый здесь, относится к замещенной или незамещенной, линейной или разветвленной углеводородной цепи указанной длины. Термин "алкенил", упоминаемый здесь, относится к замещенной или незамещенной, линейной или разветвленной цепи алкенила указанной здесь длины. Термин "алкинил", упоминаемый здесь, относится к замещенной или незамещенной, линейной или разветвленной цепи алкинила указанной здесь длины. Термин "алкокси", упоминаемый здесь, относится к цепи алкила, присоединенной через кислородный мостик. Термин "алкенокси", упоминаемый здесь, относится к цепи алкенила указанной длины, которая присоединена к атому кислорода. Термин "многоядерный циклический арил" относится к устойчивому, насыщенному или ненасыщенному, замещенному или незамещенному 9-10-членному органическому сочлененному бициклу; устойчивому, насыщенному или ненасыщенному, замещенному или незамещенному 12-14-членному органическому сочлененному трициклу или устойчивому, насыщенному или ненасыщенному, замещенному или незамещенному 14-16-членному органическому сочлененному тетрациклу. Бицикл (двухъядерное кольцо) может иметь от 0 до 4 заместителей, трицикл (трехъядерное кольцо) может иметь от 0 до 6 заместителей, а тетрацикл (четырехъядерное кольцо) может иметь от 0 до 8 заместителей. Типичные многоядерные циклические арилы включают фторенил, нафтил, антранил, фенантранил, бифенилен и пиренил. Термин "гетероарил" относится к устойчивому, насыщенному или ненасыщенному, замещенному или незамещенному 4-7-членному органическому моноциклу, содержащему один гетероатом S, O или N; устойчивому, насыщенному или ненасыщенному, замещенному или незамещенному 9-10-членному органическому сочлененному бициклу, содержащему 1-2 гетероатома, выбранных из атомов S, O и N; или устойчивому, насыщенному или ненасыщенному, замещенному или незамещенному 12-14-членному органическому сочлененному трициклу, содержащему один гетероатом S, O или N. Атомы азота и серы в этих кольцах могут быть также окисленными, а гетероатомы азота могут быть также четвертичными. Моноцикл (моноядерное кольцо) может иметь от 0 до 5 заместителей. Бицикл (двухъядерное кольцо) может иметь от 0 до 7 заместителей, а трицикл (трехъядерное кольцо) может иметь от 0 до 9 заместителей. Типичные гетероарилы включают хинолил, пиперидил, тиенил, пиперонил, оксафторенил, пиридил и бензотиенил и подобные им структуры. Термин "(С 4-С 10)циклоалкил" охватывает заместители, содержащие от 4 до 10 атомов углерода, такие как циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил, которые могут быть незамещенными или могут иметь заместители, такие как алкил и фенил. Этот термин также охватывает 5-10-членные циклоалкенилы, такие как циклопентенил и циклогексенил. Термин "(С 4-С 10)циклоалкил" также охватывает бициклические и трициклические циклоалкилы, такие как бициклопентил, бициклогексил, бициклогептил и адамантил. Термин "алканоилокси" представляет алканоилгруппу, присоединенную через кислородный мостик. Эти заместители могут быть замещенными или незамещенными, линейными или разветвленными цепями указанной длины.- 11017564 Термин "циано(С 1-С 6)алкокси" представляет замещенные или незамещенные, линейные или разветвленные алкоксицепи, содержащие от 1 до 6 атомов углерода с присоединенной к ним цианогруппой. Термин "двухвалентный (С 1-С 6)алкил" представляет замещенную или незамещенную, линейную или разветвленную цепь алкила с двумя вакантными связями, содержащую от 1 до 6 атомов углерода. Типичными двухвалентными (C1-С 6)алкилами являются метилен, этилен, пропилен, изопропилен, бутилен, изобутилен, втор-бутилен, трет-бутилен, пентилен, неопентилен и гексилен. Такие двухвалентные(С 1-С 6)алкилы могут также иметь заместители, такие как алкил, алкокси и гидрокси. Термин "двухвалентный (С 2-С 6)алкенил" представляет замещенную или незамещенную, линейную или разветвленную цепь алкенила с двумя вакантными связями, содержащую от 2 до 6 атомов углерода. Типичными двухвалентными (С 2-С 6)алкенилами являются этенил, 1-пропенил, 2-пропенил,1-бутенил, 2-бутенил и т.п. Термин "двухвалентный (С 2-С 6)алкинил" представляет замещенную или незамещенную, линейную или разветвленную цепь алкинила с двумя вакантными связями, содержащую от 2 до 6 атомов углерода. Типичными двухвалентными (С 2-С 6)алкинилами являются этинилен, 1-пропинилен, 2-пропинилен,1-бутинилен, 2-бутинилен и т.п. Термин "галоген" представляет хлор, фтор, бром или йод. Термин "галоген(С 1-С 6)алкил" представляет линейную или разветвленную цепь алкила, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, к каждому из которых присоединено от 0 до 3 атомов галогена. Типичными галоген(С 1-С 6)алкилами являются хлорметил, 2-бромэтил, 1-хлоризопропил,3-фторпропил, 2,3-дибромбутил, 3-хлоризобутил, йод-трет-бутил, трифторметил и т.п. Термин "галоген(С 1-С 6)алкокси" представляет линейную или разветвленную алкоксицепь, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, к каждому из которых присоединено от 0 до 3 атомов галогена. Типичными галоген(С 1-С 6)алкоксигруппами являются хлорметокси, 2-бромэтокси, 1-хлоризопропокси, 3-фторпропокси, 2,3-дибромбутокси, 3-хлоризобутокси, йод-трет-бутокси, трифторметокси и т.п. Термин "гетероциклил" охватывает насыщенные группы, включающие 3-10-членные кольца, в которых гетероциклическое кольцо содержит гетероатом кислорода, серу или азот. Примерами гетероциклилов являются пиперазинил, морфолино, пиперидил, метилпиперидил, азетидинил и азиридинил. Гликопептидные антибиотики настоящего изобретения, включающие оритаванцин, могут использоваться как таковые или в форме фармацевтически приемлемых солей, гидратов, сольватов этих соединений или их смесей. Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к нетоксичным солям присоединения кислот, образуемым при добавлении минеральных и органических кислот. Кислоты, обычно используемые для образования солей присоединения кислот, являются минеральными кислотами, такими как соляная, бромисто-водородная, йодисто-водородная, серная, фосфорная кислоты и т.п., и органическими кислотами, такими как п-толуолсульфоновая, метансульфоновая, щавелевая, п-бромфенисульфоновая, угольная, янтарная, лимонная, бензойная, уксусная кислоты и т.п. Соли присоединения оснований включают соли, полученные при добавлении неорганических оснований, таких как гидроксиды аммония или щелочных или щелочно-земельных металлов, карбонаты, бикарбонаты и т.п. Такие основания, полезные для получения солей настоящего изобретения, включают, в частности,гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, гидроксид кальция, карбонат кальция и т.п. Особенно предпочтительными являются соли калия и натрия. Следует отметить, что конкретный противоион, входящий в состав любой соли этого изобретения,не играет существенной роли, если соль в целом является фармакологически приемлемой, а противоион не вносит нежелательных качеств в свойства соли. Способы получения гликопептидных антибиотиков, включая оритаванцин и его аналоги, могут быть найдены, например, в патенте США 5840684, включенном в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Гликопептидные антибиотики настоящего изобретения, включая оритаванцин, могут также использоваться в форме пролекарств, таких как гликопептидные антибиотики, имеющие в своем составе по крайней мере один фрагмент поли(этиленгликоля), как раскрыто в международной заявке на патентPCT/US2008/057841, включенной в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Наличие поли(этиленгликоль)группы, присоединенной к гликопептиду, коррелируется с более высокой растворимостью гликопептидных антибиотиков в водных средах. Достижение более высоких концентраций гликопептидных антибиотиков в водных средах улучшает состав и уменьшает объем инъекции, вливания или перорального приема лекарства. Кроме того, наличие поли(этиленгликоль)группы позволяет маскировать антибиотик во время инъекции, вливания или перорального приема. Комбинация этих двух факторов и сравнительно малая токсичность, связанная с поли(этиленгликолем), позволяют снизить побочные эффекты, наблюдаемые во время введения гликопептидных антибиотиков. В предпочтительном осуществлении настоящего изобретения поли(этиленгликоль)группа в таких пролекарствах имеет средний молекулярный вес 900 г/моль или больше.- 12017564 В описании настоящего изобретения термин "субъект" относится к представителям животного мира, таким как виды птиц или млекопитающих, включая людей, обезьян, лошадей, коров, овец, коз, собак и кошек. Субъект может иметь инфекцию, вызванную клостридиум диффициле, может иметь риск возникновения инфекции клостридиум диффициле или может быть подвержен гораздо большему риску развития инфекции клостридиум диффициле, чем основная популяция. Примеры субъектов, подверженных более высокому риску развития инфекции клостридиум диффициле, включают пациентов, проходящих лечение от бактериальных инфекций, в результате чего нормальная микрофлора кишечника ингибируется бактерицидной терапией, пациентов со сниженной иммунной функцией (например, в случае иммуноглобулиновой недостаточности, дисфункции селезенки, удаления селезенки, ВИЧ-инфекции, нарушения функции лейкоцитов, гемоглобинопатии), пожилых людей (Loo et al., 2005. NEJM 353:2442),людей с определенными злокачественными новообразованиями (например, в случае множественной миеломы, хронического лимфоцитарного лейкоза, лимфомы), людей с повышенным риском профессиональных заболеваний (например, работников коммунального обслуживания, таких как пожарные, сантехники, санэпидемиологи, работники полиции, медицинских учреждений, лабораторий и больниц), людей в изолированных популяциях (например, в тюрьмах, воинских частях, домах престарелых) и других людей, имеющих иммунологические нарушения, которые могут повысить их восприимчивость к бактериальным инфекциям. Способы настоящего изобретения могут осуществляться in vivo, in vitro или ex vivo. Способы, осуществляемые in vitro, иллюстрируются, но не ограничиваются, способами, выполненными в лабораторной обстановке, например на культуре клеток, а также способами, выполненными на инертных объектах,таких как лабораторное или больничное оборудование и устройства, поверхности, таких как столешницы лабораторных столов и поверхности скамеек. Способы, осуществляемые ex vivo, иллюстрируются, но не ограничиваются, способами, выполненными на поверхности человеческого тела, например на руках. В одном воплощении способы настоящего изобретения включают использование одного или более гликопептидных антибиотиков, а в другом воплощении - использование фармацевтических составов,содержащих один или более гликопептидных антибиотиков. Фармацевтические составы настоящего изобретения содержат один или более гликопептидных антибиотиков и один или более носителей, разбавителей и инертных наполнителей. Подходящие носители, разбавители и инертные наполнители хорошо известны специалистам в области фармацевтики и включают солевой раствор, буферный солевой раствор, декстрозу (например, 5%-ный раствор декстрозы в воде), воду, глицерин, этанол, пропиленгликоль,полисорбат 80 (Tween-80), поли(этилен)гликоль 300 и 400 (PEG 300 и 400), оксиэтилированное с помощью PEG касторовое масло (например, кремофор EL), полоксамер 407 и 188, циклодекстрин или производное циклодекстрина (включая HPCD - (2-оксипропил)циклодекстрин и (2-оксиэтил)циклодекстрин,см., например, публикацию заявки на патент США 20060194717), гидрофильные и гидрофобные носители и комбинации этих компонентов. Гидрофобные носители включают, например, жировые эмульсии,липиды, оксиэтилированные с помощью PEG фосфолипиды, полимерные матрицы, биологически совместимые полимеры, липосферы, везикулы, частицы и липосомы. В описании терминов специально не упоминается питательная среда культур клеток. Инертные наполнители, включенные в состав, имеют различное назначение, которое зависит, например, от природы лекарственного средства и режима введения. Примеры обычно используемых инертных наполнителей включают следующие наполнители, но не ограничиваются ими: стабилизаторы,солюбилизирующие компоненты и поверхностно-активные вещества, буферные составы, антиоксиданты и консерванты, тонизирующие средства, просто наполнители, умягчители, эмульгаторы, суспендирующие средства или компоненты для повышения вязкости, инертные разбавители, объемообразующие средства, добавки для рассыпчатости, связующие добавки, смачивающие вещества, бактерицидные средства, хелатирующие агенты, подсластители, ароматизаторы, красящие пигменты, вспомогательные лекарственные добавки и комбинации этих компонентов. Составы могут содержать общепринятые носители и инертные наполнители, такие как кукурузный крахмал или желатин, лактоза, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, каолин, маннитол, дикальций-фосфат, хлорид натрия, альгиновая кислота,кроскармеллоза натрия и натриевая соль гликолята крахмала. Конкретный носитель, разбавитель или инертный наполнитель для использования будут зависеть от способов и целей применения активного ингредиента. Фармацевтически приемлемые инертные наполнители также включают тонизирующие средства,которые делают состав совместимым с кровью. Тонизирующие средства особенно желательны для составов, вводимых путем инъекции. Конкретные фармацевтические составы и гликопептидные антибиотики настоящего изобретения могут быть предназначены, например, для перорального, подъязычного, внутриносового, внутриглазного, ректального, трансдермального введения, введения через слизистую оболочку, наружного применения или парентерального введения. Парентеральные способы введения включают, но не ограничиваются,внутрикожное, подкожное (s.c, s.q., sub-Q, Hypo), внутримышечное (i.m), внутривенное (i.v), внутрибрюшное (i.p), внутриартериальное, интрамедуллярное, внутрисердечное, внутрисуставное, внутрисино- 13017564 виальное (жидкая область суставов), внутричерепное, внутрипозвоночное и внутриоболочечное (жидкости позвоночного канала) введения. Для этих способов введения может использоваться любое известное устройство, полезное для парентеральной инъекции или составления рецептуры лекарственного средства. Составы для парентерального введения могут быть в форме водных или неводных изотонических стерильных растворов для инъекции, суспензий или жировых эмульсий. Парентеральная форма, используемая для инъекции, должна быть в достаточной мере жидкой, чтобы ее можно было ввести шприцем. Эти растворы или суспензии могут быть приготовлены из стерильных концентрированных жидкостей,порошков или гранул. Инертные наполнители, используемые в парентеральных препаратах, также включают, но не ограничиваются указанным списком, следующие добавки: стабилизаторы (например, углеводы, аминокислоты и полисорбаты, такие как 5%-ный раствор декстрозы), солюбилизирующие компоненты (например,цетримид, докузат натрия, глицерил моноолеат, поливинилпирролидон (PVP) и полиэтиленгликоль(PEG, поверхностно-активные вещества (например, полисорбаты, токоферол-сукцинат/PEG, полоксамер и кремофор (Cremophor, буферные растворы (например, ацетаты, цитраты, фосфаты, тартраты,лактаты, сукцинаты, аминокислоты и т.п.), антиоксиданты и консерванты (например, ВНА, ВНТ, гентизиновые кислоты, витамин Е, аскорбиновая кислота, аскорбат натрия и серосодержащие вещества, такие как сульфиты, бисульфиты, метабисульфиты, тиоглицерины, тиогликоляты и т.п.), тонизирующие средства (для обеспечения физиологической совместимости), суспендирующие средства или компоненты для повышения вязкости, бактерицидные средства (например, тимеросол, бензетоний хлорид, бензалконий хлорид, фенол, крезол и хлорбутанол), хелатирующие агенты и вспомогательные лекарственные добавки(например, местные анестезирующие средства, противовоспалительные средства, вещества, препятствующие свертыванию крови, сосудосуживающие средства для пролонгирования действия и средства,увеличивающие проницаемость тканей) и комбинации этих компонентов. Парентеральные составы, содержащие гидрофобные носители, включают, например, жировые эмульсии и рецептуры, содержащие липиды, липосферы, визикулы, частицы и липосомы. Жировые эмульсии включают, в дополнение к вышеупомянутым инертным наполнителям, липиды и водную фазу,а также добавки, такие как эмульгаторы (например, фосфолипиды, полоксамеры, полисорбаты и оксиэтилированное касторовое масло), и осмотические средства (например, хлористый натрий, глицерин,сорбит, ксилит и глюкоза). Липосомы включают природные или синтетические фосфолипиды, а также могут включать стабилизаторы, такие как холестерин. В другом воплощении изобретения парентеральная форма разовой дозы гликопептидных антибиотиков может быть готовым раствором гликопептидного антибиотика в подходящем носителе в стерильной, герметично запаянной ампуле или в стерильном, предварительно заполненном шприце. Подходящий носитель может также включать любой из вышеупомянутых инертных наполнителей. В другом воплощении разовая доза гликопептидных антибиотиков настоящего изобретения может находиться в концентрированной жидкой, порошковой или гранулированной форме для последующего разбавления концентрата в подходящем фармацевтически приемлемом носителе, таком как стерильная вода, во время введения, ex tempore (по мере надобности). В дополнение к вышеупомянутым инертным наполнителям порошковые формы могут также включать объемообразующие наполнители (например,маннитол, глицин, лактозу, сахарозу, трегалозу, декстран, оксиэтилированный крахмал, фиколл и желатин), а также крио- или лиоконсерванты для предохранения ингредиентов на этапе лиофилизации. Для внутривенного введения (IV) стерильный фармацевтический состав настоящего изобретения и(необязательно) одна или более добавок, включая солюбилизаторы или поверхностно-активные вещества, могут быть растворены или суспендированы в любой из обычно используемых внутривенных жидкостей и применяться путем вливания. Жидкости для внутривенного вливания включают, но не ограничиваются перечисленным, физиологический солевой раствор, солевой раствор с фосфатным буфером,5%-ный раствор декстрозы в воде или раствор Рингера (Ringer). В случае внутримышечных препаратов стерильный фармацевтический состав настоящего изобретения может быть растворен и введен в фармацевтическом разбавителе, таком как вода для инъекций(WFI), физиологический солевой раствор или 5%-ный раствор декстрозы в воде. Подходящая нерастворимая форма фармацевтических составов может быть приготовлена и введена в виде суспензии на водной основе или фармацевтически приемлемой масляной основе, например с использованием сложного эфира длинноцепной жирной кислоты, такого как этилолеат. Для перорального введения фармацевтический состав может быть приготовлен в форме разовой дозы, содержащей терапевтически эффективное количество лекарственного средства. Особенно удобны твердые формы препаратов, такие как таблетки и капсулы. Также могут быть разработаны препараты с пролонгированным действием или покрытые энтеросолюбильной оболочкой. Для детей и престарелых пациентов особенно подходят препараты в форме суспензий, сиропов и жевательных таблеток. Для перорального приема фармацевтические составы могут находиться, например, в форме таблеток, капсул,суспензий или жидких сиропов или эликсиров, пластинок и т.п. Для общего перорального приема инертный наполнитель или добавки включают, но не ограничиваются перечисленным, инертные разбавители,- 14017564 просто наполнители, добавки для рассыпчатости, связующие добавки, смачивающие вещества, умягчители, подсластители, ароматизаторы, красящие пигменты и консерванты. В терапевтических целях таблетки и капсулы могут содержать, в дополнение к гликопептидным антибиотикам, следующие обычные носители: инертные разбавители (например, карбонаты натрия и кальция, фосфаты натрия и кальция и лактоза), связующие вещества (например, аравийская камедь, крахмал,желатин, сахароза, поливинилпирролидон (повидон), сорбит, трагакантовая камедь с метилцеллюлозой,натрийсодержащая карбоксиметилцеллюлоза, оксипропилметилцеллюлоза и этилцеллюлоза), наполнители (например, фосфат кальция, глицин, лактоза, маисовый крахмал, сорбит или сахароза), смачивающие добавки, умягчители (например, стеараты металлов, стеариновая кислота, полиэтиленгликоль, парафины, масла, диоксид кремния и коллоидный диоксид кремния, силиконовое масло или тальк), добавки для рассыпчатости (например, картофельный крахмал, кукурузный крахмал и альгиновая кислота), ароматизаторы (например, мята, масло грушанки, фруктовые ароматизаторы, вишня, виноград, жевательная резинка и т. п.) и пигменты. Носители могут также включать покрытия из инертных наполнителей, таких как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, которые замедляют поглощение препарата в желудочно-кишечном тракте. В частности, в рецептуре для перорального приема гликопептидные антибиотики настоящего изобретения могут быть в форме капсулы, содержащей гликопептидный антибиотик, желатин, оксид железа,полиэтиленгликоль, диоксид титана и один или более других неактивных ингредиентов. Подходящие количества гликопептидного антибиотика в капсуле могут варьироваться от приблизительно 10 до приблизительно 3000 мг, с предпочтительными количествами, включающими приблизительно 100, 125, 150,175, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100,1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450 и 1500 мг гликопептидного антибиотика. Рецептуры для перорального приема могут также включать полиэтиленгликоль (PEG), где марки PEG могут варьироваться от приблизительно PEG200 до приблизительно PEG8000, предпочтительно от приблизительно PEG400 до приблизительно PEG6000. Пероральные жидкие препараты, обычно в форме водных или масляных растворов, суспензий,эмульсий или эликсиров, могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, эмульгаторы, неводные вещества, консерванты, красящие пигменты и ароматизаторы. Примеры добавок для жидких препаратов включают акациевое, миндальное масло, этиловый спирт, фракционированное кокосовое масло, желатин, крахмальную патоку, глицерин, гидрированные пищевые жиры, лецитин, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, метил- или пропил-пара-оксибензоат, пропиленгликоль,сорбит или сорбиновую кислоту. Для наружного и местного применения фармацевтические составы настоящего изобретения могут быть также приготовлены в подходящих формах для нанесения на кожу или слизистые оболочки носа и горла и могут находиться в форме кремов, мазей, носовых капель, аэрозолей или вдыхаемых препаратов,сосательных таблеток или мазей для горла. Такие наружные препараты могут также включать химические соединения, такие как диметилсульфоксид (DMSO), способствующие впитыванию активного ингредиента поверхностью. Для введения в глаза или уши фармацевтические составы могут быть приготовлены в жидкой или полужидкой форме в гидрофобных или гидрофильных основах в виде капель,кремов, лосьонов, мазей или порошков. Для ректального введения фармацевтические составы могут применяться в форме свеч, содержащих добавки обычных носителей, таких как масло какао, воск или другой глицерид. В предпочтительном внутривенном (IV) составе для использования в способах настоящего изобретения доза оритаванцина варьируется приблизительно от 100 до 2000 мг и предпочтительно составляет приблизительно 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900,1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 мг или больше для внутривенного вливания в течение приблизительно 60, 90, 120 мин или более, каждые 6, 12, 18 или 24 ч на протяжении 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более дней. В этом воплощении изобретения оритаванцин может быть ресуспендирован в стерильной воде для инъекций (WFI). Далее в этом воплощении оритаванцин может быть разбавлен 5%-ным водным раствором декстрозы (D5W) до полного объема не менее 250 мл. Предпочтительно в результате должна получиться концентрация не больше 0,8 мг/мл для дозы 200 мг, 1,0 мг/мл для дозы 250 мг и 1,2 мг/мл для дозы 300 мг. В предпочтительной рецептуре перорального введения для использования в способах настоящего изобретения доза перорального приема оритаванцина варьируется в диапазоне приблизительно 0,5-100 мг на 1 кг массы тела субъекта, принимающего препарат перорально, наиболее предпочтительна доза приема в диапазоне приблизительно 5-30 мг/кг, включая дозы приблизительно 5, 10, 15, 20, 25 и 30 мг/кг. Курс лечения путем перорального приема может составлять прием одной дозы или прием нескольких доз. При пероральном приеме нескольких доз может назначаться режим их приема один раз,два раза, три раза или более в сутки. Длительность курса перорального приема может составлять 1 или более дней, включая 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более дней. В одном воплощении изобретения оритаванцин может быть смешан с 10%-ным оксипропил-бета-циклодекстрином. В другом воплощении изобретения оритаванцин может быть смешан с 85%-ным полиэтиленгликолем 400 (PEG400) в стерильной воде.- 15017564 Препарат для перорального приема может быть в форме жидкости, которая выпивается субъектом, в форме капсулы, содержащей препарат оритаванцина, или в других формах, известных в фармацевтике для перорального введения лекарственных средств. Каждый из способов настоящего изобретения может также осуществляться с включением дополнительной бактерицидной добавки к гликопептидному антибиотику или фармацевтическому составу. Такие бактерицидные средства добавляются к одному или более гликопептидных антибиотиков, которые могут использоваться в каждом из способов. Дополнительные бактерицидные средства включают рифамицин,сульфонамид, бета-лактам, тетрациклин, хлорамфеникол, аминогликозид, макролид, стрептограмин, хинолон, фторхинолон, оксазолидинон и липопептид. В частности, предпочтительны тетрациклин, бактерицидные средства на основе тетрациклина, глицилциклин, бактерицидные средства на основе глицилциклина, миноциклин, бактерицидные средства на основе миноциклина, бактерицидные средства на основе оксазолидинона, бактерицидные средства на основе аминогликозида, бактерицидные средства на основе хинолона, ванкомицин, бактерицидные средства на основе ванкомицина, тейкопланин, бактерицидные средства на основе тейкопланина, эремомицин, бактерицидные средства на основе эремомицина,хлорэремомицин, бактерицидные средства на основе хлорэремомицина, даптомицин и бактерицидные средства на основе даптомицина. Термины "доза", "разовая доза", "разовая дозировка" или "эффективная доза" относятся к физически дискретным единицам, которые содержат заданное количество активного ингредиента, рассчитанного для оказания желательного терапевтического эффекта. Эти термины являются синонимами, относящимися к терапевтически эффективным количествам и количествам, достаточным для достижения намеченных целей в способах настоящего изобретения. Терапевтически эффективное количество гликопептидных антибиотиков настоящего изобретения и количество, достаточное для достижения намеченных целей, в способах, раскрытых здесь, варьируются в зависимости от физических характеристик субъекта, серьезности симптомов у субъекта, состава и способа введения лекарственного средства и применяемого способа изобретения. Конкретная доза для данного субъекта обычно назначается по усмотрению лечащего врача. Тем не менее, терапевтически эффективное и/или достаточное количество гликопептидных антибиотиков настоящего изобретения, включая оритаванцин, обычно составляет приблизительно от 0,5 до 100 мг на 1 кг массы тела субъекта, предпочтительно от 1 до 50 мг/кг, наиболее предпочтительно от 5 до 30 мг/кг, независимо от рецептуры состава. В одинаково предпочтительных воплощениях терапевтически эффективное количество, используемое для введения одной дозы или нечастого введения доз, составляет приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 мг на 1 кг массы тела, независимо от рецептуры состава. В некоторых ситуациях может быть эффективной доза меньше 0,5 мг или больше 100 мг на 1 кг массы тела. Подходящая частота введения может варьироваться в зависимости от целей введения препарата: лечение, профилактика или предотвращение инфекции. Частоты введения доз для лечения субъекта,имеющего инфекцию, вызванную клостридиум диффициле, для профилактики или для предотвращения развития инфекции клостридиум диффициле, включают 4, 3, 2 или 1 раз в день, через день, каждый третий день, каждый четвертый день, каждый пятый день, каждый шестой день, раз в неделю, каждые восемь дней, каждые девять дней, каждые десять дней, раз в две недели, раз в месяц и два раза в месяц. В некоторых способах и воплощениях настоящего изобретения введение одной дозы или нечастое введение доз (например, 2, 3, 4, 5 или 6 доз) могут быть достаточными для достижения намеченных целей в способах, заявленных здесь. В других воплощениях для курса лечения может потребоваться многократное введение доз на протяжении длительного промежутка времени, например введение дозы 4, 3, 2 или 1 раз в день на протяжении 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или более дней. В зависимости от способов введения доза может вводиться сразу целиком, например в форме капсулы для перорального приема, или медленно в течение промежутка времени, например при внутривенном вливании. Для способов медленного введения длительность периода введения может составлять минуты, например приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100,105, 110, 115, 120 мин или более, или часы, например приблизительно 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 4,5; 5 ч или более. В описании настоящего изобретения термины "ингибировать", "подавлять", "ингибирование" и"подавление" имеют свои обычные и общепринятые значения и включают один или более видов ингибирования: ингибирование роста вегетативной формы клостридиум диффициле, ингибирование функций вегетативной формы клостридиум диффициле, ингибирование размножения вегетативной формы клостридиум диффициле, ингибирование спорообразования клостридиум диффициле, ингибирование активации спор клостридиум диффициле, ингибирование прорастания спор клостридиум диффициле и ингибирование бурного прорастания спор клостридиум диффициле. Такое ингибирование подразумевает подавление от приблизительно 1 до приблизительно 100% активности частиц по сравнению с их активностью у субъекта, которому не вводился фармацевтический состав гликопептидного антибиотика настоящего изобретения. Предпочтительно ингибирование подразумевает подавление приблизительно 100, 99,98, 97, 96, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 или 1% активности по сравнению с их активностью у- 16017564 субъекта, которому не вводился фармацевтический состав или гликопептидный антибиотик настоящего изобретения. В описании настоящего изобретения термин "спора" относится к обычно используемым терминам "спора" и "эндоспора". В описании настоящего изобретения термины "лечить" и "лечение" имеют свои обычные и общепринятые значения и подразумевают один или более видов облегчения симптомов инфекции клостридиум диффициле у субъекта, блокирование или облегчение рецидива симптома инфекции клостридиум диффициле у субъекта, уменьшение серьезности и/или частоты симптома инфекции клостридиум диффициле у субъекта, остановку прогрессирования, уменьшение или подавление роста вегетативной формы клостридиум диффициле у субъекта, ингибирование спорообразования клостридиум диффициле, ингибирование активации спор клостридиум диффициле у субъекта, ингибирование прорастания спор клостридиум диффициле у субъекта и ингибирование бурного прорастания спор клостридиум диффициле у субъекта. Лечение означает облегчение, блокирование, уменьшение, ингибирование или подавление на величину приблизительно от 1 до 100% по сравнению с субъектом, которому не вводился фармацевтический состав или гликопептидный антибиотик настоящего изобретения. Преимущественно подразумевается блокирование, уменьшение, ингибирование или подавление активности на величину приблизительно 100, 99, 98, 97, 96, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 или 1% по сравнению с активностью у субъекта, которому не вводился фармацевтический состав или гликопептидный антибиотик настоящего изобретения. В описании настоящего изобретения термины "предотвращать" и "предотвращение" имеют свои обычные и общепринятые значения и подразумевают один или более видов предотвращения образования колоний клостридиум диффициле у субъекта, предотвращение увеличения роста популяции клостридиум диффициле у субъекта, предотвращение активации, прорастания или бурного прорастания спор клостридиум диффициле у субъекта, предотвращение спорообразования клостридиум диффициле у субъекта, предотвращение развития болезни, вызванной клостридиум диффициле, у субъекта и предотвращение симптомов болезни, вызванной клостридиум диффициле, у субъекта. Как используется здесь, эффект предотвращения длится не менее приблизительно 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30,35, 40, 45, 50 или больше дней после введения фармацевтического состава или гликопептидного антибиотика настоящего изобретения. В описании настоящего изобретения термин "профилактика" включает ингибирование развития продуктивной или прогрессирующей инфекции клостридиум диффициле у субъекта, где эффект профилактики длится не менее приблизительно 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 45,50 или больше дней после введения фармацевтического состава или гликопептидного антибиотика настоящего изобретения. Ингибирование развития продуктивной или прогрессирующей инфекции, вызванной клостридиум диффициле, означает, что степень серьезности инфекции клостридиум диффициле у субъекта уменьшается на величину приблизительно от 1 до 100% по сравнению с субъектом, которому не вводился фармацевтический состав или гликопептидный антибиотик настоящего изобретения. Преимущественно уменьшение степени серьезности составляет приблизительно 100, 99, 98, 97, 96, 95, 90, 80,70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 или 1% уменьшения степени серьезности. Степень серьезности инфекции может быть основана на количестве бактерий клостридиум диффициле у субъекта, промежутке времени, в течение которого бактерии клостридиум диффициле обнаруживаются у субъекта, и/или серьезности симптома инфекции клостридиум диффициле, наряду с другими факторами. В описании настоящего изобретения термин "раз в две недели" подразумевает частоту каждые 1315 дней, термин "раз в месяц" подразумевает частоту каждые 28-31 день, а термин "раз в два месяца" подразумевает частоту каждые 58-62 дня. В описании настоящего изобретения термины "воздействие" и "контакт" означают, в широком смысле, целенаправленное сближение бактериальной клетки и молекулы гликопептидного антибиотика настоящего изобретения в достаточной мере, чтобы гликопептидный антибиотик мог оказать влияние на бактериальную клетку. Гликопептидный антибиотик может быть транспортирован к местоположению бактериальной клетки, или гликопептидный антибиотик может находиться в местоположении, к которому движется бактериальная клетка, или создаются условия для их прямого контакта. Квалифицированные специалисты в этой области понимают, что термины "воздействие" и "контакт" включают физическое взаимодействие между гликопептидным антибиотиком и бактериальной клеткой, а также воздействия, которые не требуют физического взаимодействия. В описании настоящего изобретения термин "клостридиум диффициле" ("Clostridium difficile", или"С.difficile") относится ко всем штаммам, видам и подвидам клостридиум диффициле. ПЦРриботипирование может использоваться, чтобы отличать различные штаммы, виды и подвиды клостридиум диффициле. Только в качестве примера можно упомянуть, что штамм клостридиум диффициле,охватываемый рамками настоящего изобретения, включает, в частности, ПЦР-риботипы 001, 106 и 027 клостридиум диффициле.- 17017564 Примеры Пример 1. В этих исследованиях оценивалась активность метронидазола (MET), ванкомицина (VAN) и оритаванцина (ORI) в отношении спор клостридиум диффициле с помощью трех экспериментальных методов: анализ спирального градиента конечных точек, выращивание культуры на основе агара и фазовоконтрастная микроскопия. Приготовление спор клостридиум диффиииле. ПЦР-риботипы 001, 106 и 027 клостридиум диффициле высевали в колумбийский кровяной агар и инкубировали анаэробно (при 37 С) в течение 10 дней. Результат посева собирали в стерильный солевой раствор и воздействовали на него равным объемом 100%-ного этанола в течение 1 ч. Подавленную спиртом суспензию спор интенсивно перемешивали и подвергали действию ультразвука в течение 5 мин при комнатной температуре. Фазу светлых спор клостридиум диффициле (непроросшие споры) отделяли от фазы темных спор (проросшие споры) и продуктов распада клеток путем центрифугирования в градиенте плотности (4000 об/мин, 15 мин) после расслаивания в 50%-ном растворе (в солевом растворе с фосфатным буфером, об./об.) урографина 370 (компании Schering, Германия). Процедуру центрифугирования в градиенте плотности выполняли дважды. Гранулы очищенных спор повторно суспендировали в стерильном солевом растворе (по 1 мл в 10 чашках собранного посева на колумбийском кровяном агаре). Процент светлой фазы спор, темной фазы спор и вегетативных клеток регистрировали методом фазовоконтрастной микроскопии (100-кратное увеличение). Анализ спирального градиента конечных точек. Исходные бактерицидные растворы готовили в деминерализованной воде (метронидазол, ванкомицин) 0,002% полисорбат-80 (оритаванцин). Для нанесения антибиотика с логарифмическим градиентом на поверхность предварительно высушенного (37 С, 20 мин) агара Брейзиера (pH 7) использовали специальное устройство (WASP2, Don Whitley Scientific, Великобритания). Агар с бактерицидом, нанесенным на его поверхность с логарифмическими градиентами, выдерживали при комнатной температуре в течение 1 ч, чтобы бактерицидная добавка впиталась в агар. Вегетативные культуры и споры (107 КОЕ/мл) высевали на поверхность агара (фиг. 1) стерильным ватным тампоном и инкубировали анаэробно (37 С,24 ч). Значения D измеряли (в мм) и преобразовывали в минимальные ингибирующие концентрации(MIC) (Paton, J.Н. 1990. Int. J. Exp. Clin. Chemother. 9, 31-38). Минимальные ингибирующие концентрации оритаванцина (ORI) для подавления спор клостридиум диффициле оказались в 5-13 раз ниже, чем для подавления вегетативных клеток (фиг. 2). Минимальные ингибирующие концентрации метронидазола (МЕТ) и ванкомицина (VAN) для подавления спор и вегетативных клеток клостридиум диффициле не имеют существенной разницы (данные не показаны). Выращивание культуры на основе агара. Стандартный инокулят спор клостридиум диффициле (300 КОЕ) подвергали воздействию (предполагаемых концентраций in vivo) метронидазола (9,3 мг/л), ванкомицина (350 мг/л) или оритаванцина(350 мг/л) в течение 1 мин и 30 мин в трех экземплярах. Растворы бактерицида и спор смешивали, разбавляли (до концентрации ниже MIC) стерильной деминерализованной водой, фильтровали на целлюлозно-ацетатных фильтрах (CAF, 0,45 мкм) и промывали. Целлюлозно-ацетатные фильтры переносили на агар Брейзиера (pH 7) + 5 мг/л лизоцима и после анаэробной инкубации (37 С, 48 ч) определяли количество спор клостридиум диффициле (по сравнению с контролем). После воздействия оритаванцина споры клостридиум диффициле не выживали (фиг. 3). Обнаружено связывание оритаванцина со спорами клостридиум диффициле и целлюлозно-ацетатными фильтрами (данные не показаны). Фазово-контрастная микроскопия. Стандартный инокулят спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле (107 КОЕ/мл) суспендировали в 30 мл питательной среды Брейзиера (pH 7) с добавлением 0,1; 1 или 10 мг/л метронидазола,ванкомицина или оритаванцина. Споры клостридиум диффициле также подвергали воздействию 10 мг/л бактерицида в течение 2 ч, трижды промывали в стерильном солевом растворе с фосфатным буфером(PBS), повторно суспендировали и высевали в питательную среду Брейзиера (pH 7). Образцы извлекали через 2, 4, 6, 24, 32 и 48 ч. Слайды просматривали под фазово-контрастным микроскопом и регистрировали процентное содержание светлой фазы спор, темной фазы спор и вегетативных клеток(фиг. 4). С применением арксинусного преобразования процентных данных были выполнены статистические анализы и проанализированы с помощью ранговых критериев Уилкоксона. Статистически значимым считалось значение Р 0,05. Концентрации всех бактерицидов выше значения MIC предотвращали бурное прорастание, но не подавляли начало прорастания спор клостридиум диффициле. Степень прорастания спор клостридиум диффициле, предварительно подвергнутых воздействию оритаванцина, была значительно ниже, чем в контроле (Р=0,058), и значительно ниже степени прорастания спор, предварительно подвергнутых воздействию метронидазола (МЕТ) или ванкомицина (VAN) (P0,05) (фиг. 5).- 18017564 Комментарии. Отмечена воспроизводимая разница между минимальными ингибирующими концентрациями оритаванцина (MIC) для подавления вегетативных клеток и подавления спор клостридиум диффициле (концентрации MIC были определены в шести случаях). О таком явлении не сообщалось ранее. In vivo это может дать преимущество оритаванцину перед существующими бактерицидными средствами лечения инфекции клостридиум диффициле, потенциально обеспечивая лучшее восстановление микрофлоры кишечника (которая, как предполагается, будет ингибировать клостридиум диффициле) до того, как концентрация оритаванцина станет ниже концентрации, подавляющей бурное прорастание спор клостридиум диффициле. Эксперименты по исследованию начала прорастания и бурного прорастания спор методом фазовоконтрастной микроскопии показали, что все оцененные бактерициды при концентрациях выше MIC ингибировали бурное прорастание спор клостридиум диффициле, но не начало их прорастания. Интересно отметить, что бурное прорастание спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум, предварительно подвергнутых воздействию 10 мг/л оритаванцина, было в значительной мере ингибировано, несмотря на обильное промывание. Такой результат не наблюдался для спор, предварительно подвергнутых воздействию метронидазола или ванкомицина с эквивалентной концентрацией бактерицида. Пептидный бактерицид низин подавляет бурное прорастание спор Bacillus subtilis и Clostridium sporogenes, как было продемонстрировано ранее (Chan et al. 1996. Appl. Environ. Microbiol. 62, 2966-2969; Rayman et al. 1981. Appl. Environ.Microbiol. 41, 375-380). Оритаванцин функционально относится к связывающим липиды бактерицидам II типа, таким как низин, и недавние исследования указывают, что это лекарственное средство может также ингибировать фермент трансгликозилазу, участвующую в полимеризации пептидогликана (Wang et al. 2007. 47th ICAAC Chicago. Poster C1-1474). Механизм ингибирующего действия против прорастания спор клостридиум диффициле остается еще на стадии выяснения, но потенциально это действие может быть следствием прямого связывания оритаванцина со спорами. Пример 2. С помощью методов импрегнации агара исследуемыми веществами и микроразбавления питательных сред проводились дополнительные исследования по активности оритаванцина (ORI) по сравнению с метронидазолом (МЕТ) и ванкомицином (VAN) на генотипически разных штаммах клостридиум диффициле. Материалы и методы. Бактериальные штаммы. В библиотеке штаммов в Лидсе (Leeds General Infirmary, Великобритания) было отобрано тридцать три генотипически разных (по РЦП-риботипированию) изолятов клостридиум диффициле. В группу были включены представительные изоляты эпидемических ПЦР-риботипов 001, 106 и 027 клостридиум диффициле. Контрольные изоляты Staphylococcus aureus ATCC 29213, Enterococcus faecalis ATCC 29212 и Bacteroides fragilis ATCC 25285 были включены во все определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC), чтобы гарантировать точность процедуры. Определение минимальной ингибирующей концентрации. Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) в агаре были определены методом Фримана и Вилкокса (J. Antimicrob. Chemother. 2001; 47: 244-6). Поясняя вкратце, бактерии культивировали в анаэробной питательной среде Шедлера (Oxoid, Basingstoke, Великобритания) при 37 С в течение 24 ч в анаэробной камере (Don Whitley Scientific, Shipley). Исходные растворы метронидазола и ванкомицина(Sigma-Aldrich Co., Poole, Великобритания) готовили в деминерализованной воде. Оритаванцин готовили в Р 80 (0,002%). Все бактерицидные растворы стерилизовали фильтрацией через шприцевые фильтры 0,22 мкм. Оритаванцин фильтровали при концентрации 1280 мг/л, поскольку фильтрация при более низких концентрациях приводит к значительным пропорциональным потерям лекарственного средства вследствие насыщаемого связывания. Агар Вилкинса-Чалгрена (компании Oxoid), содержащий последовательные двойные разбавления бактерицидов (0,03-16 мг/л), готовили с и без Р 80 (0,002%), а также с и без 2% лизата лошадиной крови (ЕО Labs, Bonneybridge, Великобритания). Все питательные среды были предварительно восстановлены в течение ночи в анаэробной камере. Бактериальные культуры разбавляли стерильным солевым раствором и высевали на поверхности импрегнированного бактерицидом агара с помощью многоточечного инокулятора (104 КОЕ). Чашки с посевами в импрегнированном агаре инкубировали анаэробно в течение 48 ч. Конечные точки зон подавления роста регистрировали как самые низкие концентрации бактерицида (MIC), при которых еще нет явного роста (не считая видимого помутнения или появления единичной колонии). Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) для метода макроразбавления питательных сред определяли методом Jousimies-Somer и др. (Introduction to anaerobic bacteriology. In: Wadsworth-KTLAnaerobic Bacteriology Manual, 6th edn. Belmont, California: Star Publishing Company, 2002; 1-22). Поясняя вкратце, исходные растворы бактерицидов с двойной силой готовили в питательной среде Бруцелла(10 мкл/л, Sigma). Все питательные среды для определения минимальных ингибирующих концентрацийMicro. Infect. Dis., Basel, Switzerland). Бактериальные штаммы первоначально культивировали в течение ночи в анаэробной питательной среде Шедлера и затем разбавляли 1:200 (3105 КОЕ/мл) стерильной,предварительно восстановленной питательной средой Бруцелла. Исходные растворы бактерицидов разбавляли 1:2 при добавлении инокулята каждого штамма. Питательные среды инкубировали анаэробно при 37 С в течение 48 ч. Конечные точки зон подавления роста регистрировали как концентрации бактерицида (MIC), при которых не наблюдалось никакого роста по сравнению с контролем. Минимальные ингибирующие концентрации для всех бактерицидов определяли в двух параллельных образцах. Результаты. Активность оритаванцина оценивали в отношении 33 генотипически разных изолятов клостридиум диффициле, используя и импрегнацию агара, и метод макроразбавления питательных сред. Группа штаммов клостридиум диффициле, используемых в этом исследовании, включала представительный изолят ПЦР-риботипа 027, штамма, связанного с недавними эпидемиями ИКД в Европе, Канаде и США(Kuijper et al., Curr Opin Infect Dis 2007; 20: 376-83). Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) для генотипически разных изолятов клостридиум диффициле представлены в таблице. Чувствительность (мг/л) генотипически разных штаммов клостридиум диффициле (n=33) к оритаванцину, метронидазолу и ванкомицинуAI - импрегнация агара исследуемыми бактерицидами; Геометрические средние значения MIC для метронидазола, импрегнированного в агар, были в 2-5 раз меньше значений MIC для оритаванцина и в 2-3 раза меньше значений MIC для ванкомицина. Оритаванцин и ванкомицин имели схожую активность против клостридиум диффициле для всех вариантов условий агара. Дополнение агара Вилкинса-Чалгрена добавками 0,002% Р 80 и 2% лизата лошадиной крови не оказало заметного влияния на значения MIC оритаванцина (или ванкомицина и метронидазола) для клостридиум диффициле или контрольных организмов. Кроме того, добавление Р 80 с или без лизата лошадиной крови не влияло на рост клостридиум диффициле или контрольных организмов на агаре, не содержащем бактерицид (контрольный агар). Для оритаванцина значения MIC в методе макроразбавления питательной среды были в 2-4 раза ниже, чем значения MIC в импрегнированном агаре, но для метронидазола или ванкомицина такой разницы не наблюдалось. Геометрические средние значения MIC для оритаванцина в методе макроразбавления питательной среды были в 2-5 раз меньше, чем значения для метронидазола и ванкомицина соответственно. При сравнении значений MIC в методе макроразбавления питательной среды для индивидуальных штаммов клостридиум диффициле оказалось, что 76% (25 из 33) проверенных изолятов более чувствительны к оритаванцину (2 двойных разбавлений), чем к ванкомицину. В недавней публикации (Arhin et al., Antimicrob Agents Chemother. 2008; 52: 1597-603) сообщалось,что оритаванцин быстро терялся из раствора при оценке чувствительности методом микроразбавления питательной среды в отсутствие Р 80 или 2% лизата лошадиной крови. В предшествующих исследованиях сделано предположение, что добавление Р 80 или лизата лошадиной крови, может значительно уменьшить значения MIC оритаванцина для стафилококков и энтерококков (но не для клинических изолятов стрептококков) при использовании методов микроразбавления питательной среды (AntimicrobInfect. Dis., Basel, Switzerland). Авторы считают, что наличие лизата крови в питательных средах, используемых для оценки клинических стрептококковых изолятов, может нарушить связывание оритаванцина с поверхностью; поэтому введение Р 80 не давало дальнейшего уменьшения значений MIC для оритаванцина. Кроме того, включение Р 80 в методах импрегнации агара не уменьшает значения MIC оритаванци- 20017564 на для S.aureus, коагулазонегативных стафилококков, Е.faecalis или Enterococcus faecium. В настоящем исследовании оценено влияние Р 80 и лизата лошадиной крови на значения MIC оритаванцина, ванкомицина и метронидазола при использовании метода импрегнации агара. Одновременное присутствие Р 80 и лизата лошадиной крови в методе импрегнации агара не уменьшало существенно значения MIC оритаванцина, подтверждая таким образом предыдущие исследования значений MIC на основе агара для условных анаэробов и подчеркивая вариабельность значений MIC между разными методами. Дополнительно следует отметить, что одновременное введение Р 80 и лизата лошадиной крови в данном исследовании не повлияло на значения MIC ванкомицина (или метронидазола), что также отражает предшествующие in vitro исследования чувствительности, которые не обнаружили изменения в значениях MIC этих бактерицидов в присутствии Р 80 или лизата лошадиной крови (Blosser et al., Abstracts of the 103rdfor Microbiology, Washington, DC, USA). Анализ концентраций оритаванцина в пробах, взятых из трехступенчатой in vitro модели кишечника человека в хемостате, используя биопробы в больших чашках, показывает, что диффузия лекарственного средства в агаре протекает медленно; и требуется предварительный инкубационный этап диффузии,чтобы расширить диаметры зоны воздействия. Гликопептиды, как известно, связываются с поверхностями полимеров (Wilcox et al., J. Antimicrob. Chemother. 1994; 33: 431-41), это свойство проявляется вследствие поверхностных зарядов бактерицида и полимера. Например, связывание тейкопланина с поверхностями сосудов с пробами в среднем в 4 раза сильнее, чем связывание ванкомицина. Предварительный контакт поверхности полимера с жидкостями организма человека заметно ослабляет связывание тейкопланина. Оритаванцин является полусинтетическим липогликопептидом, который имеет один или два положительных заряда при нейтральных pH. По этой причине комплексобразование оритаванцина с компонентами агара ввиду физико-химических свойств этого антибиотика может объяснить повышенные значения MIC (по сравнению со значениями, полученными методом макроразбавления питательных сред) для клостридиум диффициле и других бактерий. Действительно, об адсорбции бактерицидных пептидов на поверхности агара сообщалось ранее (Boman et al., FEBS Lett 1989; 259: 103-6). Настоящее исследование включало определение значений MIC методом импрегнации агара для всех комбинаций наличия и отсутствия Р 80 и лизата лошадиной крови и показало, что ни одна из этих двух добавок не оказывала значительного влияния на оценку чувствительности культур к оритаванцину. Повышенные значения MIC оритаванцина в методе импрегнации агара по сравнению с методами микро- и макроразбавления питательных сред наблюдались и в других учреждениях, но точный механизм этого явления пока остается невыясненным (Blosser et al., Abstracts of the 103rd Meeting of the American Society forMicrobiology, Washington, DC, 2003. Abstract C-70. American Society for Microbiology, Washington, DC,USA. Пример 3. Сравнительное влияние воздействия антибиотиков на жизнеспособность спор клостридиум диффициле. С помощью различных экспериментальных методов было продемонстрировано, что оритаванцин в большей степени нарушает переход от споры клостридиум диффициле, находящейся в состоянии покоя,к вегетативной клетке, чем существующие терапевтические бактерициды для инфекции клостридиум диффициле (ИКД). Эксперименты проводились, чтобы определить независимые влияния метронидазола, ванкомицина и оритаванцина на жизнеспособность спор клостридиум диффициле, подвергнутых воздействию этих антибиотиков. Обычно эксперименты выполняли следующим образом: смешивали споры клостридиум диффициле с антибиотиком, фильтровали раствор через ацетилцеллюлозные фильтры, чтобы собрать споры, фильтры со спорами помещали в питательный агар и определяли количество спор, оставшихся на фильтрах через определенный промежуток времени. Предшествующие эксперименты позволили предположить, что бактерицидные добавки способны связываться с ацетилцеллюлозными фильтрами, несмотря на промывку, поэтому остаточный бактерицид может уменьшить уровень извлечения спор клостридиум диффициле. С учетом начальный эксперимент включал разбавление суспензий, содержащих бактерицид и споры, перед фильтрацией и промывкой. Реакционные объемы составляли 1 мл для всех бактерицидных/контрольных растворов. Ванкомицин и оритаванцин разбавляли 1:250, а метронидазол разбавляли 1:50, чтобы перед фильтрацией эффективно уменьшить концентрацию бактерицида до уровней ниже значений минимальной ингибирующей концентрации (MIC). Пример 3 А. В 1 мл контрольного раствора (деминерализованная вода +/-Tween-80) и исследуемого раствора(содержащего бактерицид) добавляли 10 мкл спор клостридиум диффициле (3 штамма: ПЦР-риботипы 001, 106 и 027). Суспензии спор (время выдерживания: 1 или 30 мин) переносили в фильтрационные чашки и добавляли адекватный объем разбавителя (стерильная деминерализованная вода +/-Tween-80),чтобы достигнуть степени разбавления, отмеченной выше. Образцы фильтровали через ацетилцеллюлозные фильтры и промывали дополнительным объемом (50 мл) соответствующего разбавителя. Фильтры переносили в стерильных условиях на агар CCEY Брейзиера, содержащий 5 мг/л лизоцима и 2% лизата- 21017564 лошадиной крови. Эта процедура выполнялась на параллельных образцах. Питательные среды инкубировали в анаэробной атмосфере при 37 С в течение 48 ч и регистрировали количества колоний клостридиум диффициле. Результаты представлены на фиг. 6. Не наблюдалось никакой существенной разницы в извлечении спор клостридиум диффициле между образцами, выдержанными в течение 1 и 30 мин, при любой комбинации контроля/обработки. Присутствие Tween-80 (P80) также не влияло на извлечение спор клостридиум диффициле. Извлечение спор клостридиум диффициле в образцах, подвергнутых воздействию метронидазола (с обоими временами выдерживания: 1 и 30 мин), колебалось в диапазоне 90-110% от значения для контрольных образцов. Извлечение спор клостридиум диффициле в образцах, подвергнутых воздействию ванкомицина (с обоими временами выдерживания: 1 мин и 30 мин), колебалось в диапазоне 25-60% от значения для контрольных образцов. Извлечение спор клостридиум диффициле в образцах,подвергнутых воздействию оритаванцина (с обоими временами выдерживания: 1 и 30 мин), составляло 0%. Из этих результатов следует: 1) гликопептидный бактерицид может обладать активностью против спор клостридиум диффициле и/или 2) несмотря на разбавление растворов перед фильтрацией и промывку отфильтрованных образцов спор, на ацетилцеллюлозных фильтрах удерживался остаточный бактерицид, который подавлял начало прорастания и/или бурное прорастание спор клостридиум диффициле. Пример 3 Б. Чтобы оценить потенциальную возможность связывания гликопептидных бактерицидов с ацетилцеллюлозными фильтрами до или во время добавления разбавителя, методика эксперимента была изменена. Разбавитель первым добавляли в фильтрационные чашки. Затем 1 мл реакционного раствора добавляли к соответствующему разбавителю (через 1 и через 30 мин протекания реакции) и фильтровали через ацетилцеллюлозные фильтры. Фильтры промывали дополнительным объемом (50 мл) соответствующего разбавителя. Фильтры переносили в стерильных условиях на агар CCEY Брейзиера, содержащий 5 мг/л лизоцима и 2% лизата лошадиной крови. Эта процедура выполнялась на параллельных образцах. Питательные среды инкубировали в анаэробной атмосфере при 37 С в течение 48 ч и регистрировали количества колоний клостридиум диффициле. Результаты представлены на фиг. 7. Не наблюдалось никакой существенной разницы в извлечении спор клостридиум диффициле между образцами, выдержанными в течение 1 и 30 мин, при любой комбинации контроля/обработки. Присутствие Tween-80 (P80) также не влияло на извлечение спор клостридиум диффициле. Извлечение спор клостридиум диффициле в образцах, подвергнутых воздействию метронидазола, составляло 95-110% от значения для контрольных образцов. Извлечение спор клостридиум диффициле в образцах, подвергнутых воздействию ванкомицина, составляло 70-80% от значения для контрольных образцов. Извлечение спор клостридиум диффициле в образцах, подвергнутых воздействию оритаванцина (с обоими временами выдерживания: 1 и 30 мин), составляло 0%. Из этих результатов следует: 1) проект эксперимента 2 В повысил извлечение спор клостридиум диффициле из растворов, содержащих ванкомицин, но не повлиял на извлечение из растворов с оритаванцином, 2) следовательно, либо оритаванцин обладает активностью против спор, либо на фильтрах задержался остаточный бактерицид, несмотря на изменение методики эксперимента. Пример 3 В. После эксперимента 2 В были включены дополнительные контрольные образцы для ванкомицина и оритаванцина. По 1 мл растворов (не содержащих спор клостридиум диффициле) обрабатывали, как в эксперименте 2 В, и затем фильтры помещали в агар CCEY Брейзиера. На фильтры высевали 220 мкл следующих культур: а) вегетативная форма клостридиум диффициле (ПЦР-риботип 001, инкубированный в течение ночи); б) споры клостридиум диффициле (ПЦР-риботип 001) или в) Staphylococcus aureus NCTC 6571 (оксфордский штамм, инкубированный в течение ночи). После анаэробной инкубации регистрировали наличие или отсутствие роста. Результаты показали, что на фильтрах, через которые фильтровали раствор с ванкомицином, наблюдался рост всех организмов. На фильтрах, через которые фильтровали раствор с оритаванцином, наблюдался рост S.aureus NCTC 6571 (минимальная ингибирующая концентрация оритаванцина против этого штамма составляет 4 мг/л в методе импрегнации агара). На фильтрах, подвергнутых воздействию оритаванцина, извлечено существенно уменьшенное количество вегетативных форм клостридиум диффициле (1 КОЕ в одной чашке) по сравнению со значительным ростом на фильтрах, подвергнутых воздействию ванкомицина. Таким образом, эти результаты свидетельствуют о наличии ингибирующих уровней оритаванцина на ацетилцеллюлозных фильтрах, несмотря на принятые меры, описанные выше. Исходя из наблюдаемого очень малого роста вегетативных культур клостридиум диффициле по сравнению с полным отсутствием извлеченных спор, можно предложить, что для ингибирования этих форм клостридиум диффициле требуются различные концентрации оритаванцина.- 22017564 Пример 3 Г. Дополнительное возможное объяснение отсутствия извлеченных спор в случае воздействия оритаванцина в вышеупомянутых экспериментах (наряду с наличием этого лекарственного средства в ацетилцеллюлозных фильтрах) состоит в том, что оритаванцин может быть способен напрямую связывать споры клостридиум диффициле и повреждать их или ингибировать начало прорастания и/или бурное прорастание спор. Для оценки связывания спор бактерицидом проводили простой эксперимент. Были приготовлены два раствора: 1) споры клостридиум диффициле (ПЦР-риботип 001, контроль) и 2) споры клостридиум диффициле, суспендированные в растворе оритаванцина 350 мг/л (разбавитель: Tween-80-H2O). На свежий кровяной агар высевали оксфордский штамм S.aureus. В одном образце споры клостридиум диффициле центрифугировали (16000 g, 5 мин), надосадочную жидкость удаляли, а гранулы осадка повторно суспендировали в 500 мкл Tween-80-H2O. 10 мкл суспензии повторно суспендированных спор высевали на поверхность посева S.aureus. В другом образце суспензию спор клостридиум диффициле промывали в общей сложности 10 раз,используя эту процедуру, и высевали на поверхность посева S.aureus. В обоих случаях агар инкубировали аэробно при 37 С в течение ночи, а затем регистрировали наличие или отсутствие зон ингибирования.Tween-80 не подавлял рост оксфордского штамма S.aureus. Споры клостридиум диффициле (контроль) также не подавляли рост оксфордского штамма S.aureus. Подвергнутые воздействию оритаванцина споры клостридиум диффициле подавляли рост оксфордского штамма S.aureus после промывки 0, 1,2, 4, 5, 6, 9 и 10 раз. Таким образом, промывка суспензии спор не устраняла бактерицидный эффект. Эти результаты свидетельствуют о том, что оритаванцин может непосредственно связывать споры клостридиум диффициле. Пример 4. Сравнение оритаванцина и ванкомицина как средств для лечения спровоцированной клиндамицином инфекции клостридиум диффициле (ПЦР-риботипа 027) в модели кишечника человека. Для сравнения эффективности оритаванцина и ванкомицина в лечении спровоцированной клиндамицином инфекции клостридиум диффициле (ИКД), вызванной эпидемическим штаммом клостридиум диффициле, ПЦР-риботипом 027, использовали in vitro модель кишечника человека. Материалы и методы. Штаммы клостридиум диффициле. Был исследован один изолят ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле. Этот изолят представлял собой клинический штамм, извлеченный во время эпидемии ИКД в Мейнском медицинском центре(Портленд, США) в 2005 г. Штамм был любезно предоставлен доктором Робом Оуэнсом (Rob Owens) и риботипирован доктором Джоном Брейзиером (Jon Brazier) в экспертной лаборатории по анаэробным микроорганизмам (Кардифф, Уэльс, Великобритания). Трехступенчатая модель кишечника человека в хемостате. Модель кишечника была разработана для исследования кишечной микрофлоры при низких значениях pH, условий избытка углеводов в проксимальном отделе толстой кишки и некислых условий в обедненном углеводами дистальном отделе толстой кишки (Macfarlane et al., Microb Ecol 1998; 35: 1807). Микробиологические и физико-химические измерения в сосудах модели кишечника сверялись с данными по содержимому кишечника умерших скоропостижно (Macfarlane et al., Microb Ecol 1998; 35: 1807). Каждая модель кишечника состоит из трех ферментационных сосудов, связанных в ступенчатый каскад с подачей сверху питательной среды с контролируемой скоростью (D=0,015 ч-1). Сосуд орошали азотом, не содержащим кислород, чтобы гарантировать анаэробные условия, нагревание осуществляли через водяную рубашку (37 С), а в среде поддерживали заданное значение pH, используя блоки управления ферментерами (Biosolo 3, Brighton Systems, Великобритания), поставляющие 0,5 М раствор HCl/NaOH. В сосуде 1 (280 мл) поддерживалось значение pH 5,5 и высокая доступность субстрата, моделируя условия проксимального отдела толстой кишки, в то время как в сосудах 2 и 3 (300 мл) поддерживались значенияpH 6,2 и 6,8 соответственно с низкой доступностью субстрата, моделируя условия дистального отдела толстой кишки. Модель кишечника наполняли фекальным раствором 10% (вес./об.) и оставляли для уравновешивания бактериальной флоры в течение 14 дней. Подготовка моделей кишечника. Фекальные образцы собирали у пяти здоровых пожилых добровольцев (65 лет) и немедленно переносили в лабораторию в анаэробных условиях (GasPak, Oxoid, Basingstoke, Великобритания). Анализ проб кала показал отсутствие культур клостридиум диффициле при определении на агаре CCEY Брейзиера, импрегнированном 5 мг/л лизоцима (Sigma-Aldrich, UK), как сообщалось ранее (Baines et al., J.Antimicrob. Chemother. 2005; 55: 974-82; Freeman et al., J. Antimicrob. Chemother. 2003; 52: 96-102). Фекалии, не содержащие клостридиум диффициле, объединили и приготовили процеженную через крупноячеистое сито жидкую смесь (10% вес./об.) в стерильном, предварительно кондиционированном, солевом растворе с фосфатным буфером. Сосуды моделей кишечника заполнили приблизительно на две трети объема и запустили насосы подачи питательной среды.- 23017564 Подсчет микрофлоры кишечника и культур клостридиум диффициле. Главные культивируемые компоненты естественной микрофлоры кишечника и культур клостридиум диффициле регистрировали путем подсчета жизнеспособных единиц (log10 КОЕ/мл) на селективных и неселективных агарах, как сообщалось ранее (Freeman et al., J. Antimicrob. Chemother. 2005; 56: 717-25). Подсчитывали следующие группы бактерий: общая численность условных анаэробов, условноанаэробные ферментеры лактозы, общая численность анаэробов, бифидобактерии, группа Bacteroidesfragilis, общая численность клостридиум диффициле, лактобациллы, энтерококки, общая численность спор клостридиум диффициле. Продуцирование цитотоксинов культурами клостридиум диффициле определяли количественно, используя анализ цитотоксичности клеток, описанный ранее (Freeman et al., J.Antimicrob. Chemother. 2003; 52: 96-102). Титры цитотоксинов выражали в относительных единицах log10(RU). В сосуде 1 модели кишечника регистрировали только общую численность бактерий клостридиум диффициле, общую численность спор и титры цитотоксинов. План эксперимента с моделью кишечника. Использование модели кишечника для оценки терапевтических методов лечения ИКД было описано ранее (Freeman et al., J. Antimicrob. Chemother. 2007; 60: 83-91; Freeman et al., J. Antimicrob. Chemother. 2005; 56: 717-25). Поясняя вкратце, после наполнения каждой модели кишечника жидкой фекальной смесью никакие дальнейшие вмешательства не производились в течение 13 дней (период А). Во время периода А подсчет микрофлоры выполняли каждые 2 дня. Затем (день 14) в сосуд 1 каждой модели кишечника добавили инокулят (107 КОЕ) спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле (Freeman et al.,J. Antimicrob. Chemother 2003; 52: 96-102), без дальнейших вмешательств в течение 7 дней (период Б). С этого момента подсчет микрофлоры выполняли ежедневно. Далее в сосуд 1 каждой модели кишечника ввели еще один инокулят спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле (день 21) и вводили 33,9 мг/л клиндамицина (Pfizer, США) четыре раза в день в течение 7 дней (период В). Этот режим введения служил для поддержания уровней клиндамицина в модели кишечника приблизительно эквивалентными наблюдаемым in vivo после введения одной дозы 600 мг (Brown et al., Ann. Intern. Med. 1976; 84: 168-70). После прекращения введения клиндамицина никакие дальнейшие вмешательства не производились (период Г) до момента регистрации интенсивного продуцирования цитотоксинов (4 RU) в течение по крайней мере 2 последовательных дней. В день 39 в каждом эксперименте было начато введение ванкомицина (один эксперимент, 125 мг/л четыре раза в день) и оритаванцина (один эксперимент, 64 мг/л два раза в день) в течение 7 дней (период Д). Ванкомицин для введения (Сигма-Aldrich) готовили в дистиллированной воде, а оритаванцин (Targanta Therapeutics, Кембридж, США) готовили в 0,002% растворе(об./об. в дистиллированной воде) полисорбата 80 (Сигма-Aldrich), оба бактерицидных раствора стерилизовали фильтрацией (0,22 мкм) перед введением в модель кишечника. Режим введения ванкомицина был таким, чтобы достигались концентрации антибиотика, эквивалентные наблюдаемым in vivo при стандартном курсе лечения людей (Young et al., Gastroenterology. 1985; 89: 1038-45). Режим введения оритаванцина учитывал пределы растворимости лекарственного средства в буферизованных питательных средах. После прекращения введения лечебного бактерицида подсчет микрофлоры и титров цитотоксинов продолжался в течение последующих 15 дней (период Е). Биотестирование активных концентраций антибиотиков. Концентрации клиндамицина не определяли в настоящих исследованиях. Концентрации ванкомицина и оритаванцина в сосудах каждой модели кишечника определяли, используя ведомственный метод биотестирования в больших чашках. Поясняя вкратце, пробы (по 1 мл) из всех сосудов каждой модели кишечника центрифугировали (16000 g) и хранили при -20 С до проведения биотестирования. 100 мл агара Мюллера-Хинтона (Oxoid, Великобритания) с добавлением 1 М раствора пара-аминобензойной кислоты стерилизовали в автоклаве, охлаждали до 50 С и добавляли 1 мл индикатора Staphylococcusaureus ATCC 29213 (по мутности эквивалентного 0,5 стандарта МакФарланда). Расплавленный агар в стерильных условиях наливали в чашки Петри емкостью 245 мм 2 (Fisher Scientific, Лафборо, Великобритания) и давали ему устояться. Разницу диаметров зон оценивали с помощью калибраторов, разбавленных в дистиллированной воде или стерильных жидкостях модели кишечника с отрегулированными значениями pH (5,5; 6,2; 6,8). Так как разные разбавители не давали значительной разницы в диаметрах зон,для всех калибраторов оритаванцина использовалась деминерализованная вода, содержащая 0,002% полисорбат-80. Калибраторы ванкомицина готовили в стерильной деминерализованной воде. Пробы из модели кишечника стерилизовали фильтрацией (0,22 мкм). Из агара вырезали 25 лунок (диаметром 9 мм) с помощью сверла для пробок 5. В каждую лунку, выбираемую произвольно, добавляли по 20 мкл каждого двойного разбавления калибратора ванкомицина (1-512 мг/л), калибратора оритаванцина (1-128 мг/л) или пробы из модели кишечника - все образцы в трех экземплярах. Оритаванцин фильтровали при концентрации 1280 мг/л, поскольку фильтрация при более низких концентрациях приводит к значительным пропорциональным потерям лекарственного средства вследствие насыщаемого поверхностного связывания. Чашки с агаром охлаждали (при 4 С) в течение 5 ч, чтобы обеспечить диффузию бактерицида,но свести к минимуму бактериальный рост, после чего чашки для биотестирования инкубировали аэробно при 37 С в течение 48 ч. Диаметры зон измеряли штангенциркулем с точностью до 0,01 мм и строили калибровочные графики зависимости диаметра от log2 концентрации бактерицида. Затем неизвестные- 24017564 концентрации бактерицида для каждой чашки определяются по калибровочному графику и преобразуются в привычные концентрации с помощью обратной функции для log2. Средние концентрации бактерицида (мг/л) получали усреднением значений для трех параллельных проб. Пределы обнаружения для оритаванцина и ванкомицина в биотестировании составляли 2 и 8 мг/л соответственно. Результаты. Расхождения результатов подсчета жизнеспособных бактерий естественной микрофлоры кишечника кишки и ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле между экспериментами для сосудов 2 и 3 были очень малыми. Поэтому представлены результаты только для сосуда 3. Значимые различия в наблюдениях между сосудами 2 и 3 моделей кишечника будут отмечены в соответствующих аспектах обсуждения. Подсчет жизнеспособных единиц перечисленных компонентов естественной микрофлоры кишечника был стабильным в течение всего периода А и в эксперименте с оритаванцином (фиг. 8 а), и для ванкомицина (фиг. 8 б). Введение спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле (день 14, период Б) не повлияло существенно на результаты подсчета перечисленных компонентов микрофлоры кишечника ни в одном эксперименте. Влияние воздействия клиндамицина на микрофлору кишечника. Введение клиндамицина (период В) привело к заметному снижению численности в популяциях бифидобактерий (6 log10 КОЕ/мл), которая была ниже пределов обнаружения (2 log10 КОЕ/мл) к концу периода В в обоих экспериментах (фиг. 8A и B). Численность жизнеспособных единиц бактероидов и лактобацилл уменьшилась на 1-2 log10 КОЕ/мл в обоих экспериментах, в то время как численность жизнеспособных энтерококков увеличилась на 2 log10 КОЕ/мл. После прекращения введения клиндамицина (период Г) численность популяции бифидобактерий оставалась ниже пределов обнаружения перед введением оритаванцина и ванкомицина. Все другие компоненты естественной микрофлоры кишечника восстановили или превысили свои концентрации до уровня в нормальном состоянии (период А). Влияние введения оритаванцина и ванкомицина на микрофлору кишечника. Введение оритаванцина (период Д) сопровождалось незначительными нарушающими эффектами на естественную микрофлору кишечника, подсчет которой велся. Бактероиды и энтерококки были единственными бактериальными группами, на которые неблагоприятно повлияло введение оритаванцина,уменьшив их численность на 1 и 2 log10 КОЕ/мл соответственно (фиг. 8A). Снижения численности бактероидов и энтерококков после введения ванкомицина составили 6 и 1 log10 КОЕ/мл соответственно(фиг. 8B). Популяции бифидобактерий оставались ниже пределов обнаружения во время периода Д в обоих экспериментах. После прекращения введения оритаванцина (период Е) все популяции бактерий восстановили свои концентрации до уровня в нормальном состоянии (период А), кроме бифидобактерий,численность которых оставалась ниже пределов обнаружения (фиг. 8A). После прекращения введения ванкомицина все популяции бактерий естественной микрофлоры кишечника восстановили свои концентрации до уровня в нормальном состоянии (период А), кроме бифидобактерий, численность которых оставалась ниже на 2 log10 КОЕ/мл (фиг. 8B). Численность культур клостридиум диффициле не восстановилась до уровня в спокойном состоянии (период А) ни в одном эксперименте. При отсутствии клиндамицина (период В) культуры ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле оставались в форме спор во всех сосудах модели кишечника (данные для сосуда 1 и 2 не показаны) в обоих экспериментах (фиг. 9A иB). В сосуде 3 численность клостридиум диффициле уменьшилась на 1 log10 КОЕ/мл во время периода В примерно в одинаковой степени в обоих экспериментах, а продуцирование цитотоксинов не было обнаружено. Влияние воздействия клиндамицина на клостридиум диффициле. Во время введения клиндамицина (период В) культуры клостридиум диффициле оставались в форме спор и в эксперименте с оритаванцином, и в эксперименте с ванкомицином (фиг. 9A и B). Кроме того,в этот период не было обнаружено продуцирование цитотоксинов. После прекращения введения клиндамицина (период Г) культуры клостридиум диффициле оставались в форме спор, численность которых была в пределах обнаружения спустя 5 дней после прекращения введения клиндамицина в эксперименте с оритаванцином (фиг. 9A). В тот же самый период в эксперименте с ванкомицином численность спор клостридиум диффициле уменьшалась в первые 2 дня периода Г, после чего численность спор клостридиум диффициле возросла на 1 log10 КОЕ/мл (фиг. 9B). Прорастание спор клостридиум диффициле было обнаружено через 6 и 7 дней после прекращения введения клиндамицина в экспериментах с оритаванцином и ванкомицином соответственно. Численность жизнеспособных вегетативных клеток клостридиум диффициле резко увеличилась, достигнув максимального значения 6 log10 КОЕ/мл в обоих экспериментах. Продуцирование цитотоксинов было обнаружено в день 35 в обоих экспериментах и достигло максимальных титров 5 RU в обоих экспериментах. Введение лечебных бактерицидов начали в день 39 в обоих экспериментах. Прорастание спор клостридиум диффициле, их быстрое разрастание и интенсивное продуцирование цитотоксинов не наблюдались в сосуде 1 модели кишечника и в экспериментах с оритаванцином или ванкомицином во время периода Г (данные не показаны).- 25017564 Влияние введения оритаванцина на клостридиум диффициле. Общая численность клостридиум диффициле была на 2 log10 КОЕ/мл выше численности спор(6 log10 КОЕ/мл) при начале введения оритаванцина (период Д, фиг. 9A). На 2-й день введения оритаванцина и общая численность клостридиум диффициле, и численность спор уменьшились на 2 log10 КОЕ/мл и стали ниже пределов обнаружения (1,22 log10 КОЕ/мл) еще 1 день спустя, оставаясь на этом уровне всю остальную часть периода Д. Титры цитотоксинов уменьшились на 3 RU во время введения оритаванцина (период Д). Пиковые концентрации оритаванцина в сосудах 1, 2 и 3 составили 128, 109 и 52 мг/л соответственно, т.е. примерно в 8 раз ниже, чем в модели кишечника с введением ванкомицина. Возможно, что концентрация оритаванцина, показанная в образцах культур из модели кишечника, была заниженной из-за возможных потерь после фильтрации, поскольку концентрации были 1280 мг/л. Все квадратичные отклонения R2 для линии калибровки были 0,95. Влияние введения ванкомицина на клостридиум диффициле. Общая численность культур клостридиум диффициле уменьшилась на 1,5 log10 КОЕ/мл после 1 дня введения ванкомицина (период Д, фиг. 9B). Численность спор клостридиум диффициле не изменилась от введения ванкомицина, и культуры клостридиум диффициле оставались преимущественно в форме спор до конца периода Д. Титры цитотоксинов уменьшились на 3 RU во время введения ванкомицина. Пиковые концентрации ванкомицина в сосудах 1, 2 и 3 модели кишечника составили 957, 800 и 423 мг/л соответственно. Все квадратичные отклонения R2 для линии калибровки были 0,95. События после прекращения введения оритаванцина. До конца эксперимента (период Е, фиг. 9A) культуры клостридиум диффициле время от времени выделяли на уровне предела обнаружения. Центрифугирование и промывка образцов культур, в дополнение к обработке активированным углем (20-40 г/л) с целью минимизации выноса оритаванцина, не повышали извлечение клостридиум диффициле (данные не показаны). Титры цитотоксинов продолжали уменьшаться и были ниже пределов обнаружения в течение 10 дней. Концентрации оритаванцина стали ниже пределов обнаружения через 11 дней после прекращения введения оритаванцина. События после прекращения введения ванкомицина. Культуры клостридиум диффициле оставались в форме спор в течение 12 и 13 дней после прекращения введения ванкомицина и в сосуде 2 (данные не показаны), и в сосуде 3 соответственно (период Е,фиг. 9B), после чего наблюдались рецидивное прорастание, пролиферация и интенсивное продуцирование цитотоксинов. К концу эксперимента общая численность культур клостридиум диффициле составляла 6 log10 КОЕ/мл, а титры цитотоксинов составляли 5 RU. Эти результаты демонстрируют, что и оритаванцин, и ванкомицин были эффективны в ингибировании вегетативной формы клостридиум диффициле. Введение ванкомицина способствовало ингибированию вегетативных форм клостридиум диффициле, поэтому спустя 1 день после начала введения ванкомицина в сосуде модели кишечника оставались только споры клостридиум диффициле. На споры клостридиум диффициле не повлияло наличие концентраций ванкомицина, которые были более чем в 500 раз выше минимальной ингибирующей концентрации (MIC) для вегетативных форм ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле (O'Connor et al., J. Antimicrob. Chemother. 2008; doi:10.1093/jac/dkn276). О неспособности ванкомицина подавлять споры клостридиум диффициле при концентрациях, наблюдаемых в фекалиях, сообщалось ранее, что подтверждает данные, представленные в настоящем исследовании (Freeman et al., J. Antimicrob. Chemother. 2005; 56: 717-25; Levett, J. Antimicrob. Chemother. 1991; 27: 55-62; Walters et al., Gut. 1983; 24: 206-12). Кроме того, после снижения концентраций ванкомицина ниже пределов обнаружения в сосудах 2 и 3 модели кишечника во время периода Е наблюдался дальнейший эпизод прорастания спор клостридиум диффициле, пролиферации и интенсивного продуцирования цитотоксинов. Оритаванцин быстро уменьшал численность и вегетативной формы, и спор клостридиум диффициле, несмотря на то, что его пиковые концентрации активности были в 8 раз ниже концентраций ванкомицина. Эти активные концентрации оритаванцина были в 25 и 200 раз выше, чем минимальные ингибирующие концентрации (MIC) для ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле, измеренные методами импрегнации агара и макроразбавления питательных сред соответственно (O'Connor et al., J. Antimicrob.Chemother. 2008; doi:10.1093/jac/dkn276). Несмотря на усилия по удалению активного оритаванцина из образцов культуры путем промывки и адсорбции активированным углем, культуры клостридиум диффициле не возрождались, кроме единичных случаев регистрации индивидуальных колоний с концентрацией на пределе обнаружения. Таким образом, в настоящем исследовании отмечена заметная разница в эффекте воздействия оритаванцина на споры клостридиум диффициле по сравнению с ванкомицином. Действительно, недавно наблюдалось, что эффект ингибирования бурного прорастания спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле, подвергнутых воздействию оритаванцина (10 мг/л), сохранился после удаления оритаванцина промывкой. Такой эффект не обнаружен при воздействии на споры метронидазола или ванкомицина. Ни один из проверенных бактерицидов не продемонстрировал ингибирующей активности против прорастания спор при концентрациях намного выше значений MIC; поэтому можно сделать вывод, что оритаванцин обладает активностью против бурного прорастания спор клостридиум диффициле. В настоящем исследовании не наблюдалось рецидивного прорастания спор клостридиум диф- 26017564 фициле, их пролиферации и интенсивного продуцирования цитотоксинов во время периода Е после введения оритаванцина (в отличие от эксперимента с ванкомицином), даже после того, как концентрация бактерицида уменьшилась до уровня ниже пределов обнаружения. Ранее было показано, что оритаванцин связывается с поверхностями. Этот эффект устраняется 0,002% раствором полисорбата-80 (Arhin et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2008; 52:1597-603). Полисорбат-80 был введен в питательную среду модели кишечника (0,2% об./об.), и поэтому объяснение связывания оритаванцина с поверхностями модели кишечника, обеспечивая этим продолжительную активность бактерицида даже при концентрациях ниже пределов обнаружения кажется маловероятным, так как не может объяснить отсутствие спор клостридиум диффициле (по результатам анализа) в течение почти всего периода Е в настоящем исследовании. Хотя снижение значений титров цитотоксинов клостридиум диффициле было примерно одинаковым во время периода Д (3 RU) и в экспериментах с оритаванцином, и в экспериментах с ванкомицином, в случае оритаванцина потребовалось больше времени (5 дней) для снижения титров цитотоксинов до необнаруживаемых уровней. В заключение следует подчеркнуть, что и оритаванцин, и ванкомицин эффективно подавляли вегетативную форму клостридиум диффициле в модели кишечника, но только оритаванцин продемонстрировал потенциальную активность против спор. Для ванкомицина наблюдалось рецидивное возрождение спор ПЦР-риботипа 027 клостридиум диффициле после снижения концентрации антибиотика до уровня ниже пределов обнаружения, но для оритаванцина этот эффект не наблюдался. Эти факты позволяют предположить, что оритаванцин может иметь терапевтическое преимущество перед ванкомицином в отношении активности против спор. Пример 5. Оценка эффективности внутривенного введения оритаванцина в хомячковой модели ИКД. Методы. Бактериальный штамм. Во всех экспериментах использовался штамм клостридиум диффициле ATCC 43255. Этот штамм первоначально был выделен из брюшной раны и является токсином А+/В+ и двойным токсином с отрицательной регуляцией. Споры клостридиум диффициле готовили для инфицирования путем инкубирования клеток клостридиум диффициле в чашке с кровяным агаром при 37 С анаэробно в течение 7 дней для протекания спорообразования. Колонии спор клостридиум диффициле повторно суспендировали в солевом растворе с фосфатным буфером (PBS) и смешивали с равным объемом 100%-ного этанола в течение 1 ч. Споры центрифугировали, повторно суспендировали в PBS, делили на аликвоты и замораживали при -20 С. Затем споры разбавляли в PBS для перорального введения хомячкам. Хомячковая модель инфекции клостридиум диффициле (ИКД). Все исследования выполнены в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию. Самцам сирийских золотистых хомячков (6580 г; Harlan, Индианаполис, Индиана, США) предварительно ввели по одной подкожной дозе клиндамицина (100 мг/кг) за день до инфицирования (день -1). На следующий день (день 0) животные были инфицированы перорально, получив с кормом 105 спор клостридиум диффициле. Лечение антибиотиками. Начиная с 1-го дня после инфицирования (день 1) хомячкам (группа, n=10) вводили любым способом ванкомицин (50 мг/кг) или вводили внутривенно (подъязычно) оритаванцин в 10% оксипропил-циклодекстрине (HPCD) (50 мг/кг). В общей сложности 1, 2или 3 дозы оритаванцина вводили в дни 1, 3,и 5 соответственно (2 раза в день). В сравнительной группе хомячкам ввели в общей сложности 3 дозы ванкомицина в дни 1, 3 и 5. Животные наблюдались для обнаружения любых симптомов болезни вплоть до регистрации экспериментального результата и статуса выживания. Результаты. У хомячков (группа, n=10) вызывали ИКД, предварительно введя им клиндамицин (день -1), а затем инфицировав их спорами клостридиум диффициле через 24 ч (день 0). Инфицированные хомячки получили первую дозу антибиотика в день 1 и лечение повторяли каждые 2 дня в течение 5 дней; группа, которой не вводили антибиотик, использовалась как контроль. У всех животных контрольной группы (без лечения) развилась ИКД, подтверждаемая клиническими симптомами, и они или умерли, или были подвергнуты эвтаназии в состоянии агонии ко дню 5(фиг. 10). Три внутривенные дозы ванкомицина (50 мг/кг 2 раза в день) продлевали выживание на 8 дней по сравнению с нелеченными животными (фиг. 10). Тем не менее, 70% из животных, которых лечили ванкомицином, умерли между второй и третьей инъекциями в дни 3 и 5 соответственно. В результате, в день 5 пропорциональные уровни выживаемости составляли 0% для нелеченных животных и 30% для животных, которых лечили ванкомицином. По сравнению с этими группами, животные, которым внутривенно вводили оритаванцин (50 мг/кг, по 1, 2 или 3 дозы, 2 раза в день, в течение 5 дней), показали увеличенный пропорциональный уровень выживаемости, причем выживание было продлено на 4, 5 и 7 дней соответственно, по сравнению с нелеченными животными (фиг. 10). Эти факты указывают на зависимую от дозы эффективность оритаванцина. Животные, которые получали 2 дозы оритаванцина, прожили на 5 дней дольше, чем животные, получавшие эквивалентную дозу ванкомицина с режимом дози- 27017564 рования 22 раза в день (фиг. 10). Пример 6. Оценка эффективности перорального введения оритаванцина в хомячковой модели ИКД. Методы. Бактериальный штамм. Во всех экспериментах использовался штамм клостридиум диффициле ATCC 43255. Споры клостридиум диффициле готовили к инфицированию, инкубируя клетки клостридиум диффициле в чашке с кровяным агаром при 37 С анаэробно в течение 7 дней для протекания спорообразования. Колонии спор клостридиум диффициле повторно суспендировали в солевом растворе с фосфатным буфером (PBS) и смешивали с равным объемом 100%-ного этанола в течение 1 ч. Споры центрифугировали, повторно суспендировали в PBS, делили на аликвоты и замораживали при -20 С. Затем споры разбавляли PBS для перорального введения хомячкам. Хомячковая модель инфекции клостридиум диффициле. Все исследования выполнены в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию. Самцам сирийских золотистых хомячков (6580 г) предварительно ввели по одной подкожной дозе клиндамицина (CL) (100 мг/кг) за день до инфицирования (день -1). На следующий день (день 0) животные были инфицированы перорально, получив с кормом 105 спор клостридиум диффициле. Лечение антибиотиками. 1) Начиная с 1-го дня после инфицирования (PI) хомячкам (группа, n=10) вводили любым способом одну дозу ванкомицина (VA) (50 мг/кг/день) или вводили с кормом оритаванцин (ORI) в 10% оксипропилциклодекстрине (HPCD) (10, 50 или 100 мг/кг/день) в течение 5 дней. 2) Оритаванцин в полиэтиленгликоле 400 (PEG400) вводили хомячкам перорально (группа, n=5) со дня 2 в течение 5 дней. Животные наблюдались для обнаружения любых симптомов болезни вплоть до регистрации экспериментального результата (день 20) и статуса выживания. Определение клостридиум диффициле в содержимом слепой кишки. В экспериментальных и клинических конечных точках определяли клетки клостридиум диффициле и токсины в содержимом слепой кишки животных. Наличие токсинов клостридиум диффициле (токсины А и В) определяли с помощью набора CD TOX A/B IITM (Techlab) по методике изготовителя. Предел обнаружения составлял 0,8 нг/мл для токсина А и 2,5 нг/мл для токсина В. Общую численность жизнеспособных клеток (TC) (и вегетативная форма, и споры) определяли, последовательно разбавляя содержимое слепой кишки в 10 раз раствором PBS, содержащим 2% оксиразы (Oxyrase Inc). Разбавления содержимого слепой кишки помещали в чашки с агаром CCEY Брейзиера, содержащим лизоцим (Lab 160), без яичного желтка. Споры клостридиум диффициле подсчитывали, обрабатывая образцы из слепой равным объемом чистого этанола. Предел обнаружения (LOD) составлял 1,47 и 1,77 log10 КОЕ на 1 г содержимого слепой кишки для общей численности (TC) и спор соответственно. Статистические анализы. Данные по выживаемости анализировали с помощью метода Каплана-Мейера и логарифмического рангового критерия Вилкоксона, используя программу GraphPad Prism (вер. 5.00). Для статистической значимости учитывались значения р 0,05. Результаты. Как показано графически на фиг. 11A, после лечения одним только CL, до дня 20 выжило только 50% хомячков, причем все смерти происходили между днями 6-8 после инфицирования. Выживаемость хомячков, получивших только CL и споры клостридиум диффициле, составила 0% ко дню 4 после инфицирования. Как показано графически на фиг. 11B, эффективность оритаванцина (ORI) зависит от дозы. У животных, которым внутривенно вводили оритаванцин в HPCD (10, 50 и 100 мг/кг, 1 раз в день, в течение 5 дней), выживаемость продлилась на 9, 13 и 17 дней соответственно, по сравнению с нелеченными животными (р 0,0001 для каждой группы). Оритаванцин (100 мг/кг) показал превосходящую эффективность по сравнению с ванкомицином в день 12 после инфицирования. Среднее время выживания хомячков, получавших 100 мг/кг оритаванцина, составило 17 дней по сравнению с 12 днями для хомячков, получавших ванкомицин (р 0,0001). В содержимом слепой кишки всех мертвых хомячков обнаружены токсины А и В клостридиум диффициле. На фиг. 11C графически представлены результаты перорального лечения, начатого в день 1 или день 2 в течение 5 дней с введением 50 мг/кг ванкомицина 1 раз в день или 100 мг/кг оритаванцина 1 раз в день соответственно. Все животные, получавшие оритаванцин, выжили, и ни у одного из них не наблюдалось признаков болезни до 20 дней после инфицирования. Высокий уровень токсинов А и В был обнаружен в содержимом слепой кишки нелеченных животных и получавших ванкомицин, в то время как у животных, получавших оритаванцин, токсины А и В не были выявлены в день 20 после инфицирования.- 28017564 Как показано на фиг. 11D, в день 20 после инфицирования вегетативные клетки и споры клостридиум диффициле не обнаруживались в содержимом слепой кишки у всех хомячков, получавших оритаванцин, смешанный с PEG400. Предел обнаружения (LOD) составлял 1,47 и 1,77 log10 КОЕ на 1 г содержимого слепой кишки для общей численности (TC) и численности спор соответственно. Настоящее изобретение было описано выше в общих чертах и с примерами конкретных воплощений. Хотя изобретение было сформулировано с описанием предпочтительных воплощений, специалисты в данной области смогут выбрать широкий круг альтернатив из общего описания раскрытия. Изобретение не ограничено иными положениями, кроме указанных в формуле изобретения. Все документы, публикации, патенты, книги, руководства, статьи, обзоры, рефераты, стендовые доклады и другие материалы, на которые здесь даются ссылки, во всей полноте включены в настоящее изобретение посредством ссылки. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ ингибирования прорастания спор Clostridium difficile, включающий приведение в контакт спор С.difficile с гликопептидным антибиотиком в количестве, достаточном для ингибирования прорастания спор С.difficile, причем гликопептидный антибиотик представляет собой оритаванцин или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или смесь указанного. 2. Способ ингибирования как прорастания спор С.difficile, так и роста вегетативной формы С.difficile, включающий приведение в контакт спор С.difficile и вегетативной формы С.difficile с гликопептидным антибиотиком в количестве, достаточном для ингибирования как прорастания спор С.difficile, так и роста вегетативной формы С.difficile, причем гликопептидный антибиотик представляет собой оритаванцин или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или смесь указанного. 3. Способ лечения субъекта от инфекции, вызванной С.difficile, включающий введение субъекту,инфицированному С.difficile, терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика,где указанное лечение ингибирует прорастание спор С.difficile, причем гликопептидный антибиотик представляет собой оритаванцин или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или смесь указанного. 4. Способ лечения субъекта от инфекции, вызванной С.difficile, включающий введение субъекту,инфицированному С.difficile, терапевтически эффективного количества гликопептидного антибиотика,где указанное лечение ингибирует как прорастание спор С.difficile, так и рост вегетативной формы С.difficile, причем гликопептидный антибиотик представляет собой оритаванцин или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или смесь указанного. 5. Способ по любому из пп.3 или 4, где введение осуществляют внутривенно или перорально. 6. Способ по любому из пп.3 или 4, где введение осуществляют перорально. 7. Способ по п.6, где терапевтически эффективное количество гликопептидного антибиотика составляет приблизительно от 5 до 30 мг на 1 кг веса тела. 8. Способ по любому из пп.1-7, где гликопептидный антибиотик находится в форме фармацевтической композиции, содержащей гликопептидный антибиотик и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. 9. Способ по любому из пп.1-8, где приведение С.difficile в контакт осуществляют in vitro, in vivo или ex vivo.