Новые композиции опухолеассоциированных пептидов, связывающихся с молекулами человеческого лейкоцитарного антигена (hla) i или ii класса, для вакцин

НОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫХ ПЕПТИДОВ,СВЯЗЫВАЮЩИХСЯ С МОЛЕКУЛАМИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА (HLA) I ИЛИ II КЛАССА, ДЛЯ ВАКЦИН Изобретение относится к новым композициям опухолеассоциированных пептидов, связывающихся с молекулами человеческого лейкоцитарного антигена (HLA) I или II класса, в качестве вакцин для применения в иммунотерапевтических способах. В частности, настоящее изобретение относится к композициям для иммунотерапии рака, в частности рака почек и головного мозга, в частности глиомы, предпочтительно глиобластомы. Настоящее изобретение относится, кроме того,к вакцинным композициям для индуцирования противоопухолевых иммунных ответов.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ИММАТИКС БАЙОТЕКНОЛОДЖИЗ ГМБХ (DE) 017492 Изобретение относится к новым композициям опухолеассоциированных пептидов, связывающихся с молекулами человеческого лейкоцитарного антигена (HLA) I или II класса, в качестве вакцин для применения в иммунотерапевтических способах. В частности, настоящее изобретение относится к композициям для иммунотерапии рака, в частности рака почек. Настоящее изобретение относится, кроме того, к вакцинным композициям для индуцирования противоопухолевого иммунного ответа. В соответствии с целями настоящего изобретения все цитированные источники включены в полном объеме путем ссылки. Уровень техники Композиция для инъекции, состоящая из пептидов в форме порошка и разбавителя, состоящего из гидрокарбоната натрия, раскрыта в патенте WO 2007/028573 для вакцинации против почечно-клеточной карциномы. Однако эта композиция имеет различные недостатки. Основным недостатком является слабая растворимость, сильно осложняющая ее введение во время любого применения, такого как при клиническом использовании. В целях растворения порошка для получения композиции ампулу с подлежащими растворению пептидами и разбавитель следует тщательно встряхивать в течение трех минут, затем подвергнуть ультразвуковой гомогенизации в течение одной минуты и снова встряхивать в течение одной минуты. Данная процедура не может быть осуществлена всеми врачами в месте приема пациентов по причине частого отсутствия необходимого оборудования, так что полученная смесь может быть негомогенной, как это необходимо для эффективного применения. Дополнительная проблема с композицией связана с тем фактом, что при заданной скорости растворения активных ингредиентов с применением гидрокарбоната натрия в заданных концентрациях полученный раствор может быть использован только в течение примерно 30 мин. Дополнительно характеристики приведенной выше композиции со временем изменяются, что делает безопасное применение практически невозможным. После хранения описанной композиции в течение 12 месяцев при различных температурах в диапазоне от -20 до +25 С было невозможно получить прозрачный раствор даже после применения ультразвукового гомогенизатора в течение нескольких минут. Таким образом, существует потребность в новых пептидных композициях с улучшенной растворимостью и улучшенными свойствами смачиваемости лиофилизата в целях обеспечения безопасности и эффективности препарата, в особенности в случае противораковой вакцины. Настоящее изобретение соответствует данному требованию. Краткое изложение сущности изобретения Изобретение в одном из своих предпочтительных аспектов обеспечивает фармацевтические композиции, включающие 2-18, предпочтительно менее 15, более предпочтительно менее 13, еще более предпочтительно от 2 до 12 пептидов и еще более предпочтительно от 3 до 12 опухолеассоциированных пептидов; причем каждый пептид имеет длину от 8 до 22 аминокислот, предпочтительно от 9 до 16 аминокислот; причем указанные пептиды проявляют растворимость в 90%-й уксусной кислоте, составляющую по меньшей мере 2,7 мг/мл, наряду с маннитолом и полоксамером 188, причем весовое соотношение указанного(ых) пептида(ов), маннитола и полоксамера 188 находится в пределах значений от 1:5:1,5 до 1:8:2,2, включительно; или маннитолом и Твин (Tween) 80, причем весовое соотношение пептидов,маннитола и Твин 80 находится в пределах значений от 1:2:1,5 до 1:8:2,2, включительно. В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию по п.1 формулы изобретения, включающую по меньшей мере два пептида, причем указанные пептиды включают аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDNO: 1-10 или SEQ ID NO: 12-23; при условии, что композиция включает по меньшей мере один пептид,включающий последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13 или их вариант или соль; и дополнительно включающую маннитол и полоксамер 188, причем весовое соотношение пептидов, маннитола и полоксамера 188 находится в пределах значений от 1:5:1,5 до 1:8:2,2,включительно. В еще одном предпочтительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию по п.1 формулы изобретения, включающую по меньшей мере два пептида, причем указанные пептиды включают аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQID NO: 1-10 или SEQ ID NO: 12-23; при условии, что композиция включает по меньшей мере один пептид, включающий последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13 или их вариант или соль; и дополнительно включающую маннитол и Твин (Tween) 80, причем весовое соотношение пептидов, маннитола и Твин 80 находится в пределах значений от 1:2:1,5 до 1:8:2,2,включительно. Обладая преимуществами, композиция в соответствии с изобретением подходит для устойчивых препаратов, содержащих высокогидрофобные пептиды (например, IMA-CHI-001; SEQ ID NO: 23). Этот конкретный пептид, например, практически не растворим в воде и лишь немного растворим в 90%-й уксусной кислоте (растворимость около 2,9 мг/мл). Неожиданным образом сейчас стало возможным приготовить смесь пептида в соответствии с SEQ ID NO: 23 с любым другим пептидом в другой композиции,-1 017492 которая может быть использована для введения живому существу. Поэтому представленная патентная заявка раскрывает композицию смеси из 2-18 пептидов, предпочтительно менее 15, более предпочтительно менее 13, еще более предпочтительно 2-12 пептидов и еще более предпочтительно 3-12 пептидов, при длине пептидов 8-22 аминокислоты, предпочтительно 9-16 аминокислот, при условии, что пептиды обладают растворимостью по меньшей мере в 90%-й уксусной кислоте, составляющей 2,7 мг/мл, предпочтительно 2,9 мг/мл, дополнительно включающую маннитол и полоксамер 188, причем весовое соотношение пептидов, маннитола и полоксамера 188 находится в пределах от 1:5:1,5 до 1:8:2,2, включительно. В предпочтительном воплощении фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением весовое соотношение пептидов, маннитола и полоксамера 188 находится в пределах от 1:0:2 до 1:0:2,2, включительно. Другое предпочтительное воплощение настоящего изобретения обеспечивает фармацевтическую композицию, как показано выше, включающую по меньшей мере два пептида, причем указанные пептиды включают аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12-23; при условии, что композиция включает по меньшей мере один пептид, включающий SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13 или их вариант; и дополнительно включающую маннитол и Твин (Tween) 80, причем предпочтительное весовое соотношение пептидов, маннитола и Твин 80 находится в пределах значений от 1:5:0,5 до 1:5:2, включительно. Предпочтительно пептиды настоящего изобретения обладают общей длиной 9-16 аминокислот. Пептиды могут содержать непептидные связи. В других предпочтительных воплощениях фармацевтические композиции включают пептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2,и дополнительно включают по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 3-10. В определенных предпочтительных воплощениях фармацевтическая композиция может дополнительно включать пептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ IDNO: 11 при условии, что указанный пептид не является соответствующим опухолеассоциированным полипептидом полной длины. В других воплощениях фармацевтическая композиция может дополнительно содержать пептид, который состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ IDNO: 11. В других предпочтительных воплощениях фармацевтические композиции включают пептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 12 и/или SEQ ID NO: 13, и дополнительно включают по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 14-23. В некоторых предпочтительных воплощениях данная фармацевтическая композиция может дополнительно включать пептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11 при условии, что указанный пептид не является соответствующим опухолеассоциированным полипептидом полной длины. В других воплощениях фармацевтическая композиция может дополнительно содержать пептид, который состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11. В некоторых воплощениях пептиды, присутствующие в композиции, выбраны из пептидов, специфических для ткани, рака и/или пациента. В дальнейших предпочтительных воплощениях фармацевтическая композиция может дополнительно содержать по меньшей мере один подходящий адъювант. Адъюванты - это вещества, которые неспецифически усиливают или потенцируют иммунный ответ (например, иммунные ответы, опосредованные ЦТЛ или хелперными Т-клетками (Tн) на антиген), и могут, таким образом, рассматриваться как полезные в лекарственных средствах настоящего изобретения. Подходящие адъюванты включают, но не ограничиваются такими, как 1018 ISS, соли алюминия, Amplivax, AS15, BCG, CP-870,893, CpG7909,CyaA, dSLIM, флагеллин или лиганды TLR5, полученные из флагеллина, лиганд FLT3, ГМ-КСФ, IC30,IC31, Имиквимод (ALDARA), резимиквимод, ImuFact IMP321, интерлейкины, такие как IL-2, IL-13, IL-21,интерферон-альфа или -бета или их пегилированные производные, IS Patch, ISS, ISCOMATRIX, ISCOMs,Juvlmmune, LipoVac, MALP2, MF59, монофосфорил липид А, Монтанид IMS 13L2, Монтанид ISA 206,Монтанид ISA 50V, Монтанид ISA-51, эмульсии вода-в-масле и масло-в-воде, OK-432, ОМ-174, ОМ-197 МР-ЕС, ONTAK, OspA, векторная система PepTel, микрочастицы PLG и декстрана, резиквимод,SRL172, вирусомы и другие вирусоподобные частицы, YF-17D, VEGF trap, R848, бета-глюкан, Pam3Cys,стимулон Aquila QS21, который получают из сапонина, микобактериальные экстракты и синтетические имитации бактериальных клеточных стенок и другие запатентованные адъюванты, такие как Ribi's Detox,Quil или Superfos. Предпочтительными адъювантами являются такие, как адъювант Фрейнда или ГМКСФ. Несколько иммунологических адъювантов (например, MF59), специфических для дендритных клеток и их приготовление были описаны ранее (Dupuis M. et al. 1998; Allison, 1998). Также могут использоваться цитокины. Несколько цитокинов были присоединены напрямую для оказания влияния на миграцию дендритных клеток к лимфоидным тканям (например, TNF-), ускоряя созревание дендритных кле-2 017492 ток до эффективных клеток, презентирующих антиген Т-лимфоцитам (например, ГМ-КСФ, IL-1 и IL-4)(патент США 5849589, включенный сюда путем ссылки) и действующих как иммуноадъюванты (например, IL-12, IL-15, IL-23, IL-7, IFN-, IFN-) (Gabrilovich et al. 1996). Об иммуностимулирующих олигонуклеотидах CpG также сообщалось, что они усиливают эффекты адъювантов в составе вакцин. Теоретически не связанные, CpG-олигонуклеотиды при активации врожденной (неадаптивной) иммунной системы действуют с помощью Toll-подобных рецепторов (TLR), в основном TLR9. Вызванная CpG активация TLR9 усиливает антигенспецифические гуморальные и клеточные ответы на широкий спектр антигенов, включая пептидные или белковые антигены, живые или убитые вирусы, вакцины из дендритных клеток, аутологичные клеточные вакцины и полисахаридные конъюгаты как в профилактических, так и терапевтических вакцинах. Более важно то, что улучшается созревание и дифференциация дендритных клеток, приводя к улучшенной активации TH1-клеток и интенсивной генерации цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) даже при отсутствии помощи CD4 Tклеток. Ответ в направлении TH1, вызванный стимуляцией TLR9, сохраняется даже в присутствии вакцинных адъювантов, таких как квасцы или неполный адъювант Фрейнда (IFA), который обычно способствует ответу в направлении TH2. CpG-олигонуклеотиды проявляют даже большую адъювантную активность, если они входят в составы или вводятся вместе с другими адъювантами или в таких составах, как микрочастицы, наночастицы, липидные эмульсии или составах, которые в особенности необходимы для индукции сильного ответа, если антиген относительно слаб. Они также ускоряют иммунную реакцию и позволяют снизить дозы антигена на приблизительно два порядка величины с ответами антитела, сравнимыми с полной дозой вакцины без CpG в некоторых экспериментах (Krieg et al. 2006). В патенте США 6406705 В 1 описывается комбинированное применение CpG-олигонуклеотидов, адъювантов, не включающих нуклеиновые кислоты, и антигена для вызывания антигенспецифического иммунного ответа. Антагонистом CpG TLR9 является dSLIM (контурный иммуномодулятор двойного действия) компании Mologen (Берлин, Германия), который является предпочтительным компонентом фармацевтической композиции настоящего изобретения. Также могут быть использованы другие молекулы, связывающиеся с TLR, такие как РНК, связывающаяся с TLR 7, TLR 8 и/или TLR 9. Другие примеры полезных адъювантов включают, но не ограничиваются химически модифицированными CpG (например, CpR, Idera), аналогами dsPHK, такими как Poly(I:C) и AmpliGen, не-CpG бактериальной ДНК или РНК, а также иммуноактивными малыми молекулами и антителами, такими как циклофосфамид, сунитиниб, бевацизумаб, целебрекс, NCX-4016, силденафил, тадалафил, варденафил, сорафениб, темозоломид, темсиролимус, XL-999, СР-547632, пазопаниб, VEGF Trap, ZD2171, AZD2171, анти-CTLA4 и SC58175, которые могут действовать терапевтически и/или как адъювант. Количества и концентрации адъювантов и вспомогательных веществ, полезных в контексте настоящего изобретения, могут быть легко определены опытным специалистом без проведения излишних экспериментов. Предпочтительными адъювантами являются dSLIM, интерферон-альфа, -бета, CpG7909, IC31, имиквимод, резиквимод, PeviTer, РНК, тадалафил, темозоломид и Juvmmune. Предпочтительными адъювантами являются dSLIM, БЦЖ, ОК 432, имиквимод, резиквимод, ГМКСФ, интерферон-альфа, PeviTer и JuvImmune или их комбинации. В предпочтительном воплощении фармацевтической композиции в соответствии с изобретением адъювант выбран из группы, состоящей из колониестимулирующих факторов, таких как гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ, сарграмостим), имиквимод, резиквимод и интерферон-альфа. В предпочтительном воплощении фармацевтической композиции в соответствии с изобретением адъювант выбран из группы, состоящей из колониестимулирующих факторов, таких как гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ, сарграмостим), имиквимод и резиквимод. В предпочтительном воплощении фармацевтической композиции в соответствии с изобретением адъювантом является имиквимод или резиквимод. Эта композиция может быть применена для парентерального введения, такого как подкожное,внутрикожное, внутримышечное или оральное введение. Пептиды могут быть также введены вместе с иммуностимулирующими веществами, такими как цитокины. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть применены в качестве противораковой вакцины. Настоящее изобретение охватывает также набор, включающий по меньшей мере один из приведенных выше пептидов и/или приведенную выше фармацевтическую композицию, либо приготовленные ранее, либо в отдельных емкостях или ампулах для смешивания на месте. Предпочтительно набор включает (а) контейнер, содержащий фармацевтическую композицию в соответствии с изобретением, в виде раствора или в лиофилизованной форме; (b) необязательно - второй контейнер, содержащий разбавитель или восстанавливающий раствор для указанной лиофилизованной композиции и/или по меньшей мере один адъювант; и (с) необязательно - инструкции по (i) использованию раствора или (ii) восстановителя, и/или по использованию указанной лиофилизованной композиции. Также предпочтителен набор в соответствии с изобретением, дополнительно включающий один-3 017492 или более (i) буфер, (ii) разбавитель, (iii) фильтр, (iv) иглу и (v) шприц. Краткое описание фигур Фиг. 1 - аналитическая хроматограмма ВЭЖХ пептидов (SEQ ID NO: 1-11), содержащих бетанафтилаланин (NAL) в качестве внутреннего стандарта; фиг. 2 - стабильность композиции 1 (контроль) без эксципиентов при +25 С; фиг. 3 - стабильность композиции 2 в соответствии с изобретением с маннитолом и Лутролом (Lutrol) F68 (полоксамер/Poloxamer 188) при +25 С; фиг. 4 - стабильность композиции 3 в соответствии с изобретением с маннитолом и Твин (Tween) 80 при +25 С; фиг. 5 - стабильность композиции 4 в соответствии с изобретением с маннитолом и Твин (Tween) 80 при +25 С; фиг. 6 - стабильность композиции 1 (контроль) без эксципиентов при +40 С; фиг. 7 - стабильность композиции 2 в соответствии с изобретением с маннитолом и Лутролом (Lutrol) F68 (Полоксамер/Poloxamer 188) при +40 С; фиг. 8 - стабильность композиции 3 в соответствии с изобретением с маннитолом и Твин (Tween) 80 при +40 С; фиг. 9 - стабильность композиции 4 в соответствии с изобретением с маннитолом и Твин (Tween) 80 при +40 С; фиг. 10 - эффекты от эксципиентов полоксамера (Poloxamer) 188 (Лутрол/Lutrol F68 ассортимент компании BASF Ludwigshafen, Германия) и маннитола на прайминге CD8+ T-клеток in vivo. Мышей умерщвляли по истечении 9 дней после иммунизации, собирали клетки селезенки, окрашенные тетрамером, и анализировали поточной цитометрией. Процентная доля тетрамер-позитивных клеток среди всехCD8+ T-клеток показана планками погрешностей, отображающими стандартное отклонение средней величины. Все три иммунизированные пептидом группы, по данным двустороннего анализа с применением непарного t-критерия Стьюдента (p0,05), существенно отличаются от негативных контролей. Группы с и без полоксамера/Poloxamer 188 (Лутрола/Lutrol F68)/маннитола не имеют существенных различий (p=0,49); фиг. 11 - процесс получения, описанный в примере 2; фиг. 12 - аналитическая хроматограмма ВЭЖХ пептидов (SEQ ID NO: 11-23), содержащих бетанафтилаланин (NAL) в качестве внутреннего стандарта; фиг. 13 - стабильность пептидов SEQ ID NO: 11-23 при использовании с маннитолом/ЛутроломF68; фиг. 14 - стабильность пептидов SEQ ID NO: 11-23 без эксципиентов; фиг. 15 - стабильность пептидов SEQ ID NO: 11-22 с маннитолом/Лутролом F68 при +25 С; фиг. 16 - стабильность пептидов SEQ ID NO: 11-22 с маннитолом/Лутролом F68 при +5 С; фиг. 17 - cтабильность пептидов SEQ ID NO: 11-22 с маннитолом/Лутролом F68 при -20 С; фиг. 18 - данные по стабильности за 24 месяца при -20 С для композиции по примеру 2; фиг. 19 - данные по стабильности за 24 месяца при +5 С для композиции по примеру 2; фиг. 20 - данные по стабильности за 24 месяца при +25 С для композиции по примеру 2. В списке последовательностей представлены пептиды (SEQ ID NO: 1-23), которые использованы в композициях в соответствии с настоящим изобретением. Детальное описание изобретения Настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, полезную в качестве вакцины, причем указанная фармацевтическая композиция включает различные опухолеассоциированные пептиды (TUMAP) и дополнительно либо смеси маннитола и Твин 80, либо смеси маннитола и полоксамера 188, смеси которых обеспечивают стабильность и растворимость для указанной композиции."Фармацевтические композиции", используемые здесь, предпочтительно являются лиофилизованным составом, включающим пептиды, маннитол и Твин 80 или же пептиды, маннитол и полоксамер 188, или предпочтительно являются восстановленной жидкой композицией. Как таковой, используемый здесь термин "фармацевтические композиции" может относиться к лиофилизованному составу для указания на то, что композиция представлена в лиофилизованной форме. Предпочтительно, чтобы пептиды в фармацевтических композициях включали по меньшей мере один из пептидов, представленных в SEQ ID NO: 1-10, которые находятся и были идентифицированы на первичных клетках рака почки, или по меньшей мере один из пептидов, представленных в SEQ ID NO: 11-22 и 11-23, которые находятся и были идентифицированы в первичных раковых клетках глиомы. В других предпочтительных воплощениях фармацевтические композиции включают пептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 12 и/или SEQ ID NO: 13, и дополнительно включают по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 14-23. Данные композиции пептидов включают пептиды HLA класса I и II. Предпочтительно, чтобы фар-4 017492 мацевтическая композиция настоящего изобретения включала пептид, представленный в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2, и/или по меньшей мере один иной пептид, включающий SEQ ID NO: 3-10 или пептид, представленный в SEQ ID NO: 12 и/или SEQ ID NO: 13, и/или по меньшей мере один иной пептид,включающий SEQ ID NO: 11 и 14-23. Фармацевтические композиции включают пептиды как в свободной форме, так и в форме фармацевтически приемлемой соли. Используемое здесь понятие "фармацевтически приемлемая соль" относится к производным раскрытых пептидов, причем пептид модифицирован путем получения кислотных или щелочных солей агента. Например, кислотные соли получают из свободного основания (обычно, где нейтральная форма лекарственного средства имеет нейтральную группу -NH2) с применением реакции с подходящей кислотой. Подходящие кислоты для получения кислотных солей включают как органические кислоты, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, пировиноградную кислоту, щавелевую кислоту, оксиянтарную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, паратолуолсульфокислоту,салициловую кислоту и подобные, так и неорганические кислоты, например, хлористо-водородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и подобные. И наоборот, приготовление щелочных солей кислотных составляющих, которые могут присутствовать на пептиде, получают при использовании фармацевтически приемлемого основания, такого как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, гидроксид кальция, триметиламин или подобные. В одном особенно предпочтительном воплощении фармацевтические композиции включают пептиды в виде солей уксусной кислоты (ацетаты) или хлористо-водородной кислоты (хлориды). В еще более предпочтительном воплощении фармацевтические композиции в соответствии с изобретением включают SEQ ID NO: 5 в виде хлорида и все остальные пептиды в виде ацетатов. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут также содержать по меньшей мере один пептид, служащий в качестве пептида положительного контроля, иммунного маркера для проверки эффективности внутрикожного введения. Один такой отдельный пептид получен из корового антигенаHBV (SEQ ID NO: 11). В одном конкретном воплощении фармацевтическая композиция включает 11 различных пептидов,каждый из которых состоит из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 111 (см. табл. 1). Предпочтительно, чтобы каждый пептид в фармацевтической композиции присутствовал с количеством, составляющим от около 1500 мкг до около 75 мкг, предпочтительно от около 1000 мкг до около 750 мкг и более предпочтительно от около 500 мкг до около 600 мкг и наиболее предпочтительно около 578 мкг. Предпочтительно, чтобы каждый пептид был очищен ВЭЖХ и ионообменной хроматографией и имел вид от белого до серовато-белого порошка. В другом конкретном воплощении фармацевтическая композиция включает 12 различных пептидов, каждый из которых состоит из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ IDNO: 11-22, и последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 11-23 (см. табл. 1). Предпочтительно,чтобы каждый пептид в фармацевтической композиции присутствовал в количестве, составляющем от около 1500 мкг до около 75 мкг, предпочтительно от около 1000 мкг до около 750 мкг и более предпочтительно от около 500 мкг до около 600 мкг и наиболее предпочтительно около 578 мкг. Предпочтительно, чтобы каждый пептид был очищен ВЭЖХ и ионообменной хроматографией и имел вид от белого до серовато-белого порошка. Таблица 1. Предпочтительные пептиды в фармацевтических композициях настоящего изобретения Термин "пептид" используется здесь для обозначения серий аминокислотных остатков, связанных друг с другом обычно пептидными связями между -аминными и карбонильными группами смежных аминокислот. Пептиды обычно обладают длиной в 9 аминокислот в случае МНС класса I и бывают длиннее (15 или 16 аминокислот) в случае МНС класса II, но могут быть и короче, имея 8 аминокислот в длину, и длиннее, имея 16 аминокислот в длину. Термин "олигопептид" используется здесь для обозначения серий аминокислотных остатков, связанных один с другим обычно пептидными связями между альфа-аминными и карбонильными группами смежных аминокислот. Длина олигопептида не особенно важна для изобретения до тех пор, пока в нем сохраняются надлежащие эпитоп или эпитопы. Олигопептиды обычно бывают длиной в менее чем около 30 аминокислотных остатков и более чем около 14 аминокислот в длину. Термин "полипептид" обозначает серии аминокислотных остатков, связанных один с другим обычными пептидными связями между альфа-аминными и карбонильными группами смежных аминокислот. Длина полипептида не особенно важна для изобретения до тех пор, пока сохраняются надлежащие эпитопы. В отличие от терминов "пептид" или "олигопептид", термин "полипептид" введен для обозначения белковых молекул, имеющих в длину более приблизительно 30 остатков. Пептид, олигопептид, белок или полинуклеотид, кодирующий для такой молекулы, является "иммуногенным" (и, таким образом, "иммуногеном" в рамках настоящего изобретения), если он способен индуцировать иммунный ответ. В случае настоящего изобретения иммуногенность получает более специфическое определение как способность индуцировать опосредованную ЦТЛ реакцию. Таким образом,"иммуноген" должен представлять собой молекулу, которая способна индуцировать иммунный ответ, и,в случае настоящего изобретения, молекулу, способную индуцировать реакцию ЦТЛ. Т-клеточный "эпитоп" - это короткая пептидная молекула, которая связывается с молекулой МНС I или II класса и которая впоследствии распознается Т-клеткой. Т-клеточные эпитопы, которые связываются с молекулами МНС I класса, обычно имеют длину в 8-14 аминокислот и предпочтительно обычно длину в 9 аминокислот. Т-клеточные эпитопы, которые связываются с молекулами МНС II класса, обычно имеют длину в 12-30 аминокислот. В случае эпитопов, которые связываются с молекулами МНС II класса, одинаковые Т-клеточные эпитопы могут иметь общий центральный сегмент, но различаться по длине карбокси- и аминоконцевых примыкающих последовательностей вследствие того факта, что концы пептидной молекулы не углублены в структуру пептидсвязывающей бороздки молекулы МНС II класса, как то имеет место быть с пептидсвязывающей бороздкой молекулы МНС I класса. Существуют три различных генетических локуса, которые кодируют для молекул МНС I класса:HLA-A, HLA-B и HLA-C. HLA-A1, HLA-A2 и HLA-A11 являются примерами различных молекул МНС I класса, которые могут экспрессироваться из этих локусов. Используемые здесь термины "участок", "сегмент" и "фрагмент", если они использованы по отношению к полипептидам, относятся к непрерывной последовательности остатков, таких как аминокислотные остатки, последовательность которых формирует подкласс более крупной последовательности. На-6 017492 пример, если полипептид был подвергнут обработке любой из известных эндопептидаз, таких как трипсин или химотрипсин, то полученные в результате такой обработки олигопептиды будут представлять участки, сегменты или фрагменты исходного полипептида. Это означает, что любой такой фрагмент будет обязательно содержать как часть его аминокислотной последовательности сегмент, фрагмент или участок, который в значительной степени идентичен, если не в точности идентичен, последовательностиSEQ ID NO: 1-23, которая соответствует встречающимся в природе или "материнским" белкам последовательностей SEQ ID NO: 1-23. При использовании по отношению к полинуклеотидам, такие термины относятся к продуктам, полученным при обработке указанных полинуклеотидов любой из известных эндонуклеаз. В соответствии с настоящим изобретением термин "процентная доля идентичности" или "идентичный с процентной долей", если он относится к последовательности, означает, что последовательность сравнивается с заявленной или описанной последовательностью после противопоставления сравниваемой последовательности ("Сравниваемая последовательность") с описанной или заявленной последовательностью ("Контрольная последовательность"). Процентная доля идентичности определяется затем по следующей формуле: Процентная доля идентичности = 100 [I-(C/R)], где "С" является числом различий между контрольной последовательностью и сравниваемой последовательностью по длине противопоставления между контрольной последовательностью и сравниваемой последовательностью, где(i) каждое основание или аминокислота в контрольной последовательности, которые не имеют соответствующее противопоставленное основание или аминокислоту в сравниваемой последовательности; и(iii) каждое противопоставленное основание или аминокислота в контрольной последовательности,которые отличаются от противопоставленного основания или аминокислоты в сравниваемой последовательности, представляют собой различие; и R - это число оснований или аминокислот в контрольной последовательности по длине противопоставления сравниваемой последовательности с любым пропуском, образующимся в контрольной последовательности, считая также за основание или аминокислоту. Если существует противопоставление между сравниваемой последовательностью и контрольной последовательностью, для которых процентная доля идентичности по расчетам выше имеет значение приблизительного равенства или "более чем" установленной минимальной процентной доли идентичности, тогда сравниваемая последовательность имеет установленную минимальную процентную долю идентичности с контрольной последовательностью, если даже могут существовать противопоставления,в которых подсчитанная здесь выше процентная доля идентичности меньше, чем установленная процентная доля идентичности. Пептиды в фармацевтических композициях настоящего изобретения могут быть модифицированы путем замещения одного или нескольких остатков в различных, по возможности отобранных, местах по длине пептидной цепи. Такие замещения могут носить консервативный характер, например, где одна аминокислота заменяется аминокислотой с одинаковой структурой и характеристиками, такими как при замене гидрофобной аминокислоты на другую гидрофобную аминокислоту. Еще более консервативным будет замещение аминокислот одинакового или похожего размера и химического характера, такое как при замене лейцина на изолейцин. В исследованиях вариаций последовательностей внутри семейств встречающихся в природе гомологичных белков определенные замещения аминокислот переносятся гораздо чаще, чем другие, и они часто проявляют взаимосвязь в сходствах по размеру, заряду, полярности и гидрофобности между исходной аминокислотой и ее заменой; и таковой является основа определения"консервативных замещений". Консервативные замещения определены здесь как обмены внутри одной из пяти последующих групп: группа 1 - малые, алифатические, неполярные или слабо полярные остатки (Ala, Ser, Thr, Pro,Gly); группа 2 - полярные, отрицательно заряженные остатки и их амиды (Asp, Asn, Glu, Gln); группа 3 полярные, положительно заряженные остатки (His, Arg, Lys); группа 4 - крупные, алифатические, неполярные остатки (Met, Leu, Ile, Val, Cys) и группа 5 - крупные, ароматические остатки (Phe, Tyr, Trp). Менее консервативные замещения могут охватывать замещение одной аминокислоты другой,имеющей похожие характеристики, но отличающейся в какой-то степени по размеру молекулы, как в случае замещения аланина остатком изолейцина. Высоко неконсервативные замещения могут охватывать замещение кислой аминокислоты другой, которая имеет полярность, или даже такой, которая имеет щелочной характер. Такие "радикальные" замещения не могут, однако, быть отвергнуты как потенциально неэффективные из-за того, что химические эффекты не полностью предсказуемы, и радикальные замещения могут привести к увеличению случайных эффектов, в противном случае не предсказуемых, исходя из обычных химических принципов. Разумеется, в таких замещениях могут участвовать другие структуры, отличающиеся от обычныхL-аминокислот. Таким образом, D-аминокислоты могут быть замещены L-аминокислотами, обычно встречающимися в антигенных пептидах по изобретению и также охватываемыми настоящим раскрыти-7 017492 ем сущности изобретения. Кроме того, аминокислоты, содержащие нестандартные R-группы (т.е. Rгруппы, отличающиеся от обнаруженных в распространенных 20 аминокислотах природных белков),могут быть также использованы в целях замещения для получения иммуногена и иммуногенных полипептидов в соответствии с настоящим изобретением. Если были произведены замещения на более чем одной позиции для получения пептида с практически эквивалентной или большей антигенной активностью, чем та, что определена ниже, то комбинации таких замещений будут проанализированы для определения того, приведут ли эти комбинации замещений к дополнительным или синергетическим эффектам по отношению к антигенности пептида. По большей части не более четырех позиций внутри пептида должны замещаться одновременно. Предпочтительно, если ЦТЛ, специфичные для пептида с SEQ ID NO: 1-23, протестированы на замещенные пептиды; концентрация пептида, при которой замещенные пептиды достигают половины максимального роста лизиса относительно фона, составляет не более чем около 1 мМ, предпочтительно не более чем около 1 мкМ, более предпочтительно не более чем около 1 нМ, и еще более предпочтительно не более чем около 100 пМ, и наиболее предпочтительно не более чем около 10 пМ. Также предпочтительно, чтобы замещенный пептид распознавался ЦТЛ более чем одного индивида, по меньшей мере двух и более предпочтительно трех индивидов. Муцин-1 (MUC1) является высокогликолизированным трансмембранным гликопротеином I типа,который с избытком гиперэкспрессирован на клеточной поверхности многих аденокарцином человека,таких как рак груди и яичников. Аберрантная дегликозиляция свойственна злокачественным опухолям и обнаруживает эпитопы в опухолевых клетках, которые не должны быть представлены на нормальных клетках. Более того, экспрессия MUC1 была продемонстрирована во множественной миеломе и некоторых В-клеточных лимфомах не-Ходжкина. Некоторые последние сообщения (Apostolopoulos V. andTakahashi 1994; Noto 1997) показывают, что цитотоксические нерестриктированные по МНС Т-клетки из опухолей яичника, груди, поджелудочной железы и множественной миеломы могут распознавать эпитопы центральной части белка MUC1, находящейся в тандемном повторе. Были идентифицированы два рестриктированных по HLA-A2 Т-клеточных эпитопа, образованных из белка MUC1 (Brossart 1999, ЕР 1484397). Один пептид образован из участка тандемного повтора белка MUC1. Второй пептид локализован внутри сигнальной последовательности MUC1. Индукция ответов цитотоксических Т-лимфоцитов invivo после вакцинаций пациентов с распространенным раком груди или яичника дендритными клетками с введенным импульсным способом пептидом, используя такие пептиды, была успешной (Brossart 2000)(Wierecky, 2005). С учетом почечно-клеточной карциномы экспрессия MUC1 свойственна стандартным опухолям, и сообщалось, что она ассоциирована со степенью и стадией опухоли. Для MUC1 белковая гиперэкспрессия не соотносится с гиперэкспрессией мРНК. Адипофилин является маркером для специализированных дифференцированных клеток, содержащих липидные капельки, и для заболеваний, ассоциированных с жироаккумулирующими клетками (Heid,1998). Адипофилин содержится во многих культивируемых клеточных линиях, включающих фибробласты и эндотелиальные и эпителиальные клетки. Тем не менее, экспрессия адипофилина в тканях рестриктирована по определенным видам клеток, таким как вырабатывающие молоко эпителиальные клетки молочной железы, клетки коркового вещества надпочечника, клетки Сертоли и Лейдига мужской половой системы, а также по стеатозу или жировому перерождению гепатоцитов при алкогольном циррозе печени (Heid, 1998). Сообщалось, что адипофилин гиперэкспрессирован при колоректальном раке (Sana 2001), гепатоклеточной карциноме (Kurokawa 2004) и при почечно-клеточной карциноме (Young 2001).c-Met кодирует гетеродимерный трансмембранный рецептор с тирозинкиназной активностью, который состоит из -цепи, связанной дисульфидной связью с -субъединицей (Bottaro 1991; Rubin 1993). Обе субъединицы экспрессированы на поверхности, тяжелая -субъединица отвечает за связывание лигандов, фактор роста гепатоцитов (HGF), -субъединица содержит внутриклеточный домен, который способствует активации различных сигнальных путей трансдукции. Каскады реакций с c-Met задействованы в регенерации органов, как было продемонстрировано для печени и почек, эмбриогенеза, кроветворения, развития мышц и при регуляции миграции и адгезии нормально активированных В-клеток и моноцитов (Zarnegar, 1995; Naldini, 1991; Montesano, 1998; Schmidt, 1995; Uehara, 1995; Bladt, 1995; Takayama, 1996; Mizuno, 1993; van, V. 1997; Beilmann, 2000). Далее, многочисленные исследования показали,что гиперэкспрессия c-Met задействована в злокачественной трансформации и инвазивности злокачественных клеток.c-Met опосредует мультифункциональные и потенциально онкогенные активности фактора роста гепатоцитов HGF/scatter, включая содействие клеточному росту, подвижности, выживаемости, растворению внеклеточных матриц и ангиогенезу (Bottaro, 1991; Rubin, 1993; Zarnegar, 1995). Связывание HGF с рецептором вызывает автофосфорилирование c-Met и активирует сигнальные процессы по ходу транскрипции, включая ras, фосфатидилиноситол 3'-киназу, фосфолипазу C и активированные митогеном-8 017492 белковые каскады реакций, связанные с киназой. Ген c-Met экспрессирован преимущественно в эпителиальных клетках и гиперэкспрессирован в нескольких злокачественных тканях и клеточных линиях. Возрастающее число сообщений показало, что неэпителиальные клетки, такие как кроветворные, нервные клетки и клетки скелета, реагируют на HGF, а злокачественные заболевания кроветворной системы, как,например, множественная миелома, болезнь Ходжкина, лейкемия и лимфома, экспрессируют белок сMet. Ослабленный контроль инвазивного фенотипа роста в онкогенно активированном c-Met, спровоцированном c-Met-активационными мутациями, c-Met амплификацией/гиперэкспрессией и приобретениемHGF/c-Met аутокринных петель, снабжает злокачественные клетки инвазивными и метастатическими свойствами. Примечательно, что конститутивная активация c-Met у трансгенных мышей с HGFгиперэкспрессией способствует обширному онкогенезу. Регулятор сигналов G-белка 5 (RGS5) является негативным регулятором сигнальных путей гетеротримерного G-белка, хотя его функция in vivo остается неясной. RGS-белки представляют собой семейство молекул с объединяющей каталитической функцией, но с различным тканевым распределением. Они стимулируют истинную активность гуанозин-трифосфатазы (GTPase) активированных субъединиц G и,таким образом, ускоряют инактивацию G-белка. Таким образом, молекулы RGS ингибируют сигналы по ходу транскрипции связанных с G-белком рецепторов (De, 2000). Недавно было показано, что регулятор индукции сигнала-5 G-белка в перицитах совпадает с активным ремоделированием сосудов во время опухолевой неоваскуляризации. В модели панкреатического канцерогенеза островковых клеток мыши, а также в высокоангиогенных астроцитомах наблюдалась гиперэкспрессия RGS5 в перицитах во время ангиогенного переключения, сопровождающего активное ремоделирование сосудов. Гиперэкспрессия рестриктировалась по сосудистой сети опухоли в сравнении с нормальными островками Лангерганса. Тем не менее, повышение количества RGS5 также происходит во время заживления ран и овуляции (Berger 2005). Экспрессия RGS5 увеличена в RCC (Rae 2000). В другом исследовании ПЦР с обратной транскрипцией показала сильную экспрессию RGS5 во всех исследованных RCC, тогда как в нормальных почках экспрессия была очень слаба или не выявлялась (6,6:1 с ПЦР в реальном времени). Основным местоположением RGS5 в RCC были эндотелиальные клетки опухоли (Furuya 2004). Далее, сообщалось, чтоRGS5 является эндотелиальным клеточным маркером синусоидного типа гепатоклеточной карциномы(Chen, 2004). Аполипопротеин L1 (APOL1) является секретируемым высокоплотным липопротеином, который связывается с аполипопротеином А-I. Аполипопротеин A-I - это относительно широко распространенный плазменный белок и основной апопротеин HDL (липопротеины высокой плотности). Он задействован в формировании большинства холестериловых сложных эфиров в плазме и также способствует оттоку холестерина из клеток. Аполипопротеин L1 может играть роль в липидном обмене и переносе по организму, а также в обратном переносе холестерина из периферических клеток в печень. Плазменный белок является одноцепочечным полипептидом с кажущейся молекулярной массой около 40 кДа (Duchateau, 1997; Duchateau, 2001). APOL1 кДНК была изолирована из активированных эндотелиальных клеток библиотеки кДНК, и было показано, что повышение ее содержания регулируется TNF-, который является сильным провоспалительным цитокином (Monajemi, 2002).KIAA0367 был идентифицирован в рамках проекта "Kazusa cDNA", цель которого - обнаружение неизвестных длинных человеческих транскриптов, кодирующих предполагаемые белки (Ohara, 1997). Хотя функция продукта предполагаемого белка KIAA0367 из 820 аминокислот неизвестна, он содержит на С-конце липидсвязывающий домен CRAL-TRIO, который связывает малые гидрофобные молекулы и присутствует в нескольких факторах обмена нуклеотидов и в белок-взаимодействующем белке 2 (BNIP2) с массой 19 кДа BCL2/аденовируса Е 1 В. BNIP-2 задействован в контроле различных клеточных функций, включая клеточную морфологию, миграцию, эндоцитоз и прогрессию клеточного цикла (Zhou,2005). KIAA0367 расположен на хромосомном участке 9q21. Этот участок описывается как обычная мишень гомозиготной делеции во многих опухолях (Gursky, 2001; Weber, 2001) или как лишенный гетерозиготности (Louhelainen 2000; Tripathi 2003). Растворимая гуанилатциклаза (sGC), гетеродимерный белок, состоящий из - и -субъединиц (1 гем-группа), катализирует конверсию GTP во вторичный мессенджер cGMP и функционирует как главный рецептор для оксида азота и азотосодержащих сосудорасширяющих средств (Zabel 1998). GUCYa3 иb3 гиперэкспрессированы в глиомах человека. Трансфекция антисмысловой GUCY1A3 или GUCY1B3 снижает васкуляризацию и рост опухоли голой мыши. Это может быть связано с тем фактом, что VEGF индуцируется cGMP (Saino 2004). GUCY1A3 способствует миграции опухолевых клеток опухолевой клеточной линии молочной железы мыши (Jadeski 2003). Циклин D1 относится к высококонсервативному семейству циклинов, более точно к подсемейству циклинов D (Xiong, 1991; Lew, 1991). Циклины выполняют функцию регуляторов CDK (циклинзависимые киназы). Различным циклинам свойственна разная степень экспрессии и способы деградации, что вносит вклад в координацию стадий митоза во времени (Deshpande, 2005). Циклин D1 формирует комплекс с и функционирует как регуляторная субъединица CDK4 или CDK6, активность которых требуется-9 017492 для клеточного цикла перехода G1/S. CCND1 формирует с CDK4 и CDK6 голоэнзимный комплекс серин/треонинкиназа, обеспечивающий субстратную специфичность комплекса (Bates 1994). Было показано, что этот белок взаимодействует с белком-супрессором опухоли Rb (Loden 2002), и экспрессия этого гена положительно регулируется Rb (Halaban, 1999). Мутации, амплификация и гиперэкспрессия этого гена, который изменяет прогрессию клеточного цикла, часто наблюдались в различных опухолях и могут благоприятствовать онкогенезу (Hedberg, 1999; Vasef, 1999; Troussard, 2000).CSPG4 (хондроитин сульфат протеогликан) представляет интегральный мембранный хондроитин сульфат протеогликан. Он известен как ранний маркер прогрессии меланомы, присутствующий на клеточной поверхности и вовлеченный в стимуляцию пролиферации, миграции и инвазии опухолевой клетки. CSPG4 сильно экспрессирован в 90% случаев человеческой меланомы. Хотя CSPG4 не является строго опухолеспецифическим, опухолереактивные ответы CD4+ T-клеток у пациентов с меланомой и здоровых индивидов распознают CSPG4693-709 на HLA-DR11-экспрессирующих клетках меланомы при отсутствии аутоиммунности (Erfurt et al., 2007). Экспрессия CSPG4 была также описана, кроме активированных перицитов, в некоторых нормальных тканях, таких как эндотелиальные клетки, хондроциты, гладкомышечные клетки, определенные виды базальных кератиноцитов внутри эпидермиса, в равной степени как и внутри волосяного фолликула(Campoli et al., 2004). Во время ангиогенеза и в ответ на патологии CNS высокоподвижные клетки CSPG4 подвергаются быстрым морфологическим изменениям и мобилизуются в места, где происходит рост и восстановление сосудов. CSPG4 гиперэкспрессированы и в опухолевых клетках, и в перицитах кровяных сосудов злокачественных опухолей головного мозга (Chekenya and Pilkington, 2002). Вживлением клеток из CSPG4 положительной клеточной линии человеческой глиомы в головной мозг иммунодефицитных голых крыс было продемонстрировано, что данные опухоли имеют более высокую капиллярную плотность по сравнению с контрольными пробами; это предполагает, что экспрессией CSPG4 регулируются как функции,так и структура полученной от хозяина сосудистой сети опухоли (Brekke et al., 2006). В эксперименте с ксенотрансплантатом по вживлению материала мультиформной глиобластомы (GBM), полученного биопсией, в голых крыс было установлено, что CSPG4 в основном ассоциируется с кровеносными сосудами как перицитов, так и компонентов основания мембраны сосудистой сети опухоли, и экспрессия ассоциирована с областями высокой клеточной пролиферации (Chekenya et al., 2002a). Кроме того, экспрессияCSPG4 дифференциально экспрессирован в человеческих глиомах с более высокой экспрессией в глиомах высокой по сравнению с глиомами низкой степени злокачественности (Chekenya et al., 1999). Высокая экспрессия CSPG4 соотносится с мультилекарственной резистентностью, опосредованной возросшей активацией сигнальных процессов с участием 31 интегрин/PI3K и их мишеней по ходу транскрипции, способствуя выживанию клеток (Chekenya et al., 2008).FABP7: белки, связывающие жирную кислоту (FABP), являются цитозольными белками 14-15 кДа,которые, как предполагается, задействованы в поглощении, транспортировке и нацеливании жирной кислоты (ЖК). Как считается, они увеличивают растворимость ЖК в цитоплазме во время транспортировки ЖК между мембранными компартментами и доставляют ЖК к их ядерным мишеням (Glatz et al., 2002).FABP могут модулировать концентрацию ЖК и таким образом оказывать влияние на различные клеточные функции, такие как ферментативная активность, экспрессия генов, клеточный рост и дифференциация (Glatz and Storch, 2001).FABP7 мРНК экспрессирован в тканях нейроэпителиального происхождения в равной степени, как и в злокачественных глиомах (степени III и IV по ВОЗ). Ген был картирован на хромосомной полосе 6q22-23 - регионе, который также содержит протоонкоген с-myc и часто подвергается потере гетерозиготности при злокачественной глиоме. Анализ клеточных линий злокачественной глиомы показал, чтоFABP7 часто ко-экспрессирован с глиальным фибриллярным кислым белком (GFAP); предполагается,что клетка, в которой возникает злокачественная глиома, может быть астроцитной клеткойпредшественником, которая обладает потенциалом для экспрессии белков как в нормальных условиях,так и в результате образования опухоли (Godbout et al., 1998). Белок FABP7 проявляет от умеренной до сильной ядерной и цитоплазмической экспрессии в мультиформной глиобластоме (GBM). Трансфицированные FABP7 клетки глиомы проявляют в 5 раз большую миграционную активность, чем контрольные клетки. Таким образом, более короткая общая выживаемость, ассоциированная с гиперэкспрессиейFABP7, в особенности в мультиформной глиобластоме (GBM), может быть обусловлена повышенной миграцией и инвазией опухолевых клеток в окружающую мозговую паренхиму (Liang et al., 2005). Дальнейший анализ распределения FABP7 в астроцитомах указывает на повышенные уровни FABP7 в регионах инфильтрации опухолей, предполагая что FABP7 играет важную роль в направлении инфильтрации злокачественных клеток в смежные мозговые ткани (Mita et al., 2007). FABP7 демонстрирует вариабельные уровни экспрессии и субклеточную локализацию в глиальных тканях и всех степенях астроцитомы. Тем не менее, в особенности ядерная локализация FABP7, по-видимому, ассоциирована с инфильтративным фенотипом клеток глиомы и каскадами реакций EGFR, так как его ядерная транслокация была об- 10017492 наружена после активации EGFR и ассоциируется с плохим прогнозом в случае EGFR-положительной мультиформной глиобластомы (GBM). Более того, ядерная иммунореактивность FABP7 не может быть зафиксирована в астроцитоме I степени (Liang et al., 2006; Kaloshi et al., 2007). Нейролигин 4, экспрессируемый сцепленным с Х-хромосомой геном, является членом семейства белков клеточной адгезии, который, по-видимому, выполняет определенную роль при созревании и работе нейронных синапсов. Члены семейства нейролигинов обладают сходной структурной организацией: содержат N-концевой сигнальный пептид, эстеразоподобный домен с двумя местами альтернативного сплайсинга, короткий линкерный регион с низким сходством последовательностей перед трансмембранным доменом и короткую цитозольную часть с высококонсервативной С-концевой последовательностью. Относительно самые высокие уровни содержания нейролигина 4 мРНК были обнаружены в сердце. Более низкая экспрессия была установлена в печени, скелетных мышцах и поджелудочной железе, тогда как в головном мозге, плаценте, легких и почке нейролигин 4 мРНК было трудно обнаружить (Bolliger etal., 2001). Мутации Х-сцепленного гена NLGN4 являются потенциальной причиной спектра нарушений аутистического характера, и о мутациях сообщалось у нескольких пациентов с аутизмом, синдромом Аспергера и умственной отсталостью (Jamain et al., 2003; Laumonnier et al., 2004; Lawson-Yuen et al., 2008). Были описаны немногие случаи ассоциации NLGN4X с раком: при желудочно-кишечных стромальных опухолях гиперэкспрессия NLGN4X была установлена в детском и юношеском возрасте в отличие от случаев со взрослыми (Prakash et al., 2005). Тенасцин С: внеклеточная матрица, окружающая опухолевые клетки, отличается от внеклеточной матрицы нормальных тканей. Тенасцин-С (TNC) - белок внеклеточного матрикса с сильным повышением количества в процессах, которые тесно ассоциированы с повышенной миграционной активностью,такой как эмбриональное развитие (Bartsch et al., 1992), заживление ран (Mackie et al., 1988) и неопластические процессы (Chiquet-Ehrismann, 1993; Chiquet-Ehrismann and Chiquet, 2003). Кроме того, TNC гиперэкспрессирован в опухолевых сосудах, которые имеют высокий пролиферационный индекс, указывающий на то, что TNC задействован в неопластическом ангиогенезе (Kim et al., 2000). В нормальном человеческом головном мозге экспрессия TNC была установлена только в редких случаях, тогда как в злокачественных глиомах он экспрессирован в высокой степени (Bourdon et al., 1983). Экспрессия TNC может быть вызвана гипоксией (Lal et al., 2001), TGF-бета 1, обеспечивая механизм для инвазии глиом высокой степени злокачественности в здоровую паренхиму (Hau et al., 2006), или гастрином, который существенно модулирует миграцию человеческих GBM-клеток (Kucharczak et al., 2001). TNC снижает количество тропомиозина-1 и таким образом дестабилизирует стрессовые волокна актина. Это вызывает снижение количества ингибитора сигнального Wnt-каскада, Dickkopf. Так как снижение экспрессии тропомиозина 1 и возрастание сигнала Wnt-каскада тесно связаны с трансформацией и онкогенезом, то TNC специфически модулирует данные сигнальные каскады реакций, усиливая пролиферацию клеток глиомы (Ruiz etal., 2004). Периваскулярное окрашивание TNC вокруг кровеносных сосудов, снабжающих опухоль, наблюдалось в тканях мультиформной глиобластомы (GBM), и менее часто в глиомах II и III степени по ВОЗ,указывая на то, что интенсивность окрашивания TNC соотносится со степенью опухоли, причем наиболее сильное окрашивание указывает на плохой прогноз (Herold-Mende et al., 2002). TNC также вносит свой вклад в генерацию ниши стволовых клеток внутри субвентрикулярной зоны (SVZ), принимая участие в управлении сигналами фактора роста для ускорения развития нервных стволовых клеток. Доминирующим эффектом TNC на клетках SVZ-зоны является регуляция процессов, связанных с развитием(Garcion et al., 2004). TNC является сильнейшим инициатором направленной миграции нервных стволовых клеток человека (NSC). Вырабатываемый опухолью ЕСМ таким образом обеспечивает терпимое окружение для тропизма NSC к рассеянным опухолевым клеткам (Ziu et al., 2006).NRCAM (адгезивная молекула нервных клеток) - это нейронная адгезивная молекула трансмембранных клеток со множественными иммуноглобулинподобными типа С 2 и фибронектиновыми доменами типа III. Она задействована в управлении, разрастании и фасцикуляции нейрональных клеток (Grumetet al., 1991; Morales et al., 1993; Stoeckli and Landmesser, 1995; Perrin et al., 2001; Sakurai et al., 2001) при формировании гомофильных, в равной степени как и гетерофильных взаимодействий с IgCAM (VolkmerBennett, 1994) представлена в повышенном количестве в образующих трубки эндотелиальных клетках,предполагается ее возможная роль в образовании трубок и ангиогенезе (Aitkenhead et al., 2002).NRCAM является геном-мишенью -катенина и комплекса плакоглобин-LEF/TCF, который содействует онкогенезу (Conacci-Sorrell et al., 2002). Эктодомен NRCAM может быть сброшен с клеточной поверхности металлопротеазоподобными активностями. Этот сброшенный домен способен активировать разнообразные сигнальные пути, он повышает клеточную подвижность и ведет к онкогенезу у мышейNRCAM присутствует в повышенном количестве в анапластичных астроцитомах и опухолевых тканях мультиформной глиобластомы (GBM) по сравнению с нормальным головным мозгом, и повы- 11017492 шенные уровни соотносятся с инвазивным поведением (Sehgal et al., 1998). Антисмысловая РНК, в отличие от NRCAM, снижает онкогенную способность GBM-клеток человека (Sehgal et al., 1999).IGF2BP3 является членом белкового семейства инсулиноподобных факторов роста II, связывающих мРНК, вовлеченным в локализацию, оборот и трансляционный контроль мРНК. Этот белок содержит несколько КН-доменов (К-гомологичных), которые важны в связывании РНК и о которых известно, что они вовлечены в синтез и метаболизм РНК. Экспрессия проявляется, главным образом, во время эмбрионального развития и была описана для некоторых опухолей. Таким образом, IGF2BP3 рассматривается как онкофетальный белок (Liao et al., 2005). Высокий уровень транскрипции IGF2BP3 в многочисленных раковых тканях по сравнению с контрольными тканями указывает на то, что белок IGF2BP3 может играть функциональную роль в пролиферации трансформированных клеток. В пользу данной гипотезы говорит и то, что единственной незлокачественной тканью человека, экспрессирующей транскриптIGF2BP3, является человеческая плацента, ткань, характеризующаяся клеточным ростом и пролиферацией (Mueller-Pillasch et al., 1997). Например, IGF2BP3 экспрессирован в образце светлоклеточной почечно-клеточной карциномы(RCC), и его экспрессия ассоциирована с распространенной стадией и степенью первичных опухолей. Кроме того, положительная экспрессия IGF2BP3 ассоциирована с повышенным в 5-10 раз риском отдаленных метастазов и с повышенным на 42-50% риском летального исхода от (Hoffmann et al., 2008; JiangIGF2BP3 также высокоэкспрессирован в карциномах поджелудочной железы. В 2 исследованиях 90% проб тканей опухолей поджелудочной железы проявляли экспрессию IGF2BP3 после иммуноокрашивания, в то время как не неопластические ткани поджелудочной железы были негативными дляIGF2BP3. Кроме того, экспрессия прогрессивно возрастала вместе со стадией опухоли (Yantiss et al.,2005; Yantiss et al., 2008). Экспрессия IGF2BP3 была также обнаружена в существенно повышенном состоянии в уротелиальных опухолях высокой степени, в то время как он обычно не экспрессирован в доброкачественном уротелии или уротелиальных опухолях низкой степени. Более того, пациенты с IGF2 ВР 3-положительными опухолями имеют намного более низкий процент выживаемости без прогрессирования и выживаемости без болезни, чем те, что имеют IGF2BP3-негативные опухоли (Li et al., 2008; Sitnikova et al., 2008; Zhenget al., 2008). Бревикан (BCAN) является специфическим для головного мозга членом лектинового семейства хондроитинсульфатпротеогликанов. Сообщалось о двух изоформах BCAN: изоформе с полной длиной цепи, секретируемой во внеклеточный матрикс, и более короткой изоформе с последовательностью, которая предсказывает наличие гликофосфатидилинозитольного (GPI) "якоря". Секретируемая изоформа высоко экспрессирована от рождения в течение первых 8 лет жизни, а к 20 годам ее активность снижается до низких уровней, которые сохраняются в нормальном взрослом корковом веществе. Изоформа GPI экспрессирована на постоянно низких уровнях во время развития (Gary et al., 2000). BCAN принадлежит к семейству протеогликанов,описываемых обычно как барьерные молекулы, которые препятствуют клеточной и нейритной подвижности в нервной системе взрослых (Viapiano and Matthews, 2006). In vivo, BCAN экспрессирован вокруг границ рострального миграционного потока (Jaworski and Fager, 2000) и является главным компонентом в повышенном количестве глиального рубца после травмы нервной системы (Jaworski et al., 1999).BCAN имеет разительно высокое повышение количества в глиомах, где может быть установлено приблизительно 7-кратное повышение экспрессии по сравнению с нормальными уровнями. BCAN мРНК не был обнаружен в пробах коркового вещества взрослых людей у индивидов, которые умерли без нейрологических осложнений. Как яркое отличие, BCAN мРНК был обнаружен в каждой из 27 хирургических проб человеческой глиомы, таким образом, вызывая предположение, что BCAN может быть единственным селективным маркером в глиоме (Jaworski et al., 1996). Белковая тирозинфосфатаза, рецепторного типа, Zeta1 (PTPRZ1, PTP-) - PTPRZ1 является членом семейства белковых тирозинфосфатаз рецепторного типа и кодирует проходящий через мембрану только один раз мембранный белок I типа с двумя цитоплазматическими тирозинбелковыми фосфатазными доменами, одним альфа-углеродным ангидразным доменом и фибронектиновым доменом III типа. Экспрессия этого гена индуцирована в раковых клетках желудка (Wu et al., 2006), при раке груди (PerezPinera et al., 2007), при повторной миелинизации олигодендроцитов при поражении множественным склерозом (Harroch et al., 2002) и в эмбриональных клетках почек человека в условиях гипоксии (Wang etal., 2005). Как белок, так и транскрипт гиперэкспрессированы в клетках глиобластомы, способствуя их гаптотактической миграции (Lu et al., 2005) и геномной амплификации ДНК в глиобластоме (Mulholland et al.,2006). Хитиназо-3-подобная 2 (CHI3L2) - CHI3L2 была первоначально идентифицирована в хондроцитах и содержится в повышенном количестве, например при остеоартрите (Steck et al., 2002). Хотя этот белок еще недостаточно хорошо охарактеризован, он, скорее всего, секретируется во внеклеточное пространство. Его часто описывали как антиген-мишень при ревматическом артрите. Экспериментальная индукция- 12017492 антиангиогенеза при трансфекции siPHK (VEGF-A) человеческой глиомной клеточной линии вызвала повышение количества CHI3L2. Сурвивин (BIRC5)-экспрессия BIRC5 (сурвивин), член семейства белков-ингибиторов апоптоза(IAP), содержится в повышенном количестве в фетальных тканях и различных видах рака человека. Предполагается, что сурвивин способен к регуляции как клеточной пролиферации, так и отмирания апоптотических клеток. Предпочтительно в глиобластоме обнаруживаются очень высокие уровни экспрессии сурвивина (Angileri et al., 2008). Предполагается, что гиперэкспрессия сурвивина в глиомах головного мозга может играть важную роль в злокачественной пролиферации, антиапоптозе и ангиогенезе(Zhen et al., 2005; Liu et al., 2006). Предпочтительно в случае глиобластомы, но также и при других опухолевых формах, экспрессия сурвивина была значительно ассоциирована со степенью злокачественности(с наибольшей экспрессией сурвивина в глиобластоме) и более короткими общими сроками выживаемости по сравнению с пациентами, у которых были сурвивин-негативные опухоли (Kajiwara et al., 2003;Saito et al., 2007; Uematsu et al., 2005; Mellai et al., 2008; Grunda et al., 2006; Xie et al., 2006; Sasaki et al.,2002; Chakravarti et al., 2002). Белки семейства матричной металлопротеиназы (ММР) задействованы в разрушении внеклеточной матрицы при нормальных физиологических процессах, таких как эмбриональное развитие, размножение и ремоделирование тканей в равной степени, как и во время заболеваний, таких как артрит и метастазы(Mott, 2004). Матричная металлопротеиназа 7 (ММР 7) секретируется как неактивный белокпредшественник с массой 29,6 кДа, который активируется при расщеплении внеклеточными протеиназами. Активный фермент имеет молекулярную массу 19,1 кДа и связывает по два иона цинка и два иона кальция на субъединицу (Miyazaki, 1990; Browner, 1995). ММР 7 расщепляет желатин, фибронектин и казеин (Miyazaki, 1990; Quantin, 1989) и отличается от большинства членов семейства ММР отсутствием консервативного С-терминального белкового домена (Gaire, 1994). ММР 7 часто гиперэкспрессирован в злокачественной ткани (Lin 2004; Bramhall 1997; Denys, 2004), и предполагается, что он способствует инвазии опухолевых клеток in vivo (Wang, 2005). Эти белки могут быть мишенью опухолеспецифического иммунного ответа при многих видах рака. Пептид корового антигена вируса гепатита В, HBV-001, получен не из эндогенного опухолеассоциированного антигена человека, а из корового антигена вируса гепатита В. Во-первых, это обеспечивает количественное сравнение силы Т-клеточных ответов, индуцированных опухолеассоциированными пептидами (TUMAP), использованными в фармацевтических композициях настоящего изобретения, и, следовательно, обеспечивает изучение их способности вызывать противоопухолевые ответы. Во-вторых, он функционирует как важный положительный контроль в случае недостатка каких-либо Т-клеточных ответов у пациента. И, в-третьих, он также обеспечивает проведение мониторинга иммунокомпетентности пациента. Инфицирование вирусом гепатита В (HBV) является одной из самых распространенных причин заболевания печени, поражающим примерно 350 млн человек по всему миру (Rehermann, 2005). В связи с простотой горизонтального и вертикального переноса и наличием потенциала для хронического заболевания это может привести к циррозу печени и гепатоклеточной карциноме, поэтому HBV наносит сильный удар по системам здравоохранения многих стран мира. Геном HBV (Previsani, 2002) включает частично двухцепочечную кольцевую ДНК. В вириснах HBV она окружена коровым белком НВс и другими белками, формируя нуклеокапсид, который защищен внешней оболочкой, содержащей липиды и поверхностные белки семейства HBs (называемые также оболочечными белками). Антигенные детерминанты, ассоциированные с НВс и HBs, обозначаются как HBcAg и HBsAg, соответственно. Эти антигены ассоциированы с серологической реакцией, т.е. ответами антител, обнаруженными в крови пациента, и находятся среди клинически наиболее применимых систем антиген-антитело для диагноза инфекцииHBV. HBc будет представлять новый чужеродный антиген у всех индивидов без предшествующей истории инфекции HBV. Так как для этого антигена хорошо известны иммуногенные пептиды (Bertoletti,1993; Livingston, 1997), то в рамках исследований IMA из HBcAg в качестве антигена для положительного контроля был выбран один пептид из 10 аминокислот. Индукция пептид-специфических ЦТЛ НВс будет затем использоваться как маркер иммунокомпетентности пациента и успешности вакцинации. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть использованы для парентерального введения, такого как подкожное, внутрикожное, внутрибрюшинное, внутривенное, внутримышечное или оральное введение. Для этого пептиды растворяются или суспендируются в фармацевтически приемлемом, предпочтительно водном носителе. Помимо этого, композиция может содержать эксципиенты, такие как антиоксиданты, консерванты, буферы, связующие агенты, разрушающие агенты,разбавители и вкусоароматические добавки. Пептиды могут быть также введены вместе с иммуностимулирующими веществами, такими как цитокины. Пространный список эксципиентов, которые могут быть использованы в такой композиции, может быть взят, например, из A. Kibbe, Handbook of PharmaceuticalExcipients, 3. Ed., 2000, изд. American Pharmaceutical Association and pharmaceutical press. Композиции по изобретению могут использоваться для предупреждения, профилактики и/или лечения аденоматозных или раковых заболеваний. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут вводиться пациенту, страдающему- 13017492 аденоматозным или раковым заболеванием, ассоциированным с соответствующим пептидом или антигеном с SEQ ID NO: 1-10, или пациенту, страдающему от рака головного мозга, в частности глиомы, в особенности раковым заболеванием глиобластомы, которое ассоциировано с соответствующим пептидом или антигеном с SEQ ID NO: 11-22 или 11-23. Пептиды фармацевтической композиции способны вызывать опосредованный Т-клетками иммунный ответ у пациента. Как отмечалось выше, в случае почечноклеточного рака фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно включает пептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ IDNO: 1 и/или SEQ ID NO: 2, и дополнительно включает по меньшей мере один дополнительный опухолеассоциированный пептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ IDNO: 3-10. В случае рака головного мозга, в частности глиомы, в особенности глиобластомы, фармацевтическая композиция предпочтительно включает последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12 и/или SEQ ID NO: 13, и дополнительно включает по меньшей мере один дополнительный опухолеассоциированный пептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ IDNO: 11 и 14-22 и/или 23. Предпочтительно, чтобы пептиды, которые присутствуют в фармацевтических композициях настоящего изобретения, обладали общей длиной от 9 до 100, предпочтительно от 9 до 30 и, особенно предпочтительно, от 9 до 16 аминокислот. Кроме того, по меньшей мере один пептид в соответствии с любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-23 может включать непептидные связи. Предпочтительная фармацевтическая композиция по изобретению (предпочтительно для вакцины против почечно-клеточного рака) включает пептид, состоящий из аминокислотной последовательности,представленной в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2, и в других воплощениях далее включает по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ IDNO: 3-11. Еще одна предпочтительная фармацевтическая композиция по изобретению (вакцина против рака головного мозга, в частности глиомы, предпочтительно глиобластомы) включает пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12 и/или SEQ ID NO: 13, и в других воплощениях далее включает по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11-22 и/или 23. Пептид может быть также меченым или может быть гибридным белком или гибридной молекулой. Пептиды, последовательность которых дана в настоящем изобретении, как ожидается, стимулируютCD8+ ЦТЛ. Тем не менее, стимуляция более эффективна в присутствии помощи, производимой CD4+ Тклетками. Таким образом, рекомбинантные партнеры или части гибридной молекулы адекватно обеспечивают эпитопы, которые стимулируют CD4+ T-клетки. Стимулирующие эпитопы CD4+ хорошо известны из уровня техники и включают те, что были выявлены в столбнячном токсине. Дополнительно в предпочтительном воплощении пептид является рекомбинантным белком, в частности включающим Nконцевые аминокислоты антиген-ассоциированной инвариантной цепи (Ii) HLA-DR. В одном воплощении пептид по изобретению является укороченным белком человека или гибридным белком белкового фрагмента и другого сегмента полипептида, при условии, что человеческий сегмент включает одну или более аминокислотных последовательностей изобретения. Пептиды, полезные в фармацевтической композиции, могут быть в основном чистыми или комбинированными с иммуностимулирующим адъювантом или использоваться в комбинации с иммуностимулирующими цитокинами или могут вводиться с подходящей системой доставки, например, липосомами,микро-, наночастицами, мицеллой, эмульсиями и гелями. При вакцинации пептидом вообще необходим адъювант, и такой как ГМ-КСФ является предпочтительным адъювантом (человеческий ГМ-КСФ имеется в продаже под названием Sargramostim, Leukine, производитель Berlex сейчас Bayer HealthcarePharmaceuticals). Другие подходящие адъюванты включают стимулон Aquila's QS21 (Aquila Biotech,Worcester, MA, США), который получают из сапонина, микобактериальные экстракты и синтетические имитации бактериальных клеточных стенок и собственно адъюванты, такие как Ribi's Detox. Также может быть использован Quil А, другой полученный из сапонина адъювант (Superfos, Дания). Другие адъюванты, такие как адъювант Фрейнда, могут также быть полезны. Полезно также может быть, если пептид конъюгировать с подходящим носителем, таким как гемоцианин лимфы улитки (KLH) или маннан (см.WO 95/18145 и Longenecker et al. (1993) Ann. NY Acad. Sci. 690, 276-291). Так как адъювант определяется как субстанция, усиливающая иммунный ответ на антиген (MedlinePlus Medical Dictionary, NIH), то могут использоваться и другие субстанции с этой же функцией, включая, но не ограничиваясь, агонистыToll-подобного рецептора (TLR агонисты), предпочтительно субстанции, агонистически взаимодействующие с TLR 3, 7, 8 и 9, такие как протамин-стабилизированная РНК, CpG-олигонуклеотиды, CpRолигонуклеотиды, бактериальная ДНК, имидазохинолины и т.д. Другие вещества, известные из уровня техники, которые подходят для усиления иммунного ответа,включают, но без ограничения, ингибиторы индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS), аргиназы(ARG1), индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), рецептора васкулярного эндотелиального фактора роста 1(VEGFR-1), васкулярного эндотелиального фактора роста (VEGF), циклооксигеназы-2 (СОХ-2), рецепто- 14017492 ра I TGF- (TGFRI). Такими ингибиторами могут быть, например, моноклональные антитела к молекулам или малым молекулам. О малых молекулах и моноклональных антителах из уровня техники известно, что они имеют ингибиторную функцию по отношению к факторам, указанным выше, и, таким образом, усиливают иммунный ответ; это, например, 1-МТ, NCX-4016, рофекоксиб, целебрекс, ВЕС,АВН, nor-NOHA, SB-505124, SD-208, LY580276, AMD3100, акситиниб, бевацизумаб, JSI-124, СРА-7,XL-999, ZD2171, пазопаниб, СР-547632 и VEGF Trap. И дополнительно, субстанции, снижающие число регуляторных T-клеток (CD 4+, CD25+, FoxP3+),подходят в качестве адъювантов. Они включают, например, но без ограничения, циклофосфамид (Цитоксан), ONTAK (денилейкин дифтитокс), Сунитиниб, анти-CTLA-4 (MDX-010, СР-675206), анти-CD25,анти-CCL22 и анти-GITR. Предпочтительные количества пептидов в фармацевтических композициях настоящего изобретения могут варьировать от около 0,1 до 100 мг, предпочтительно от около 0,1 до 1 мг и наиболее предпочтительно от около 300 мкг до 800 мкг на 500 мкл раствора. Термин "около" подразумевает +/-10% заданного объема, если не указано другое. Специалист данной области будет способен установить фактическое количество пептида для использования, исходя из нескольких факторов, таких как, например, иммунный статус отдельного пациента и/или количество TUMAP (опухолеассоциированный пептид), который презентируется в конкретном виде рака. Фармацевтические композиции настоящего изобретения обеспечивают композицию с чрезвычайно улучшенной растворимостью и свойствами смачиваемости лиофилизата по сравнению с ранее известными композициями. Это было достигнуто при использовании специальной композиции эксципиентов. Таким образом, были разработаны фармацевтические композиции настоящего изобретения, включающие пептиды с SEQ ID NO: 1-10 или SEQ ID NO: 1-11 и их варианты, которые показывают превосходную стабильность при хранении при (-20 С, +5 С, +25 С) и могут быть легко растворены. Под термином "стабильность при хранении" понимается, что процентная доля побочных продуктов не поднимается выше 5% в течение двух лет. Кроме того, термин "стабильность" означает, что специфические свойства, такие как растворимость, оптическая прозрачность раствора и число частиц в растворе,не меняются ощутимо в течение данного отрезка времени. Термин "легко растворимые" означает, что лиофилизат может быть полностью растворен посредством использования буфера или других эксципиентов за несколько секунд до двух минут без применения ультразвукового гомогенизатора. Кроме того, композиция может быть легко введена пациенту в целях лечения посредством инъекции i.d. и менее предпочтительно s.c. Значение рН полученного раствора должно находиться между рН 2,7 и pH 9. В другом воплощении фармацевтическая композиция настоящего изобретения может включать сахара, сахарные спирты, аминокислоты, такие как глицин, аргинин, глютаминовую кислоту и другие в качестве образователей структуры. Сахара могут быть моно-, ди- или трисахаридами. Эти сахара могут быть использованы в отдельности, в равной степени как и в комбинации с сахарными спиртами. Примеры cахаров включают глюкозу, маннозу, галактозу, фруктозу или сорбозу в качестве моносахаридов; сахарозу, лактозу, мальтозу или трегалозу в качестве дисахаридов и рафинозу в качестве трисахарида. Сахарный спирт может быть, например, маннитозой. Предпочтительными ингредиентами являются сахароза, лактоза, мальтоза, трегалоза, маннит и/или сорбит и более предпочтительно маннитол. Кроме того, фармацевтические композиции настоящего изобретения могут включать хорошо переносимые физиологические эксципиенты (см. "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 5-е изд., авторыRaymond Rowe, Paul Sheskey and Sian Owen, Pharmaceutical Press (2006, такие как антиоксиданты, подобные аскорбиновой кислоте или глютатиону; консерванты, такие как фенол, м-крезол, метил- или пропилпарабен, хлорбутанол, тиомерсал или бензалконийхлорид; стабилизаторы, структуроформирующие средства, такие как сахароза, лактоза, мальтоза, трегалоза, миннитоза, маннит и/или сорбит, маннит и/или лактоза и растворители, такие как полиэтиленгликоли (PEG), например, PEG 3000, 3350, 4000 или 6000; или циклодекстрины, например, гидроксипропилциклодекстрин, сульфобутилэтил-циклодекстрин или -циклодекстрин; или декстраны или полоксамеры, например, полоксамер 407, полоксамер 188 или Твин 20, Твин 80. В предпочтительном воплощении фармацевтические композиции настоящего изобретения включают один или более хорошо переносимых эксципиентов, выбранных из группы, состоящей из антиоксидантов, структуроформирующих средств и стабилизаторов. Настоящее изобретение относится к обнаружению, что композиции, включающие по меньшей мере два комплекта пептидов соответствующих SEQ ID NO: 1-10 или SEQ ID NO: 1-11, маннитол и полоксамер 188 в специфическом соотношении, ведут к композициям, которые проявляют значительно повышенную стабильность и могут быть растворены без использования ультразвуковой обработки. Кроме того, для растворения требуется лишь несколько секунд. При визуальном контроле после восстановления 4,2% раствором бикарбоната натрия должен наблюдаться раствор от прозрачного до опалесцирующего(для лиофилизата). Данные характеристики растворения фармацевтических композиций настоящего изобретения воспроизводятся даже после хранения лекарственного продукта при -20 С, +5 С и +25 С в те- 15017492 чение 2 лет. Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, включающим по меньшей мере четыре комплекта пептидов в соответствующих SEQ ID NO: 11-22, SEQ ID NO: 11-23, SEQ ID NO: 12-22 или SEQ ID NO: 12-23, причем маннитол и полоксамер 188 в специфическом соотношении приводят к тому, что композиции могут быть легко растворены. При визуальном контроле после восстановления 4,2% раствором бикарбоната натрия должен наблюдаться раствор от прозрачного до опалесцирующего(для лиофилизата). Отдельные пептиды в описанном составе обладают стабильностью в течение по меньшей мере 3 месяцев после хранения при -20 С, +5 С и +25 С. В предпочтительном воплощении фармацевтические композиции настоящего изобретения включают специфическое соотношение пептидов/маннитола/Твин 80 (по весу), включительно и в диапазоне от 1:2:1,5 до 1:8:2,2. См. приводимую ниже диаграмму для других предпочтительных соотношений, которые включены в настоящее изобретение. Особенно предпочтительным соотношением является 1:5:2. Другим особенно предпочтительным соотношением является 1:8:2. В другом предпочтительном воплощении фармацевтические композиции настоящего изобретения включают специфическое соотношение пептидов/маннитола/полоксамера 188 (по весу), включительно и в диапазоне от 1:5:1,5 до 1:8:2,2. См. приводимую ниже диаграмму для других предпочтительных соотношений, которые включены в настоящее изобретение. Предпочтительное соотношение: 1:5:1. Другое особенно предпочтительное соотношение пептидов/маннитола/полоксамера 188 по весу составляет 1:8:2. Более предпочтительная композиция включает смесь пептидов/маннитола/полоксамера 188 в соотношении 1:5:2 по весу (см. пример 2). Другое соотношение включает пептиды/маннитол/полоксамер 188 в соотношении от 1:0:2 до 1:2:2,2 по весу. Другие воплощения настоящего изобретения включают следующие соотношения по весу. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть лиофилизованы. Полученный лиофилизат может быть восстановлен в водную композицию при добавлении водного растворителя. Предпочтительно, чтобы водная композиция могла напрямую вводиться парентерально пациенту. Поэтому дальнейшим воплощением настоящего изобретения является водная фармацевтическая композиция раскрытых выше композиций, получаемая при восстановлении лиофилизата, описанного выше, водным растворителем. Приемлемым диапазоном значений рН является рН 2-12 для внутривенного и внутримышечного введения, но для подкожного введения диапазон снижается до 2,7-9,0, так как степень растворения invivo понижена, приводя к увеличению потенциала для возникновения раздражения на месте инъекции.Strickley Robert G., Pharm. Res., 21, NO: 2, 201-230 (2004). Предпочтительно водная фармацевтическая композиция по изобретению имеет pH-значение, составляющее 7-9, еще более предпочтительно pH-значение от 8 до 9 и еще более предпочтительно pHзначение от 8,3 до 8,7. Фармацевтические композиции настоящего изобретения хорошо переносятся физиологически, могут быть легко произведены, точно дозированы и проявляют превосходную стабильность при хранении относительно концентрации, продуктов разложения и эксципиентов в течение времени хранения. Препараты могут сохранять стабильность в течение 2 лет в замороженном состоянии при -20 С, в охлажденном виде при (+2-8 С) или даже при комнатной температуре (+25 С), при 60% относительной влажности. Фармацевтические композиции настоящего изобретения предпочтительно являются стерильными и приготавливаются для введения in vivo. Настоящее изобретение обеспечивает также способ повышения иммунных ответов у субъекта; указанный способ включает введение субъекту по необходимости фармацевтической композиции настоящего изобретения, причем указанные пептиды, варианты или соли вводятся в эффективном количестве,предпочтительно количестве, эффективном для повышения указанного иммунного ответа. Изобретение дополнительно обеспечивает применение фармацевтической композиции по изобретению в лекарственном средстве для введения субъекту в целях повышения иммунного ответа против рака. Также включается применение фармацевтической композиции настоящего изобретения для лечения рака, предпочтительно почечного рака, и применение для изготовления лекарственного средства для введения пациенту в целях повышения иммунного ответа против рака и, следовательно, для лечения рака. Пептиды, использованные в фармацевтической композиции, предпочтительно являются чистыми или в основном чистыми и, желательно, в основном гомогенными (т.е. свободными от загрязняющих пептидов или белков и т.д.). "В основном чистый" означает пептидный препарат с очисткой ВЭЖХ, составляющей по меньшей мере 90% и предпочтительно по меньшей мере 95%. "В основном гомогенный" препарат означает пептидный препарат, включающий по меньшей мере 99% пептида, исходя из общего веса пептида в препарате. Настоящее изобретение, кроме того, включает набор, содержащий:(a) контейнер, который содержит фармацевтическую композицию, как описано выше, в виде раствора или в лиофилизованной форме;(b) необязательно - второй контейнер, содержащий разбавитель или восстанавливающий раствор для лиофилизованной композиции; и(c) необязательно - инструкции по (i) использованию раствора или (ii) восстановленного раствора и/или по использованию лиофилизованной композиции.- 17017492 Кроме того, набор может включать один или более (i) буфер, (ii) разбавитель, (iii) фильтр, (iv) иглу или (v) шприц. Контейнер является предпочтительно флаконом, ампулой, шприцем или пробиркой; и он также может быть контейнером многоразового использования. Фармацевтическая композиция предпочтительно лиофилизована. Наборы настоящего изобретения предпочтительно включает лиофилизованную композицию настоящего изобретения в подходящем контейнере и инструкции для ее восстановления и/или по ее использованию. Подходящие контейнеры включают, например, флаконы, ампулы (например, двухкамерные ампулы), шприцы (такие как двухкамерные шприцы) и пробирки. Контейнер может быть сделан из разнообразных материалов, таких как стекло или пластик. Предпочтительно набор и/или контейнер содержат(ит) инструкции, или нанесены на контейнер, которые дают указания для восстановления и/или использования. Например, на этикетке может быть указано, что лиофилизованная композиция должна восстанавливаться до пептидных концентраций, как те, что описаны выше. На этикетке дополнительно может быть указано, что композиция применяется или предназначается для подкожного введения. Контейнер с композицией может быть ампулой многоразового использования, которая обеспечивает повторное введение (например, от 2-6 введений) восстановленной композиции. Набор может включать дополнительно второй контейнер, включающий подходящий разбавитель (например, раствор бикарбоната натрия). При смешивании разбавителя и лиофилизованной композиции окончательная концентрация пептида в восстановленной композиции составляет по меньшей мере 0,15 мг/мл/пептид (=75 мкг) и предпочтительно не более чем 3 мг/мл/пептид (=1500 мкг). Набор может дополнительно включать другие материалы, желательные и с коммерческой, и с точки зрения пользователя, включая другие буферы, разбавители,фильтры, иглы, шприцы и упаковочные вкладыши с инструкциями по применению. Набор настоящего изобретения может включать один контейнер, который содержит фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением с или без других компонентов (например,других соединений или фармацевтических композиций этих других соединений) или может иметь отдельные контейнеры для каждого компонента. Набор по изобретению предпочтительно включает композицию по изобретению, укомплектованную для применения в комбинации для совместного введения второго соединения (такого как адъюванты(например, ГМ-КСФ, химиотерапевтическое средство, натуральный продукт, гормон или антагонист,средство против ангиогенеза или ингибитор; апоптоз-индуцирующее средство или хелатор или их фармацевтическую композицию. Компоненты набора до введения пациенту могут предварительно быть собраны в комплекс, или же каждый компонент может быть в отдельном контейнере. Компоненты набора могут быть одним или несколькими жидкостными растворами, предпочтительно водным раствором, более предпочтительно стерильным водным раствором. Компоненты набора могут также быть твердой формой, которые могут быть превращены в жидкости при добавлении подходящих растворителей, которые предпочтительно предоставляются в другом контейнере. Контейнер для терапевтического набора может быть ампулой, пробиркой, колбой, флаконом,шприцем или любыми другими средствами, заключающими в себе твердое вещество или жидкость. Обычно, если имеются более одного компонента, набор содержит вторую ампулу или другой контейнер,который обеспечивает отдельную дозировку. Набор может также содержать другой контейнер для фармацевтически приемлемой жидкости. Терапевтический набор будет предпочтительно содержать приспособление (например, одну или более игл, шприцы, пипетки для глаз, пипетки и т.д.), которое обеспечивает введение веществ по изобретению, являющихся компонентами настоящего набора. Настоящая композиция подходит для введения пептидов любым приемлемым способом, таким как оральный (энтеральный), назальный, глазной, подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутривенный или трансдермальный. Предпочтительно, чтобы введение было s.c и наиболее предпочтительноi.d. Введение может производиться инфузионным насосом. Методика проведения аналитических тестов. Идентичность, чистоту и содержание пептида определяли аналитической хроматографией обратнофазной ВЭЖХ. Длина волн при определении была 220 нм. Анализ стабильности (стабильность испытуемых композиций). а) Вакцина против почечно-клеточного рака. Различные лиофилизаты проверяли на стабильность каждого отдельного пептида при +25 С и+40 С, используя способ аналитической ВЭЖХ. Анализ напряжения при +25 С и +40 С производили для определения тенденций в отношении, какая из композиций более устойчива при комнатной и более высоких температурах. Пептиды в соответствии с SEQ ID NO:1-10 были лиофилизованы без каких-либо эксципиентов и при добавлении маннитола и Полоксамера 188 (Лутрол F68) или Твин 80. Были приготовлены следующие испытуемые композиции и стабильность измеряли при +25 С и+40 С способом аналитической ВЭЖХ: Композиция 1: пептиды без каких-либо эксципиентов; Композиция 2: пептиды/маннитол/Лутрол F68 (Полоксамер 188) (1:5:2 по весу); Композиция 3: пептиды/маннитол/Твин 80 (1:5:2 по весу); Композиция 4: пептиды/маннитол/Твин 80 (1:5:1 по весу). Начальные измерения ВЭЖХ производили для каждой композиции до начала хранения в климатической камере. Для этой цели содержимое двух ампул было полностью растворено в 30%-й уксусной кислоте и произведены измерения обратнофазной ВЭЖХ при повторном определении. Для обеспечения сопоставимости между отдельными измерениями в качестве внутреннего стандарта был использован нафтилаланин, который лиофилизован вместе с пептидами. По истечении 7, 14, 21 и 28 дней из климатической камеры изымали очередные две ампулы для определения стабильности. Оценку данных производили при повторном определении показателей для одной ампулы. Для одной точки времени и температуры использовали две независимые ампулы в целях получения в общей сложности четырех показателей. Данные показатели брали для вычисления стандартного отклонения,приведенного в планках погрешностей в соответствующей диаграмме. Результат экспериментов: стабильность каждого отдельного пептида в композиции с маннитолом и Лутролом F68 сравнима с результатами, полученными для композиции без каких-либо эксципиентов. Композиции, содержащие Твин 80, проявляют повышенную деградацию IMA-RGS-001, предпочтительно при +40 С, и увеличение сигнала, предпочтительно для пептида IMA-ADF-001. Данное повышение может быть из-за ко-элюирования загрязнения, вызванного деградацией пептидов.b) Вакцина против клеточной глиобластомы. Различные лиофилизаты были протестированы на растворимость и стабильность смеси пептидов в композиции. Пептиды в соответствии с SEQ ID NO: 11-23 были лиофилизованы без каких-либо эксципиентов и с добавлением маннитола/Полоксамера 188 (Лутрол F68) и маннитола/Твин 80. Были приготовлены следующие испытуемые композиции и были протестированы их растворимости в различных растворах и стабильность при +25 С и +40 С. Композиция 1: пептиды без каких-либо эксципиентов; Композиция 2: пептиды/маннитол/Лутрол F68 (Полоксамер 188) (1:5:2 по весу); Композиция 3: пептиды/маннитол/Твин 80 (1:5:2 по весу). Стабильность обеих композиций была одинаково хорошей. Растворимость была наилучшей при использовании композиции 2, которая образовывала прозрачную и бесцветную смесь, в то время как в композиции 3 в некоторых случаях наблюдался легкий осадок при более высоких концентрациях. При использовании композиции 1 растворение было вообще невозможно. Результат экспериментов: стабильность каждого отдельного пептида в композиции с маннитолом/Лутролом F68 и маннитолом/Твин 80 сравнима с результатами, полученными для композиции без каких-либо эксципиентов. Без каких-либо эксципиентов композиция нерастворима в подходящих растворах, например в гидрокарбонате натрия (4,2%). Вычисление потенции для композиции IMA901. Эффект от эксципиентов Полоксамера 188 и маннитола был проверен на эффективности Тклеточного прайминга. Неактивными эксципиентами в композиции IMA901 являются Полоксамер 188(Лутрол F68) и маннитол. Данные два эксципиента не входили в композицию IMA901 на 1-й фазе испытаний и были включены в композицию на 2-й фазе испытаний для повышения растворимости и стабильности в использовании вакцины IMA901. В данном исследовании проверяли влияние данных веществ на эффективность Т-клеточного прайминга у мышей после пептидной иммунизации моделью мышиного пептида. Не наблюдалось никаких токсических эффектов от Полоксамера 188 (Лутрол F68) и маннитола. T-клеточный прайминг анализировали окрашиванием тетрамера и проточной цитометрией exvivo девять дней спустя после иммунизации. Добавление Полоксамера (Лутрол F68)/маннитола в иммунизационный раствор не меняет эффективность CD8+ T-клеточного прайминга. Принципы теста. Иммунизация: В целях прайминга наивных CD8+ T-клеток иммуногенный пептид Ova257-264 (SIINFEKL), связывающий H2-Kb, в комбинации с адъювантом, обычно используемым при иммунизации мышей (CpG деоксиолигонуклеотид), в 4,2%-м бикарбонатном буфере вводился внутрикожно 8-12 недельным женским особям мышей (штамм C57BL/6, Н 2b, 3 мыши на группу). Сравнивали растворы инъекций с и без Полоксамера 188 (Лутрол F68 (16,5 мг/мл и маннитола (41,3 мг/мл). Концентрации эксципиентов одинаковы, как были запланированы для инъекционного раствора IMA901. Положительный контроль иммунизировали подкожно пептидным раствором, содержащим CpG, эмульсифицированным в Titermax classic (Sigma-Aldrich). Тетрамерное окрашивание: cпустя 9 дней мышей умерщвляли и анализировали ex vivo Ova257-264- 19017492 специфические Т-клетки селезенки с помощью тетрамерного окрашивания и проточной цитометрии. Тетрамерная технология обеспечивает специфическую и чувствительную детекцию T-клеток, несущих совместимый T-клеточный рецептор. Результаты: Локально на местах введения инъекции или систематически не наблюдалось никаких токсических эффектов от Полоксамера 188 (Лутрол F68 BASF, Ludwigshafen, Германия)/маннитола. Положительная контрольная группа, CpG-группа и группа CpG/Полоксамер 188/маннитол проявляли значительно более высокую частотность пептидспецифических T-клеток по сравнению с отрицательными контролями (p0,05). Не было значительных различий между группами только с CpG иCpG/Полоксамер 188/маннитол. Возможность положительных популяций, искусственно полученных путем наблюдения, была исключена посредством тетрамерного окрашивания пролиферированных пептидспецифических клеток после пятидневной стимуляции in vitro пептидом (данные не приводятся). В заключение, присутствие Полоксамера 188 (Лутрол F68)/маннитола в иммунизационном "коктейле" не вносит изменений в вызванные пептидом иммунные ответы у мышей, и поэтому, в принципе,не ожидается побочных или неблагоприятных воздействий от Полоксамера 188 (Лутрол F68) и маннитола на эффективность и безопасность основанных на пептидах иммунотерапевтических препаратов. Материалы и методы. Пептиды, использованные для приготовления различных композиций, были синтезированы и поставлены фирмой Bachem AG, Швейцария. Примеры Пример 1. Исходные растворы каждого отдельного пептида были приготовлены путем растворения пептидов в подходящих растворителях в соответствии с их характеристиками растворимости (см. табл. 2). 1,47 мл пептидных растворов с более высокой концентрацией (пептид 5-10) и 7,34 мл пептидных растворов 1-4 были скомбинированы с последующим добавлением 1,47 мл 10%-й уксусной кислоты. Смесь обрабатывали на вортексе в течение 2 минут и на ультразвуковой бане в течение 1 мин. Приблизительно 1 мл полученного прозрачного раствора переносили в стеклянные ампулы, добавляя затем 19,2 мг маннитола и 50 мкл исходного раствора Твин 80 (77 мг Твин 80, растворенного в 30%-м растворе уксусной кислоты). Раствор замораживали в течение нескольких минут при -40 С и подвергали лиофилизации в течение 14 ч при давлении 0,06 мбар, затем следовал 6-часовой период после просушки при 0,003 мбар (см. табл. 3). Таблица 2. Пептиды, использованные для примера 1 Таблица 3. Лиофилизационные параметры для примера 1- 20017492 Пример 2. Был создан лот GMP (надлежащая практика организации производства), содержащий 2000 ампул с 578 мкг отдельного пептида на ампулу плюс маннитол и Полоксамер 188. Композиция включает пептиды, маннитол и Полоксамер 188 в соотношении 1:5:2 [по весу]. Каждый отдельный пептид был взвешен в соответствии с количествами, приводимыми в табл. 4, в отдельных стеклянных сосудах. После взвешивания все пептиды были растворены в специфицированном растворителе. Таблица 4. Пептиды, использованные для примера 2 Из-за различной растворимости пептидов их необходимо растворять в соответствии с порядком,представленным в табл. 4, начиная с пептида 1. Для растворения пептидов были использованы различные количества и концентрации раствора уксусной кислоты и инъекционной воды (WFI) из-за различий в растворимости пептидов и с учетом окончательного объема наполнения основного объема раствора. Для улучшения растворимости каждую ампулу сильно встряхивали в течение максимум 5 мин и при необходимости обрабатывали ультразвуком в течение максимум 5 мин. Количества и концентрации для использования приводятся также в табл. 4. После того как пептиды без труда были растворены, растворы необходимо смешать в порядке, приведенном в табл. 4, начиная с пептида номер 1. Растворы помещаются в стерильный стеклянный контейнер. Отдельные ампулы для пептидов промывают раствором 105 мл уксусной кислоты (30%). В заключение этот раствор добавляют в смесь пептидного раствора и перемешивают в течение 5 мин. В пептидную смесь добавляли 23,1 г Полоксамера 188 (Лутрол F68) и 57,8 г маннитола и весь раствор перемешивали в течение 5 мин. Основной объем раствора, содержащий все 10 пептидов и эксципиенты, был стерильно профильтрован через фильтр с размером пор 0,22 мкм. 1,485 мл раствора заливали в стерильные стеклянные ампулы 2R в стерильных условиях и в инертной азотной атмосфере, укупоривали и переносили в лиофильную сушилку для лиофилизации. Процесс лиофилизации (см. табл. 5) включает замораживание ампул при температуре -45 С, постепенное повышение температуры до +20 С (основная фаза сушки) и заключительную стадию сушки при +25 С. По окончании процесса сушки в лиофильной сушилке снова устанавливали атмосферное давление, используя высушенный азот, который был стерильно профильтрован. Таблица 5- 21017492 Процедура повторного растворения: Для клинических исследований описанную выше композицию растворяют в 700 мкл гидрокарбоната натрия (4,2%) по следующей инструкции. Снимите пластиковую крышку с одной ампулы. Распакуйте и удалите гидрокарбонат натрия (4,2%) из холодильника по меньшей мере за 30 мин до перерастворения, чтобы довести его до комнатной температуры до начала инъекции. Приготовьте шприц и иглу для восстановления. Применяйте асептическую технику для взятия 700 мкл разбавителя для восстановления лиофилизата. Чтобы растворить лиофилизат, ампулу и разбавитель следует сильно встряхивать в течение 1 мин, проверить, прозрачен ли раствор, в противном случае продолжить встряхивание в течение еще одной минуты, пока раствор не станет прозрачным. 10-30 мин спустя после инъекции ГМ-КСФ используйте новый шприц для введения i.d. 500 мкл восстановленной композиции в то же место. Введение раствора должно происходить в течение 1 ч после восстановления. Растворенный лиофилизат может храниться в асептических условиях при комнатной температуре в течение до 1 ч со времени восстановления. Контроль стабильности после восстановления показал, что большинство пептидов остаются достаточно устойчивыми после восстановления. Однако произошло снижение в случае двух специфических пептидов, т.е. IMA-CCN-001 и IMA-RGS-001 (см. табл. 6). Так как эти пептиды содержат остаток цистеина, то произошла вызванная временем димеризация. Таблица 6. Результаты анализа на ВЭЖХ для стабильности в использовании после восстановления 4,2% раствором гидрокарбоната натрия. Сравнение композиций с эксципиентами и без них Начальный объем: 100%. Первая ВЭЖХ производится после перерастворения. Влияние различных факторов pH (около pH 8,5) и высокопроизводительного карбонатного буфера на успех пептидных иммунизации было измерено на модели с мышами. Используя стандартную иммуногенную модель пептида в различных инъекционных растворах, была протестирована эффективность прайминга с помощью стандартного анализа с 51Cr. Результаты были подтверждены способом проточной цитометрии после окрашивания тетрамера. Итак, не было обнаружено значительных различий в эффективности прайминга среди внутрикожных иммунизаций при pH 7,5; 8,5 (pH разбавителя IMA901) и pH 9,5. И дополнительно, высокая ионная сила не снижала наблюдаемые иммунные ответы в сравнении с изотоническим инъекционным буфером. При иммунизациях инъекционным раствором с рН 7,5 и 8,5 и разбавителем IMA901 токсических побочных эффектов не наблюдалось, но они проявлялись в случае инъекционного раствора с рН 9,5 (локальные некротические повреждения кожи на месте введения). Данные результаты подтверждают пригодность выбранного буфера в качестве подходящего разбавителя дляIMA901. Пример 3. Исходные растворы каждого отдельного пептида были приготовлены путем растворения пептидов в подходящих растворителях в соответствии с их характеристиками растворимости (см. табл. 6).- 22017492 Таблица 6. Пептиды, использованные для примера 3 Из-за различной растворимости пептидов их необходимо растворять в соответствии с порядком,представленным в табл. 4, начиная с пептида 1. Для растворения пептидов были использованы различные количества и концентрации раствора уксусной кислоты и инъекционной воды (WFI) из-за различий в растворимости пептидов и с учетом окончательного объема наполнения основного объема раствора. Для улучшения растворимости каждую ампулу сильно встряхивали в течение максимум 5 минут и при необходимости обрабатывали ультразвуком в течение максимум 5 мин. Количества и концентрации для использования приводятся также в табл. 6. После того как пептиды без труда были растворены, растворы необходимо смешать в порядке, приведенном в табл. 6, начиная с пептида 1. Растворы помещаются в стеклянный контейнер, снабженный магнитной мешалкой. В заключение этот раствор добавляют в смесь пептидного раствора и перемешивают по меньшей мере в течение 5 мин. В пептидную смесь добавляли 601,1 мг Полоксамера 188 (Лутрол F68) и 1502,8 мг маннитола и весь раствор перемешивали в течение 5 мин. Основной объем раствора, содержащий все 13 пептидов и эксципиенты, был стерильно профильтрован через фильтр с размером пор 0,22 мкм. 1,500 мл раствора заливали в стеклянные ампулы 2R, укупоривали и переносили в лиофильную сушилку для лиофилизации. Процесс лиофилизации (см. табл. 7) включает замораживание ампул при температуре -45 С, постепенное повышение температуры до +20 С(основная фаза сушки) и заключительную стадию сушки при +25 С. Когда сушка была завершена, в лиофильной сушилке снова устанавливали атмосферное давление, используя азот. Таблица 7. Лиофилизационные параметры для примера 3- 23017492 Процедура повторного растворения. Для клинических исследований описанную выше композицию растворяют в 700 мкл гидрокарбоната натрия (4,2%). Чтобы растворить лиофилизат, ампулу и разбавитель следует сильно встряхивать в течение 1 мин, проверить, прозрачен ли раствор, в противном случае продолжить встряхивание в течение еще одной минуты, пока раствор не станет прозрачным. Введение 500 мкл раствора должно происходить в течение 1 ч после восстановления. Растворенный лиофилизат может храниться в асептических условиях при комнатной температуре в течение до 1 ч со времени восстановления. Контроль стабильности после восстановления показал, что большинство пептидов оставались достаточно устойчивыми после восстановления (см. табл. 8). Таблица 8. Результаты анализа на ВЭЖХ для стабильности в использовании после восстановления 4,2% раствором гидрокарбоната натрия. Сравнение композиций с эксципиентами и без них Пример 4. Исходные растворы каждого отдельного пептида были приготовлены путем растворения пептидов в подходящих растворителях в соответствии с их характеристиками растворимости (см. табл. 9).- 24017492 Таблица 9. Пептиды, использованные для примера 4 Из-за различной растворимости пептидов их необходимо растворять в соответствии с порядком,представленным в табл. 4, начиная с пептида 1. Для растворения пептидов были использованы различные количества и концентрации раствора уксусной кислоты и инъекционной воды (WFI) из-за различий в растворимости пептидов и с учетом окончательного объема наполнения основного объема раствора. Для улучшения растворимости каждую ампулу сильно встряхивали в течение максимум 5 мин и при необходимости обрабатывали ультразвуком в течение максимум 5 мин. Количества и концентрации для использования приводятся также в табл 9. После того как пептиды без труда были растворены, растворы необходимо смешать в порядке, приведенном в табл. 9, начиная с пептида с SEQ ID NO: 23. Растворы помещаются в стеклянный контейнер,снабженный магнитной мешалкой. В заключение этот раствор добавляют в смесь пептидного раствора и перемешивают по меньшей мере в течение 5 мин. В пептидную смесь добавляли 62 4,2 мг Полоксамера 188 (Лутрол F68) и 1560,6 мг маннитола, и весь раствор перемешивали в течение 5 мин. Основной объем раствора, содержащий все 12 пептидов и эксципиенты, был стерильно профильтрован через фильтр с размером пор 0,22 мкм. 1,500 мл раствора заливали в стеклянные ампулы 2R, укупоривали и переносили в лиофильную сушилку для лиофилизации. Процесс лиофилизации (см. табл. 10) включает замораживание ампул при температуре -45 С, постепенное повышение температуры до +20 С(основная фаза сушки) и заключительную стадию сушки при +25 С. Когда сушка была завершена, в лиофильной сушилке снова устанавливали атмосферное давление, используя сухой азот. Таблица 10. Лиофилизационные параметры для примера 4 Контроль стабильности при различных температурах показал, что все пептиды достаточно устойчивы даже в стрессовых (+25 С) условиях (см. табл. 11).- 25017492 Таблица 11. Результаты анализа на ВЭЖХ для стабильности пептидов в композиции при +25 С+/- 2 С в течение 3 месяцев Таблица 12. Результаты анализа на ВЭЖХ для стабильности пептидов в композиции при +5 С+/-3 С в течение 3 месяцев Таблица 13. Результаты анализа на ВЭЖХ для стабильности пептидов в композиции при -20 С+/-5 С в течение 3 месяцев- 26017492 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Фармацевтическая композиция, включающая 2-18, предпочтительно 2-15, более предпочтительно 2-13, еще более предпочтительно 2-12 пептидов и еще более предпочтительно 3-12 опухолеассоциированных пептидов; где каждый пептид имеет длину 8-22 аминокислот, предпочтительно 9-16 аминокислот; где указанные пептиды проявляют растворимость в 90% уксусной кислоте, составляющую по меньшей мере 2,7 мг/мл; маннитол и полоксамер 188, где весовое соотношение указанного(ых) пептида(ов), маннитола и полоксамера 188 находится в пределах значений от 1:5:1,5 до 1:8:2,2 включительно; или маннитол и Твин (Tween) 80, где весовое соотношение пептидов, маннитола и Твин (Tween) 80 находится в пределах значений от 1:2:1,5 до 1:8:2,2 включительно. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, где указанное весовое соотношение пептидов, маннитола и полоксамера 188 находится в пределах значений от 1:0:2 до 1:0:2,2 включительно. 3. Фармацевтическая композиция по п.1, включающая по меньшей мере два пептида, где указанные пептиды включают аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDNO: 1-10 или SEQ ID NO: 12-23; при условии, что композиция включает по меньшей мере один пептид,включающий последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13 или их вариант или соль; и дополнительно включающая маннитол и полоксамер 188, где весовое соотношение пептидов, маннитола и полоксамера 188 находится в пределах значений от 1:5:1,5 до 1:8:2,2 включительно. 4. Фармацевтическая композиция по п.3, где весовое соотношение пептидов, маннитола и полоксамера 188 находится в пределах значений от 1:0:2 до 1:0:2,2 включительно. 5. Фармацевтическая композиция по п.1, включающая по меньшей мере два пептида, где указанные пептиды включают аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ IDNO: 1-10 или SEQ ID NO: 12-23; при условии, что композиция включает по меньшей мере один пептид,включающий последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 или SEQ ID NO: 13, или их вариант или соль; и дополнительно включающая маннитол и Твин (Tween) 80, где весовое соотношение пептидов, маннитола и Твин (Tween) 80 находится в пределах значений от 1:2:1,5 до 1:8:2,2 включительно. 6. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-5, где указанные пептиды обладают общей длиной 9-16 аминокислот. 7. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-6, где по меньшей мере один из указанных пептидов содержит непептидные связи. 8. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-7, где указанная композиция включает пептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1 и/или SEQ IDNO: 2, и дополнительно включает по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 3-10. 9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-8, где указанная композиция включает пептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 12 и/или SEQ IDNO: 13, и дополнительно включает по меньшей мере один пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 14-23. 10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-9, дополнительно включающая пептид,включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11, при условии, что указанный пептид не является соответствующим опухолеассоциированным полипептидом полной длины, предпочтительно дополнительно включающая пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 11. 11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-10, где количества пептидов, присутствующих в композиции, являются ткане- и/или раковоспецифическими. 12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-11, дополнительно включающая по меньшей мере один подходящий адъювант. 13. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-12 в качестве противораковой вакцины. 14. Набор, включающий:(a) контейнер, содержащий фармацевтическую композицию по любому из пп.1-13 в виде раствора или в лиофилизованной форме;(b) необязательно, второй контейнер, содержащий разбавитель или восстанавливающий раствор для указанной лиофилизованной композиции и/или по меньшей мере один адъювант; и(c) инструкцию(и) по (i) использованию раствора или (ii) восстановленного раствора и/или по использованию указанной лиофилизованной композиции. 15. Набор по п.14, дополнительно включающий один или более (i) буфер, (ii) разбавитель, (iii) фильтр, (iv) иглу и (v) шприц.