Антагонисты il-17a и il-17f и способы их применения

Номер патента: 15351

Опубликовано: 30.06.2011

Авторы: Гао Зерен, Риксон Марк В., Левин Стивен Д.

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Выделенный растворимый полипептид, кодируемый полинуклеотидом, включающим по меньшей мере один экзон гена, кодирующего IL-17RA (SEQ ID NO:21), и по меньшей мере один экзон гена, кодирующего IL-17RC, где указанный растворимый полипептид связывает IL-17A и IL-17F.

2. Выделенный растворимый полипептид по п.1, в котором полипептидная последовательность IL-17RC выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, 166, 4 и 24.

3. Выделенный растворимый полипептид по п.1, отличающийся тем, что его растворимая форма связывается с IL-17F.

4. Выделенный растворимый полипептид по п.3, отличающийся тем, что дополнительно связывается с IL-17A.

5. Выделенный растворимый полипептид по п.1, отличающийся тем, что специфически связывается с IL-17F и IL-17A.

6. Выделенный растворимый полипептид по п.1, отличающийся тем, что дополнительно включает полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO:175 и 180.

7. Выделенный растворимый полипептид по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно ПЭГилирован.

8. Выделенный растворимый полипептид, включающий аминокислотные остатки 193-447 из SEQ ID NO:2 и аминокислотную последовательность, кодируемую, по меньшей мере, экзоном 1 гена, кодирующего IL-17RA, представленный на фиг. 3, в котором указанный растворимый полипептид специфически связывается с IL-17А и IL-17F.

9. Выделенный растворимый полипептид по п.8, отличающийся тем, что включает аминокислотную последовательность, кодированную экзонами 1-6 гена, кодирующего IL-17RA, представленную на фиг. 3.

10. Выделенный растворимый полипептид по п.8, в котором указанный полипептид включает полипептид, представленный на фиг. 4.

11. Выделенный растворимый полипептид по любому из пп.8 и 9, отличающийся тем, что дополнительно включает полипептид, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO:175 и 180.

12. Выделенный растворимый полипептид по любому из пп.8 и 9, отличающийся тем, что он дополнительно ПЭГилирован.

13. Выделенный растворимый полипептид, включающий аминокислотные остатки 1-458 из SEQ ID NO:158, где указанный растворимый полипептид специфически связывает IL-17А и IL-17F.

14. Выделенный растворимый полипептид по п.13, отличающийся тем, что он включает SEQ ID NO:158.

15. Выделенный растворимый полипептид по п.13, отличающийся тем, что состоит из аминокислотных остатков 1-458 из SEQ ID NO:158.

16. Выделенный растворимый полипептид по п.14, отличающийся тем, что состоит из SEQ ID NO:158.

17. Выделенный растворимый полипептид по п.13, отличающийся тем, что он дополнительно ПЭГилирован.

18. Выделенный растворимый полипептид по п.14, отличающийся тем, что он дополнительно ПЭГилирован.

19. Выделенный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных остатков 193-276 из SEQ ID NO:2, аминокислотных остатков 208-291 из SEQ ID NO:166, аминокислотных остатков 277-370 из SEQ ID NO:2, аминокислотных остатков 292-385 из SEQ ID NO:166, аминокислотных остатков 371-447 из SEQ ID NO:2 и аминокислотных остатков 386-462 из SEQ ID NO:166, где указанный полипептид специфически связывает IL-17A и IL-17F.

20. Выделенный полипептид по п.19, отличающийся тем, что включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:160, 162 и 164.

21. Выделенный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:68, 70, 72, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98, 102, 106, 110, 114, 118, 122, 140 и 152, где указанный полипептид специфически связывает IL-17A и IL-17F.

22. Выделенный полипептид по п.21, отличающийся тем, что он дополнительно ПЭГилирован.

23. Способ продуцирования антитела к полипептиду, включающий инокуляцию животного полипептидом, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO:160, 162 и 164, в котором полипептид вызывает иммунную реакцию в животном, чтобы продуцировать антитело и выделение антитела из животного, и в котором антитело специфически связывается с полипептидом IL-17RC и снижает активность IL-17A и/или IL-17F.

24. Способ по п.23, отличающийся тем, что антитело снижает провоспалительную активность IL-17A и/или IL-17F.

25. Способ по п.23, отличающийся тем, что антитело нейтрализует взаимодействие IL-17A и/или IL-17F с IL-17RC или IL-17RA.

26. Способ по п.25, отличающийся тем, что нейтрализация антителом измеряется обнаружением нейтрализации IL-17A и/или IL-17F in vitro.

27. Способ по п.23, отличающийся тем, что антитело снижает провоспалительную активность обоих IL-17A и IL-17F.

28. Способ по п.23, отличающийся тем, что антитело нейтрализует взаимодействие обоих IL-17А и IL-17F с IL-17RC.

29. Способ по п.25, отличающийся тем, что нейтрализацию антителом измеряют обнаружением нейтрализации обоих IL-17A и IL-17F in vitro.

30. Способ снижения или ингибирования либо IL-17А-вызванного, либо IL-17F-вызванного воспаления, включающий введение млекопитающему с воспалением количества растворимого полипептида по любому из пп.1, 8, 9, 13 или 14, достаточного для снижения воспаления.

31. Способ снижения IL-17А-вызванного и IL-17F-вызванного воспаления, включающий введение млекопитающему с воспалением количества растворимого полипептида по любому из пп.1, 8, 9, 13 или 14, достаточного для снижения воспаления.

32. Способ лечения млекопитающего, пораженного воспалительным заболеванием, вызванным IL-17А или IL-17F, включающий введение млекопитающему антагониста IL-17A или IL-17F, позволяющего снизить воспаление, в котором антагонист содержит растворимый полипептид по п.1 и в котором воспалительная активность либо IL-17A, либо IL-17F снижается.

33. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является астма.

34. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является хроническое воспалительное заболевание.

35. Способ по п.34, отличающийся тем, что болезнью является хроническое воспалительное заболевание, включая воспалительную болезнь кишечника, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, артрит, атопический дерматит или псориаз.

36. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является синдром раздраженного кишечника (IBS).

37. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является острое воспалительное заболевание.

38. Способ по п.37, отличающийся тем, что болезнью является острое воспалительное заболевание, включая эндотоксемию, сепсис, синдром токсического шока или инфекционное заболевание.

39. Способ лечения млекопитающего, пораженного воспалительным заболеванием, в котором принимают участие IL-17A и 1L-17F, включающий введение млекопитающему антагониста IL-17A и IL-17F, позволяющего снизить воспаление, в котором антагонист содержит растворимый полипептид по п.1 и в котором воспалительная активность IL-17A и IL-17F снижается.

40. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является астма.

41. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является хроническое воспалительное заболевание.

42. Способ по п.41, отличающийся тем, что болезнью является хроническое воспалительное заболевание, включая воспалительную болезнь кишечника, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, артрит, атопический дерматит или псориаз.

43. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является синдром раздраженного кишечника (IBS).

44. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является острая воспалительная болезнь.

45. Способ по п.44, отличающийся тем, что болезнью является острая воспалительная болезнь, включая эндотоксемию, сепсис, синдром токсического шока или инфекционную болезнь.

46. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является рассеянный склероз.

47. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является рассеянный склероз.

48. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является ревматоидный артрит.

49. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является ревматоидный артрит.

50. Способ по п.32, отличающийся тем, что болезнью является остеоартрит.

51. Способ по п.39, отличающийся тем, что болезнью является остеоартрит.

52. Способ по п.32 или 39, отличающийся тем, что болезнью является аутоиммунная болезнь.

53. Способ по п.52, отличающийся тем, что аутоиммунная болезнь представляет собой рассеянный склероз, ревматоидный артрит или воспалительную болезнь кишечника (IBD).

54. Способ по п.32 или 39, отличающийся тем, что болезнью является хроническая воспалительная болезнь дыхательных путей.

55. Способ по п.54, отличающийся тем, что хроническая воспалительная болезнь дыхательных путей представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ) и кистозный фиброз.

56. Способ по п.32 или 33, отличающийся тем, что болезнь представляет собой псориаз, ревматоидный артрит, остеоартрит, язвенный колит, болезнь Крона, синдром раздраженной толстой кишки (СРТК), контактный дерматит, рассеянный склероз, отторжение трансплантата, астма, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), кистозный фиброз или аллергическую астму.

57. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид в соответствии с любым из пп.1-11, 13-16 и 19-21.

58. Молекула нуклеиновой кислоты по п.57, включающая нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO:157.

59. Экспрессирующий вектор, включающий следующие функционально связанные элементы:

a) промотор транскрипции,

b) сегмент ДНК, кодирующий полипептид по любому из пп.1-11, 13-16 и 19-21;

c) терминатор транскрипции.

60. Клетка, включающая экспрессирующий вектор по п.59, причем клетка экспрессирует полипептид, кодируемый указанным ДНК-сегментом.

61. Способ получения полипептида, включающий:

a) культивирование клетки по п.60 в условиях, пригодных для экспрессии белка;

b) выделение экспрессированного полипептида.

62. Способ по п.61, где клетка является эукариотической клеткой и где экспрессированный полипептид секретируется из клетки.

63. Способ по п.61 или 62, где полипептид включает аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:158 или остатки 1-458 от SEQ ID NO:158.

64. Способ по любому из пп.32-56, отличающийся тем, что растворимый полипептид получают способом по п.63.

Рисунок 1


Текст

Смотреть все

Настоящее изобретение относится к антагонистам IL-17A и IL-17F. Антагонисты по изобретению основаны на IL-17RC одном или обоих IL-17RC и IL-17RA (IL-17RC/IL-17RA). Такие антагонисты служат, чтобы блокировать, ингибировать, уменьшать, противодействовать или нейтрализовать активность IL-17F, IL-17 А или обоих IL-17A и IL-17F. IL-17A и IL-17F представляют собой цитокины, которые вовлечены в воспалительные процессы и человеческую болезнь. IL-17RA является рецептором для IL-17A, a IL-17RC является общим рецептором как для IL-17A, так и для IL-17F. Настоящее изобретение включает растворимые антагонисты IL-17A и IL-17F, также как методы их использования. 015351 Уровень изобретения Цитокины представляют собой растворимые маленькие белки, которые опосредуют многие биологические эффекты, включая регулирование роста и дифференцирование многих типов клеток (см., например, Arai et al., Ann. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Pouland Seder, Cell, 76:241 (1994. Белки, которые составляют группу цитокина, включают интерлейкины,интерфероны, колониестимулирующие факторы, факторы некроза опухоли и другие регулирующие молекулы. Например, человеческий интерлейкин-17 представляет собой цитокин, который стимулирует экспрессию интерлейкина-6, внутриклеточной молекулы адгезии 1, интерлейкина-8, колониестимулирующего фактора макрофагов-гранулоцитов и экспрессию простагландина Е 2, и играет роль в предпочтительном созревании гематопоэтических предшественников CD34+ в нейтрофилы (Yao et al., J. Immunol. 755:5483 (1995); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183:2593 (1996. Рецепторы, которые связывают цитокины, обычно состоят из одного или больше составных мембранных белков, которые связывают цитокин с высоким сродством и трансдуцируют этот случай связывания с клеткой через эндоплазматические участки определенных субъединиц рецептора. Рецепторы цитокина сгруппированы в несколько классов на основе общих черт в их доменах, связывающих внеклеточные лиганды. Продемонстрированные in vivo активности цитокинов и их рецепторов иллюстрируют клинический потенциал других цитокинов, рецепторов цитокинов, агонистов цитокинов и антагонистов цитокинов и потребность в них. Например, продемонстрированные in vivo активности семейства провоспалительных цитокинов показывают огромный клинический потенциал антагонистов провоспалительных молекул и потребность в них. Краткое описание чертежей Фиг. 1 А и 1 В являются графическими представлениями структуры экзона человеческого IL-17RCx1(последовательность SEQ ID NO:2). Для тех аминокислот, где кодон сплайсирован экзон-интронным сочленением, сочленение перемещалось, включая весь кодон. Фиг. 2 А и 2 В являются графическими представлениями структуры экзона человеческого IL-17RCx4(последовательность SEQ ID NO:166). Фиг. 3 является графическим представлением структуры экзона человеческого IL-17RA (последовательность SEQ ID NO:21). Фиг. 4 А и 4 В являются графическими представлениями структуры экзона предпочтительного растворимого полипептида по настоящему изобретению, как описано здесь и в последовательностях SEQ IDNO:157 и 158. Этот растворимый полипептид включает экзоны из обеих последовательностей как человеческого IL-17RA (последовательность SEQ ID NO:21), так и человеческого IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2). Фиг. 5 представляет графическое представление обычного результата анализа, используя протокол,обрисованный в общих чертах в примере 33. График выполнен с применением программы Prizm. Величины Y представляют интенсивность флуоресценции (MFI), нормализованную к максимуму и минимуму(100 и 0%) на основе только лиганда и контрольных лунок без лиганда/без растворимого рецептора, и,таким образом, вычисляют процент связывания лиганда с клетками. Программное обеспечение вычисляет IC50 для каждой кривой. Детальное описание изобретения Настоящее изобретение касается этих потребностей, предоставляя антагонисты к провоспалительным цитокинам IL-17A и IL-17F. Конкретно, провоспалительные цитокины IL-17A и IL-17F имеют высокую степень подобия последовательностей, имеют много общих биологических свойств, оба произведены активированными Т-лимфоцитами. Они оба вовлечены как факторы, которые способствуют прогрессии различных аутоиммунных и воспалительных болезней, включая ревматоидный артрит и астму. Фактически, реагенты, которые отрицают функцию IL-17A, значительно повышают склонность и серьезность заболевания в нескольких мышиных моделях человеческой болезни. IL-17A опосредует свои эффекты через взаимодействие с рецептором его узнавания, рецептором IL-17 (IL-17R), но рецептор для IL17F еще не идентифицирован. Ранее, мы сообщили, что IL-17RC является рецептором как для IL-17A,так и для IL-17F и связывает оба с одинаково высоким сродством. IL-17R, с другой стороны, связываетIL-17A с высоким сродством, но IL-17F связывает с очень низким сродством. Совместно с этим было показано, что растворимая форма IL-17R блокирует связывание и передачу сигналов IL-17A в клетках,экспрессирующих каждый рецептор, но не мешает связыванию или функции IL-17F на IL-17RC. Вмешательство IL-17A было предложено как эффективная терапия нескольких аутоиммунных болезней, использующих антагонисты по настоящему изобретению, которые могут блокировать, ингибировать, уменьшать, противодействовать или нейтрализовать активность IL-17A, IL-17F, или как IL-17A, так и IL-17F, которые включают растворимые IL-17RC и IL-17RC/IL-17RA рецепторы, будут иметь преимущества перед методами лечения, которые предназначаются только для одного из этих двух цитокинов. Изобретение далее обеспечивает их применение при воспалительной болезни, также как близких составов и методов.-1 015351 А) Краткий обзор. Заболевания, связанные с иммунной системой, и воспалительные болезни представляют собой проявление или последствие довольно сложных, часто многократно взаимосвязанных биологических путей,которые в нормальной физиологии важны, чтобы ответить на повреждение или рану, вызывать репарацию повреждения или раны, и устанавливают врожденную и приобретенную защиту против инородных организмов. Болезнь или патология встречаются, когда эти нормальные физиологические пути вызывают дополнительное повреждение или раны, либо как непосредственно относящиеся к интенсивности реакции, как следствию патологического регулирования, или чрезмерного возбуждения, как реакция на"свое", либо как к их комбинации. Хотя генез этих болезней часто включает многостадийные пути и часто многократные различные биологические системы/пути, вмешательство в критических точках в один или несколько из этих путей может иметь улучшающий или терапевтический эффект. Терапевтическое вмешательство может иметь место, как антагонизм вредного процесса/пути или как стимулирование полезного процесса/пути. Много заболеваний, связанных с иммунитетом, известны и всесторонне изучены. Такие болезни включают иммуноопосредованные воспалительные болезни (такие как ревматоидный артрит, иммуноопосредованная почечная болезнь, гепатобилиарная болезнь, воспалительная болезнь кишечника (ВБК),псориаз и астма), неиммуноопосредованные воспалительные болезни, инфекционные болезни, болезни иммунодефицита, неоплазия и т.д. Т-Лимфоциты (Т-клетки) являются важным компонентом иммунной реакции млекопитающих. Т-Клетки узнают антигены, которые связаны с аутомолекулой, закодированной генами в пределах главного комплекса гистосовместимости (ГКГС). Антиген может быть показан вместе с молекулами ГКГС на поверхности антигенпредставляющих клеток, вирусинфицированых клеток, раковых клеток, трансплантатов и т.д. Система Т-лимфоцитов устраняет эти измененные клетки, которые представляют угрозу для здоровья млекопитающего-хозяина. Т-Клетки включают клетки Т-хелперы и цитотоксические Т-клетки. Клетки Т-хелперы сильно разрастаются после узнавания комплекса антиген-ГКГС на антигенпредставляющей клетке. Т-Хелперы также секретируют много цитокинов, т.е. лимфокинов, которые играют центральную роль в активации В-клеток, цитотоксических Т-клеток и многих других клеток, которые участвуют в иммунной реакции. Центральным событием и в гуморальной, и в клеточно-опосредованной иммунной реакции является активация и клональная экспансия клеток Т-хелперов. Активация Т-хелпера начинается взаимодействием рецептора Т-клетки PTK-CD3 комплекса с антиген-ГКГС на поверхности антигенпредставляющей клетки. Это взаимодействие вызывает каскад биохимических событий, которые побуждают оставшиеся Т-хелперы вступать в клеточный цикл (переход G0 в G1) и приводит к экспрессии рецептора высокого сродства к IL-2 и иногда к IL-4. Активированная Т-клетка прогрессирует через цикл пролиферации и дифференциации в клетки памяти или эффекторные клетки. В дополнение к сигналам, опосредуемым через РТК, активация Т-клеток включает дополнительную костимуляцию, вызванную цитокинами, выделяемыми антигенпредставляющей клеткой или через взаимодействие с мембраносвязанными молекулами на антигенпредставляющей клетке и Т-клетке. Цитокины IL-1 и IL-6, как было показано, обеспечивают костимулирующий сигнал. Кроме того, взаимодействие между молекулой В 7, экспрессируемой на поверхности антигенпредставляющей клетки, и молекуламиCD28 и CTLA-4, экспрессируемыми на поверхности Т-клетки, производит активацию Т-клетки. Активированные Т-лимфоциты экспрессируют увеличенное число клеточных молекул адгезии, таких какICAM-1, интегрины, VLA-4, LFA-1, CD56 и т.д. Пролиферация Т-клеток в смешанной лимфоцитной культуре или смешанной лимфоцитной реакции (СЛР) является установленным показанием способности соединения стимулировать иммунную систему. Во многих иммунных реакциях воспалительные клетки инфильтруются в участок раны или инфекции. Мигрирующие клетки могут быть нейтрофильными, эозинофильными, моноцитарными или лимфоцитарными, как может быть определено гистологической экспертизой поврежденных тканей. CurrentProtocols in Immunology, ed. John E. Coligan, 1994, John WileySons, Inc. Иммуннозависимые болезни могут лечиться подавлением иммунной реакции. Применение растворимых рецепторов и/или нейтрализация антител, которые ингибируют молекулы, имеющие иммуностимулирующую активность, было полезным в лечении иммунноопосредованных и воспалительных болезней. Молекулы, которые ингибируют иммунную реакцию, могут использоваться (белки непосредственно или через использование агонистов антитела), чтобы ингибировать иммунную реакцию и таким образом улучшить течение иммуннозависимой болезни. Интерлейкин-17 (IL-17A) идентифицировали как клеточный ортолог белка, кодированного Т-лимфотропным вирусом герпеса (Herpes virus Saimiri, HSV) [см. Rouvier et al., J. Immunol., 150 (12): 5445-5456 (1993); Yao et al., J. Immunol, 122 (12):5483-5486 (1995) и Yao et al. Immunity, 3 (6): 811-821(1995)]. Последующая характеризация показала, что этот белок представляет собой сильный цитокин,действие которого может вызывать провоспалительные реакции в разных периферических тканях. IL17A представляет собой дисульфидно-связанный гомодимерный цитокин приблизительно 32 kDa, который синтезируется и секретируется только CD4+-активированными Т-клетками памяти (рассмотрено уFossiez et al. Int. Rev. Immunol., 16: 541-551 [1998]). Конкретно, IL-17 синтезируется как предшественникполипептид из 155 аминокислот с N-концевой сигнальной последовательностью из 19-23 остатков и секретируется как дисульфидно-связанный гликопротеин. IL-17A раскрыт в WO 9518826 (1995),WO 9715320 (1997) и WO 9704097 (1997), так же как в патенте США 6063372. Несмотря на его ограниченное распределение в ткани, IL-17A показывает плейотропные биологические активности на различных типах клеток. IL-17A, как было найдено, стимулирует продукцию многих цитокинов. Это вызывает секрецию IL-6, IL-8, IL-12, лейкозподавляющего фактора (LIF), простагландина Е 2, МСР-1 и ГКСФ прикрепленными клетками, такими как фибробласты, кератиноциты, эпителиальные и эндотелиальные клетки. У IL-17A также есть способность вызвать поверхностную экспрессию ICAM-1, пролиферацию Т-клеток и рост и дифференциацию человеческих клетокпредшественников CD34.sup.+ в нейтрофилы. IL-17A был также вовлечен в метаболизм кости и, как предположено, играет важную роль в патологических состояниях, характеризуемых наличием активированных Т-клеток и продукцией ФНО-альфа, таких как ревматоидный артрит и ослабление костных имплантатов (Van Bezooijen et al., J. Bone Miner. Res. 14: 1513-1521 [1999]). Активированные Т-клетки синовиальной ткани, полученной от больных ревматоидным артритом, как было найдено, секретируют более высокое количество IL-17A, чем полученное от нормальных людей или больных остеоартритом(Chabaud et al. Arthritis Rheum. 42: 963-970 [1999]). Предполагалось, что этот провоспалительный цитокин активно способствует синовиальному воспалению в ревматоидном артрите. Кроме его провоспалительной роли IL-17A, кажется, способствует патологии ревматоидного артрита еще одним механизмом. Например, IL-17A, как было показано, вызывает экспрессию фактора дифференциации остеокластов(ФДО) мРНК в остеобластах (Kotake et al., J. Clin. Invest., 103: 1345-1352 [1999]). ФДО стимулирует дифференцирование клеток-предшественников в остеокласты, клеток, вовлеченных в резорбцию кости. Так как уровень IL-17A значительно увеличен в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом, кажется, что образование остеокластов, вызванное IL-17A, играет критическую роль в резорбции кости при ревматоидном артрите. IL-17A, как также полагают, играет ключевую роль в определенных других аутоиммунных нарушениях, таких как рассеянный склероз (Matusevicius et al. Mult. Scler, 5: 101-104 [1999]). IL-17A, как далее показано, внутриклеточной передачей сигналов стимулирует притокCa.sup.2+ и снижение [цАМФ] в человеческих макрофагах (Jovanovic et al., J. Immunol., 160:3513 [1998]). Фибробласты, обработанные IL-17A, вызывают активацию NF-.kappa.В [Yao et al. Immunity, 3:811 (1995),Jovanovic et al., выше], в то время как макрофаги, обработанные им, активируют NF-.kappa.В и митогенактивированные протеинкиназы (Shalom-Barek et al., J. Biol. Chem., 273:27467 [1998]). Дополнительно, IL-17A также разделяет подобные последовательности с цитокинподобным фактором 7 млекопитающих, который вовлекается в рост хряща и кости. Другие белки, с которыми полипептиды IL-17A разделяют подобные последовательности, являются человеческим интерлейкинзависимым фактором, полученным из эмбриона (EDIRF), и интерлейкином 20. Совместимый с широким диапазоном эффектов IL-17A, рецептор клеточной поверхности для IL17A, как было найдено, широко экспрессируется во многих тканях и типах клеток (Yao et al. Cytokine,9:794 [1997]). В то время как аминокислотная последовательность человеческого рецептора IL-17A (IL17R) (866 аминокислот) предсказывает белок с единственным трансмембранным доменом и длинным,525 аминокислот, внутриклеточным доменом, причем последовательность рецептора уникальна и не подобна последовательности любого из рецепторов из семейства рецепторов цитокина/факторов роста. Это вместе с нехваткой подобия самого IL-17A другим известным белкам указывает на то, что IL-17A и его рецептор могут быть частью нового семейства сигнальных белков и рецепторов. Показано, что активность IL-17A опосредуется через связывание его с уникальным рецептором поверхности клетки, причем предыдущие исследования показали, что контактирование Т-клеток с растворимой формой полипептидного рецептора IL-17A ингибировала пролиферацию Т-клеток и продукцию IL-2, вызванную фитогемоагглютином (ФГА), конканавалином А и моноклональным антителом анти-РТК (Yao et al., J. Immunol,155:5483-5486 [1995]). Также есть значительный интерес в идентификации и характеристике новых полипептидов, имеющих гомологию с известными рецепторами цитокина, конкретно с рецепторами IL17A. Картина экспрессии IL-17F, кажется, подобна картине экспрессии IL-17 А в том, что она включает только Т-клетки, активированные CD4+, и моноциты (Starnes et al. J. Immunol. 167: 4137-4140 [2001]). IL17F, как было продемонстрировано, вызывает ГКСФ, IL-6 и IL-8 в фибробластах (Hymowitz et al., EMBO[2001]). Недавно сообщалось, что IL-23, цитокин, произведенный дендритной клеткой, может опосредовать продукцию как IL-17A, так и IL-17F, прежде всего в Т-клетках памяти (Aggarwal et al. J. Biol. Chem. 278:1910-1914 [2003]). Кроме того, избыточная экспрессия или повышенная регуляция как IL-17 А, так и IL-17F проявляется у людей, страдающих артритом и астмой (рассмотрено у Moseley et al. Cytokine Growth Factor Rev. 14:155-174 [2003]). Что касается артрита, эти цитокины действуют в манере, характерной для деструкции хряща и суставов, которая связана с ревматоидным артритом или остеоартритом. Например, IL-17A и IL17F, как было продемонстрировано, увеличивают матриксную деградацию в суставных эксплантатах-3 015351 хряща через выделение гликозаминогликанов протеогликана хряща и фрагментов коллагена, ингибируя синтез новых протеогликанов и коллагенов (Cai et al., Cytokine 16:10-21 [2001]; Attur et al., ArthritisRheum. 44:2078-2083 [2001]). Подобно IL-17A, чрезмерная экспрессия IL-17F в мышах, как также было показано, увеличивает рекрутмент нейтрофилов легкого и приводит к повышенной экспрессии Th1-связанных цитокинов в легком, включая IL-6, IFN-гамма, IP 10 и MIG (Starnes et al. J. Immunol. 167: 4137-4140 [2001]). IL-17F также повышенно активировался в Т-клетках от сенсибилизированных аллергеном астматиков (Kawaguchi etal., Immunol., 167:4430-4435 [2001]) и, как найдено, вызвал продукцию IL-6 и IL-8 в клетках нормального человеческого бронхиального эпителия (NHBE). В отличие от IL-17A, IL-17F, кажется, ингибирует развитие кровеносных сосудов in vitro (Starnes et al. J. Immunol., 167: 4137-4140 [2001]). мРНК IL-17F не была обнаружена Нозерн-блоттинг анализом в различных человеческих тканях, но резко индуцировалась при активации CD4+ Т-клеток и моноцитов. У мышей клетки Th2 и тучные клетки, как было найдено, экспрессируют IL-17F при активации. См. Dumont, Expert Opin. Ther. Patents, 13 (3)(2003). Подобно IL-17A, экспрессия IL-17F, как было также найдено, активируется интерлейкином IL-23 у мышей. Семейство цитокин/рецептор IL-17, кажется, представляет уникальную сигнальную систему в пределах сети цитокинов, которая предложит инновационные подходы к манипуляции иммунными и воспалительными реакциями (ответами). Соответственно настоящее изобретение основано на открытии нового рецептора семейства IL-17, IL-17RC и его способности связывать как IL-17A, так и IL-17F.IL-17RC был первоначально идентифицирован, используя биоинформатический подход, чтобы искать белки, связанные с IL-17RA и идентифицированные через кДНК, кодирующую белок IL-17RC, связанный с рецептором IL-17. Несмотря на его очевидное подобие рецептору IL-17 (IL-17RA), который связывается с прототипичным членом IL-17A семейства IL-17, и идентификацию пяти других членов семейства цитокина IL-17, ранее не сообщалось об определенном лиганде для IL-17RC. Однако IL-17A иIL-17F были идентифицированы как определенные лиганды для IL-17RC, как описано в заявке на патент США 11/150533, поданной 10 июня 2005 г. и изданной как патент США 20060002925. Конкретно,эти лиганды были идентифицированы с применением клеток почек детенышей хомячков (ПДХ), которые были устойчиво трансфицированы конструктом, кодирующим либо человеческий IL-17RA (hIL-17RA),либо IL-17RC (hIL-17RC). Экспрессия рецепторов на поверхности была подтверждена анализом FACS(анализ клеточным сортером с возбуждением флуоресценции), используя либо моноклональное антитело для hIL-17RA или поликлональную антисыворотку к hIL-17RC. Чтобы оценить связывание цитокина,биотинилированные формы человеческих IL-17A, С, D, Е, и F и стрептавидин, коньюгированный с флюорохромом, применяли, чтобы обнаружить связывание цитокина с трансфицированными клетками поточной цитометрией. Результаты ясно показали, что устойчиво трансфицированные клетки ПДХ, экспрессирующие hIL-17RA, ясно связывали человеческий IL-17A (hIL-17A), как ожидалось, затем как клетки, трансфицированные пустым вектором экспрессии, были не в состоянии связать какие-либо члены тестированного семейства IL-17. Относительно слабое связывание человеческого IL-17F (hIL-17F) сhIL-17RA-трансфицированными клетками также наблюдалось, но не было никакого значительного связывания других членов тестированного семейства IL-17. Другие члены семейства IL-17 были исследованы на связывание с hIL-17RC-трансфицированными клетками и отмечено, что эти клетки показали значительное связывание с hIL-17F. Кроме того, значительное связывание hIL-17A с этими клетками было замечено, но не найдено никакого связывания hIL-17C, D или Е. Эти данные доказали, что hIL-17RC был рецептором как для hIL-17F, так и для hIL-17A. Дополнительно, уровень флюоресценции в диапазоне концентраций цитокина был исследован, чтобы определить относительное сродство hIL-17 А и F к hIL-17RA и hIL-17RC. Сравнивая средние интенсивности флюоресценции индивидуальных цитокинов на каждом трансфектанте, отмечено, что hIL-17A связывался намного лучше с hIL-17RA, чем hIL-17F, но что оба цитокина, оказалось, связывались одинаково хорошо с hIL-17RC-трансфицированными клетками. Интересно, что связывание цитокина с клетками, которые экспрессировали оба рецептора, оказалось, было совокупным, без признака кооперативности. Затем специфичность этого связывания была исследована в попытке конкурировать за связывание с немеченым цитокином. Трансфицированные клетки ПДХ культивировали при фиксированной концентрации биотинилированного цитокина и увеличивающихся концентрациях немеченого цитокина, и количество связанного биотинилированного материала количественно определяли FACS анализом. Показано, что связывание обоих, hIL-17A и F, с hIL-17RC было специфическим, начиная с увеличивающихся концентраций немеченого цитокина, которому мешает связывание с биотинилированным материалом. Фактически, немеченые hIL-17A и F эффективно перекрестно конкурируют за связывание биотинилированных форм обоих цитокинов с hIL-17RC-трансфицированными клетками, предполагая, что эти два цитокина связывают hIL-17RC с похожим сродством, и что они связываются с перекрывающимися, если не идентичными участками. Немеченый hIL-17A также эффективно конкурировал за связывание обоих биотинилированных hIL-17A и F с hIL-17RA-трансфицированными клетками, в то время как немеченыйhIL-17F не показал, по существу, способности конкурировать за связывание hIL-17A с hIL-17RA. Это-4 015351 указывает, что, хотя hIL-17F показал определенное связывание с hIL-17RA, авидность этого взаимодействия, оказалось, была значительно ниже, чем взаимодействия hIL-17A и hIL-17RA. Исследования насыщенности связывания проведено, чтобы измерить сродство связывания hIL-17A и F с hIL-17RC и hIL-17RA. Линии клеток ПДХ, устойчиво экспрессирующих hIL-17RA или hIL-17RC,культивировали с йодсодержащими hIL-17A или F в условиях насыщения связывания, чтобы определить константы сродства каждого цитокина для каждого рецептора. hIL-17 А связывал как hIL-17RA, так иhIL-17RC с сопоставимым сродством (табл. 1). Конкретно, клетки ПДХ, трансфицированные указанным рецептором, использовались, чтобы установить величины Kd для hIL-17 А и hIL-17F, как описано в методах. Показанные результаты являются средними величинами Kd, полученными из тройного определения. Таблица 1 Кроме того, сродство hIL-17F к hIL-17RC очень подобно сродству hIL-17 А к этому рецептору (см. табл. 1 выше). Однако совместимое с результатами, полученными, используя биотинилированные цитокины, сродство hIL-17F к hIL-17RA было примерно 1000-кратно ниже относительно измеренных других величин сродства. Это указывает, что hIL-17A и F связывают hIL-17RC с подобными величинами сродства, но их величины сродства к hIL-17RA резко отличаются. Наблюдение, что hIL-17RC связывал как hIL-17A, так и F, с высоким сродством, предполагает, что клетки, экспрессирующие hIL-17RC, должны быть одинаково способны к отклику на hIL-17A и F. С другой стороны, так как hIL-17RA связывал hIL-17A с высоким сродством, a hIL-17F приблизительно в 1000 раз менее хорошо, выполнение состоит в том, что клетки, экспрессирующие hIL-17RA, были в физиологических условиях, только реакцией на hIL-17A. Ранее, было показано, что hIL-17RA экспрессируется повсеместно, но его экспрессия, как сообщалось, была более высокой в кроветворных клетках при более низкой экспрессии в других тканях. Поэтому экспрессия hIL-17RC изучалась, чтобы определить степень перекрывания в структурах экспрессии. Нозерн-блоттинг анализ показал, что hIL-17RC экспрессировался при высоких уровнях в железистых тканях, таких как надпочечник, простата, печень и щитовидная железа, при неподдающейся обнаружению экспрессии в кроветворных тканях. Чтобы далее исследовать экспрессию этих рецепторов в кроветворных клетках, связывание биотинилированных hIL-17A и F с мононуклеарными клетками периферической крови (МКПК) также исследовалось многопараметрическим FACS анализом. Результаты указали, что hIL-17A связывался фактически со всеми исследованными субпопуляциями МКПК, затем как hIL-17F не показал поддающееся обнаружению связывание с любой из этих групп. Это совместимо со способностью hIL-17RA связывать hIL17A, но не hIL-17F, с высоким сродством и со способностью обнаруживать мРНК для hIL-17RC в МКПК. Все вместе эти данные указывают, что IL-17RC предпочтительно экспрессируется в некроветворных тканях, в то время как IL-17RA предпочтительно экспрессируется в кроветворных клетках. Высокое сродство связывания hIL-17A и F с hIL-17RC-трансфицированными клетками предполагает, что эффективным лекарством могла быть растворимая форма hIL-17RC. Такая молекула была эффективным антагонистом этих двух цитокинов. Чтобы проверить это непосредственно, растворимая форма человеческого hIL-17RC была произведена как белок слитого фиброцита (Fc) и испытана на способность ингибировать связывание hIL-17A и F. Эти эффекты затем сравнивали с результатами, полученными с применением растворимой формы hIL-17RA. Увеличивающиеся концентрации hIL-17RC-Ig или hIL17RA-Ig включались в реакции связывания, и анализ FACS использовался, чтобы оценить влияние растворимых рецепторов на связывание биотинилированных цитокинов с устойчиво трансфицированными клетками ПДХ. Растворимый hIL-17RC ингибировал связывание и hIL-17FA и F до близкой степени, тогда как слитый белок Fc другого члена семейства IL-17R, hIL-17RD, не имел никакого эффекта. С другой стороны, растворимый hIL-17RA эффективно блокировал связывание hIL-17A, но не имел, по существу,никакого влияния на связывание hIL-17F. Подобные результаты были получены, исследуя связываниеhIL-17 А с кроветворными клетками. Это связывание эффективно блокировало применение hIL-17RA-Ig и hIL-17RC-Ig, но не hIL-17RD-Ig. Эти данные совместимы с результатами, полученными из измерений сродства, и указывают, что растворимые рецепторы ведут себя также, как их формы, фиксированные мембраной. Как дополнительное исследование способности человеческого hIL-17RC-Ig связываться с hIL-17A иF, сродство растворимого рецептора к этим цитокинам оценивали, используя анализ Biacore. Растворимый hIL-17RC, связанный как с hIL-17A, так и с F, с высоким сродством (табл. 2), оказывая дополнительную поддержку идее использовать этот реагент как антагонист эффектов как hIL-17A, так и F, invivo. Конкретно, растворимые рецепторы захватывались на чипы, и эксперименты по связыванию выполняли, как описано ниже.ND=связывание не обнаружено. Количество сплайс-вариантов у людей намного больше, поэтому авторы выполняли свои начальные эксперименты только на субпопуляции этих молекул. Молекулы, выбранные для этого анализа, также отличались по их включению или исключению из экзона 7, но, в отличие от мыши, все сплайс-варианты включали весь экзон 8. Криптический сплайс-акцептор, найденный в середине последовательности мышиного экзона 8, не присутствует в человеческом экзоне 8. Однако другие испытанные сплайс-варианты включали или исключали экзон 12 hIL-17RC. Эти варианты обозначали hIL-17RCx1 (идентичный по составу экзона мышиному x1 выше), hIL-17RCx4 (идентичный по составу экзона мышиному х 4 выше), hIL17RCx2 и hIL-17RCx7. Снова, эти сплайс-варианты быстро экспрессировались в клетки 293F и испытавались на их способность связывать биотинилированные мышиные и человеческие IL-17A и F, результаты суммированы в табл. 3. Таблица 3(+) указывает поддающееся обнаружению, значительное связывание цитокина, как оценено значительным увеличением флюоресценции FACS. (-) указывает на отсутствие значительного изменения флюоресценции. Совместимый с экспериментами, представленными ранее, hIL-17RCx1 связывался как с hIL-17A,так и с F, но, не связывался ни с одним цитокином мыши. hIL-17RCx4 также связывался с обоими человеческими цитокинами, и как его мышиный двойник, он связывался с mIL-17F, но не с mIL-17A. hIL17RCx2 и х 7 не в состоянии связываться с любым из четырех испытанных цитокинов, хотя они ясно экспрессировались на поверхности трансфицированных клеток, начиная с поликлональной антисыворотки против hIL-17RC, меченых клеток CD8+ (данные не показаны). Эти результаты связывания честно повторялись в устойчиво трансфицированных клетках ПДХ также. Все вместе, эти данные поддерживают заключения относительно существенных участков белка IL-17RC, нужных для связывания с человеческими цитокинами. Многочисленные публикации включали IL-17A и, в меньшей степени, IL-17F, как вносящие вклад в прогресс болезни и тяжесть коллагениндуцированного артрита (КИА) мышей и человеческого ревматоидного артрита. Была исследована экспрессия mIL-17A и F в суставах или лимфатических узлах дренирования (ЛУД) мышей, которых иммунизировали коллагеном, чтобы вызвать КИА. Анализ полимеразноцепной реакцией (ПЦР) в режиме реального времени ясно продемонстрировал, что оба цитокина активировались в обеих тканях в патологически измененных мышах относительно неиммунизированных контрольных групп, ясно указывая, что экспрессия коррелировала с болезнью. Кроме того, относительная экспрессия mIL-17RA и mIL-17RC также исследовалась в тех же самых тканях. Однако в этом случае не было воспроизводимой корреляции экспрессии ни одного рецептора с болезнью. Кроме того, что было очевидно, было несоответствие в экспрессии при сравнении ЛУД с некроветворной тканью (задняя нога). В согласии с предыдущими результатами, что касается экспрессии человеческих рецепторов, mIL-17RA,как было найдено, более высоко экспрессируется в кроветворной ткани, a mIL-17RC более высоко экспрессируется в некроветворной ткани. Эти данные предполагают, что экспрессия mIL-17A и экспрессияmIL-17F коррелируют с болезнью, так что оба из необходимых рецепторов присутствуют в патологически измененной и нормальной ткани, и предполагают, что нейтрализация этих цитокинов может быть эффективной терапией, чтобы предотвратить развитие болезни. 2-6 015351 Соответственно родственным рецептором для IL-17A и F, как показано, является IL-17RC. Особенно, hIL-17RC связывается с hIL-17A и F с похожими величинами сродства. Так как эти два члена семейства IL-17 имеют 55% идентичных последовательностей, поэтому, возможно, не удивительно, что они имеют одинаковые рецепторы. Однако hIL-17RA связывает hIL-17A с высоким сродством, но связываетhIL-17RA не будет связывать hIL-17F. Применение состоит в том, что клетки, которые экспрессируютhIL-17RC, должны отвечать как на hIL-17A, так и на F, затем как клетки, которые экспрессируют толькоhIL-17RA, отвечают только на IL-17A. У этого различия есть потенциал, чтобы показать, как эти цитокины влияют на различные ткани. Через экспрессионный анализ показано, что, хотя IL-17RA экспрессируется повсеместно, он более высоко экспрессируется в кроветворных клетках, затем как IL-17RC имеет тенденцию экспрессироваться в некроветворных тканях без экспрессии в кроветворных клетках. В соответствии с этим, все субпопуляции мононуклеарных клеток человеческой периферической крови связывают hIL-17A, но не связывают hIL-17F. Кроме того, это предполагает, что некроветворные ткани должны отвечать как на IL-17A, так и на F, тогда как кроветворные клетки должны отвечать только на IL-17A. Это исследование связывания цитокина с различными сплайс-вариантами IL-17RC выявляет два участка рецептора, которые являются существенными для связывания цитокина, и есть тонкие различия в характеристиках связывания мышиных и человеческих цитокинов. Кроме того, эти характеристики согласуются для цитокинов независимо от вида исследованного рецептора. Как показано данными, представленными в табл. 3, экзон 12 и все экзоны 8 требуются для hIL-17A и F, чтобы связываться с IL-17RC,так как только эти цитокины связываются с человеческими x1 вариантами и человеческими х 4 вариантами. Каждая из этих изоформ включает все экзоны 8 и экзон 12, хотя они отличаются относительно того,включается ли экзон 7 или нет. Это подразумевает, что экзон 7 необязателен для связывания человеческих цитокинов. Важность генерирования антагониста как к функции IL-17A, так и к IL-17F кажется ясной из доступной информации, которая показывает сильную корреляцию между экспрессией IL-17A и F и развитием многих аутоиммунных и воспалительных заболеваний. Эти два цитокина вызывают другие воспалительные цитокины и хемокины, так же как матриксные металлопротеазы, которые способствуют деструкции коллагена и кости в аутоиммунном артрите. Этот реагент должен служить эффективным терапевтическим средством для ревматоидного артрита и в других воспалительных заболеваниях, в которых hIL17 А и F играют роль. Таким образом, растворимые формы человеческого IL-17RC разработаны, чтобы служить антагонистом как к IL-17A, так и к IL-17F. Терапевтически, эти растворимые полипептиды IL-17RC эффективны. Однако из-за многочисленных факторов растворимый IL-17RC легко не секретируется многочисленными и разными производящими системами, доступными в технике. И при этом не секретируется в адекватных количествах, необходимых в производственных целях. Таким образом, есть потребность в технике развивать антагонисты к IL-17A и IL-17F, которые могут быть экспрессированы и секретированы в количествах, которые могут быть масштабированы для производства. Соответственно настоящее изобретение отвечает этой потребности, обеспечивая антагонисты к IL17A и IL-17F, которые могут быть экспрессированы и секретированы. Конкретно, настоящее изобретение основано на развитии и открытии ряда естественно не встречающихся растворимых молекул или растворимых полипептидов, которые связываются с, противодействуют и (или) блокируют связываниеIL-17A и IL-17F с их рецепторами. Эти растворимые полипептиды включают участки IL-17RC. Эти растворимые полипептиды могут также включить участки как IL-17RC, так и IL-17RA (IL-17RC/IL-17RA). Один такой предпочтительный вариант представлен на фиг. 4 А и 4 В, так же как в последовательностях SEQ ID NO:157 и 158. Этот растворимый полипептид включает экзоны 1-6 человеческого IL-17RAID NO:2). Более конкретно, этот растворимый полипептид сливают с молекулой фиброцита (Fc), такой как Fc5, как содержится в последовательностях SEQ ID NO:157 и 158. Однако специалист в технике легко признал бы, что любая молекула Fc может быть использована, так же как любая другая молекула, которая приводила бы к димеризации. Также антагонисты к активности IL-17F и IL-17A, такие как IL-17RC и IL-17RC/IL-17RA, растворимые рецепторы по настоящему изобретению, полезны в терапевтическом лечении воспалительных болезней, особенно как антагонисты как к IL-17F, так и к IL-17A, по отдельности или вместе, в лечении болезней, включающих эти молекулы. Кроме того, антагонисты к активности IL-17 А и активности IL17F, такие как растворимые рецепторы по настоящему изобретению, полезны в терапевтическом лечении других воспалительных болезней, например, чтобы связывать, блокировать, ингибировать, снижать, противодействовать или нейтрализовать IL-17F и IL-17A (или индивидуально или вместе), чтобы лечить псориаз, атопический и контактный дерматит, воспалительную болезнь кишечника (ВБК), синдром раздражения толстой кишки (СРК), колит, эндотоксемию, артрит, ревматоидный артрит, псориатический артрит, респираторное заболевание взрослых (ARD), септический шок, полиорганную недостаточность,воспалительное повреждение легкого, такое как астма, хроническую обструктивную болезнь легких(ХОБЛ), гиперреактивность дыхательных путей, хронический бронхит, аллергическую астму, бактери-7 015351 альную пневмонию, псориаз, экзему и воспалительную болезнь кишечника, такую как неспецифический язвенный колит и болезнь Крона, инфекцию Helicobacter pylori, интраабдоминальные спайки и/или абсцессы как результаты перитонеального воспаления (т.е. от инфекции, раны и т.д.), системную волчанку,эритематоз (SLE), рассеянный склероз, системный склероз, нефротический синдром, отторжение аллотрансплантата органа, болезнь - пересаженная ткань против хозяина (GVHD), отторжение трансплантата почки, легкого, сердца, и т.д., артрит, вызванный стрептококковой клеточной оболочкой (SCW),остеоартрит, гингивит/периодонтит, герпетический стромальный кератит, рак, включая простату, почки,ободочную кишку, яичники, шейку матки, лейкоз, ангиогенез, рестеноз и болезнь Кавасаки. Субъединицы рецепторов цитокина характеризуются многодоменной структурой, включающей домен, связывающий лиганд, и эффекторный домен, который обычно включается в трансдукцию сигнала. Мультимерные рецепторы цитокина включают мономеры, гомодимеры (например, рецептор фактора роста, полученного из тромбоцитов (ФРПТ,иизоформы), рецептор эритропоэтина, MPL [рецептор тромбопоэтина] и рецептор колониестимулирующего фактора гранулоцитов (ГКСФ, гетеродимеры,которых субъединицы каждая имеет лигандсвязывающий и эффекторный домены (например, рецептор ФРПТ,изоформу) и мультимеры, имеющие составляющие субъединицы с непарными функциями(например, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7 и рецепторы ГМ-КСФ). Некоторые рецепторные субъединицы являются общими у многих рецепторов. Например, субъединица AIC2B, которая не может связывать лиганд самостоятельно, но включает внутриклеточный домен трансдукции сигнала, является компонентом рецепторов ГМ-КСФ и IL-3. Много рецепторов цитокина могут быть помещены в одно из четырех близких семейств на основе их структур и функций. Гемопоэтические рецепторы класса I, например,характеризуются наличием домена, содержащего сохраненные остатки цистеина и мотив WSXWS. Дополнительные домены, включая домены протеинкиназы; домены фибронектина типа III и домены иммуноглобулина, которые характеризуются дисульфидно-связанными петлями, присутствуют в определенных гемопоэтических рецепторах. Структура рецептора цитокина была рассмотрена Urdal, Ann. ReportsMed. Chem., 26:221-228, 1991 и Cosman, Cytokine, 5:95-106, 1993. Обычно считают, что при селективном давлении организмы приобретают новые биологические функции, новые члены семейства рецептора возникали из дублирования существующих генов рецептора, приводя к существованию мультигенных семейств. Члены семейства, таким образом, содержат остатки предкового гена, и эти характерные особенности могут эксплуатироваться при изоляции и идентификации дополнительных членов семейства. Соответственно настоящее изобретение направлено на антагонисты IL-17A и IL-17F, которые блокируют каждый соответствующий лиганд от связывания и/или передачи сигналов через соответствующий рецептор или рецепторы. В предпочтительных вариантах такие антагонисты основаны на полипептидной структуре IL-17RC,как изображено в фиг. 1-4. Рецептор IL-17RC имеет большое количество сплайс-вариантов, основанных на включении или исключении определенных экзонов. Как описано ниже, некоторые из этих экзонов требуются для связывания лиганда (IL-17A и (или) IL-17F). Настоящее изобретение базируется частично на открытии структурного подобия (домены) междуIL-17RC и другими членами семейства IL-17, такими как IL-17RA (последовательность SEQ ID NO:21). Конкретно, три домена были идентифицированы. 1) Домен 1 (последовательность SEQ ID NO:159 и 160) включает экзоны 8-10 из IL-17RC. Это соответствует аминокислотным остаткам 193-276 из IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2) и аминокислотным остаткам 208-291 из IL-17RCx4 (последовательность SEQ ID NO:166). 2) Домен 2 (последовательность SEQ ID NO:161 и 162) включает экзоны 11-13 из IL-17RC. Это соответствует аминокислотным остаткам 277-370 из IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2) и аминокислотным остаткам 292-385 из IL-17RCx4 (последовательность SEQ ID NO:166). 3) Домен 3 (последовательность SEQ ID NO:163 и 164) включает экзоны 8-10 из IL-17RC. Это соответствует аминокислотным остаткам 371-447 из IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2) и аминокислотным остаткам 386-462 из IL-17RCx4 (последовательность SEQ ID NO:166). Таким образом, настоящее изобретение направлено на растворимые полипептиды IL-17RC на основе различных комбинаций экзонов, изображенных в фиг. 1. Конкретно, примеры этих растворимых полипептидов включают следующее. 1) Вариант 1210 (последовательности SEQ ID NO:67 и 68), который включает экзоны 1-6 и 8-16 из человеческого IL-17RCx1, слитого с Fc10 (последовательности SEQ ID NO:174 и 175) через линкер (последовательности SEQ ID NO:176 и 177). Вариант 1210 также имеет препросигнальный пептид из otPA(полипептидная последовательность, показанная в SEQ ID NO:178). Fc5 или любой эквивалент, известный в технике, может также использоваться вместо Fc10. 2) Вариант 1390 (последовательности SEQ ID NO:69 и 70), который включает экзоны 1-6 и 8-16 человеческого IL-17RCx1, слитого с Fc10 (последовательности SEQ ID NO:174 и 175). Вариант 1390 также имеет нативную сигнальную последовательность, Fc5, или любой эквивалент, известный в технике, может также использоваться вместо Fc10. 3) Вариант 1341 (последовательности SEQ ID NO:71 и 72), который включает экзоны 1-6 мышиногоIL-17RA и 8-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc10 (последовательности SEQ ID NO:174 и 175) через линкер (последовательности SEQ ID NO:176 и 177). Вариант 1341 также имеет сигнальный пептид мышиного IL-17RA (последовательность SEQ ID NO:181). Fc5 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc10. 4) Вариант 1342 (последовательности SEQ ID NO:73 и 74), который включает экзоны 8-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc10 (последовательности SEQ ID NO:174 и 175) через линкер (последовательности SEQ ID NO:176 и 177). Вариант 1342 также имеет сигнальный препропептид из otPA (последовательность SEQ ID NO:178). Fc5 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc10. 5) Вариант S1 (последовательности SEQ ID NO:77 и 78), который включает экзоны 1-7 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S1 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 6) Вариант S2 (последовательности SEQ ID NO:81 и 82), который включает экзоны 1-8 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S2 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 7) Вариант S3 (последовательности SEQ ID NO:85 и 86), который включает экзоны 1-9 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S3 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 8) Вариант S4 (последовательности SEQ ID NO:89 и 90), который включает экзоны 1-10 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S4 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 9) Вариант S5 (последовательности SEQ ID NO:93 и 94), который включает экзоны 1-11 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S6 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 10) Вариант S6 (последовательности SEQ ID NO:97 и 98), который включает экзоны 14-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S6 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 11) Вариант S7 (последовательности SEQ ID NO:101 и 102), который включает экзоны 11-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S7 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 12) Вариант S10 (последовательности SEQ ID NO:105 и 106), который включает экзоны 7-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S10 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 13) Вариант S11 (последовательности SEQ ID NO:109 и 110), который включает экзоны 1-7 и 14-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S11 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике,также может использоваться вместо Fc5. 14) Вариант S12 (последовательности SEQ ID NO:113 и 114), который включает экзоны 1-7 и 11-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S1 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике,также может использоваться вместо Fc5. 15) Вариант S13 (последовательности SEQ ID NO:117 и 118), который включает экзоны 1-13 человеческого IL-17RCx1 и экзоны 7-9 человеческого IL-17RA , слитые с Fc5 (последовательности SEQ IDNO:179 и 180). Вариант S13 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 16) Вариант S14 (последовательности SEQ ID NO:121 и 122), который включает экзоны 1-6 мышиного IL-17RA, экзоны 8-13 человеческого IL-17RCx1 и экзоны 7-9 мышиного IL-17RA, слитые с Fc5 (последовательности SEQ ID NO:179 и 180). Вариант S14 также имеет нативную сигнальную последовательность. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 17) Вариант 1407 (последовательности SEQ ID NO:139 и 140), который включает экзоны 1-10 человеческого IL-17RA и экзоны 8-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ IDNO:179 и 180). Вариант 1407 также имеет нативную сигнальную последовательность из человеческогоIL-17RC. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 18) Вариант 1459 (последовательности SEQ ID NO:151 и 152), который включает экзоны 1-6 и 8-16Leu21Ala (по сравнению с IL-17RCx1). Вариант 1459 также имеет препро сигнальный пептид из otPA(полипептидная последовательность, показанная в SEQ ID NO:178). Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. 19) Вариант 1454 (последовательности SEQ ID NO:157 и 158), который включает экзоны 1-6 человеческого IL-17RA и экзоны 8-16 человеческого IL-17RCx1, слитые с Fc5 (последовательности SEQ IDNO:179 и 180). Вариант 1454 также имеет нативный сигнальный пептид из человеческого IL-17RA. Fc10 или любой эквивалент, известный в технике, также может использоваться вместо Fc5. Вышеописанные варианты представляют только ограниченное число вариантов по настоящему изобретению. Специалист в технике мог бы легко и без неуместного экспериментирования разработать и испытать другие варианты IL-17RC и (или) IL-17RC/IL-17RA, основанные на разработке по настоящей заявке и на определенных фиг.1-4, включенных здесь. Например, другие сигнальные пептиды, которые могут применяться вместо раскрытых выше,включают: сигнальный пептид человеческого гормона роста (последовательности SEQ ID NO:168 и 169),переменную область тяжелой цепи мышиного иммуноглобулина (VH 26-10) (последовательность SEQ IDNO:170 и 171) или человеческий CD33 (последовательность SEQ ID NO:172 и 173). Среди других изобретений настоящее изобретение обеспечивает новое применение растворимых рецепторов по настоящему изобретению. Эти растворимые рецепторы могут базироваться исключительно на IL-17RC (обозначаемый "IL-17RC", или "растворимый IL-17RC", или "sIL-17RC", которые все могут использоваться здесь попеременно) или могут быть основаны на участках объединения IL-17RA с IL17RC ("IL-17RC/IL-17RA", или "гибридный RC/RA RC/RA", или любые их вариации, которые могут использоваться здесь попеременно). Настоящее изобретение также обеспечивает растворимые полипептидные фрагменты и слитые белки IL-17RC и IL-17RC/IL-17RA для использования в человеческих воспалительных и аутоиммунных болезнях. Растворимые рецепторы по настоящему изобретению могут использоваться, чтобы блокировать, ингибировать, уменьшать, противодействовать или нейтрализовать активность либо IL-17F, либо IL-17A, или как IL-17A, так и IL-17F в лечении воспаления и воспалительных заболеваний, таких как псориаз, псориатический артрит, ревматоидный артрит, эндотоксемия, ВБК,СРК, колит, астма, отторжение аллотрансплантата, иммуноопосредованные почечные болезни, гепатобилиарные болезни, рассеянный склероз, атеросклероз, промотирование роста опухоли, или дегенеративная болезнь суставов и другие воспалительные состояния, раскрытые здесь. Иллюстративная нуклеотидная последовательность, которая кодирует человеческий IL-17RC (IL17RCx1), обеспечивается последовательностью SEQ ID NO:1; закодированный полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:2. IL-17RC функционирует как рецептор для обоих IL-17A (последовательности SEQ ID NO:13 и 14) и IL-17F (последовательности SEQ ID NO:15 и 16). IL-17RC может действовать как мономер, гомодимер или гетеродимер. Предпочтительно IL-17RC действует как гомодимерный рецептор для IL-17A и для IL-17F. Как описано в настоящем изобретении, либо мономерный, либо гомодимерный рецептор может включать только один IL-17RC, или он может включать участки других рецепторов семейства IL-17, такие как IL-17RA (IL-17RC/IL-17RA). Также настоящее изобретение охватывает растворимые рецепторы, которые включают участки IL-17RC в комбинации с IL-17RA, IL-17RE или любым другим рецептором семейства IL-17. IL-17RC может также действовать как гетеродимерная субъединица рецептора для цитокина, родственного IL-17. Например, IL-17RC может образовывать гетеродимер с IL-17RA или другим рецептором, подобным IL-17. IL-17RC раскрыт в заявке на патент США 10/458647 и в заявке WIPO WO 01/04304, которые обе включены здесь в их полноте ссылкой. Анализ человеческого клона кДНК, кодирующего IL-17RC (последовательность SEQ ID NO:1), выявил открытую рамку считывания, кодирующую 692 аминокислотных остатка (последовательность SEQ IDNO:2), включающую предполагаемую сигнальную последовательность из приблизительно 20 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 1-20 из последовательности SEQ ID NO:2), внеклеточный связывающий лиганд домен из приблизительно 431 аминокислотного остатка (аминокислотные остатки 21-452 из последовательности SEQ ID NO:2; последовательности SEQ ID NO:3), трансмембранный домен из приблизительно 20 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 453-473 из последовательности SEQ ID NO:2) и внутриклеточный домен из приблизительно 203 аминокислотных остатков(аминокислотные остатки 474-677 из последовательности SEQ ID NO:2). Кроме того, связывающий лиганд домен представлен последовательностью SEQ ID NO:22. Еще одна иллюстративная нуклеотидная последовательность, которая кодирует вариантный человеческий IL-17RC, определяемый как "IL-17RCx4", обеспечивается последовательностью SEQ IDNO:165, кодированный полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:166. Предсказанный сигнальный пептид представляет собой остатки 1-60 из последовательности SEQ ID NO:165 и 1-20 из последовательности SEQ ID NO:166; внеклеточный домен состоит из остатков 61-1401 из последовательности SEQ ID NO:165 и 21-467 из последовательности SEQ ID NO:166; трансмембранный домен состоит из остатков 1402-1464 из последовательности SEQ ID NO:165 и 468-488 последовательности SEQ IDNO:166; и внутриклеточный домен состоит из остатков 1465-2121 из последовательности SEQ ID NO:165 и 489-707 из последовательности SEQ ID NO:166.- 10015351 Еще одна иллюстративная нуклеотидная последовательность, которая кодирует вариантный человеческий IL-17RC, обозначаемый как "IL-17RC-1", обеспечивается последовательностью SEQ ID NO:4,кодированный полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:5. IL-17RC-1 раскрыт в заявке на патент США 10/458647 и в заявке WIPO W0 01/04304, которые обе включены здесь в их полноте ссылкой. Секвенирование показало, что IL-17RC-1 представляет собой укороченную форму полипептидного рецептора. Таким образом, IL-17RC-1 испытывает недостаток в аминокислотных остатках 1-113 из последовательности SEQ ID NO:2. Последовательность SEQ ID NO:10 представляет аминокислотную последовательность полипептида IL-17RC-1, которая включает N-концевой участок IL-17RC. Сравнение аминокислотных последовательностей IL-17RC и IL-17RC-1 также указало, что эти два полипептида представляют альтернативно сплайс-варианты. Аминокислотная последовательность IL17RC включает 17-аминокислотный сегмент (аминокислотные остатки 339-355 из последовательностиSEQ ID NO:2), которой отсутствует в IL-17RC-1, в то время как в IL-17RC отсутствует после аминокислоты 479 13-аминокислотный сегмент, найденный в IL-17RC-1 (аминокислотные остатки 350-362 последовательности SEQ ID NO:5). Полипептид, который содержит оба аминокислотных сегмента, обеспечивается последовательностью SEQ ID NO:11, в то время как последовательность SEQ ID NO:12 представляет аминокислотную последовательность полипептида, у которого отсутствуют 13- и 17 аминокислотные сегменты. Еще одна иллюстративная нуклеотидная последовательность, которая кодирует вариантный человеческий IL-17RC, обозначаемый как "IL-17RC-6", обеспечивается последовательностью SEQ ID NO:23,кодированный полипептид показан последовательностью SEQ ID NO:24. IL-17RC-6 содержит делецию 25 аминокислотных остатков по сравнению с IL-17RC, как реализовано в последовательности SEQ IDNO:2. Конкретно, IL-17RC-6 не содержит аминокислотные остатки 94-118 из последовательности SEQID NO:2. Анализ человеческого клона кДНК, кодирующего IL-17RC-6 (последовательность SEQ IDNO:23), показал наличие внеклеточного лигандсвязанного домена, содержащего приблизительно 427 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 1-427 последовательности SEQ ID NO:24), трансмембранного домена, содержащего приблизительно 20 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 428-448 из последовательности SEQ ID NO:24 и внутриклеточного домена из приблизительно 218 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 449-667 последовательности SEQ ID NO:24). Иллюстративная нуклеотидная последовательность, которая кодирует вариантный мышиный IL17RC, обеспечивается последовательностью SEQ ID NO:25; кодированный полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:26. Мышиный IL-17RC функционирует как рецептор для обоих мышиного IL17 А (последовательность SEQ ID NO:17 и 18) и мышиного IL-17F (последовательность SEQ ID NO:19 и 20). Анализ мышиного клона кДНК, кодирующего IL-17RC (последовательность SEQ ID NO:25), выявил внеклеточный лигандсвязывающий домен из приблизительно 449 аминокислотных остатков последовательности SEQ ID NO:27. Кроме того, лигандсвязывающий домен представлен последовательностьюSEQ ID NO:28. Еще одна иллюстративная нуклеотидная последовательность, которая кодирует вариантный мышиный IL-17RC, обеспечивается последовательностью SEQ ID NO:29; кодированный полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:30. Ген IL-17RC находится в хромосоме 3 р 25-3 р 24. Как обсуждается ниже, эта область связана с различными нарушениями и болезнями. Нозерн-блоттинг анализ указывает, что есть сильная экспрессия гена IL-17RC в тканях щитовидной железы, надпочечника, простаты и печени и меньшая экспрессия в тканях сердца, тонкой кишки, желудка и трахеи. Напротив, есть слабая или нет никакой экспрессии в мозге, плаценте, легких, скелетных мышцах, почках, поджелудочной железе, селезенке, тимусе, яичнике, ободочной кишке, лейкоцитах периферической крови, спинном мозге, лимфатических узлах и костном мозге. Эти наблюдения показывают, что последовательность IL-17RC может использоваться дифференцированно среди различных тканей. Как описано ниже, настоящее изобретение обеспечивает изолированные полипептиды, включающие аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, или по меньшей мере 90%, или больше чем на 95, т.е. на 96, 97, 98%, или больше чем на 99% либо больше идентична аминокислотной последовательности сравнения 21-692 из последовательности SEQ ID NO:2,в которой изолированный полипептид специфично связывается с антителом, которое специфично связывается с полипептидом, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2. Настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды, включающие аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или на по меньшей мере 90% идентична аминокислотной последовательности сравнения, выбранной из группы, состоящей из: (а) аминокислотных остатков 21-452 последовательности SEQ ID NO:2, (b) аминокислотных остатков 21-435 последовательности SEQ ID NO:10, (с) аминокислотных остатков 21-677 последовательности SEQ ID NO:2 и (d) аминокислотных остатков 1-692 из последовательности SEQ ID NO:2, в котором изолированный полипептид специфически связывается с антителом, которое специфично связывается с полипептидом,состоящим или из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, или из аминокислотной последо- 11015351 вательности SEQ ID NO:10. Иллюстративные полипептиды включают полипептид, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 10, 11 или 12. Настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды, включающие внеклеточный домен, в котором внеклеточный домен включает либо аминокислотные остатки 21-452 из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, либо аминокислотные остатки 21-435 из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:10. Такие полипептиды могут далее включать трансмембранный домен,который находится в карбоксильном концевом положении относительно внеклеточного домена, в котором трансмембранный домен включает аминокислотные остатки 453-473 из последовательности SEQ IDNO:2. Эти полипептиды могут также включать внутриклеточный домен, который находится в карбоксильном концевом положении относительно трансмембранного домена, в котором внутриклеточный домен включает либо аминокислотные остатки 474-677 из последовательности SEQ ID NO:2, либо аминокислотные остатки 457-673 из последовательности SEQ ID NO:10, и необязательно, сигнальную секреторную последовательность, которая находится в аминном концевом положении относительно внеклеточного домена, в котором сигнальная секреторная последовательность включает кислотные остатки 120 из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2. Настоящее изобретение также включает вариантные полипептиды IL-17RC, в которых аминокислотная последовательность вариантного полипептида разделяет идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2, выбранной из группы, состоящей по меньшей мере из 70%-ной тождественности, по меньшей мере 80%-ной тождественности, по меньшей мере 90%-ной тождественности, по меньшей мере 95%-ной тождественности или больше чем 95%-ной тождественности, в которой любое различие между аминокислотной последовательностью вариантного полипептида и аминокислотной последовательностью SEQ IDNO:2 происходит из-за одной или более консервативных замен аминокислот. Кроме того, настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды, как раскрыто выше, которые связывают IL-17F (например, человеческая полипептидная последовательность IL-17F,как показано в последовательности SEQ ID NO:16). Человеческая полинуклеотидная последовательностьIL-17F показана в последовательности SEQ ID NO:19, а соответствующий полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:20. Настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды,как раскрыто выше, которые связывают IL-17A (например, человеческая полипептидная последовательность IL-17A, как показано в последовательности SEQ ID NO:14). Человеческая полинуклеотидная последовательность IL-17A показана в последовательности SEQ ID NO:13. Мышиная полинуклеотидная последовательность IL-17A показана в последовательности SEQ ID NO:17, а соответствующий полипептид показан в последовательности SEQ ID NO:18. Настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды и эпитопы, включающие по меньшей мере 15 смежных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности SEQ IDNO:2 или 3. Иллюстративные полипептиды включают полипептиды, которые либо включают, либо состоят из последовательности SEQ ID NO:2 или 3, ее антигенного эпитопа или ее функционального фрагмента, связывающего IL-17A или IL-17F. Кроме того, настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды, как раскрыто выше, которые связываются с, блокируют, ингибируют, уменьшают, противодействуют или нейтрализуют активность IL-17F или IL-17A. Настоящее изобретение также включает вариантные полипептиды IL-17RC, в которых аминокислотная последовательность разделяет идентичность с аминокислотными остатками последовательностиSEQ ID NO:2, выбранными из группы, состоящей из по меньшей мере 70%-ной тождественности, по меньшей мере 80%-ной тождественности, по меньшей мере 90%-ной тождественности, по меньшей мере 95%-ной тождественности или больше чем 95%-ной тождественности, такой как 96, 97, 98 или больше чем 99% или больше тождественность, где любое различие между аминокислотной последовательностью вариантного полипептида и соответствующей аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 происходит из-за одной или более консервативных замен аминокислот. Такие консервативные замены аминокислот описаны здесь. Кроме того, настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды, как раскрыто выше, которые связываются с, блокируют, ингибируют, уменьшают, противодействуют или нейтрализуют активность IL-17F или IL-17A. Настоящее изобретение далее обеспечивает фармацевтические составы, включающие фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере один вектор экспрессии или рекомбинантный вирус,включающий такие векторы экспрессии. Настоящее изобретение далее включает фармацевтические составы, включая фармацевтически приемлемый носитель и полипептид или антитело, описанное здесь. Настоящее изобретение также обеспечивает слитые белки, включающие полипептид IL-17RC и фрагмент иммуноглобулина. В таких слитых белках фрагментом иммуноглобулина может быть постоянная область тяжелой цепи иммуноглобулина, такая как человеческий фрагмент Fc. Настоящее изобретение далее включает изолированные молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют такие слитые белки.- 12015351 Эти и другие аспекты изобретения станут очевидными при отсылке к следующему подробному описанию. Кроме того, различная библиография идентифицируется ниже и включается ссылкой в их полноте. В) Определения. В описании, которое следует, многие термины широко используются. Следующие определения предоставлены, чтобы облегчить понимание изобретения. Как используется здесь, "нуклеиновая кислота" или "молекула нуклеиновой кислоты" относится к полинуклеотидам, таким как дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) или рибонуклеиновая кислота(РНК), олигонуклеотидам, фрагментам, произведенным полимеразно-цепьевой реакцией (ПЦР), и фрагментам, произведенным любыми сшиванием, расщеплением, действием эндонуклеазы и действием экзонуклеазы. Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть составлены из мономеров, которые являются естественно встречающимися нуклеотидами (такими как ДНК и РНК) или аналогами естественно встречающихся нуклеотидов (например, -энантиомерными формами естественно встречающихся нуклеотидов), или их комбинацией. Модифицированные нуклеотиды могут иметь изменения во фрагментах сахаров и (или) пуринового или пиримидинового основания. Модификации сахаров включают, например,замену одной или более гидроксигрупп галогенами, алкильными группами, амино и азидогруппами, или сахара могут быть функционализированы как простые эфиры или сложные эфиры. Кроме того, весь сахарный фрагмент может быть заменен пространственно и электронно подобными структурами, такими как азасахара и карбоциклические аналоги сахаров. Примеры модификаций во фрагменте основания включают алкилированные пурины и пиримидины, ацилированные пурины или пиримидины, или другие известные гетероциклические заменители. Мономеры нуклеиновых кислот могут быть связаны фосфодиэфирными связями или аналогами таких связей. Аналоги фосфодиэфирных связей включают фосфоротиолат, фосфородитиолат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанилотиоат, фосфороанилидат, фосфороамидат и т.п. Термин "молекула нуклеиновой кислоты" также включает так называемые"пептидные нуклеиновые кислоты", которые включают естественно встречающиеся или модифицированные нуклеиновокислотные основания, присоединенные к полиамидному скелету. Нуклеиновые кислоты могут быть однонитевые или двухнитевые. Термин "комплемент молекулы нуклеиновой кислоты" относится к молекуле нуклеиновой кислоты,имеющей комплементарную нуклеотидную последовательность и обратную ориентацию по сравнению с нуклеотидной последовательностью сравнения. Например, последовательность 5' ATGCACGGG 3' является комплементарной к 5' CCCGTGCAT 3'. Термин "выродившаяся нуклеотидная последовательность" обозначает последовательность нуклеотидов, которая включает один или более выродившихся кодонов по сравнению с молекулой нуклеиновой кислоты сравнения, которая кодирует полипептид. Выродившиеся кодоны содержат различные триплеты нуклеотидов, но кодируют тот же самый аминокислотный остаток (т.е. триплеты GAU и GAC, каждый кодирует Asp). Термин "структурный ген" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая транскрибируется в информационную РНК (иРНК), которая затем транслируется в аминокислотную последовательность,характеризующую определенный полипептид."Изолированная молекула нуклеиновой кислоты" является молекулой нуклеиновой кислоты, которая не включается в геномную ДНК организма. Например, молекула ДНК, которая кодирует фактор роста, который был отделен от геномной ДНК клетки, является изолированной молекулой ДНК. Другим примером изолированной молекулы нуклеиновой кислоты является химически синтезированная молекула нуклеиновой кислоты, которая не включается в геном организма. Молекула нуклеиновой кислоты,которая была изолирована из определенной частицы, меньше, чем полная молекула ДНК хромосомы из частицы."Конструкт молекулы нуклеиновой кислоты" является молекулой нуклеиновой кислоты, либо одно-, либо двухнитевой, которая была изменена человеческим вмешательством, так чтобы содержать сегменты нуклеиновой кислоты, объединенные и размещенные по соседству в порядке, не существующем в природе."Линейная ДНК" обозначает некольцевые молекулы ДНК, имеющие свободные 5' и 3' концы. Линейная ДНК может быть получена из замкнутых кольцевых молекул ДНК, таких как плазмиды, ферментативным расщеплением или физической разбивкой."Комплементарная ДНК (кДНК)" является однонитевой молекулой ДНК, которая образуется из матрицы мРНК ферментом обратная транскриптаза. Как правило, применяется праймер, комплементарный к участкам мРНК, для инициирования обратной транскрипции. Специалисты в технологии также применяют термин "кДНК" при обращении к двухнитевой молекуле ДНК, состоящей из такой однонитевой молекулы ДНК и комплементарной к ней нити ДНК. Термин "кДНК" также относится к клону молекулы кДНК, синтезируемому из матрицы РНК."Промотор" представляет собой нуклеотидную последовательность, которая направляет транскрипцию структурного гена. Как правило, промотор расположен в некодирующей 5' области гена, ближайшего к участку начала транскрипции структурного гена. Элементы последовательности в пределах промо- 13015351 торов, которые функционируют в инициировании транскрипции, часто характеризуются согласованностью нуклеотидных последовательностей. Эти промоторные элементы включают участки, связывающие РНК-полимеразу, последовательности TATA, последовательности СААТ, дифференционноспецифические элементы (DSE); McGehee et al., Mol. Endocrinol., 7:551 (1993), элементы реакции циклического АМФ (CRE), элементы реакции сыворотки (SRE); Treisman, Seminars in Cancer Biol., 1:41 (1990),элементы реакции глюкокортикоида (GRE) и сайты связывания других факторов транскрипции, таких как CRE/ATF (O'Reilly et al., J. Biol. Chem. 2957:19938 (1992, АР 2 (Ye et al., J. Biol. Chem. 269:25128(1994, SP1, белок связывания элемента реакции цАМФ (CREB; Loeken, Gene Expr. 3:253 (1993 и октамерные факторы (см. в общем Watson et al., eds., Molecular Biology of the Gene, 4th ed. (The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. 1987) и Lemaigre и Rousseau, Biochem. J. 303:1 (1994. Если промотор представляет собой индуцируемый промотор, то скорость транскрипции растет в ответ на индуцирующее средство. Напротив, скорость транскрипции не регулируется индуцирующим средством, если промотор представляет собой конститутивный промотор. Ингибируемые промоторы также известны."Коровый промотор" содержит существенные нуклеотидные последовательности для промоторной функции, включающие ТАТА-блок и начало транскрипции. По этому определению основной промотор может иметь или не может иметь поддающуюся обнаружению активность в отсутствие определенных последовательностей, которые могут усиливать активность или придавать тканеспецифическую активность."Регуляторный элемент" представляет собой нуклеотидную последовательностью, которая модулирует активность корового промотора. Например, регуляторный элемент может содержать нуклеотидную последовательность, которая связывается с клеточными факторами, позволяющими транскрипцию исключительно или избирательно в определенных клетках, тканях или органеллах. Эти типы регуляторных элементов обычно связываются с генами, которые экспрессируются "клеточноспецифичным", "тканеспецифичным" или "органелласпецифичным" образом."Усилитель" представляет собой тип регуляторного элемента, который может увеличивать эффективность транскрипции, независимо от расстояния или ориентации усилителя относительно участка начала транскрипции."Гетерологическая ДНК" относится к молекуле ДНК или популяции молекул ДНК, которые не существуют естественно в пределах данной клетки-хозяина. Молекулы ДНК, гетерологичные к определенной клетке-хозяину, могут содержать ДНК, полученную из разновидности клетки-хозяина (т.е. эндогенная ДНК), пока такая ДНК хозяина соединяется с нехозяйской ДНК (т.е. экзогенной ДНК). Например,молекула ДНК, содержащая сегмент нехозяйской ДНК, кодирующий полипептид, реально связанный с сегментом ДНК хозяина, включающим промотор транскрипции, как полагают, является гетерологической молекулой ДНК. Наоборот, гетерологическая молекула ДНК может включать эндогенный ген, реально связанный с экзогенным промотором. Как другая иллюстрация, молекула ДНК, включающая ген,полученный из клетки дикого типа, как полагают, является гетерологической ДНК, если эта молекула ДНК вводится в мутантную клетку, у которой нет гена дикого типа."Полипептид" представляет собой полимер аминокислотных остатков, соединенных пептидными связями, произведенный естественно или синтетически. Полипептиды с меньше чем приблизительно 10 аминокислотными остатками обычно упоминаются как "пептиды"."Белок" представляет собой макромолекулу, включающую одну или более полипептидных цепей. Белок может также включить непептидные компоненты, такие как углеводные группы. Углеводы и другие непептидные заменители могут быть добавлены к белку клеткой, в которой белок производится, и будет меняться в зависимости от типа клетки. Белки определяются здесь на основе их аминокислотной структуры скелета; заменители, такие как углеводные группы, обычно не конкретизируются, но могут присутствовать тем не менее. Пептид или полипептид, кодированный "нехозяйской" молекулой ДНК, является "гетерологическим" пептидом или полипептидом."Клонирующий вектор" представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, такую как плазмида,космида или бактериофаг, которые имеют способность реплицироваться автономно в клетке-хозяине. Клонирующие векторы обычно содержат один или небольшое количество участков узнавания рестрикционной эндонуклеазы, которые позволяют вставку молекулы нуклеиновой кислоты определимым способом без потери существенной биологической функции вектора, так же как нуклеотидную последовательность, кодирующую маркерный ген, который пригоден для использования в идентификации и селекции клеток, преобразованных клонирующим вектором. Маркерные гены обычно включают гены, которые обеспечивают устойчивость тетрациклина или устойчивость ампициллина."Вектор экспрессии" представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую ген, который экспрессируется в клетке-хозяине. Как правило, вектор экспрессии включает промотор транскрипции, ген и терминатор транскрипции. Экспрессия гена обычно помещается под контроль промотора и такой ген, как говорят, "реально связан с" промотором. Точно так же регуляторный элемент и коровый промотор реально связаны, если регуляторный элемент модулирует активность корового промотора."Рекомбинантный хозяин" является клеткой, которая содержит гетерологическую молекулу нуклеиновой кислоты, такую как клонирующий вектор или вектор экспрессии. В настоящем контексте пример рекомбинантного организма представляет собой клетку, которая производит IL-17RC из вектора экспрессии. Напротив, IL-17RC может быть произведен клеткой, которая является "естественным источником" IL-17RC и у которой нет вектора экспрессии."Интегральные трансформанты" являются рекомбинантными клетками-хозяевами, в которых гетерологическая ДНК интегрировалась в геномную ДНК клеток."Слитый белок" является гибридным белком, экспрессированным молекулой нуклеиновой кислоты,включающей нуклеотидные последовательности по меньшей мере двух генов. Например, слитый белок может включать по меньшей мере часть полипептида IL-17RC, слитого с полипептидом, который связывается с матрицей сродства. Такой слитый белок обеспечивает средство выделять большие количестваIL-17RC, используя афинную хроматографию. Термин "рецептор" обозначает белок, ассоциированный с клеткой, который связывает биоактивную молекулу, которую называют "лигандом". Это взаимодействие опосредует влияние лиганда на клетку. Рецепторы могут быть мембраносвязанными, цитозольными или ядерными; мономерными (например,рецептор тироид-стимулирующего гормона, бета-адренергический рецептор) или мультимерными (например, рецептор тромбоцитпроизводящего фактора роста (ТПФР), рецептор гормона роста, рецепторIL-3, рецептор ГМ-КСФ, рецептор Г-КСФ, рецептор эритропоэтина и рецептор IL-6). Мембраносвязанные рецепторы характеризуются многодоменной структурой, включающей внеклеточный лигандсвязывающий домен и внутриклеточный эффекторный домен, который обычно вовлекается в трансдукцию сигнала. В определенных мембраносвязанных рецепторах внеклеточный лигандсвязанный домен и внутриклеточный эффекторный домен располагаются в отдельных полипептидах, которые включают полный функциональный рецептор. В общем, связывание лиганда с рецептором приводит к конформационному изменению в рецепторе, которое вызывает взаимодействие между эффекторным доменом и другой молекулой (молекулами) в клетке, которая, в свою очередь, приводит к альтерации метаболизма клетки. Метаболические события,которые часто связываются со взаимодействием лиганд-рецептор, включают генную транскрипцию, фосфорилирование, дефосфорилирование, увеличение продукции циклического АМФ, мобилизацию клеточного кальция, мобилизацию мембранных липидов, клеточную адгезию, гидролиз инозитлипидов и гидролиз фосфолипидов."Растворимый рецептор" представляет собой рецепторный полипептид, который не связывается с мембраной клетки. Растворимые рецепторы представляют собой обычно лигандсвязанные рецепторные полипептиды, которые испытывают недостаток в трансмембранных и цитоплазматических доменах и других связываниях с клеточной мембраной, таких как через гликофосфоинозит (ГФИ). Растворимые рецепторы могут включать дополнительные аминокислотные остатки, такие как метки сродства, которые предусматривают очистку полипептида или предусматривают места для прикрепления полипептида к субстрату, или последовательности константной области иммуноглобулина. Многие клеточноповерхностные рецепторы имеют естественные, растворимые двойники, которые производятся протеолизом или транслируются альтернативно сплайсированной мРНК. Растворимые рецепторы могут быть мономерными, гомодимерными, гетеродимерными или мультимерными, с мультимерными рецепторами,обычно не включающими больше 9 субъединиц, предпочтительно не включающими больше 6 субъединиц и наиболее предпочтительно не включающими больше 3 субъединиц. Рецепторные полипептиды,как говорят, существенно свободны от трансмембранных и внутриклеточных полипептидных сегментов,когда они не содержат достаточного количества этих сегментов, чтобы обеспечить мембранную фиксацию или трансдукцию сигнала, соответственно. Растворимые рецепторы рецепторов цитокина обычно включают внеклеточный цитокинсвязывающий домен, свободный от трансмембранного домена и внутриклеточного домена. Например, представительные растворимые рецепторы включают растворимые рецепторы для IL-17RA, как показано в последовательностях SEQ ID NO:167 (полинуклеотид) и 21 (полипептид). Это в пределах уровня специалиста в технологии выразить то, что последовательности известной последовательности рецептора цитокина включают внеклеточный цитокинсвязывающий домен,свободный от трансмембранного домена и внутриклеточного домена. Кроме того, специалист в технологии, используя генетический код, может легко определить полинуклеотиды, которые кодируют такие растворимые рецепторные полипептиды. Термин "секреторная сигнальная последовательность" обозначает последовательность ДНК, которая кодирует пептид ("секреторный пептид"), который, как компонент большего полипептида, направляет больший полипептид по секреторному пути обмена клетки, в которой он синтезируется. Больший полипептид обычно расщепляют, чтобы удалить секреторный пептид во время транзита по секреторному пути."Изолированный полипептид" представляет собой полипептид, который существенно свободен от загрязняющих клеточных компонентов, таких как углевод, липид или другие напоминающие белок примеси, связанные с полипептидом в природе. Как правило, препарат изолированного полипептида содержит полипептид в высокоочищенной форме, т.е. по меньшей мере приблизительно 80% чистоты, по- 15015351 меньшей мере приблизительно 90% чистоты, по меньшей мере приблизительно 95% чистоты, больше 95% чистоты, такой как 96, 97 или 98%, или большей чистоты, или больше 99% чистоты. Один способ показать, что определенный белковый препарат содержит изолированный полипептид - появление единственной полосы после электрофореза белкового препарата в натрийдодецилсульфат (НДС) - полиакриламидном геле - и окрашивания геля Бриллиантовым Синим Кумасси. Однако термин "изолированный" не исключает наличия того же самого полипептида в альтернативных физических формах, таких как димеры или альтернативно гликозилированные или дериватизированные формы. Термины "аминоконцевой" и "карбоксиконцевой" применяются здесь, чтобы обозначить положения в пределах полипептидов. Где контекст позволяет, эти термины применяют в отношении определенной последовательности или участка полипептида, чтобы обозначить близость или относительное положение. Например, определенная последовательность позиционированного карбоксиконца в последовательности сравнения в пределах полипептида располагается ближе к карбоксиконцу последовательности сравнения, но не обязательно в карбоксиконце полного полипептида. Термин "экспрессия" относится к биосинтезу генного продукта. Например, в случае структурного гена экспрессия включает транскрипцию структурного гена в мРНК и трансляцию мРНК в один или более полипептидов. Термин "сплайс-вариант" используют здесь, чтобы обозначить альтернативные формы РНК, транскрибированной из гена. Сплайс-вариация возникает естественно через использование альтернативных участков сплайсинга в пределах транскрибированной молекулы РНК, или реже между отдельно транскрибированными молекулами РНК, и может привести к нескольким мРНК, транскрибированным из того же самого гена. Сплайс-варианты могут кодировать полипептиды, имеющие измененную аминокислотную последовательность. Термин сплайс-вариант также используется здесь, чтобы обозначить полипептид, кодированный сплайс-вариантом мРНК, транскрибированной из гена. Как используется здесь, термин "иммуномодулятор" включает цитокины, факторы роста стволовых клеток, лимфотоксины, костимуляторные молекулы, гематопоэтические факторы и другие и синтетические аналоги этих молекул. Термин "пара комплемент/антикомплемент" обозначает неидентичные фрагменты, которые образуют нековалентно связанную, устойчивую пару при адекватных условиях. Например, биотин и авидин(или стрептавидин) являются прототипичными членами пары комплемент/антикомплемент. Другие типичные пары комплемент/антикомплемент включают пары рецептор/лиганд, антитело/антиген (или гаптен или эпитоп), полинуклеотидные пары сенсор/антисенсор и т.п. Когда желательна последующая диссоциация пары комплемент/антикомплемент, пара комплемент/антикомплемент имеет сродство связывания меньше 109 М-1."Антиидиотипное антитело" представляет собой антитело, которое связывается с переменной областью домена иммуноглобулина. В настоящем контексте антиидиотипное антитело связывается с переменной областью антитела anti-IL-17RC и, таким образом, антиидиотипное антитело подражает эпитопу"Фрагмент антитела" является участком антитела, таким как F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab и т.п. Независимо от структуры фрагмент антитела связывается с тем же самым антигеном, который узнается интактным антителом. Например, фрагмент моноклонального антитела анти-IL-17RC связывает с эпитопом IL17RC. Термин "фрагмент антитела" также включает синтетический или генно-инженерный полипептид,который связывается с определенным антигеном, таким как полипептиды, состоящие из переменной области легкой цепи, фрагменты "Fv", состоящие из переменных областей тяжелых и легких цепей, рекомбинантная одиночная цепь полипептидных молекул, в которых легкие и тяжелые переменные области соединены пептидным линкером ("scFv белки"), и минимальные единицы узнавания, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельную область."Химерное антитело" представляет собой рекомбинантный белок, который содержит переменные домены и комплементарные определяющие области, полученные из антитела грызуна, в то время как остаток молекулы антитела получают из человеческого антитела."Гуманизированные антитела" представляют собой рекомбинантные белки, в которых области, определяющие мышиную комплементарность моноклонального антитела, передавались от тяжелых и легких переменных цепей мышиного иммуноглобулина в человеческий переменный домен. Конструкция гуманизированных антител для терапевтического использования у людей, которые получают из мышиных антител, таких как антитела, которые связываются с или нейтрализуют человеческий белок, находится в пределах навыка специалиста в технологии. Как используется здесь, "терапевтическое средство" представляет собой молекулу или атом, который сопряжен с фрагментом антитела, чтобы произвести конъюгат, который полезен для терапии. Примеры терапевтических средств включают лекарства, токсины, иммуномодуляторы, хелатные комплексы,соединения бора, светочувствительные средства или краски и радиоизотопы."Поддающийся обнаружению маркер" представляет собой молекулу или атом, который может быть сопряжен с фрагментом антитела, чтобы произвести молекулу, полезную для диагноза. Примеры под- 16015351 дающихся обнаружению маркеров включают хелатные комплексы, светочувствительные средства, радиоизотопы, флуоресцентные средства, парамагнитные ионы или другие маркеры. Термин "метка сродства" применяют здесь, чтобы обозначить полипептидный сегмент, который может быть присоединен ко второму полипептиду, чтобы предусмотреть очистку или обнаружение второго полипептида или обеспечить участки для присоединения второго полипептида к субстрату. В принципе, любой пептид или белок, для которого доступно антитело или другой определенный связывающий агент, могут использоваться как метка сродства. Метки сродства включают тракт полигистидина, белок(1988, пептид, связывающий стрептавидин, или другой антигенный эпитоп или связывающий домен; см. в общем Ford et al., Protein Expression and Purification, 2:95 (1991). Молекулы ДНК, кодирующие метки сродства, доступны от коммерческих поставщиков (например, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ)."Голое антитело" представляет собой целое антитело, в противоположность фрагменту антитела,который не спрягается с терапевтическим средством. Голые антитела включают поликлональные и моноклональные антитела, так же как определенные рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные антитела. Как используется здесь, термин "компонент антитела" включает как целое антитело, так и фрагмент антитела."Иммуноконъюгат" представляет собой конъюгат компонента антитела с терапевтическим средством или поддающимся обнаружению маркером. Как используется здесь, термин "белок слитого антитела" относится к рекомбинантной молекуле,которая включает компонент антитела и полипептидный компонент IL-17RC. Примеры белка слитого антитела включают белок, который включает внеклеточный домен IL-17RC, и либо домен Fc, либо антигенсвязывающую область."Целевой полипептид" или "целевой пептид" представляет собой аминокислотную последовательность, которая включает по меньшей мере один эпитоп и которая экспрессируется на клетке-мишени,такой как опухолевая клетка, или клетка, которая несет антиген возбудителя инфекции. Т-Клетки узнают пептидные эпитопы, представленные молекулой основного комплекса гистосовместимости к целевому полипептиду или целевому пептиду, и обычно разлагают клетку-мишень или рекрутируют другие иммунные клетки к участку клетки-мишени, таким образом, убивая клетку-мишень."Антигенный пептид" представляет собой пептид, который будет связывать молекулу основного комплекса гистосовместимости (ОКГ) с получением комплекса ОКГ-пептид, который узнается Тлимфоцитом, таким образом, вызывая цитотоксическую реакцию лимфоцита после предоставления к Тклетке. Таким образом, антигенные пептиды способны связывать соответствующую молекулу основного комплекса гистосовместимости и вызывать цитотоксическую реакцию Т-лимфоцитов, такую как лизис клетки или определенное выделение цитокина против клетки-мишени, которая связывает или экспрессирует антиген. Антигенный пептид может быть связан в контексте молекулы основного комплекса гистосовместимости класса I или класса II на антигенпредставляющей клетке или на клетке-мишени. В эукариотах РНК-полимераза катализирует транскрипцию структурного гена, чтобы произвести мРНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть разработана так, чтобы содержать матрицу РНКполимеразы, в которой РНК-транскрипт имеет последовательность, которая комплементарна к последовательности определенной мРНК. РНК-транскрипт называют "антисенсорной РНК", а молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует антисенсорную РНК, называют "антисенсорным геном." Молекулы антисенсорной РНК способны связываться с молекулами мРНК, приводя к ингибированию трансляции мРНК."Антисенсорный олигонуклеотид, специфический для IL-17RC" или "антисенсорный олигонуклеотид IL-17RC" представляет собой олигонуклеотид, имеющий последовательность, (а) способную образовывать устойчивый триплекс с участком гена IL-17RC, или (b) способную образовывать устойчивый дуплекс с участком мРНК-транскрипта гена IL-17RC."Рибозим" представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая содержит каталитический центр. Термин включает ферменты РНК, аутосплайсинга РНК, саморасщепления РНК и молекулы нуклеиновой кислоты, которые выполняют эти каталитические функции. Молекулу нуклеиновой кислоты,которая кодирует рибозим, называют "ген рибозима.""Внешняя последовательность гида" представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая направляет эндогенный рибозим, R-наза Р, к конкретному виду внутриклеточной мРНК, приводя к расщеплению мРНК R-назой Р. Молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует внешнюю последовательность гида, называют "геном внешней последовательности гида". Термин "вариантный ген IL-17RC" относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая является модификацией последовательности SEQ ID NO:2. Такие варианты включают естественно встречающиеся полиморфизмы генов IL-17RC, так же как синтетических генов, которые содержат консервативные замены аминокислот- 17015351 ной последовательности SEQ ID NO:2. Дополнительные вариантные формы генов IL-17RC представляют собой молекулы нуклеиновой кислоты, которые содержат инсерции или делеции нуклеотидных последовательностей, описанных здесь. Вариантный ген IL-17RC может быть идентифицирован, например, определяя, гибридизируется ли ген с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:4, или ее комлементом при строгих условиях. Альтернативно, вариантные гены IL-17RC могут быть идентифицированы сравнением последовательностей. Две аминокислотные последовательности имеют "100%-ную идентичность аминокислотных последовательностей", если аминокислотные остатки двух аминокислотных последовательностей являются теми же самыми, когда выровнены для максимального соответствия. Точно так же две нуклеотидные последовательности имеют "100%-ную идентичность нуклеотидных последовательностей", если нуклеотидные остатки двух нуклеотидных последовательностей являются теми же самыми, когда выровнены для максимального соответствия. Сравнения последовательности могут быть выполнены, используя стандартные программы, такие как программы, включенные в набор LASERGENEbioinformatics, который производится DNASTAR (Madison, Wisconsin). Другие методы сравнения двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей, определяя оптимальное выравнивание, известны специлистам в технологии (см., например, Peruski и Peruski, Internet and New Biology: Tools forComputer Database of Nucleic Acids and Proteins" in Methods in Gene Biotechnology, p. 123-151 (CRC Press,Inc. 1997), and Bishop (ed.), Guide to Human Genome Computing, 2-nd Edition (Academic Press, Inc. 1998. Конкретные методы определения идентичности последовательностей описаны ниже. Независимо от определенного метода, используемого, чтобы идентифицировать вариантный ген IL17RC или вариантный полипептид IL-17RC, вариантный ген или полипептид, кодированный вариантным геном, может функционально характеризоваться способностью связываться специфично с антителом анти-IL-17RC. Вариантный ген IL-17RC или вариантный полипептид IL-17RC могут также функционально характеризоваться способностью связываться с лигандом, например IL-17A и (или) IL-17F, используя биологическую или биохимическую пробу, описанную здесь. Термин "аллельный вариант" применяют здесь, чтобы обозначить любой из двух или больше альтернативных форм гена, занимающего тот же самый хромосомный локус. Аллельное изменение возникает естественно через мутацию и может закончиться фенотипическим полиморфизмом в пределах совокупностей. Генные мутации могут быть тихими (никакого изменения в кодированном полипептиде) или могут кодировать полипептиды, имеющие измененную аминокислотную последовательность. Термин"аллельный вариант" также применяют здесь, чтобы обозначить белок, кодированный аллельным вариантом гена. Термин "ортолог" обозначает полипептид или белок, полученный из одного вида, который является функциональной копией полипептида или белка другого вида. Различия последовательностей среди ортологов являются результатом видообразования."Паралоги" представляют собой различные, но структурно близкие белки, сделанные организмом. Паралоги, как полагают, возникают через дубликацию гена. Например, -глобин, -глобин и миоглобин являются паралогами друг друга. Настоящее изобретение включает функциональные фрагменты генов IL-17RC. В пределах контекста этого изобретения "функциональный фрагмент" гена IL-17RC относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая кодирует участок полипептида IL-17RC, который является доменом, описанным здесь,или, по меньшей мере, специфично связывается с антителом анти-IL-17RC. Из-за неточности стандартных аналитических методов молекулярные массы и длины полимеров,как понимают, являются приблизительными величинами. Когда такая величина будет выражена как примерно X или приблизительно X, установленная величина X, как будут понимать, будет иметь точность 10%. С) Продукция полинуклеотидов или генов IL-17RA и IL-17RC. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие человеческий ген IL-17RA или IL-17RC, или полинуклеотиды, кодирующие любой из растворимых полипептидов по настоящему изобретению, могут быть получены, производя скрининг человеческой кДНК или геномной библиотеки, используя полинуклеотидные зонды, основанные на последовательности SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:4. Эти методы являются стандартными и известными и могут быть достигнуты, используя набор клонирования, доступный от коммерческих поставщиков; см., например (Ausubel et al. (eds.), Short Protocols in Molecular Biology, 3rd(1997) at p. 47-52). Молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют человеческий ген IL-17RA или IL-17RC, могут также быть получены, используя полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с олигонуклеотидными праймерами, имеющими нуклеотидные последовательности, которые основаны на нуклеотидных последова- 18015351 тельностях гена IL-17RA или IL-17RC или кДНК. Общие методы для библиотек скрининга с ПЦР предоставляются, например, Yu et al., "Use of Polymerase Chain Reaction to Screen Phage Libraries" in Methodsin Molecular Biology, Vol.15: PCR Protocols: Current Methods and Applications, White (ed.). Humana Press,Inc., 1993. Кроме того, методы применения ПЦР, чтобы выделять близкие гены, описаны, например, Preston, "Use of Degenerate Oligonucleotide Primer and the Polymerase Chain Reaction to Clone Gene Family(ed.)., Humana Press, Inc., 1993. В качестве альтернативы, ген IL-17RA или IL-17RC может быть получен синтезом молекул нуклеиновых кислот, используя взаимно праймирующие длинные олигонуклеотиды и нуклеотидные последовательности, описанные здесь (см., например, Ausubel (1995. Установленные методы, использующие полимеразную цепную реакцию, обеспечивают способность синтезировать молекулы ДНК длиной по меньшей мере две килобазы (Adang et al., Plant Molec. Biol. 21:1131 (1993), BambotAppl., 4:299 (1995. Для обзоров по синтезу полинуклеотидов см., например, Glick and Pasternak, Molecular Biotechnology, Principles and Aplications of Recombinant DNA (ASM press, 1994), Itakura et al., Annu.D) Продукция генных вариантов IL-17RA или IL-17RC. Настоящее изобретение обеспечивает много молекул нуклеиновой кислоты, включая молекулы ДНК и РНК, которые кодируют полипептиды IL-17RA или IL-17RC, раскрытые здесь. Специалисты в технологии с готовностью признают, что ввиду вырождения генетического кода значительное изменение последовательности возможно среди этих полинуклеотидных молекул. Кроме того, настоящее изобретение также обеспечивает изолированные растворимые мономерные, гомодимерные, гетеродимерные и мультимерные рецепторные полипептиды, которые включают по меньшей мере часть IL-17RC, который является существенно гомологичным рецепторному полипептиду последовательности SEQ ID NO:2. Таким образом, настоящее изобретение рассматривает молекулы нуклеиновой кислоты полипептидкодирующие IL-17RA IL-17RC, включая выродившиеся нуклеотиды последовательности SEQ ID NO:1 или последовательности SEQ ID NO:4 и их РНК эквиваленты. Специалисты в технологии с готовностью признают, что ввиду вырождения генетического кода значительное изменение последовательности возможно среди этих полинуклеотидных молекул. Последовательность SEQ ID NO:7 представляет собой выродившуюся нуклеотидную последовательность, которая охватывает все молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид IL-17RC последовательности SEQ ID NO:2. Специалисты в технологии с готовностью признают, что вырожденная последовательность SEQ ID NO:7 также обеспечивает все РНК последовательности, кодирующие последовательность SEQ ID NO:2 заменой Т на U. Таким образом, настоящее изобретение рассматривает молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид IL-17RC, включая нуклеотиды 154-2229 последовательности SEQ ID NO:1 и их РНК эквиваленты. Точно так же IL-17RC-1 вырожденная последовательность SEQ ID NO:6 также обеспечивает все РНК последовательности, кодирующие последовательность SEQ ID NO:5 заменой Т на U. Табл. 4 включает однобуквенные коды для обозначения положения выродившегося нуклеотида."Разрешение" представляет собой нуклеотиды, обозначенные кодовой буквой. "Комплемент" указывает код комплементарного нуклеотида (нуклеотидов). Например, код Y обозначает или С, или Т, а его комплемент R обозначает А или G, причем А комплементарно Т, a G комплементарно С. Выродившиеся кодоны, охватывающие все возможные кодоны для данной аминокислоты, представлены в табл. 5. Таблица 5 Каждый специалист в технологии оценит, что некоторая неясность вносится в определение выродившегося кодона, представителя всех возможных кодонов, кодирующих аминокислоту. Например, выродившийся кодон для серина (WSN), при некоторых обстоятельствах, может кодировать аргинин(AGR), а выродившийся кодон для аргинина (MGN), при некоторых обстоятельствах, может кодировать серин (AGY). Подобные отношения существуют между кодонами, кодирующими фенилаланин и лейцин. Таким образом, некоторые полинуклеотиды, охватываемые выродившейся последовательностью, могут кодировать вариантные аминокислотные последовательности, но каждый специалист в технологии может легко идентифицировать такие вариантные последовательности, обращаясь к аминокислотной последовательности SEQ ID NO:6. Вариантные последовательности могут быть легко проверены на функциональные возможности, как описано здесь. Различные виды могут показать "предпочтительное применение кодона". В общем, см., Grantham et- 20015351 применение кодона" или "предпочтительные кодоны" является технологическим термином, относящимся к кодонам трансляции белка, которые наиболее часто используются в клетках определенного вида,таким образом, способствуя одному или нескольким представителям возможных кодонов, кодирующих каждую аминокислоту (см. табл. 5). Например, аминокислота треонин (Thr) может быть кодирована АСА, АСС, ACG или ACT, но в клетках млекопитающих АСС является обычно используемым кодоном; в других видах, например клетках насекомых, дрожжах, вирусах или бактериях, различные кодоны Thr могут быть предпочтительными. Предпочтительные кодоны для определенного вида могут быть введены в полинуклеотиды по настоящему изобретению многими методами, известными в технологии. Введение предпочтительных последовательностей кодона в рекомбинантную ДНК может, например, увеличить продукцию белка, делая трансляцию белка более эффективной в пределах определенного клеточного типа или вида. Поэтому выродившиеся последовательности кодона, раскрытые здесь, служат матрицей для того, чтобы оптимизировать экспрессию полинуклеотидов в различных клеточных типах и видах,обычно используемых в технологии и раскрытых здесь. Последовательности, содержащие предпочтительные кодоны, могут быть проверены и оптимизированы для экспрессии в различных видах и проверены на функциональные возможности, как раскрыто здесь. кДНК, кодирующая IL-17RA или IL-17RC, может быть изолирована многими методами, такими как зондирование полной или частичной человеческой кДНК или одним, или больше наборами выродившихся зондов, основанных на раскрытых последовательностях. кДНК может также быть клонирована,применяя полимеразную цепную реакцию с праймерами, разработанными из представительных человеческих последовательностей IL-17RA или IL-17RC, раскрытых здесь. Кроме того, кДНК библиотека может использоваться, чтобы трансформировать или трансфицировать клетки-хозяева, и экспрессия кДНК интереса может быть обнаружена антителом к полипептиду IL-17RA или IL-17RC. Специалисты в технологии признают, что последовательность, раскрытая в SEQ ID NO:1, представляет единственную аллель человеческого IL-17RC и что аллельное изменение и альтернативный сплайсинг, как ожидают, будут иметь место. Аллельные варианты этой последовательности могут быть клонированы зондированием кДНК или геномными библиотеками из различных людей согласно стандартным процедурам. Аллельные варианты нуклеотидных последовательностей, раскрытых здесь, включая последовательности, которые содержат молчащие мутации и последовательности, в которых мутации приводят к изменениям в аминокислотной последовательности, находятся в рамках настоящего изобретения,так как являются белками, которые являются аллельными вариантами аминокислотных последовательностей, раскрытых здесь. Молекулы кДНК, произведенные из альтернативно сплайсированных мРНК,которые сохраняют свойства полипептида IL-17RC, включаются в рамки настоящего изобретения, так как являются полипептидами, кодированными такими кДНК и мРНК. Аллельные варианты и сплайсварианты этих последовательностей могут быть клонированы зондированием кДНК или геномными библиотеками от различных людей или тканей согласно стандартным процедурам, известным в технологии. Используя методы, обсужденные выше, специалист в технологии может получить много полипептидов, кодирующих растворимый рецептор, который включает участок субъединицы рецептора IL-17RC,который является существенно гомологичным к последовательности SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:4 или который кодирует всю или фрагмент последовательности SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:5 или их аллельные варианты и сохраняют лигандсвязывающие свойства рецептора IL-17RC дикого типа. Такие полипептиды могут также включать дополнительные полипептидные сегменты, как в целом раскрыто здесь. В пределах определенных вариантов изобретения изолированные молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизироваться при строгих условиях с молекулами нуклеиновой кислоты, включающими нуклеотидные последовательности, раскрытые здесь. Например, такие молекулы нуклеиновой кислоты могут гибридизироваться при строгих условиях с молекулами нуклеиновой кислоты, включающими нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:4 или с молекулами нуклеиновой кислоты,включающими нуклеотидные последовательности, комплементарные к SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:4,или их фрагменты. В общем, строгие условия выбирают так, чтобы они были приблизительно на 5 С ниже, чем тепловая точка плавления (Т.пл.) для определенной последовательности при определенной ионной силе и рН. Т.пл. представляет собой температуру (при определенной ионной силе и рН), при которой 50% целевой последовательности гибридизируется с хорошо подобранным зондом. После гибридизации молекулы нуклеиновой кислоты могут быть промыты, чтобы удалить негибридизированные молекулы нуклеиновой кислоты при строгих условиях или при очень строгих условиях; см., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (Cold Spring Harbor Press, 1989); Ausubel et al. (eds.),Current Protocols in Molecular Cloning (John Wiley and Sons, Inc. 1987); Berger и Kimmel (eds.), Guide toPremier 4.0 (Premier Biosoft International; Palo Alto, CA), так же как сайты в Интернете, являются доступными инструментами для анализа данной последовательности и вычисления Т.пл., основанное на определенных пользователем критериях. Это вполне в пределах способности специалиста, чтобы приспосо- 21015351 бить гибридизацию и промывку для использования с определенным полинуклеотидным гибридом. Настоящее изобретение также обеспечивает изолированные полипептиды IL-17RA или IL-17RC,которые имеют существенно подобные идентичности последовательностей к полипептидам последовательностей SEQ ID NO:2 (IL-17RC) и SEQ ID NO:21 (IL-17RA), или их ортологи. Термин "существенно подобная идентичность последовательности" использован здесь, чтобы обозначить полипептиды, имеющие по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, таких как 96, 97, 98 или больше 95% идентичности последовательности с последовательностями, показанными в последовательности SEQ ID NO:2, или их ортологами. Например, вариантные и ортологические рецепторы IL-17RA или IL-17RC могут использоваться, чтобы произвести иммунную реакцию и развести перекрестно-реагирующие антитела к человеческим IL-17RA или IL-17RC. Такие антитела могут быть гуманизированы и модифицированы, как описано здесь, и использованы терапевтически для лечения псориаза, псориатического артрита, БВК, БРК, колита, эндотоксемии, так же как в других терапевтических применениях, описанных здесь. Настоящее изобретение также рассматривает вариантные молекулы нуклеиновой кислоты IL-17RA или IL-17RC, которые могут быть идентифицированы, используя два критерия: определение подобия между кодированным полипептидом с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 (IL-17RC) иSEQ ID NO:21 (IL-17RA) и гибридизационный анализ. Такие варианты включают молекулы нуклеиновой кислоты: (1) которые остаются гибридизированными с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:4 для IL-17RC (или его комплемента) при строгих условиях промывки, в которых строгость промывки эквивалентна 0,5 х-2 х SSC с 0,1% SDS при 55-65 С, и (2) которые кодируют полипептид, имеющий по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или больше 95%, таких как 96, 97, 98 или 99% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2. Альтернативно, варианты IL17RC могут характеризоваться как молекулы нуклеиновой кислоты: (1) которые остаются гибридизированными с молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:4 (или его комплемент) при очень строгих условиях промывки, в которых строгость промывки эквивалентна 0,1 х-0,2 х SSC с 0,1% SDS при 50-65 С, и (2) которые кодируют полипептид,имеющий по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или больше 95%, таких как 96, 97, 98 или 99% или больше идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2. Процент идентичности последовательности определяют обычными методами; см., например,Altschul et al., Bull. Math. Bio., 48:603 (1986), и Henikoff и Henikoff, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 89:10915(1992). Кратко, две аминокислотные последовательности выравниваются, чтобы оптимизировать показатели выравнивания, используя штраф за открытие делеции 10, штраф за продолжение делеции 1 и матрицу подсчета "BLOSUM62" Henikoff и Henikoff (там же), как показано в табл. 6 (аминокислоты указаны стандартными однобуквенными кодами). Процент идентичности затем вычисляют, как([Общее количество идентичных пар]/[длина более длинной последовательности плюс количество гэпов,введенных в более длинную последовательность, чтобы выровнять эти две последовательности])100. Таблица 6- 22015351 Специалисты в технологии оценят, что есть много установленных алгоритмов, доступных, чтобы выровнять две аминокислотные последовательности. Алгоритм поиска подобия "FASTA" Pearson и Lipman представляет собой подходящий метод выравнивания белков для определения уровня идентичности,разделенного аминокислотной последовательностью, раскрытой здесь, и аминокислотной последовательностью предполагаемого варианта IL-17RC. Алгоритм FASTA описан Pearson и Lipman, Proc. Nat'lAcad. Sci. USA, 85:2444 (1988) и Pearson, Meth. Enzymol. 183:63 (1990). Кратко, FASTA сначала характеризует подобие последовательности, идентифицируя области, разделенные последовательностью под вопросом (например, последовательность SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3) и тестовой последовательностью, которая имеет или самую высокую плотность идентичности (если переменная ktup=1), или пары идентичности (если ktup=2), не рассматривая консервативные аминокислотные замены, инсерции или делеции. Десять областей с самой высокой плотностью идентичности затем повторно пересчитывают,сравнивая подобие всех спаренных аминокислот, используя матрицу замены аминокислот, и концы областей "урезают", с включением только тех остатков, которые вносят вклад в самый высокий счет. Если есть несколько областей с показателями, больше, чем урезанная величина (вычисленная по предопределенной формуле, основанной на длине последовательности и величине ktup), то урезанные начальные области исследуются, чтобы определить, могут ли области соединяться с получением приблизительного выравнивания с гэпами. Наконец, самые высокие области подсчета двух аминокислотных последовательностей выравниваются, используя модификацию алгоритма Недлемана-Вюнша-Селлерса (Needleman и Wunsch, J. Mol. Biol. 48:444 (1970); Sellers, SIAMM J. Appl. Math., 26:1%1 (1974, который учитывает аминокислотные инсерции и делеции. Иллюстративные параметры для анализа FASTA: ktup=1, штраф за открытие делеции=10, штраф за продолжение делеции=1 и матрица замены=BLOSUM62. Эти параметры могут быть введены в программу FASTA, изменяя файл матрицы подсчета ("SMATRIX"), как объяснено в приложении 2 из Pearson, Meth. Enzymol. 183:63 (1990).FASTA может также использоваться, чтобы определить идентичность последовательности молекул нуклеиновой кислоты, используя отношение, как раскрыто выше. Для сравнений нуклеотидных последовательностей величина ktup может изменяться от одного до шести, предпочтительно от трех до шести,наиболее предпочтительно три, с другим набором параметров, как описано выше. Настоящее изобретение включает молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептид,имеющий консервативные аминокислотные замены по сравнению с аминокислотной последовательностью, раскрытой здесь. Например, могут быть получены варианты, которые содержат одну или более аминокислотные замены последовательностей SEQ ID NO:2 или 21, в которых алкиламинокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на алкиламинокислоту, ариламинокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на ариламинокислоту, серосодержащая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на серосодержащую аминокислоту, гидроксисодержащая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на гидроксисодержащую аминокислоту, кислотная аминокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на кислотную аминокислоту, основная аминокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на основную аминокислоту, или двухосновная монокарбоновая аминокислота в аминокислотной последовательности IL-17RA или IL-17RC заменяется на двухосновную монокарбоновую аминокислоту. Среди общих аминокислот, например, "консервативная замена аминокислоты" иллюстрируется заменой среди аминокислот в пределах каждой из следующих групп: (1) глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин, (2) фенилаланин, тирозин и триптофан, (3) серин и треонин, (4) аспартат и глутамат, (5) глютамин и аспарагин, (6) лизин, аргинин и гистидин. Таблица BLOSUM62 представляет собой матрицу замены аминокислот, полученную из приблизительно 2000 местных многократных выравниваний сегментов белковых последовательностей, представляющих очень консервативные области больше чем 500 групп близких белков (Henikoff и Henikoff, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 59:10915 (1992. Соответственно частоты замены BLOSUM62 могут использоваться, чтобы определить консервативные замены аминокислот,которые могут быть введены в аминокислотные последовательности по настоящему изобретению. Хотя возможно проектировать замены аминокислот, основанные исключительно на химических свойствах(как обсуждено выше), язык "консервативная замена аминокислоты" предпочтительно относится к замене, представленной величиной BLOSUM62 больше чем -1. Например, замена аминокислоты консервативна, если замена характеризуется величиной BLOSUM62 0, 1, 2 или 3. Согласно этой системе предпочтительные консервативные замены аминокислот характеризуются величиной BLOSUM62 по меньшей мере 1 (например, 1, 2 или 3), в то время как более предпочтительные консервативные замены аминокислоты характеризуются величиной BLOSUM62 по меньшей мере 2 (например, 2 или 3). Определенные варианты IL-17RC характеризуются наличием по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или больше 95%, такой как 96, 97, 98 или 99% или большей идентичности последовательности с соответствующей аминокислотной последовательностью (например, последовательностью SEQ ID NO:2 или 21), в которой изменение в аминокислотной последовательности происходит из-за одной или больше консервативных замен аминокислоты.- 23015351 Консервативные аминокислотные изменения в гене IL-17RA или IL-17RC могут быть введены, например, заменой нуклеотидов, перечисленных в последовательности SEQ ID NO:1 или 4, на нуклеотиды. Такие варианты "консервативной аминокислоты" могут быть получены олигонуклеотид-специфическим мутагенезом, линкерсканирующим мутагенезом, мутагенезом, использующим полимеразную цепную реакцию, и т.п. (см. Ausubel (1995); и McPherson (ed.), Directed Mutagenesis: A Practical Approach (IRLPress, 1991. Вариантный полипептид IL-17RC может быть идентифицирован по способности специфично связывать антитела анти-IL-17RC. Белки по настоящему изобретению могут также включить не встречающиеся в природе аминокислотные остатки. Не встречающиеся в природе аминокислотные остатки включают, без ограничения,транс-3-метилпролин,2,4-метанопролин,цис-4-гидроксипролин,транс-4-гидроксипролин,Nметилглицин, аллотреонин, метилтреонин, гидроксиэтилцистеин, гидроксиэтилгомоцистеин, нитроглутамин, гомоглутамин, пипеколиновую кислоту, тиазолидинкарбоновую кислоту, дегидропролин, 3- и 4 метилпролин, 3,3-диметилпролин, трет-лейцин, норвалин, 2-азафенилаланин, 3-азафенилаланин, 4 азафенилаланин и 4-фторфенилаланин. Несколько методов известны в технологии для включения не встречающихся в природе аминокислотных остатков в белки. Например, in vitro система может применяться, в которой нонсенс-мутации подавляют, используя химически аминоацилированные супрессорные тРНК. Методы синтеза аминокислот и аминоацилированных тРНК известны в искусстве. Транскрипция и трансляция плазмид, содержащих нонсенс-мутации, обычно выполняются в бесклеточной системе, включающей экстракт E.coli S30 и коммерчески доступные ферменты и другие реагенты. Белки очищают хроматографией; см., например, Robertson et al., J. Chem. Soc. 113:2122 (1991), Ellman et al.,Methods Enzymol., 202:301 (1991), Chung et al., Science, 259:806 (1993), and Chung et al., Proc. Nat'l Acad.Sci. USA, 90:10145 (1993). Во втором методе перевод выполнен в овоцитах Xenopus микроинъекцией мутированной мРНК и химически аминоацилированных супрессорных тРНК (Turcatti et al., J. Biol. Chem. 277:19991 (1996. В пределах третьего метода, клетки E.coli культивируются в отсутствие естественной аминокислоты,которая должна быть заменена (например, фенилаланин), и в присутствии желательной не встречающейся в природе аминокислоты (например, 2-азафенилаланина, 3-азафенилаланина, 4-азафенилаланина и 4-фторфенилаланина). Не встречающуюся в природе аминокислоту включают в белок вместо его естественной копии. См., Koide et al., Biochem., 33:7470 (1994). Естественно встречающиеся аминокислотные остатки могут быть преобразованы в не встречающиеся в природе аминокислоты химической модификацией in vitro. Химическая модификация может быть объединена с сайт-специфическим мутагенезом,чтобы далее расширить диапазон замен (Wynn и Richards, Protein Sci., 2:395 (1993. Аминокислотные остатки IL-17RA или IL-17RC могут быть заменены на ограниченное число неконсервативных аминокислот, аминокислот, которые кодируются генетическим кодом, на не встречающиеся в природе аминокислоты и неестественные аминокислоты. Существенные аминокислоты в полипептидах по настоящему изобретению могут быть идентифицированы согласно методикам, известным в технологии, таким как сайт-специфический мутагенез или аланин-сканирующий мутагенез (Cunningham и Уэллс, Science, 244:1081 (1989), Bass et al., Proc. Nat'lProteins: Analysis and Design, Angeletti (ed.), p. 259-311 (Academic Press, Inc. 1998. В последней методике единственные мутации аланина вводятся в каждый остаток молекулы, и проистекающие мутантные молекулы проверяют на биологическую активность, чтобы идентифицировать аминокислотные остатки,которые важны для активности молекулы. См. также, Hilton et al., J. Biol. Chem. 277:4699 (1996). Хотя секвенирование может использоваться, чтобы далее определить лигандсвязывающие областиIL-17RA или IL-17RC, аминокислоты, которые играют роль в связывающей активности IL-17RA или IL17RC (таком как связывание IL-17RC с IL-17A или IL-17F, или IL-17RA с IL-17A), могут также быть определены физическим анализом структуры, как определено такими методами, как ядерный магнитный резонанс, кристаллография, электронная дифракция или маркировка фотосродства, в соединении с мутацией предполагаемого контактного сайта аминокислот; см., например, de Vos et al., Science, 255:306(1992), Smith et al., J. Mol. Biol. 224:899 (1992), and Wlodaver et al., FEBS Lett., 309:59 (1992). Конкретно, три области идентифицированы. 1) Домен 1 (последовательности SEQ ID NO:159 и 160) включает экзоны 8-10 из IL-17RC. Это соответствует аминокислотным остаткам 193-276 из IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2) и аминокислотным остаткам 208-291 из IL-17RCx4 (последовательность SEQ ID NO:166). 2) Домен 2 (последовательности SEQ ID NO:161 и 162) включает экзоны 11-13 из IL-17RC. Это соответствует аминокислотным остаткам 277-370 из IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2) и аминокислотным остаткам 292-385 из IL-17RCx4 (последовательность SEQ ID NO:166). 3) Домен 3 (последовательности SEQ ID NO:163 и 164) включает экзоны 8-10 из IL-17RC. Это соответствует аминокислотным остаткам 371-447 из IL-17RCx1 (последовательность SEQ ID NO:2) и аминокислотным остаткам 386-482 из IL-17RCx4 (последовательность SEQ ID NO:166). Многократные замены аминокислот могут быть сделаны и испытаны, используя известные методы мутагенеза и скрининга, такие как раскрыты Reidhaar-Olson and Sauer (Science, 241:53 (1988 или Bowie- 24015351 и Sauer (Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 86:2152 (1989. Кратко, эти авторы раскрывают методы для одновременно рандомизации двух или больше положений в полипептиде, селекции функционального полипептида и последующего секвенирования мутагенетического полипептида, чтобы определить спектр допустимых замен в каждом положении. Другие методы, которые могут использоваться, включают показ бактериофага (например, Lowman et al., Biochem. 30:10832 (1991), Ladner et al., USA Patent No. 5223409,Huse, международная публикация WO 92/06204 и регионспецифический мутагенез (Derbyshire et al.,Gene, 46:U5 (1986) и Ner et al., DNA, 7:127 (1988. Кроме того, IL-17RC или IL-17RA, маркированные биотином или ФИТЦ, могут использоваться для экспрессионного клонирования лигандов IL-17RC. Варианты раскрытых нуклеотидных или полипептидных последовательностей IL-17RC или IL17RA могут также быть произведены через тасование ДНК, как раскрыто Stemmer, Nature, 370:389(1994), Stemmer, Proc. Nat'l Acad.Sci. USA, 97:10747 (1994) и международная публикация WO 97/20078. Кратко, вариантные молекулы ДНК производятся in vitro гомологической рекомбинацией случайной фрагментации родительской ДНК, за которой следует повторная сборка, используя ПЦР, приводя к случайно вводимым точечным мутациям. Эта техника может быть изменена при использовании семейства родительских молекул ДНК, таких как аллельные варианты или молекулы ДНК из различных видов,чтобы вводить дополнительную вариабельность в процесс. Выбор или скрининг на желательную активность, за которым следуют дополнительные повторения мутагенеза и анализ, предусматривает быстрое"развитие" последовательностей выбором желательных мутаций при одновременном выборе против вредных изменений. Методы мутагенеза, как раскрыто здесь, могут быть объединены с автоматизированными методами скрининга высокой пропускной способности, чтобы обнаружить активность клонированных, мутагенизированных полипептидов в клетках-хозяевах. Мутагенизированные молекулы ДНК, которые кодируют биологически активные полипептиды, или полипептиды, которые связываются с антителами анти-IL17RC или анти-IL-17RA, могут быть выделены из клеток-хозяев и быстро секвенированы, применяя современное оборудование. Эти методы позволяют быстрое определение важности индивидуальных аминокислотных остатков в полипептиде интереса и могут быть применены к полипептидам неизвестной структуры. Настоящее изобретение также включает "функциональные фрагменты" полипептидов IL-17RC илиIL-17RA и молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие такие функциональные фрагменты. Эти функциональные фрагменты могут либо связывать лиганд или лиганды (т.е. как IL-17A, так и IL-17F) по отдельности или вместе. Обычный делеционный анализ молекул нуклеиновой кислоты может быть выполнен, чтобы получить функциональные фрагменты молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют полипептиды IL-17RC или IL-17RA. В качестве иллюстрации, молекулы ДНК, имеющие нуклетидную последовательность SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:4, могут быть расщеплены нуклеазой Bal31, чтобы получить ряд гнездовых делеций. Фрагменты затем вставляют в векторы экспрессии в присущей рамке считывания, и экспрессированные полипептиды изолируют и испытывают на способность связывать антитела анти-IL-17RC. Альтернативой расщеплению экзонуклеазой является применение олигонуклеотидспецифического мутагенеза, чтобы ввести делеции или стоп-кодоны, чтобы определить продукцию желательного фрагмента. Альтернативно, определенные фрагменты гена IL-17RC или IL-17RA могут синтезироваться, используя полимеразную цепную реакцию. Этот общий подход иллюстрируется исследованиями по укорочению одного или обоих концов интерферонов и суммирован Horisberger и Di Marco, Pharmac. Ther., 66:501 (1995). Кроме того, стандартные методы функционального анализа белков описаны, например, Treuter et al., Molec. Gen. Genet, 240:113(1995), and Meisel et al., Plant Molec. Biol. 30:1 (1996). Настоящее изобретение также рассматривает функциональные фрагменты гена IL-17RC или генаIL-17RA, у которых есть изменения аминокислот, по сравнению с аминокислотной последовательностью, раскрытой здесь. Вариантный ген IL-17RC или IL-17RA может быть идентифицирован на основе структуры, определяя уровень идентичности с раскрытыми нуклеотидными и аминокислотными последовательностями, как обсуждено выше. Альтернативным подходом к идентификации вариантного гена на основе структуры является определение, может ли молекула нуклеиновой кислоты, кодирущая потенциальный вариантный ген IL-17RC или IL-17RA, гибридизироваться с молекулой нуклеиновой кислоты,включающей нуклеотидную последовательность, такую как SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:4. Настоящее изобретение также включает использование функциональных фрагментов полипептидовIL-17RC или IL-17RA, антигенных эпитопов, эпитопнесущих участков или лигандсвязывающих участков полипептидов IL-17RC и (или) IL-17RA и молекул нуклеиновой кислоты, которые кодируют такие функциональные фрагменты, антигенные эпитопы и эпитопнесущие участки или лигандсвязывающие участки полипептидов IL-17RC и (или) IL-17RA. Такие фрагменты применяют, чтобы произвести полипептиды- 25015351 для использования в производстве растворимых рецепторов или связывающих молекул, которые связывают, блокируют, ингибируют, уменьшают, противодействуют или нейтрализуют активность IL-17A илиIL-17F или обоих IL-17 А и IL-17F. "Функциональный" полипептид IL-17RC или IL-17RC/IL-17RA или его фрагмент, как определено здесь, характеризуется способностью блокировать, ингибировать, уменьшать, противодействовать или нейтрализовать воспалительную, пролиферативную или дифференцирующуюся активность IL-17A и (или) IL-17F, его способностью вызвать или ингибировать специализированные функции клетки, или его способностью связываться специфично с IL-17A и (или) IL-17F. Как ранее описано здесь, IL-17RA и IL-17RC характеризуются уникальной структурой рецептора цитокина и доменами, как описано здесь. Таким образом, настоящее изобретение далее рассматривает использование слитых белков, включающих: (а) полипептидные молекулы, включающие один или больше доменов,описанных выше; и (b) функциональные фрагменты, включающие один или больше из этих доменов. Другая полипептидная часть слитого белка может быть внесена другим рецептором цитокина, таким как рецептор, подобный IL-17, такой как IL-17RA, IL-17RE, IL-RD, или неприродный и (или) неродственный секреторный сигнальный пептид, который облегчает секрецию слитого белка. Настоящее изобретение также обеспечивает полипептидные фрагменты или пептиды, включающие лигандсвязывающий участок полипептида IL-17RC или IL-17RA, описанный здесь. Такие фрагменты или пептиды могут включать участок либо IL-17RC, либо IL-17RA, который связывается с соответствующим лигандом (IL-17A и (или) IL-17F). Для любого полипептида IL-17RC или IL-17RA, включая варианты и слитые белки, специалист в технологии может легко произвести полностью вырожденную полинуклеотидную последовательность,кодирующую этот вариант, используя информацию, изложенную в табл. 1 и 2 выше. Кроме того, специалисты в технологии могут использовать стандартное программное обеспечение, чтобы разработать варианты IL-17RC или IL-17RA, основанные на нуклеотидных и аминокислотных последовательностях, описанных здесь. Е) Продукция полипептидов IL-17RC. IL-17RA и IL-17RC/IL-17RA. Полипептиды по настоящему изобретению, включая полипептиды полной длины; растворимые мономерный, гомодимерные, гетеродимерные и мультимерные рецепторы; рецепторы полной длины; фрагменты рецептора (например, лигандсвязывающие фрагменты и антигенные эпитопы); функциональные фрагменты и слитые белки, могут быть произведены в рекомбинантных клетках-хозяевах, следуя обычным методам. Чтобы экспрессировать ген IL-17RC, IL-17RA и IL-17RC/IL-17RA, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, должна быть реально связана с регуляторными последовательностями, которые управляют транскрипционной экспрессией в векторе экспрессии, и затем введена в клетку-хозяина. В дополнение к транскрипционным регуляторным последовательностям, таким как промоторы и усилители, векторы экспрессии могут включать трансляционные регуляторные последовательности и маркерный ген, который подходит для выбора клеток, которые несут вектор экспрессии. Векторы экспрессии, которые являются подходящими для продукции инородного белка в клеткахэукариотах, обычно содержат: (1) элементы прокариотической ДНК, кодирующей природу бактериальной реплики и маркера устойчивости к антибиотику, чтобы предусмотреть рост и выбор вектора экспрессии в бактериальном хозяине; (2) элементы эукаритической ДНК, которые управляют инициированием транскрипции, такие как промотор; и (3) элементы ДНК, которые управляют обработкой транскриптов, таких как последовательность завершения/полиаденилирования транскрипции. Как обсуждено выше, векторы экспрессии могут также включать нуклеотидые последовательности, кодирующие секреторную последовательность, которая направляет гетерологические полипептиды в секреторный путь клетки-хозяина. Например, вектор экспрессии IL-17RC может включать ген IL-17RC, IL-17RA и IL17RC/IL-17RA и секреторную последовательность, полученную из любого секретируемого гена. Белки IL-17RC, IL-17RA и IL-17RC/IL-17RA по настоящему изобретению могут быть экспрессированы в клетках млекопитающих. Примеры подходящих клеток-хозяев млекопитающих включают клетки почки африканской зеленой обезьяны (Vero; ATCC CRL 1583), клетки почки человеческого эмбриона(HEK 293; ATCC CRL 1573), клетки почки детеныша хомячка (BHK-21, BHK-570; ATCC CRL 8544,ATCC CRL 10314), клетки почки собаки (MDCK; ATCC CCL 34), клетки яичника китайского хомячка(CHO-K1; ATCC CCL61; СНО DG44 (Chasin et al., Som. Cell. Molec. Genet, 12:555, 1986, клетки крысиного гипофиза (GH1; ATCC CCL82), клетки HeLa S3 (ATCC CCL2.2), клетки крысиной гепатомы (H-4-IIЕ; ATCC CRL 1548), SV40-преобразованные клетки почки обезьяны (COS-1; ATCC CRL 1650) и мышиные эмбриональные клетки (NIH-3T3; ATCC CRL 1658). Для млекопитающего организма транскрипционные и трансляционные регулирующие сигналы могут быть получены из вирусных источников млекопитающих, например аденовируса, бычьего вируса папилломы, обезьяньего вируса или им подобных, в которых регулирующие сигналы связаны с определенным геном, у которого есть высокий уровень экспрессии. Подходящие транскрипционные и трансляционные регулирующие последовательности также могут быть получены из генов млекопитающих, например актина, коллагена, миозина и металлотионеина. Транскрипционные регулирующие последовательности включают промоторную область, достаточную, чтобы направить инициирование синтеза РНК. Подходящие эукариотические промоторы включают- 26015351 в качестве промотора мышиный ген металлотионеин 1 (Hamer et al., J. Molec. Appl. Genet, 7:273 (1982,TK промотор вируса герпеса (McKnight, Cell, 31:355 (1982, ранний промотор SV40 (Benoist et al.,Nature, 290:304 (1981, вирусный промотор саркомы Poyca (Gorman et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA,79:6111 (1982, промотор вируса цитомегалии (Foecking et al., Gene, 45:101 (1980 и мышиный вирусный промотор опухоли груди (см. в общем Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins in MammalianSons, Inc. 1996. Альтернативно, прокариотический промотор, такой как промотор бактериофаг Т 3 РНК-полимераза,может применяться, чтобы управлять генной экспрессией в клетках млекопитающих, если прокариотический промотор регулируется эукариотическим промотором (Zhou et al., Mol. Cell. Biol., 10:4529 (1990),и Kaufman e al., Nucl. Acids Res., 19:4485 (1991. В определенных вариантах последовательность ДНК, кодирующая растворимый рецепторный полипептид IL-17RC, IL-17RA и IL-17RC/IL-17RA или фрагмент полипептида IL-17RC, IL-17RA или IL17RC/IL-17RA, является реально связанной с другими генетическими элементами, требуемыми для ее экспрессии, в общем, включая промотор и терминатор транскрипции в пределах вектора экспрессии. Вектор будет также обычно содержать один или более селектируемых маркеров и один или более репликаторов, хотя специалисты в технологии признают, что в пределах определенных систем селектируемые маркеры могут быть предоставлены на отдельных векторах, а реплика экзогенной ДНК может быть предоставлена интеграцией в геноме клетки-хозяина. Выбор промоторов, терминаторов, селектируемых маркеров, векторов и других элементов представляет собой вопрос обычной разработки в пределах уровня обычного навыка в искусстве. Много таких элементов описано в литературе и доступно через коммерческих поставщиков. Многие компоненты растворимого комплекса рецептора могут быть сотрансфицированы на индивидуальных векторах экспрессии или содержаться в единственном векторе экспрессии. Такие методы экспрессии многих компонентов белковых комплексов известны в технике. Вектор экспрессии может быть введен в клетки-хозяева, используя много стандартных методов,включая кальцийфосфатную трансфекцию, липосом-опосредованную трансфекцию, микроснарядопосредованную доставку, электропорацию, и т.п. Трансфицированные клетки могут быть отобраны и размножены, чтобы обеспечить рекомбинантные клетки-хозяева, которые включают вектор экспрессии,устойчиво интегрированный в геном клетки-хозяина. Методы введения вектора в эукариотические клетки и методы выбора таких устойчивых трансформантов, используя доминантный селектируемый маркер,описаны, например, Ausubel (1995) и Murray (ed.), Gene Transfer and Expression Protocols (Humana Press,1991). Например, один подходящий селектируемый маркер представляет собой ген, который обеспечивает устойчивость к антибиотическому неомицину. В этом случае, выбор выполняют в присутствии лекарственного средства типа неомицина, такого как G-418 или ему подобного. Системы выбора могут также использоваться, чтобы увеличить уровень экспрессии гена интереса, процесс называется "усиление". Усиление выполняют, культивируя трансфектанты в присутствии низкого уровня селективного средства и затем увеличивая количество селективного средства, чтобы выбрать клетки, которые производят высокие уровни продуктов введенных генов. Подходящий усиливаемый селектируемый маркер представляет собой дигидрофолатредуктазу (ДГФР), которая придает устойчивость к метотрексату. Другие гены устойчивости лекарственного средства (например, устойчивость гигромицина, множественная лекарственная устойчивость, пуромицинацетилтрансфераза) могут также использоваться. Альтернативно, маркеры,которые вводят измененный фенотип, такой как зеленый флуоресцентный белок или белки поверхности клетки, такие как CD4, CD8, ГКГС класс I, плацентарная щелочная фосфатаза, могут использоваться,чтобы сортировать трансфицированные клетки от нетрансфицированных клеток такими средствами, как сортер FACS (клеточный сортер с возбуждением флуоресценции) или технология магнитного разделения гранул. Полипептиды по изобретению могут также быть произведены культивируемыми клетками млекопитающих, используя вирусную систему доставки. Образцовые вирусы для этой цели включают аденовирус, ретровирусы, вирус герпеса, вирус коровьей оспы и аденоассоциированный вирус (ААВ). Аденовирус, двухниточный вирус ДНК, в настоящее время является лучшим изученным генным вектором передачи гена для доставки гетерологической нуклеиновой кислоты (для обзора, см. Becker et al., Meth. CellBiol., 43:161 (1994), и Douglas и Curiel, ScienceMedicine, 4:44 (1997. Преимущества аденовирусной системы включают приспособляемость относительно больших вставок ДНК, способность расти до высокого титра, способность инфицировать широкий диапазон типов клеток млекопитающих и гибкость, которая позволяет использование с большим количеством доступных векторов, содержащих различные промоторы. Удалением участков генома аденовируса могут быть обеспечены большие вставки (до 7 Кб) гетерологической ДНК. Эти вставки могут быть включены в вирусную ДНК прямым сшиванием или гомологической рекомбинацией с со-трансфицированной плазмидой. Выбором является удаление существенногоEl гена из вирусного вектора, которое приводит к неспособности копировать, если El ген не предоставлен клеткой-хозяином. Человеческие клетки 293, инфицированные вектором аденовируса (АТСС Nos.CRL-1573, 45504, 45505), например, могут быть выращены как прикрепленные клетки или в суспензионной культуре при относительно высокой плотности клеток, чтобы произвести значительное количество белка (см. Gamier et al., Cytotechnol. 75:145 (1994. Полипептиды по изобретению могут также быть экспрессированы в других высших эукариотических клетках, таких как клетки птиц, грибов, насекомых, дрожжей или растений. Бакуловирусная система обеспечивает эффективное средство введения клонированных генов в клетки насекомого. Подходящие векторы экспрессии основаны на вирусе многократного ядерного полиэдроза Autographa californica(AcMNPV) и содержат известные промоторы, такие как промотор белок теплового шока Дрозофилы(hsp) 70, непосредственно-ранний генный промотор (ie1) и отсроченный ранний промотор 39 КБ вируса ядерного полиэдроза Autographa californica, промотор бакуловируса р 10 и промотор Drosophila metallothionein. Второй метод создания рекомбинантного бакуловируса использует основанную на транспозоне систему, описанную Luckow (Luckow, et al., J. Virol. 67:4566 (1993. Эта система, которая использует векторы передачи, продается в комплекте Bac-to-Bac (Life Technologies, Rockville, MD). Эта система использует вектор передачи PFASTBAC (Life Technologies), содержащий транспозон Tn7, чтобы переместить ДНК, кодирующую полипептид, в бакуловирусный геном, поддерживаемый в E.coli как большая плазмида, названная "бакмид"; см. Hill-Perkins and Possee, J. Gen. Virol. 717:971 (1990), Bonning, et al., J.Gen. Virol. 75:1551 (1994), and Chazenbalk and Rapoport, J. Biol. Chem. 270:1543 (1995). Кроме того, векторы передачи могут включать в рамке слияния ДНК, кодирующую эпитопную метку в С- или N-конце экспрессированного полипептида, например эпитопую метку Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Nat'lAcad. Sci., 82:7952 (1985. Используя известную технику, вектор передачи, содержащий ген, кодирующий полипептид по настоящему изобретению, трансфомируется в E.coli и подвергается скринингу на бакмиды, которые содержат прерванный ген lacZ, указывающий на рекомбинантный бакуловирус. ДНК бакмида, содержащую геном рекомбинантного бакуловируса, затем изолируют, используя общие методы. Иллюстративный вектор PFASTBAC может быть изменен до значительной степени. Например,промотор полиэдрин может быть удален и заменен на промотор основного белка бакуловируса (также известный как промотор Pcor, р 6.9 или MP), который экспрессировался ранее в бакуловирусной инфекции, и, как показано, был выгоден для экспрессии секретируемых белков (см., например, Hill-Perkins andRapoport, J. Biol. Chem. 270:1543 (1995). В таких конструктах вектора передачи может использоваться короткая или длинная версия основного белкового промотора. Кроме того, векторы передачи могут быть построены, которые заменяют нативные секреторные сигнальные последовательности на секреторные сигнальные последовательности, полученные из белков насекомого. Например, секреторная сигнальная последовательность из Ecdysteroid Glucosyltransferase (EGT), пчелиного Melittin (Invitrogen Corporation;Carlsbad, CA), или бакуловируса gp67 (PharMingen: San Diego, CA), может использоваться в конструкциях, чтобы заменить нативную секреторную сигнальную последовательность IL-17RC. Рекомбинантный вирус или бакмид применяют, чтобы трансфициовать клетки-хозяева. Подходящие клетки-хозяева насекомого включают клеточные линии, полученные из IPLB-Sf-21, кукольной яичниковой линии клеток Spodoptera frugiperda, такой как Sf9 (ATCC CRL 1711), Sf21AE и Sf21 (InvitrogenCorporation; San Diego, CA), так же как клетки Drosophila Schneider-2 и клеточная линия HIGH FIVEO(Invitrogen), происходящая из Trichoplusia ni (патент США 5300435). Коммерчески доступные бессывороточные питательные среды могут использоваться, чтобы вырастить и поддержать клетки. Подходящими питательными средами являются Sf900 II (Life Technologies) или ESF 921 (Expression Systems) для клеток Sf9; и Ех-cellO405 (JRH Biosciences, Lenexa, KS) или Express FiveO (Life Technologies) для Т. ni клеток. Когда применяют рекомбинантный вирус, клетки обычно вырастают от инокуляционной плотности приблизительно 2-5105 клеток до плотности 1-2106 клеток, за которое время рекомбинантная вирусная линия добавляется при множественности заражения (multiplicity of infection, MOI) от 0,1 до 10, более типично около 3. Установленные методы для производства рекомбинантных белков в бакуловирусных системах предоставлены Bailey et al., "Manipulation of Baculovirus Vectors", Murray (ed.), p. 147-168 (The Humana Press,Inc. 1991), Patel et al., "The baculovirus expression system" in DNA Cloning 2: Expression Systems, 2-nd Edition, Glover et al. (eds.), p. 205-244 (Oxford University Press, 1995), Ausubel (1995) at p. 16-37 to 16-57,Richardson (ed.), Baculovirus Expression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995), and by Lucknow, "InsectSaccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris и Pichia methanolica. Подходящие промоторы для экспрессии в дрожжах включают промоторы из GAL1 (галактоза), PGK (фосфоглицераткиназа), ADH (алкогольдегидрогеназа), АОХ 1 (алкогольоксидаза), HIS4 (гистидинолдегидрогеназа) и т.п. Много клонирующих векторов дрожжей разработаны и легко доступны. Эти векторы включают векторы, основанные на YIp, такиеYCp19. Методы для трансформации клеток S. cerevisiae с экзогенной ДНК и производства рекомбинантных полипептидов из них раскрыты, например, Kawasaki, патент США 4599311, Kawasaki et al., патент США 4931373, Brake, патент США 4870008, Welch et al., патент США 5037743 и Murrae etal., патент США 4845075. Трансформированные клетки выбирают по фенотипу, определяемому селектируемым маркером, обычно устойчивостью лекарственного средства или способностью расти в отсутствие специфического питательного вещества (например, лейцина). Подходящей векторной системой для использования в Saccharomyces cerevisiae является векторная система POT1, раскрытая Kawasaki et al.(патент США 4931373), который позволяет трансформированным клеткам быть отобранными выращиванием в содержащих глюкозу питательных средах. Дополнительные подходящие промоторы и терминаторы для использования в дрожжах включают промоторы из генов гликолитических ферментов(см., например, Kawasaki, патент США 4599311, Kingsman et al., патент США 4615974, и Bitter, патент США 4977092), и генов алкогольдегидрогеназы; см. также патенты США 4990446, 5063154,5139936 и 4661454. Трансформационные системы для других дрожжей, включая Hansenula polymorpha, Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces fragilis, Ustilago maydis, Pichia pastoris, Pichia methanolica, Pichia guillermondii и Candida maltosa, известны в технологии; см., например, Gleeson et al., J. Gen.Microbiol., 732:3459 (1986), и Cregg, патент США 4882279. Клетки Aspergillus могут быть использованы согласно методам McKnight et al., патент США 4935349. Методы трансформации AcremoniumLambowitz, патент США 4486533. Например, применение Pichia methanolica как организма-хозяина для продукции рекомбинантных белков раскрыто Raymond, патент США 5716808, Raymond, патент США 5736383, Raymond et al.,Yeast, 14:11-23 (1998), и в международных патентах WO 97/17450, WO 97/17451, WO 98/02536 иWO 98/02565. Молекулы ДНК для применения в трансформации P. methanolica будут обычно получаться как двухниточные, кольцевые плазмиды, которые предпочтительно линеаризуются перед трансформацией. Для продукции полипептида в P. methanolica, промотор и терминатор в плазмиде может быть из генаP. methanolica, такого как ген использования спирта P. methanolica (AUG1 или AUG2). Другие полезные промоторы включают промоторы генов дигидроксиацетонсинтазы (ДГАС), форматдегидрогеназы(ФМД) и каталазы (КАТ). Чтобы облегчить интеграцию ДНК в хромосому хозяина, предпочитают иметь весь сегмент экспрессии плазмиды, к которой примыкают с обоих концов последовательности ДНК хозяина. Подходящим селектируемым маркером для использования в Pichia methanolica является ген P.methanolica ADE2, который кодирует фосфорибозил-5-аминоимидазолкарбоксилазу (AIRC; ЕС 4.1.1.21) и который позволяет клеткам-хозяевам ade2 расти в отсутствие аденина. Для крупномасштабных производственных процессов, когда желательно минимизировать использование метанола, могут применяться клетки-хозяева, в которых удалены оба гена использования метанола (AUG1 и AUG2). Для продукции секретируемых белков клетки-хозяева могут быть дефицитными в генах вакуолярной протеазы (РЕР 4 иPRB1). Электропорация используется, чтобы облегчить введение плазмиды, содержащей ДНК, кодирующей полипептид интереса в клетках P. methanolica. Клетки P. methanolica могут быть трансформированы электропорацией, используя экспоненциально затухающее, пульсирующее электрическое поле,имеющее напряженность поля от 2,5 до 4,5 кВ/см, предпочтительно приблизительно 3,75 кВ/см, и временную константу (t) от 1 до 40 мс (миллисекунд), наиболее предпочтительно приблизительно 20 мс. Векторы экспрессии могут также быть введены в протопласты растений, интактные ткани растений или изолированные растительные клетки. Методы введения векторов экспрессии в ткань растения включают прямую инфекцию или со-культивирование ткани растения с Agrobacterium tumefaciens, микроснаряд-опосредуемую доставку, инъекцию ДНК, электропорацию и т.п.; см., например, Horsch et al., Science,227:1229 (1985), Klein et al., Biotechnology, 10:268 (1992), и Miki et al., "Procedures for introducing ForeignPress, 1993). Альтернативно, гены, кодирующие полипептиды по настоящему изобретению, могут быть экспрессированы в прокариотических клетках-хозяевах. Подходящие промоторы, которые могут использоваться, чтобы экспрессировать полипептиды IL-17RC в прокариотическом организме, известны специалистам в технологии и включают промоторы, способные узнавать полимеразы Т 4, Т 3, Sp6 и Т 7, промоторыPR и PL лямбда бактериофага, промоторы trp, recA, шока высокой температуры, lacUV5, tac, Ipp-lacSpr,phoA и lacZ E.coli, промоторы В. subtilis, промоторы бактериофагов Bacillus, промоторы Streptomyces, int промотор лямбда бактериофага, bla промотор pBR322 и промотор CAT гена хлорамфениколацетилтрансферазы. Прокариотические промоторы были рассмотрены Glick, J. Ind. Microbiol., 7:277 (1987),Watson et al., Molecular Biology of the Gene, 4th Ed. (Benjamen Cummins, 1987), и Ausubel et al. (1995). Подходящие прокариотические организмы включают E.coli и Bacillus subtilus. Подходящие штаммы Е.coli включают BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS, BL21(DE3)pLysE, DH1, DH4I, DH5, DH5I, DH5IF',DH5IMCR, DH10B, DH10B/p3, DH11S, C600, HB101, JM101, JM105, JM109, JM110, K38, RR1, Y1088,Y1089, CSH18, ER1451 и ER1647 (см., например, Brown (ed.), Molecular Biology Labfax (Academic Press,- 29

МПК / Метки

МПК: C07K 14/00, C07K 16/28

Метки: il-17f, il-17a, применения, способы, антагонисты

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/30-15351-antagonisty-il-17a-i-il-17f-i-sposoby-ih-primeneniya.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антагонисты il-17a и il-17f и способы их применения</a>

Похожие патенты